Introdução: Os anticorpos antiproteína P ribossomal (anti-P) são considerados marcadores sorológicos específicos do Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) e estão associados a acometimento hepático nesta doença. As semelhanças entre a hepatite autoimune (HAI) e a hepatite associada ao LES levou ao questionamento se o anticorpo anti-P também estaria presente na HAI. Objetivo: Avaliar a frequência e significância clínica do anticorpo anti-P em uma grande coorte de pacientes com HAI. Métodos: Foram analisados os soros de 96 pacientes com HAI, coletados no diagnóstico e comparados com 82 soros de indivíduos saudáveis. Todos os soros foram testados para a presença do anticorpo anti-P pelo método de ELISA, do anticorpo anti-DNA de dupla fita pelo método de imunofluorescência indireta usando Crithidia luciliae e do anticorpo anti-Sm pelo método de ELISA. Os critérios de exclusão adotados foram a presença de outros anticorpos específicos de LES como o anti-DNA de dupla fita (n=1) e o anti-Sm (n=2) ou se o paciente apresentasse o diagnóstico de LES definido pelo Colégio Americano de Reumatologia (n=0). Os prontuários médicos foram revisados para dados demográficos, clínicos e resultados de exames laboratoriais relacionados a hepatopatia e anticorpos específicos de HAI. Resultado: Títulos moderados ou alto (> 40 U) de anti-P foram encontrados em 9,7% (9/93) dos pacientes com HAI e em nenhum dos controles (p = 0,003). No diagnóstico, os pacientes com anti-P positivo ou negativo apresentavam características demográficas/clínicas semelhantes, como a frequência de cirrose (44,4% vs 28,5%, p = 0,44) e exames laboratoriais relacionados a hepatite (p > 0,05). Entretanto, ao final do seguimento destes pacientes (média de 10,2 ± 4,9 anos), os pacientes positivos para anticorpos anti-P apresentaram uma maior frequência de cirrose quando comparados a pacientes negativos para anti-P (100% vs 60%, p = 0,04). Conclusão: a demonstração da presença do anticorpo anti-P em pacientes com HAI sem evidência de LES sugere um mecanismo comum de acometimento hepático nestas duas doenças. Além disso, a presença deste anticorpo parece predizer um pior prognóstico nos pacientes com HAI / Background: Autoantibodies to ribosomal P proteins (anti-rib P) are specific serological markers for systemic lupus erythematosus (SLE) and are associated with liver involvement in this disease. The similarity in autoimmune background between autoimmune hepatitis (AIH) and SLE- associated hepatitis raises the possibility that anti-rib P antibodies might also have relevance in AIH. Aims: To evaluate the frequency and clinical significance of anti-rib P antibodies in a large AIH cohort. Methods: Sera obtained at diagnosis of 96 AIH patients and of 82 healthy controls were tested for IgG anti-ribosomal P protein by ELISA. All of the sera were also screened for other lupus-specific autoantibodies, three patients with the presence of anti-dsDNA (n=1) and anti-Sm (n = 2) were excluded. Results: Moderate to high titers (> 40 U) of anti-rib P antibody were found in 9.7% (9/93) of the AIH patients and none of the controls (P = 0.003). At presentation, AIH patients with and without anti-rib P antibodies had similar demographic/clinical features, including the frequency of cirrhosis (44.4% vs. 28.5%, P = 0.44), hepatic laboratorial findings (p > 0.05). Importantly, at the final observation (follow-up period 10.2 ± 4.9 years), the AIH patients with anti-rib P had a significantly higher frequency of cirrhosis compared to the negative group (100% vs. 60%, P = 0.04). Conclusion: The novel demonstration of anti-rib P in AIH patients without clinical or laboratory evidence of SLE suggests a common underlying mechanism targeting the liver in these two diseases. In addition, this antibody appears to predict the patients with worse AIH prognoses

O HEV é um patógeno viral, transmitido principalmente pela via fecal-oral e responsável por grandes surtos de hepatite em todo o mundo. A hepatite E é considerada a hepatite com transmissão entérica mais frequente no mundo, e um importante problema de saúde pública. Por apresentar uma fase sanguínea assintomática e ser um agente emergente, cuja incidência vem aumentando ao longo da última década, o HEV é também considerado um problema para a hemoterapia, uma vez que põe em risco a segurança transfusional, devido ao risco de sua transmissão por transfusão sanguínea. No Brasil, sua ocorrência e características ainda não são compreendidas e os estudos disponíveis são limitados. Objetivo: Determinar a prevalência do HEV em doadores de sangue do Hemocentro de Ribeirão Preto no ano de 2015. Material e Métodos: Foram selecionados aleatoriamente 1.000 doadores de sangue do Hemocentro de Ribeirão Preto no período de janeiro a dezembro de 2015. Inicialmente, foi realizada a pesquisa de anticorpos da classe IgG do HEV em plasma, utilizando a metodologia de imuno-ensaio enzimático (ELISA). As amostras que se apresentaram reagentes (positivas ou inconclusivas) para IgG HEV, foram submetidas à pesquisa de antígenos virais, também por metodologia ELISA. Paralelamente aos testes sorológicos, foi realizado o teste molecular para a detecção de RNA viral, aplicando a técnica de PCR em tempo real e utilizando primers desenhados para a região mais conservada do vírus (ORF-3). Resultados: Entre as 1.000 amostras testadas, 124 foram positivas para a pesquisa de anticorpos anti-HEV IgG e 5 foram inconclusivas. A soroprevalência encontrada foi de 12,5%. A maior prevalência encontrada foi na faixa etária de 50-59 anos (21,2%, p<0,01), porém com aumento significativo entre os 40 e 69 anos de idade. A menor prevalência