O objetivo do presente estudo foi o de analisar o efeito da irradiação com laser em baixa intensidade no sistema antioxidante enzimático de glândulas salivares submandibular (GSM) e parótida (GP) de ratas diabéticas induzidas por estreptozotocina. As ratas foram inicialmente divididas em grupos não-diabéticas (C) e diabéticas (D) e mantidas pelo período experimental de 30 dias. No vigésimo nono dia as ratas foram subdivididas em seis grupos, sendo três grupos de animais não diabéticos (C0, C5 e C20) e três de animais diabéticos (D0, D5 e D20), de acordo com a dose de irradiação laser que cada grupo recebeu (0, 5 e 20 J/cm2 respectivamente). Para a indução do diabetes foi realizada a injeção intraperitoneal de estreptozotocina (60 mg/kg de peso corporal) dissolvida em tampão citrato de sódio 0,1 M, pH 4,5. Os animais pertencentes aos grupos C (não diabéticos) receberam a injeção somente do veículo. As glicemias foram verificadas 72 horas após a indução do diabetes, para a confirmação do estado diabético nos grupos D. Foram considerados diabéticos os animais que apresentaram glicemia superior a 250mg de glicose/dl de sangue. A irradiação com laser em baixa intensidade seguiu a metodologia determinada pelo método de Simões et. al. (2009). Os animais foram eutanasiados 24 horas após a irradiação, sendo imediatamente removidas as glândulas salivares para a realização das análises bioquímicas. Foram determinados através de espectrofotometria, os valores de total antioxidante (TAS) e as atividades das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx). Através da análise dos resultados podemos concluir que em GSM de ratas diabéticas o laser com dose de 20J/cm2 causou aumento na atividade da enzima SOD. E independente da dose, causou aumento nos valores de TAS e atividade da enzima CAT. Já em GSM de ratas não diabéticas a dose de 20J/cm2 causou diminuição dos valores de TAS. E independente da dose a irradiação com laser levou a um aumento da atividade da enzima CAT. Nas parótidas de ratas diabéticas, independente da dose, a irradiação com laser causou diminuição da atividade da enzima CAT. E em GP de ratas não diabéticas a dose de 5J/cm2 causou diminuição da atividade da enzima CAT. / The aim of the present study was to analize the effect of low-power laser irradiation in the antioxidant enzymatic system of submandibular (GSM) and parotid (GP) salivary glands of diabetic rats induced by streptozotocin. The rats were initially divided into non-diabetic animals (C) and diabetic-animals (D) and maintained by the experimental period of thirty days. Twenty-nine days after diabetes induction, the animals were randomly divided into six groups: three diabetic groups (D0, D5 and D20) and three non-diabetic groups (C0, C5 and C20), according with laser irradiation dose that each one received (0, 5 and 20J/cm2, respectively). For diabetes induction an intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ) (60mg/Kg body weight), dissolved in 0.1M sodium citrate buffer, pH 4.5 was performed. In non-diabetic animals, only the citrate buffer was used. The diabetes condition was confirmed seventy-two hours after animals have received the STZ injection. Rats with blood glucose level higher than 14mM (250 mg/100ml) were considered diabetic. The laser irradiation was performed according to Simões et.al. method (2009). Twenty-four hours after the irradiation rats were euthanized. Then, immediately after the euthanasia, salivary glands were removed for biochemical analysis. The total antioxidant values (TAS) and the activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxide (GPx) enzymes were determined in spectrophotometer. Analyzing the results we can conclude that in GSM of diabetic rats the laser irradiation with 20J/cm2 increased the SOD activity. With the two different doses, increased the TAS values and CAT activity. However, in GSM of non-diabetic rats, laser irradiation with 20J/cm2, decreased the TAS values and led to an increase in CAT activity, regardless of the dose. In parotid glands laser irradiation decreased the CAT activity with either dose of 5J/cm2 or 20 J/cm2 and the laser irradiation with dose of 5J/cm2, decreased the CAT activity in parotid glands of non-diabetic rats.

