A crescente urbanização associada à multiplicação do número de cidades e o aumento populacional, especialmente nos países em desenvolvimento, têm favorecido o surgimento e o crescimento desordenado das comunidades com consequente dificuldade de acesso aos serviços básicos, inadequadas condições de moradia e exposição a diversos contaminantes ambientais que contribuem para a baixa qualidade de vida e saúde. As parasitoses intestinais apresentam íntima relação com as condições sanitárias, constituindo um relevante problema de saúde pública com maior prevalência entre indivíduos de baixo nível socioeconômico. A ocorrência e manifestação da sintomatologia decorrente de uma infecção parasitária também se associa, principalmente, com a imaturidade do sistema imunológico em crianças com idade ntre 0 e 6 anos, que têm no ambiente de creches e pré-escolas outro importante fator que pode contribuir para a contaminação. Embora sejam crescentes os relatos de parasitismo intestinal em crianças que frequentam creches, ainda são escassas as pesquisas direcionadas aos pré- escolares da região Sul da Bahia, Brasil. Por essa razão, o objetivo deste estudo foi identificar a prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia em crianças de 0 a 6 anos que frequentam creches municipais de Itabuna, cidade localizada na região Sul do estado da Bahia. Para atender aos objetivos propostos foram aplicados dois questionários, um as diretoras das creches/pré-escolas, visando realizar o levantamento das condições de saneamento e práticas de higiene alimentar no ambiente escolar e outro aos responsáveis legais das crianças, com o intuito de conhecer as condições individuais e familiares dos participantes. Para pesquisa de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foram coletadas três amostras fecais por sujeito da pesquisa, processadas e analisadas pelos métodos de Ziehl- Neelsen adaptado e Mariano & Carvalho, respectivamente. A prevalência de Cryptosporidium spp. e Giardia lamblia foi de 39,10% e 29,49%, respectivamente. A grande maioria das crianças é de famílias de baixa condição social e baixo nível de escolaridade, possuem alta quantidade de moradores por residência (transmissão interpessoal). Estes aspectos constituem fatores facilitadores para a disseminação desses parasitas na população estudada. O hábito de não lavar as mãos com água e sabão também se mostrou um fator facilitador a infecção por Giardia lamblia e Cryptosporidium spp., manter as unhas cortadas e limpas diminui a exposição dos indivíduos a infecção por Giardia lamblia. Diante dos resultados, a investigação das enteroparasitoses, em especial da criptosporidíase e giardíase em pré- escolares de Itabuna, Bahia, Brasil é fundamental, devido o alto índice de positividade dos exames coproparasitológicos. Tal aspecto, aliado à escassez de estudos sobre o tema nessa região, mostra claramente que se trata de um problema de saúde pública e que se tornam necessárias melhorias no planejamento estratégico da aplicação dos recursos financeiros em prol do controle das parasitoses no município / Increasing urbanization linked to the multiplication of the number of cities and population growth, especially in developing countries, have favored the emergence and the uncontrolled growth of communities resulting in poor access to basic services, inadequate housing conditions and exposure to several environmental contaminants that contribute to poor quality of life and health. The Intestinal parasitosis shows a close relationship with sanitary conditions representing an important public health problem with higher prevalence among individuals of low socioeconomic status. The occurrence and presenting of symptoms resulting from a parasitic infection are also mainly associated with the immune system immaturity in children aged between 0 and 6 years, who have in their daycare and kindergarten environment another important determinant that could contribute to contamination. Although the reports about intestinal parasitism in children attending day care centers are increasing, there is still scarse research addressing kindergarten children in Southern Bahia, Brazil. Therefore, the aim of this study was to identify the prevalence of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia in children aged fron 0 to 6 years old who are attended in some of Itabuna\'s daycare centers. Itabuna city is located in the southern area of Bahia state. To meet the objectives proposed two questionnaires were applied , one to the daycare / kindergarten directors, in order to survey the conditions of sanitation and food hygiene practices in the school environment and other to the legal guardians, in order to find out the individual and family conditions of the participants. For the detection of Cryptosporidium spp. and Giardia lamblia three fecal samples were collected for each research subject, processed and analyzed by the Ziehl-Neelsen adapted, and Mariano & Carvalho methods, respectively. The prevalence of Cryptosporidium spp. Giardia lamblia were 39,10% and 29,49%, respectively. The large majority of children come from families of low social status, and educational level, live in enviroment with a high number of residents per household (person transmission). These aspects are factors that facilitate the spreading of these parasites in the studied group. The habit of not washing hands with soap and water was also a facilitating factor to infection by Giardia lamblia and Cryptosporidium spp., keep nails clean and cut decreases the exposure of individuals to infection by Giardia lamblia. Given the results, the investigation of intestinal parasites, especially giardiasis and cryptosporidiosis in the kindergarten schools Itabuna, Bahia, Brazil is critical, because of the high rate of positive results of fecal examinations. This aspect, together with the scarcity of studies on the subject in this region, clearly shows that it is a public health problem and that improvements are required in the strategic planning of the financial resources uses to the control of parasitic diseases in the city

Giardia duodenalis é um protozoário de distribuição mundial responsável por causar infecções entéricas em uma grande variedade de mamíferos, incluindo os humanos. Mesmo apresentando pouca variação em sua morfologia, os isolados podem ser diferenciados, de acordo com análises de proteína e polimorfismo de DNA, em pelo menos oito agrupamentos genéticos distintos, denominados assemblages (A-H). Apenas os assemblages A e B têm sido reportados em humanos e outros mamíferos. Isolados de assemblage A podem, ainda, ser divididos em quatro sub-assemblages (AI, AII, AIII e AIV). Sequencias heterogêneas têm sido frequentemente identificadas em estudos de caracterização molecular envolvendo amostras contendo múltiplos cistos do parasita. Buscando estudar a ocorrência dos eventos de heterozigose de sequencia alélica (ASH) e recombinação gênica, o presente trabalho teve como objetivo isolar cistos de G. duodenalis empregando-se a técnica de micromanipulação e caracterizá-los molecularmente através da análise multilócus envolvendo os genes gdh, tpi, orfC4 e bg. Dez cistos foram individualizados e utilizados na