Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2018-01-16T13:45:19Z No. of bitstreams: 1 GLAUCE CHRISTIAN ALVES DUARTE.PDF: 7412666 bytes, checksum: f0301da81bceac842c42e74f9d99cf80 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-16T13:45:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GLAUCE CHRISTIAN ALVES DUARTE.PDF: 7412666 bytes, checksum: f0301da81bceac842c42e74f9d99cf80 (MD5) / Santander Universidades / A Ipecacuanha é uma planta medicinal de grande interesse da indústria farmacêutica e representatividade econômica devido à atividade dos seus principais metabólitos emetina e cefalina. Considerando que esses metabólitos são encontrados nas raízes, sua colheita foi extrativista, colocando a espécie na lista de espécies ameaçadas de erosão genética e de extinção. Desse modo, o objetivo do presente estudo foi avaliar, por meio de técnicas de RMN, o efeito da sazonalidade associado a fatores agronômicos e climáticos sobre os teores de emetina e cefalina em indivíduos da espécie cultivados na região de Niterói. Os indivíduos foram cultivados sob 4 diferentes tipos de substrato e 3 diferentes graus de sombreamento. Foram realizadas 4 colheitas referentes às 4 estações do ano, no período de 1 ano. Os extratos brutos obtidos a partir das raízes foram submetidos à doseamento por CLAE-DAD e analisados por duas técnicas de RMN, a saber, RMN em solução e HRMAS. Nessa última técnica, foram realizadas análises dos extratos e das raízes pulverizadas. Os resultados de doseamento por CLAE-DAD mostraram que, no outono, os indivíduos cultivados em terra preta + areia + bokashi e 70% de sombreamento apresentaram os maiores teores de emetina e cefalina (0,63 e 1,84, respectivamente). Apesar de não ser possível quantificar os alcaloides por meio das técnicas de RMN, as análises quimiométricas vieram a corroborar com os resultados e mostraram uma tendência a agrupamento das amostras coletadas no inverno, o que sugere diferenças metabólicas nesta estação. Dessa forma, conclui-se que, tanto na técnica cromatográfica quanto na espectroscópica, a sazonalidade foi o principal fator determinante para a escolha do período ótimo de colheita na região onde o estudo foi conduzido / The Ipecac is a medicinal plant of great interest to the pharmaceutical and economic representativeness industry due to the activity of its main metabolites emetine and cephaeline. Considering that these metabolites are found in the roots, his crop was harvested by hand, placing the species on the list of species threatened by genetic erosion and extinction. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of seasonality associated with agronomic and climatic factors on the content of emetine and cephaeline in individuals grown in the Niteroi region by NMR techniques. Individuals were cultured in 4 different types of substrate and 3 degrees of shading. 4 samples were collected regarding the four seasons, in the period of 1 year. The crude extract obtained from roots were assayed by HPLC-DAD and analyzed by two NMR techniques, namely solution NMR and HRMAS. In the latter technique, analyzes were performed of extracts and powdered roots. The results of determination by HPLC-DAD showed that in the fall, the grown individuals in black soil + sand + Bokashi and 70% shading showed higher levels of emetine and cephalin (0.63 and 1.95, respectively). Although it is not possible to quantify the alkaloids by NMR techniques, chemometric analysis came to corroborate the results and showed a tendency to cluster the samples collected in winter, suggesting metabolic differences in this season. Thus, we concluded that both the chromatographic technique as in spectroscopy, seasonality was the main determining factor for choosing the optimal harvest period in the region where the study was conducted

Cerca de 10% da flora mundial é representada pela família Asteraceae, uma das maiores famílias de Angiospermae, caracterizada não só pela diversidade morfológica e taxonômica, como também pela riqueza de metabólitos secundários apresentada pelas espécies estudadas dessa família. Lychnophora salicifolia Mart. é a espécie de maior distribuição geográfica do gênero (ocorrendo na Serra do Espinhaço na Bahia, em Minas Gerais e no sudeste de Goiás) e a mais polimórfica também. Entre seus usos etnobotânicos, destaca-se a ação anti-inflamatória e analgésica. Neste trabalho, realizamos o estudo da variação dos metabólitos polares dessa espécie, sendo que para isso foi utilizada a desreplicação do extrato bruto (metanol/água obtido a partir da folhas) através da análise por CLAE-DAD-EM, a qual permitiu a caracterização dos constituintes dessa mistura através da análise dos espectros de UV e dados de EM. Assim foi possível identificar 20 substâncias: ácido protecatecuico; ácido 3-O-E-cafeoilquínico; ácido 3-O-p-cumaroilquínico; ácido 4-O-E-cafeoilquínico; ácido 5-O-E-cafeoilquínico; ácido 4-O-p-cumaroilquínico; ácido 5-O-p-cumaroilquinico; ácido 5-O-feruloilquínico; vicenina-2 (6,8-di-C--glcosilapigenina); ácido 3,4-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 3,5-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 3-O-cumaroil 5-O-p-cafeoilquínico; ácido 3-O-cafeoil, 5-O-p-cumaroilquínico; ácido 4,5-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 4-feruloil-5-O-E-cafeoilquínico; ácido 3,4 di-O-p-cumaroilquínico; ácido 3,5 di-O-p-cumaroilquínico; ácido 4,5 di-O-p-cumaroilquínico; ácido lychnofólico e o ácido 2-O-acetil lychnofólico. Para a