Resumo não disponível

A Intervenção Coronariana Percutânea (ICP) provoca o rompimento da integridade vascular, desencadeando o processo da coagulação. O uso de anticoagulantes durante a ICP é fundamental para prevenção de eventos tromboticos associados ao procedimento. Sabe-se que o efeito anticoagulante da heparina não fracionada é errático, mesmo após ajuste da dose por peso do paciente. Portanto, para que haja anticoagulação adequada evitando eventos tromboticos ou hemorrágicos, o uso da heparina requer monitorização de seus efeitos. Esta monitorização pode ser feita através do Tempo de Coagulação Ativada (TCA), que é uma medida do nível de anticoagulação executada a beira do leito. Diversos estudos investigaram qual o TCA ideal para pacientes submetidos a ICP. Este artigo revisa a literatura a respeito, demonstrando que o nível de anticoagulação obtida com heparina é variável, dependendo das condições clínicas do paciente, da terapêutica adjunta e do equipamento utilizado para sua medida, devendo o nível de anticoagulante ser ajustado para obter-se o TCA desejado. Pacientes submetidos a ICP devem receber heparina não fracionada na dose necessária para atingirem TCA de 300s; quando associado ao Inibidor da Glicoproteína IIb/IIIa Abxicimab, o TCA deve ser de 200 a 250s, medidos através do Hemochron.

A heparina foi isolada no início do século XX e permanece, até os dias atuais, como um dos mais importantes e eficientes agentes terapêuticos de ação antitrombótica. Sua atividade anticoagulante deve-se à ativação da antitrombina (AT), uma serpina responsável pela inibição fisiológica de serino-proteinases plasmáticas, tais como fIIa e fXa. Os esforços no sentido da elucidação dos aspectos estruturais e dinâmicos associados ao reconhecimento molecular da heparina pela AT, em nível atômico, vêm encontrando diversas dificuldades, principalmente associadas aos compostos sacarídicos. Em decorrência de sua elevada polaridade e flexibilidade, glicosaminoglicanos como a heparina são difíceis de estudar e modelar. Soma-se a isto o fato de que os resíduos de iduronato presentes na heparina (IdoA) apresentam um incomum equilíbrio conformacional entre estados de cadeira (1C4) e bote-torcido (2SO), sendo esta última estrutura postulada como a possível conformação bioativa. Sendo assim, este trabalho apresenta um estudo de modelagem molecular do perfil conformacional da heparina, tanto em solução quanto complexada à AT, utilizando cálculos ab initio e simulações de dinâmica molecular (DM) Em decorrência da ausência de parâmetros capazes de descrever polissacarídeos nos campos de força atualmente disponíveis, cargas atômicas foram geradas, utilizando-se os esquemas de Mulliken, Löwdin e cargas ajustadas ao Potencial Eletrostático, através de cálculos quantum-mecânicos na base 6-31G** e testadas na simulação de DM da heparina. Diversas condições de simulação, tais como modelos de água, concentrações de sais e as conformações 1C4 e 2SO do IdoA, foram avaliadas de forma a identificar as melhores condições para a descrição conformacional da heparina em solução. O protocolo de DM obtido foi então utilizado no estudo do complexo AT-heparina. Os resultados obtidos estão de acordo com os dados experimentais atualmente disponíveis acerca da conformação da heparina e da contribuição energética de cada resíduo de aminoácido da AT para a formação do complexo com a heparina. A partir dos cálculos ab initio realizados, foi proposto um refinamento na estrutura da heparina determinada por RMN, enquanto que as simulações de DM permitiram reinterpretar aspectos da estrutura tridimensional da AT determinada por cristalografia de raios-X. Adicionalmente, os dados obtidos sugerem que não há requerimento conformacional para a interação do IdoA com a AT Globalmente, os dados indicam que simulações de DM podem ser utilizadas para representar adequadamente a conformação da heparina, assim como para caracterizar e quantificar suas interações com a AT. Assim sendo, propomos o uso de simulações de DM do complexo entre a AT e a heparina, ou entre a AT e compostos derivados da heparina, como uma ferramenta útil no processo de desenvolvimento de novos agentes antitrombóticos e anticoagulantes.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-19T13:51:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_RayanaLuna_2016 (1).pdf: 8156604 bytes, checksum: 38605ef2e80adea3732612e363d4a7d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T13:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_RayanaLuna_2016 (1).pdf: 8156604 bytes, checksum: 38605ef2e80adea3732612e363d4a7d2 (MD5) Previous issue date: 2016-06-15 / FACEPE / O desenvolvimento de uma gestação saudável depende de uma adequada circulação uteroplacentária. Abortos recorrentes (AR), óbito fetal, partos prematuros, pré-eclâmpsia (PE) e trombofilia materna (TM) são algumas das patologias que interferem nessa rede vascular. São muitos os fatores que podem influenciar na tênue interface entre o parto de um feto saudável, um parto prematuro ou até mesmo um aborto. Uma variedade de moléculas como citocinas, proteínas de adesão e fatores de crescimento podem ter um papel importante durante o desenvolvimento fetal assim como em todo processo gestacional. Desta forma, desequilíbrio entre vias de sinalização assim como as vias inflamatórias têm sido relacionadas com o desencadeamento do processo abortivo. O fator de crescimento placentário (PGF) é um marcador importante para identificar deficiência placentária que pode ser ligada a PE. Mulheres com PE tendem a ter níveis inferiores de PGF circulantes quando comparadas a mulheres com gestações saudáveis. A inflamação aguda é comumente associada com injúria fetal assim como a inflamação crônica tem sido associada com a morte fetal e aborto. Estudos epigenéticos e epidemiológicos têm demostrado que indivíduos nascidos de mães que tiveram complicações durante a gravidez possuem maior risco de desenvolverem