pesquisa. Todos foram igualmente identificados por todos os genes, nove cistos caracterizados como assemblage AII e um cisto caracterizado como assemblage B. Os cromatogramas oriundos do cisto identificado como assemblages B apresentaram diversos sítios heterogêneos nos genes gdh, bg e orfC4, sendo que, nesses dois últimos, observaram-se sobreposições dos alelos AII e B no produto sequenciado (heterozigose inter assemblage). Os produtos de PCR foram clonados e as sequencias obtidas revelaram a ocorrência dos dois alelos neste único cisto. Os sítios polimórficos encontrados nas sequencias do gene gdh indicaram heterozigose intra assemblage B. Embora ASH já tenha sido relatada em cistos individualizados de G. duodenalis, estes são os primeiros resultados indicando a presença dos dois alelos, simultaneamente, em um único indivíduo. Esses resultados demonstram fortes evidências que ocorre troca genética entre indivíduos geneticamente distintos de G. duodenalis / Giardia duodenalis is a worldwide distribution enteric protozoan responsible for causing infections in a wide variety of mammals, including humans. Even showing little change in their morphology, isolates can be distinguished, according to the analysis of proteins and DNA polymorphisms in at least eight distinct genetic groups, known assemblages (A - H). Only assemblages A and B have been reported in humans and other mammals. Isolates of assemblage A also can be divided into four sub-assemblages (AI, AII, AIII and AIV). Heterogeneous sequences have been frequently identified in studies involving molecular characterization of samples containing multiple cysts of the parasite. Seeking to study the occurrence of allelic sequence heterozygosity (ASH) and genetic recombination events, the present study aimed to isolate G. duodenalis cysts employing the micromanipulation technique and characterize them molecularly through multilocus analysis involving gdh, tpi, orfC4 and bg genes. Ten cysts were individualized and used in the research. All cysts were equally identified for all genes; nine cysts were characterized as assemblage AII and one characterized as assemblage B. The chromatograms derived from the cyst identified as assemblage B presented many heterogeneous sites in gdh, bg and orfC4 genes, and in these last two, there were overlaps of alleles AII and B in the sequenced product (heterozygous inter assemblage). PCR products were cloned and the sequences obtained revealed the occurrence of two alleles at this single cyst. The polymorphic sites found in the sequences of the gdh gene indicated intra heterozygosity assemblage B. Although ASH has already been reported in G. duodenalis individualized cysts, these are the first results indicating the presence of two alleles simultaneously in a single individual. These results demonstrate strong evidence that genetic exchange occurs between individuals genetically distinct of G. duodenalis

Orientadores: José Roberto Guimarães, Regina Maura Bueno Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Civil, Arquitetura e Urbanismo / Made available in DSpace on 2018-08-16T18:49:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fagnani_RegianeAparecidaGuadagnini_M.pdf: 1137415 bytes, checksum: 64844acd70b57a2326bc81078d609ced (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi inferir a eficiência do Processo Oxidativo Avançado (POA): H2O2/UV, na inativação de oocistos e cistos dos protozoários Cryptosporidium spp. e Giardia spp. respectivamente, em amostras de solução aquosa com características de água natural. Utilizaram-se concentrações de peróxido de hidrogênio de 15 mg L-1 e 6 g L-1 e dose de UV de 44 mW s cm-2 e 5.472 mW s cm-2, respectivamente. A eficiência do POA foi inferida a partir da avaliação do dano morfológico causado pelo processo na parede de oocistos e cistos, sendo observados pelo método de Reação de Imunofluorescência Direta (RID) e mediante Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). O POA foi mais eficiente em causar dano na parede de Giardia duodenalis e oocistos de Cryptosporidium spp. Usando a menor dose de UV e concentração de peróxido, o POA causou dano de forma e/ou fluorescência em 45,3 % dos cistos de G. duodenalis e em 61,9 % dos oocistos de Cryptosporidium spp. Entretanto quando utilizada a alta dose de UV e concentração de peróxido, somente dois oocistos Cryptosporidium spp. foram observados. Oocistos de Cryptosporidium spp. mostrou maior sensibilidade ao POA do que cistos de Giardia duodenalis / Abstract: The aim of this study was infered the efficiency of advanced oxidative processes (AOP): H2O2/UV in inactivation of oocysts and cysts of Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis respectively, in aqueous solution's samples with characteristics of natural water. It was used concentrations of hydrogen peroxide of 15 mg L-1 and 6 g L-1 and UV dose was of 44 mW s cm-2 and 5.472 mW s cm-2, respectively. Direct Immunofluorescence Antibody Assay (IFA) and Scanning Electron Microscopy (SEM) were used to evaluate oocysts and cysts walls damage caused by the process. The AOP was efficient in damage G. duodenalis cysts and Cryptosporidium spp. oocysts wall. Using a small dose of UV irradiation and concentrations of hydrogen peroxide, AOP caused damage oin the shape and/or alteration of fluorescence in 45.3 % cysts of G. duodenalis and 61.9 % oocysts of Cryptosporidium spp. However, when used higher UV dose and concentrations of hydrogen peroxide only two Cryptosporidium spp. oocysts were observed. Cryptosporidium spp. oocysts showed higher sensibility than cysts of G. duodenalis to the peroxidation assisted by ultraviolet light process / Mestrado / Saneamento e Ambiente / Mestre em Engenharia Civil

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T22:08:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CantusioNeto_Romeu_D.pdf: 1288923 bytes, checksum: 6747f006dc8fe56fe9a7284e80649fe0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A veiculação hídrica tem sido considerada uma das principais vias de transmissão de giardiose e criptosporidiose sendo implicada na ocorrência de vários surtos de gastroenterites, em vários países nos últimos anos. Diante deste panorama, no Brasil foi emitida Portaria 518/04 (Ministério da Saúde), que recomenda a pesquisa destes protozoários em água de consumo humano. Por este motivo, o objetivo deste estudo foi realizar um estudo comparativo entre as metodologias de concentração já existentes: Filtração em Membrana (FM) e Floculação em Carbonato de Cálcio (FCC), tecendo uma análise crítica das mesmas e verificando-se a sua aplicabilidade em amostras naturais de água superficial do Rio Atibaia. Este estudo foi conduzido em duas etapas: na primeira, foram realizados 52 experimentos, visando analisar o desempenho dos métodos propostos determinando-se a precisão inicial em amostras de água reagente inoculadas com suspensões comerciais de cistos e oocistos Easy Seed® (Biotecnology Frontiers, Austrália), aplicando-se ou não a etapa de purificação mediante o uso da separação imunomagnética. Quando foram avaliadas amostras do rio Atibaia, a suspensão comercial de cistos e oocistos utilizada para a contaminação artificial foi