encontrada foi no grupo etário de 18 a 29 anos (3,9%). A soroprevalência foi proporcionalmente maior entre os indivíduos do gênero masculino (14,3%, p<0,06) em relação aos indivíduos do sexo feminino (10,4%). Nenhuma das amostras testadas foi positiva para a pesquisa de antígenos HEV e nem para a detecção de RNA viral. Conclusão: A soroprevalência do vírus da hepatite E encontrada entre os doadores de sangue de Ribeirão Preto foi alta (12,5%) e compatível com os dados nacionais de soroprevalência entre doadores. A viremia não pode ser estabelecida, pois não foram encontrados casos de HEV RNA positivos. / HEV is a viral pathogen, transmitted primarily by the fecal-oral route and responsible for large outbreaks of hepatitis worldwide. Hepatitis E is considered the most common transmissible enteric hepatitis in the world, and is currently considered a major public health problem. Because it presents an asymptomatic blood stage and is an emerging agent whose incidence has increased over the last decade, HEV is also considered a problem for hemotherapy, since it jeopardizes transfusion safety due to the risk of its transmission by transfusion. In Brazil its occurrence and characteristics are poorly understood and available studies are limited. Objective: To determine the prevalence of HEV in blood donors at the Hemocentro de Ribeirão Preto in the year 2015. Material and Methods: 1.000 blood donors were randomly selected from the Hemocentro of Ribeirão Preto from January to December 2015. Initially, a HEV IgG antibody was investigated in plasma, using ELISA (enzyme immunoassay). As samples that presented reagents (positive or inconclusive) for HEV IgG, they were submitted to the research of viral antigens, also by ELISA methodology. In parallel to the serological tests, it was carried out for molecular testing to detect viral RNA, applying a real-time PCR technique and using primers designed for a more conserved region of the virus (ORF-3). Results: Among 1,000 tested samples, 124 were positive for anti-HEV IgG antibodies and 5 were inconclusive. One seroprevalence was found to be 12.5%. A higher prevalence was found in the age range of 50-59 years (21.2%, p<0,001), but with a significant increase between 40 and 69 years of age. The lowest prevalence was found for the 18-29 age group (3.9%). Seroprevalence was proportionally higher among males (14.3%, p<0,06) than among female users (10.4%). It was not evaluated for a HEV antigen search or for viral RNA detection. Conclusion: A seroprevalence of hepatitis E virus found among blood donors from Ribeirão Preto and high (12.5%) and compatible with data from seroprevalence among donors. Viremia cannot be established because no cases of positive RNA HEV have been found

Estudamos, através de modelagem matemática, aspectos estacionários, espaciais e temporais relacionados à propagação e controle de doenças infecciosas de transmissão direta por contato pessoa-a-pessoa. Elaboramos modelos matemáticos determinísticos fundamentados no princípio de ação de massas em Epidemiologia, levando em consideração a simetria no número de contatos entre suscetíveis e infectados, o que nos permitiu estimar a taxa per capita de contatos potencialmente infectantes e, por conseguinte, a força de infecção e os possíveis efeitos de diferentes programas de vacinação. O desenvolvimento do modelo de estado estacionário foi feito com base em dados sorológicos de rubéola (Azevedo Neto 1992) para uma população que ainda não havia sido imunizada por meio de vacinação. Analisamos, então, o efeito de três diferentes esquemas de vacinação para a rubéola, nos seguintes intervalos de idade: de 1 a 2 anos, de 7 a 8 anos e de 14 a 15 anos. A incerteza estatística na idade média de infecção foi estimada com o auxílio do método de Monte Carlo e tal metodologia foi aplicada a dados de varicela e hepatite A. Estudamos também o aspecto espacial, com a inclusão da variável distância na formulação de um modelo SIR e análise da influência do alcance de interação entre indivíduos. E, através do estudo da força de infecção em função da idade e do tempo, pudemos analisar, de modo qualitativo, diferentes cenários na evolução temporal de uma doença infecciosa. / We have studied, based on mathematical modelling, stationary, spatial and temporal features related to the propagation and control of directly transmitted infectious diseases through person-to-person contact. We have developed deterministic mathematical models founded on the mass-action principle of Epidemiology, taking into account the symmetry of contacts among susceptible and infectious individuals. Such symmetry enabled us to estimate the potentially infective per capita contact rate and, therefore, the force of infection and the possible effects of different vaccination programmes. The steady state modelling has been based on rubella serological data of a non-immunized population (Azevedo Neto 1992) and we have analysed three different vaccination schemes against rubella in the following age intervals: from 1 to 2 years of age, from 7 to 8 years of age, and from 14 to 15 years of age. The serological data variability has been considered in the estimation of the statistical uncertainty of the average age at infection by means of the Monte Carlo method and we have applied this methodology to varicella and hepatitis A data. The spatial feature in a SIR model has been studied with the analysis of the influence of the interaction range among individuals. We have also studied the force of infection as a function of age and time and we have analysed, in a qualitative way, different situations in the time evolution of an infectious disease.