Displasia ectodérmica hipoidrótica é uma doença genética rara, clinicamente caracterizada por alterações envolvendo os dentes, pele e suas estruturas anexas. Manifestações orais comuns incluem anadontia ou oligodontia, dentes conóides e xerostomia. Poucos relatos associam displasia ectodérmica e redução do fluxo salivar. O objetivo desse estudo é analisar possíveis alterações nas glândulas salivares de dez portadores de displasia ectodérmica que fazem acompanhamento no Departamento de Dermatologia Pediátrica da Universidade de São Paulo. Ultrassonografia foi realizada em dez casos em infantes portadores de displasia ectodérmica hipoidrótica nas suas glândulas salivares parótida e submandibular. Três apresentaram alterações na glândula parótida e/ou submandibular. Aplasia ou hipoplasia das glândulas salivares maiores é associada a casos de displasia ectodérmica e sugere-se acompanhamento rotineiro das glândulas salivares maiores usando ultrassonografia para prevenção de alterações decorrentes da hiposalivação na cavidade oral. / Background- Hypohidrotic ectodermal dysplasia is a rare genetic disease, clinically characterized by defects involving skin and their adnexal structures, as well as oral structures such as teeth, and occasionally salivary glands. These latter manifestations include anodontia or hypodontia, conical teeth and xerostomia. Objective- To analyze possible alterations in major salivary glands of ten patients with ectodermal dysplasia, using image exam. Methods- Ultrasonography was performed in ten pediatric cases of hypohidrotic ectodermal dysplasia to investigate the status of parotid and submandibular salivary gland. Results- Three patients presented aplasia/hypoplasia of at least one gland examined. The other 7 patients did not present any alterations in parotid and submandibular glands. Limitations- Although ultrasonography exam is adequate to investigate the presence and status of major salivary glands, other important glands such as sublingual and minor mucous salivary glands are not well-visualized using this technique. Conclusions- Aplasia or hypoplasia of the major salivary gland is strongly related to ectodermal dysplasia and we suggest routine evaluation of the major salivary gland using ultrasound to monitor and manage the possible impact of xerostomia in oral health.

RESUMO: O complexo Irre Recognition Module (IRM) é um importante subgrupo de proteínas transmembranares da superfamília das imunoglobulinas que desempenham função de adesão celular e participam de diversos processos do desenvolvimento de Drosophila melanogaster, tais como: direcionamento axonal, fusão de mioblastos, espaçamento dos órgãos sensoriais, autofagia das glândulas salivares, eliminação de células suplementares e especificação de destino celular na retina pupal. A família IRM é composta por quatro membros bem caracterizados: roughest (rst; irregular-chiasmC); kin-of-irre (kirre); hibris (hbs) e sticksand-stones (sns). Uma característica marcante entre dois membros deste grupo, kirre e rst, é a ocorrência de redundância funcional durante o processo de fusão de mioblastos na musculatura somática embrionária e na fase de \"cell sorting\" das células interomatidiais na etapa final de padronização da retina pupal de Drosophila. Neste contexto, foi observado que kirre pode suprir a ausência ou diminuição nos níveis de expressão de mRNA de rst para manter o fenótipo selvagem destes tecidos. Em glândulas salivares larvais de Drosophila, modelo amplamente utilizado para estudo da morte celular programada (MCP), mutantes rstD, um alelo semidominante de rst, apresentaram fenótipo de persistência deste tecido mesmo após 12 horas à sua eliminação observada em animais selvagens. Considerando o importante processo de redundância funcional promovido por membros do grupo IRM, durante o desenvolvimento de tecidos de Drosophila melanogaster, avaliamos a correlação entre os 4 membros deste grupo durante o processo de autofagia da glândula salivar larval. Para tanto, os níveis de transcrição de genes do complexo foram analisados por RT-qPCR após a formação do pupário até o desfecho do processo de histólise. Verificamos uma diminuição a nível transcricional de rst após o pico no título de ecdisona que leva a histólise da glândula em animais selvagens, e níveis alterados dos mRNAs dos membros do complexo em animais mutantes rstD. Contudo, a superexpressão de rst não foi suficiente para gerar glândulas persistentes. Além disso, descrevemos