Color Seed® (Biotecnology Frontiers, Austrália). Em uma segunda etapa, um total de 36 experimentos foi conduzido com o objetivo de se avaliar o comportamento dos mesmos métodos frente a fatores interferentes, característicos da matriz de água bruta superficial, entre eles a turbidez. Nos experimentos controle com amostra de água reagente, a metodologia de FM recuperou mais organismos (21,5 % dos oocistos e 25,0 % dos cistos), quando comparada com a metodologia de FCC (5,3 % e 5,8 % dos oocistos e cistos, respectivamente). A inclusão da etapa de purificação por separação imunomagnética (IMS) não resultou num aumento na recuperação de cistos e oocistos nestas metodologias (FM e FCC). Nos experimentos com amostras de água do Rio Atibaia, de uma maneira geral, a metodologia de FCC apresentou melhor desempenho de recuperação dos organismos e quando incluída a etapa de IMS, uma melhora ocorreu apenas para a recuperação de cistos de Giardia spp. Quando avaliada amostras de água bruta superficial do rio Atibaia em condições de turbidez até 50 NTU a etapa de purificação por IMS acarretou uma maior eficiência de recuperação de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp., para as duas metodologias de concentração. Quando a turbidez das amostras foi superior a 50 NTU, uma melhora da recuperação ocorreu apenas para Cryptosporidium spp, utilizando-se o método de FM. Assim, ambas as metodologias avaliadas, mostraram-se eficientes para serem aplicadas em um monitoramento desses protozoários em amostras hídricas, mesmo em situações de alta turbidez. A etapa de purificação pela separação imunomagnética nem sempre apresentou um ganho na recuperação dos organismos e, as variações nos valores de recuperação para ambos os protozoários, são inerentes aos protocolos utilizados e também associados à matriz analisada. A FM é indicada pela praticidade, tempo e resultados, podendo auxiliar para o conhecimento da ocorrência destes patógenos e assim, minimizar a possibilidade de sua transmissão mediante veiculação hídrica / Abstract: The waterborne transmission route of giardiosis and criptosporidiosis has been considered the major one, causing the occurrence of several gastroenteritis outbreaks in several countries in the last years. Looking to this panorama, was published in Brazil the Governmental Decree 518/04 (Health Department), that recommends the research of these protozoa in water samples. For this reason, the goal of this study was to accomplish a comparative study between Membrane Filtration (MF) and Calcium Carbonate Flocculation (FCC) concentration methodologies, doing a critical analysis of both and verifying its apply in natural samples of Atibaia River superficial water. Two stages took place: in the first one, 52 experiments were carried out, aiming to analyze the performance of the methods proposed, determining the initial precision in samples of reagent water inoculated with commercial suspensions of cysts and oocysts (Easy Seed®-Biotecnology Frontiers Australia), applying or not the purification step by Immunomagnetic Separation. When natural water samples were evaluated, the commercial suspension of cysts and oocysts utilized for the artificial contamination was (Color Seed®-Biotecnology Frontiers Australia). In a second step, 36 experiments were carried out aiming to evaluate the behavior of the methods facing interferential factors, peculiar of the superficial raw water matrix, as turbidity. In the trial control with reagent water sample, the FM methodology recovered more organisms (21.5% of the oocysts and 25.0% of the cysts), in comparison to the FCC methodology (5.3% of the oocysts and 5.8% of the cysts). The purification step by Immunomagnetic Separation (IMS) did not show an improvement in the recovery of cysts and oocysts in these methodologies (FM and FCC). In the experiments with natural water performance of the organisms and when IMS step was included, an improvement occurred just for the recovery of Giardia spp. cysts. When superficial raw water of Atibaia river samples with turbidity up to 50 NTU were evaluated, the purification step by IMS showed higher efficiency in the recovery of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts, for both concentration methodologies. When the turbidity of the sample was over 50 NTU, a recovery improvement occurred just for Cryptosporidium spp, using the FM method. Thus, both methodologies showed efficiency in monitoring these protozoa in water samples, even in situations of high turbidity. The purification step by Immunomagnetic Separation not always showed gain in the recovery of the organisms and the variations in the values of recovery for both protozoa are inherent to the protocols that were used and also associated to the analyzed matrix. However, the FM method is indicated for its practicability, time and results, being able to help the knowledge of the occurrence of these pathogens and minimize the possibility of its transmission by waterborne route / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T18:48:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leal_DiegoAveraldoGuiguet_M.pdf: 3198919 bytes, checksum: 4b596c748379fae87029d533ef64688a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Moluscos bivalves por serem eficazes organismos filtradores acumulam e concentram substâncias, partículas e até mesmo patógenos em seus tecidos, se os locais onde vivem ou são cultivados receberem cargas de efluentes contaminados. Estes animais atuam como bioindicadores de contaminação fecal e, ao serem ingeridos crus ou mal cozidos, podem transmitir os patógenos acumulados em seus tecidos. Diversos estudos em diferentes países reportaram a presença de protozoários patogênicos como Cryptosporidium e Giardia em moluscos bivalves destinados ao consumo humano, porém, no Brasil estes dados são inexistentes. Diante deste cenário, é interessante e relevante investigar a ocorrência destes protozoários neste tipo de alimento, consumidos em diversas regiões do país. Este estudo teve a finalidade de avaliar a contaminação natural por oocistos e cistos dos protozoários parasitos em moluscos bivalves localizados em um ambiente de estuário do litoral norte do Estado de São Paulo; detectar as formas parasitárias em água de rio e água do mar; verificar se existe correlação entre fatores climáticos, físico-químicos e microbiológicos e a ocorrência natural dos parasitos nestes ambientes aquáticos e verificar se existe correlação entre a qualidade das águas e a contaminação dos moluscos que vivem nesta região. Os exemplares de moluscos foram processados através da homogeneização de tecidos específicos e submetidos a centrífugo-concentração com éter-PBS e as amostras hídricas foram analisadas pela técnica de filtração em membranas. A visualização dos protozoários foi realizada através da reação de imunofluorescência direta e a confirmação da morfologia dos protozoários feita com a utilização de microscopia de contraste de fase e a incorporação de um corante vital (DAPI). Cistos de Giardia foram detectados em 8 das 12 amostras de água do rio e uma amostra continha oocistos de Cryptosporidium. Ambos os patógenos foram detectados na água do mar, onde Cryptosporidium