O ameloblastoma é definido como um tumor odontogênico epitelial de crescimento lento e localmente invasivo, que acomete os maxilares com alta taxa de recorrência quando não removido adequadamente. Este trabalho tem por objetivo estudar as expressões imuno-histoquímicas das proteínas -catenina, p-Akt, CD44 e vimentina em ameloblastomas. Para este estudo foram selecionados 40 casos de ameloblastoma, pertencentes aos arquivos do Serviço de Patologia da Disciplina de Patologia Bucal da FOUSP. Para a realização das reações imuno-histoquímicas foi utilizada a técnica da estreptavidina-biotina e os cortes submetidos aos anticorpos anti--catenina, anti-pAkt, anti-CD44 e anti-vimentina separadamente. O padrão de marcação celular da -catenina nos ameloblastomas foi: marcação citoplasmática, nuclear e de membrana em 33 (82,5%) casos, marcação citoplasmática e de membrana em 7 (17,5%) casos; quanto à sua localização, em 21 (52,5%) casos marcações central e periférica, em 15 (37,5%) casos observou-se marcação central, em, 4 (10%) marcação periférica. Com relação à proteína p-AKT em 36 (90%) casos o padrão de marcação celular foi citoplasmático, sendo em 4 (10%) casos evidenciado o padrão citoplasmático e nuclear. De todos os casos analisados quanto a localização da marcação do p-AKT, 23 (57,5%) casos com marcação nas áreas central e periférica e 17 (42,5%) apresentaram marcação periférica. Nenhuma das lâminas estudadas apresentou marcação exclusiva em áreas centrais da lesão. Para a proteína CD44, 27 (67,5%) casos dos ameloblastomas estudados apresentou marcações citoplasmática e de membrana, enquanto 13 (32,5%) casos mostraram apenas marcações citoplasmáticas. No que diz respeito a localização, 28 (70%) casos apresentaram marcações centrais e periféricas concomitantes, 11 (27 %) casos marcações centrais, e 1 (2,5%) caso marcação periférica. 37 (92,5%) dos casos incluídos nesta pesquisa apresentou marcação citoplasmática para vimentina, sendo 3 (7,5%) casos negativos para a proteína. Dentre os casos com positividade, 22 (55%) referiram-se à região central 14 (7,5%) para as regiões central e periférica , e 1 (2,5%) caso para a região periférica. De acordo com os resultados obtidos, acredita-se que as áreas central e periféricas do tumor possuem células responsáveis pela proliferação e invasividade do tumor, assim como a presença de células tronco responsáveis pela invasividade do tumor, também estão presentes nessas áreas. / The ameloblastoma is defined as an epithelial odontogenic tumor of slow growth, and locally invasive, affecting the jaws with a high rate of recurrence if not removed properly. This study aims to study the immunohistochemical expression of the protein -catenin, p-Akt, CD44 and vimentin in ameloblastomas. For this study we selected 40 cases of ameloblastoma, from the archives of the Pathology of Oral Pathology FOUSP. To carry out the reactions immunohistochemical technique was used streptavidin-biotin and cuts subjected to anti--catenin, anti-pAkt, anti-CD44 and antivimentin separately. The pattern of cell labeling of -catenin in ameloblastomas was: cytoplasmic, nuclear and membrane in 33 (82.5%) cases, cytoplasmic membrane in 7 (17.5%) cases, as regards its location in 21 (52.5%) cases markings central and peripheral in 15 (37.5%) cases observed central marking in, 4 (10%) peripheral marking. With respect to the p-AKT protein in 36 (90%) cases, the staining pattern was cytoplasmic cell, and 4 (10%) patients demonstrated the nuclear and cytoplasmic pattern. In all cases analyzed as marking the location of the p-AKT, 23 (57.5%) cases with marking the central and peripheral areas and 17 (42.5%) had peripheral marking. None of the studied thin sections show labeling exclusively in the central areas of the lesion. For protein CD44, 27 (67.5%) cases of ameloblastomas studied showed markings and cytoplasmic membrane, while 13 (32.5%) cases showed only cytoplasmic markings. Regarding localization, 28 (70%) presented concomitant central and peripheral markings, 11 (27%) patients central markings, and 1 (2.5%), peripheral marking case. 37 (92.5%) of the cases included in this study showed cytoplasmic staining for vimentin, and 3 (7.5%) cases negative for protein. Among the positive cases, 22 (55%) referred to the central 14 (7.5%) for the central and peripheral, and 1 (2.5%) case for the peripheral region. According to the obtained results, it is believed that central and peripheral areas of the tumor cells have responsible for the proliferation and invasiveness of the tumor, as well as the presence of stem cells responsible for tumor invasiveness, are also present in these areas.