Hepatite é uma condição inflamatória do fígado que pode ser autolimitada ou pode progredir para um quadro de fibrose, cirrose ou câncer. Uma das consequências mais graves associada ao dano hepático é a insuficiência hepática aguda (também conhecida como insuficiência hepática fulminante), cujas etiologias mais comuns são as infecções virais, a autoimunidade e o uso de medicamentos. Conhecendo as atividades biológicas das moléculas presentes na saliva dos insetos hematófagos, e com base em resultados anteriores do nosso grupo de pesquisa, acreditamos que os componentes salivares do mosquito Aedes aegypti possam ser empregados na prevenção e/ou tratamento de doenças inflamatórias. Assim, para avaliar o potencial terapêutico da saliva de A. aegypti em quadros de insuficiência hepática aguda, empregamos um modelo experimental amplamente utilizado para o estudo da hepatite autoimune, a hepatite experimental aguda induzida por concanavalina A (Con A) e um modelo de hepatotoxicidade induzida por acetaminofeno (APAP), comumente empregado para o estudo da lesão hepática induzida por fármaco. Nossos resultados demonstram que a exposição de animais às picadas de mosquitos A. aegypti reduz os níveis das enzimas alanino aminotransferase (ALT) em ambos os modelos e de aspartato aminotransferase (AST) no modelo de hepatite induzida por Con A. Além disso, o tratamento com a saliva foi capaz de reduzir os níveis de citocinas séricas IFN-&gamma, IL-6 e IL-2, bem como a expressão de IFN-&gamma no fígado no modelo de hepatite experimental aguda induzida por Con A e as citocinas séricas TNF-, IL-6, IL1 e IL-10 no modelo de hepatite tóxica induzida por APAP. Os animais injetados com Con A apresentaram um aumento das frequências de populações de células NK e macrófagos e a exposição às picadas reduziu essas alterações para níveis próximos aos do grupo controle. Da mesma maneira, a exposição aos mosquitos também reduziu as populações de células dendríticas, macrófagos e células NKT, que se apresentaram aumentadas no grupo de animais injetados com APAP. Tais dados demonstram que a saliva de A. aegypti é capaz de proteger os animais dos efeitos deletérios das hepatites avaliadas, devido à sua capacidade de modular a resposta inflamatória nos animais experimentais. Estudos futuros poderão caracterizar as moléculas responsáveis por essa atividade biológica, destacando seu potencial uso como opção para prevenção e/ou tratamento destas condições. / Hepatitis is an inflammatory condition of the liver that can be self-limiting or progress to fibrosis, cirrhosis or cancer. One of the most severe consequences associated with the hepatic damage is the acute liver failure (also known as fulminant hepatic failure). being viral infections, autoimmunity and use of medications the most common etiologies. Knowing the biological activities of the compounds present in the saliva of hematophagous insects, and based on previous results from our group, we believe that the salivary components of Aedes aegypti mosquitoes can be employed in the prevention and/or treatment of inflammatory diseases. Thus, to evaluate the therapeutic potential of A. aegypti mosquito saliva in acute liver failure, we employed a well-established model for the study of autoimmune hepatitis, acute experimental hepatitis induced by concanavalin A (Con A), and a model of hepatotoxicity induced by acetaminophen (APAP) commonly employed to study drug-induced liver injury. Our results demonstrate that the exposure of animals to A. aegypti mosquito bites reduces alanine aminotransferase (ALT) enzyme levels in both models and aspartate aminotransferase (AST) in the acute experimental hepatitis induced by Con A. In addition, the treatment with saliva was able to reduce the levels of the serum cytokines IFN-&gamma, IL-6 and IL-2, as well as the expression of hepatic IFN-&gamma in the in the model of acute experimental hepatitis induced by ConA as well as the serum cytokines TNF-, IL-6, IL-1, and IL-10 in the APAP-induced toxic hepatitis model. Animals injected with Con A presented an increase in the frequencies of NK cells and macrophages populations, and the exposure to the bites reduced this changes to levels close to that found in the control group. Likewise, mosquito exposure also reduced the populations of dendritic cells, macrophages and NKT cells that were increased in the group of animals injected with APAP. These data demonstrate that A. aegypti saliva is able to protect animals from the deleterious effects of the evaluated hepatitis, due to its ability to modulate the inflammatory response of the experimental animals. Future studies might characterize the molecules responsible for this biological activity, highlighting their potential use as an option for prevention and/or treatment of these conditions.