esteve presente em 40,0 % e Giardia em 20,0 % do total amostrado. O pool de homogenados teciduais de brânquias foi positivo para oocistos e cistos em dois períodos, com concentrações de 12/oocistos/animal e 50 cistos/animal. Não houve associação significativa entre os fatores climáticos, físico-químicos e microbiológicos e o número de oocistos detectados na água do rio e na água do mar; para os cistos, foi encontrada uma correlação significativa com coliformes termotolerantes (p = 0,007) na água do mar. Ademais, não foi possível estabelecer correlação entre a qualidade da água e o número de cistos e oocistos detectados nos tecidos das ostras. Esta é a primeira vez que oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia foram encontrados em ostras de uma região costeira do país e também na América Latina. Estes achados têm importância para a saúde pública, pois refletem a extensão da contaminação dos ambientes e dos alimentos de origem marinha, requerendo a padronização de um controle de qualidade. Palavras-chave: Cryptosporidium spp.; Giardia spp.; moluscos bivalves; Crassostrea rhizophorae; água do mar; água de rio; estuário; esgoto / Abstract: Bivalve molluscs are great filter feeders that may accumulate and concentrate substances, particles and even pathogens in their tissues, if the places that they inhabit or are cultivated receive contaminated effluents dispose. These animals, which serve as biological indicators of faecal contamination, may transmit the protozoa accumulated in their tissues, whenever they are ingested in a raw or lightly cooked form. Several studies in different countries reported the presence of parasite protozoa like Cryptosporidium and Giardia in bivalve molluscs destined for human consumption, however, in Brazil, these data are non-existent. For this reason, it is interesting and relevant the investigation of the occurrence of these protozoan in this type of food, consumed in different regions of the country. The aim of this study was to evaluate the natural contamination of oocysts and cysts of parasite protozoan in bivalve molluscs located in an estuarine environment in the Northern coast of São Paulo State; detect this protozoan in river and seawater; verify if there is a correlation between climatic, microbiological, physical and chemical factors with the natural occurrence of parasites in aquatic environments and verify if there is a correlation between water quality and the contamination of bivalve molluscs present at the region. Bivalve molluscs were processed through the homogenization of specific tissues and submitted to centrifugal concentration with ether-PBS, and water samples were analyzed by membrane filtration technique. Protozoa were visualized with direct immunofluorescence antibody test and to confirm the morphology of the parasites, contrast-phase microscopy and the incorporation of a vital dye (DAPI) were used. Giardia cysts were detected in 8 of 12 samples of river water and one sample contained Cryptosporidium oocysts. Both pathogens were detected in marine water where Cryptosporidium were present in 40,0% and Giardia in 20,0% of all samples analyzed. Gill pools homogenates of oysters were positive for oocysts and cysts in two periods with a mean concentration of 12 oocysts/oyster and 50 cysts/oyster. There was no significant association between the climatic, physical, chemical and microbiological factors with the number of oocysts detected in river water and in seawater; for cysts, it was found a high association only with thermotolerant coliforms (p = 0,007) in seawater. Moreover, it was not possible to establish correlation between water quality and the number of oocysts and cysts detected in oysters tissues. This is the first time that Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts were found in oysters from the coastal region of Brazil, and it is also the first report in Latin America to date. These findings might be of public health importance, reflecting the extension of the contamination in marine environment and on seafood, requiring a need for quality control standards. Key-words: Cryptosporidium spp.; Giardia spp.; bivalve molluscs; Crassostrea rhizophorae; seawater; river water; estuary; sewage / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

O protozoário flagelado Giardia duodenalis é um parasito intestinal que pode infectar uma ampla variedade de mamíferos, incluindo os humanos e os animais domésticos e selvagens. Devido à carência de informações a respeito da caracterização molecular de amostras de Giardia spp. no Brasil, o presente estudo teve como objetivo analisar 113 amostras de fezes positivas para Giardia spp. de origem humana e animal. Um segmento do gene que codifica a enzima glutamato desidrogenase (gdh) dos isolados provenientes de 37 humanos, 31 cães, 20 gatos, 12 bugios, cinco bezerros, três chinchilas, duas avestruzes, dois cachorros-do-mato e uma onça-pintada foi amplificado e seqüenciado. A análise da seqüência de nucleotídeos do gene gdh mostrou que estes isolados foram divididos em seis linhagens genéticas principais (Assemblages A, B, C, D, E, F). O genótipo AII foi identificado apenas nas amostras de humanos, enquanto o genótipo AI foi detectado nos isolados de origem animal (gato, bezerro, onça-pintada). Os isolados de Giardia spp. provenientes dos humanos, bugios, chinchilas e avestruzes foram caracterizados como pertencente ao genótipo BIV. Entretanto, os demais Assemblages foram identificados apenas em um grupo específico de hospedeiros. Assemblage C e D foram encontrados nas amostras de cães e cachorros-do-mato, Assemblage F nas amostras de gatos e Assemblage E nas amostras de bezerros. A caracterização molecular das amostras de Giardia spp. gera uma importante contribuição para o conhecimento da especificidade de hospedeiro dos diferentes genótipos. / The flagellated protozoan Giardia duodenalis is an intestinal parasite that can infect a broad variety of mammalian hosts, including humans and domestic and wild animals. Due the lack of information about the molecular characterization of Giardia spp. in Brazil, this study aimed to analyse 113 stool samples from human and animals, all positive to Giardia spp. A segment of the glutamate dehydrogenase gene (gdh) of isolates from 37 humans, 31 dogs, 20 cats, five calves, 12 wild monkeys, three chinchilas, two ostrichs, two crab-eating-foxes and one jaguar was amplified and sequenced. Nucleotide sequences analysis of gdh gene showed that these isolates could be divided into six main genetic lineage (Assemblages A, B, C, D, E, F). The genotype AII was identified only in human isolates, whereas genotype AI was detected in a variety of animals (cat, calf, jaguar). In adition, Giardia spp. isolates recovered from human, wild monkeys, chinchila and ostrichs were characterized as genotype BIV. However the other Assemblages identified were confined to restrict host species. Assemblages C and D were found in isolates from dogs and crab-eating-foxes, Assemblage F from cats and Assemblage E from calves. The molecular characterisation of Giardia spp. isolates has made a major contribution to our understanding of the host specificity of different genotypes.