validação da metodologia analítica foi utilizada uma substância pertencente a cada classe de compostos: ácido 5-O-E-cafeoilquínico, vicenina-2 e o ácido 2-O-acetil lychnofólico. Quanto à validação da metodologia analítica, esta garantiu a confiabilidade dos resultados e a credibilidade do método para os propósitos deste estudo, abrangendo a faixa de concentração necessária para as análises de variação populacional, além apresentar valores de limites de detecção e limites de quantificação, precisão e recuperação adequados. Na análise intrapopulacional, verificou-se uma variabilidade quantitativa entre indivíduos da mesma população, porém, em média os indivíduos pertencentes à mesma população são parecidos quimicamente. Já em relação ao estudo da variação populacional, pudemos verificar diferenças tanto quanti como qualitativas entre populações coletadas em regiões distintas do Brasil, sendo que a partir da análise estatística, verificamos que há uma correlação entre isolamento geográfico e diminuição da semelhança do perfil de metabólitos polares entre as plantas de populações diferentes indicando que o padrão encontrado para concentração dos metabólitos é influenciado pela distribuição geográfica das amostras. Todavia, não é possível determinar a localização das amostras unicamente pelas variáveis metabólicas estudadas. Assim, a concentração e presença dos metabólitos são influenciadas pela distribuição geográfica das amostras. / About 10% of the world flora is represented by the Asteraceae family, which has been extensively studied since it is one of the largest families of Angiospermae, characterized not only by morphological and taxonomic diversity but also the wealth of secondary metabolites produced by the species studied of this family. Lychnophora salicifolia Mart. is the most widely distributed species of the genus (occurring in the Serra do Espinhaço in Bahia, Minas Gerais and in the southeast of Goiás) and also is the most polymorphic. Its popular use is due to the anti-inflammatory and analgesic activity. In this work, we studied the variation of polar metabolites of this species using the dereplication of the crude extract (methanol/water obtained from the leaves) by the HPLC-DAD-MS analysis, which led us to identify the constituents of this mixture by analyzing the UV spectra and MS data. Thus it was possible to identify 20 substances: protocatechuic acid; 3-O-E-caffeoylquinic acid; 3-O-p-coumaroylquinic acid; 4-O-E-caffeoylquinic acid; 5-O-E-caffeoylquinic acid; 4-O-p-coumaroylquinic acid; 5-O-p-coumaroylquinic acid; 5-O-feruloylquinic acid; vicenin-2 (6,8-di-C--glucosylapigenin); 3,4-di-O-E-caffeoylquinic acid, 3,5-di-O-E-caffeoylquinic acid; 3-O-coumaroyl-5-O-p-caffeoylquinic acid; 3-O-caffeoyl acid, 5-O-p-coumaroylquinic acid; 4,5-di-O-E-caffeoylquinic acid, 4-feruloyl-5-O-E-caffeoylquinic acid; 3,4-di-O-p-coumaroylquinic acid; 3,5-di-O-p-coumaroylquinic acid; 4,5-di-O-p-coumaroylquinic acid; lychnofolic acid and 2-O-acetyl lychnofolic acid. To the validation of analytical methodology were used one substance belonging to each class of compounds: 5-O-E-caffeoylquinic acid, vicenin-2 and 2-O-acetyl lychnofolic acid. So, the validation of analytical method ensured the reliability and credibility of the results of the method for purposes of this study, covering the concentration range required for analysis of population variation and presents appropriates values of detection and quantification limits, precision and recovery. For intrapopulation analysis, there was a quantitative variability between individuals of the same population, but on average the individuals of the same population are similar chemically. In relation to the study of interpopulation variation, we could see quantitative and qualitative differences between populations collected from different regions of Brazil, and from the statistical analysis, we found that there is a correlation between geographic isolation and decrease of the similarity of the polar metabolites profile between plants of different populations. This indicated that the pattern found for the concentration of metabolites is influenced by the geographical distribution of samples. However, it is not possible to determine the location of the samples only by the metabolic variables studied. Thus, the presence and concentration of metabolites are influenced by the geographical distribution of samples.

The aim of this diploma thesis was to determine the effect of the addition of several types of local wines in the production of wine sausages. Selected wine varieties were characterized using basic and modern analytical methods (liquid chromatography with a diode array detector) and the obtained results were compared with the results of sensory analysis.The sensory analysis was divided into two parts, the first evaluated six non-traditional wine varieties used in the production of wine sausages and the second part evaluated samples with the addition of the traditionally used wine variety Veltlínské zelené, but in three different volumes. Using the Statistica program, the data obtained from the sensory analysis were processed and the mutual correlation was evaluated. Using the gas chromatography method with a flame ionization detector the fatty acid content of a standard sample of wine sausage has been determined. Based on all the determined results, the best wine variety for the production of wine sausages was chosen, it was the blue grape variety André.

