Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-18T12:59:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoFuncaoTimica.pdf: 1549137 bytes, checksum: b42257328d96b7bfbaca2684aaff57e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-11-07T12:47:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoFuncaoTimica.pdf: 1549137 bytes, checksum: b42257328d96b7bfbaca2684aaff57e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T12:47:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoFuncaoTimica.pdf: 1549137 bytes, checksum: b42257328d96b7bfbaca2684aaff57e6 (MD5) Previous issue date: 2017 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dos portadores de HTLV-1, 90% permanecem assintomáticos, 2-3% desenvolvem Leucemia Linfoma de Células T do Adulto (LLcTA) e 0,25-4% desenvolvem Paraparesia Espástica Tropical/ Mielopatia Associada ao HTLV (PET/MAH). Na PET/MAH, são encontrados infiltrados de células T CD8+ específicas na medula que destroem as células T CD4+ infectadas, levando a uma resposta imunológica ativada crônica. As células T recém-emigradas do timo (ou células T naïve) possuem círculos excisados pelo rearranjo do gene do receptor de células T (TREC) que não duplicam na proliferação celular, sendo um bom indicador para quantificar o número de células T naïve e assim avaliar a função tímica. O presente estudo almejou Verificar a função tímica de pacientes portadores da infecção pelo vírus HTLV-1 através da quantificação do número de TREC em células mononucleares do sangue periférico. Trata-se de um estudo transversal analítico, realizado com 39 pacientes, acima de 18 anos, divididos em dois grupos: com PET/MAH (PET) e sem PET/MAH (NPET). Foi realizada avaliação clínica e fisioterapêutica, coleta de sangue, separação das células linfomononucleares, extração de DNA e RNA, curva absoluta de TREC, quantificação de DNA e RNA, detecção e quantificação de partículas TREC, síntese de cDNA, expressão gênica da citocina IL-7 e análise estatística com os testes de Mann-Whitney e correlação de Spearman, com o valor de p ≤ 0,05 como nível de significância. Dos 39 pacientes estudados, dois foram excluídos do estudo por apresentarem doença autoimune. Quanto à comparação entre grupos da quantificação de TREC: há diferença entre o grupo PET e NPET (p = 0,01), nos pacientes com idade ≤59 anos entre os grupos PET e NPET (p = 0,04), nas pacientes do sexo feminino entre o grupo PET e NPET (p = 0,003) e o grupo com cadeira de rodas e sem cadeira de rodas (p = 0,05). Já com relação à comparação da expressão gênica de IL-7 entre grupos: no grupo NPET há diferença entre o grupo ≤59 anos e o ≥60 anos (p = 0,02), no sexo feminino há diferença entre o grupo PET e NPET (p = 0,04). A função tímica mostrou-se prejudicada em pacientes portadores de HTLV-1 com PET/MAH comparados àqueles sem PET/MAH, pois houve um prejuízo na produção de células T naïve nessa população, mostrada através das diferenças entre variáveis tanto no grupo PET e NPET com relação à quantificação de TREC. Apesar de ainda não estar clara a importância deste comprometimento no desencadeamento e/ou evolução da PET/MAH, infere-se que a redução da produção de células T naïve pode alterar a resposta imunológica nesses pacientes, repercutindo diretamente no quadro clínico dos mesmos. / In HTLV-1 infeccions 90% of carriers remain asymptomatic, 2-3% develop Adult T-cell leukemia/lymphoma (ATL) and 0.25-4% develop HTLV-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). In HAM/TSP, specific CD8 + T cell infiltrates are found in the marrow that destroy infected CD4 + T cells, leading to a chronic activated immune response. Recently emigrated T cells (or naïve T cells) have excised circles by the rearrangement of T cell receptor (TREC) genes that do not double in cell proliferation, being a good indicator to quantify the number of naïve T cells and thus evaluate the thymic function. This study aimed to verify the thymic function of patients with HTLV-1 infection by quantifying the number of TREC in peripheral blood mononuclear cells. This is a cross-sectional, analytical study of 39 patients over 18 years of age, divided into two groups: HAM/TSP (PET) and without HAM/TSP (NPET). We