Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:32Z : No. of bitstreams: 1 000847745_20170227.pdf: 184874 bytes, checksum: 77631070ff8a07f3359b1fb5c396f4ac (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-03T11:01:33Z: 000847745_20170227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-03T11:02:41Z : No. of bitstreams: 1 000847745.pdf: 1720621 bytes, checksum: 5da3023273e6a040671b72235040def6 (MD5) / O desenvolvimento vegetal é influenciado por diferentes fatores como os microRNAs (miRNAs) e os fitohormônios, os quaisinteragem numa complexa rede de regulação. Entre os miRNAs, o miRNA156 (miR156) regula os fatores de transcrição SQUAMOSA Promoter-Binding Protein-Like(SPL) afetando diferentes processos do desenvolvimento vegetal. Entre os fitohormônios, os brassinosteróides (BRs) participam na regulação dos eventos associados à fase juvenil da planta. A interação miR156/SPL-BRs não é conhecida, pelo qual, este estudo avaliou a interação destas duas vias durante o desenvolvimento juvenil de Arabidopsis thaliana. Formacaco da raiz principal (RP) e número de raizes laterais (RL) bem como o crescimento do hipocótilo foram utilizados como marcadores desta possivel interação. Foram utilizadas plantas de A. thaliana (Ecotipo Col-0) que expressam constitutivamente o miR156 (miR156-OE), plantas com níveis reduzidos do miR156 (Mimicry-156) e plantas selvagens (WT). Entre os BRs foi escolhido o 24-EpiBrassinolídeo (24-EBL) por ser o BR mais ativo. Plântulas miR156-OE apresentam maior comprimento da RP, maior número de RL e maior sensibilidade aos tratamentos com 24-EBL; fenótipos e comportamento opostosforam observados nas plântulas Mimicry-156. Além disso, plântulas miR156-OE apresentam maior comprimento do hipocótilo, enquanto as plântulas Mimicry-156 apresentam reduzido comprimento. Entre os genes SPLs que respondem ao tratamento com 24-EBL se encontram os SPL2, - 3, -4, -5, e -6. Entre os genes da via dos BRs foram observados alterações na expressão dos genes CPD, BZR1, BES1 e BAS1. Estes dados sugerem que a via genética do miR156/SPL interage com os BRs, e também contribuem para um melhor conhecimento da genética molecular do desenvolvimento de arabidopsis / Plant development is affected by different factors such as micro-RNAs (miRNAs) and phytohormones which interact in a complex regulation network. Among miRNAS, miRNA156 (miR156) regulates SQUAMOSA Promoter- Binding Protein-Like (SPL) transcription factor family affecting different plant development processes. Among phytohormones, brassinosteroids (BRs) participate in regulation of vegetal juvenile processes. miR156/SPL-BRs interaction is unknown whereby the aim of this work was to evaluate the interaction between those two pathways during Arabidopsis thaliana juvenile development. Main root (RP), lateral root number (RL) and hypocotyl length were selected as markers of this interaction. A. thaliana (Col-0 ecotype) overexpressing miR156 (miR156-OE), plants with miR156 reduced activity (Mimicry-156) and wild type (WT) plants were used. 24-Epibrassinolide (24- EBL), the most active BRs, was selected. miR156-OE plants have longer RP length, more RL and 24-EBL sensitivity. Opossite phenotypes were observed on Mimicry-156 plants. Besides, miR156-OE plants have longer hypocotyl length while Mimicry-156 plants have shorter. SPLs genes, SPL2, -3, -4, -5, and -6 responded to 24-EBL treatment. BRs pathway genes, CPD, BZR1, BES1 and BAS1 had changes in gene expression. Our data suggest a interaction between the miR156/SPL and BRs pathways and help to understand the molecular genetics of Arabidopsis development