Content: The restriction of certain dangerous substances according to REACH (Registration, Evaluation, Authorisation of Chemicals as well as the Restricted Substances Lists (RSL) requirements promoted by various renowned brands obliges tanneries to everyday more numerous analysis with undesired conflictual situations on false positive tests results. This situation is worsened by the voluntary reduction of requested detection limits far below the levels recommended by the accepted ISO methods. On this context, ISO 17070:2015 was extended in its current version from the determination of pentachlorophenol to tetrachlorophenol, trichlorophenol, dichlorophenol and monochlorophenol isomers. Some brands also included under this technique the ortho phenyl phenol (OPP) analysis, requesting a quantification limit below 1 mg/kg for all analytes. The present paper proposes a new HPLC-DAD-MS direct method for the verification of chlorophenols positive cases, and its extension to leather chemicals analysis, as well as the discrimination among false positive cases and real positive ones. The paper also illustrates case studies reporting differences in the quantification of the said analytes and the chlorophenol scission in different analytical conditions. Take-Away: False positives verification of the presence of chlorophenols. Quicker method respect to the current ISO 17070:2015 standard. Method reliable on Leather chemicls chlorophenos research. Generation of chlorophenols from certain AOX substances.

This diploma thesis focuses on optimization and validation of the method for a mixture of tetracycline antibiotics (oxytetracycline, tetracycline) determination using high performance liquid chromatography with a diode array detector (HPLC–DAD). The aim of this thesis was to determine suitability of the system for the determination of these antibiotics in milk. The theoretical part is focused on individual groups of antibiotics and their mechanism of action, resistances and possibilities of use. Next point of this thesis is legislation, which describes permitted amounts of antibiotics in milk. In this study, the HPLC method and validation parameter is described in detail. The experimental part deals with creation and optimization of the method and its validation. Following validation parameters were verified: system suitability, linearity, method accuracy, limit of detection and quantification, robustness. The results obtained indicate mostly suitable ratio of mobile phase of 0,01 M trifluoracetic acid:methanol:acetonitrile = 80:10:10. The wavelength 355 nm was found as the most feasible for this method after evaluating the result. Determination of robustness showed that the method is robust, and the only significant effect on the robustness was observed in column changes.

In der vorliegenden Arbeit wurde die Leistungsfähigkeit der Hochleistungsflüssigchromatographie mit Photodiodenarraydetektion (HPLC-DAD) im Rahmen der Systematischen Toxikologischen Analyse (STA) umfassend untersucht, ein besonderer Schwerpunkt lag dabei auf der Aussagesicherheit bei der Substanzidentifizierung. Die Grundlage für diese Untersuchungen bildete die Messung der UV-Spektren und relativen Retentionszeiten (RRT) von 2.682 toxikologisch relevanten Substanzen mit Hilfe moderner Diodenarraydetektoren und unter einheitlichen experimentellen Bedingungen (Eluent: Acetonitril/ Phosphatpuffer pH 2,3; Trennsäule: Lichrospher RP8ec). Die erhaltenen Daten wurden zusammen mit weiteren Substanzinformationen in einer Spektrenbibliothek zusammengefasst, die als Buch und CD-ROM auch der Öffentlichkeit zugänglich gemacht wurde. Bei der Entwicklung eines Konzeptes zur Methodenvalidierung für die STA erwiesen sich insbesondere die Kenngrößen Selektivität und Spezifität als von zentraler Bedeutung. Unter Verwendung eines Fensteransatzes für die RRT und des Similarity Index (SI) für den Spektrenvergleich wurden sämtliche möglichen Substanzpaare aus der Spektrenbibliothek miteinander auf ihre Unterscheidbarkeit hin verglichen, wobei verschiedene RRT-Fensterbreiten und SI-Schwellenwerte zugrundegelegt wurden. Aus den Ergebnissen wurden Selektivitätsparameter wie die Relative Identification Power (RIP), die Discriminating Power (DP) und die Mean List Length (MLL) berechnet. Mit einer RIP von 84,2 %, einer MLL von 1,25 und einer DP von 0,9999 wurden für die Substanzidentifikation anhand von RRT + UV-Spektrum im Literaturvergleich sehr gute Ergebnisse erhalten. Die hohe Grad an Spezifität der UV-Spektren für den Einsatz in der STA wurde einerseits durch Auszählung sämtlicher in der Spektrenbibliothek gefundener Chromophore/Absorptionssysteme belegt: 1.650 verschiedene Absorptionssysteme wurden gefunden, über 60 % der Verbindungen trugen ein in diesem Substanzbestand einzigartiges Absorptionssystem. Andererseits wurde die computergestützte Unterscheidbarkeit zwischen verschiedenen Gruppen jeweils strukturell ähnlicher Wirkstoffe anhand des UV-Spektrums untersucht. Hierfür wurden 487 Substanzen in ein hierarchisches System von Haupt- und Untergruppen eingeteilt, zwischen denen anschließend mit Hilfe der Schrittweisen Diskriminanzanalyse (SDA) unterschieden werden sollte. Die sehr guten Klassifizierungsergebnisse und die Auflösung auch feiner struktureller Unterschiede, oftmals abseits des eigentlichen Absorptionssystems, lassen es grundsätzlich möglich erscheinen, auch Substanzen für die STA zu erschließen, die nicht in der Spektrenbibliothek enthalten sind. Insgesamt erwies sich die HPLC-DAD als hochselektives und -spezifisches Messverfahren, das zu Recht eine der wichtigsten STA-Methoden darstellt. / In this thesis the capability of high-performance liquid chromatography with photodiode array detection in the context of Systematical Toxicological Analysis (STA) was extensively investigated with a special focus on the certainty of substance identification. As the foundation for these investigations, UV spectra and relative retention times (RRT) of 2,682 toxicologically relevant compounds were recorded under uniform experimental conditions (mobile phase: acetonitrile/ phosphate buffer pH 2.3; column: Lichrospher RP8ec) using up-to-date photodiode array detectors. Together with additional substance information these data were built into a spectra library also made available to the public in the form of a book and a CD-ROM. During the development of a concept for the validation of a STA method, selectivity and specificity were found to be of central importance. Using a window approach for the RRT and the Similarity Index (SI) for spectral comparison, all possible substance pairs within the spectra library were examined in terms of their respective distinguishability, based on different RRT windows and SI threshold values. From the results selectivity parameters such as the Relative Identification Power (RIP), the Discriminating Power (DP), and the Mean List Length (MLL) were calculated. As compared to the literature, with a RIP of 84.2 %, a MLL of 1.25, and a DP of 0,9999 excellent results were obtained for the substance identification based on the combination of RRT and UV spectrum. The high degree of specificty of UV spectra for use in the STA was demonstrated on the one hand by counting all different chromophores/ absorption systems found in the spectra library: 1,650 systems were found, more than 60 % of the substances bore absorption systems unique in the dataset. On the other hand the computer-based distinction between different groups of structurally similar compounds on the basis of the UV spectrum was investigated by dividing 487 substances into a hierarchical system of main and subgroups and trying to distinguish between these groups using stepwise discriminant analysis (SDA). The highly satisfying classification results together with the resolution of fine structural differences, often remote from the actual absorption system, make it seem possible to also render substances not included in the spectra library accessible for the STA. In conclusion HPLC-DAD proved to be highly selective and specific, rightfully regarded as one of the most important STA methods.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Hymenaea martiana Hayne is an arboreal species known as "Jatobá" or "Jatobá-da-mata". It is a typical plant of Cerrado and Caatinga biomes, the latter being the only exclusively Brazilian biome and much of its biological heritage can not be found anywhere else on the planet. The plants Hymenaea genus are commonly used in Brazilian traditional medicine for the treatment of inflammation, bacterial infections, rheumatism and anemia. The plant extracts have substances produced by the secondary metabolism, with ability to inhibit bacteria and other microorganisms. The molecules present in plant extracts, such as phenolic compounds, alkaloids, flavonoids and terpenes are active against viruses, bacteria and fungi. One of the main challenges of traditional food production is to ensure the safety. The unpasteurized milk has been a vehicle of foodborne diseases. This product and its derivatives have often been implicated in food poisoning Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Salmonella spp. The aim of this study was to use Jatobá extract, identify compounds and evaluate their antimicrobial activity. The organic material was collected, and then the ethanolic extract prepared, which was analyzed by HPLC-DAD. From the HPLC-DAD analysis, it was possible to identify rutin (106 μg/mg) as one of the major compounds of the locust tree leaf extract. For the ethanol extract of H. martiana sheets were antimicrobial activity against strains of Staphylococcus aureus ATCC® 25923, E. coli ATCC® 35218 and S. enterica subsp. enterica serovar Choleraesuis ATCC® 10708 being the minimal bacterial concentration of 125.3 μg/mL, 781.2 μg/mL and 1562.5 μg/mL respectively. For antimicrobial tests in vivo it was observed that the extract possesses bactericidal power in the concentration of 102 CFU/mL. Thus the leaf extract of Jatobá has potential for use in reducing microbial load of milk for the production of cheese curds, in order to reduce diseases transmitted by food. / Hymenaea martiana Hayne é uma espécie arbórea conhecida como ―Jatobá‖ ou ―Jatobá-da-mata‖. É uma planta típica dos biomas cerrado e caatinga, sendo este último o único bioma exclusivamente brasileiro e grande parte do seu patrimônio biológico não pode ser encontrado em nenhum outro lugar do planeta. As plantas