performed a clinical and physiotherapeutic evaluation, blood collection, lymphomononuclear cell separation, DNA and RNA extraction, absolute TREC curve, DNA and RNA quantification, TREC particle detection and quantification, cDNA synthesis, cytokine IL-7 and statistical analysis with the Mann-Whitney tests and Spearman's correlation, with p ≤ 0.05 as significance level. Of the 39 patients studied, two were excluded from the study because they presented autoimmune disease. Regarding the comparison between groups of TREC quantification: there was a difference between the PET and NPET groups (p = 0.01), in patients with age ≤59 years between the PET and NPET groups (p = 0.04), in the (p = 0.003) and the group with a wheelchair and without a wheelchair (p = 0.05). As for the comparison of IL-7 gene expression between groups: in the NPET group there was a difference between the group ≤59 years and the ≥60 years (p = 0.02), in the female there was a difference between the PET and NPET groups (p = 0.04). Thymic function was impaired in patients with HTLV-1 with HAM/TSP compared to those without HAM/TSP, as there was a loss in naïve T cell production in this population, shown by the differences between variables in both PET and NPET groups With respect to the quantification of TREC. Although the importance of this compromise in the triggering and / or evolution of HAM/TSP is not yet clear, it is inferred that the reduction of naïve T cell production can alter the immunological response in these patients, directly affecting their clinical picture.

Made available in DSpace on 2016-08-19T18:15:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VERONICA GUIMARAES DE SOUZA.pdf: 3740222 bytes, checksum: bbd94374950c3edeaa9e9522c0e561fb (MD5) Previous issue date: 2009-11-18 / INDTRODUCTION: HTLV are retroviruses with tropism for lymphocytes T, type 1 (HTLV-1) is endemic in the Caribbean region, Japan, South America, and parts of Africa; type 2 in some American native groups, rare in Africa, and the Europe associated with use of injectable drugs. In Brazil one esteem 2,5 million infected people in all the states where it was searched, with some prevalence. OBJECTIVE: This study had the objective identify the prevalence of HTLV-1 and 2 in the selection of pregnant taken care of in the prenatal one of three public services. METHODOLOGY Transversal study, carried through between 11/02 and 03/12/2008, with 2044 pregnant in three public services of prenatal, São Luis/MA. Patients had been guided on the study and enclosed after signature of the TCLE and filling of the questionnaire. They had participated pregnant between 18 and 45 years, without history of psychiatric illnesses, high blood pressure, kidney pathology, diabetes and others that would characterize specialized necessity of prenatal. The sample was calculated in 2041, to be able of the test of 95%, absolute error of 5%, was used program Stata 9,0, carried through test qui squared and accepted p< 0,05 (95%) as limit for significance. In the selection collection of digital blood in processed paper was used filter and in the laboratory of NUPAD - MG, to be submitted to ELISA test. The pregnant that had presented resulted modified had been contacted for new collection of peripheral vein blood for confirmatory tests western blot and PCR.RESULTS Of the 2044 evaluated pregnant, 7 pregnant had presented resulted modified, 01 indeterminate and 06 positives, showing prevalence of 0.34%. CONCLUSION This research MOSTROU that prevalence is higher then on blood donators and is necessary ampler studies and that they contemplate other extracts of the population to identify the reality of the presence of the virus in the State of the Maranhão. / INTRODUÇÃO: O HTLV é um retrovírus com tropismo pelos linfócitos T; o tipo 1 é endêmico na região do Caribe, Japão, América do Sul, e partes da África; o tipo 2 em alguns grupos nativos americanos e em estudos em doadores de sangue, raramente na África, e na Europa associado com uso de drogas injetáveis. No Brasil estima-se 2,5 milhões de pessoas infectadas em todos os Estados onde foi pesquisado, com prevalências variáveis. No Maranhão, a prevalência encontrada em doadores de