Orientador: Adriano Luiz Tonetti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Civil, Arquitetura e Urbanismo / Made available in DSpace on 2018-08-25T09:51:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leonel_LaysPaulino_M.pdf: 2123587 bytes, checksum: f2f21f542524435e2023085c25b3381d (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Diante do enorme problema de saúde pública que são as doenças de veiculação hídrica e do grande déficit sanitário existente no Brasil, principalmente nas cidades com população inferior a cinquenta mil habitantes e nas periferias dos grandes centros urbanos, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência de um sistema simplificado, composto por filtro anaeróbio, preenchido com anéis de bambu, associado a filtro de areia, na remoção de cistos de Giardia spp. e ovos de helmintos. O filtro anaeróbio foi operado com fluxo ascendente e tempo de detenção hidráulica de 12 horas, o efluente proveniente deste reator era aplicado sobre a superfície do leito de areia em oito cargas de 25 L m-2, totalizando uma taxa de aplicação de 200 L m-2dia-1. As amostras de efluente eram coletadas em três pontos, P01 (esgoto bruto), P02 (efluente do filtro anaeróbio) e P03 (efluente do filtro de areia), mensalmente, durante 12 meses. Nos últimos quatro meses, foram realizadas análises para detecção de cistos de Giardia spp. no lodo do filtro anaeróbio e de ovos de helmintos no leito do filtro de areia e também no lodo. O sistema também foi avaliado quanto à remoção de E. coli e quanto aos parâmetros físicos e químicos. O filtro anaeróbio foi capaz de remover 99,5 ± 28,7% da concentração estimada de cistos presentes no esgoto bruto, já o filtro de areia removeu 56,25 ± 31,6% dos cistos presentes no efluente anaeróbio, sendo a eficiência de remoção total do sistema igual 99,7%. Ovos de helmintos foram detectados em apenas três amostras de efluente anaeróbio, em uma concentração média de 1,5 ovos/L, sendo alcançada a remoção de 100% dos ovos após a passagem pelo filtro de areia. O sistema também proporcionou a redução de 4 unidades logarítmicas da concentração de E. coli presente no esgoto bruto, além do mais, o efluente produzido apresentou baixas concentrações de Demanda Química de Oxigênio (52 ± 24 mgL-1) e Sólidos Suspensos Totais (17 ± 20 mgL-1) e, baixos valores de turbidez (3 ± 4 UT), comprovando assim, a eficiência do sistema simplificado proposto tanto na remoção de patógenos quanto na adequação dos parâmetros físicos e químicos / Abstract: In the face of the enormous public health¿s problem that are the waterborne diseases and the big Brazilian sanitary deficit, especially at cities with less than fifty thousand inhabitants and big cities¿ peripheries, this study aimed to evaluate the efficiency of a simplified system, composed by an upflow anaerobic filter, filled with bamboo rings, associated with a sand filter, in the removal of Giardia cysts and helminths eggs. The anaerobic filter was operated with hydraulic retention time of 12 hours, the effluent from this reactor was applied to the sand bed surface in eight loads of 25 L m-2, with a total application rate of 200 L m -2 day-1. The samples were collected at three different points, P01 (raw sewage), P02 (anaerobic filter effluent) and P03 (Sand filter effluent), monthly, during 12 months. In the last four months were performed analysis to detect Giardia spp. cysts in the anaerobic filter sludge and helminths eggs in the sand filter bed and, as well, in the sludge. The system was also evaluated relating to the E. coli removal and for physical and chemical parameters. The anaerobic filter was able to remove 99.5 ± 28.7% of the estimated concentration of cysts present in raw sewage, while the sand filter removed 31.6 ± 56.25% of the cysts present in the anaerobic effluent, making the system total efficiency¿s removal of 99.7%. Helminth eggs were detected in three anaerobic effluent samples, in an average concentration of 1.5 eggs/L, and after the effluent passes through the sand filter there was a removal of 100% eggs. The system also provided a reduction of 4 log units of E. coli concentration existing in raw sewage, in addition the effluent produced showed low concentrations of Chemical Oxygen Demand (52 ± 24 mg L - ) and Total Suspended Solids (17 ± 20 mgL -1) and lower turbidity values (3 ±4 UT), proving then, the simplified system proposed efficiency both in removing pathogens, as the adequacy of physical and chemical parameters / Mestrado / Saneamento e Ambiente / Mestra em Engenharia Civil

Orientador: Cassiana Maria Reganhan-Coneglian / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Tecnologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T04:53:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Canale_Ivan_M.pdf: 7288933 bytes, checksum: 93678fbce9055e79b05000fd1cab8c23 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Estações de Tratamento de Água (ETA) de ciclo completo. Como o volume de ALF pode representar de 3 a 6% do volume de água tratada produzido na ETA, existe interesse cada vez maior no tratamento desse efluente para fins de recirculação junto com a água bruta aduzida à ETA. Entretanto, existe uma preocupação de que essa água residuária possa conter matéria orgânica, sólidos totais, metais, carbono orgânico, precursores de trihalometanos, cistos/oocistos de protozoários ou outras impurezas concentradas durante o processo de filtração. Este trabalho de pesquisa tem como objetivo caracterizar com base em parâmetros físico-químicos, microbiológicos e parasitológicos a água de lavagem de filtros gerada e recirculada na ETA Capim Fino, em Piracicaba / SP - Brasil. Foram avaliadas 12 amostras da água bruta do manancial que abastece a ETA (rio Corumbataí), ALF bruta, ALF clarificada (com o uso de polímeros auxiliares ou por simples sedimentação) e água filtrada da ETA. Para caracterização da ALF foram analisados os parâmetros físico-químicos: cloro residual, cor, turbidez, pH, alumínio solúvel, sólidos totais fixos, sólidos totais voláteis, sólidos sedimentáveis, carbono orgânico total e o potencial de formação de trihalometanos; os