a localização espacial, por imunohistoquímica, dos membros do complexo, enfatizando a colocalização de rst e kirre, contrariamente aos membros sns e hbs. / ABSTRACT: The complex Irre Recognition Module (IRM) is an important subgroup of transmembrane proteins of the immunoglobulin superfamily that play a role in cell adhesion and participates in several processes of development of Drosophila melanogaster, such as: axonal targeting, fusion of myoblasts, spacing of sensory organs , autophagy of the salivary glands, elimination of supplementary cells and specification of cellular target in the pupal retina. The IRM family is composed of four well-characterized members: roughest (rst; irregular-chiasmC); kin-of-irre (kirre); hibris (hbs) and sticks-and-stones (sns). A striking feature of this group is the occurrence of functional redundancy during the process of fusion of myoblasts in the embryonic somatic musculature and in the phase of cell sorting of the interomatid cells in the final step of standardization of the pupal retina of Drosophila. In this context, it can be concluded that it can not provide an absence or decrease the mRNA expression levels of maintaining the wild tissue phenotype. In larval salivary glands of Drosophila, a widely used model for the study of programmed cell death (MCP), rstD mutants, a semidominant rst allele, showed persistence phenotype of this tissue after 12 hours for its observed elimination in wild animals. During the development of Drosophila melanogaster tissues, we evaluated a correlation between the 4 members of this group during the autophagy process of the salivary gland. To that end, transcription levels of complex genes were analyzed by RT-qPCR after patient formation until the end of the histolysis process. We have seen a transcriptional decrease in the first unpronounced postdoc peak of ecdysone leading to histolysis of the gland in wild animals, and altered levels of mRNAs of the complex members in rstD mutant animals. However, a first overexpression was not enough to generate persistent glands. In addition, we describe a spatial location, by immunohistochemistry, of two members of the complex, emphasizing a first and second hand colocalization, unlike the sns and hbs members.

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Mallmann.pdf: 3158977 bytes, checksum: 98919264cd60f9ac2f5553060b4c6c44 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T11:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Cacilda S. Y. Mallmann.pdf: 3158977 bytes, checksum: 98919264cd60f9ac2f5553060b4c6c44 (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / Sjögren's syndrome (SS) is a chronic inflammatory disease that affects the epithelial tissue of exocrine secretion glands, characterized by immunological changes as the infiltration of salivary and lacrimal glands by CD4 + T lymphocytes and B lymphocytes and the presence of autoantibodies against nuclear antigens. Genetic, hormonal and environmental factors are also important in its pathogenesis. In its diagnosis are used different criteria approved by the American College of Rheumotology (ACR) and the European Call Against Rheumatism (EULAR) which include semi-quantitative histological examination of samples of minor salivary glands sublabial processed in paraffin and stained with hematoxylin-eosin (foci scores; 50 lymphocytes/4 mm2). From the experimental point of view, this method is susceptible to bias, since it is based on an extremely limited area of tissue to be analyzed and has the potential to result in lower precision and accuracy. In an attempt to minimize such bias this proposal aims to standardize quantitative morphometric measurements in minor salivary gland biopsies (GSM) in SS suspected patients using stereological tools free of systematic bias, therefore, to ensuring precision and accuracy in morphometry. Such tools allow the detection of minimal morphological changes that would otherwise be overlooked by semi-quantitative assessment of routine. To this end, 10 biopsies of female patients suspected of having SS were histologically processed and embedded in acrylic resin hydroxyethyl methacrylate (Technovit 7100, Heraues-Kulzer, Germany). The blocks containing the biopsy fragments were randomly oriented to allow obtaining isotropic sections (Orientator). Serial sections (6-13/biopsy) were stained with eosin hematoxylin and Harrys. Fields of view chosen in a uniform, systematic and random way were photographed