sangue foi de 10/1000. OBJETIVO: Este estudo pretendeu identificar a prevalência do HTLV-1 e 2 na triagem de gestantes atendidas no pré-natal de três serviços públicos. METODOLOGIA: Foi realizado estudo transversal, entre 11/02/08 e 03/12/2008, com 2044 gestantes em três serviços públicos de pré-natal, São Luis/MA. As pacientes foram orientadas sobre o estudo e incluídas após assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido) e preenchimento do questionário. Participaram gestantes consideradas de baixo risco gestacional entre 18 e 45 anos, sem história de doenças psiquiátricas, hipertensão arterial, nefropatia, diabetes e outros que caracterizariam necessidade de pré-natal especializado. A amostra foi calculada em 2041 gestantes, poder do teste de 95%, erro absoluto de 5%. Foi usado programa Stata 9.0, realizado teste qui quadrado e aceito p<0,05 (95%) como limite para significância. Na triagem usou-se coleta de sangue digital em papel filtro e processada no laboratório do NUPAD - MG, para ser submetida à técnica de ensaio imunoenzimático, específica para papel de filtro ( Biorad, Estados Unidos). As gestantes que apresentaram resultado alterado foram contatadas para nova coleta de sangue venoso periférico para testes confirmatórios Western blot e PCR. RESULTADOS: Das 2044 gestantes avaliadas, 7 gestantes apresentaram resultados alterados na fase de triagem, 01 indeterminado e 06 positivos. Posteriormente, foram submetidas aos testes confirmatórios, onde todas as 07 amostras foram positivas, mostrando prevalência de 0.34%, sendo 03 casos tipo HTLV 2 e 04 casos HTLV 1. CONCLUSÃO: Este estudo revelou que o vírus HTLV está presente na população estudada em prevalência mais alta que em doadores de sangue. Fazem-se necessário estudos mais amplos e que contemplem outros extratos da população para se identificar a realidade da presença do vírus no Estado do Maranhão, a fim de prevenir sua disseminação.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-11T18:23:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PadraoRespostaImunologica.pdf: 1375375 bytes, checksum: 23ce5566cb35397ecbe03996334dc56f (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-25T18:50:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PadraoRespostaImunologica.pdf: 1375375 bytes, checksum: 23ce5566cb35397ecbe03996334dc56f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-25T18:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PadraoRespostaImunologica.pdf: 1375375 bytes, checksum: 23ce5566cb35397ecbe03996334dc56f (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O vírus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) está associado principalmente a leucemia/linfoma de células T do adulto (LLcTA) e a paraparesia espástica tropical/mielopatia associado ao HTLV-1 (PET/MAH). A PET/MAH é uma doença inflamatória do sistema nervoso central (SNC), porém o mecanismo pelo qual o HTLV-1 induz a PET/MAH ainda não está totalmente esclarecido. Acredita-se que a interação vírus-hospedeiro pode levar ao desequilíbrio na resposta imunológica, com produção aumentada de citocinas inflamatórias, podendo estar relacionada ao desenvolvimento da PET/MAH. Assim, este trabalho visa analisar a resposta imunológica periférica dos pacientes portadores do HTLV-1 e correlacioná-la com as manifestações neurológicas funcionais dos pacientes com PET/MAH. Foram incluídos 69 pacientes neste estudo, sendo 43 portadores do HTLV-1 sem PET/MAH e 26 portadores do HTLV-1 com PET/MAH. Nos pacientes com PET/MAH as manifestações neurológicas funcionais avaliadas foram: força muscular, tônus muscular, equilíbrio e grau de auxílio da marcha. Cinco (05) mL de sangue foram coletados em tubo com EDTA de cada paciente e as células linfomononucleares foram separadas utilizando Ficoll-Paque. O RNA total foi extraído de 106 células utilizando o reagente Trizol. Após quantificação do RNA, 1 μg do mRNA foi submetido a transcrição reversa para obtenção do cDNA. A expressão gênica relativa das citocinas IFN-, TNF-, IL-4, IL-10 e TGF- foram realizadas através da PCR em tempo real utilizando o StepOnePlus (Applied Biosystem) com o reagente SybrGreen (Applied Biosystem). Para o cálculo da expressão