Foi realizada uma pesquisa com cirurgiões-dentistas (CDs) e auxiliares odontológicos (AOs) das redes pública e privada, no município de Ribeirão Preto,SP – Brasil, com os objetivos de: 1. avaliar a cobertura vacinal e a efetividade da vacinação contra a hepatite B; 2. verificar o uso de equipamentos de proteção individual (EPIs) na rotina de trabalho; 3. verificar a prevalência de marcadores sorológicos do HBV; 4. analisar possíveis associações entre marcadores sorológicos do HBV e alguns fatores de risco de infecção pelo vírus. A pesquisa contou com 338 participantes, de consultórios e clínicas odontológicas – 201 CDs(26 da rede pública e 175 da rede privada) e 137 AOs (23 da rede pública e 114 da rede privada). Foi aplicado um questionário individual para obter informações referentes a características dos participantes, vacinação contra a hepatite B e fatores de risco relacionados à infecção pelo HBV. Simultaneamente, coletou-se uma amostra de 8 ml de sangue para a pesquisa dos seguintes marcadores sorológicos do HBV: HBsAg, anti-HBc e anti-HBs. Todos os exames foram feitos, através de técnicas imunoenzimáticas, no Laboratório de Sorologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP. Estavam vacinados com três doses ou mais da vacina contra a hepatite B 80,6% dos CDs (80,8% da rede pública e 80,6% da rede privada) e 24,8% dos AOS(82,6% da rede pública e 13,2% da rede privada). A prevalência de anti-HBs entre os vacinados com três doses ou mais da vacina foi de 84,3% - 84,6% entre CDs e 82,8% entre AOs. A prevalência dos marcadores sorológicos do HBV ficou assim distribuída: HBsAg, 0,5% entre CDs, não encontrado entre AOs; anti-HBc, 9,5% entre CDs (IC 95%: 5,4% - 13,5%) e 2,9% entre AOs (IC 95%: 0,1% - 5,7%);anti-HBs, 78,1% entre CDs (IC 95%: 72,3% - 83,8%) e 29,9% entre AOs (IC 95%: 22,2 - 37,6%). Os EPIs mais utilizados pelos CDs eram as luvas, com percentual de 98,0%, e a máscara, com 96,5%, no atendimento de todos os pacientes. Os CDs da rede privada utilizavam os seguintes EPIs: luvas, 97,7%; máscara, 96,0%; óculos de proteção, 70,3%; avental, 55,4%; gorro 32,6%. Os CDs da rede pública usavam os seguintes EPIs: luvas e máscaras, 100,0%; avental, 88,5%; óculos de proteção, 65,4%; gorro, 30,8%. O EPI mais utilizado pelos AOs eram as luvas, com percentual de 97,1%. Os AOs da rede pública utilizavam: luvas, 100,0%; avental, 95,7%; máscara, 78,3%; óculos de proteção; 34,8%; gorro, 17,4%. Os AOs da rede privada utilizavam: luvas, 96,5%; máscara, 37,7%; avental, 28,1%; óculos de proteção, 11,4%; gorro, 10,5%. Dos AOs da rede privada, 3,5% referiram não usar nenhum EPI. O estudo mostrou que a prevalência dos marcadores sorológicos do HBV entre CDs e AOs é semelhante à da população de pacientes de Unidades de Saúde de Ribeirão Preto e que parte dos profissionais, especialmente os AOs, negligenciam a proteção pela imunização ativa e uso de EPIs. / A survey was carried out among dentists (D) and dental assistants (DA) of the public and the private sectors in the city of Ribeirão Preto, São Paulo, Brazil, in order to a) evaluate the vaccine coverage as well as the effectiveness of the vaccination against hepatitis B; b) check for the presence of serological markers of the hepatitis B virus(HBV)infection; assess the use of individual protection equipments (IPE). The survey,involving 338 participants working in dentist private offices or in dental clinics, comprised 201 D (26 of the public sector and 175 of the private sector) and 137 DA(23 of the public sector and 114 of private practices). Individual survey questionnaires were used to gather information regarding the participants, the vaccination against hepatitis B, and the risk factors related to the HBV infection. Blood samples (8 ml) were collected to assess the following serological markers for the HBV infections: HBsAg, Anti-HBc, and Anti-HBs. All essays were done with the immunoenzimatic technique by the Serological Laboratory of the Hospital das Clinicas of the University of São Paulo Medical School, at Ribeirão Preto. A higher proportion of the D compared to the DA were vaccinated with three or more doses of the hepatitis B: 80.6% of the D (80.8% of the public sector and 80.6% of the private sector) but only 24,8% of the DA (82.6% of the public sector and 13,2% of the private sector). Among those vaccinated with three or more doses 84.3% (84.6% for D and 82.8% for DA) presented positive tests for the anti-HBs marker. Considering the whole population evaluated, the occurrence of serological markers for HBV infection was distributed as follows: HBsAg, 0.5% in D and zero in DA; anti-HBc, 9.5% in D (95% CI: 5.4% to 13.5%) and 2.9% in DA (95% CI: 0.1% to 5.7%); and anti-HBs, 78.1% in D (95% CI: 72.3% to 83.8%) and 29.9% in DA (95% CI: 22.2% to 37.6%). Most dentists make use of some IPE when treating patients: 98.0% wore gloves and 96.5% face masks. There was little difference in use of IPE between dentists working in the private and the public sectors: for the former 97.7% wore gloves, 96.0% face masks, 70.3% protective eyewear, 55.4% protective uniform, and 32.6% caps; for the later, 100% wore gloves and face masks, 88.5% protective uniform, 65.4% protective eyewear, and 30.8% caps. A high percentage of the DA also wore IPEs, although the numbers were lower for those of the private sector. Among the former group 100% wore gloves, 95.7% protective uniform, 78.3% face masks, 34.8% protective eyewear, and 17.4% caps. The corresponding figures for the DA of the private dental offices and clinics were: 96.5% wore gloves, 37.7% face masks, 28.1% protective uniform, 11.4% protective eyewear, and 10.5% caps. A small percentage (3.5%) of the DA working in the private sector did not report the use of any IPE. The study showed that the occurrence of serological markers for infection with HBV in dental professionals is similar to that of the population as a whole, and that part of the professionals, especially the DAs, neglect to secure protection by active immunization and use of IPEs.