patologias diversas na vida adulta como acidente vascular cerebral, cardiopatias, obesidade e infertilidade. O Sildenafil, um inibidor de fosfodiesterase tipo-5 com características vasodilatadoras tem ajudado na terapia de restrição de crescimento fetal (RCF). Recentemente Sildenafil, tem sido demostrado por apresentar-se como anti-inflamatório em diversos modelos animais de patologias humanas como esclerose múltipla, hiperplasia prostática, doenças cardiovasculares, pulmonares entre outras. Por outro lado a Heparina de baixo peso molecular tem sido utilizada como tratamento para casos de AR quando o diagnóstico é associado ou não com TM, apesar deste tipo de esquema terapêutico não ser considerado eficaz em muitos casos. O presente estudo se propôs a investigar alvosterapêuticos em modelos animais de AR e PE, através da avaliação do tratamento com Sidenafil ou/com Heparina para a prevenção do processo abortivo assim como a investigação da influência da sinalização via-PGF na formação da vascularização cerebral fetal. Tratamento com Sildenafil sozinho ou tratamento conjunto com Heparina protegeu contra a mortalidade fetal, diminuiu a sinalização inflamatória na placenta assim como melhorou a saúde dos fetos de camundongo expostos a altas doses de Lipopolissacarídeos (LPS) como modelo para perda gestacional. PGF foi identificado em áreas importantes do cérebro de fetos geneticamente normais, no período de gestação média assim como também foram identificados níveis compatíveis do receptor 1 para fator de crescimento vascular endotelial (VEGF): Flt-1. A via que envolve o PGF mostrou-se essencial para o desenvolvimento vascular cerebral saudável. A proteção placentária e por consequência manutenção da saúde do feto é de suma importância para que a gestação chegue a termo e resulte no parto de um indivíduo saudável e sem riscos à saúde da mãe. Esse trabalho traz informações detalhadas de como acontece a modulação durante a vascularização cerebral durante o desenvolvimento em animais geneticamente normais assim como em camundongos PGF-/-. Adicionalmente, demostra como a terapia utilizando Sildenafil isoladamente ou em combinação com Heparina pode diminuir o perfil inflamatório e/ou trombótico do sistema fisiológico gravídico e desta forma prevenir o processo abortivo, mantendo a saúde fetal. / The development of a healthy pregnancy depends on proper uteroplacental circulation. Recurrent miscarriages (RM), fetal death, pre-term labour, preeclampsia (PE) and maternal thrombophilia (MT) are some of the pathologies that may affect with arrangements of this circulation network. There are many factors that can influence the maternal-fetal interface and aberrant gene expression at the site of this interface can result in premature birth or even miscarriage. A variety of molecules including a variety of cytokines, adhesion proteins and growth factors play an important role during fetal development as well as throughout gestation. Indeed, an imbalance of signaling and inflammatory signaling pathways have been associated with the initiation of the abortive process, regardless of the origin of this event. Placental growth factor (PGF) is an important marker to identify placental defects that can be linked to PE. Women with PE tend to have lower levels of circulating PGF when compared to women with healthy pregnancies. Acute inflammation is often associated with fetal injury and chronic inflammation has been associated with abortion and fetal death. Additionally, epigenetic and epidemiological studies have shown that individuals born to mothers who have complications during pregnancy have a higher risk of developing various diseases in adulthood such as: stroke, heart disease, obesity and infertility. Sildenafil, a phosphodiesterase type-5 inhibitor with vasodilating characteristics has proved beneficial in fetal growth restriction (FGR) pathologies. Recent studies have shown that Sildenafil plays an anti-inflammatory agent in a wide range of pathologies in animal models of human diseases such as: multiple sclerosis, prostatic hyperplasia, cardiovascular, and pulmonary diseases among others. Low molecular weight heparin (LMWH) has been used as a treatment for RM cases when diagnosis is associated or not with MT. Despite these facts, recently published meta-analyses have demonstrated that treatments using LMWH are not superior. This study proposed to investigate new therapeutic approaches in animal models of RM and PE. This was accomplished by evaluation of the effectiveness of Sildenafil and/or Heparin in the prevention of fetal mortality/abortion as well as the investigation of the influence of PGF signaling pathway in the formation of fetal brain vasculature. Treatment with sildenafil; alone or in combination with heparin protected against fetal mortality and decreased inflammatory signaling in the placenta, as well as improved the health of the mouse fetuses exposed to high doses of lipopolysaccharide (LPS). PGF was detected in important areas of the brain in genetically normal fetuses and the average period of gestation was also identified as compatible to vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor: Flt-1. The pathway involving PGF was found to be essential for healthy vascular development in the brain. Therefore, early placental protection and therefore maintaining the fetus' health is of paramount importance if the pregnancy comes to term and results in the birth of a healthy individual and without risks to health of the mother. This work provides detailed information into critical events that occur during the development of the cerebral vasculature both in genetically normal as well as in PGF -/- mice. Additionally, this work demonstrates how therapies with sildenafil alone or in combination with heparin can reduce the inflammatory status and/or thrombotic physiological systems of pregnancy and thereby prevent fetal mortality, thus maintaining fetal health.

Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T08:05:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freitas_CristianeFonseca_D.pdf: 2119434 bytes, checksum: 58a318beb1d3946d852e010325a6187c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Neste estudo, investigamos os efeitos protetores do BAY 41-2272 sobre a hipertensao pulmonar induzida pelo complexo heparina-protamina e hipoxia em cães anestesiados. Os animais foram anestesiados com pentobarbital sodico (Hypnol, 30mg/kg, iv) combinado com citrato de fentanila (0,01 mg/kg/h, i.v.) e diazepam (0,25mg/kg/h, iv). A hipertensao pulmonar pelo complexo heparina-protamina foi induzida com a administracao de 500 UI/kg de heparina, seguida da administracao de protamina (10 mg/kg). A interacao heparina-protamina causou aumento de aproximadamente 350% da pressao media da arteria pulmonar (PMAP), acompanhado de aumento significativo do indice de resistencia vascular pulmonar (IRVP) e da pressao capilar pulmonar (PcP). Este aumento foi significativo 2 min apos a injecao de protamina, mantendo-se significativamente elevado ate aproximadamente 5 minutos apos administracao da mesma. Ao mesmo tempo em que se detectou a hipertensao pulmonar, observamos reducao significativa da pressao arterial media (PAM). Observamos ainda um aumento significativo da frequencia cardiaca (FC) aos 2 minutos apos administracao da protamina com discreta diminuicao do indice cardiaco (IC). O indice de resistencia vascular sistemica (IRVS) nao sofreu alteracoes significativas. A saturacao do oxigenio (SpO2) foi significativamente diminuida apos a formacao do complexo heparina-protamina. Nos animais tratados com BAY 41-2272 (10 /kg/min, i.v.), observamos reducao marcante do aumento da PMAP, do IRVP e da PcP. Por outro lado, este tratamento potencializou a reducao da PAM. Alem disso, o BAY 41-2272 reduziu significantemente o IRVS e aumentou a FC. A diminuicao da SpO2 foi atenuada significativamente pelo BAY 41- 2272. Os niveis plasmaticos de GMPc foram dosados aos 2 min apos a formacao do complexo heparina-protamina, tendo-se mostrado elevados no grupo tratado com o BAY41-2272. O tempo de tromboplastina parcial ativado (TTPA) nao apresentou alteração significativa no tratamento com o BAY 41-2272. O veiculo do BAY 41-2272 (DMSO 30%) nao alterou significativamente os parametros estudados. A hipertensao pulmonar por hipoxia foi induzida com a instalacao de uma baixa tensao de oxigenio (FiO2=12%). Nesta circunstancia, a PMAP elevou-se em aproximadamente 280% aos 5 minutos, mantendo-se significativamente elevada ate 15 minutos apos instalacao da hipoxia. A elevacao da PMAP foi acompanhada de aumentos significativos no IRVP e PcP. A PAM, IRVS, FC e IC nao apresentaram alterações significativas. A SpO2 diminuiu na presenca da hipoxia. O tratamento com BAY 41-2272 (10 /kg/min, i.v.), reduziu significativamente a PMAP, PcP e IRVP. O IRVS foi significativamente potencializado pelo BAY 41-2272. A PAM, FC e IC nao alteraram significativamente. A diminuicao da SpO2 foi atenuada significativamente pelo BAY 41- 2272. Os niveis plasmaticos de GMPc elevaram-se significativamente no grupo tratado com o BAY 41-2272. Em conclusao, o BAY 41-2272 atenuou a acao vasoconstritora pulmonar induzida pelo complexo heparina-protamina e hipoxia levando a uma prevencao da hipertensao pulmonar. / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia

Orientadores: Joyce Maria Annichino-Bizacchi, Nelci Fenalti Hoher / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:49:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pazzini_Carla_M.pdf: 2143259 bytes, checksum: b3ff6eb2527b691a4021526983ef2aeb (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A heparina é um anticoagulante amplamente empregado no tratamento e profilaxia da trombose venosa profunda (TVP). Algumas limitações do seu uso são o custo e a via de administração, endovenosa ou subcutânea, às vezes em doses repetidas em 24 horas. Assim, o desenvolvimento de um produto que possa ser administrado por via subcutânea em um menor número de aplicações ou por via oral, torna-se um importante desafio, e de grande aplicabilidade clínica. A utilização de um sistema de liberação sustentada de fármacos pode vir ao encontro desse objetivo, pois permite que o agente seja protegido e liberado gradativamente. Este projeto consistiu na preparação e caracterização de nanopartículas biodegradáveis de poli (e-caprolactona) (PCL) como carreador de heparina de baixo peso molecular, e avaliação de sua atividade anticoagulante e antitrombótica in vivo. As nanopartículas foram preparadas pelo método de dupla emulsão a/o/a e evaporação de solvente. A caracterização das nanopartículas foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV), observando-se nanopartículas esféricas e homogêneas. O diâmetro médio das nanopartículas foi de 269 ± 36 nm e o potencial zeta foi de -1,20 ± 1,93 mV, indicando que as mesmas apresentam carga negativa. A eficiência de encapsulação, analisada pelo método Azure II, foi de 80 ± 2,3%. A liberação da heparina in vitro, avaliada pelo método de Azure II, no período de 24 horas foi de 4 ± 1,8%. Após a adição da esterase houve um aumento para 10 ± 1,9% na liberação de heparina, provavelmente pela aceleração da degradação