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:28Z : No. of bitstreams: 1 000848862.pdf: 1362469 bytes, checksum: ecb358806a7f2339216f60fc6b4979f6 (MD5) / A elevada produção de cana-de-açúcar no Brasil é resultado do adequado manejo usado no campo com a cultura, e quando não adequado causa perdas significativas em produtividade. Dentre os tratos culturais, está o manejo das plantas daninhas, as quais são plantas indesejáveis as culturas. Entre as plantas daninhas, o capim-camalote (Rottboellia cochinchinensis) destaca-se como planta de difícil controle. Esse difícil controle está associado ao reduzido número de herbicidas registrados e seletivos a cultura da cana-de-açúcar, à variabilidade genética presente nas plantas daninhas, característica intrínseca a elas, e também a dormência das sementes e o vigor das plantas. Mediante a dificuldade do controle químico observada pelos produtores elaborou-se a hipótese de que isso pode ser devido a existência de biótipos entre e dentro das diferentes populações infestantes de canaviais que respondem de forma diferente aos tratamentos com herbicidas. Para verificar esta hipótese o presente trabalho teve como objetivo estudar a variabilidade genética em plantas de Rottboellia cochinchinensis em três populações (municípios de Igarapava, Mococa e Piracicaba) do Estado de São Paulo, utilizando-se da técnica AFLP. Foram também avaliadas a aplicação de herbicidas em pós-emergência das plantas e a análise citogenética. Nos três locais foram realizadas coletas de folhas no terço superior da plantas e sementes, em áreas de produção comercial de cana-de-açúcar. Para a caracterização molecular seis iniciadores foram utilizados com o marcador AFLP, em 10 indivíduos por população (30 indivíduos no total), com base na presença (1) e ausência (0) de bandas, no ano de 2012. Para a sensibilidade à herbicidas o experimento foi instalado em vasos com capacidade para 20 L, em delineamento inteiramente casualizado. Os tratamentos... / The Brazilian high sugarcane production comes from adequate management techniques, which when non-properly used may cause significant yield losses. The weed control is one of these crop practices; such technique consists of eliminating unwelcome plants from farming areas. Among weed species, itchgrass (Rottboellia cochinchinensis) can be highlighted as one of the plants difficult to be controlled. This fact may be associated to a reduced number of selective herbicides registered for sugarcane crop, weed genetic variability, seed dormancy and plant vigor. By means of the difficult chemical control faced by farmers, we have drawn up a hypothesis that such fact might be related to the existence of varied biotypes between and within the different weed populations in sugarcane fields, responding distinctly to herbicide applications. To check this hypothesis, we aimed to study the genetic variability of Rottboellia cochinchinensis (itchgrass) from three different populations (in the cities of Igarapava, Mococa and Piracicaba) in São Paulo State, Brazil, and using AFLP technique. Moreover, post-emergence application and cytogenetics were tested. Upper third leaf and seed samples were collected from the three locations, in areas of sugarcane commercial production. For molecular characterization, six primers were used with the AFLP marker, using 10 plants per population (30 in total), based on band presence (1) and absence (0) in the year of 2012. A completely randomized experiment was set to evaluate herbicide responses, using 20-L pots. Chemical treatments were performed by the herbicides: ametryn (3,000 g ha-1) - T1; isoxaflutole (135 g ha-1) - T2; ametryn (300 g ha-1)+isoxaflutole (135 g ha-1) T3; isoxaflutole (135 g ha-1)+clomazone (1200 g ha-1) T4; amicarbazone (1400 g ha-1) - T5; ametryn (3,000 g ha-1)+trifloxysulfuron-sodium (22.5 g ha-1) - T6; glyphosate (2,160 g ha-1) - T7; MSMA (2,880 g ha-1) - T8 and ametryn ...

