En France, quelques cas de toxoplasmose sévère ont été liés à la consommation de viande de cheval qui avait été importée du continent américain où les souches atypiques de Toxoplasma gondii sont plus fréquentes qu’en Europe. De nombreuses études de séroprévalence existent dans la littérature mais l’estimation du risque d’infection par T. gondii après consommation de viande de cheval est impossible à cause de l’absence de validation des tests sérologiques et la corrélation inconnue entre la détection des anticorps anti T. gondii et la présence de kystes dans les tissus. Nous avons utilisé la technique de capture magnétique-réaction de polymérisation en chaine (CM-PCR) pour détecter l’ADN de T. gondii dans 231 échantillons de viande de cheval achetés dans des supermarchés en France et évalué la performance et le niveau d’agrément du test d’agglutination modifié (MAT) et de la méthode immuno-enzymatique ELISA dans les jus de viande. Nous avons également utilisé 196 sérums de chevaux provenant de l'institut français du cheval et de l'équitation à Chamberet, en France, pour évaluer la précision des tests sérologiques ELISA, MAT et le test d’immunofluorescence (IFAT). Les tests sérologiques manquaient de sensibilité, de spécificité, d’agrément entre eux et il n’y avait pas de corrélation avec la présence d’ADN de T. gondii dans la viande de cheval, ce qui suscite des doutes sur la fiabilité des données de séroprévalence de T. gondii chez les chevaux dans la littérature. L’ADN de T. gondii a été détecté dans 43% des échantillons de viande de cheval mais l’absence d’isolement de souche chez la souris suggère une faible répartition des kystes dans les muscles squelettiques et un faible risque d’infection par T. gondii avec la consommation de viande de cheval. Cependant, pour éviter tout risque de toxoplasmose, il est recommandé de bien cuire la viande. / In France, some cases of severe toxoplasmosis have been linked to the consumption of horse meat that had been imported from the American continent where atypical strains of Toxoplasma gondii are more common than in Europe. Many seroprevalence studies exist in the literature but the risk assessment of T. gondii infection after horse meat consumption is impossible because of the absence of validation of serological tests and the unknown correlation between detection of antibodies against T. gondii and presence of tissue cysts. We performed magnetic capture-polymerase chain reaction (MC-PCR) to detect T. gondii DNA in 231 horse meat samples purchased in supermarkets in France and evaluated the performance and level of agreement of the modified agglutination test (MAT) and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the meat juices. We also tested 196 horse sera from - institut français du cheval et de l'équitation, Chamberet, France - to assess the accuracy of ELISA, MAT and immunofluorescence antibody test (IFAT). The serological tests lacked sensitivity, specificity, agreement between them, and there was no correlation with the presence of T. gondii DNA in horse meat, raising concerns about the reliability of T. gondii seroprevalence data in horses from the literature. T. gondii DNA was detected in 43% of horse meat samples but the absence of strain isolation in mice from more than 100 horse meat samples suggest a low distribution of cysts in skeletal muscles and a low risk of T. gondii infection associated with horse meat consumption. However, to avoid any risk of toxoplasmosis, a thorough cooking of horse meat is recommended.

In dieser Arbeit wird eine neue Methode der Vitalitätsbestimmung von Cryptosporidium parvum-Oozysten beschrieben. Die gereinigten Oozysten wurden in einer HCT-8-zelllinie kultiviert und mittels IFAT ausgewertet. Um eine genaue Quantifizierung der fluoreszierenden Flächen vornehmen zu können, wurden die Bilder einer Bildanalysesoftware zugeführt und analysiert. Die Menge eingesäter Oozysten korrelierte signifikant mit den gemessenen Flächen intrazellulärer Entwicklungsstadien. In diesem System wurden verschiedene Feldisolate vergleichend getestet sowie die Vitalität thermisch inaktivierter Oozysten bestimmt.