das partículas pela enzima. A liberação in vivo da heparina encapsulada, após aplicação subcutânea em ratos, foi avaliada pela atividade anti-Xa plasmática através do método colorimétrico, e os resultados foram comparados aos obtidos com heparina livre. A dose de heparina encapsulada teve que ser 5 vezes maior que a dose de heparina livre. A heparina encapsulada em nanopartículas apresentou uma liberação sustentada por até 12 horas, por um período significativamente mais prolongado (P<0,01), mas com menor atividade anti-Xa. Esses dados sugerem que as nanopartículas podem permitir que a heparina seja liberada de uma forma mais gradual, e mesmo em dose mais elevada, não parece estar associada a um risco de atividade acima da faixa terapêutica. Quando se comparou a atividade anti-Xa obtida pela injeção subcutânea de nanopartículas com heparina em doses diversas, 800 UI/Kg e 1000 UI/Kg, ficou demonstrado que o efeito e o tempo de ação dependem da dose aplicada. Para avaliação da ação antitrombótica foi padronizado o modelo de TVP por estase em ratos. As doses de nanopartículas empregadas para a avaliação da ação antitrombótica foram calculadas pela atividade anti-Xa semelhante à obtida com a heparina livre, de 0,3 a 0,7 UI/mL. A heparina livre ou encapsulada em nanopartículas foi aplicada em uma única dose, por via subcutânea. Os resultados mostraram que houve diminuição significativa do trombo formado com a utilização de heparina livre, em comparação ao grupo controle (P=0,004). Praticamente não houve a formação de trombose venosa em nenhum dos ratos que receberam a heparina encapsulada em nanopartículas, com uma diferença significativa tanto em relação ao grupo controle (P<0,001) como ao grupo com heparina livre (P<0,001). Em resumo, o método de dupla emulsão a/o/a mostrou-se um método eficiente para o encapsulamento de heparina, proporcionando a obtenção de nanopartículas esféricas e com alta eficiência de encapsulação. Pelos estudos in vivo, a heparina encapsulada não liofilizada mostrou uma liberação sustentada, por um período superior ao obtido com a heparina livre, e com excelente ação antitrombótica. Caso esses resultados se confirmem através da continuidade deste estudo, a utilização de heparina encapsulada em nanopartículas na prática clínica poderá ser uma realidade com grandes vantagens para o paciente. / Abstract: Heparin is an anticoagulant widely used in the treatment and prophylaxis of deep vein thrombosis (DVT). Some limitations of its use is the cost and route of administration, intravenous or subcutaneous, sometimes in repeated doses in 24 hours. Thus, the development of a product that can be administered subcutaneously in a smaller number of applications or orally becomes a major challenge, with interesting clinical applications. The use of a system for sustained release of drugs can come to meeting that goal, because it allows the agent to be protected and released gradually. This project consisted of the preparation and characterization of biodegradable nanoparticles of poly (e-caprolactone) (PCL) as a carrier of heparin of low molecular weight, and its evaluation of anticoagulant and antithrombotic activity in vivo. The nanoparticles were prepared by the method of double emulsion w/o/w and evaporation of solvent. The characterization of nanoparticles was performed by scanning electron microscopy (SEM), which showed homogeneous spherical nanoparticles. The average diameter of nanoparticles was 269±36 nm and zeta potential was -1.20±1.93 mV, indicating negative charge. The encapsulation efficiency, assayed by Azure II, was 80±2.3%. The release of heparin in vitro, at the 24-hour period was 4±1.8%. After the addition of esterase the release of heparin was increased to 10±1.9%, probably by accelerating the degradation of particles by the enzyme. The in vivo release of encapsulated heparin after subcutaneous administration in rats, was assessed by anti-Xa plasma activity and the results were compared with free heparin. The dose of heparin encapsulated had to be 5 times the dose of heparin free. Heparin-encapsulated nanoparticles showed a sustained release for up to 12 hours for a period significantly longer (P<0.01), but with lower anti-Xa activity. These data suggest that nanoparticles may allow heparin to be released in a more gradual, but with lower activity. When comparing the anti-Xa activity obtained by subcutaneous injection of nanoparticles with different doses of heparin, 800 IU/kg and 1000 IU/kg, demonstrated that the effect and duration of action depends on the dose applied. To evaluate the antithrombotic action of nanoparticles with heparin a model of DVT by stasis in rats was used. The doses of nanoparticles used for the evaluation of antithrombotic action were calculated by anti-Xa activity similar to that obtained with free heparin, 0.3 to 0.7 IU/mL. Heparin free or encapsulated in nanoparticles was applied in a single dose subcutaneously. The results showed a significant decrease of thrombus formed with the use of free heparin, compared with the control group (P=0.004). There were virtually no formation of venous thrombosis in any of the rats that received heparin encapsulated in nanoparticles, with a significant difference both in the control group (P<0.001) and the group with free heparin (P<0.001). In summary, the method of double emulsion w/o/w proved an efficient method for the encapsulation of heparin, providing spherical homogeneous nanoparticles with high encapsulation efficiency. For in vivo studies, heparin encapsulated showed a sustained release for a period greater than that of free heparin, and with excellent antithrombotic action. If these results are confirmed by the continuity of this study, the use of heparin encapsulated in nanoparticles in clinical practice can be of great benefits for the patient. / Mestrado / Medicina Experimental / Mestre em Fisiopatologia Médica

Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-04-12T12:20:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DOUGLASMENON.pdf: 572476 bytes, checksum: d5466629f5b7b1f9a9f071bdb64e0755 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-12T12:20:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DOUGLASMENON.pdf: 572476 bytes, checksum: d5466629f5b7b1f9a9f071bdb64e0755 (MD5) Previous issue date: 2015-08-28 / INTRODUCTION: Degloving injuries are an specific category of wound, when occurs devascularization of tissue and ischemic injury, with high levels of morbidity and mortality. OBJECTIVES: To evaluate the efficacy of hyperbaric oxygen therapy and use of topic and intralesional heparin in a experimental model of degloving injuries. METHODS: There was used adult male Wistar rats, submitted to degloving injury of right lower limb, from the base of the thigh to the ankle articulation, under general anesthesia with ketamine plus xylazine. Animals was divided into four groups: Control; Heparin – topic spray heparin daily over the injury site; Hyperbaric Oxigenation – daily 30 minutes sessions in chamber with 100% O2 and 2 ATA pressure and Positive Control – 45 mg/kg intraperitoneal alopurinol, single dose. All the animals received prophylactic antibiotic with benzathine penicillin 40.000 UI/kg and analgesia with dipyrone added to the water (2 mg/mL). On the seventh postoperative day, animals were submitted to euthanasia and skin flaps was taken out and total area and necrotic area was measured and necrotic percentage was calculated. RESULTS: Necrotic percentage average in control group was 56.03%; in positive control group was 51.36%, p=0.2; in heparin group 42.10% p≤0.05; and in hyperbaric oxygen group 31.58% p≤0.01. DISCUSSION: There was significant reduction of necrosis percentage in animals treated with hyperbaric oxygenation and also in the animals of heparin group. The model used on this study must be understood as also a model of doubt or debil vascularization skin flaps suggesting possibility of new studies of this therapeutic modalities in other situations of Plastic Surgery and other kind of diseases involving tissue ischemia, as heart attack, coronarian ischemia, stroke and limbs vascular insufficiency. CONCLUSION: Both heparin topic administration and hyperbaric oxygenation shows efficacy in reduction of necrotic area percentage in this model. / INTRODUÇÃO: Os desluvamentos são uma categoria específica de ferimentos, onde ocorre grande desvascularização dos tecidos, que ficam por sua vez sujeitos a lesão isquêmica, incorrendo em grandes índices de morbimortalidade. OBJETIVOS: Avaliar o efeito do tratamento com heparina tópica e oxigenação hiperbárica em modelo animal de desluvamentos. MÉTODOS: Foram utilizados ratos adultos machos Wistar, que foram submetidos a indução de desluvamento do membro inferior direito, extendendo-se desde a raiz da coxa até a articulação do tornozelo, sob anestesia geral com cetamina + xilazina. Os animais foram distribuídos em quatro grupos: Controle; Heparina - heparina spray tópica diariamente sobre a área de lesão; Oxigenação Hiperbárica - sessões diárias de 30 minutos em câmara com O2 a 100 % e 2 ATA de pressão; e Controle Positivo - 45 mg/kg intraperitoneal de alopurinol, dose única. Todos os animais receberam antibioticoprofilaxia com penicilina benzatina IM 40.000 UI/kg e analgesia com dipirona adicionada à água do bebedouro (2mg/mL). No sétimo dia de pós operatório os animais foram submetidos a eutanásia e os retalhos cutâneos foram retirados e realizadas medidas das áreas total e necrótica, bem como o cálculo da porcentagem da área de necrose. RESULTADOS: A média da porcentagem de necrose do grupo controle foi de 56,03 %; no grupo controle positivo 51,36 % (p=0,2); no grupo da heparina 42,10 % (p≤0,05) ; e no grupo da oxigenação hiperbárica 31,58% (p≤0,01). DISCUSSÃO: Houve redução significante da porcentagem de necrose nos animais tratados com oxigenação hiperbárica e também nos animais do grupo da heparina. O modelo utilizado neste estudo deve ser entendido também como um modelo de retalhos cutâneos de vascularização duvidosa ou deficiente, sugerindo a possibilidade de novos estudos dessas modalidades terapêuticas em diversas situações da Cirurgia Plástica, e outros tipos de patologias que envolvam isquemia tecidual, como infarto agudo do miocárdio e isquemia coronariana, acidente vascular encefálico e insuficiência vascular de membros. CONCLUSÃO: A oxigenação hiperbárica, assim como a aplicação tópica de heparina mostraram-se eficazes na redução do percentual de área de necrose no modelo estudado.