parâmetros microbiológicos: coliformes totais, Escherichia coli; e os protozoários patogênicos: Giardia spp. e Cryptosporidium spp. O monitoramento da ALF bruta apontou como principais características físico-químicas deste efluente elevados teores de turbidez, alumínio, carbono orgânico total, sólidos totais (fixos e voláteis), sólidos sedimentáveis e potencial de formação de THM. A clarificação da ALF com polímero aniônico possibilitou a redução na concentração dos diversos constituintes analisados. Giardia spp. foi detectada na água bruta (cinco resultados positivos e concentração de cistos variando de <LMD a 75,0 cistos/litro) e na ALF clarificada (dois resultados positivos e concentração de 50 cistos/litro). A pré-cloração realizada na ETA, bem como o uso de água tratada (clorada) para lavagem dos filtros garantiu praticamente ausência de E. coli na água de lavagem. A avaliação da água filtrada da ETA apresentou resultados em conformidade com a Portaria 2914/2011 (padrão de potabilidade) do Ministério da Saúde, com exceção da turbidez, onde foram observados quatro resultados acima do limite de 0,5 NTU estabelecido pela Portaria (1,53, 0,54 , 0,59 e 0,74 NTU), o que pode indicar um transpasse de partículas no efluente filtrado nos primeiros minutos seguintes à lavagem dos filtros. Não foram detectados E. coli ou protozoários na água filtrada. Diante do fato que a recirculação da ALF clarificada junto com a água bruta está ocorrendo numa vazão de 60 L/s, que corresponde a 4,5% da vazão de água bruta (1300 L/s) e de forma intermitente, provavelmente não deverão ocorrer efeitos indesejáveis ao processo de tratamento ou o comprometimento da qualidade da água tratada. Com intuito de precaução, é importante que seja dada toda a atenção ao tratamento (clarificação) da ALF antes da recirculação, para redução da turbidez a níveis mínimos possíveis e que a recirculação do efluente clarificado seja realizada na vazão de 4,5% ou menor / Abstract: Filter backwash water (FBWW) is the largest liquid waste generated in a conventional water treatment plant (WTP). As the volume of FBWW can represent from 3 to 6% of the volume of treated water produced in the WTP, there is an increasing interest in treatment and recycling of this effluent with raw water adducted to WTP. But FBWW would contain concentrated organic matter, total solids, metals, organic carbon, trihalomethanes (THM) precursors, cysts/oocysts of protozoa and other impurities which could be a concern. This research aims to characterize FBWW generated and recirculated in Capim Fino WTP in Piracicaba / SP - Brazil by physico-chemical, microbiological and parasitological analyses. Twelve samples of raw water from the river that supplies the WTP (Corumbataí river), raw FBWW, clarified FBWW (using auxiliary polymers or simple sedimentation) and filtered water were collected and evaluated. The physico-chemical parameters were: residual chlorine, color, turbidity, pH, soluble aluminum, total fixed and volatile solids, settleable solids, total organic carbon and THM potential formation; microbiological parameters: total coliforms and Escherichia coli; and pathogenic protozoa Giardia spp. and Cryptosporidium spp. Monitoring the raw FBWW pointed as the main physicochemical characteristics high levels of turbidity, aluminum, total organic carbon, total solids (fixed and volatile), sedimentary solids and THM potential formation. Clarification of FBWW with anionic polymer resulted in a reduction in the concentration of the various parameters. Giardia spp. was found in raw water (five positive results and cyst concentration ranging from <Minimum Detection Limit to 75 cysts/liter) and in clarified FBWW (two positive results, concentration of 50 cysts/liter). The pre-chlorination performed in the WTP and the use of treated water (chlorinated) for washing the filters virtually assured absence of E. coli in the FBWW. The filtered water were in compliance with the Brazilian drinking water standards, with the exception of turbidity. Four samples were above the maximum limit of 0.5 NTU (1.53, 0.54, 0.59 and 0.74 NTU), which may indicate a passage of particles in the first minutes after the washing of the filters. E. coli and protozoa were not detected in the filtered water. Because of the recirculation of clarified FBWW is mixed with raw water at a flow of 60 L/s, which corresponds to 4.5% of the flow of raw water (1300 L/s) and intermittently, it is probable that no undesirable effects would occur in the treatment and in the quality of the drinking water. It is important that full attention is given to treatment (clarification) of FBWW before recirculation to reduce turbidity to the minimum levels that are possible and that the recirculation of clarified effluent is conducted at a flow rate of 4.5% or less / Mestrado / Tecnologia e Inovação / Mestre em Tecnologia

Orientadores: Regina Maura Bueno Franco, Isabel Cristina Vidal Siqueira de Castro, Edson Aparecido Abdul Nour / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T10:51:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Greinert-Goulart_JulianeAraujo_D.pdf: 4997738 bytes, checksum: fddca06ec1f7089f7c5092bfde151876 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os protozoários Giardia spp. e Cryptosporidium spp. são importantes patógenos de veiculação hídrica e são responsáveis por diversos surtos epidêmicos relacionados ao consumo de água contaminada. O estudo da remoção de patógenos e da microfauna que compõem sistemas combinados anaeróbio/aeróbio ainda é incipiente no mundo. Este trabalho teve como objetivo Estudar a remoção de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. e avaliar a microfauna do sistema combinado anaeróbio/aeróbio de dois sistemas de Tratamento de Esgoto. Na ETE Piçarrão foram colhidas amostras de esgoto bruto, efluente e lodo do Reator Anaeróbio de Fluxo Ascendente (RAFA), lodo recirculado do tanque de aeração, efluente tratado e lodo condicionado e, da estação de tratamento de esgoto em escala de bancada foram colhidas amostras do lodo do filtro anaeróbio, lodo do biofiltro aerado submerso e lodo do decantador e efluente tratado. Os cistos e oocistos foram concentrados mediante centrifugação e filtração em membrana, empregou-se a reação de imunofluorescência direta e confirmação dos protozoários utilizando o corante vital DAPI e DIC. Para a análise da microfauna foram colhidas amostras de lodo ativado do tanque de aeração e do líquido obtido do biofiltro aerado submerso. A análise quantitativa dos micrometazoários e dos protozoários foi realizada em câmara de Sedgwick-Rafter. A análise qualitativa incluiu observação in vivo, culturas e técnicas ciliatológicas. A ETE Piçarrão apresentou eficiências de remoção de cistos de Giardia spp. que variaram de 99,8 a 100%, sendo observadas altas concentrações de cistos de Giardia spp. no esgoto bruto com uma média de 98.333 cistos/L, sendo que a maior parte dos cistos foi removida pelo RAFA e concentrou-se no lodo condicionado. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram detectados em apenas 3 meses na ETE Piçarrão e cistos de Giardia spp. foram detectados em todos os 24 meses de análises. O sistema em escala de bancada apresentou eficiência de remoção de praticamente 100% durante todo o estudo demonstrando que a combinação de sistemas anaeróbio/aeróbio, além de remover nutrientes, também contribui para remoção destes parasitos. O sequenciamento das amostras positivas para Cryptosporidium spp. resultou em perfis compatíveis com as espécies C. hominis e C. parvum e para Giardia spp. em perfis compatíveis com a espécie G. duodenalis assembleias AII e BIV. A microfauna do lodo ativado da ETE Piçarrão é diversificada e composta principalmente por organismos indicadores de boas condições operacionais. A microfauna do sistema em escala de bancada que visava remoção de nitrogênio teve composição diferente com relação às espécies e as abundâncias se comparados com aqueles encontrados em sistemas de lodos ativados convencional. Os ciliados Euplotes aediculatus e Sterkiella cavicola isolados da ETE Piçarrão demonstraram potencial predatório sobre oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia. O estudo da remoção destes parasitos patogênicos ressalta a importância do tratamento de esgotos sanitários para redução do impacto dos efluentes gerados no meio ambiente e na saúde pública; a necessidade de maior controle quanto ao tratamento de lodo condicionado e a utilização da microfauna como uma importante ferramenta na avaliação do desempenho de sistemas de tratamento de esgoto / Abstract: Giardia spp. and Cryptosporidium spp. are important waterborne pathogens responsible for several outbreaks related to consumption of contaminated water. Due to its long-term survival and peculiar behavior during sewage treatment, changes in system performance may result in decreased removal of these protozoa. Removal of pathogens and study of microfauna from combined system anaerobic / aerobic are still incipient in the world. This work aimed to study the removal of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts and evaluate the microfauna of the aerobic system of two wastewater treatment systems. Samples of the WWTP Piçarrão were collected from raw sewage, UASB effluent, UASB sludge, recirculated sludge from the aeration tank, treated effluent and conditioned sludge. Samples of the system bench scale were collected from the anaerobic filter sludge, submerged aerated biofilter sludge and sludge from the clarifier and the treated effluent. The cysts and oocysts were concentrated by centrifugation and membrane filtration. Protozoa were searched using the direct immunofluorescence assay and confirmation of protozoa using the vital dye DAPI and DIC. Samples were taken from the activated sludge of aeration tank and the liquid obtained from the submerged aerated biofilter for the analysis of the microfauna. Quantitative analysis of small metazoans and protozoan were held in Sedgwick-Rafter chamber. Predation assays were performed with ciliates from the two systems studied. WWTP Piçarrão showed removal efficiencies of Giardia spp. ranging from 99.8 to 100%. Raw sewage presented high concentrations of Giardia spp. (average of 98,333 cysts / L). The majority of cysts were removed by UASB and concentrated in the conditioned sludge emphasizing the importance of proper treatment of this residue. Cryptosporidium spp. was detected in 3 months in WWTP Piçarrão and Giardia spp. was detected in all 24 months of analysis. The combined system bench scale attained almost 100% of removal efficiency during the monitoring period demonstrating that the combination of anaerobic / aerobic systems contributes to removal of these parasites. All samples tested positive for Cryptosporidium spp. by immunofluorescence were also positive by PCR. The sequencing reaction resulted in profiles compatible with the species C. hominis and C. parvum, compared to homologous sequences available in GenBank database and Giardia spp. resulted in profiles supporting the species G. duodenalis assemblage IIA and BIV. The microfauna of the activated sludge from the WWTP Piçarrão are diverse and composed mainly of indicator organisms of good operating condition. Microfauna of the bench scale system, which aimed nitrogen removal, had different composition concerning the species and its abundance when compared with those found in conventional activated sludge systems. Free-living ciliates Euplotes aediculatus and Sterkiella cavicola isolated from WWTP Piçarrão demonstrated predatory potential for Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts. This study underscores the importance of sewage treatment to reduce the impact of effluents generated in the environment and in public health; the need for greater control regarding the treatment of conditioned sludge generated in sewage treatment plants and the use of microfauna as an important tool for assessing the performance of wastewater treatment systems / Doutorado / Parasitologia / Doutora em Parasitologia