and analyzed quantitatively using appropriate software (IMOD 4.5/Stereology). Based on the criteria for the diagnosis of SS by the ACR, patients were divided into Group Non-SS (N = 4; 0-1 satisfied criterion) and SS group (N = 6; 2-3 criteria met). In evaluating the density of the components of GSMs (t-test), there was a significant increase in the proportion of lymphocytes in the SS group (p = 0.033). The other components showed no significant changes. The number of lymphocytes (p=0.025) and lymphoplasmacytic infiltrates (p = 0.038) were increased in the SS group, but no significant change was observed in the number of plasma cells and the volume of GSMs between groups. The CE of GSM Cavaliere volume remained below 5%. The number of evaluated sections influences the precision and accuracy of the results. There is no correlation between pathological score and stereological evaluation of lymphocytic infiltrates. The SS group was characterized by the presence of positive values for the Anti-SSA antibodies/Anti- SSB, high focal score and reduced dry score. We conclude that quantitative analysis of GSM by stereology provides detailed information that can implement and complement the laboratory and clinical findings in the diagnosis of Sjögren's syndrome. / No diagnóstico da Síndrome de Sjögren (SS) usamos os critérios aprovados pela American College of Rheumotology (ACR), que é uma doença inflamatória crônica do tecido epitelial das glândulas de secreção exócrina. É caracterizada por alterações imunológicas como a infiltração das glândulas salivares e lacrimais por linfócitos T CD4+ e linfócitos B e pela presença de autoanticorpos contra antígenos nucleares. Do ponto de vista experimental, as metodologias envolvidas nesta caracterização são suscetíveis ao viés, visto que se baseiam em uma área extremamente restrita de tecido a ser analisado e têm o potencial de gerar resultados com baixa precisão e acurácia. A proposta neste trabalho foi padronizar medidas morfométricas usando estereologia na glândula salivar menor (GSM) de pacientes suspeitos de SS afim de garantir precisão e acurácia na determinação de SS. Para tal, 10 biópsias de mulheres foram processadas histologicamente e incluídas em resina acrílica. Seções seriais (6-13/biópsia) foram coradas após a fragmentação da biópsia em blocos orientados ao acaso, para permitir a obtenção de seções isotrópicas (orientator). Campos de vista escolhidos de forma uniforme, sistemática e ao acaso foram fotografados em Estereomicroscópio Digital System e analisados quantitativamente. Aplicando os critérios da ACR para SS, houve segregação dos pacientes em Grupo Não-SS e Grupo SS. Na avaliação da densidade de volume dos componentes das GSMs (test-t) houve um aumento significativo na proporção de linfócitos do Grupo SS (p = 0,033). Os demais componentes não apresentaram alterações significativas. O número de linfócitos (p = 0,025) e infiltrados linfoplasmocitários (p = 0,038) estiveram aumentados no Grupo SS, contudo nenhuma alteração significativa foi observada no número de plasmócitos e no volume das GSMs entre os grupos. Na determinação do volume da GSM o coeficiente de erro manteve-se abaixo de 5%. O número de seções avaliadas influencia a precisão e acurácia dos resultados. Não há correlação entre os dados patológicos e o estereológico na avaliação dos infiltrados linfocitários. Concluímos que a análise estereológica fornece informações detalhadas que podem implementar e complementar os achados no diagnóstico da Síndrome de Sjögren.

O objetivo do presente estudo foi o de analisar o efeito da irradiação com laser em baixa intensidade no sistema antioxidante enzimático de glândulas salivares submandibular (GSM) e parótida (GP) de ratas diabéticas induzidas por estreptozotocina. As ratas foram inicialmente divididas em grupos não-diabéticas (C) e diabéticas (D) e mantidas pelo período experimental de 30 dias. No vigésimo nono dia as ratas foram subdivididas em seis grupos, sendo três grupos de animais não diabéticos (C0, C5 e C20) e três de animais diabéticos (D0, D5 e D20), de acordo com a dose de irradiação laser que cada grupo recebeu (0, 5 e 20 J/cm2 respectivamente). Para a indução do diabetes foi realizada a injeção intraperitoneal de estreptozotocina (60 mg/kg de peso corporal) dissolvida em tampão citrato de sódio 0,1 M, pH 4,5. Os animais pertencentes aos grupos C (não diabéticos) receberam a injeção somente do veículo. As glicemias foram verificadas 72 horas após a