Orientador: Mario de Beni Arrigoni / Banca: Paulo Roberto Leme / Banca: Paulo Henrique Mazza Rodrigues / Resumo: Esse estudo foi realizado para avaliar o efeito do preparado de anticorpos policlonais (PAP) e/ou da monensina sódica (MON) sobre o desempenho, características e perfil de ácidos graxos da carcaça em bovinos Brangus Jovens confinados. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2 x 2 com medidas repetidas no tempo, sendo os fatores a inclusão ou não de MON e de PAP, avaliados em dois períodos (crescimento e terminação), totalizando 24 baias, sendo 6 repetições (baia) por tratamento (3 animais/baia), com 72 Brangus machos não castrados (285.9 ± 38.7 kg). As dietas dos tratamentos foram diferentes apenas no tocante aos aditivos utilizados: controle (sem aditivo), MON, PAP ou MON + PAP (MIX). Não foi observado efeito (P>0,05) da inclusão do PAP (+) em relação a não inclusão do PAP (-) para nenhuma das variáveis do desempenho. Também não foi encontrada interação (P>0,05) entre os aditivos, nem como para aditivos e período para as variáveis de desempenho. No entanto, foi observado efeito (P < 0,05) da inclusão de MON (+) em relação a não inclusão de MON (-) para as variáveis ganho de peso diário (GPD), ganho de peso total (GP), peso vivo final (PVF), conversão alimentar (CA), eficiência alimentar (EA), custo para ganhar um kilo de peso vivo (CKPV) e peso de carcaça quente (PCQ), em que os animais que receberam MON (+) tiveram maior (P< 0,05) GPD, GP, PVF e melhor (P< 0,05) CA, EA e CKPV que aqueles que não receberam MON (-). Para as variáveis de ultrassom e perfil de ácidos graxos não foram observados efeitos principais (P > 0,05) dos aditivos. Contudo, foi observada interação (P < 0,05) entre MON e período para a variável área de olho de lombo final, embora não tenha sido constatada diferença estatística (P>0,05) entre animais que receberam ou não MON dentro de cada período... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study, conducted at the São Paulo State University feedlot, Botucatu Campus, Brazil, was designed to test the effects of polyclonal antibody preparation (PAP) against rumen bacteria and/or monensin (MON) on feedlot performance, carcass characteristics and fatty acid profile of Brangus bullocks. Seventy-two 9-mo-old bullocks (285.9 ± 38.7 kg) were assigned to 24 pens (3 bullocks/pen) and used in a completely randomized design with 2 x 2 factorial arrangement of treatments, where the factors were inclusion or not of PAP or MON, measured over two phases, growing and finishing, replicated 6 times. The diets treatments were different only about feed additives used: control (no additive), MON, PAP or MON + PAP (MIX). No significant (P > 0.05) PAP main effect, interactions between feed additives or between feed additives and phase were observed for any performance variables. However, significant (P>0.05) MON main effect were observed for average daily gain (ADG), total gain (TG), final body weigh (FBW), hot carcass weight (HCW), feed:gain ratio (G:F) and cost to gain one kilo of BW (CKBW), animals fed MON had higher (P<0,05) ADG, TG, FBW and better (P<0.05) G:F and CKBW than animals not fed MON. For ultrasound and fatty acid profile (FAP) variables, no significant (P>0.05) feed additives main effect were observed. However, significant (P>0.05) interactions between MON and phase were observed for final rib eye area variable, though, no significancy (P>0.05) between animals fed MON or not inside each phase were observed. For FAP, significant (P>0.05) interactions were observed between feed additives for the variables linoleic acid, polyunsaturated fatty acid (PUFA), polyunsaturated fatty acid per saturated fatty acid (PUFA/AGS) and polyunsaturated fatty acid per monounsaturated fatty acid (PUFA/MUFA). However, no significant (P>0.05) means effects among treatments were observed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Clarisse Martins Machado / Resumo: A revaccination program is recommended for all HSCT recipients. Despite the excellence of the Brazilian revaccination program, several pitfalls have been observed over the years. We evaluated such pitfalls and how a prospective and tailored follow-up may help to overcome these obstacles. HSCT recipients (n=122) were followed prospectively and categorized into Group 1 (n=72), recipients who had already started the revaccination program and Group 2 (n=50), recipients who were up to start the vaccines. Whenever a gap on the program was encountered or a difficulty was reported, interventions and subsequent evaluations were performed. Problems related to patient compliance were less frequent than those