do gênero Hymenaea são comumente utilizadas na medicina tradicional brasileira para o tratamento de processo inflamatório, infecções bacterianas, reumatismo e anemia. Os extratos vegetais possuem substâncias produzidas pelo metabolismo secundário, com capacidade de inibir bactérias e outros micro-organismos. As moléculas presentes nos extratos vegetais, como os compostos fenólicos, alcaloides, flavonóides e terpenos são ativos contra vírus, bactérias e fungos. Um dos principais desafios da produção tradicional de alimentos é garantir a segurança dos mesmos. O leite não pasteurizado tem sido um veículo de doenças de origem alimentar. Este produto e seus derivados têm sido frequentemente implicados na intoxicação alimentar por Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Salmonella spp. O objetivo desse estudo foi usar extrato de jatobá, identificar os compostos presentes e avaliar sua atividade antimicrobiana. O material biológico foi coletado e a seguir preparado o extrato etanólico, o qual foi analisado por meio CLAE-DAD. A partir da análise de CLAE-DAD, foi possível identificar a rutina (106 μg/mg) como um dos compostos majoritários do extrato de folhas do jatobá. Para o extrato etanólico das folhas de H. martiana houve atividade antimicrobiana frente às cepas de Staphylococcus aureus ATCC® 25923, E. coli ATCC® 35218 e S. enterica subsp. enterica serovar Choleraesuis ATCC® 10708 sendo a concentração bacteriana mínima de 125,3 μg/mL, 781,2 μg/mL e 1.562,5 μg/mL respectivamente. Para os testes antimicrobianos in vivo observou-se que o extrato possui poder bactericida na concentração de 102 UFC/mL. Dessa forma o extrato de folhas do Jatobá possui potencial para o uso na redução da carga microbiana do leite para à produção de queijo coalho, visando à redução de doenças veiculadas por alimentos.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Spilanthes Acmella (L.) Murray (Asteraceae) is native to South America, popularly known as jambu. This plant is used in Northern Region of Brazil as a condiment in typical dishes such as tacacá and pato no tucupi and has application in traditional medicine to treat toothache, stomatitis and throat diseases. Furthermore, several therapeutic properties have been reported for S. acmella such as antiviral, antibacterial, antiseptic, diuretic, anti-inflammatory and healing agent. Spilanthol is the major constituent from flowers of this species, which is associated with several biological activities: analgesic, larvicide, insecticide, antibacterial, antifungal, etc. Currently, extracts of jambu and spilanthol are also used as ingredients for cosmetic anti-aging. Given the above, this work reports the development of a HPLC-DAD method for determination of spilanthol in samples of S. acmella. This study used samples from accessions of S. acmella (fresh whole plant and its parts: leaves, stems and flowers, fresh and dried) cultivated and collected in the Rural Campus-UFS. The conditions for analysis using HPLC-DAD system Shimadzu LC 20A Prominence were: analytical column Luna ® C18 (250 mm x 4.6 mm, 5 m) Phenomenex, gradient elution using as mobile phase MeOH (B): H2O (A): 85% (A) for 6 min., 85-100% (A) for 1 min., 100% (A) for 5 min.; 100-85% (A) for 1 min.; 85% (A) for 10 min; flow rate 1.0 mL/min, injection volume 20 L and the chromatograms obtained at =230 nm. Spilanthol was used as a reference standard (tr=5.1 min). The method was validated according to RE 899/03 (ANVISA). Linearity was determined by external standard calibration curve (r2=0.9997) and by the standard addition method (r2=0.9995). The limit of quantification and detection were 0.7 and 0.1 g/mL, respectively. The repeatability showed coefficients of variation (CV, %) between 0.21 to 2.85% and the accuracy, expressed as a recovery percentage ranged from 100.2 to 103.3%. The method was applied in 41 samples of S. acmella including samples from genetic improvement. Samples of dried flowers and accession J-05 had the highest content of spilanthol (101.2 g/mL and 120.5 g/mL, respectively). Therefore, this work presents a contribution to the quality control of extracts of S. acmella. / Spilanthes acmella (L.) Murray (Asteraceae) é uma planta nativa da América do Sul conhecida popularmente como jambú. Esta planta é usada como condimento em pratos típicos da Região Norte como o tacacá e o pato no tucupi e tem aplicação na medicina tradicional para tratar dor de dente, estomatite e doenças da garganta. Além disso, várias propriedades terapêuticas foram relatadas para S. acmella tais como antiviral, antibacteriana, anti-séptica, diurética, antiinflamatória e cicatrizante. Espilantol é o constituinte majoritário das flores desta espécie, o qual está associado a várias atividades biológicas: analgésica, larvicida, inseticida, antimicrobiana, fungicida, etc. Atualmente, extratos de jambú e o espilantol são usados como ingredientes para cosmético antienvelhecimento. Diante do exposto, este trabalho relata o desenvolvimento de um método analítico por CLAE-DAD para determinação de espilantol em amostras de S. acmella. Neste estudo foram utilizadas amostras dos acessos de S. acmella (planta inteira fresca e suas partes: folhas, caules e inflorescências frescas e