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-13. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:14Z : No. of bitstreams: 1 000854521_20160812.pdf: 82338 bytes, checksum: e4da31f0cbbba0357b1f03a80a768a0e (MD5) Bitstreams deleted on 2016-08-12T12:00:48Z: 000854521_20160812.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T12:01:21Z : No. of bitstreams: 1 000854521.pdf: 1322164 bytes, checksum: 7b22d155b69c968406f0adc4a9c9c1de (MD5) / O Brasil possui uma grande diversidade botânica, graças a seus diversos biomas, sendo a documentação das espécies existentes muito importante para o conhecimento da biodiversidade mundial. O gênero Senna possui 80 espécies enquanto o gênero Casearia apresenta 37 espécies no Brasil. O gênero Lantana possui cerca de 150 espécies. Alguns princípios ativos dessas espécies foram testados previamente no laboratório da Orientadora, apresentando atividade tripanocida promissora; entretanto existem dificuldades na classificação de alguns espécimes desses gêneros. Novas técnicas de identificação surgem para auxiliar na taxonomia. DNA Barcoding é uma técnica muito útil, pois é rápida, precisa, e com alta relação custo-benefício, utilizando uma pequena sequência de DNA para identificação. Suas aplicações vão desde identificar espécies crípticas até na luta contra o comércio ilegal de espécies ameaçadas de extinção e madeira extraída ilegalmente, dentre outras. Para realização desta técnica em plantas, utilizam-se genes localizados no cloroplasto - matK (codifica a proteína maturase K), rbcL (codifica a proteína ribulose 1,5-bifosfato ou Rubisco) e/ou regiões de espaçador intergênicos presente no cloroplasto (trbH-psbA). Neste trabalho em parceria com o NuBBE - Núcleo de Bioensaios, Biossíntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais, visamos identificar as espécies pela técnica de DNA Barcoding, utilizando as regiões rbcL, trbH-psbA e ITS2, para para verificar a acurácia de banco de dados e melhorar a classificação taxonômica. Os resultados mostraram que a região rbcL é uma boa região para amplificação e sequenciamento, com boa taxa de discriminação de espécie. A região psbA-trnH é menos efetiva na discriminação de espécie comparada à região rbcL. A região ITS2 apresentou identidade com sequência de fungos, mostrando dificuldade na... / Brazil has a great botanical diversity, thanks to its various biomes, and the documentation of existing species is very important for understanding the world's biodiversity. Senna genus has 80 species while Casearia genus has 37 species in Brazil. The Lantana genus has about 150 species. Some active compounds of these species were tested in the laboratory presenting promising trypanocidal activity; however there are difficulties in classification of some specimens of these genres. New identification techniques emerge to assist in taxonomy. DNA barcoding is a very useful technique because it is fast, accurate, and highly cost-effective, using a small DNA sequence for identification. Its applications range from identifying cryptic species to the fight against illegal trade in endangered species and illegally harvested timber, among others. To perform this technique, in plants, use genes located in the chloroplast - matK (encoding the protein maturase K) rbcL (encoding ribulose 1,5-bisphosphate or protein Rubisco) and/or intergenic spacer regions in the chloroplast (trbH-psbA). In this work in partnership with NuBBE - Center for Bioassays, Biosynthesis and Ecophysiology of Natural Products, we aimed to identify the species by DNA barcoding technique, using the regions rbcL, trbH-psbA and ITS2, to check the database accuracy and improve the taxonomic classification. The results showed that the rbcL region is a good region for amplification and sequencing, with good species discrimination rate. The psbA-trnH region is less effective in discrimination compared to the rbcL region. The ITS2 region showed identity with fungal sequence, showing difficulty in using this region.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-15. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:20Z : No. of bitstreams: 1 000858042.pdf: 2321453 bytes, checksum: d56468b7b1d5643182c61f38e1a2372d (MD5) / Com o atual cenário de mudanças climáticas, observa-se a tendência a eventos de seca mais longos e recorrentes, desta forma a obtenção de plantas mais tolerantes à seca figura como um dos principais investimentos dentro da ciência e tecnologia nacional. Os oligossacarídeos da família das rafinoses (RFOs) desempenham múltiplas funções nas plantas e sabe-se que estes são acumulados nos tecidos vegetais em situações de déficit hídrico, garantindo a estabilidade das membranas celulares, consequentemente mantendo as funções vitais da planta. Por sua vez, a enzima galactinol sintase (GolS, EC 2.4.1.123), catalisa o primeiro passo na biossíntese dos oligossacarídeos dos RFOs desempenhando um importante papel regulador na partição do carbono entre sacarose e RFOs. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi introduzir em soja, via Agrobacterium tumefaciens, a construção gênica 35S:AtGolS2 e caracterizar molecularmente e fisiologicamente os eventos obtidos sob déficit hídrico. Para o processo de transformação, a cultivar convencional de soja BRS 184 foi utilizada e os eventos obtidos foram caracterizados quanto ao número de cópias através da técnica de qPCR. Para a análise da expressão gênica constitutiva o RNA total dos eventos, em condições bem irrigadas, foi extraído e a expressão determinada via RT-qPCR. A taxa de segregação foi calculada através do teste do X2 (p≤ 0.05). Com base nos resultados obtidos, dois eventos (2Ia1 e 2Ia4) foram selecionados para serem analisados quanto a respostas moleculares e fisiológicas sob déficit hídrico induzido em condições de casa de vegetação. Os resultados mostraram que nas plantas do evento 2Ia4 o maior acumulo de água associado a menor área foliar na condição controle levou a manutenção das trocas gasosas causado pela redução na transpiração foliar, maior acúmulo de água no substrato e acúmulo de transcritos de rafinose e galactinol nos tecidos / With the current scenario of climate change, there is a tendency to longer and recurrent drought events, thus obtaining more drought tolerant plants figure as a major investment in the national science and technology. Raffinose family oligosaccharides (RFOs) plays multiple functions in plants and it is known that these are accumulated in plant tissues in water deficit situations, guaranteeing the stability of cell membranes, thus maintaining the vital functions of the plant. In turn, galactinol synthase (GolS, EC 2.4.1.123) catalyzes the first step in the biosynthesis of RFOs plays an important regulatory role in carbon partitioning between sucrose and orphans. Thus, our objective was to introduce gene construction 35S:AtGolS2 via Agrobacterium tumefaciens in soybean plants and characterize molecularly and physiologically events obtained under water deficit. In this context, the conventional soybean BRS 184 was used in the transformation process and the soybean events were molecularly characterized in regard to the transgene copy number by qPCR technique. For the analysis of constitutive gene expression total RNA of events, well-watered conditions, was extracted and the expression determined by RT-qPCR. The segregation rate was calculated using the X2 test (p ≤ 0.05). Based on our results, two events (2Ia1 and 2Ia4) were selected to be analyzed for physiological responses under drought simulated under greenhouse conditions. The results showed that the plants 2Ia4 event the largest accumulation of water associated with lower leaf area in the control condition led to maintenance of gas exchange caused by the reduction in leaf transpiration, increased water accumulation in the substrate and accumulation of raffinose and galactinol transcripts in tissues. Thus, the increased levels of these carbohydrates would have made these act as osmoprotectors, enabling the recommendation of 2Ia4 plants breeding programs aimed at tolerance to drought

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-17Bitstream added on 2014-06-13T20:53:58Z : No. of bitstreams: 1 martin_lc_me_botib.pdf: 1513851 bytes, checksum: b337e010131dce6a4e203f7b96730b8f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Estresses abióticos, como a seca, podem reduzir significativamente os rendimentos no cultivo de espécies comercialmente importantes, tais como o eucalipto na produção de celulose e papel. Quando submetidas às condições de déficit hídrico, as plantas desenvolvem alguns mecanismos de defesa. As betaínas participam destes mecanismos, sendo seu soluto mais comum a glicina betaína. Esta é uma amina quaternária distribuída extensamente em diversas espécies de plantas superiores, sintetizada em elevadas taxas, tendo como função, manter a turgescência celular. A identificação e estudo de genes relacionados à tolerância à seca são importantes para os programas de melhoramento florestal. Este estudo teve por objetivo identificar SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) no gene colina monooxigenase relacionado ao metabolismo da glicina betaína em Eucalyptus. A sequência do gene em estudo foi encontrada em genomas de plantas modelos através do banco de dados GenBank, sendo as mesmas, utilizadas para a procura de similaridades no banco de dados de ESTs de eucalipto FORESTs – FAPESP. Após a constatação de homologia no banco de dados de eucalipto, foram confeccionados oito pares de “primers” para flanquear essas regiões, sendo estes, avaliados, amplificando