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T14:45:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_RicardoCondeAlves_M.pdf: 3524379 bytes, checksum: 96e6db4afee4c65f60a4ee47a8ee3232 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Cães e gatos são os animais domésticos mais utilizados para interagir e conviver com as pessoas. Estes animais cada vez mais compartilham o mesmo habitat que os seres humanos. Em que pese os benefícios advindos deste íntimo relacionamento, há que se considerar que cães e gatos podem albergar parasitos com potencial zoonótico, dentre os quais Giardia e Cryptosporidium, ambos de grande importância na medicina veterinária e na saúde pública. Giardia é um protozoário entérico cosmopolita responsável por diarreia em grande variedade de hospedeiros, incluindo o ser humano. Cryptosporidium é um parasito emergente e oportunista, que ganhou destaque com o advento da síndrome da deficiência imunológica adquirida, uma vez que este protozoário pode causar quadros graves em indivíduos imunocomprometidos. Do ponto de vista epidemiológico, é importante entender quais são as espécies de Giardia e Cryptosporidium que acometem os seres humanos e os animais, bem como conhecer aquelas que possuem potencial zoonótico. Conhecer a prevalência desses parasitos na população de cães e gatos torna-se ferramenta importante, que possibilita delinear ações que reduzam o risco de transmissão para outros animais, bem como para a população humana. A determinação das assembleias de Giardia duodenalis mais prevalentes nos cães e gatos também é de grande relevância, visto que este protozoário possui grande diversidade genética e os hospedeiros das espécies canina e felina podem albergar tanto assembleias zoonóticas quanto espécie-específicas. O presente estudo teve como objetivo, através do uso de métodos parasitológicos tradicionais, avaliar a prevalência de G. duodenalis e Cryptosporidium sp. em cães (n=299) e gatos (n=38) pertencentes aos estratos errante, comunitário e semidomiciliado e recolhidos ao Centro de Controle de Zoonoses de Campinas (CCZ), no período de março de 2011 a março de 2012. As amostras fecais positivas para G. duodenalis foram caracterizadas molecularmente através do locus tpi. Também se avaliou a eventual associação entre as características epidemiológicas da população em estudo e infecção por Giardia e Cryptosporidium. Os resultados revelaram uma prevalência de 13,3% para G. duodenalis nas amostras fecais de cães. Houve diferença estatisticamente significativa em relação à consistência da amostra fecal, com maior ocorrência nas amostras pastosas ou diarreicas. A prevalência de G. duodenalis em gatos foi de 5,5%. Em relação ao Cryptosporidium, sua prevalência em cães foi de 2,0%. Não foram encontrados oocistos nas amostras de gatos. Os resultados moleculares indicaram em todas as amostras de cães sequenciadas identidade com as assembleias C ou D de G. duodenalis, sugerindo que animais desta espécie pertencentes aos estratos avaliados constituem baixo risco à saúde pública no município de Campinas. A amostra de gato em que foi possível realizar o sequenciamento revelou identidade com a assembleia AI, demonstrando que animais desta espécie pertencentes aos estratos avaliados podem se constituir em preocupação em saúde pública no município de Campinas, podendo os mesmos eliminar cistos com potencial zoonótico / Abstract: Dogs and cats are the most common domestic animals used for interact and live with humans. Even more these animals are sharing the same habitat with the human beings. Despite of the benefits of this intimate relationship, we must consider that dogs and cats can be hosts for zoonotic parasites, including Giardia and Cryptosporidium, both parasites with great relevance in veterinary medicine and public health. Giardia is a cosmopolitan enteric protozoan responsible for diarrhea in a wide variety of hosts, including man. Cryptosporidium is an emergent and opportunist parasite, which attained relevance with the advent of the acquired immune deficiency syndrome, since this parasite can cause severe disease in immunocompromised individuals. From an epidemiological standpoint, it is important to understand which are the Cryptosporidium species and Giardia genotypes which affect humans and animals, as well as know those with zoonotic potential. The prevalence rates knowledge of these parasites in canine and feline populations becomes an important tool that makes possible to delineate actions to reduce risk of transmission to other animals, as well as to the human population. The assemblages of Giardia duodenalis more prevalent in dogs and cats are also an important determination, since this protozoan has great genetic diversity and also the canine and feline's host species can harbor both zoonotic and species-specific assemblages. Through the use of traditional parasitological methods, the present study aimed to evaluate the prevalence of G. duodenalis and Cryptosporidium sp. in dogs (n=299) and cats (n=38) belonging to stray, community and semi-domesticated strata and captured by the Zoonosis Control Center of Campinas (CCZ), from March 2011 to March 2012. The positive samples for G. duodenalis have been molecularly characterized through locus tpi. The possible association among the epidemiological characteristics of the studied population with the infection by Giardia and Cryptosporidium, was also evaluated. The prevalence of G. duodenalis was 13.3% in fecal samples in dogs and statistical significant difference has been observed in relation to the consistency of the fecal sample, with higher prevalence in doughy or diarrheic samples. The prevalence of G. duodenalis in cats was 5.5%. In relation to Cryptosporidium, the prevalence in dogs was 2.0%. Oocysts were not found in fecal samples from cats. All amplified sequences sampled from dogs feces showed identity with C or D assemblage of G. duodenalis, suggesting that dogs belonging to evaluated strata constitute low risk to public health in the city of Campinas. The cat's fecal sample, which were possible to sequence, showed identity with the Assemblage AI, demonstrating that animals of this species belonging to this particular strata can be a concern in public health for the city of Campinas, since they can eliminate cysts with zoonotic potential / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia