A doença periodontal tem sido frequentemente associada ao parto pretermo. A plausibilidade biológica para tal associação baseia-se na hipótese de uma inflamação sistêmica de baixa intensidade de origem periodontal. Entretanto, os estudos de intervenção que investigaram o efeito da terapia periodontal durante a gestação não observaram reduções significativas na incidência de prematuridade. Como diversas citocinas têm sido associadas tanto a doença periodontal quanto ao parto pretermo, cogita-se que elas desempenhem um papel importante na associação observada. Até o presente momento, pouco se sabe a respeito da correlação entre os níveis de citocinas no soro e no fluído crevicular gengival (FCG), assim como do efeito da terapia periodontal sobre esses marcadores de inflamação em gestantes. O objetivo desta tese foi avaliar a relação entre níveis sistêmicos e periodontais de biomarcadores inflamatórios relacionados com a resposta imune periodontal e também com os mecanismos de parto. Também investigou-se o efeito da terapia periodontal sobre os níveis dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Esta tese é composta por dois estudos que utilizaram uma sub-amostra de mulheres que haviam sido recrutadas para um ensaio clínico randomizado maior que investigou o efeito da terapia periodontal sobre a incidência de prematuridade. Mulheres entre 18-35 anos e com até 20 semanas de gestação foram aleatoriamente alocadas para receber tratamento periodontal não cirúrgico completo até a 24a semana de gestação (grupo teste) ou apenas uma consulta de uma remoção de cálculo supragingival (grupo controle). Dados clínicos e amostras de sangue e FCG foram coletadas no início do estudo, entre 26-28 semanas de gestação e 30 dias após o parto. Quatro sítios periodontais por paciente foram aleatoriamente selecionados para coleta de FCG entre aqueles com maior profundidade de sondagem. Os níveis de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL- 12p70 e FNT-α foram analisados por citometria de fluxo. No estudo 1, investigou-se a correlação e concordância entre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas em 100 pacientes, utilizando dados coletados até a 20a semana de gestação. As pacientes apresentaram extensa inflamação e limitada destruição periodontal. A correlação entre os níveis de citocinas no soro e no FCG foi baixa e não significativa, com exceção da IL-12p70 que mostrou uma correlação moderada, porém significativa, entre as duas fontes (r=0.32, p=0.001). Os níveis de citocinas observados no FCG explicaram menos de 10% dos respectivos níveis observados no soro, com exceção da IL-12p70 em que eles foram responsáveis por 23% dos níveis séricos (p=0.0001, r2=0.23). A profundidade de sondagem e o sangramento a sondagem estiveram significativamente associados com os níveis de IL-1β, IL-6 e IL-8 no FCG, mas tiveram efeitos limitados sobre os níveis sistêmicos de todas as citocinas. No estudo 2, comparou-se o efeito da terapia periodontal durante a gestação (n=30) com uma consulta única de remoção de cálculo supragingival (n=30) sobre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Após o tratamento, uma redução drástica da inflamação periodontal foi observada no grupo teste, com o percentual de sangramento a sondagem reduzindo de 49.62% para 11.66% dos sítios (p<0.001). A terapia também reduziu significativamente os níveis de IL-1β e IL-8 (p<0.001) no FCG. Entretanto, nenhum efeito significativo do tratamento foi observado em relação aos níveis sistêmicos dessas citocinas. Após o parto, os níveis periodontais de IL-1β no grupo teste permaneceram significativamente menores que no grupo controle, enquanto que nenhuma diferença foi observada em relação aos níveis sistêmicos das outras citocinas avaliadas. Pode-se concluir que os níveis de citocinas no soro e FCG não estão significativamente associados em mulheres com extensa inflamação mas limitada destruição periodontal. Embora a terapia periodontal durante a gestação reduza significativamente o nível de citocinas no FCG, ela parece não ter um impacto considerável sobre os níveis sistêmicos desses biomarcadores. / Periodontal disease has been frequently associated with preterm birth. The biological plausibility for this association relies on the hypothesis of a low-grade systemic inflammation originated from periodontal disease. However, clinical studies that investigated the effect of periodontal therapy during pregnancy did not observe significant reductions in the incidence of prematurity. Several cytokines have been associated with both periodontal disease and preterm birth, and might play a key role in the observed association. To date, little is known about the correlation between serum and gingival crevicular fluid (GCF) cytokine levels, as well as the effect of periodontal therapy on these inflammatory markers in pregnant women. The aim of this thesis was to investigate the relationship between periodontal and systemic levels of inflammatory biomarkers related to periodontal immune response and also with the mechanisms of delivery. We also investigated the effect of periodontal therapy on serum and GCF cytokine levels during pregnancy and 30 days postpartum. This thesis consists of two studies that used a sub-sample of women who had been previously enrolled in a larger randomized controlled trial investigating the effect of periodontal therapy on the incidence of preterm birth. Women aged between 18-35 years and up to 20 weeks of gestation were randomly assigned to receive comprehensive nonsurgical periodontal treatment before the 24th gestational week (test group) or a single appointment of supragingival calculus removal (control group). Clinical data, blood and GCF samples were collected at baseline, between 26-28 weeks of gestation and 30 days postpartum. Four periodontal sites per patient were randomly selected for GCF collection among those with deepest probing depth. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 and TNF-α levels were analyzed using a cytometric bead array. In the study one, we investigated the correlation and agreement between periodontal and systemic levels of these cytokines in 100 patients, using data collected until 20 weeks of gestation. Patients presented widespread periodontal inflammation but limited destruction. The correlation between serum and GCF cytokine levels was low and not significant, except for IL-12p70, which showed a moderate but significant correlation between the two sources (r = 0.32, p = 0.001). The GCF cytokine levels observed explained less than 10% of the respective serum levels observed, except for IL-12p70, which was responsible for 23% of serum levels (p = 0.0001, r2 = 0.23). Probing depth and bleeding on probing were significantly associated with IL-1β, IL-6 and IL-8 GCF levels, but had limited effects on systemic levels of all cytokines. In the study two, we compared the effect of periodontal therapy during pregnancy (n=30) or a single appointment for supragingival calculus removal (n=30) on periodontal and systemic levels of these cytokines during pregnancy and 30 days postpartum. After treatment, a remarkable reduction of periodontal inflammation was observed in the test group, with bleeding on probing reducing from 49.62% to 11.66% of the sites (p<0.001). Periodontal therapy also significantly reduced IL-1β and IL-8 GCF levels (p<0.001). However, no significant differences due to therapy were observed regarding systemic levels of these cytokines. After delivery, IL-1β GCF levels in the test group remained significantly lower than in the control group, whereas no difference was observed for systemic levels of any other cytokine evaluated. It can be concluded that serum and GCF cytokine levels are not significantly associated in women with widespread periodontal inflammation but limited destruction. Although periodontal therapy during pregnancy significantly reduces GCF cytokine levels, it seems to have a negligible impact on systemic levels of these biomarkers.

Kronisk parodontit orsakar vävnadsdestruktion till följd av matrixmetalloproteinasaktivitet. Dessa enzym härrör från värdcellerna och är en del av det immunologiska svaret på bakteriella virulensfaktorer. Grönt te har studerats för sina hälsofrämjande egenskaper, som omfattar bland annat anti-inflammatoriska effekter. Effekten beror delvis på enzyminhibering av tepolyfenoler. Syftet med denna studie var att ytterligare undersöka den inhiberande effekten av grönt te, med fokus på enzymatisk aktivitet i gingivalvätska från patienter med parodontal sjukdom. Patienter med kronisk parodontit valdes ut för att delta i studien. Gingivalvätska extraherades med mikropipetter från patienternas gingivala sulci. Proverna behandlades med grönt te och jämfördes med obehandlade prover från samma försöksperson. Fluorescens proteasanalys med kasein som substrat utfördes på fjorton prover för att detektera skillnader i kaseinolytisk aktivitet. Zymogramanalys med användning av gelatin som substrat utfördes på fyra prover, för att undersöka skillnader i gelatinolytisk aktivitet och analysera molekylvikter för de olika enzymerna. Den fluorometriska analysen visade en signifikant lägre enzymaktivitet i prover med tillsatt grönt te jämfört med obehandlade prover (p<0.001). Zymogramanalysen visade en skillnad i enzymaktivitet som var mest uttalad i banden för molekylär vikt runt 255 kDa, analogt med komplex av matrixmetalloproteinas-9. Sammanfattningsvis har det i denna studie påvisats att grönt te har en hämmande effekt på kaseinolytisk aktivitet och en mindre, mer specifik, hämmande effekt på gelatinasaktivitet. / Chronic periodontitis involves tissue destruction by matrix metalloproteinase, derived from the host cells, as part of the immunological response to bacterial virulence factors. Green tea has been studied for its health promoting properties, which includes anti-inflammatory effects. The effect is in part due to enzyme inhibition by tea polyphenols. The aim of this study was to further investigate the inhibitory effect of green tea, focusing on enzymatic activity in gingival crevicular fluid from patients with periodontal disease. Patients with chronic periodontitis were selected for participation in the study. Gingival crevicular fluid was extracted with micropipettes from the gingival sulci of the patients. Samples were treated with green tea and compared with untreated samples from the same subject. Fluorescence protease assay with casein as substrate was made using fourteen samples for detecting differences in caseinolytic activity. Zymogram assay using gelatin as substrate was done using four samples to test gelatinolytic activity and analyse molecular weights of the different enzymes. The fluorometric assay showed a significantly lower enzyme activity in samples mixed with green tea than untreated samples (p<0.001). The zymogram assay showed a difference in band strength which was most pronounced in the bands of molecular weight around 255 kDA, analogous to complexes of matrix metalloproteinase-9. In conclusion, green tea has been shown in this study to have a strong inhibitory effect on caseinolytic activity and a lesser, more specific, inhibitory effect on gelatinase activity.

A introdução da terapia antirretroviral (TARV) causou impacto significativo na qualidade de vida e controle de infecções oportunistas em indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), desta forma é crescente o interesse no estudo de doenças orais crônicas na era pós-TARV, com destaque para a periodontite crônica (PC). Foi avaliado o efeito da terapia periodontal não-cirúrgica (TPNC) nos parâmetros clínicos periodontais, perfil de citocinas salivares e no fluido crevicular gengival (FCG) e na colonização oral por Candida spp em indivíduos infectados pelo HIV com PC, por meio de um estudo quase-experimental. Indivíduos infectados pelo HIV (grupo teste) e não-infectados pelo HIV (grupo controle), ambos com PC foram avaliados. Os seguintes parâmetros foram analisados (1) clínicos, (2), imunológicos e (3) e microbiológicos: 1) índice gengival (IG), profundidade de sondagem (PS), nível de inserção clínica (NIC) e número de dentes; 2) níveis de linfócitos T CD4+ e carga viral plasmática (apenas para o grupo teste), níveis salivares de interleucina (IL)-6, IL-8 e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-&alpha;) e níveis no FCG de lactoferrina (Lf) e histatina-5 (Hst-5), e 3) colonização oral por Candida spp. Os parâmetros foram analisados em três diferentes tempos (tempo 0 = baseline; tempo 2 = 30 dias após TPNC e tempo 3 = 90 dias após TPNC). A contagem de linfócitos T CD4+ e carga viral foi realizada em amostras de sangue dos pacientes do grupo teste, as ILs, Lf e Hst-5 foram dosadas por Enzyme-Lynked Immunosorbent Assay (ELISA) e a contagem e classificação de Candida spp foram determinadas a partir de amostras de enxaguado bucal. Nas comparações entre grupos por tempo, ambos apresentaram redução de IG (p<0,0001), PS (p<0,0001), bem como ganho de inserção clínica (p<0,0001) e houve aumento na contagem de linfócitos T CD4+ (p=0,0120) para o grupo teste. A quantificação da carga viral variou (p=0,2984), embora tenha ocorrido diminuição de alguns outliers iniciais com valores altos. Em relação aos biomarcadores, não foi possível observar diminuição estatisticamente significante com o tempo para IL-6 (p=0,6879), IL-8 (p=0,0557), TNF-&alpha;(p=0,7013), Lf (p=0,8188) e Hst-5 (p=0,1780) embora o declínio para IL-8 tenha sido mais acentuado. Pôde-se observar uma tendência de aumento entre o tempo 0 e tempo 2, seguido de 20 diminuição no tempo 3 para os grupos teste e controle da IL-8 e Hst-5, em contraste com o declínio linear para o grupo controle da IL-6. As concentrações de Lf apresentaram padrão de aumento do tempo 0 ao tempo 2 e diminuição do tempo 2 ao tempo 3 para o grupo teste, ao contrário do grupo controle, que diminuiu do tempo 0 ao tempo 2 e diminuiu do tempo 2 ao tempo 3. A análise de Candida spp foi dicotomizada entre os grupos teste e controle e mostrou diminuição significante ao longo dos tempos para ambos os grupos (p<0,0001). Pode-se concluir que a TPNC teve impacto benéfico nos marcadores sistêmicos da infecção pelo HIV e nos níveis de IL-8 salivar, além de reduzir a colonização oral por Candida spp em ambos os grupos / The introduction of antiretroviral therapy (ART) has had a significant impact on the quality of life and control of opportunistic infections in individuals infected by the human immunodeficiency virus (HIV), thus increasing interest in the study of chronic oral diseases in the post-ART era, with emphasis on chronic periodontitis (CP). The effect of non-surgical periodontal therapy (NSPT) on periodontal clinical parameters, salivary cytokine profile and gingival crevicular fluid (GGF), and oral colonization by Candida spp in HIV-infected individuals with CP was evaluated by means of a study quasi-experimental. Individuals infected with HIV (test group) and non-HIV infected (control group), both with CP were evaluated. The following parameters were analyzed: (1) clinical, (2) immunological, (3) and microbiological: 1) gingival index (GI), probing depth (PD), clinical attachment level (CAL) and number of teeth; 2) levels of CD4+ T lymphocytes and plasma viral load (only for the test group), salivary levels of interleukin (IL) -6, IL-8 and tumor necrosis factor-alpha (TNF-&alpha;) and levels of lactoferrin (Lf) and histatin-5 (Hst-5), and 3) oral colonization by Candida spp. The parameters were analyzed at three different times (time 0 = baseline, time 2 = 30 days after NSPT and time 3 = 90 days after NSPT). The CD4+ T lymphocyte count and viral load were performed on blood samples from the patients in the test group, ILs, Lf and Hst-5 were dosed by Enzyme- Lynked Immunosorbent Assay (ELISA) and the counting and classification of Candida spp were determined from oral rinse samples. In the comparisons between groups by time, both presented reduction of IG (p <0.0001), PD (p <0.0001), as well as clinical attachment gain (p<0.0001) and there was an increase in CD4+ T lymphocyte count (p=0.0120) for the test group. The viral load quantification varied (p=0.2984), although some initial outliers with a high value decreased. Regarding to the biomarkers, it was not possible to observe statistically significant decrease with time for IL-6 (p = 0.6779), IL-8 (p = 0.0557), TNF-&alpha; (p = 0.8188) and Hst-5 (p = 0.1780) although the decline for IL-8 was more pronounced. A tendency to increase between time 0 and time 2, followed by decrease in time 3 for the test and control groups of IL- 8 and Hst-5, could be observed in contrast to the linear decline for the control group of IL- 6. 23 Lf concentrations showed a pattern of increase from time 0 to time 2 and decrease from time 2 to time 3 for the test group, unlike the control group, which decreased from time 0 to time 2 and decreased from time 2 to time 3. Candida spp analysis was dichotomized between the test and control groups and showed a significant decrease over time for both groups (p <0.0001). It can be concluded that NSPT had a beneficial impact on the systemic markers of HIV infection and on salivary IL-8 levels, in addition to reducing oral colonization by Candida spp in both groups

Pacientes com câncer de mama sob quimioterapia tem níveis aumentados de marcadores inflamatórios, que podem piorar condições periodontais pré-existentes. Este estudo avaliou o efeito do tratamento periodontal nao cirúrgico (TPNC) e estabeleceu a correlação entre os parâmetros clínicos com os níveis de citocinas presentes no fluido crevicular gengival (FCG) antes e após TPNC. Quarenta indivíduos foram alocados em dois grupos; pacientes com periodontite cronica (PC) (n=20) e pacientes com câncer de mama com periodontite crônica (CAN/PC) (n=20). Os seguintes parâmetros clínicos e imunológicos foram analisados: i) profundidade de sondagem (PS), nível clinico de inserção (NCI), índice gengival (IG), índice de placa (IP), ii) avaliação dos níveis de Interleucina (IL) - 4, IL-10, IL-17, IL-2, IL-6, IL-1&beta;, Interferon gama (INF-&gamma;), Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-&alpha;) e Fator de Crescimento Tumoral-beta (TGF-&beta;) no fluido crevicular gengival (Luminex), no baseline, 45 dias e 180 dias após TPNC. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados. Nas comparações entre grupos: No baseline, o grupo PC apresentou níveis maiores de INF-&gamma; e níveis menores de IL- 10 e TGF-&beta; quando comparados ao grupo CAN/PC. Aos 45 dias o grupo CAN/PC apresentou níveis mais reduzidos de TNF-&alpha; (p < 0,0001) em comparação com o grupo PC. Em relação aos 180 dias, o grupo PC apresentou níveis mais reduzidos de INF-&gamma; (p < 0,001), IL-2 (p < 0. 001), TNF-&alpha; (p < 0,0001) e níveis elevados de IL-10 (p < 0,01) e TGF-&beta; (p < 0,001), quando comparados ao grupo CAN/PC. Nas comparações entre períodos de tempo: o grupo CAN/PC apresentou uma redução significativa de IL-2 aos 45 e 180 dias (p < 0,05) em comparação com baseline, TNF-&alpha; teve uma redução aos 45 dias, em comparação com baseline (p < 0.0001), alem disso, houve uma redução significativa do TGF-&beta; aos 180 dias em comparação com baseline (p < 0,0001). Enquanto IL-1&beta;, foi aumentado aos 45 dias em comparação com baseline (p < 0,05). No grupo PC, houve uma redução significativa dos níveis de INF-&gama; aos 180 dias, em comparação com baseline (p < 0,0001) e 45 dias (p < 0,05). Da mesma forma, IL-2 e TNF-&alpha; reduziram aos 180 dias, em comparação com baseline (p < 0,0001) e 45 dias (p < 0,0001), bem como um aumento de TGF-&beta; aos 180 dias, em comparação com baseline (p < 0,05) e 45 dias (p < 0,0001). Na análise de correlação entre os parâmetros clínicos e os níveis de citocinas do FCG: No grupo CAN/PC, foi encontrado uma positiva correlação entre PS e os níveis de TNF-&alpha; (r = 0.6489, p = 0.002) no baseline. IL-17 foi positivamente correlacionado com redução de PS (r = 0.4596, p = 0.04) aos 180 dias; assim também IL-6 foi positivamente correlacionado com redução de PS e ganho de NCI (r = 0.4513, p = 0.05, r = 0.5578, p = 0.01, respectivamente) aos 180 dias. No grupo PC, IL-17 foi positivamente correlacionada com PS e NCI (r = 0.4558, p = 0.04, r= 0.5447, p = 0.01, respectivamente) no baseline. IL-1&beta; foi positivamente correlacionado com redução de PS e ganho de NCI (r = 0.5538, p = 0.01, r = 0.5902, p = 0.006, respectivamente), aos 45 dias. Uma negativa correlação foi encontrada entre IL-4 e ganho de NCI (r = -0.4981, p = 0.03) aos 180 dias. Pode-se concluir que a TPNC reduz os estímulos antigênicos e consequentemente ajuda a reduzir a carga inflamatória de pacientes com câncer de mama com periodontite crônica, melhorando assim as condições clinicas periodontais e sistêmicas. / Patients with breast cancer undergoing chemotherapy have increased levels of inflammatory markers, which may worsen pre-existing periodontal conditions. The aim of this study was to evaluate the effect of non-surgical periodontal treatment (NSPT) and to establish a correlation between clinical parameters and levels of cytokines present in the gingival crevicular fluid (GCF) before and after NSPT. Forty individuals were allocated in two groups; patients with chronic periodontitis (PC) (n = 20) and patients with breast cancer with chronic periodontitis (CAN/PC) (n = 20). The following clinical and immunological parameters were analyzed: i) probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), gingival index (GI), plaque index (PI), ii) levels of Interleukin (IL) - 4, IL-10, IL-17, IL-2, IL-6, IL-1&beta;, Interferon gamma (INF-&gama;), tumor necrosis factor (TNF-&alpha;), transforming growth factor beta (TGF-&beta;) in gingival crevicular fluid (Luminex) in baseline, 45 days and 180 days after NSPT. The data were statistically analyzed. In the comparisons between groups: At the baseline, the PC group had higher levels of INF-&gama; and low levels of IL-10 and TGF-&beta; when compared to the CAN/PC group. At 45 days, the CAN/PC group had lower levels of TNF&alpha;- (p <0.0001) compared to the PC group. In 180 days, the PC group had lower levels of INF-&gama; (p <0.001), IL-2 (p < 0. 001), TNF-&alpha; (p <0.0001), and higher levels of IL-10 (p < 0.01) and TGF-&beta; (p < 0.001), compared to the CAN/PC group. In comparisons between periods: The CAN/PC group showed a significant reduction of IL-2 at 45 and 180 days (p < 0.05) compared to baseline, TNF-&alpha; had a reduction at 45 days, when compared to baseline (p < 0.0001). In addition, there was a significant reduction of TGF-&beta; at 180 days when compared to the baseline (p < 0.0001), while IL-1&beta; increased at 45 days when compared to baseline (p < 0.05). The P group showed a significant reduction of INF-&gama; at 180 days when compared to baseline (p < 0.0001) and 45 days, (p <0.05). In the same manner, IL-2 and TNF-&alpha; had a reduction at 180 days when compared to baseline (p < 0.0001) and 45 days (p <0.0001). Likewise, there was an increase of TGF-&beta; at 180 days when compared to the baseline (p < 0.05) and at 45 days (p <0.0001). IL-17, IL-6 and IL-4 had no statistically significant differences between groups in all time points. In the analysis of correlation between the clinical parameters and the cytokine levels of the GCF: In the CAN/P group, a significant positive correlation was found between PD and TNF-&alpha; levels (r = 0.6489, p = 0.002) at baseline. IL-17 was positively correlated with PD reduction (r=0.4596, p = 0.04) at 180 days; also IL-6 was significantly positively correlated with PD reduction and CAL gain (r = 0.4513, p = 0.05, r = 0.5578, p = 0.01, respectively) at 180 days. In the P group, IL-17 was also positively correlated with PD and CAL (r = 0.4558, p = 0.04, r = 0.5447, p = 0.01, respectively) at baseline. IL-1&beta; was positively correlated with PD reduction and CAL gain (r = 0.5538, p = 0.01, r = 0.5902, p = 0.006, respectively) at 45 days. A negative correlation was found between IL-4 and CAL gain (r = -0.4981, p = 0.03) at 180 days. In conclusion, these data suggest that NSPT reduces antigenic stimuli and consequently helps to reduce the inflammatory burden in breast cancer patients with chronic periodontitis.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:57:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nancielli Teixeira - Influencia de diferentes_ resinas e tecn.pdf: 1668593 bytes, checksum: 73d67bc8169b66441386241284104ea5 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the influence of different composite resins and technical polishing and finishing over periodontals tissues and gingival crevicular fluid in cervical lesions restorations noncarious (LCNC). Initially were evaluated 272 teeths of patients with complaints related to LCNC and, acordding to the inclusion and exclusion criteria were selected 60 teeths for elegibility. Each tooth received a restoration with a kind of composite resin (Resin Tetric N-Ceram® or Resin Z350 XT®) in both quadrants, varying the polishing technique ( Astropol® Polishing rubber or Sof-lex® Disks). Periodontal tissues analysis, the longitudinal evaluation of restaurations and the gengival crevicular fluid collect were taken prior to scalling and root planning and also at 30, 60, 120 and 180 days of restaurations making. After the data collection and tabulation , these were submited to the Friedman test, with a significance