Orientadores : Antonio Celso Fonseca de Arruda, Waldyr Parolari Novello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-01T20:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ValdesSerra_JuanCarlos_D.pdf: 25068209 bytes, checksum: caa7c445827fdde20ccef687862da317 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As cirurgias cardiopulmonares são freqüentemente associadas a procedimentos de circulação extracorpórea (CEC), os quais necessitam de conectores, tubos, reservatórios, etc. O contato entre o sangue e superfícies artificiais na CEC provoca alterações adversas como, por exemplo, a adesão e destruição de glóbulos vermelhos, a adesão e agregação plaquetária e a ativação da coagulação sanguínea. Este trabalho compreende o desenvolvimento e caracterização de revestimentos superficiais não trombogênicos para utilização na superfície interna de tubos de poli(cloreto de vinila) (pVC), muito utilizados em procedimentos de circulação extracorpórea. Foram avaliados: tubos não revestidos, tubos revestidos com heparina-cloreto de benzalcônio e tubos revestidos com plasma de baixa energia (GlowDischarge). Os métodos para caracterização foram: microscopia óptica (MO), microscopia eletrônica de varredura (MEV), determinação da rugosidade superficial, medidas de ângulo de contato, espectroscopia de infravermelho com reflexão interna múltipla (MIR) e avaliação do envelhecimento no revestimento. Também foi analisado o comportamento da hemocompatibilidade através da determinação de alguns parâmetros da coagulação: tempo de protrombina (TP), tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), tempo de trombina (TI), fibrinogênio e número de plaquetas. As análises por MO mostram ranhuras no material, o que é atribuído ao processo de fabricação dos tubos (extrusão), observando-se que para aumentos analisados não existe diferença entre os substratos revestidos e não revestidos. Já nos resultados via MEV com aumentos maiores, observa-se os revestimentos com topografias superficiais diferentes em comparação ao substrato, dependendo do método de revestimento. Foi determinada a espessura do revestimento com heparina, apresentando uma distribuição homogênea oscilando por volta de 1 Ilm. O ensaio de rugosidade superficial para substratos não revestidos mostra, que o calibre mais rugoso foi o de 1/2" ( 12,7 mm), sendo o mais trombogênico. O ângulo de contato mostra que o componente polar para todos os revestimentos é menor que o componente dispersivo de energia superficial, demonstrando características de materiais hidrofóbicos em todos os revestimentos superficiais obtidos. No teste de infravermelho, conclui-se que as modificações causadas pelos revestimentos são muito superficiais, permitindo que a radiação fosse absorvida pelo substrato de PVC, demonstrando que o teste não é o adequado para avaliar estas modificações superficiais. O comportamento dos revestimentos quanto à hemocompatibilidade demonstrou que tubos revestidos com heparlna-cloreto de benzalcônio retardam os parâmetros da coagulação. Para revestimentos com plasma destaca-se o revestimento com SF6, que não provoca mudanças significativas nos parâmetros medidos, mantendo valores muitos parecidos com a amostra inicial, para um tempo de exposição in vitro de 2,5 horas / Abstract: Cardiopulmonary surgeries are frequently associated to procedures of extracorporal circulation (ECC), which need connectors, tubes, reservoirs, etc. Contact between the artificial blood and surfaces in the ECC improve adverse alterations such as, for example, red globule adhesion and destruction, adhesion and aggregation platelet and the activation of blood coagulation. This work is based on the development and characterization of non-thrombogenic superficial coating for use in the internal surface of poly(vinyl chloride) (PVC) tubes, many used in extracorporeal circulation procedures. The following were evaluated: non-coated tubes, heparin- benzalkonium chloride coated tubes and plasma (Glow Discharge) coated tubes. The methods for characterization were: optic microscopy (OM), scanning electronic microscopy (SEM), determination of superficial roughness, measurement of contact angle, infra-red ray spectroscopy (IRM) and aging evaluation the coating. Also the behavior of the hemocompatibilidade through the determination of some coagulation parameters was analyzed: time of prothrombin (TP), time of activated partial thromboplastin (TAPT), trombin time (TI), fibrin and number of platelets. The OM analyses show grooves in the material, which is attributed 10 the manufacture process of the tubes (route), observing that for analyzed increases there is no difference between coated and non-coated substrate. Coating with different superficial topography in relation to the substratum, depending on the coating method, were observed in the results with higher SEM increases observes. The thickness of the coating with heparin was determined, presenting a homogeneous distribution oscillating around 1 _m. The assay of superficial roughness for the non-coated substrate sample, that the bore roughest caliber was W', (12.7 mm), which was the most thrombogenic. The contact angle showed that the polar component for alI treatment was less than the dispersive component of superficial energy, demonstrating hydrophobic materials characteristics in all the superficial treatment obtained. In the infra-red ray test it was concluded that the modifications caused by the coatings were very superficial, allowing the radiation 10 be absorbed by the PVC substratum, which demonstrated that the test is not adequate for these superficial modifications. The behavior of coatings in term of hemocompatibility demonstrated that tubes coated with heparin- benzalkonium chloride delay the coagulation parameters. For coatings with plasma, the coating with SF6 stands out, as it does not provoke significant changes in the measured parameters, maintaining many values similar 10 the initial sample, for a display time in vitro of2.5 hours / Doutorado / Materiais e Processos de Fabricação / Doutor em Engenharia Mecânica