gênica foi realizada através da fórmula 2-CT, onde CT é CTgene – CTgene constitutivo, sendo os genes constitutivos utilizados o GAPDH e β-actina. Os pacientes com e sem PET/MAH apresentaram predomínio de expressão gênica do perfil Th1, principalmente de IFN-. Foi observado também que nos pacientes com PET/MAH houve expressão aumentada de TNF-. O perfil Th2 (IL-4) apresentou-se diminuído, principalmente nos pacientes com PET/MAH. Quanto à resposta antiinflamatória, a expressão de IL-10 se mostrou prejudicada nos pacientes com PET/MAH e a expressão de TGF- inicialmente se mostrou elevada em ambos os grupos. Após análises da razão entre TGF-IL-10 pode-se observar que a expressão de TGF- se manteve quase que equiparada a expressão de IL-10, sugerindo a sua participação não como citocina antiinflamatória, mas como possível ação de reparação tecidual. O perfil inflamatório associou-se positivamente com o grau de auxílio na marcha e o equilíbrio, apresentando resultados significantes somente para a expressão de IFN-. Os pacientes infectados pelo HTLV-1 que desenvolvem PET/MAH apresentam aumento da resposta Th1 em relação aos pacientes que não desenvolveram PET/MAH, e esse aumento de expressão de IFN- está relacionado com o desenvolvimento e progressão da doença. / Human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) is associated with adult T-cell leukemia/lymphoma (ATL) and HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). HAM/TSP is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS); however, the mechanism by which HTLV-1 induces HAM/TSP is not yet clear. The virus–host interaction may provoke changes in the immunological response, such as the enhanced production of inflammatory cytokines, which are implicated in the pathogenesis of HAM/TSP. This work aimed to analyze the peripheral immune response of patients infected with HTLV-1 and correlate it with functional neurological manifestations in patients with HAM/TSP. In the current study, 69 HTLV-1 infected patients were studied. 26 of them developed HAM/TSP and 43 didn’t develop HAM/TSP. In patients with HAM/TSP was evaluated the functional neurological manifestations like muscle strength, muscle tone, balance and walking aid. Five mL peripheral blood was collected into a tube with EDTA and lymphomononuclear cells were separated on a Ficoll-PaqueTM Plus density gradient (GE Healthcare). Total RNA was extracted from 106 cells with Trizol reagent. After RNA quantification, 1 μg of total RNA was submitted to reverse transcription for the generation of cDNA using the Superscript III kit (Invitrogen). IFN-, TNF-, IL-4, IL-10 and TGF- gene expression was measured quantitatively with the StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystem) using SYBR Green reagent (Applied Biosystem). The amount of mRNA in the sample was expressed as the relative amount to the GAPDH and β-actin genes, according to the formula 2-Ct, where Ct is Ctgene – Cthousekeeping gene. The gene expression showed higher expression of Th1 cytokine in patients with and without HAM/TSP, principally IFN-. In HAM/TSP patients also showed higher TNF- expression. The gene expression showed lower expression of Th2 cytokine in patients with HAM/TSP. As regards the anti-inflammatory response, gene expression of IL-10 showed impaired in patients with HAM/TSP and expression of TGF- initially showed higher in both groups. After ratio analysis between TGF-andIL it was observed that the expression of TGF-wasequivalent to the expression of IL-10, suggesting its involvement as a non-inflammatory cytokine, but as possible repair action tissue. The inflammatory profile was positively associated with the walking aid and balance, showing significant results only for the expression of IFN-. The patients infected with HTLV-1 who developed HAM/TSP showed increased Th1 response compared to patients who did not develop HAM/TSP, and this increased expression of IFN- is related to the development and progression of the disease.