level of 5%. The results revealed that resins and polishing techniques applied in this study showed no estatistical differences at the end of follow-up in any of the analyzes. However all groups evaluated showed differences between the initial and final times (p <0.05). From the results obtained it was concluded that regardless of the restorative material or polishing technique, the restoration of LCNC cavities improved the periodontal health of patients / O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência de diferentes resinas compostas e técnicas de acabamento e polimento sobre os tecidos periodontais e o fluído crevicular gengival em restaurações de lesões cervicais não cariosas. Foram avaliados inicialmente 272 dentes de pacientes com queixas relacionadas à LCNC e, a partir dos critérios de inclusão e exclusão definidos, foram selecionados para elegibilidade 60 dentes, divididos em 4 grupos com N:15 dentes. Cada dente recebeu restauração com um tipo de resina composta nanoparticulada (Resina Tetric N-Ceram® ou Resina Z350 XT®) nos dois hemiarcos, variando a técnica de polimento (Borrachas de polimento Astropol® ou Discos Sof-lex®). A análise periodontal dos tecidos, a avaliação longitudinal das restaurações e a coleta do fluido crevicular gengival foram realizadas antes da raspagem e alisamento corono-radicular, e também aos 30, 60, 120 e 180 dias após a confecção das restaurações. Após a obtenção e tabulação dos dados, esses foram submetidos ao teste de Friedman, com nível de significância de 5%. Os resultados revelaram que as resinas e as técnicas de polimento utilizadas neste estudo não apresentaram diferenças estatísticas ao final do período de acompanhamento em nenhuma das análises. Porém, todos os grupos avaliados apresentaram diferenças entre os tempos iniciais e finais (p<0,05). A partir dos resultados obtidos foi possível concluir que, independente do material restaurador ou da técnica de polimentos utilizada, a restauração das cavidades de LCNC proporcionou melhora da saúde periodontal dos pacientes

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:57:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao corrigida - finalizada (16 de abril)a.pdf: 1391478 bytes, checksum: 48ccd69d69cf234b54e5fd0bda78b5ff (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / Fundação Araucária / Aim: Recent studies demonstrate Diabetes Mellitus (DM) as a risk factor for the impairment of periodontal health and a growing body of evidence has been supporting periodontal disease (PD) as having an adverse effect on glycemic control and on the pathophysiology of the diabetes-related complications. This study aims to evaluate the effect of periodontal therapy immoderately compensated and decompensated type 2 diabetic patients. Subjects and methods: 40 patients with DM2 and periodontal disease were selected and divided into two groups: Group 1: Moderately compensated; Group 2: Decompensated. Of these 40 patients, only 35 participated in the study. The analyses were performed at 0, 3 and 6 months after scaling and root planning and including clinical periodontal parameters and the quantification of gingival crevicular fluid (GCF). Glycated hemoglobin (HbA1c), fasting glucose (FG) and IL1-&#946; expression were measured. Results: Both groups presented improvement in all clinical periodontal parameters as well as quantification of gingival crevicular fluid and in the expression of IL-1ß present in the fluid after 6 months. However, no statistically significant difference was found in the levels of HbA1C in the first group after 6 months, although a significant increase was found after six months in the other group. While in relation to the FG, a great improvement was found in the first group and a significant increase in the second group after six months. Conclusion: It was possible to observe that conventional periodontal treatment (scaling and root planing) is more effective for moderately compensated type 2 diabetic patients glycemic control rather than for the decompensated patients. / Estudos recentes demonstraram o Diabetes Mellitus (DM) como um fator de risco para o comprometimento da saúde periodontal e crescentes evidências apontam que a doença periodontal (DP) tem um efeito adverso sobre o controle glicêmico e uma participação ativa na fisiopatologia das complicações relacionadas ao DM. Objetivo: Avaliar o efeito do tratamento periodontal em pacientes portadores de Diabetes Mellitus tipo 2 moderadamente compensados e descompensados. Metodologia: Foram selecionados 40 pacientes com DM2 e periodontite, estes foram divididos em dois grupos: Grupo 1: moderadamente compensados; Grupo 2: descompensados. Destes 40 pacientes, apenas 35 participaram do estudo. As análises foram realizadas aos 0, 3 e 6 meses após raspagem e alisamento radicular, incluindo parâmetros clínicos periodontais e a quantidade de fluido crevicular gengival (GCF). Foram dosadas a hemoglobina glicada (HbA1c), a glicemia em jejum (GJ) e a expressão IL1&#946;. Resultados: Houve uma melhora de todos os parâmetros clínicos periodontais avaliados em ambos os grupos, assim como da quantidade de GFC e dos níveis de IL-1ß presentes no fluído após um período de 6 meses. No entanto, em relação aos níveis de HbA1c, estatisticamente, não houve alteração ao final dos 6 meses no grupo moderamente compensado, enquanto nos descompensados, houve um aumento significativo ao final dos 6 meses. Já com relação à GJ, houve uma melhora significativa no primeiro grupo e um aumento significativo no segundo grupo ao final dos 6 meses. Conclusão: Sendo assim, pode-se concluir que o tratamento periodontal básico (raspagem e alisamento radicular convencional) foi mais efetivo para o controle glicêmico dos pacientes com diabetes tipo 2 moderadamente compensados do que nos descompensados.