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Zanini de Oliveira e Silva.pdf: 465089 bytes, checksum: 7b5132fe9e6131d6a845e0aeaedb42a6 (MD5) Previous issue date: 2007-07-06 / Hepatitis C virus (HCV), described in 1989, belongs to the Hepacivirus genus and the Flaviviridae family and possess a genomic RNA contend 9,600 nucleotides approximately. Due to its high genetic variability was classified in genotypes (1-6) and subtypes (a, b, c etc.). The genotypes 1a, 1b, 2a, 2b and 3a, have cosmopolitan distribution; whereas in Brazil, genotypes 1 and 3 are the most prevalent. The incubation period for acute hepatitis C varies around 6 to 10 weeks and approximately 80% of the acute infections are asymptomatic. Between 10 and 20 years, about 20% of the chronic infections evolve for cirrhosis and these can evolve for death due to complications. In accordance with the World Organization of Health, 3% of the world-wide population (about 180 million individuals) is infected for the HCV. Hepatitis C can be diagnosed by means of serological tests and analyses-based techniques of Molecular Biology. The assay more commonly used for detention of antibodies anti-HCV is ELISA. This test consists of antigens fixed in the wells of a microtiter plate. Specific antibodies against these antigens will adhere to the plate and will be detected by antibodies anti-human immunoglobulin colorimetric markers. This study aims the confection of ELISA using a multiepitope protein (MEHCV). The samples used in the assays are from blood banks. Tests with nickel resin-purified MEHCV and column-purified MEHCV (desalting and non-desalting) had been carried through. The tests aimed standardize the concentration of the protein for well and the dilutions of the serum; to evaluate unspecific reactions through tests with positive serum for other infections (positive anti- HBV and HAV) and with negative serum; and to compare ELISA in house with commercial ELISA. In accordance with the standardization results tests, how much bigger the protein pureness degree biggest was the protein concentration necessary in the microplates sensitization to evaluate possible crossed-reactions. The tests to evaluate unspecific reactions using the resinpurified MEHCV had presented higher sensitivity (92.86%) and specificity (82.89%) than the column-purified MEHCV (Sensitivity = 80%; Specificity = 47.5%). In contrast of ELISA in house, commercial ELISA only presented a result false-positive for sample 5 (anti-HBV positive). To evaluate the interference of other proteins, it was carried through, an assay using microplates sensitized with unspecific proteins. These results suggest that MEHCV protein don t possess yet the ideal pureness degree to be used as antigen and that possibly, the false-positive reactions occurred had been caused by unspecific proteins present with the recombinant protein MEHCV. / O vírus da hepatite C (HCV), descrito em 1989, pertence ao gênero Hepacivirus e à família Flaviviridae e possui um RNA genômico contendo aproximadamente 9.600 nucleotídeos. Devido à sua alta variabilidade genética foi classificado em genótipos (1-6) e subtipos (a, b, c etc.). Os genótipos 1a, 1b, 2a, 2b e 3a, têm distribuição cosmopolita; enquanto que no Brasil, os genótipos 1 e 3 são os mais prevalentes. O período de incubação para hepatite C aguda varia em torno de 6 a 10 semanas e aproximadamente 80% das infecções agudas são assintomáticas. Entre 10 e 20 anos, cerca de 20% das infecções crônicas evoluem para cirrose e estas podem evoluir para óbito devido a complicações. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, 3% da população mundial, cerca de 180 milhões de indivíduos, está infectada pelo HCV. A hepatite C pode ser diagnosticada laboratorialmente por meio de testes sorológicos e por meio de análises baseadas em técnicas de biologia molecular. O ensaio mais comumente utilizado para detecção de anticorpos anti-HCV é o ELISA. Esse teste consiste de antígenos virais que são fixados nas cavidades de uma placa de microtitulação. Anticorpos específicos contra esses antígenos irão se aderir à placa e serão detectados por anticorpos anti-imunoglobulina humana contendo marcadores colorimétricos. Esse estudo tem como objetivo a confecção de um ELISA utilizando uma proteína multiepítopo (MEHCV). As amostras utilizadas nos ensaios vieram de bancos de sangue. Foram realizados testes com MEHCV purificada em resina e em coluna de níquel (dessalinizada e não-dessalinizada). Os testes consistiam em padronizar a concentração da proteína por cavidade e as diluições dos soros; avaliar reações inespecíficas através de testes com soros positivos para outras infecções (anti-HBV e HAV positivos) e com soros negativos; e comparar o ELISA in house com um ELISA comercial. De acordo com os resultados dos testes de padronização, quanto maior o grau de pureza da proteína, maior foi a concentração de proteína necessária na sensibilização das microplacas para avaliar possíveis reações cruzadas. Os testes para avaliar reações inespecíficas utilizando a proteína purificada em coluna apresentaram sensibilidade (92,86%) e especificidade (82,89%) superior aos realizados com a proteína purificada em coluna (Sensibilidade = 80%; Especificidade = 47,5%). Ao contrário do ELISA in house, o ELISA comercial apresentou somente um resultado falso-positivo para a amostra 5 (anti-HBV positiva). Para avaliar a interferência de outras proteínas, foi realizado ainda, um ensaio utilizando microplacas sensibilizadas com proteínas inespecíficas. Esses resultados sugerem que a proteína MEHCV ainda não possui o grau de pureza ideal para ser utilizada como antígeno e que possivelmente, as reações falso-positivas ocorridas foram causadas por proteínas inespecíficas presente junto à proteína recombinante MEHCV.