indução do diabetes, para a confirmação do estado diabético nos grupos D. Foram considerados diabéticos os animais que apresentaram glicemia superior a 250mg de glicose/dl de sangue. A irradiação com laser em baixa intensidade seguiu a metodologia determinada pelo método de Simões et. al. (2009). Os animais foram eutanasiados 24 horas após a irradiação, sendo imediatamente removidas as glândulas salivares para a realização das análises bioquímicas. Foram determinados através de espectrofotometria, os valores de total antioxidante (TAS) e as atividades das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx). Através da análise dos resultados podemos concluir que em GSM de ratas diabéticas o laser com dose de 20J/cm2 causou aumento na atividade da enzima SOD. E independente da dose, causou aumento nos valores de TAS e atividade da enzima CAT. Já em GSM de ratas não diabéticas a dose de 20J/cm2 causou diminuição dos valores de TAS. E independente da dose a irradiação com laser levou a um aumento da atividade da enzima CAT. Nas parótidas de ratas diabéticas, independente da dose, a irradiação com laser causou diminuição da atividade da enzima CAT. E em GP de ratas não diabéticas a dose de 5J/cm2 causou diminuição da atividade da enzima CAT. / The aim of the present study was to analize the effect of low-power laser irradiation in the antioxidant enzymatic system of submandibular (GSM) and parotid (GP) salivary glands of diabetic rats induced by streptozotocin. The rats were initially divided into non-diabetic animals (C) and diabetic-animals (D) and maintained by the experimental period of thirty days. Twenty-nine days after diabetes induction, the animals were randomly divided into six groups: three diabetic groups (D0, D5 and D20) and three non-diabetic groups (C0, C5 and C20), according with laser irradiation dose that each one received (0, 5 and 20J/cm2, respectively). For diabetes induction an intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ) (60mg/Kg body weight), dissolved in 0.1M sodium citrate buffer, pH 4.5 was performed. In non-diabetic animals, only the citrate buffer was used. The diabetes condition was confirmed seventy-two hours after animals have received the STZ injection. Rats with blood glucose level higher than 14mM (250 mg/100ml) were considered diabetic. The laser irradiation was performed according to Simões et.al. method (2009). Twenty-four hours after the irradiation rats were euthanized. Then, immediately after the euthanasia, salivary glands were removed for biochemical analysis. The total antioxidant values (TAS) and the activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxide (GPx) enzymes were determined in spectrophotometer. Analyzing the results we can conclude that in GSM of diabetic rats the laser irradiation with 20J/cm2 increased the SOD activity. With the two different doses, increased the TAS values and CAT activity. However, in GSM of non-diabetic rats, laser irradiation with 20J/cm2, decreased the TAS values and led to an increase in CAT activity, regardless of the dose. In parotid glands laser irradiation decreased the CAT activity with either dose of 5J/cm2 or 20 J/cm2 and the laser irradiation with dose of 5J/cm2, decreased the CAT activity in parotid glands of non-diabetic rats.

Sabendo que o conhecimento do sistema estomatognático é de fundamental importância para que os clínicos e cirurgiões cheguem a um diagnóstico preciso e instituam o tratamento adequado, propôs-se o presente estudo, que consistiu na dissecção da cabeça de quatro cadáveres caninos e quatro felinos. O objetivo foi a descrição e documentação das estruturas musculares e tegumentares detalhando a origem e inserção, inervação e função de cada estrutura dos tecidos moles bem como a descrição completa das glândulas salivares para a aplicação clínico-cirúrgica na prática odontológica de cães e gatos. / Concerned about the knowledge of the stomatognatic system as of fundamental importance to the practitioner and surgeons to reach a precise diagnosis and institute the appropriate treatment, the present study was proposed, consisting in the dissection of the head of four canine and four feline cadavers. The objective was the description and doccumentation of the muscular structures and tegument, detailing the origin and insertion, inervation and function of each structure of the soft tissue as well as the complete description of the salivary glands for a clinical-surgical application in dentistry.