fragmentos únicos. Depois de realizado o seqüenciamento do gene colina monooxigenase, foi utilizado a ferramenta BLAST no GenBank, confirmando com sucesso a identidade da sequência. Em seguida, as sequências foram alinhadas e os SNPs encontrados. No total, foram identificados 49 SNPs, sendo 12 em regiões codificantes e 37 em regiões UTRs e íntrons. Somente os SNPs localizados nas regiões codificantes foram utilizados neste trabalho, sendo 83,3% deles possuindo mutações sinônimas e 16,7% não-sinônimas. Em seguida, foi utilizada uma população mais abrangente composta de E. grandis... / Abiotic stress, such as drought, can reduce significantly the yield in the important commercially species crop, such as the eucalyptus in the cellulose and paper. When submitted to the water stress conditions, the plants develop some defense mechanisms. The betaines are part of these mechanisms , being their solute more common to the glycine betaine. This is a quaternary amine extensively distributed in several species of higher plants synthesized in high taxes with the function of maintaining the cellular turgescence. Identifying and studying the genes related to the drought tolerance are important for the forest improvement programs. This work aimed at identifying SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) in choline monooxygenase related to the glycine betaine in Eucalyptus. The gene sequence was found in model plants genomes through the databank GenBank, being used for searching similarities in the databank ESTs of eucalyptus FORESTs – FAPESP. After noticing homology in the eucalyptus databank, eight pairs of primers were made to amplify these regions, being evaluated, amplifying unique fragments. After the choline monooxygenase sequencing was performed, it was used the BLAST in the GenBank, confirming successfully the sequence identity. Then, the sequences were aligned and the SNPs were found. In the total, 49 SNPs were identified, being 12 in coding regions and 37 in UTRs and intron regions. Only the SNPs located in coding regions were used in this work, being 83.3% of the SNPs with synonymous mutation and 16.7% non-synonymous. Following, it was used a wider population made up of de E. grandis, E. Urophylla and the hybrid “Urograndis” to perform the SNPs genotyping, establishing the formation of 18 haplotypes and 16 possible haplotypical combinations which revealed that some genotypes were exclusive for the species E. grandis and E. urophylla. With the objective of decreasing costs... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-28Bitstream added on 2014-06-13T19:12:49Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_m_me_botib.pdf: 857762 bytes, checksum: 6884bf144951c5e915d6a1c0a0ca3e5c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O gene que codifica a TCTP (Translationally Controlled Tumour Protein) está presente em todos os eucariontes e o seu produto está envolvido em diferentes processos celulares. Embora bem caracterizada em mamíferos, poucos são os trabalhos disponíveis na literatura relacionados à análise da TCTP em plantas. No presente trabalho, a expressão do gene que codifica a TCTP em tomateiros foi analisada em situações de estresse biótico e abiótico. No estresse abiótico, as plantas de tomate foram submetidas a dano mecânico nas folhas, e essas coletadas após 4, 8 e 12 horas. No estresse biótico, duas espécies virais foram inoculadas mecanicamente nas plantas de tomate, o Cucumber mosaic virus (CMV) e o Pepper Yellow Mosaic Virus (PepYMV), respectivamente, e as folhas sistemicamente inoculadas foram coletadas após 25 dias. Um aumento na expressão da TCTP foi constatado em resposta ao estresse biótico, sendo de 1,3x em relação ao controle não inoculado na infecção pelo CMV, e de 1,4x na infecção pelo PepYMV. No estresse mecânico, o pico de expressão ocorreu após 4 horas com um aumento de 3,4x em relação ao controle não tratado, com posterior redução nos demais tempos. Adicionalmente, plantas transgênicas de tabaco capazes de superexpressar a TCTP de tomate foram geradas a fim de determinar o papel dessa proteína na infecção pelo PepYMV. Quando as linhagens transgênicas geradas foram inoculadas com o PepYMV observou-se, aos 14 dias após a inoculação (DAI), um aumento na concentração viral (1,8x) em relação às plantas de tabaco não transformadas, sendo o mesmo verificado aos 21 DAI (1,6x). Essa diferença, entretanto, não foi mais observada aos 28 DAI. Esses dados confirmam a relação funcional da TCTP com a resposta de defesa das plantas aos estresses bióticos e abióticos / Not available