O objetivo deste estudo foi utilizar biópsias minimamente invasivas para avaliar a expressão de mediadores inflamatórios e sua correlação com o fluido gengival em pacientes com periodontite severa. O grupo teste compreendeu 22 pacientes com periodontite severa (idade média 45,5 &#61617; DP 8,9 anos), analisados por sítios rasos e profundos, e o grupo controle por 14 pacientes periodontalmente saudáveis (idade média 39,35 &#61617; DP 16,5 anos). As amostras do fluido gengival foram coletadas com papel absorvente, nos mesmos sítios de onde foram realizadas as biópsias, e quantificadas, por Luminex, para IFN- &#947;, IL 1-&#946;, IL-6, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IL-17F, sCD40L e TNF&#945;. Foram coletadas biópsias, com um punch de 2mm de diâmetro nos grupos teste e controle. A avaliação imuno-histoquímica foi semiquantitativa, nas células epiteliais, plasmócitos, macrófagos, fibroblastos e células endoteliais, para a IL1-&#946;, IFN-&#947;, IL-6 e IL-17. Foram observadas marcações imuno-histoquímicas, em todos os grupos celulares analisados, tanto nos pacientes com periodontite como nos controles, sem diferenças significativas entre eles. O fluido gengival apresentou maiores quantidades para os marcadores IL-1&#946; e IL-23 nos sítios profundos. Não foram encontradas correlações significativas entre as marcações imuno-histoquímicas e o fluido gengival para os subgrupos analisados. Na análise comparativa entre as biópsias e o fluido gengival, a IL1-&#946; mostrou alta concordância nos sítios rasos e profundos. Concluindo, a utilização padronizada de um punch de 2mm de diâmetro para biópsias em tecido periodontal mostrou- se viável, para estudos com imuno-histoquímica. O fluido gengival pode não expressar todos os marcadores do tecido correspondente, com variações dependendo do marcador analisado e das condições inflamatórias locais. / The aim of this study was to use minimally invasive biopsies to evaluate the expression of inflammatory mediators and their correlation with gingival fluid in patients with severe periodontitis. The test group comprised 22 patients with severe periodontitis (mean age 45.5 &#61617; 8.9 years SD), analyzed by shallow and deep sites and the control group for 14 periodontally healthy patients (mean age 39.35 &#61617; SD 16.5 years). Gingival fluid samples were collected with absorbent paper in the same sites where biopsies were performed, and quantified by Luminex to IFN-&#947;, IL-1 &#946;, IL-6, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IL-17F, TNF and sCD40L. Biopsies were taken with a 2 mm diameter punch in both groups. Immunohistochemistry was semiquantitative evaluated, comprising epithelial cells, plasma cells, macrophages, fibroblasts and endothelial cells, to IL1-&#946;, IFN-&#947;, IL-6 and IL-17. Immunohistochemical markers were observed in the analyzed cells groups, both in periodontitis patients as in controls, without significant differences between them. The gingival fluid showed higher amounts for IL-1&#946; and IL-23 in deep sites. No significant correlations between immunohistochemical markers and GCF were found. In the comparative analysis between immunohistochemical markers and GCF, IL1-&#946; showed high concordance in shallow and deep sites. In conclusion, the use of a standardized punch 2mm diameter for periodontal tissue biopsies proved to be feasible for studies with immunohistochemistry. The gingival fluid may not express all the markers of the corresponding tissue, with variations depending on the analysed marker and local inflammatory conditions.

O objetivo deste estudo foi utilizar biópsias minimamente invasivas para avaliar a expressão de mediadores inflamatórios e sua correlação com o fluido gengival em pacientes com periodontite severa. O grupo teste compreendeu 22 pacientes com periodontite severa (idade média 45,5 &#61617; DP 8,9 anos), analisados por sítios rasos e profundos, e o grupo controle por 14 pacientes periodontalmente saudáveis (idade média 39,35 &#61617; DP 16,5 anos). As amostras do fluido gengival foram coletadas com papel absorvente, nos mesmos sítios de onde foram realizadas as biópsias, e quantificadas, por Luminex, para IFN- &#947;, IL 1-&#946;, IL-6, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IL-17F, sCD40L e TNF&#945;. Foram coletadas biópsias, com um punch de 2mm de diâmetro nos grupos teste e controle. A avaliação imuno-histoquímica foi semiquantitativa, nas células epiteliais, plasmócitos, macrófagos, fibroblastos e células endoteliais, para a IL1-&#946;, IFN-&#947;, IL-6 e IL-17. Foram observadas marcações imuno-histoquímicas, em todos os grupos celulares analisados, tanto nos pacientes com periodontite como nos controles, sem diferenças significativas entre eles. O fluido gengival apresentou maiores quantidades para os marcadores IL-1&#946; e IL-23 nos sítios profundos. Não foram encontradas correlações significativas entre as marcações imuno-histoquímicas e o fluido gengival para os subgrupos analisados. Na análise comparativa entre as biópsias e o fluido gengival, a IL1-&#946; mostrou alta concordância nos sítios rasos e profundos. Concluindo, a utilização padronizada de um punch de 2mm de diâmetro para biópsias em tecido periodontal mostrou- se viável, para estudos com imuno-histoquímica. O fluido gengival pode não expressar todos os marcadores do tecido correspondente, com variações dependendo do marcador analisado e das condições inflamatórias locais. / The aim of this study was to use minimally invasive biopsies to evaluate the expression of inflammatory mediators and their correlation with gingival fluid in patients with severe periodontitis. The test group comprised 22 patients with severe periodontitis (mean age 45.5 &#61617; 8.9 years SD), analyzed by shallow and deep sites and the control group for 14 periodontally healthy patients (mean age 39.35 &#61617; SD 16.5 years). Gingival fluid samples were collected with absorbent paper in the same sites where biopsies were performed, and quantified by Luminex to IFN-&#947;, IL-1 &#946;, IL-6, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, IL-17F, TNF and sCD40L. Biopsies were taken with a 2 mm diameter punch in both groups. Immunohistochemistry was semiquantitative evaluated, comprising epithelial cells, plasma cells, macrophages, fibroblasts and endothelial cells, to IL1-&#946;, IFN-&#947;, IL-6 and IL-17. Immunohistochemical markers were observed in the analyzed cells groups, both in periodontitis patients as in controls, without significant differences between them. The gingival fluid showed higher amounts for IL-1&#946; and IL-23 in deep sites. No significant correlations between immunohistochemical markers and GCF were found. In the comparative analysis between immunohistochemical markers and GCF, IL1-&#946; showed high concordance in shallow and deep sites. In conclusion, the use of a standardized punch 2mm diameter for periodontal tissue biopsies proved to be feasible for studies with immunohistochemistry. The gingival fluid may not express all the markers of the corresponding tissue, with variations depending on the analysed marker and local inflammatory conditions.