Os macrófagos são células fagocíticas derivadas dos monócitos sanguíneos produzidos pela medula óssea e estão diretamente envolvidos em um conjunto de processos biológicos vitais. Durante o repasto sanguíneo, fêmeas do mosquito Aedes aegypti inoculam saliva na pele de seu hospedeiro vertebrado e, devido sua localização estratégica nos tecidos, os macrófagos estão dentre as primeiras células residentes a ser exposta a saliva. Apesar dessa evidência fisiológica, pouco se sabe sobre os efeitos imunomoduladores da saliva desse mosquito sobre os macrófagos. Assim, o objetivo deste projeto foi avaliar o papel dos componentes salivares de A. aegypti em macrófagos murinos ativados por LPS+IFN-γ e o potencial efeito de uma proteína salivar no desenvolvimento da encefalomielite autoimune experimental (EAE), um modelo experimental para estudo da esclerose múltipla. Em conclusão, o EGS de A. aegypti apresenta efeito imunomodulatório sobre macrófagos peritoneais ativados com LPS e IFN-γ. Além disso, nossos resultados sugerem que a proteína identificada com possível inibidor da IL-6 produzida por macrófagos ativados pode ser capaz de diminuir a polarização de respostas Th1 e Th17, afetando assim o desenvolvimento da EAE. / Macrophages are phagocytic cells derived from blood monocytes produced by the bone marrow and are directly engaged in a set of vital biological processes. During blood feeding, Aedes aegypti female mosquitoes inoculate saliva into the skin of their vertebrate hosts and, due to its strategic location in the tissues, macrophages are possibly among the first resident cells to be exposed to saliva. Despite this physiological evidence, little is known about the immunomodulatory effects of this mosquitos saliva on macrophages. Thus, the aim of this study was to evaluate the role of A. aegypti salivary components in LPS/IFN-γ-activated murine macrophages and the potential effect of a salivary protein on the development of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), an experimental model for multiple sclerosis studies. In conclusion, A. aegypti SGE presents immunomodulatory effect on peritoneal macrophages activated by LPS/IFN-γ. Furthermore, our results suggest that the protein identified as a putative inhibitor of IL-6 produced by activated macrophages may be able to down modulate the polarization of Th1 and Th17 responses, thus affecting the development of EAE.

Nosso laboratório investiga os mecanismos moleculares que promovem o estabelecimento de padrões de expressão gênica regulados no desenvolvimento em eucariotos superiores. Como modelo, utilizamos o gene de pufe de DNA BhC4-1, que é amplificado e expresso de modo regulado na glândula salivar e na glândula protorácica no final do quarto estadio larval de B. hygida. Estudos funcionais em D. melanogaster resultaram na identificação de módulos cis-reguladores (MCRs) na região promotora do gene BhC4-1. O MCR de glândula anelar de 67 bp (-253/-187), promove a expressão de BhC4-1-lacZ na glândula anelar a partir do final do desenvolvimento embrionário. O MCR de glândula salivar de 129 bp (-186/-58), dirige a expressão do transgene nas glândulas salivares de prépupas. A glândula anelar é o principal órgão endócrino larval e em D. melanogaster é o resultado da fusão das glândulas protorácicas (responsáveis pela síntese de hormônios esteroides), corpus allatum (síntese de hormônio juvenil) e corpus cardiacum (glândula neuroendócrina). Neste trabalho foram obtidas 12 linhagens independentes transformadas com uma construção que contém o fragmento (-253/+40) do promotor do gene de pufe de DNA BhC4-1 clonado à montante do gene repórter GFP. O genótipo destas linhagens foi validado utilizando-se Southern blots. Inicialmente as 12 linhagens obtidas foram analisadas quanto ao padrão de expressão de GFP em larvas de terceiro estadio e em prépupas 2 horas. Em conjunto, esta análise revelou que o padrão de expressão de GFP é bastante variável nestas linhagens. A análise do padrão de expressão da proteína repórter foi estendida em duas linhagens representativas da série (- 253/+40)/GFP. Nestas linhagens a expressão de GFP é inicialmente detectada na glândula salivar durante o estágio de prépupa e na glândula anelar a partir do terceiro estadio larval. Diferentemente do anteriormente observado em linhagens (-253/+40)/lacZ, nestas linhagens não detectamos a expressão de GFP em tempos do desenvolvimento anteriores ao terceiro estadio larval. Experimentos de interação gênica revelaram que na ausência do fator de transcrição br, a expressão de GFP é mantida na glândula anelar e abolida na glândula salivar de larvas de terceiro estadio. Os resultados dos experimentos de interação gênica corroboram dados anteriores que indicavam que o conjunto