A hepatite C, causada pelo vírus da hepatite C (HCV), afeta milhões de pessoas no mundo. A transmissão do HCV é semelhante ao HIV, justificando a alta taxa de prevalência da coinfecção. Pacientes coinfectados HCV/HIV apresentam maior taxa de progressão da fibrose hepática e da mortalidade, em comparação aos pacientes monoinfectados com HCV. Assim, o estudo de genes e/ou moléculas que controlam a resposta imune é pertinente. No presente estudo, avaliamos o papel do antígeno leucocitário humano G (HLA-G), molécula com reconhecida atividade imunomoduladora, capaz de inibir a ativação das células T e a atividade citotóxica das células Natural Killers (NK) e linfócitos T CD8+, além de induzir a formação células T reguladoras. Nós investigamos 216 pacientes monoinfectados pelo HCV, 135 pacientes coinfectados HCV-HIV e 152 indivíduos não infectados. A variabilidade do gene HLA-G foi avaliada por sequenciamento de Sanger e a expressão hepática da molécula por imunoistoquímica. A expressão de HLA-G foi observada somente no tecido hepático dos pacientes, principalmente nos hepatócitos. O aumento de expressão de HLA-G foi associado com avanço da fibrose e da atividade necroinflamatória no fígado de ambos os grupos de pacientes. Idade igual ou superior a 40 anos e a cor de pele não-branca também foram associados com aumento da expressão hepática da molécula nos pacientes HCV. Outros fatores do hospedeiro analisados como gênero e genótipo do HCV não foram associados com o nível de expressão de HLA-G no fígado. A frequência do alelo HLA-G*01:01:01:01 estava aumentada nos pacientes HCV e do alelo G*01:05N diminuída nos pacientes coinfectados HCV-HIV, porém, não houveram associações significantes entre a variabilidade genética de HLA-G e a expressão hepática de HLA-G. O presente estudo contribui para a ampliar os conhecimentos acerca da participação da molécula HLA-G na hepatite C crônica, associado ou não com infecção pelo HIV. / Hepatitis C, caused by the hepatitis C virus (HCV), affects millions of people worldwide. The transmission of HCV is similar to HIV, which explains the high prevalence of coinfection. HCV-HIV coinfected patients have higher rate of liver fibrosis progression and mortality when compared to HCV monoinfected patients. Thus, the study of genes and/or molecules that control the immune response is relevant. In the present study, we evaluated the role of human leukocyte antigen G (HLA-G), a molecule known by its immunomodulatory activity, which is capable to inhibit T cell activation and cytotoxic activity of natural killer (NK) cells and CD8+ T cells, in addition to inducing the formation of regulatory T cells. We studied 216 HCV patients, 135 HIV-HCV coinfected patients and 152 uninfected individual. The variability of the HLA-G gene was evaluated by Sanger sequencing and the hepatic expression of the molecule by immunohistochemistry. The HLA-G expression was observed only in liver tissue of patients, mainly in hepatocytes. The increased HLA-G expression was associated with increased liver fibrosis and necroinflammatory activity in both groups of patients. The age greater than or equal to 40 years and the non-white skin color were also associated with increased hepatic expression of the molecule in the HCV patients. Other host factors analyzed as gender and HCV genotype were not associated with the level of HLA-G expression in the liver. The frequency of HLA-G*01:01:01:01 allele was increased in HCV patients and G*01:05N decreased in HCV-HIV coinfected patients, however, there was no significant association between the genetic variability of HLA-G and HLA-G liver expression. The present study contributes to expand the knowledge regarding the participation of HLA-G in chronic C hepatitis, associated or not with the HIV infection.