Pacientes com câncer de mama sob quimioterapia tem níveis aumentados de marcadores inflamatórios, que podem piorar condições periodontais pré-existentes. Este estudo avaliou o efeito do tratamento periodontal nao cirúrgico (TPNC) e estabeleceu a correlação entre os parâmetros clínicos com os níveis de citocinas presentes no fluido crevicular gengival (FCG) antes e após TPNC. Quarenta indivíduos foram alocados em dois grupos; pacientes com periodontite cronica (PC) (n=20) e pacientes com câncer de mama com periodontite crônica (CAN/PC) (n=20). Os seguintes parâmetros clínicos e imunológicos foram analisados: i) profundidade de sondagem (PS), nível clinico de inserção (NCI), índice gengival (IG), índice de placa (IP), ii) avaliação dos níveis de Interleucina (IL) - 4, IL-10, IL-17, IL-2, IL-6, IL-1&beta;, Interferon gama (INF-&gamma;), Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-&alpha;) e Fator de Crescimento Tumoral-beta (TGF-&beta;) no fluido crevicular gengival (Luminex), no baseline, 45 dias e 180 dias após TPNC. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados. Nas comparações entre grupos: No baseline, o grupo PC apresentou níveis maiores de INF-&gamma; e níveis menores de IL- 10 e TGF-&beta; quando comparados ao grupo CAN/PC. Aos 45 dias o grupo CAN/PC apresentou níveis mais reduzidos de TNF-&alpha; (p < 0,0001) em comparação com o grupo PC. Em relação aos 180 dias, o grupo PC apresentou níveis mais reduzidos de INF-&gamma; (p < 0,001), IL-2 (p < 0. 001), TNF-&alpha; (p < 0,0001) e níveis elevados de IL-10 (p < 0,01) e TGF-&beta; (p < 0,001), quando comparados ao grupo CAN/PC. Nas comparações entre períodos de tempo: o grupo CAN/PC apresentou uma redução significativa de IL-2 aos 45 e 180 dias (p < 0,05) em comparação com baseline, TNF-&alpha; teve uma redução aos 45 dias, em comparação com baseline (p < 0.0001), alem disso, houve uma redução significativa do TGF-&beta; aos 180 dias em comparação com baseline (p < 0,0001). Enquanto IL-1&beta;, foi aumentado aos 45 dias em comparação com baseline (p < 0,05). No grupo PC, houve uma redução significativa dos níveis de INF-&gama; aos 180 dias, em comparação com baseline (p < 0,0001) e 45 dias (p < 0,05). Da mesma forma, IL-2 e TNF-&alpha; reduziram aos 180 dias, em comparação com baseline (p < 0,0001) e 45 dias (p < 0,0001), bem como um aumento de TGF-&beta; aos 180 dias, em comparação com baseline (p < 0,05) e 45 dias (p < 0,0001). Na análise de correlação entre os parâmetros clínicos e os níveis de citocinas do FCG: No grupo CAN/PC, foi encontrado uma positiva correlação entre PS e os níveis de TNF-&alpha; (r = 0.6489, p = 0.002) no baseline. IL-17 foi positivamente correlacionado com redução de PS (r = 0.4596, p = 0.04) aos 180 dias; assim também IL-6 foi positivamente correlacionado com redução de PS e ganho de NCI (r = 0.4513, p = 0.05, r = 0.5578, p = 0.01, respectivamente) aos 180 dias. No grupo PC, IL-17 foi positivamente correlacionada com PS e NCI (r = 0.4558, p = 0.04, r= 0.5447, p = 0.01, respectivamente) no baseline. IL-1&beta; foi positivamente correlacionado com redução de PS e ganho de NCI (r = 0.5538, p = 0.01, r = 0.5902, p = 0.006, respectivamente), aos 45 dias. Uma negativa correlação foi encontrada entre IL-4 e ganho de NCI (r = -0.4981, p = 0.03) aos 180 dias. Pode-se concluir que a TPNC reduz os estímulos antigênicos e consequentemente ajuda a reduzir a carga inflamatória de pacientes com câncer de mama com periodontite crônica, melhorando assim as condições clinicas periodontais e sistêmicas. / Patients with breast cancer undergoing chemotherapy have increased levels of inflammatory markers, which may worsen pre-existing periodontal conditions. The aim of this study was to evaluate the effect of non-surgical periodontal treatment (NSPT) and to establish a correlation between clinical parameters and levels of cytokines present in the gingival crevicular fluid (GCF) before and after NSPT. Forty individuals were allocated in two groups; patients with chronic periodontitis (PC) (n = 20) and patients with breast cancer with chronic periodontitis (CAN/PC) (n = 20). The following clinical and immunological parameters were analyzed: i) probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), gingival index (GI), plaque index (PI), ii) levels of Interleukin (IL) - 4, IL-10, IL-17, IL-2, IL-6, IL-1&beta;, Interferon gamma (INF-&gama;), tumor necrosis factor (TNF-&alpha;), transforming growth factor beta (TGF-&beta;) in gingival crevicular fluid (Luminex) in baseline, 45 days and 180 days after NSPT. The data were statistically analyzed. In the comparisons between groups: At the baseline, the PC group had higher levels of INF-&gama; and low levels of IL-10 and TGF-&beta; when compared to the CAN/PC group. At 45 days, the CAN/PC group had lower levels of TNF&alpha;- (p <0.0001) compared to the PC group. In 180 days, the PC group had lower levels of INF-&gama; (p <0.001), IL-2 (p < 0. 001), TNF-&alpha; (p <0.0001), and higher levels of IL-10 (p < 0.01) and TGF-&beta; (p < 0.001), compared to the CAN/PC group. In comparisons between periods: The CAN/PC group showed a significant reduction of IL-2 at 45 and 180 days (p < 0.05) compared to baseline, TNF-&alpha; had a reduction at 45 days, when compared to baseline (p < 0.0001). In addition, there was a significant reduction of TGF-&beta; at 180 days when compared to the baseline (p < 0.0001), while IL-1&beta; increased at 45 days when compared to baseline (p < 0.05). The P group showed a significant reduction of INF-&gama; at 180 days when compared to baseline (p < 0.0001) and 45 days, (p <0.05). In the same manner, IL-2 and TNF-&alpha; had a reduction at 180 days when compared to baseline (p < 0.0001) and 45 days (p <0.0001). Likewise, there was an increase of TGF-&beta; at 180 days when compared to the baseline (p < 0.05) and at 45 days (p <0.0001). IL-17, IL-6 and IL-4 had no statistically significant differences between groups in all time points. In the analysis of correlation between the clinical parameters and the cytokine levels of the GCF: In the CAN/P group, a significant positive correlation was found between PD and TNF-&alpha; levels (r = 0.6489, p = 0.002) at baseline. IL-17 was positively correlated with PD reduction (r=0.4596, p = 0.04) at 180 days; also IL-6 was significantly positively correlated with PD reduction and CAL gain (r = 0.4513, p = 0.05, r = 0.5578, p = 0.01, respectively) at 180 days. In the P group, IL-17 was also positively correlated with PD and CAL (r = 0.4558, p = 0.04, r = 0.5447, p = 0.01, respectively) at baseline. IL-1&beta; was positively correlated with PD reduction and CAL gain (r = 0.5538, p = 0.01, r = 0.5902, p = 0.006, respectively) at 45 days. A negative correlation was found between IL-4 and CAL gain (r = -0.4981, p = 0.03) at 180 days. In conclusion, these data suggest that NSPT reduces antigenic stimuli and consequently helps to reduce the inflammatory burden in breast cancer patients with chronic periodontitis.