de fatores de transcrição que regulam a expressão de BhC4-1-lacZ na glândula anelar é distinto daquele que promove a expressão do gene na glândula salivar. As linhagens obtidas neste trabalho constituem uma ferramenta a ser utilizada na caracterização de fatores de transcrição tecido-específicos que regulam o gene BhC4-1 na glândula anelar e/ou na glândula salivar a partir do final do desenvolvimento larval. / Our laboratory investigates the molecular mechanisms that promote the establishment of developmentally regulated gene expression patterns in metazoans. As a model, we employ the BhC4-1 DNA puff gene, which is amplified and expressed in a regulated manner in the salivary gland and in the prothoracic gland at the end of the fourth larval instar in B. hygida. Functional studies in D. melanogaster resulted in the identification of cis-regulatory modules (CRMs) in the BhC4-1 promoter region. The 67 bp (-253/-187) ring gland CRM drives BhC4-1-lacZ expression in the ring gland from late embryonic development. The 129 bp (-186/-58) CRM salivary gland drives transgene expression in the prepupal salivary glands. The ring gland is the major endocrine organ, and comprises the prothoracic glands (synthesis of ecdysteroid hormones), corpus allatum (synthesis of juvenile hormone) and corpus cardiacum (neuroendocrine gland). In this work, 12 independent lines transformed with a construct containing the BhC4-1 promoter fragment (- 253/+40) cloned upstream of the reporter gene GFP were obtained. The genotype of each line was validated using Southern blots. Initially, the 12 obtained lines were analyzed to investigate the pattern of GFP expression in the third instar larvae and in the 2 hours prepupae. This initial screening revealed that the pattern of GFP expression is highly variable in these lines. The developmental pattern of GFP expression was extended in two representative (- 253/+40)/GFP lines. In these lines, GFP expression is initially detected in the larval and prepupal salivary glands and in ring gland third instar. Differently from previously observed in (-253/+40)/lacZ lines, in these lines we did not detect GFP expression at developmental times prior to the third larval instar. Gene interaction experiments revealed that in the absence of the br transcription factor, GFP expression is maintained in the ring gland and abolished in the salivary gland of third instar larvae. The results of gene interaction experiments corroborate previous data indicating the set of transcription factors that regulate BhC4-1-lacZ expression in the ring gland is distinct from that which promotes gene expression in salivary glands. The lines obtained in this work constitute a tool to characterize the tissue-specific transcription factors that regulate BhC4-1 gene in the ring gland and/or in the salivary gland from the end of the larval development.

A radioterapia de cabeça e pescoço apresenta alguns efeitos adversos orais como hipossalivação e halitose, a qual pode ser mensurada por um dispositivo, o Oralchroma, que é um cromatógrafo gasoso que permite a mensuração dos 3 principais gases do mau-hálito: Sulfidreto (HS), Metilmercaptana (MM) e Dimetilsulfeto (DMS). O objetivo deste estudo foi avaliar os parâmetros de halitose através do Oralchroma® nos pacientes submetidos à radioterapia de cabeça e pescoço quando comparado a indivíduos não irradiados pela observação das relações entre os parâmetros estudados: fluxo salivar, índice de higiene oral e quantidade de biofilme lingual (WTCI) e a halitose. Realizaram-se as halimetrias sem e com o desafio da cisteína (DC), além de avaliar a relação da hipossalivação e assialia com xerostomia e ardência bucal nos pacientes submetidos à radioterapia de cabeça e pescoço. Foram selecionados 76 pacientes, sendo dividos em um grupo com 38 submetidos à radioterapia de cabeça e pescoço e, em outro grupo, com 38 pacientes não irradiados, pareados pelo sexo e idade. Os resultados mostraram que os indivíduos não irradiados apresentaram aumento significativo dos Compostos Sulfurados Voláteis (CSVs) - HS e DMS (DC) quando comparados a indivíduos submetidos à terapia antineoplásica para tratamento de câncer de cabeça e pescoço. Observou-se também a correlação entre o aumento da saburra lingual, hipossalivação e elevação dos CSVs. A hipossalivação foi significativa nos pacientes com câncer de cabeça e pescoço, mas o índice de saburra lingual foi maior no grupo de indivíduos não irradiados. Percebeu-se que, quando há assialia, o índice de saburra lingual é inexpressivo e só altera a identificação do DMS. A hipossalivação esteve relacionada com a xerostomia nos dois grupos, mas sem relação com a ardência bucal, já a assialia apresentou relação direta com ardência bucal. Nessa