INTRODUÇÃO: A pesquisa de fatores que possam reconhecer precocemente quais serão os pacientes portadores de HAI com boa evolução ou aqueles que serão resistentes ao tratamento, levaria a um melhor planejamento da terapia. OBJETIVOS: Determinar se fatores laboratoriais pré-tratamento, e o tempo necessário para atingir remissão clínico-laboratorial são preditivos de remissão histológica ou melhora do grau arquitetural na HAI tipo1 em crianças. MÉTODOS: Estudo retrospectivo com 50 crianças portadoras de hepatite autoimune tipo 1 acompanhadas na Unidade de Hepatologia Pediátrica do Instituto da Crianças HC- FMUSP, no período de 1992 a 2012. Realizado revisão de 93 biópsias hepáticas às cegas por um único patologista. RESULTADOS: Foram selecionadas 40 crianças segundo critérios de inclusão. Na biópsia inicial a atividade inflamatória grau 4 e cirrose eram predominantes (31 pacientes-77,5%), sendo que na biópsia de controle, 17 crianças atingiram remissão histológica e 11 melhora do grau arquitetural. Não encontramos valores estatísticos dos fatores laboratoriais ao diagnóstico em relação à remissão histológica. Já em relação à arquitetura, os exames bilirrubina total (p=0,02) e direta (p=0,04) e o tempo de Protrombina (p=0,07) foram relacionados à melhora do grau arquitetural quando apresentavam valores com menor alteração. O tempo necessário para atingir remissão clínico-laboratorial não apresentou correlação com a melhora do padrão inflamatório ou arquitetural. O tratamento foi suspenso em 14 crianças, com taxa de recaída de 50%, em que a maioria ainda apresentava atividade inflamatória na histologia. O tempo de tratamento foi maior nas crianças que evoluíram com remissão sustentada depois de retirada da medicação. CONCLUSÕES: Observou-se em nosso estudo que os fatores laboratoriais ao diagnóstico, independente de seu grau de alteração, não podem predizer quais as crianças que evoluirão para remissão histológica. As crianças com menor grau de alteração de bilirrubina total e direta e tempo de Protrombina, são as que evoluíram com reversão da fibrose hepática. O tempo necessário para atingir a remissão clínico-laboratorial não foi fator preditivo de melhora histológica. Recaída depois da suspensão do tratamento foi associada a presença de atividade inflamatória, e os pacientes em remissão sustentada são os com maior tempo de tratamento / INTRODUCTION: The study of factors that can recognize, earlier, which patients will be carrying autoimmune hepatitis presenting good outcome or those who will be resistant to treatment, would lead to a much better therapy planning. This study aims to: determine whether pretreatment laboratory factors and the time required for achieving clinical and laboratory remission are predictors of histological remission or improvement of the architectural degree in AIH type 1 in children. METHODS: A retrospective study of 50 children with autoimmune hepatitis type 1 accompanied by the Pediatric Hepatology Unit of the Institute of Children HC- FMUSP between 1992 and 2012. A review of 93 liver biopsies was randomly conducted by a single pathologist. RESULTS: Forty children were selected according to criteria of inclusion. In the initial biopsy the inflammatory activity level 4 and cirrhosis were predominant (31 patients-77, 5%), in the control biopsy 17 patients achieved histological remission and 11 presented improvement in the architectural degree. We found no statistical values of the diagnostic laboratory factors in relation to histological remission. Regarding the architecture, the exams total bilirubin (p = 0.02) and direct bilirubin (p = 0.04) and prothrombin time (p = 0.07) were related with the improvement of the architectural level when presented the values with lower changes. The time required for achieving clinical and laboratory remission presented no correlation with the improvement of the inflammatory or architectural pattern. The treatment was suspended in 14 children with relapse rate of 50%, in most of them the inflammatory activity still present on histology. The length of treatment was longer in children who developed sustained remission after the withdrawal of medication. CONCLUSIONS: We observed in our study that the laboratory factors for the diagnosis, regardless their degree of alteration, can not predict which children will progress to histological remission. The children who presented lower degrees of change in total and direct bilirubin and prothrombin time are those who have progressed to reversal of liver fibrosis. The time required for achieving clinical and laboratory remission was not a predictive factor for histological improvement. Relapse after discontinuation of treatment was associated to the presence of inflammatory activity, and patients with sustained remission are the ones who had longer period of treatment