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-02T18:47:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMultivariadaCaracteristicas.pdf: 5198916 bytes, checksum: 0ce8e3192cf89dfe1d89945906922fa2 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-10-03T13:26:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMultivariadaCaracteristicas.pdf: 5198916 bytes, checksum: 0ce8e3192cf89dfe1d89945906922fa2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T13:26:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMultivariadaCaracteristicas.pdf: 5198916 bytes, checksum: 0ce8e3192cf89dfe1d89945906922fa2 (MD5) Previous issue date: 2017 / A Paraparesia Espástica Tropical/Mielopatia associada ao Vírus Linfotrópico de Células T Humanas Tipo 1 (PET/MAH) é uma condição debilitante causada pela inflamação do tecido nervoso medular, por ação do HTLV-1. Neste trabalho objetivou-se avaliar a classificação de indivíduos infectados pelo vírus e propor um modelo de predição clínica para a ocorrência de PET/MAH. Foi utilizado um banco de dados composto de 63 indivíduos infectados, sendo 23 com diagnóstico de PET/MAH pelos critérios da OMS, e variáveis preditoras funcionais (variáveis ordinais), níveis de expressão gênica (variáveis contínuas) e a variável demográfica sexo. Em um primeiro momento uma técnica de análise de componentes principais mista foi empregada, seguida de análise de conglomerados hierárquica, para investigar a associação dos indivíduos em grupos, de forma não supervisionada, e comparar com a classificação definida pelos profissionais clínicos. Em um segundo momento, foram derivados modelos de predição diagnóstica com base em regressão logística binária penalizada, a qual é adequada nos contextos de tamanho amostral reduzido. A análise não supervisionada mostrou que os pacientes se organizavam em três grupos, sendo um grupo de pacientes com PET/MAH, um grupo de pacientes sem PET/MAH e um grupo intermediário, que comporta indivíduos com e sem a doença. Na modelagem estatística foram derivados dois modelos, um com critério de penalização 0,032 e outro com critério 0,1, mais extremo, sendo ambos avaliados por validação interna usando validação cruzada de 10 vezes. As variáveis que compuseram os modelos finais foram: grau de alteração na marcha, escore de Tinetti, tônus do músculo adutor direito e esquerdo e tônus do tríceps sural esquerdo. O uso de métodos estatísticos de predição pode ser útil como ferramenta de apoio à decisão diagnóstica de PET/MAH, especialmente em contextos de recursos limitados. / Human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1)- associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) is a debilitating condition resulting from inflammation of the nerve tissue of the spinal cord caused by the action of HTLV-1. The aim of the present study was to evaluate the classification of individuals infected with HTLV-1 and propose a clinical prediction model for the occurrence of HAM/TSP. A database composed of 63 infected individuals was used, 23 of whom were diagnosed with HAM/TSP using the criteria recommended by the World Health Organization. Functional predictors (ordinal variables), gene expression levels (continuous variables) and sex (demographic variable) were also used. A mixed principal component analysis was employed, followed by hierarchical cluster analysis to determine the allocation of individuals into groups in an unsupervised fashion and compare the results to the classifications defined by clinicians. Diagnostic prediction models were then derived based on penalized binary logistic regression, which is suitable when the sample size is small. The unsupervised analysis showed that the patients were arranged into three groups: patients with HAM/TSP, patients without HAM/TSP and an intermediate group composed of individuals with and without the disease. Two models were derived from the statistical modeling – one with a penalization criterion of 0.032 and another with a criterion of 0.1 (more extreme). Both models were evaluated by internal validation using 10-fold crossvalidation. The variables that composed the final models were degree of gait alteration, derived Tinetti score, left and right adductor muscle tone and left triceps surae muscle tone. Statistical prediction methods may constitute a useful tool to support the diagnoses of HAM/TSP, especially in settings with limited resources.