related to HSCT center modifications of previous recommendations, or to errors made by the vaccination center. Advisory intervention was needed in 64% and 46% of Group 1 and Group 2, respectively (p=0.05), and were partially successful in around 70% of the cases. Total resolution was achieved in more than 35% in both groups. Although the Brazilian revaccination program is excellent, it needs to be improved and all efforts should be made to guarantee a safe and complete revaccination schedule. HSCT centers should appoint nurses and transplant infectious disease physicians to organize and to monitor the progress of the program. / Abstract: Um programa de revacinação é recomendado para todos os receptores de TCTH. Apesar da excelência do programa de revacinação brasileiro, várias dificuldades têm sido observadas ao longo dos anos. Avaliamos essas dificuldades, e como um follow-up prospectivo e adaptado poderia ajudar a superar esses obstáculos. Receptores de TCTH (n=122) foram acompanhados prospectivamente e categorizados em Grupo 1 (n=72), receptores que já haviam iniciado o programa de revacinação e Grupo 2 (n=50), receptores que iniciaram a vacinação após inclusão no estudo. Sempre que uma falha no programa foi encontrada ou uma dificuldade informada, intervenções e subsequentes avaliações foram realizadas. Problemas relacionados à adesão dos pacientes foram menos frequentes do que as relacionadas às modificações das recomendações anteriores do centro de TCTH, ou a erros cometidos pelo centro de vacinação. Intervenções foram necessárias em 64% e 46% nos Grupos 1 e 2, respectivamente (p=0,05), e foram parcialmente bem sucedidas em aproximadamente 70% dos casos. A total resolução foi alcançada em mais de 35% em ambos os grupos. Embora o programa de revacinação brasileiro seja excelente existe a necessidade de aperfeiçoa-lo, e todos os esforços deveriam ser feitos para garantir um programa de revacinação seguro e completo. Os Centros de TCTH deveriam indicar enfermeiros e infectologistas de transplante para organizar e monitorar o progresso do programa de revacinação. / Mestre

A anaplasmose bovina é uma das principais causas de perdas produtivas e mortes no Rio Grande do Sul em rebanhos bovinos. O Anaplasma marginale é o principal agente causador da enfermidade e provoca hipertermia, anemia, prostração, abortos e perdas produtivas nos animais acometidos. Tendo em vista o controle deste hemoparasita em uma propriedade leiteira localizada no município de Eldorado do Sul no Rio Grande do Sul, na qual a incidência da doença era alta, 473 animais foram imunizados com Anaplasma centrale na busca de desenvolvimento cruzado para Anaplasma marginale. No experimento foram verificadas que a incidência que normalmente era acima de 30% na propriedade passou para níveis inferires a 5%. No entanto, foram verificados abortos decorrentes da imunização, principalmente nos animais que possuíam menos de 90 dias de prenhes. Já o número de mortes globais na fazenda caiu consideravelmente tendo em vista que a principal causa de morte era a anaplasmose bovina. Dos animais inoculados com A. centrale em torno de 15% apresentaram sintomatologia clínica da enfermidade e precisaram ser tratados com oxitetraciclina no período entre 15 e 30 dias após a imunização. O custo com tratamento empregado na propriedade posterior à imunização caiu em torno de 85% o que provocou impacto significativo economicamente na propriedade. / Bovine anaplasmosis is a major cause of production losses and deaths in Rio Grande do Sul cattle herds. The Anaplasma is the main causative agent of cattle disease. It causes hyperthermia, anemia, prostration, abortions and reduces milk production in affected animals. In order to control this hemoparasite on a dairy farm located in the municipality of Eldorado do Sul in Rio Grande do Sul, where the disease incidence was high, 473 animals were immunized with Anaplasma centrale in the search for cross-protectiv immunity for Anaplasma marginale. The property anaplasmosis incidence, which usually was above 30%, became 5% after the immunization. However, abortions were observed resulting from innoculaition, especially in animals that had less than 90 days of pregnancy. The global number of deaths on the farm dropped considerably given that the main cause of death was the bovine anaplasmosis. 15% of animals inoculated with A. centrale showed clinical symptoms of the disease between 15 and 30 days after immunization and had to be treated with oxytetracycline . The amount of money spent with anaplasmosis treatment decay 85% after the immunization, which caused significant economic impact on the property.