secas) cultivadas e coletadas no Campus Rural da UFS. As condições de análise utilizando o sistema CLAE-DAD Shimadzu LC 20A Prominence foram: coluna analítica C18 Luna® (250 mm x 4,6mm, 5 m) Phenomenex; eluição gradiente no modo reverso, utilizando como fase móvel MeOH(B): H2O(A): 85% (A) por 6 min., 85-100% (A) por 1 min., 100% (A) por 5 min.; 100-85% (A) por 1 min.; 85% (A) por 10 min; vazão 1,0 mL/min; volume de injeção 25 μL e os cromatogramas obtidos em =230 nm. Espilantol foi usado como padrão de referência (tr=5,1 min). O método foi validado conforme RE no 899/03 (ANVISA). A linearidade foi determinada pela curva de padrão externo (r2=0,9997) e por adição de padrão (r2=0,9995). O limite de quantificação e de detecção foram 0,7 e 0,1 μg/mL, respectivamente. A repetibilidade apresentou coeficientes de variação (CV%) entre 0,21 a 2,85% e a exatidão, expressa como percentual de recuperação, variou de 100,2 a 103,3%. O método foi aplicado em 41 amostras de S. acmella incluindo amostras oriundas de melhoramento genético. As amostras da flores seca e do acesso J-05 apresentaram o maior teor de espilantol (101,2 μg/mL e 120,5 g/mL, respectivamente). Esse trabalho apresenta uma contribuição ao controle de qualidade de extratos de S. acmella.

Orientadores: Cesar Costapinto Santana, Isabel Cristina Sales Fontes Jardim / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-08T01:29:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maldaner_Liane_M.pdf: 1508589 bytes, checksum: 3a427ebd108b6fdad8d08be5f356992c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A soja é um dos principais produtos de exportação do Brasil, sendo muito empregada na alimentação, por ser um alimento funcional, rico em vitaminas, proteínas e sais minerais. A crescente demanda e a busca da qualidade da soja exigem a aplicação constante, de agrotóxicos durante o seu cultivo, sendo as vezes abusiva. Por outro lado, para garantir o bem estar da população, uma vez que a maioria dos agrotóxicos são prejudiciais à saúde, as principais agências reguladoras impõem limites máximos de resíduos para os agrotóxicos que podem estar presentes nos alimentos. Em vista disso, neste trabalho, foi desenvolvido e validado um método para determinação dos principais agrotóxicos (imazetapir, imazaquim, metsulfurom-metil, carboxim, clorimurom-etil e tebuconazol) usados nas lavouras de soja, empregando a dispersão da matriz em fase sólida (DMFS) como técnica de extração, seguida de uma etapa de cIean-up e posterior análise por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de diodos (CLAE-DAD). Os resultados mostraram que a DMFS é adequada para amostras sólidas e complexas, como a soja, é rápida e simples, entretanto, exige a otimização de várias variáveis durante o processo de desenvolvimento da metodologia. A etapa de cIean-up foi necessária devido a quantidade de int~rferentes provenientes da matriz, que foram, na sua maioria, eliminados com o uso de uma co-coluna de C8. Permaneceram interferentes que co-eluíram nos tempos de retenção do imazetapir e do'metsulfurom, que não invalidaram suas determinações, mas prejudicaram suas quantificações. A validação da metodologia mostrou bons resultados de recuperação para todos os agrotóxicos (60 -120 %), com exceção para o metsulfurom e tebuconazol no nível mais baixo de concentração; precisão < 15 % para todos os compostos, com exceção do imazetapir e metsulfurom; boa linearidade, coeficientes de correlação> 0,90 e nenhuma tendência foi visualizada no gráfico de resíduos. O limite de quantificação do método permitiu que os limites máximos de resíduos impostos pelas agências reguladoras para todos os compostos estudados fossem atingidos, com exceção para o imazetapir, devido a co-eluição do interferente. As amostras provenientes de uma cultura de soja analisadas não apresentaram contaminação pelos agrotóxicos em estudo / Abstract: Soy is one of principal Brazilian exportation products of Brazil as it is much used as a foodstuff because of its functional properties: rich in vitamins, proteins and minerais. The increasing quantity and quality of soy demands a constant and even expressive application of pesticides during soy cultivation. On the other hand, for preservation of public heath, since most pesticides may be prejudicial to health, the main regulatory agencies impose the maximum residues limits of pesticides in food. Thus, in this work, a method to determine the main pesticides applied in soy cultivation (imazethapyr, imazaquin, metsulfuron-methyl, carboxin, chlorimurom-ethyl and tebuconazole) using matrix solid phase dispersion (MSPD) as the extraction technique, followed by a clean-up step and subsequent chromatographic analysis by high performance liquid chromatography - diode array detection (HPLC-DAD), was developed and validated. The results have shown that MSPD is a suitable extraction procedure for solid and complex matrices, as is the case of soy and is a rapid and simple technique. However, it requires the optimization of some variables during the process of methodology development. The clean-up step was necessary because of the amount of matrix impurities, but the majority was eliminated using a C8 co-column. Remaining im.purities with the same