Le virus humain T lymphotrope de type 1 (HTLV-1) est l'agent étiologique de la leucémie/lymphome T de l'adulte (ATLL) qui se développe après plusieurs décennies et pour laquelle il n'existe à ce jour pas de traitement efficace. Parmi les protéines virales de HTLV-1, Tax et HBZ jouent un rôle déterminant dans le développement de l'ATLL. Si Tax participe au processus leucémogène dès les étapes précoces, HBZ jouerait plutôt un rôle dans le maintien du phénotype tumoral dans les étapes tardives. Dans ce contexte, là nous nous sommes intéressés à la régulation de l'expression des protéines anti-apoptotiques Bfl-1 et Bcl-xL, par les protéines virales Tax et HBZ. Nous avons montré que Tax induit l'expression des protéines anti-apoptotiques Bfl-1 et Bcl-xL de la famille Bcl-2 via la voie NF-B, alors que HBZ n'a aucun effet sur leur expression. De plus, Tax coopère avec les facteurs de transcription c-Jun et JunD de la voie AP-1 pour augmenter l'expression de ces gènes anti-apoptotiques. En revanche, HBZ module uniquement la trans-activation de bfl-1 induite par Tax. L'ensemble de nos résultats indique donc que Tax joue un rôle prépondérant dans l'activation de l'expression de Bfl-1 et de Bcl-xL et suggère que Bfl-1 et Bcl-xL sont exprimées au cours des étapes précoces et tardives du développement de l'ATLL. Par une stratégie d'ARN interférence, nous avons ensuite montré que Bfl-1 et/ou Bcl-xL sont impliquées dans la survie de lignées cellulaires T infectées par HTLV-1, suggérant que Bfl-1 et Bcl-xL représentent des cibles thérapeutiques potentielles pour traiter l'ATLL. Actuellement, il existe des petites molécules ciblant les membres anti-apoptotiques de la famille Bcl-2, mais aucune ne cible spécifiquement Bfl-1. En collaboration avec la société IMAXIO, nous avons identifié par deux cribles à haut débit 83 molécules capables d'inhiber l'activité anti-apoptotique de Bfl-1. L'une de ces molécules induit spécifiquement la mort de lignées cellulaires T infectées par HTLV-1 pour lesquelles Bfl-1 représente un gène de survie. Ainsi, ce travail doit permettre à terme de développer de futurs médicaments dirigés contre Bfl-1 et de proposer une nouvelle stratégie thérapeutique ciblée contre l'ATLL

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O Brasil é considerado o país com o maior número absoluto de indivíduos infectados pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV2), perto de 2,5 milhões; além disso, é também considerado epidêmico para o HIV e, portanto, casos de coinfecção HIV/HTLV são frequentes no país. O presente trabalho efetuou o seqüenciamento das regiões LTR, env e tax do genoma proviral do HTLV-1 e do HTLV-2 isolados das amostras de sangue de pacientes coinfectados pelo HIV-1 de Londrina e região (n=34) e de São Paulo (n=20), para realizar a caracterização molecular e determinar subtipos virais. Foram utilizadas na análise das sequências as ferramentas Sequencher 4.7, BLAST, Genotyping-NCBI, Subtyping-REGA, BioEdit 7.0.5.3, ClustalW, GenBank, PAUP 4.0.b10, Modeltest 3.7, TreeView 1.6.6 e MEGA4. As diversas análises confirmaram como subtipos prevalentes o HTLV-1a, subgrupo Transcontinental A, e o HTLV-2a (variante -2c). Foram detectadas assinaturas moleculares nos isolados do Brasil. Detectou-se o genótipo brasileiro taxA para o HTLV-1 e para o HTLV-2 a Tax longa, a qual é característica da variante HTLV-2c. Houve também a confirmação da troca de aminoácido S1909P no env dos HTLV-2. Especulou-se sobre duas entradas do HTLV-1 no Brasil e sobre a disseminação do HTLV-2c em grupos distintos quanto ao comportamento de risco e região geográfica. O estabelecimento de métodos laboratoriais otimizados para isolados brasileiros de HTLV-1 e HTLV-2 possibilitou melhor compreensão da diversidade genômica e da origem e disseminação dos HTLVs em populações coinfectadas pelo HIV no Brasil. / Brazil is considered the country with the major absolute number of individuals infected with human T-lymphotropic virus types 1 and 2 (HTLV-1 and HTLV-2), close to 2,500,000; moreover, it is also considered epidemic for HIV/Aids =and therefore HIV/HTLV coinfection is frequent in the country. This study aimed at sequencing the LTR, env and tax regions of the proviral genome of HTLV-1 and HTLV-2 isolated from blood samples obtained from patients coinfected with HIV-1 from Londrina and vicinities (n=34) and São Paulo (n=20), in order to perform the molecular characterization and viral subtyping. For sequences analysis, several bioinformatics tools were employed: Sequencher 4.7, BLAST, Genotyping-NCBI, Subtyping-REGA, BioEdit 7.0.5.3, ClustalW, GenBank, PAUP 4.0.b10, Modeltest 3.7, TreeView 1.6.6 and MEGA4. The results confirmed as prevalent the HTLV-1a subtype, the Transcontinental subgroup A, and the HTLV-2a (variant-2c). Molecular signatures characteristic of Brazilian isolates were detected: taxA Brazilian genotype in HTLV-1, and the long Tax which is characteristic of the HTLV-2c in HTLV-2. Also, it was confirmed the S1909P amino acid change in the env region of HTLV-2c. It was speculated on two entrances of HTLV-1 in Brazil, and on the spread of HTLV-2c in distinct groups related to risk factors and geographic region. The establishment and optimization of laboratory methods performed in this study allowed to get a better understanding on HTLVs genomic diversity, and to give insights on the origin and spread of HTLVs in populations coinfected with HIV in Brazil.