Submitted by ANA PAULA PERES LOPES ROMARIZ (anapaulaperlopes@hotmail.com) on 2018-11-08T20:05:10Z No. of bitstreams: 1 ANA PAULA ROMARIZ Dissertação corrigida 06.05.18 E 04.11.pdf: 2116840 bytes, checksum: b2108011ea2c9d6d8f71c8bf663ffd36 (MD5) / Approved for entry into archive by Cristina Alexandra de Godoy null (cristina@adm.feis.unesp.br) on 2018-11-09T11:06:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 romariz_appl_me_ilha.pdf: 2116840 bytes, checksum: b2108011ea2c9d6d8f71c8bf663ffd36 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-09T11:06:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 romariz_appl_me_ilha.pdf: 2116840 bytes, checksum: b2108011ea2c9d6d8f71c8bf663ffd36 (MD5) Previous issue date: 2018-03-02 / Tripanosomatídeos são protozoários parasitas flagelados que em ruminantes no Brasil incluem os pertencentes à família Trypanosomatidae, com os gêneros Trypanosoma e Leishmania. Com relação aos búfalos domésticos (Bubalus bubalis), pouco ou nada se conhece sobre estes parasitas. Este estudo teve como objetivo avaliar por meio de métodos parasitológicos (exame direto do parasita no microscópio), sorológicos (RIFI – reação de imunofluorescência indireta) e moleculares (PCR – reação em cadeia pela polimerase e sequenciamento) a presença de tripanosomatídeos em búfalos. Amostras de sangue e suabe conjuntival foram coletadas de 100 búfalos da Fazenda São Francisco, Andradina, SP e de 10 búfalos de Selvíria, MS. Dos 110 búfalos, 60,9% (67/110) apresentaram hemoflagelares tripanossomatídeos nos esfregaços sanguíneos e 90% (99/110) deles apresentaram anticorpos anti-Leishmania pela RIFI. O DNA destes parasitas foi detectado em 29,09% (32/110) dos búfalos pela técnica de PCR, sendo, 26,36% (29/110) na PCR do sangue e 3,6% (4/110) na PCR do suabe conjuntival. Das amostras positivas para PCR, sete foram enviadas para o sequenciamento gênico, e uma delas foi identificada como Leishmania infantum e três como Trypanosoma theileri, ambas as amostras apresentaram 100% de similaridade com as respectivas espécies após comparação pelo GenBank. Este estudo relata o primeiro registro de infecção por L. infantum em B. bubalis na região de Andradina, SP, e a presença de búfalos infectados por espécies de T. theileri, evidenciando a necessidade de mais estudos sobre tripanosomatídeos em búfalos. / Trypanosomatides are flagellate protozoan parasites that in ruminants include those belonging to the family Trypanosomatidae, with the genera Trypanosoma and Leishmania, but with little or nothing information about these parasite infections in domestic water buffalo (Bubalus bubalis). Tthis study was assessed through the parasitological (direct examination of the parasite under microscope), serological (IFAT – immunofluorescence antibody test), and molecular tests (PCR from blood and conjunctival swab and genic sequencing) to detect possible trypanosomatides in buffalo herds from Andradina, SP and Selvíria, MS. Thus, 60.9% (67/110) buffaloes presented trypanosomatid parasites in the blood smears, 90% (99/110) had anti-Leishmania antibodies by IFAT. The DNA of these parasites was detected in 29.09% (32/110) of buffaloes by the PCR technique; 26.36% (29/110) in blood and 3.6% (4/110) in conjunctival swab. Positive PCR samples from seven animals were sent for DNA sequencing, and one of them was identified as Leishmania infantum and three as Trypanosoma theileri, both samples showed 100% of similarity with the respective species after comparison by BenBank. This study reports for the first time the presence of parasite L. infantum in B. bubalis from Andradina, SP, and highlights the presence of buffaloes infected with T. theileri, and indicates the need for more studies on trypanosomatid parasites in buffaloes.

Submitted by MARIA LUANA ALVES null (marialuana.alves@yahoo.com) on 2016-05-03T01:22:40Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao prontissima.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-04T20:03:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alves_ml_me_ilha.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-04T20:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alves_ml_me_ilha.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) Previous issue date: 2016-03-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral (LV), doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, é considerada um problema de saúde pública no Brasil. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo epidemiológico sobre a ocorrência da LV em cães e gatos e de flebotomíneos em dois abrigos de animais, durante o período de um ano, no município de Ilha Solteira, SP. Amostras de material biológico foram coletadas de 192 cães e de 197 gatos, para realização de exames sorológicos por meio do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para ambas espécies animais e da reação intradérmica de Montenegro para cães. Dos cães examinados, 17,2% (33/192) estavam sorologicamente positivos para LV pelo método ELISA, 19,8% (38/192) pela RIFI e 45,4% (15/33) pela reação intradérmica. Para cães, a concordância entre as técnicas sorológicas foi classificada de razoável a boa, mas quando comparadas à reação de Montenegro foi considerada ruim. No inquérito felino das 197 amostras, a soroprevalência foi de 32,4% (64/197) e 31,9% (63/197) no ELISA e RIFI, respectivamente. Embora a maioria dos cães e dos gatos entregue nos abrigos já estivesse infectada, seis cães e cinco gatos infectaram-se no interior desses abrigos, após algum tempo de permanência nesses recintos. Um total de 131 flebotomíneos foram capturados por meio das armadilhas luminosas, colocadas no interior dos dois abrigos durante o período de dois anos. Os fatores de riscos associados à LV foram determinados estatisticamente pela análise univariada, com valor significativo (p ≤ 0,05), onde o porte pequeno dos cães, o uso de coleira de deltametrina e o diagnóstico precoce foram variáveis determinantes que influenciaram a positividade dos animais, ou seja, as duas últimas variáveis determinaram significativamente na diminuição de casos positivos da doença nos abrigos. Concluiu-se que os animais desses abrigos estavam vulneráveis a essa parasitose por se tratarem de locais com a presença de flebotomíneos vetores e de animais positivos para LV, oferecendo risco para a disseminação da doença no município. / Visceral leishmaniasis (VL), a disease caused by Leishmania infantum and transmitted by the sand fly Lutzomyia longipalpis, is considered a public health problem in Brazil. The study aimed to carry out an epidemiological study on the occurrence of VL in dogs and cats, and sand flies during the period of one year in two animal shelters from Ilha Solteira, SP. A total of 197 and 192 biological material samples were collected, respectively from cats and dogs for serological survey by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and an indirect fluorescent antibody test (IFAT) for both species of animals, and the intradermal reaction of Montenegro (only for dogs). During the study with dogs, 17,2% (33/192) were serologically positive for LV by ELISA, 19,8% (38/192) by IFAT and 45,4% (15/33) by the intradermal method. The correlation analysis between the serological techniques was ranged from reasonable to good for dogs, but was bad when compared to the Montenegro reaction. The feline seroprevalence was 32,4% (64/197) and 31,9% (63/197) for ELISA and IFAT, respectively. Although the most of dogs and cats in shelters were infected, six dogs and five cats infected inside the shelters. A total of 131 sand flies were captured by the light traps in both shelters, during two years. The risk factors, statistically determined by univariate analysis (p ≤ 0.05), demonstrated that the small size of the dogs, the use of deltamethrin collar and the precocious diagnosis, significantly influenced the animals positivity for VL. It was concluded that these animal shelters were vulnerable to this parasitic infection because of the presence of sand flies and positive animals for LV. / FAPESP: 2014/12609-2

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-08Bitstream added on 2015-04-09T12:48:01Z : No. of bitstreams: 1 000814210.pdf: 741951 bytes, checksum: f3cd07eaf72ae06779a4848293410751 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / presente estudo teve por objetivo pesquisar a ocorrência de infecção por Leishmania spp. em 491 cães domiciliados no município de Florianópolis, Santa Catarina, região até então considerada indene para leishmaniose visceral, mas que apresenta notificação de casos autóctones da doença canina no ano de 2011. A soroprevalência na população avaliada foi de 0,4% (2/491) por ELISA indireto e 4,09% (24/491) por RIFI. A concordância entre as técnicas sorológicas foi fraca (k=0,069). Somente um cão apresentou sororeatividade em ambos os métodos sorológicos. No mesmo animal foi amplificado o DNA de Leishmania sp. no sangue total, por PCR convencional e PCR em Tempo Real. Não foi possível realizar o sequenciamento do material amplificado e, deste modo, determinar a espécie de Leishmania envolvida. Os resultados do presente estudo salientam a necessidade de uma investigação epidemiológica minuciosa no município / The aim of the present study was to investigate the occurrence of Leishmania infantum chagasi infection in 491 dogs living in Florianópolis, Santa Catarina, a region considered non-endemic for visceral leishmaniasis, but with notification of autochthonous of canine cases in 2011. The seroprevalence in this population was 0.4% (2/491) by ELISA and 4.09% (24/491) by IFAT. There was a poor agreement between the serological techniques (k = 0.069). Only one dog presented seroreactivity in both serological methods. In the same animal Leishmania sp. DNA was amplified from whole a blood sample by conventional PCR and Real- Time PCR. It was not possible to sequence the amplicons and, thereby, to determine the Leishmania specie involved. The results of this study highlight the necessity of epidemiological investigation in the county / FAPESP: 2010/17168-3

Resumo: presente estudo teve por objetivo pesquisar a ocorrência de infecção por Leishmania spp. em 491 cães domiciliados no município de Florianópolis, Santa Catarina, região até então considerada indene para leishmaniose visceral, mas que apresenta notificação de casos autóctones da doença canina no ano de 2011. A soroprevalência na população avaliada foi de 0,4% (2/491) por ELISA indireto e 4,09% (24/491) por RIFI. A concordância entre as técnicas sorológicas foi fraca (k=0,069). Somente um cão apresentou sororeatividade em ambos os métodos sorológicos. No mesmo animal foi amplificado o DNA de Leishmania sp. no sangue total, por PCR convencional e PCR em Tempo Real. Não foi possível realizar o sequenciamento do material amplificado e, deste modo, determinar a espécie de Leishmania envolvida. Os resultados do presente estudo salientam a necessidade de uma investigação epidemiológica minuciosa no município / Abstract:The aim of the present study was to investigate the occurrence of Leishmania infantum chagasi infection in 491 dogs living in Florianópolis, Santa Catarina, a region considered non-endemic for visceral leishmaniasis, but with notification of autochthonous of canine cases in 2011. The seroprevalence in this population was 0.4% (2/491) by ELISA and 4.09% (24/491) by IFAT. There was a poor agreement between the serological techniques (k = 0.069). Only one dog presented seroreactivity in both serological methods. In the same animal Leishmania sp. DNA was amplified from whole a blood sample by conventional PCR and Real- Time PCR. It was not possible to sequence the amplicons and, thereby, to determine the Leishmania specie involved. The results of this study highlight the necessity of epidemiological investigation in the county / Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luis Ferreira / Banca: Marcia Dalastra Laurenti / Mestre

Orientador: Wilma Aparecida Starcke Buzetti / Resumo: Tripanosomatídeos são protozoários parasitas flagelados que em ruminantes no Brasil incluem os pertencentes à família Trypanosomatidae, com os gêneros Trypanosoma e Leishmania. Com relação aos búfalos domésticos (Bubalus bubalis), pouco ou nada se conhece sobre estes parasitas. Este estudo teve como objetivo avaliar por meio de métodos parasitológicos (exame direto do parasita no microscópio), sorológicos (RIFI – reação de imunofluorescência indireta) e moleculares (PCR – reação em cadeia pela polimerase e sequenciamento) a presença de tripanosomatídeos em búfalos. Amostras de sangue e suabe conjuntival foram coletadas de 100 búfalos da Fazenda São Francisco, Andradina, SP e de 10 búfalos de Selvíria, MS. Dos 110 búfalos, 60,9% (67/110) apresentaram hemoflagelares tripanossomatídeos nos esfregaços sanguíneos e 90% (99/110) deles apresentaram anticorpos anti-Leishmania pela RIFI. O DNA destes parasitas foi detectado em 29,09% (32/110) dos búfalos pela técnica de PCR, sendo, 26,36% (29/110) na PCR do sangue e 3,6% (4/110) na PCR do suabe conjuntival. Das amostras positivas para PCR, sete foram enviadas para o sequenciamento gênico, e uma delas foi identificada como Leishmania infantum e três como Trypanosoma theileri, ambas as amostras apresentaram 100% de similaridade com as respectivas espécies após comparação pelo GenBank. Este estudo relata o primeiro registro de infecção por L. infantum em B. bubalis na região de Andradina, SP, e a presença de búfalos infectados por espéci... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanosomatides are flagellate protozoan parasites that in ruminants include those belonging to the family Trypanosomatidae, with the genera Trypanosoma and Leishmania, but with little or nothing information about these parasite infections in domestic water buffalo (Bubalus bubalis). Tthis study was assessed through the parasitological (direct examination of the parasite under microscope), serological (IFAT – immunofluorescence antibody test), and molecular tests (PCR from blood and conjunctival swab and genic sequencing) to detect possible trypanosomatides in buffalo herds from Andradina, SP and Selvíria, MS. Thus, 60.9% (67/110) buffaloes presented trypanosomatid parasites in the blood smears, 90% (99/110) had anti-Leishmania antibodies by IFAT. The DNA of these parasites was detected in 29.09% (32/110) of buffaloes by the PCR technique; 26.36% (29/110) in blood and 3.6% (4/110) in conjunctival swab. Positive PCR samples from seven animals were sent for DNA sequencing, and one of them was identified as Leishmania infantum and three as Trypanosoma theileri, both samples showed 100% of similarity with the respective species after comparison by BenBank. This study reports for the first time the presence of parasite L. infantum in B. bubalis from Andradina, SP, and highlights the presence of buffaloes infected with T. theileri, and indicates the need for more studies on trypanosomatid parasites in buffaloes. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-13 / Serum samples from 1840 sheep from Rio Grande do Sul south (area region), Brazil, were tested to verify the prevalence of IgG antibodies against Toxoplasma gondii by Immunofluorescent Antibody Test (IFAT), using sera dilution 1:64 as cut-off value. Four age groups were studied: one year old, two years old, three years old and > four years old sheep. The prevalence rate for T. gondii infection was 20,2% (450/1840) (15,2% < IC < 26,2%) in sheep, with titers ranging from 1:64 to 1:4096. The prevalence rate of sheep farms, that had at least one positive sheep, was 87,4% (83/95) (78,9% < IC < 92,8%). There was association between antibodies seroprevalence to T. gondii and sheep age, once the one year old group s prevalence was 9,7% (95/687) (6,2%<IC95%<15,0%) and > four years old group s was 35,3% (255/681) (27,5%<IC95%<43,8%). Multivariate logistic regression did not reveal any significant seroprevalence association between sex and other risk factors. The univariate analysis showed presence of housed cats (p=0,17) and not carcasses remotion (p=0,20) as variables with some epidemiological importance. Toxoplasma gondii infection occurs in almost every sheep farms and thus, can be responsable for ovine reproductive losses and human health problems in this region. / As amostras de soro sanguíneo de 1840 ovinos do sul do Rio Grande do Sul, foram testadas para determinar a prevalência de anticorpos da classe IgG para Toxoplasma gondii através do uso da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), com ponto de corte de 1:64. Os animais experimentais foram divididos em quatro grupos de acordo com a idade: um ano, dois anos, três anos e quatro anos ou mais. A soroprevalência para T. gondii foi 20,2% (450/1840) (15,2% < IC < 26,2%) nos ovinos, com variação de títulos de 1:64 até 1:4096. A prevalência das propriedades foco (com pelo menos um animal positivo) foi 87,4% (83/95) (78,9% < IC < 92,8%). Foi observada associação entre soroprevalência para T. gondii e idade dos ovinos, já que a prevalência no grupo de um ano de idade foi 9,7% (95/687) (6,2%<IC95%<15,0%) e no grupo dos animais com quatro anos ou mais foi 35,3% (255/681) (27,5%<IC95%<43,8%). Não foi observada associação significativa entre soroprevalência e sexo, assim como com nenhum dos fatores de risco avaliados na análise multivariada (regressão logística). Entretanto, na análise univariada, duas variáveis se mostraram com maior intensidade de associação com a soroprevalência que as outras: presença de gatos domésticos (p=0,17) e o não recolhimento de carcaças nas propriedades (p=0,20). Os resultados indicam que a infecção por T. gondii está amplamente distribuída entre os rebanhos ovinos da região sul do Rio Grande do Sul, podendo causar perdas reprodutivas nesses animais e representar riscos à saúde humana.

In dieser Arbeit wird eine neue Methode der Vitalitätsbestimmung von Cryptosporidium parvum-Oozysten beschrieben. Die gereinigten Oozysten wurden in einer HCT-8-zelllinie kultiviert und mittels IFAT ausgewertet. Um eine genaue Quantifizierung der fluoreszierenden Flächen vornehmen zu können, wurden die Bilder einer Bildanalysesoftware zugeführt und analysiert. Die Menge eingesäter Oozysten korrelierte signifikant mit den gemessenen Flächen intrazellulärer Entwicklungsstadien. In diesem System wurden verschiedene Feldisolate vergleichend getestet sowie die Vitalität thermisch inaktivierter Oozysten bestimmt.