O polimorfismo de IL28B foi descrito como fator importante na patogênese de infecções causadas por alguns vírus. O objetivo desta pesquisa foi avaliar se polimorfismos (SNP rs8099917 IL28B e SNP rs12979860) foram associados na presença de HAM/TSP. Métodos: O estudo incluiu 188 pacientes do Instituto de Infectologia \"Emilio Ribas\" de São Paulo, divididos em três grupos: 117 Indivíduos infectados pelo HTLV-1 (49 assintomáticos e 68 com HAM TSP), 47 Pacientes monoinfectados pelo vírus da Hepatite C (HCV) e 24 coinfectados pelo HTLV- 1 e HCV. Amostras de sangue foram coletadas, e o PBMC separado através da centrifugação por gradiente de densidade Ficoll-Hypaque. O DNA foi extraído usando um kit comercial, e armazenado a - 80 ° C e, a carga proviral do HTLV-1 foi quantificada. Os SNPs da IL28B na região rs8099917 e rs12979860 foram analisados em todos os grupos por PCR StepOnePlus. Resultados: A análise estatística usando modelo multivariado que incluiu as variáveis: gênero, idade, e carga proviral do HTLV-1, mostrando que o polimorfismo IL28B SNP rs12979860 não foi associado com a HAM/TSP. Em contraste, o SNP rs8099917 GG alelo foi associada com HAM/TSP, quando comprado aos indivíduos assintomáticos (OR = 6,25; IC95% = 1,22- 32,00). Conclusão: Pessoas com SNP rs8099917 genótipo GG podem apresentar uma resposta imune distinta contra a infecção pelo HTLV-1. Assim, parece razoável sugerir que uma pesquisa de polimorfismos IL28BSNP rs8099917 deve ser realizada em todos os indivíduos HTLV-1, a fim de monitorar o risco de desenvolvimento da doença. / The polymorphism of IL28B was described as important in the pathogenesis of infections caused by some viruses. The aim of this research was to evaluate whether IL28B gene polymorphisms (SNP rs8099917 and SNP rs12979860) were associated with HAM/TSP. Methods: The study included 188 patients of the Institute of Infectious Diseases \"Emilio Ribas\" of São Paulo, they formed three groups: 117 subjects infected with HTLV-1(49 asymptomatic and 68 with HAM TSP), 47 chronic HCV monoinfected patients and 24 co-infected with HTLV-1 and HCV. Blood samples were collected and PBMC separated by density gradient centrifugation in Ficoll-Hypaque. DNA was extracted using a commercial kit, and the DNA was stored at -80 ° C for later analysis. Thereafter, the proviral load of individuals with HTLV-1 was quantified SNPs rs12979860 and rs8099917 in the region of IL28B were analyzed in all groups by PCR StepOnePlus system in real time. Results: A multivariate model analysis, including gender, age, and HTLV-1 DNA proviral load, showed that IL28B polymorphism SNP rs12979860 was not independently associated with HAM/TSP outcome. In contrast, the SNP rs8099917 allele GG was independently associated with HAM/TSP outcome (OR=6.25; IC95%=1.22- 32.00). Conclusion: Persons with SNP rs8099917 genotype GG may present a distinct immune response against HTLV-1 infection. So, it seems reasonable to suggest that a search for IL28B polymorphisms should be performed for all HTLV-1-infected subjects in order to monitor their risk for disease development; however, since this is the first description of this finding in the literature, we should first replicate this study with more HTLV-1-infected persons to strengthen the evidence already provided by our results.

As taxas de resposta viral ao tratamento com Interferon- associado com Ribavirina ainda não estão bem definidas. Muitos estudos associam vários fatores virais e do hospedeiro, tais como a idade, sexo, peso, etnia, nível de enzimas hepáticas, estágio de fibrose, genótipo do HCV com os níveis de RNA viral. Outros estudos associam as células CD8+ específicas para epítopos do HCV com o controle da viremia. O objetivo desse trabalho foi verificar se há aumento na pressão seletiva contra o vírus nos pacientes em tratamento com Interferon- associado à Ribavirina respondedores em comparação com os pacientes não respondedores e associar esse aumento com a ação antiviral do tratamento e/ou com o aumento da resposta imune devido à ação imunomoduladora do Interferon-, utilizando-se modelos de máxima verossimilhança, de cálculo da razão dN/dS e realizando o mapeamento dos epítopos das proteínas NS5A. Nossos resultados demonstram que usando modelos par a par não foi detectado evidência de seleção positiva, entretanto utilizando modelos de máxima verossimilhança nós observamos evidência no grupo que não responde a terapia. O mapeamento dos epítopos revelou que o epítopo VLSDFKTWL estava associado com a resposta efetiva do tratamento com suporte estatístico. Estes resultados indicam que a resposta imunológica aumenta durante o período de tratamento, auxiliando na eliminação do vírus. Além das análises, foi desenvolvida uma ferramenta de mapeamento automático dos epítopos do HCV e análise de seleção natural aplicando modelos de máxima verossimilhança / The reason for low rates of sustained viral response (SVR) in HCV patients remains unknown. Several studies suggest that viral load is closely associated to viral and host factors, such age, sex, body weight, transaminase levels and HCV genotype. Moreover, an strong CD8+ T-cell immunity in acute resolving hepatitis C is matched by strong and sustained CD4+ T-cell proliferation to multiple recombinant structural and non-structural viral proteins is responsible for the control of viraemia in HCV infection. Here, we investigate the differences in CD8 epitopes frequencies from Los Alamos database between groups of patients that showed distinct response to pegylated alpha interpheron with ribavirin therapy, and test for evidence of natural selection on virus in treatment failure group, using five maximum likelihood evolutionary models. Our results indicated no evidence of positive selection by using pairwise models, however we identify evidence of positive selection in non responder group by applying maximum likelihood models. The epitope mapping showed that the epitope VLSDFKTWL was associated with efective therapy outcome, with statistical support. Those results suggest that the immune response increase during the treatment period, allowing the virus clearance. We also developed a tool for automatic mapping of epitopes of HCV that tests for evidence of natural selection by applying maximum likelihood models