pesquisa, observou-se que a irradiação de cabeça e pescoço podem contribuir para formação de CSVs, contudo, estes foram mais elevados no grupo não irradiado. Esse fato pode ser atribuído à assialia, condição clínica observada significativamente nos pacientes irradiados que contribuiu para escassa produção dos CSVs (HS e MM) e foi relevante para ausência de biofilme lingual, bem como na ardência bucal. / Head and neck radiotherapy presents some oral adverse effects such as hyposalivation and halitosis, which can be measured by a device, Oralchroma, which is a gas chromatograph that allows the measurement of the 3 main gases of the bad breath: Sulfidide (HS), Methylmercaptan (MM) and Dimethylsulfide (DMS). The aim of this study was to evaluate the parameters of oral halitosis in patients submitted to head and neck radiotherapy when compared to non-irradiated individuals by observing the relationships between the studied parameters: salivary flow, oral hygiene index and lingual biofilm content (WTCI) and halitosis. Halimetry was performed with and without the challenge of cysteine (DC), besides evaluating the relationship of hyposalivation and assialia with xerostomia and oral burning in patients submitted to head and neck radiotherapy. Seventy-six patients were selected, divided into one group with 38 submitted to head and neck radiotherapy and in another group with 38 non-irradiated patients, matched by sex and age. The results showed that the non - irradiated individuals presented a significant increase of the Volatile Sulfur Compounds (CSVs) - HS and DMS (DC) when compared to individuals submitted to antineoplastic therapy for the treatment of head and neck cancer. It was also observed the correlation between the increase of the lingual saburra, hyposalivation and elevation of CSVs. Hyposalivation was significant in patients with head and neck cancer, but the lingual flap index was higher in the group of non-irradiated individuals. It was noticed that, when there is assialia, the lingual flap index is inexpressive and only changes the identification of the DMS. Hyposalivation was related to xerostomia in both groups, but unrelated to oral burning, and assialia was directly related to oral burning. In this research, it was observed that head and neck irradiation may contribute to the formation of CSVs, however, these were higher in the non-irradiated group. This fact can be attributed to assialia, a clinically observed condition in irradiated patients, which contributed to low CSV production (HS and MM) and was relevant for absence of lingual biofilm as well as oral burning.

Neste estudo avaliou-se os efeitos do diabetes mellitus (DM) sobre dois sistemas: glândula parótida de ratos e células cultivadas in vitro. Foram avaliados respectivamente a composição da matriz extracelular e a migração de células expostas a elevada concentração de glicose. Na parótida observou-se aumento de colágenos III, IV e V, laminina e fibronectina, mediado por TGFb2. Em células isoladas observou-se que a glicose dificultou a polarização celular, reduziu a velocidade e direcionalidade de migração, reduziu a persistência e estabilidade das protrusões celulares e a maturação de adesões. Estas alterações estão relacionadas à ativação da GTPase Rac1, dependente de estresse oxidativo. Este estudo sugere, pela primeira vez, que: 1) a hipofunção salivar pode envolver um espessamento da lâmina basal de capilares e parênquima por mecanismos previamente observados em outros orgãos-alvo de complicações diabéticas e 2) que a glicose exerce um efeito direto sobre a migração celular, fator que pode contribuir para a cicatrização deficiente em indivíduos diabéticos. / In this study we evaluated the effects of DM on two different systems: the rat parotid gland and in vitro cultured cells. Extracellular matrix composition and the migratory behavior of cells exposed to a high glucose concentration (HG) were evaluated, respectively. In the parotid, DM led to an increase in collagens III, IV and V, laminin and fibronectin, through a TGFb2-dependent mechanism. In cultured cells, HG impaired cell polarization, reduced migration velocity and directionality, reduced the persistence and stability of protrusive cellular processes, as well as adhesion maturation. These effects were related to Rac1 GTPase activation, dependent on the oxidative stress promoted by HG. This study suggests, for the first time, that: 1) salivary hypofunction in DM might involve the thickening of capillary and parenchyma basal lamina, through mechanisms already described in other target organs for diabetic complications and 2) that glucose directly impairs cell migration, and this effect may contribute to the chronic wound healing observed in diabetic patients.