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-24Bitstream added on 2014-06-13T20:33:37Z : No. of bitstreams: 1 sagawa_chd_me_botib.pdf: 714941 bytes, checksum: df3eaab1e05c19ec58e826a408e00160 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Nas florestas de Eucalyptus, o déficit hídrico é apontado como um dos fatores abióticos mais importantes, pois afeta significativamente o crescimento e o rendimento das plantações. Para contornar esse problema, o uso de genótipos tolerantes ao déficit hídrico é uma das alternativas mais razoáveis. Entretanto, a tolerância ao déficit hídrico é uma característica complexa e a estratégia de mapeamento de QTLs pode ajudar a entender a arquitetura genética relacionada com a variação fenotípica que esta característica apresenta. Este estudo buscou identificar as regiões genômicas associadas ao déficit hídrico em Eucalyptus. Para isso, foi utilizada uma progênie segregante com 195 indivíduos oriunda de um cruzamento de clones híbridos (E. grandis x E. urophylla) contrastantes para o estresse por déficit hídrico. Os experimentos foram realizados em casa de vegetação sob duas condições de irrigação (testemunha e estressado por déficit hídrico). Características fisiológicas foram utilizadas para a caracterização fenotípica da progênie e as análises estatísticas foram realizadas considerando as médias obtidas em cada experimento. O mapa genético foi construído com marcadores microssatélites e AFLP com auxílio do software JoinMap® 3.0. O mapeamento de QTLs seguiu duas abordagens: análise de marcas individuais e mapeamento múltiplo de QTLs (MQM). No mapa de ligação foram posicionados 99 marcadores em 13 grupos de ligação, totalizando 842,35 cM com distância média de 9,30 cM entre os marcadores. A análise de marcas individuais identificou vários QTLs de pequeno efeito e um QTL (LOD=6,11) localizado na posição do marcador EMBRA135 representando 20,8% da variação em condutância estomática (gs) nas plantas sob condição de estresse. Já o mapeamento MQM apontou dois QTLs, sendo um submetida a condições normais de irrigação (LOD=16,44) e outro na condição de estresse (LOD=15,25), representando 77,1% e 69,1%, respectivamente, na transpiração. Também identificou QTLs co-localizados no grupo 6 e QTLs de pequeno efeito. Portanto, este estudo identificou QTLs relacionados a tolerância ao déficit hídrico em Eucalyptus e estes QTLs identificados podem estar envolvidos em muitos mecanismos de tolerância que as plantas podem usar para evitar este estresse. / In Eucalyptus forests, drought stress has being pointed as one of the most important abiotic factor significantly affecting the growth and yield. The use of drought tolerant genotypes can be the most reasonable alternative to overcome this problem. Drought tolerance is a complex trait and QTLs mapping approach can help to understand the genetic architecture related to this trait. This study aims to identify genetic loci linked to phenotypic variation in drought tolerance in Eucalyptus. A progeny with 195 plants generated from a cross between two contrasting hybrid clones (E. grandis x E. urophylla) to drought stress was evaluated. The experiment took place in a greenhouse under two irrigation conditions (control and drought stress). Physiological traits were used for phenotypic characterization of the progeny and statistical analyzes were performed considering the means obtained in each experiment. For the genetic map of the progeny, the linkage analysis were executed on JoinMap® 3.0 software with microsatellite and AFLP markers. The QTL mapping followed two strategies: single locus analysis and multiple QTL models mapping (MQM). The linkage map resulted in 13 groups with 99 markers, and the map’s length was 842,35 cM with an average distance of 9,30 cM between the markers. The single locus analysis identified several QTL with small effects and one QTL (LOD=6,11) at the EMBRA135 marker position which represents 20,8% of the stomatal conductance variation (gs) in drought stressed plants. The MQM mapping, otherwise, detected two QTL, one in control plants (LOD=16,44) and one in stressed plants (LOD=15,25), which represents 77,1% and 69,1%, respectively, of the transpiration variation. Co-localized QTL were also identified at group 6 and several small effects QTL. Therefore, this study identified QTL related to drought tolerance in Eucalyptus and these QTLs identified may be involved in many tolerance mechanisms that plants can use to avoid this stress.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-07Bitstream added on 2014-06-13T19:12:49Z : No. of bitstreams: 1 costa_cs_me_botib.pdf: 556138 bytes, checksum: f3943b845a387e5013dc6b9cb14d81da (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A identificação de promotores com expressão tecido-específica é uma alternativa viável para substituição dos promotores com expressão ubíqua geralmente utilizados em transgenia. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivos caracterizar funcionalmente o promotor de um gene de eucalipto que codifica um transportador de potássio com expressão específica em raiz bem como isolar e caracterizar a região promotora de um gene de eucalipto selecionado como apresentando expressão específica em folha. Plantas transgênicas de tabaco (Nicotiana tabacum SR1) contendo um cassete de expressão composto pelo promotor de raiz fusionado ao gene repórter GUS (que codifica a β-glucoronidase) foram usadas em ensaios histoquímicos e histológicos para investigar a especificidade da expressão determinada pelo promotor em estudo. Os resultados evidenciaram que o promotor investigado dirige a expressão do gene repórter em tecido vascular de folhas e raízes. A expressão em feixes vasculares de folhas e raízes foi confirmada em cortes histológicos. Visando avaliar a resposta deste promotor a baixas concentrações de potássio, duas linhagens da geração T2 foram submetidas à deficiência de potássio, e a expressão relativa do gene repórter GUS foi determinada por PCR em tempo real. Nas linhagens submetidas a estresse de potássio observou-se um aumento da expressão relativa do gene repórter GUS em função da privação do elemento. Em paralelo, um gene selecionado in silico como apresentando expressão em folha de eucalipto teve seu perfil de expressão validado por RT-PCR. A construção de um cassete de expressão contendo o referido promotor fusionado ao gene repórter GUS foi empreendida visando futuras validações funcionais / The identification of tissue-specific promoters is of great value to substitute the ubiquitous promoters generally used in transgenic production. In this context, the present study aimed to functionally characterize the promoter of a Eucalyptus grandis gene encoding a potassium transporter showing root specific expression, and to isolate and functionally characterize the promoter region of an E. grandis gene selected as showing specific expression in leaf. Transgenic tobacco plants (Nicotiniana tabacum SR1) harboring a promoter:GUS fusion were used to investigate the expression specificity of the selected root promoter. The results showed that the investigated promoter drives a reporter gene expression in vascular tissues of leaves and roots. The expression in vascular bundles of leaves and roots was confirmed in histological crosssections. To evaluate the promoter responsiveness to low potassium concentrations, two transgenic lines (T2) were submitted to potassium starvation and the relative expression of the GUS reporter gene was determined by real time PCR. An increase in the relative expression of GUS in response to potassium starvation was observed. In parallel, the expression pattern of a gene showing leaf specific expression in Eucalyptus grandis was validated by RT-PCR. The construction of an expression cassette containing this promoter fused to the GUS reporter gene was performed aiming future functional characterization

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-17Bitstream added on 2014-06-13T20:14:43Z : No. of bitstreams: 1 lemes_arn_me_jabo.pdf: 416795 bytes, checksum: 44abf4d7c9c15c73531d86dc762390a5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) possui a capacidade de produzir inclusões protéicas (proteína Cry) e proteínas vegetativas (Vip). Estas proteínas podem ser tóxicas para insetos e por meio de transgenia, a expressão em plantas, podem também proporcionar controle de importantes pragas agrícolas. Nesse sentido, esta pesquisa teve por objetivo avaliar o potencial de controle das proteínas Cry1Aa, Cry1Ac, Cry1Ca, Vip3A(1), Vip3A(2) e Vip3A(3) em uma população brasileira da lagarta-da-maçã, Heliothis virescens (Lepidoptera: Noctuidae), bem como o efeito subletal e efeito sinérgico entre estas proteínas e a proteólise pelo suco do intestino do inseto praga em estudo. Para tanto, clones de Escherichia coli recombinantes portadores de genes únicos foram cultivados em meio para a indução das proteínas e os lisados obtidos foram utilizados para as análises de toxicidade por meio de bioensaios. Diferentes concentrações protéicas foram utilizadas para conduzir os bioensaios. A mortalidade foi avaliada e obteve-se a CL50. Desta forma, observou-se que, dentre as proteínas testadas, Cry1Ac (CL50 39,89 ng.cm-2), Vip3A(2) (CL50 945,77 ng.cm-2) e Vip3A(3) (CL50 874,45 ng.cm-2 ) foram as mais tóxicas e houve correlação negativa entre a concentração de proteínas e o peso das lagartas. Nos ensaios referentes ao efeito sinérgico das proteínas, ativadas e não ativadas com tripsina comercial, foram encontradas possíveis combinações eficientes no controle da praga em estudo destacando-se Vip3A(2)/Cry1Aa, Vip3A(1)/Cry1Aa, Vip3A(1)/Cry1Ac, e Vip3A(2)/Cry1Ac. Os resultados referentes à interação das enzimas digestivas do intestino de H. virescens com as toxinas Cry1 e Vip3A permitiram