As metaloproteinases da matriz (MMPs) foram identificadas na saliva, na placa dental, na dentina e no cemento. Este trabalho teve como objetivos: Estudo I (I) - avaliar a expressão de MMP-2 e MMP-9 presentes na saliva total e parotidiana e no fluido gengival crevicular (FGC) de pacientes portadores e não portadores de lesões cervicais não cariosas (LCNC); Estudo II (II) - investigar se a presença de MMP-8 e -9/TIMPs poderia influenciar a remineralização de lesões artificialmente criadas na superfície radicular, com ou sem desgaste por abrasão. Os métodos utilizados foram: (I) Coleta de amostras de saliva e do FGC de 32 pacientes, com (n=16) e sem LCNC (n=16). A atividade gelatinolítica das MMPs foi avaliada através de análise zimográfica e Western Blot. (II): Espécimes de dentina humana radicular foram obtidos. O grupo controle G1(10) não sofreu nenhum tratamento. Os demais segmentos radiculares foram desmineralizados G2(60). O Grupo A não foi submetido à escovação e o Grupo B foi submetido à abrasão por escovação em uma máquina de escovação simulada. G2(10) foi apenas desmineralizado, G3(10) desmineralizado e remineralizado, e os Grupos G4(10), G5(10), G6(10), G7(10) foram desmineralizados e remineralizados em presença de tampão neutro, TIMP, MMP-8 e -9, MMP-8,-9 e TIMP, respectivamente. Para a análise elemental, as concentrações de Ca+2, P, Mg+2 assim como a relação molar Ca/P e Mg/Ca foram determinadas através de uma sonda eletrônica para microanálise (EPMA). A análise qualitativa por retrodispersão (BSE) foi realizada para demonstrar a distribuição global da densidade mineral. Os resultados (I) mostraram que a principal gelatinase presente, tanto na saliva total quanto no FGC, é a proMMP-9. Na saliva secretada pela glândula parótida, não foram detectadas bandas indicando a presença de gelatinases. Os resultados do estudo (II) indicaram que os espécimes escovados apresentaram maior conteúdo de Ca+2 a 20µm e maior conteúdo de Mg+2 a 30 e 50µm. Em presença de TIMPs, ocorreu uma redução do conteúdo de Ca+2 a 20µm. Para os espécimes não escovados, em todas as profundidades, as amostras incubadas com MMPs apresentaram maiores valores de Ca+2. Portanto, pode-se concluir que (I) a comparação entre pacientes com e sem LCNC mostrou não haver diferença estatisticamente significante quanto à atividade gelatinolítica; (II) quando não inibidas pelos TIMPs, as MMPs degradaram o colágeno completamente desmineralizado na superfície radicular, permitindo melhor recalcificação na superfície subjacente. Esse fenômeno foi também facilitado pela abrasão por escovação. / Matrix metalloproteinases (MMPs) have been identified in saliva, plaque, gingival crevicular fluid (GCF), dentin and cementum. Study (I) aimed at evaluating the presence and quantity of gelatinases MMP-2 and MMP-9 in total and parotid saliva and in GCF (GCF) of subjects with and without NCCL. Study (II) aimed at investigating whether the presence of matrix metalloproteinase (MMP)-8 and - 9/TIMPs would influence the remineralization of artificial root lesions with and without mechanical wear. (I) Total stimulated saliva, parotid saliva, and GCF from patients with (n=16) and without NCCL (n=16) were collected and assessed for gelatin zymography and for western immunoblot analysis. (II) Human root segments from Group A (n=35) were not brushed and from Group B (n=35) were subjected to machine-controlled brushing, simulating mechanical wear. Specimens from Group 1 (control, n=10) were left untreated. Group 2 (n=10), was just demineralized; Group 3 (n=10) was demineralized and remineralized. The other samples G4 (n=10), G5 (n=10), G6 (n=10), G7 (n=10) were subjected to remineralization with HEPES buffer, tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 (TIMP-2), activated MMP-8 and MMP-9 and activated MMP-8, MMP-9 and TIMP-2, respectively. Ca+2, P, Mg+2 concentrations as well as Ca/P and Mg/Ca molar ratios were determined through an Electron Probe Microanalyser (EPMA). (I) Densitometric analysis revealed that the main gelatinase was proMMP-9. No statistically significant difference was observed for MMP-2 and MMP-9 levels, separately. In parotid saliva, gelatinolytic activity was very low or absent. Western immunoblots revealed that, while little immunoreactivity was detected for MMP-2, there was positive immunoreaction for MMP-9, both in total saliva and in GCF. Gelatinases do not seem to originate from parotid gland. (II) The results indicated that the brushed specimens presented higher Ca+2 levels at 20 µm and higher Mg+2 content at 30 and 50 µm. Ca+2 content at 20 µm decreased in the presence of TIMPs. For the non-brushed specimens, in all depths, samples incubated with MMPs showed highest Ca+2 values. It can be concluded that (I) the main gelatinase present in the oral cavity is MMP-9. No significant differences were found in total gelatinolytic activity among NCCL+ and NCCL- patients. (II) When not inhibited by TIMPs, MMPs degraded the completely demineralized collagen in the root surface, allowing for better recalcification in the deeper areas. This phenomenon was also facilitated by the brushing procedure.