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-12-20T15:50:22Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1478810 bytes, checksum: be9e97e7629b09268a428ed4728be5c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-20T15:50:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1478810 bytes, checksum: be9e97e7629b09268a428ed4728be5c8 (MD5) Previous issue date: 2016-08-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada por protozoários parasitas intracelulares da espécie Leishmania infantum chagasi nas Américas. Esses parasitos possuem forte tropismo por órgãos viscerais, especialmente baço, fígado e medula óssea, onde se proliferam e provocam lesões podendo ser letal caso não sejam tratadas. O parasito possui moléculas consideradas fatores de virulência que vem sendo intensamente investigadas. Entre elas destacamos as proteínas ligante de heparina (PLH), glicoproteínas relacionadas em diversos trabalhos na literatura com o processo de adesão e internalização do parasito à célula hospedeira. Nesse trabalho utilizamos a PLH de L. infantum chagasi (PLHLc) em experimentos de imunização de camundongos BALB/c para avaliar a proteção conferida a esses animais após desafio com as formas promastigotas do parasito. Foram avaliadas a carga de parasitos no baço e no fígado, produção de citocinas (IFN- , TNF, IL-2, IL-17, IL-6, IL-10 e IL-4) e de óxido nítrico (NO) após imunização com PLHLc isolada ou associada ao Adjuvante Incompleto de Freund (AIF) e Adjuvante Saponina (SAP), quatro semana após o desafio. Os camundongos foram imunizados por via intraperitoneal ou subcutânea, sendo submetidos a duas doses de reforço utilizando o mesmo protocolo da primeira imunização. Quinze dias após a última dose os camundongos foram infectados com 1 x 10 7 promastigotas de L. infantum chagasi em fase final logarítmica de crescimento. Quatro semanas após a infecção os animais foram eutanasiados e o baço e o fígado foram coletados para ensaio da quantificação da carga parasitária e avaliação da produção de citocinas e NO por citometria de fluxo e pelo método de Griess, respectivamente. Nossos resultados mostraram que o grupo imunizado apenas com PLHLc não apresentou redução da carga parasitária e os esplenócitos estimulados in vitro com antígeno particulado de L. infantum chagasi (AgLc) produziram citocinas IL-6 e IL-17, ambas de padrão de resposta imune Th17 e a citocina IL-10. O grupo imunizado com PLHLc + AIF apresentou redução da carga de parasitos apenas no baço e produziram citocinas IFN- e IL-2 (Th1), IL-6 e IL-17 (Th17) e IL-10. O grupo imunizado com PLHLc + SAP apresentou redução da carga parasitária no baço e no fígado. Os esplenócitos desse grupo estimulados in vitro com AgLc produziram maiores médias de citocinas de padrão de resposta imune Th1 e Th17 e a citocina reguladora IL-10 comparado com os grupos anteriores. Em relação a produção de NO por esplenócitos estimulados in vitro com AgLc níveis basais foram detectados pelo método de Griess em todos os grupos avaliados. Os resultados alcançados nos mostra que a PLHLc associada ao adjuvante Saponina representa uma forte candidata a vacina contra LV e nos direciona para uma nova etapa de investigação, a proteção conferida pela PLHLc recombinante. / Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by the protozoan intracellular parasite Leishmania infantum chagasi specie in the Americas. These parasites exhibit a strong tendency to invade visceral organs, especially the spleen, liver and bone marrow, where they proliferate and cause injuries and can be lethal if not treated. The parasite exhibit molecules considered as virulence factors that have been intensively searched. Among then we highlight the heparin-binding proteins (HBP), glycoproteins related in several studies in the literature with the process of adhesion and internalization of the parasite to the host cell. In this work, we used L. infantum chagasi HBP (HBPLc) in immunization experiments using BALB/c mice to evaluate the protection given to the animals after challenge with promastigote forms of the parasite. Were evaluate the parasite load in the spleen and liver, cytokine production (IFN- , TNF, IL-2, IL-17, IL-6, IL-10 e IL-4) and nitric oxide (NO) after immunization with isolated HBPLc or associated with Incomplete Freund’s Adjvant (IFA) and Saponin Adjuvant (SAP), four weeks after challenge. The mice were immunized by intraperitoneal or subcutaneous route and submitted two times to booster doses using the same protocol of the first immunization. Fifteen days after the last dose the mice were infected with 1 x 10 7 