O Brasil é considerado o país com o maior número absoluto de indivíduos infectados pelos vírus linfotrópicos de células T humanas dos tipos 1 e 2 (HTLV-1 e HTLV2), perto de 2,5 milhões; além disso, é também considerado epidêmico para o HIV e, portanto, casos de coinfecção HIV/HTLV são frequentes no país. O presente trabalho efetuou o seqüenciamento das regiões LTR, env e tax do genoma proviral do HTLV-1 e do HTLV-2 isolados das amostras de sangue de pacientes coinfectados pelo HIV-1 de Londrina e região (n=34) e de São Paulo (n=20), para realizar a caracterização molecular e determinar subtipos virais. Foram utilizadas na análise das sequências as ferramentas Sequencher 4.7, BLAST, Genotyping-NCBI, Subtyping-REGA, BioEdit 7.0.5.3, ClustalW, GenBank, PAUP 4.0.b10, Modeltest 3.7, TreeView 1.6.6 e MEGA4. As diversas análises confirmaram como subtipos prevalentes o HTLV-1a, subgrupo Transcontinental A, e o HTLV-2a (variante -2c). Foram detectadas assinaturas moleculares nos isolados do Brasil. Detectou-se o genótipo brasileiro taxA para o HTLV-1 e para o HTLV-2 a Tax longa, a qual é característica da variante HTLV-2c. Houve também a confirmação da troca de aminoácido S1909P no env dos HTLV-2. Especulou-se sobre duas entradas do HTLV-1 no Brasil e sobre a disseminação do HTLV-2c em grupos distintos quanto ao comportamento de risco e região geográfica. O estabelecimento de métodos laboratoriais otimizados para isolados brasileiros de HTLV-1 e HTLV-2 possibilitou melhor compreensão da diversidade genômica e da origem e disseminação dos HTLVs em populações coinfectadas pelo HIV no Brasil. / Brazil is considered the country with the major absolute number of individuals infected with human T-lymphotropic virus types 1 and 2 (HTLV-1 and HTLV-2), close to 2,500,000; moreover, it is also considered epidemic for HIV/Aids =and therefore HIV/HTLV coinfection is frequent in the country. This study aimed at sequencing the LTR, env and tax regions of the proviral genome of HTLV-1 and HTLV-2 isolated from blood samples obtained from patients coinfected with HIV-1 from Londrina and vicinities (n=34) and São Paulo (n=20), in order to perform the molecular characterization and viral subtyping. For sequences analysis, several bioinformatics tools were employed: Sequencher 4.7, BLAST, Genotyping-NCBI, Subtyping-REGA, BioEdit 7.0.5.3, ClustalW, GenBank, PAUP 4.0.b10, Modeltest 3.7, TreeView 1.6.6 and MEGA4. The results confirmed as prevalent the HTLV-1a subtype, the Transcontinental subgroup A, and the HTLV-2a (variant-2c). Molecular signatures characteristic of Brazilian isolates were detected: taxA Brazilian genotype in HTLV-1, and the long Tax which is characteristic of the HTLV-2c in HTLV-2. Also, it was confirmed the S1909P amino acid change in the env region of HTLV-2c. It was speculated on two entrances of HTLV-1 in Brazil, and on the spread of HTLV-2c in distinct groups related to risk factors and geographic region. The establishment and optimization of laboratory methods performed in this study allowed to get a better understanding on HTLVs genomic diversity, and to give insights on the origin and spread of HTLVs in populations coinfected with HIV in Brazil.

Le virus T-lymphotrope humain de type 1 (HTLV-1) est l’agent étiologique de deux principales pathologies : la leucémie/lymphome à cellules T de l’adulte (ATLL) et la paraparésie spastique tropicale/myélopathie associée à HTLV-1 (HAM/TSP). Ces deux maladies sont caractérisées par des phénotypes immunitaires opposés, puisque l’ATLL est associée à une immunosuppression et l’HAM/TSP à une réponse pro-inflammatoire. Les mécanismes qui déterminent l’évolution de l’infection chronique vers l’une ou l’autre de ces maladies sont peu connus. L’interféron de type 1 (IFN-I) a une fonction ambiguë dans l’organisme. Si cette cytokine contribue à la réponse immunitaire précoce, elle est également associée au développement de pathogenèses pour des infections virales persistantes. Les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs) ont la particularité de produire de grandes quantités d’IFN-I après la reconnaissance de cellules infectées par des virus. Nous avons montré que ceci était également vrai pour HTLV-1, puisque le contact entre une cellule infectée par HTLV-1 et la pDC est nécessaire à la production d’IFN-I. Cette production est induite par la particularité de HTLV-1 à s’accumuler en surface des cellules infectées, au sein d’une structure préalablement définie sous le terme de biofilm viral. La nature de la matrice extracellulaire dans laquelle est accumulée le virus régule la réponse IFN-I par les pDCs, la présence de l’antigène Galβ(1-3)GalNAc désialylé à la surface des cellules infectées contribuant à réduire cette réponse IFN-I. Nous avons également observé que des cellules infectées par le virus HTLV-2, virus phylogénétique proche de HTLV-1 mais peu pathogène, tendent à induire une plus faible production d’IFN-I, mais une meilleure maturation des pDCs. Nous avons enfin montré que la fréquence des pDCs dans le sang et leur capacité à répondre à un stimulus est similaire chez des patients HAM/TSP, des porteurs asymptomatiques et des individus sains. Ces résultats contrastent avec des études antérieures qui montrent une diminution de la fréquence des pDCs chez les patients ATLL et une diminution de leur activité chez les individus infectés. Le nombre et la fonction des pDCs pourraient ainsi contribuer à l’orientation de la pathogenèse vers l’ATLL ou l’HAM/TSP. / HTLV-1 (Human T-lymphotropic virus type 1) is the etiological agent of two main diseases: the adult T-cell leukemia/lymphoma (ATLL) and the HTLV-1 associated myelopathy/tropical spastic paraparesis, which are characterized by different immune phenotypes. While the ATLL is linked to an immunosuppressive state, the HAM/TSP is linked to a pro-inflammatory state in patients. The mechanisms contributing to the development of these two diseases in the HTLV-1 infected individuals are poorly understood. Type I interferon (IFN-I) has ambivalent functions in the organism. While this cytokine is an effector of early immune responses, several studies have reported a negative impact of this cytokine during chronic infections. The plasmacytoid dendritic cells (pDCs) are the main producers of IFN-I in vivo, and can produce high amounts of this cytokine after the recognition of virally infected cells. We have shown that pDCs are able to recognize HTLV-1-infected cells, thus leading to the production of IFN-I. pDCs’ triggering is mediated by the accumulated viral particles at the surface of the infected cells, within a carbohydrate-rich structure, previously described as the viral biofilm. The nature of the extracellular matrix itself seems to regulate IFN-I production by pDCs, since the exposition of an asialylated Galβ(1-3)GalNAc glycan at the surface of the HTLV-infected cells reduces the IFN-I production. We also observed that HTLV-2 (a close relative of HTLV-1)-infected cells, in contrast to HTLV-1-infected cells, tend to induce a lower production of IFN-I after being recognized by the pDCs but a greater maturation of the latter. Finally, we have shown that pDCs’ frequency in the blood and their ability to produce IFN-α after an ex vivo stimulation is equivalent in healthy donors, asymptomatic HTLV-1 carriers and HAM/TSP patients. This result contrasts with previous studies which demonstrated that blood circulating pDCs’ frequency is reduced in ATLL patients and that pDCs from HTLV-1 infected individuals have a reduced ability to produce IFN-α after stimulation. Thus, dysregulation of the frequency and functionality of pDCs could contribute to the development of one disease or the other.