constatar que as proteínas são ativadas / Bacillus thuringiensis (Bt) produces protein inclusions (Cry proteins) and vegetative proteins (Vip). Such proteins may act as toxic to some insects and through transgenesis plants they may be able to control important agricultural pests. Thus this work aimed to evaluate the control potential of Cry1Aa, Cry1Ac, Cry1Ca, Vip3A(1), Vip3A(2) and Vip3A(3) proteins in a Brazilian population of Heliothis virescens (tobacco budworm) (Lepidoptera: Noctuidae), as well as to analyze the sublethal and the synergic effects among these proteins and the proteolysis on the intestinal juice of this pest. In order to do this, Escherichia coli clones expressing each one of the above mentioned proteins were induced to produce them and the obtained lysates were used to determine the level of toxicity through bioassays with neonatal larvae of H. virescens. Different protein concentrations were used to carry out the bioassays. The mortality was evaluated and it was possible to detect the CL50. It was possible to observe that among the tested proteins, Cry1Ac (CL50 39.89 ng.cm-2), Vip3A(2) (CL50 945,77 ng.cm-2) and Vip3A (3) (CL50 874,45 ng.cm-2) were the most toxic and showed a negative correlation between the protein concentration and larvae weight. During the bioassays concerning the synergistic effect of these proteins, which were either previously activated or not using commercial trypsin, there we found efficient combinations for the control of the pest under study in this work, being that the combinations Vip3A(2)/Cry1Aa, Vip3A(1)/Cry1Aa, Vip3A(1)/Cry1Ac and Vip3A(2)/Cry1Ac were considered the best ones. The results with reference to the interaction of the digestive enzymes from the intestine of H. virescens larvae when using the toxins Cry1 and Vip3A allowed us to detect that these proteins are activated

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-11-28Bitstream added on 2014-06-13T18:29:33Z : No. of bitstreams: 1 ganga_rmd_me_jabo.pdf: 819507 bytes, checksum: 5ba45956cafb05a742d55332f642a8b2 (MD5) / Os maracujazeiros pertencem à família Passifloraceae e ao gênero Passiflora, reunindo mais de 500 espécies distribuídas pelos trópicos, principalmente no Brasil, centro de origem de pelo menos um terço das espécies, o que determina uma grande variabilidade genética. Como maior produtor mundial da fruta, o Brasil tem cerca de 35 mil hectares de área colhida e produção superior a 317 mil toneladas por ano, no qual Bahia, São Paulo e Sergipe respondem por mais de 50% da produção no País. A avaliação da variabilidade presente é indispensável aos trabalhos de melhoramento genético, cuja caracterização molecular pode fornecer a base para estudos de diversidade, pautando-se na composição genética sem influência do ambiente. Marcadores moleculares fAFLP foram utilizados para estimar a diversidade genética entre 36 acessos de maracujá amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.) coletados em 18 estados do Brasil. Os resultados obtidos permitiram concluir que os marcadores fAFLP se mostraram consistentes na verificação da variabilidade genética, detectando e quantificando a ampla divergência genética entre os 36 acessos de Passiflora edulis f. flavicarpa Deg. analisados, bem como a não formação de estruturação geográfica. Tais resultados podem auxiliar na definição de estratégias mais eficientes a serem utilizadas em programas de melhoramento genético de maracujazeiro amarelo. / Passion fruit trees belong to the Passionfloraceae family and to the Passiflora genus, gathering more than 500 species distributed over the tropics, mainly in Brazil, source of at least one third of the species, what determines a great genetic variability. As the world's biggest producing country, Brazil has around 35 thousand hectares of harvest area, and a production superior to 317 thousand tons per year from which Bahia, São Paulo and Sergipe are responsible for more than 50%. The assessment of the variability is essential to genetic breeding works, whose molecular characterization can provide us with the basis for studies on diversity, taking into account the genetic composition without environmental influence. fAFLP molecular markers were utilized to estimate genetic diversity among 36 yellow passion fruit accessions (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.) colleted in 18 Brazilian states. The obtained results led to the conclusion that the fAFLP markers were consistent regarding to the evaluation of genetic variability, detecting and quantifying the ample genetic divergence among the 36 analyzed accessions, as well as to the no geographic structural formation. Such results can be useful to the definition of more efficient strategies to be applied in genetic breeding programs of yellow passion fruit tree.