L. infantum chagasi promastigotes end logarithmic phase of growth. Four weeks after infection the animals were euthanized and spleen and liver were collected for assay quantification of the parasite load and evaluation of the cytokine and NO production by flow cytometry and by Griess method, respectively. Our results showed that the group immunized with only HBPLc showed no reduction in parasite load and spleen cells stimulated in vitro with crude extract of L. infantum chagasi (AgLc) produced cytokines IL-6 and IL-17, both standard immune response Th17 and IL-10 cytokine. The group immunized with HBPLc + IFA decreased the parasite load only in the spleen and produced cytokines IFN- and IL-2 (Th1), IL-6 and IL-17 (Th17) and IL-10 cytokine. The group immunized with HBPLc + SAP decreased the parasite load in the spleen and liver. The spleen cells this group in vitro stimulated with AgLc generated pattern cytokines of Th1 and Th17 and regulatory cytokine IL-10 compared to previous groups. About NO production by spleen cells stimulated in vitro with AgLc baseline levels were detected by Griess method in all groups evaluated. The results achieved shows that the HBPLc associated with Saponin adjuvant is a strong candidate against VL vaccine and directs us to a new stage of research, the protection given by recombinant HBPLc.

Medicamentos biológicos são obtidos a partir de fluidos biológicos ou tecidos de origem animal por procedimentos biotecnológicos e, a partir do vencimento das suas patentes, surge a possibilidade da produção de suas cópias, os chamados biossimilares. Este tema, além de polêmico, por ainda apresentar divergências de entendimento da classe científica, também engloba 4 das 5 classes terapêuticas de medicamentos mais vendidas, e apresenta evolução crescente no mercado farmacêutico. Com o aumento da demanda, cresce o interesse na produção de medicamentos biológicos de alta qualidade, com a mesma eficácia, porém a preços mais baixos. Dessa forma, é possível entender a responsabilidade das regulamentações, principalmente no que diz respeito aos biossimilares, a fim de que eles respeitem os requisitos mínimos necessários para serem comparáveis ao seu medicamento biológico novo. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar questões técnico-regulatórias e os requisitos de qualidade para registro de medicamentos biológicos e biossimilares humanos frente a diferentes Autoridades Sanitárias mundiais. A análise foi baseada em três moléculas biológicas, sendo a clássica heparina e moléculas novas, filgrastim e infliximabe. Foi constatado que na teoria, a legislação brasileira é baseada em regulamentos internacionais, especialmente da Federal and Drug Administration (FDA) e European Medicines Agency (EMA), e que na prática, o Brasil tem se mostrado mais conservador na extrapolação de indicação e na aprovação dos biossimilares. Ainda, foi possível notar que independente do país, as Farmacopeias ainda necessitam de aprimoramento com relação a este tema, pois em sua maioria, não existe padronização dos parâmetros e testes a serem realizados. Pesquisa demonstrou que o conhecimento sobre biossimilares ainda não está consolidado entre profissionais médicos e que, portanto, há necessidade de programas para esclarecimentos, com a finalidade de estimular seu uso, quando possível e com custos mais interessantes. / Biological drugs are obtained from biological fluids or animals tissues by biotechnological procedures and, from the expiration of their patents, the possibility of producing their \"copies\", the so-called biosimilars, arises. In addition to being a controversial subject, as it still presents divergences of understanding by the scientific class, it also encompasses 4 of the 5 therapeutic classes of best-selling drugs, and it presents an increasing evolution in the pharmaceutical market. As demand increases, interest in the production of high-quality biological drugs with the same effectiveness, but at lower prices, also increases. In this way, it is possible to understand the responsibility of regulations, especially with regard to biosimilars, so that they comply with the minimum requirements needed to be comparable to their reference biological medicine. Thus, the objective of this project was to evaluate technical and regulatory topics, as well as quality requirements for the registration of human biological and biosimilar medicines under the perspective of different Health Authorities around the world. The analysis was based on three biological molecules, being the classic heparin and new molecules, filgrastim and infliximab. It was found that in theory, Brazilian regulation is based on international regulations, especially the Federal and Drug Administration (FDA) and the European Medicines Agency (EMA), and that in practice, Brazil has been more conservative in the extrapolation of indication and approval of biosimilars. Also, it was possible to note that, regardless the country, Pharmacopoeias still need to be improved for this topic, since in general, there is no standardization of the parameters and tests to be performed. Research showed that the knowledge about biosimilars is not yet consolidated among doctors and that, therefore, there is a need for clarification programs, with the purpose of stimulating their use, when possible and at lower costs.