As cepas vacinais rotavírus reassortants G1, G2, G3, G4 e G9 foram obtidas de um rearranjo genético entre cepas humanas de rotavírus do grupo A do sorotipo G (D, DS-1, P, ST-3 e AU32) e a cepa bovina UK-Bovine. Neste estudo, a cepa reassortant de rotavírus IB-BRV-4-G4 foi formulada, em duas condições, sem adjuvante (Esquema 1) e com adjuvante (Esquema 2) para imunização de camundongos Balb/c. Três AcMos da classe IgM foram obtidos da fusão utilizando animais do Esquema 1 e com o esquema 2 foram obtidos 3 AcMos, dois da classe IgA e um da subclasse IgG1. Destes últimos, dois AcMo (IgA) reconheceram somente epitopos conformacionais em teste de Dot-blot. Entretanto, o AcMo 3 (IgG1) foi reativo a proteínas virais também por Western Blotting, em uma região de perfil eletroforético coincidente com a glicoproteína VP7 de rotavírus. Os resultados mostram que o esquema II de imunização resultou em AcMo específicos para o sorotipo G4, sendo o AcMo IgG1 um forte candidato a ser utilizado nos testes de potência da vacina pentavalente de rotavírus do Instituto Butantan. / The rotavirus strain (G1, G2, G3, G4 and G9) were obtained of reassortants between human rotavirus of the group A and G serotypes (D, DS-1, P, ST-3 and AU32) and a strain from bovine (UK-Bovine).In this study, IB-BRV-4-G4 reassortant rotavirus strain was used to immunize Balb/c mice. Two schedules of immunization were used in the animals, one with IB-BRV-4-G4 (E1) and other with rotavirus antigen and adjuvant (E2). Three monoclonal antibodies of IgM class were obtained of cells from mice immunized only with rotavirus antigen (E1) and with (E2) was obtained three monoclonal antibodies, two producers the IgA class and one the IgG1 subclass. The IgA clones were reactive to G4 serotype rotavirus antigen only in the Dot-blot test. The mAb IgG1 was also reactive to viral proteins in a region of electrophoresis profile in the Western blotting test that coincided with the glycoprotein VP7 of rotavirus. The results indicate that the IgG1 obtained is specific to G4 serotype of rotavirus. It is candidate to be for use in the potency test of pentavalent vaccine.

A partir de uma biblioteca de cDNA de glândulas de veneno de Micrurus corallinus (cobra-coral), uma serpente da Família Elapidae bastante representada no Brasil e muito comum em áreas florestais tropicais, foram gerados 1.438 Expressed Sequences Tags (ESTs), agrupados em 611 clusters. O banco representa os genes mais expressos na glândula de veneno de M. corallinus. Os transcritos relacionados às toxinas apresentaram ao redor de 46% de representação nesse banco de seqüências. A composição geral das toxinas inclui: toxinas de três dígitos (3FTx) (24%), fosfolipases A2 (PLA2) (16%), lectinas do tipo C (5%), entre outros. O banco permitiu não somente a identificação de possíveis toxinas, mas também de transcritos celulares, sendo a maioria envolvida nas funções fisiológicas de células da glândula de veneno. A maior parte dessas moléculas apresenta um envolvimento na expressão gênica e protéica, o que reflete uma alta especialização do tecido para a síntese de toxinas. A análise do transcriptoma de glândulas de veneno de M. corallinus possibilitou a identificação de alguns candidatos antigênicos para um anti-soro antielapídico alternativo. Cinco candidatos antigênicos foram selecionados por meio da análise do transcriptoma obtido: Atg1 (Grupo das neurotoxinas Homolog 8), Atg2 (Grupo das neurotoxinas Homolog 7/3/1), Atg3 (Outras neurotoxinas 1), Atg4 (Outras neurotoxinas 2) e Atg5 (fosfolipase do tipo A2). Avaliamos a viabilidade de imunização com o DNA desses candidatos. Para isso, os cinco grupos de antígenos foram clonados, primeiramente em pGEM-T e, posteriormente, em pSecTag2A, que é um vetor de expressão em células de mamíferos. As clonagens foram inicialmente testadas em células do tipo COS (transfecção transiente), entretanto não ficou clara a capacidade dessas células em expressar os antígenos. Para a análise da resposta imunológica da vacina de DNA, proteínas recombinantes produzidas em E. coli foram utilizadas para o coating de ELISA para detectar anticorpos presentes no soro primário proveniente da imunização com DNA. Os resultados mostraram que o soro dos animais imunizados foi capaz de reconhecer os antígenos recombinantes. Isso indica que a imunização por DNA em camundongos poderia ser uma boa alternativa em relação à imunização do veneno puro de serpente, que é custosa e muito depende da disponibilidade do veneno. Apesar da necessidade de testes complementares, esse é um resultado promissor, já que a produção de anticorpos pode ser alcançada por via de imunização intramuscular, mais prática para objetivos de produção. / Micrurus corallinus(coral snake) is a tropical forest snake belonging to the Elapidae Family, and is very common in Brazil. From the cDNA library of its venom glands, 1.438 Expressed Sequences Tags (ESTs) were generated and grouped into 611 clusters. This database contains the most expressed genes in the M. corallinus venom glands. The transcripts related to toxins represent approximately 46% of the total genes in this database. The toxin compound consists of: three finger toxins (24%), phospholipases A2 (PLA2s) (16%), type-C lectins (5%), among others. This database allowed not only the identification of possible toxins, but also the identification of cellular transcripts, most of which seems to be involved in physiological functions of venom gland cells. The majority of these molecules are involved in gene and protein expression, revealing the high level of specialization of the tissue for toxin synthesis. The analysis of the M. corallinus venom gland transcriptome allowed the identification of some antigenic candidates for an alternative antielapidic antiserum. Five antigenic candidates were selected after analysing the transcriptome: Atg1 (Homolog group 8), Atg2 (Homolog group 7/3/1), Atg3 (Other neurotoxins 1), Atg5 (A2-type phospholipase). These five antigenic groups were used for DNA immunization. Then they were first cloned in pGEM-T and, after, in pSecTag2A, which is an expression vector in mammal cells. The cloning was tested in COS-type cells (transient transfection), without signs of expression. To analyze the immunological response, recombinant proteins were produced in E. coli and used for ELISA coating to react with the primary serum deriving from the DNA immunization. The results showed that the serum from the immunized animals was able to recognize the recombinant antigens, indicating that the DNA immunization in mice could be a feasible alternative regarding the traditional immunization with crude snake venom, which is costly and heavily dependent on the availability of the venom. Regardless the need for additional tests, this is a promising result, because the antibody production can be achieved by intramuscular immunization, a more effective method when aiming for downstream production.

A anaplasmose bovina é uma das principais causas de perdas produtivas e mortes no Rio Grande do Sul em rebanhos bovinos. O Anaplasma marginale é o principal agente causador da enfermidade e provoca hipertermia, anemia, prostração, abortos e perdas produtivas nos animais acometidos. Tendo em vista o controle deste hemoparasita em uma propriedade leiteira localizada no município de Eldorado do Sul no Rio Grande do Sul, na qual a incidência da doença era alta, 473 animais foram imunizados com Anaplasma centrale na busca de desenvolvimento cruzado para Anaplasma marginale. No experimento foram verificadas que a incidência que normalmente era acima de 30% na propriedade passou para níveis inferires a 5%. No entanto, foram verificados abortos decorrentes da imunização, principalmente nos animais que possuíam menos de 90 dias de prenhes. Já o número de mortes globais na fazenda caiu consideravelmente tendo em vista que a principal causa de morte era a anaplasmose bovina. Dos animais inoculados com A. centrale em torno de 15% apresentaram sintomatologia clínica da enfermidade e precisaram ser tratados com oxitetraciclina no período entre 15 e 30 dias após a imunização. O custo com tratamento empregado na propriedade posterior à imunização caiu em torno de 85% o que provocou impacto significativo economicamente na propriedade. / Bovine anaplasmosis is a major cause of production losses and deaths in Rio Grande do Sul cattle herds. The Anaplasma is the main causative agent of cattle disease. It causes hyperthermia, anemia, prostration, abortions and reduces milk production in affected animals. In order to control this hemoparasite on a dairy farm located in the municipality of Eldorado do Sul in Rio Grande do Sul, where the disease incidence was high, 473 animals were immunized with Anaplasma centrale in the search for cross-protectiv immunity for Anaplasma marginale. The property anaplasmosis incidence, which usually was above 30%, became 5% after the immunization. However, abortions were observed resulting from innoculaition, especially in animals that had less than 90 days of pregnancy. The global number of deaths on the farm dropped considerably given that the main cause of death was the bovine anaplasmosis. 15% of animals inoculated with A. centrale showed clinical symptoms of the disease between 15 and 30 days after immunization and had to be treated with oxytetracycline . The amount of money spent with anaplasmosis treatment decay 85% after the immunization, which caused significant economic impact on the property.

Embora a imunização gênica apresente vantagens sobre as vacinas convencionais, nem sempre a produção de anticorpos e a conseqüente proteção conferida pelo sistema imune contra o antígeno de interesse são satisfatórias. As causas da baixa eficácia da imunização gênica, nestes casos, ainda são pouco conhecidas, porém um dos pontos mais relevantes em todo o processo é a eficiência da transfecção do DNA. O sucesso desta metodologia depende do estabelecimento de um sistema de entrega de gene eficiente e seguro. De acordo com a teoria proposta de Kuhn et al. (1999), baixas concentrações de moléculas anfifílicas podem ser usadas para neutralizar a carga do DNA, sem a formação de lipossomos. Este trabalho teve como objetivo avaliar o uso do lipídio catiônico dimetildioctadecil brometo de amônio (DDAB) como neutralizador da carga do DNA para a imunização de camundongos. Para a realização dos experimentos, um plasmídeo expressando a proteína do capsídeo (CA) do vírus da artrite encefalite caprina (CAEV), sob o comando do promotor citomegalovírus humano (CMV), foi utilizado nas imunizações. Os camundongos foram divididos em cinco grupos e receberam, via subcutânea, três inoculações de 10 μg de DNA linear (grupo 1), DNA linear mínimo (grupo 2), DNA circular (grupo 3) associados a 2,7 μg de DDAB ou DNA circular nu (grupo 4). O grupo controle foi inoculado com 2,7 μg de DDAB em solução fisiológica. Os camundongos imunizados com o plasmídeo na forma linear associado ao DDAB apresentaram maiores títulos de anticorpos CA que os inoculados com a forma circular ou linear mínima. Os dados sugerem que o lipídio catiônico DDAB tem potencial de uso como veículo de transfecção gênica em animais. / Genetic immunization has several advantages over conventional vaccines. However, antibody production and protection against the antigen of interest are often not satisfactory. In these cases, the causes of the low effectiveness of the genetic immunization are still poorly understood. One of the most relevant points in the immunization process is the DNA delivery. A successful DNA vaccine depends on the establishment of an efficient and safe gene delivery system. In accordance with Kuhn et al. (1999), low concentrations of amphiphilic molecules can be used to neutralize the DNA charge without the formation of liposomes. The aim of this study was to examine the effect of cationic lipid dimethildioctadecyl-ammonium bromide (DDAB) as a charge neutralizer for DNA for the immunization in mice. A plasmid expressing the capsid protein (CA) of caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) under the control of the human cytomegalovirus immediate early promoter (hCMVie1) was used in the immunization. Mice were grouped and immunized with three injections of either 10 μg of linear DNA (group 1), minimal linear DNA (group 2) or circular DNA (group 3) associated with 2,7 μg of DDAB or naked circular DNA (group 4). The control group received 2,7 μg of DDAB diluted in physiologic solution. Mice immunized with DNA in linear form associated with DDAB developed higher titers of antibodies against CA than the animals immunized with the circular or minimal linear form. The data suggest that lipidic cationic DDAB could be a useful delivery system for genetic immunization.

The role of vaccination in children, who received chemotherapy for malignancies, including acute lymphoblastic leukemia (ALL), remains controversial. Both the disease and treatment affect the immune system. Changes may occur by neutropenia, leading to immediate risk of bacterial and fungal infections, loss protective levels of antibody by previous immunizations, as well as the questionable efficacy of revaccination. Therefore, different approaches are applied in several countries and the best vaccination schedule is not well defined yet. Moreover, the existing recommendations, mainly built on low levels of evidence, are not always followed by oncologists in clinical practice and there are still few references to literature on the subject. The paucity of data from controlled trials on both residual immunity against vaccine antigens at the end of treatment of children with ALL and the ability of the patients to respond to vaccine boosters does not allow the development of guidelines, and then further evaluation are required. We conducted a study using open controlled clinical trial to assess the levels of protection against viral vaccine antigens in children treated for leukemia after completion of chemotherapy, and implementation of a booster dose vaccine. Serum antibody levels were evaluated for hepatitis B, measles, rubella and mumps in 33 patients and compared with a control group. Statistical analysis was performed using the Chi-square and Fisher exact tests for categorical variables and Mann-Whitney test for continuous variables. As a result, there was a high proportion of individuals not immune to measles (75.9%), to rubella (51.7%) and hepatitis B (59.3%) at the end of chemotherapy for ALL. After administration of one booster dose of vaccine, had a recovery for all antigens tested was statistically significant for measles (p = 0, 0422) and hepatitis B (p = 0.0357). It is recommended, therefore, administration of one dose of the MMR and evaluate vaccine antibody titers for individual interventions. / O papel da vacinação em crianças que receberam quimioterapia (QT) para neoplasias malignas, inclusive leucemia linfóide aguda (LLA), continua controverso. Tanto a doença quanto o tratamento afetam o sistema imune. As alterações podem ocorrer pela neutropenia, que leva ao risco imediato de infecções bacterianas e fúngicas, pela perda dos níveis protetores de anticorpos adquiridos por imunizações prévias, como também pela eficácia duvidosa das reimunizações. Por isso, diferentes abordagens são aplicadas em vários países e o melhor esquema de vacinação não está bem definido. Além disso, as recomendações existentes, construídas principalmente com baixos níveis de evidência, nem sempre são seguidas pelos oncologistas na prática clínica e as referências de literatura quanto ao tema são poucas. A escassez de dados de ensaios controlados, tanto para a imunidade residual contra antígenos vacinais no final do tratamento de crianças com LLA, como para a capacidade desses pacientes responderem aos reforços vacinais, não permitiu até o momento o desenvolvimento de diretrizes, sendo, então, necessárias novas avaliações. Foi realizado um estudo do tipo ensaio clínico controlado aberto, para avaliar as taxas de proteção contra antígenos vacinais virais em crianças tratadas para LLA após término da QT, e da aplicação de uma dose de reforço vacinal. O estado imunológico contra hepatite B, sarampo, rubéola e caxumba foi avaliado em 33 pacientes e comparado com um grupo controle. Para análise estatística foram utilizados o teste do qui-quadrado e exato de Fisher para variáveis categóricas e teste de Mann-Whitney para variáveis contínuas. Observouse uma elevada proporção de indivíduos não imunes ao sarampo (75,9%) à rubéola (51,7%) e à hepatite B (59,3%) ao final da QT para LLA. Após a administração de uma dose vacinal de reforço, ocorreu a recuperação para todos os antígenos testados sendo estatisticamente significante para sarampo (p = 0,0422) e hepatite B (p = 0,0357). Recomenda-se, portanto, uma dose das vacinas tríplice viral e hepatite B após recuperação hematológica e posterior avaliação dos títulos de anticorpos vacinais para intervenções individualizadas.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-07-13T17:18:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Marcelo Cordeiro definitiva 2015.pdf: 5642335 bytes, checksum: cb50fdd5ae64295157f0535b7f488925 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T17:18:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Marcelo Cordeiro definitiva 2015.pdf: 5642335 bytes, checksum: cb50fdd5ae64295157f0535b7f488925 (MD5) Previous issue date: 2015-03-13 / CAPES / Imunização genética contra o câncer cervical baseado no oncogene E5 do papilomavírus humano tipo 16 A infecção persistente pelo HPV16 está associada com cânceres cervicais anogenitais e um subconjunto de cânceres de cabeça e pescoço. E5, E6 e E7 são oncoproteínas virais que contribuem com a transformação de queratinócitos humanos. Além de potencializar a habilidade das proteínas E6 e E7 na imortalização/invasão de queratinócitos primários, as proteínas E5 de HPV de alto risco têm participação relevante nas fases precoces de transformação, como na alteração da via dependente do receptor do fator de crescimento epidermal. Entretanto, o antígeno E5 como candidato vacinal ainda não foi devidamente explorado. Ainda, as linhagens celulares mais utilizadas como modelos de desafio tumoral podem não simular os padrões de expressão dos oncogenes de HPV, já que, sua expressão é dirigida por promotores diferentes dos de HPV. Este trabalho utilizou um novo modelo de desafio para validar vacinas anti-HPV baseado em células C3, as quais apresentam a expressão do HPV sob controle de seu próprio promotor. Duas versões do oncogene E5 de HPV16 foram geradas como vacinas de DNA; uma mantendo a sequência íntegra do gene E5 e outra codificando apenas seus dois prováveis epítopos imunogênicos em duplicata. As candidatas vacinais foram submetidas a experimentos in vivo para demonstração de efeitos anti-tumorais contra células C3. Sob regime preventivo ou terapêutico, tumores em camundongos vacinados sofreram efeitos de imunidade celular, conforme indicado pelo acompanhamento do desenvolvimento tumoral e ensaios de ELISPOT. Os efeitos anti-tumorais elicitados pela imunização genética baseada em E5 foram equiparáveis àqueles obtidos por abordagem similar adotada por imunização genética baseada em E6 e E7. O aprimoramento técnico sobre esta abordagem deve, no futuro, resultar em perspectivas de estudos clínicos baseados na imunização genética com E5 contra o HPV e seus tumores associados / Genetic immunization against cervical cancer based on human papillomavirus 16 E5 oncogene HPV16 persistent infection is associated with cervical and anogenital cancers and a subset of head and neck cancers. E5, E6 and E7 are oncoproteins that contribute to human keratinocytes viral transformation. Further enhancing E6/E7-mediated immortalization/invasion of primary keratinocytes, high risk HPV E5 proteins have significant participation in early stages of transformation, for example, by triggering epidermal growth factor receptor (EGFR)-dependent cell growth. However, E5 antigen as a vaccine candidate has not been well explored yet. In addition, the most commonly cell lines used as tumor challenge models may not properly simulate the HPV oncogene expression patterns, since its expression is directed by non-HPV promoters. This study has adopted a new challenge model based on C3 cell line to evaluate anti-HPV vaccines, which present HPV expression driven by its own promoter. Two E5-based versions were generated as DNA vaccines; an HPV16 E5 whole gene sequence and another gene, that encodes only two likely immunogenic epitopes in duplicate. Vaccine candidates were subjected to in vivo experiments in order to demonstrate anti-tumor effects against HPV16-expressing C3 cells-bearing mice. Under preventive or therapeutic procedure, tumors in vaccinated mice suffered cellular immunity effects, as indicated by monitoring tumor growth and ELISPOT assays. The anti-tumor effects elicited by genetic immunization based on E5 were comparable to those obtained by similar approach taken by genetic immunization based on E6 and E7. The technical improvement on this approach should, in future, results in prospects for clinical studies based on E5 genetic immunization against HPV and its associated tumors.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-04-25T13:20:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese - Leonardo Almeida.pdf: 2091382 bytes, checksum: 56413e207110ef30fff7bdeeb3c03088 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T13:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese - Leonardo Almeida.pdf: 2091382 bytes, checksum: 56413e207110ef30fff7bdeeb3c03088 (MD5) Previous issue date: 2016-12-22 / CAPES / Em raras ocasiões, Deleuze mencionou o Direito como uma área de seu interesse e possível campo de investigação. Em sua obra, no entanto, semelhante ponto permaneceu um caminho não percorrido pelo autor, especialmente em relação à sua reflexão política. Este trabalho toma como ponto de partida dois eixos de investigação que, ao final, verificaremos de que maneira eles tendem a se cruzar: a articulação de uma reflexão jurídica através da filosofia da diferença de Gilles Deleuze e o seu papel no horizonte de sua filosofia política, marcada por uma profunda desconfiança das democracias liberais capitalistas. Para tanto, adotamos como estratégia metodológica um engajamento crítico e seletivo com a filosofia do direito do século vinte em que, apesar das diferentes propostas, convergem para a ideia de decisão judicial como subsunção, conforme um intérprete jurídico de Deleuze, Alexandre Lefebvre. O recurso à filosofia deleuzeana neste ponto, serve para concebermos a decisão judicial para além da subsunção, tendo como amparo a temporalidade e a criação na concepção de Henri Bergson. Por fim, uma vez repensada a decisão judicial, trata-se de apreendê-la no contexto das preocupações e posicionamentos políticos do autor, o que fazemos através de inscrição da filosofia política de Deleuze e Félix Guattari nos estudos recentes sobre biopolítica, exceção e imunização. Pretendemos averiguar se essa concepção de criatividade, que ressalta a plasticidade e a inventividade das categorias jurídicas, não traz consigo também o risco do político e da produção da exceção através das suas operações internas, ou seja, abrindo espaço para o uso de uma força política esvaziada dos constrangimentos jurídicos do Estado de Direito para proteger a comunidade de ameaças externas. / Deleuze in a few occasions mentioned how Law was an object of study that deeply concerned him. However, within his philosophical project, he mostly ignored legal concerns and problems, even in his most political reflections. This work takes as it starting point two lines of investigation, which, in the end, cross each other. The first line consists on an inquiry about judgment and legal adjudication regarding creativity influenced by Gilles Deleuze´s philosophy of difference. The second one is how this inquiry fits within Deleuze´s political philosophy and his mistrust of capitalist liberal democracies. We adopted as our main methodological strategy a critical and selective interpretation of some of the most relevant accounts of legal adjudication in twenty-century legal philosophy that, despite many relevant differences within themselves, concur in conceiving legal adjudication as a subsumptive activity, as Alexandre Lefebvre pointed out in his book, The Image of Law. Overall, regarding this discussion, we approach to Deleuze´s philosophy of difference and Bergson´s concepts of temporality and creation in order to conceive legal adjudication beyond its subsumptive form. Finally, after reformulating legal adjudication, we seek to establish its relevance for Deleuze overall political reflections through developing a theoretical relation between Deleuze and Guattari´s political philosophy and the contemporary studies on exception and immunization within biopolitic studies. We take as our theoretical hypothesis that, once we consider legal adjudication in terms of its intrinsic creativity potential, the plasticity and flexibility of legal concepts could also carries a political risk in terms of opening up spaces of exception through the legal system´s internal operations. One expression of this kind of risk would be the establishing of new legal categories that authorizes and legitimizes political force situated beyond the usual legal constraints of the Rule of Law in order to protect the community from external threats.