retention time as imazethapyr and metsulfuron do not invalidate the determination but prejudice the quantification of these compounds. The validated method has shown good -results of recuperation for ali pesticides (60 - 120 %) except for metsulfuron and tebuconazole at the lowest concentration levei, precision < 15 % for ali compounds, except for imazethapyr and metsulfuron, good linearity and correlation coefficients > 0.90 without visible bias. The quantification limit of the method allows determinations below the maximum residues limits for ali pesticides, except for the imazethapyr, due to the presence of an impurity. Soy samples from soy cultivation were analyzed and did not present contamination for the pesticides under study / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

As partes aéreas de Equisetum giganteum L. (Equisetaceae), espécie nativa da América do Sul, denominada cavalinha e rabo-de-cavalo, são utilizadas popularmente sob a forma de infuso ou decocto no tratamento de afecções urinárias e hepáticas e principalmente como diurética, hemostática, adstringente, remineralizante e emagrecedora. Entretanto, poucos estudos científicos foram realizados envolvendo esta espécie. Quanto às propriedades biológicas de seus extratos, têm sido relatadas atividades diurética e antimicrobiana, e ausência de efeitos tóxicos agudos em camundongos, quando administrados por via oral. Considerando a ampla disponibilidade de E. giganteum no mercado brasileiro e o seu potencial terapêutico, torna-se necessária a definição de parâmetros de controle de qualidade para a matéria-prima vegetal, bem como o desenvolvimento de produtos padronizados. Assim, este trabalho objetivou avaliar parâmetros de controle de qualidade e estabelecer critérios químicos que permitam diferenciar E. giganteum de outras espécies do gênero e, a partir de uma solução extrativa aquosa, desenvolver extrato seco por spray drying e caracterizá-lo. Para isso, partes aéreas de E. giganteum e outras espécies disponíveis foram utilizadas. Análises comparativas destas amostras foram realizadas por CCD, CLAE e teor de flavonóides totais. Para E. giganteum, o teor de cinzas, os constituintes fenólicos e flavonóides totais foram determinados por método espectrofotométrico no UV/VIS. Análise por CCD foi realizada em placas de gel de sílica; fase móvel acetato de etila:ácido fórmico:ácido acético glacial:água (100:11:11:26); e detecção com reagente Natural / UV a 365 nm. Análises por CLAE dos extratos metanólicos foram realizadas empregando coluna de fase-reversa (C18) e detector de arranjo de diodos. O material vegetal foi também submetido à hidrólise ácida, a qual foi otimizada empregando Desenho Composto Central Rotacional e Análise de Superfície de Resposta para investigar os efeitos da concentração de HCl e do tempo de hidrólise. As agliconas correspondentes aos flavonóides heterosídicos foram extraídas e analisadas por método de CLAE previamente validado. O teor de flavonóides totais foi avaliado por ensaio colorimétrico com cloreto de alumínio a 425 nm. Análises por CLAE-DAD e CLAE-EM/EM também foram realizadas na intenção de caracterizar os compostos fenólicos presentes em E. giganteum. Uma solução extrativa aquosa foi obtida por decocção a partir da matéria-prima vegetal e posteriormente seca por spray drying empregando equipamento NIRO® atomizer semi-industrial. O extrato seco obtido foi então caracterizado. Os resultados demonstraram para E. giganteum um teor de cinzas totais e insolúveis em ácido (a 600ºC) respectivamente de 20,07 ± 0,21% e 13,75 ± 0,39%. O teor de fenólicos totais foi de 7,27 ± 0,05 mg equivalente a ácido gálico por grama, e de 0,420 ± 0,014 g% para os flavonóides totais. Na análise por CCD de E. giganteum foi verificada a presença de manchas características de polifenóis, sendo que, na análise por CLAE, alguns constituintes apresentaram espectro de UV característicos de derivados do ácido cinâmico e do canferol A diferenciação entre E. giganteum e E. arvense, e em menor extensão para E. hyemale e E. bogotense, foi possível através do perfil cromatográfico obtido nas análises por CCD e CLAE. A possível presença de tiamina foi caracterizada por CCD nestas amostras. Nas condições ótimas de hidrólise determinadas para E. giganteum, canferol e, em menor teor, quercetina foram encontradas. A análise comparativa das agliconas dos flavonóides por CLAE e dos flavonóides totais por espectrofotometria revelou similaridades químicas entre E. giganteum, E. hyemale e E. bogotense, mas não para E. arvense, o qual apresentou um perfil de agliconas distinto. A maior parte dos compostos fenólicos puderam ser caracterizados em E. giganteum por meio da análise por CLAE-EM/EM, sendo encontrado principalmente derivados heterosídicos do canferol, mas também outros compostos fenólicos raros. A obtenção de extrato seco por spray drying a partir de solução extrativa aquosa de E. giganteum mostrou-se viável, com alto rendimento do processo (85,6%). O produto foi caracterizado como um pó fino com baixa densidade, baixa fluidez e alta umidade residual, mas baixa atividade de água. Com relação a sua composição química, o extrato seco apresentou alto teor de minerais e açúcares redutores. A presença na droga vegetal e no extrato seco de E. giganteum de alto teor de minerais, corrobora seu uso como remineralizante. Os resultados obtidos neste trabalho representam as primeiras contribuições para o estabelecimento de parâmetros e métodos para a caracterização e o controle de qualidade da droga vegetal de E. giganteum. A viabilidade de produção e a caracterização do extrato seco obtido contribuem para o desenvolvimento de novos produtos farmacêuticos e a avaliação de outras atividades biológicas. / Aerial stems of Equisetum giganteum L. (Equisetaceae, traditional name: ‘‘horsetail’’), a native plant from South America, are used in folk medicine for treating kidney and hepatic illness, due to their diuretic, hemosthatic, adstringent, remineralizant and weight loss properties. However, few scientific studies have been performed regarding this species. Concerning the biological properties, diuretic and antimicrobial activities, as well as no oral acute toxicity in mice have been reported. Considering the large availability of the E. giganteum in the Brazilian market and its therapeutic potential, the definition of the quality control parameters for the raw material, as well as the development of standardized products with well-established biological activities becomes necessary. Thus, the aim of this work was to establish identification methods and to evaluate quality control parameters for the E. giganteum raw material in order to compare this species with others of the genus, as well as to develop and to characterize a spray-dried product from an aqueous E. giganteum extractive solution. Dried aerial stems of E. giganteum and other species available were employed in the comparative analysis by TLC, HPLC and UV/VIS total flavonoid content. The ash content was determined. Total phenolic and flavonoid contents were determined by UV/VIS spectrophotometric method. The TLC analysis was carried out on silica gel plates; mobile phase ethyl acetate:formic acid:glacial acetic acid:water (100:11:11:26); and detection with Natural Product reagent / UV at 365 nm. HPLC analysis of methanol extracts was performed with a C18 column and a diode-array detector. The plant raw material was also submitted to acid hydrolysis which was optimized using Central Composite Rotational Design and Response Surface Analysis for investigate the effects of HCl concentration and hydrolysis time. The corresponding flavonoid aglycones were extracted and analyzed by a previously validated HPLC method. Total flavonoid content was measured also by aluminium chloride colorimetric assay at 425 nm. In attempt to characterize phenolic compounds in E. giganteum, HPLC-DAD and HPLC-MS/MS analysis were performed. An aqueous extractive solution (AES) was prepared by decoction of E. giganteum grounded stems using water. The resulting AES was spray-dried using a Niro Production Minor equipped with rotary atomizer (GEA, Copenhagen, Denmark). The spray-dried extract was then characterized. The content of total ash and acidinsoluble ash (at 600 °C) in E. giganteum stems were 20.07 ± 0.21% and 13.75 ± 0.39% (mean ± S.D.), respectively. The total phenolic content was 7.27 ± 0.05 mg expressed as gallic acid equivalent per gram (GAE/g), and the total flavonoid content was 0.420 ± 0.014 g% (w/w). In the TLC of E. giganteum was verified the presence of spots characteristic of polyphenols. The HPLC fingerprint revealed the existence of some constituents with UV spectra characteristics of cinnamic acid and kaempferol derivatives. The differentiation between E. giganteum and E. arvense, and in a minor extension for E. hyemale and E. bogotense, was possible by the chromatographic profile in TLC and HPLC analysis. The possible presence of thiamine was characterized by TLC in these samples. In the optimum condition found for hydrolysis of E. giganteum raw material, quercetin and kaempferol aglicones were found. The comparative analysis of flavonoids aglycones using HPLC and total flavonoids spectrophotometric methods revealed similarities between E. giganteum, E. hyemale and E. bogotense, but not for E. arvense, which showed a distinct profile of aglycones. The HPLC-MS/MS analysis of E. giganteum hydroethanol extractive solution allowed to characterize some flavonoids heterosides, mainly quercetin and kaempferol derivatives, and other rare compounds. The spray-dried extract (SDE) of E. giganteum was obtained with a high process yield (85.6%) and characterized as a very fine powder with low density, poor flowability and high loss on drying, but low water activity. The high content of reducing sugars and minerals, represented by total ash, was also observed in the SDE and can explain some these characteristics. The high content of sugars and minerals in the SDE also corroborate the traditional use of the plant as remineralizant. The results obtained in this study represent one of the first contributions to the establishment of parameters and methods for the characterization and quality control of raw material of E. giganteum. The feasibility of production and subsequent characterization of dried extract obtained contributes to the development of new pharmaceuticals products and to the evaluation of new biological activities.