Biomateriais, cerâmicos ou metálicos, para emprego em tecido ósseo, são importantes ferramentas na medicina regenerativa com intuito de reparar, restaurar, restituir, sustentar, tratar e substituir tecido lesionado. A análise da resposta biológica aos biomateriais é um grande desafio, considerando os aspectos inerentes do tecido ósseo mineralizado e as características físicas dos biomateriais. A compreensão do comportamento celular envolvido nesse conjunto tem o intuito de desenvolver biomateriais mais aptos e adequados ao tecido ósseo o qual ele é destinado. O objetivo deste estudo foi avaliar a osteointegração de implantes cerâmicos e metálicos após ensaio in vivo, por meio de técnicas histoquímicas com colorações de Giemsa-Eosina (GE), Hematoxilina-Eosina (HE), Tricrômico de Masson-Goldner (MG), Tricrômico de Masson (TM), Tricrômico de Gomori (GO) e Picrossírus (PS), Azul de Toluidina (AT) além de técnicas imunohistoquímica (IHQ), lectina-histoquímica (LHQ) e marcadores fluorescentes. Implantes cerâmicos à base de fosfatos de cálcio: hidroxiapatita (HAp), β-fosfato tricálcico (β-TCP) e mistura dos dois (BCP) 1:1 em peso, foram produzidos por gelcasting de espuma e pela inovadora técnica da bola de neve. Os implantes à base de titânio comercialmente puro (Ticp) e da Liga Ti-13Nb-13Zr (Liga) foram produzidos por metalurgia do pó; sendo macroporosos, com a adição de diferentes polímeros naturais, ou microporosos, com elevadas densidades, submetidos a diferentes tratamentos de superfície. A avaliação da osteointegração foi realizada em tíbia de coelhos após períodos de reparação, em conjuntos osso-implante: não-descalcificados e descalcificados. Na análise histológica por microscopia óptica com colorações histoquímicas, os conjuntos apresentaram crescimento ósseo com osteointegração em todos os implantes. A análise por fluorescência mostrou as fases e áreas marcadas de acordo com o período de aplicação do marcador, indicando intenso remodelamento ósseo em todo o osso, o crescimento ósseo no interior dos poros e ao redor dos implantes para os marcadores tetraciclina e calceína. Com a análise de IHQ foram avaliados os marcadores para osteopontina (OP), osteonectina (ON) e osteocalcina (OC), e com LHQ foram avaliadas 5 lectinas. O melhor marcador por IHQ foi para OP, havendo correlação entre a marcação com WGA pela LHQ e OP pela IHQ. A técnica de LHQ foi bem sucedida em criar perfis de comparação entre os biomateriais. A maior marcação por RCA-1 para todos os implantes cerâmicos e metálicos, indicam que esta é um promissor marcador para diferenciação em estudos de osteointegração, bem como a marcação por sWGA e PNA nos implantes de Liga. / The use of biomaterials in bone, whether ceramic or metallic, are important tools for regenerative medicine aiming to repair, restore, restitute, support, treat and substitute damaged tissue. The evaluation of biological response towards biomaterials is a big challenge considering the inherent aspects of mineralized bone tissue and physical characteristics of biomaterials. The understanding of the cellular behavior involved will propitiate the development of more fit and adequate biomaterials to the targeted bone. The objective of this study was to evaluate the osseointegration of ceramic and metallic implants after in vivo testing on bone, with histochemical staining techniques as Giemsa-Eosin (GE), Hematoxylin-Eosin (HE), Masson-Goldners Trichrome (MG), Massons Trichrome (MT), Gomoris Trichrome (GT), Picrosirius Red (PS), Toluidine Blue (TB), besides Immunohistochemistry (IHC), Lectinhistochemistry (LHC) and Fluorescent labeling. The ceramic implants were produced using calcium phosphates: hydroxyapatite (HAp), β-tricalcium phosphate (β-TCP) and their biphasic mixture (BCP) 1:1 by weight, as ceramic foam by gelcasting or as ceramic spheres obtained by the innovative Snowballing technique. The metallic implants were produced using commercially pure titanium (cpTi) and alloy Ti-13Nb-13Zr (Alloy) by powder metallurgy, using natural polymers as additives to achieve macroporosity and microporous without additives and different surface treatments. The osseointegration evaluation was performed on implanted tibia bone of New Zealand White rabbits after repair period in bone-implant samples either decalcified or undecalcified. Histological analysis of stained slides with optical microscopy showed samples with bone ingrowth and osteointegration on all implants. The Fluorescent analysis evidenced the bone growth phases and areas according to each marker injection period. Intense remodeling process throughout the bone, bone ingrowth inside the pores and surrounding the implants was observed with the markers tetracycline and calcein. The IHC analysis was performed using markers for osteopontin (OP), osteocalcin (OC) and osteonectin (ON), and LHC analysis using five lectins. The best marker by IHC was OP; with correlation between the result of lectin WGA and the antibody for OP. The LHC technique was successful creating profiles for comparison between biomaterials. The results of RCA-1 for all ceramic and metallic implants indicates that this is a promising marker for differentiation at osseointegration studies, as well as the results of sWGA and PNA for Alloy implants.

Topoisomerases são enzimas nucleares que participam na regulação da estrutura do DNA nas células eucarióticas. A topoisomerase III é o mais novo membro da família das topoisomerases. Seu papel no desenvolvimento dos tumores mamários ainda necessita ser investigado. O objetivo do presente estudo foi avaliar a imunoexpressão da topoisomerase III nos carcinomas mamários, e comparar sua expressão com dados clinicopatológicos e marcadores imunohistoquímicos clássicos de importância prognóstica nos carcinomas mamários. Utilizando-se tissue microarrays contendo 171 casos de carcinomas ductais mamários primários, foi analisada a expressão imunohistoquímica de topoisomerase III, receptor de estrógeno, receptor de progesterona, HER-2, Ki67, p53 e BRCA-1. Positividade para topoisomerase III foi encontrada em 33,9% dos casos, e sua expressão relacionou-se com metástases à distância (p=0.036) e óbito (p=0.006). Negatividade para topoisomerase III relacionou-se com negatividade para HER=2 (p<0.001), p53 (p<0.001) e BRCA-1 (p=0.001), e com baixa expressão de Ki-67 (p<0.001). Na Análise de Riscos Múltiplos de Cox, a expressão de topoisomerase III foi um significante preditor de sobrevida [razão de risco 3.006 (intervalo de confiança a 95%: 1.582-5.715); p=0.001]. Concluindo, a topoisomerase III pode ser útil na avaliação do prognóstico de pacientes com câncer de mama, além de ser um fator independente de predição da sobrevida. / Topoisomerases are ubiquitous nuclear enzymes that regulate DNA structure in eukaryotic cells. The role of topoisomerase III, the newest member of the topoisomerase family, in the clinical outcome of breast cancer is still poorly understood. This study aims to investigate the immunoexpression of topoisomerase III in breast cancer and its relationships with clinicopathological features and immunohistochemical markers of prognostic significance in breast pathology. Using tissue microarrays containing 171 cases of primary invasive breast cancer, we analyzed the immunoexpression of topoisomerase III, estrogen receptor, progesterone receptor, HER-2, Ki67, p53 and BRCA-1. Immunostaining for topoisomerase III was found in 33.9% of breast carcinomas, and immunopositivity was related with distant metastasis (p=0.036) and death (p=0.006). Decreased expression of topoisomerase III was related with negativity with HER-2 (p<0.001), p53 (p<0.001) and BRCA1 (p=0.001) and low expression of Ki67 (p<0.001). In the multivariate analysis, topoisomerase III expression was a significant predictor of survival [hazard ratio 3.006 (95% confidence interval 1.582-5.715); p=0.001]. In conclusion, topoisomerase III expression can be a useful marker in assessing the prognosis of patients with breast cancer and is an independent predictor of survival.

Introdução: O adenocarcinoma ampular é uma neoplasia maligna rara, com frequência de 1% em relação a todos os tumores gastrintestinais e, de 6 a 25% dos casos de neoplasias periampulares. Como distintos epitélios convalescem dentro da ampola de Vater, a origem histológica desses tumores ainda é uma questão desafiadora na prática clínica. As diferenças nas classificações histomorfológicas tornam difícil a avaliação e comparação dos estudos clínicos desses tumores. Por isso, a divisão histológica em dois tipos principais (intestinal e pancreatobiliar) é necessária para comparação terapêutica e prognóstica desta neoplasia. Materiais e métodos: No presente estudo foram incluídos 27 pacientes no período de 2007 a 2013 com diagnóstico de Adenocarcinoma Ampular no HCFMRP-USP. Foi realizada a avaliação histológica e imuno-histoquímica com os anticorpos CK7, CK20, CDX2, MUC1, MUC2, MUC5AC e, em seguida, avaliado a sobrevida global. Resultados: A média de sobrevida global foi de 40,26 meses. 63% eram carcinomas do tipo intestinal e 37% eram do tipo pancreatobiliar. A expressão dos marcadores CK20, MUC 2 e CDX 2 foram mais frequentes nos tumores do tipo intestinal, já os marcadores CK7, MUC 1 e MUC5AC foram expressos com maior frequência no tipo pancreatobiliar. O CDX2 é o marcador com maior sensibilidade e especificidade para o tipo intestinal quando usado de forma isolada (p<0,01). A associação de CK7 e MUC1 apresentou alta sensibilidade (80%) para o subtipo pancreatobiliar, enquanto as associações CK20 e CDX2 ou MUC2 e CDX2 apresentavam especificidade de 100% para o subtipo intestinal. A média global de sobrevida foi de 40,26 meses. Não houve interferência do tipo histológico (p=0,48), estadiamento (p=0,90) ou realização de quimioterapia (p=0.30) na sobrevida global. Conclusão: O presente estudo propõe que a utilização de um painel imuno-histoquímica composto por CDX2, CK7 e MUC1 permite a classificação com maior acurácia dos adenocarcinomas ampulares em tipo intestinal ou pancreatobiliar. Não foi possível afirmar que a realização de quimioterapia, o estadiamento patológico ou o perfil histopatológico influenciou na sobrevida global, porém o grande impacto deste estudo foi a possibilidade de classificar, a partir de um painel imuno-histoquímico reduzido, os dois subtipos histológicos usuais dos adenocarcinoma ampulares e com isso estabelecer um protocolo para direcionar melhor os pacientes. / Background: Ampullary carcinoma is a rare malignant neoplasm, with a frequency of 1% of all gastrointestinal tumors and represents 6 to 25% of the cases of periampullary neoplasms. As distinct epithelia convalesce within the ampulla of Vater, the histological origin of these tumors is still a challenging question in clinical practice. Differences in histomorphological classifications make difficult to evaluate and compare the clinical trials of these tumors. Therefore, the histological division into two main types (intestinal and pancreatobiliary) is necessary for therapeutic and prognostic comparison of this cancer. Methods: 27 patients were included between 2007 and 2013 with diagnosis of ampullary carcinoma from HCFMRP-USP. Histological and immunohistochemical evaluation was performed with the antibodies CK7, CK20, CDX2, MUC1, MUC2, MUC5AC and then was evaluated the overall survival. Results: The overall survival rate was 40.26 months. Sixty three percent were intestinal type carcinomas and 37% were pancreatobiliary type. Expression of the CK20, MUC 2 and CDX 2 were more frequent in intestinal tumors, whereas the CK7, MUC 1 and MUC5AC markers were expressed more frequently in the pancreatobiliary type. The immunostaining of CDX2 presented highest sensitivity and specificity for the intestinal type when used alone (p <0.01). The association of CK7 and MUC1 showed high sensitivity (80%) for the pancreatobiliary type, while CK20 and CDX2 or MUC2 and CDX2 associations had 100% specificity for the intestinal type. The overall survival rate was 40.26 months. There was no significative relation of histological type (p = 0.48), staging (p = 0.90) or chemotherapy (p = 0.30) with the overall survival. Conclusions: This study suggests that the use of an immunohistochemical panel of CDX2, CK7 and MUC1 allows the classification with higher accuracy in the intestinal or pancreatobiliary type. It was not possible to affirm that chemotherapy, pathological staging or histopathological profile influenced the overall survival, but the major impact of this study was the possibility to classify, from a reduced immunohistochemical panel, the two usual histological subtypes of ampullary adenocarcinoma and thus establish a protocol to better target patients.

O presente estudo teve como objetivo caracterizar a expressão da família SIBLING (Small Integrin-Binding Ligand, N-linked Glycoproteins) após tratamento regenerativo de furca com enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários. Para isto, os 2os e 3os pré-molares superiores foram extraídos em quatro cães s.r.d. Cinco dias após as extrações, defeitos padronizados de furca classe II foram criados nos 2os, 3os e 4os pré-molares inferiores, bilateralmente. Estes defeitos foram tratados imediatamente com raspagem, alisamento e polimento corono-radicular (RAPCR) e retalho deslocado coronariamente (RDC) (Grupo Controle) ou com RAPCR + RDC + enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários (Grupo Teste) em um experimento de boca-dividida. Após um período de 6 semanas de reparação, os animais foram sacrificados e foi realizada análise imuno-histoquímica para avaliar a localização dos membros da família de proteínas SIBLING, composta pelas seguintes proteínas nãocolágenas da matriz extracelular: osteopontina (OPN), sialoproteína óssea (BSP), proteína da matriz dentinária 1 (DMP1), sialofosfoproteína da dentina (DSPP) e fosfoglicoproteína da matriz extracelular (MEPE). Não foram encontradas diferenças na expressão da família SIBLING entre os grupos teste e controle. Todas as proteínas foram expressas no novo osso, novo cemento e novo ligamento periodontal, em ambos os grupos. Os osteoclastos demonstraram imunolocalização intracelular intensa somente para a OPN. Cementócitos e o novo ligamento periodontal demonstraram, particularmente, marcação intensa para a MEPE. Houve uma diferença evidente entre o padrão de marcação entre o lado tratado (vestibular) e o não-tratado (lingual) de todos os espécimes, com presença de maior marcação do lado vestibular, para todos os anticorpos testados. Podemos concluir que não houve diferenças no padrão de expressão da família SIBLING após o uso do enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários. A família de proteínas SIBLING é expressa durante o processo de reparação de defeitos de furca, indicando possíveis papéis e funções para as proteínas OPN, BSP, DMP1, DSP e MEPE como moléculas alvo em terapias de regeneração periodontal. / The present study aimed in characterizing the expression of the SIBLING (Small Integrin- Binding Ligand, N-linked Glycoproteins) family in a regenerative treatment of furcation defects with a reparative tissue graft obtained from extraction sockets. The second and third upper premolars were extracted in four mixed breed dogs. Five days later, standardized class II furcation defects were created in the second, third and fourth mandibular premolars, bilaterally. The defects were immediately treated with either debridement and root planning (DRP) combined with a coronally positioned flap (CPF) (Control Group), or with DRP+CPF + a reparative tissue graft derived from the second and third premolar extraction sockets (Experimental Group) in a split-mouth design. After 6 weeks period of healing, the animals were sacrificed and immunohistochemistry was carried out to assess the localization of members of the SIBLING family of noncollagenous extracellular matrix proteins, namely osteopontin (OPN), bone sialoprotein (BSP), dentin matrix protein 1 (DMP1), dentin sialophosphoprotein (DSPP) and matrix extracellular phosphoglycoprotein (MEPE). No differences in the SIBLING family of proteins expression were noted between the control and experimental group. All proteins were expressed in new bone, new cementum and new periodontal ligament in both groups. Osteoclasts exhibited intense intracellular localization only for OPN. Cementocytes and the newly formed periodontal ligament demonstrated particularly intense staining for MEPE. There was an evident difference between the staining pattern between the treated (buccal side) and non-treated (lingual) side of the specimens, with a more intense staining pattern in the buccal side, for all the tested antibodies. In conclusion, there were no differences in the pattern of SIBLING expression following the use of a reparative tissue graft obtained from extraction sockets. The SIBLING family of proteins is expressed during the healing process of furcation defects indicating possible roles and functions of OPN, BSP, DMP1, DSPP and MEPE as target molecules in periodontal regeneration therapies.

O tumor mamário é a terceira neoplasia mais incidente na espécie felina, seguida das neoplasias hematopoiéticas e cutâneas. Nos gatos, diferentemente do observado em cães e humanos, cerca de 85 a 95% dos tumores mamários são malignos e a doença tende a apresentar um comportamento mais agressivo. Desta forma, parâmetros clínico-epidemiológicos, patológicos e moleculares têm sido propostos como fatores prognósticos nesta espécie, porém os resultados ainda são controversos. Recentemente, uma nova classificação molecular foi proposta nesta doença em felinos, na qual foram estabelecidos seis subtipos moleculares de acordo com o St. Gallen International Expert Consensus Panel para humanos. Assim, o presente estudo teve como principal objetivo investigar o valor prognóstico de parâmetros clínico-patológicos e dos subtipos moleculares no carcinoma mamário em felinos. Foram analisados 65 tumores, provenientes de 42 gatas atendidas em hospitais veterinários públicos e particulares. Os tumores foram submetidos à análise histopatológica e imuno-histoquímica para os receptores de estrógeno e progesterona, HER-2, Ki67 e citoqueratina 5/6. Os parâmetros clinico-patológicos foram correlacionados com a sobrevida pelo teste de Log-rank (p&lt;0,05). Os tipos histológicos mais frequentes foram os carcinomas tubulopapilares, sólidos e cribiformes, a maioria graduados como grau II. Em relação aos subtipos moleculares, os tumores foram classificados em triplo negativo normal-like (35,4%), triplo negativo basal-like (29,1%), HER-2 positivo (25%) e Luminais A e B (10,5%). Em relação aos fatores prognósticos, animais com idade superior a 12 anos (p=0,0036) e com tumores ulcerados (p=0,0139) demonstraram correlação significativa com menor tempo de sobrevida. Os parâmetros raça, status reprodutivo, uso de anticoncepcional, tratamento, tamanho e volume tumorais, multiplicidade tumoral, morfologia, grau histológico, índice de proliferação e os subtipos moleculares não apresentaram correlação com a sobrevida. Os resultados demonstrados aqui ressaltam a importância da correlação clínica, patológica e molecular na determinação dos fatores prognósticos e, consequentemente, no desenvolvimento de novos procedimentos e alvos terapêuticos. / The mammary tumor is the third most frequent neoplasm in the feline species, followed by hematopoietic and cutaneous neoplasms. In cats, unlike that observed in dogs and humans, about 85 to 95% of mammary tumors are malignant and the disease tends to present more aggressive behavior. In this way, clinical-epidemiological, pathological and molecular parameters have been proposed as prognostic factors in this species, but the results are still controversial. Recently, a new molecular classification was proposed in this feline disease, in which six molecular subtypes were established according to \"St. Gallen International Expert Consensus Panel \"for humans. Thus, the present study had as main objective to investigate the prognostic value of clinical-pathological parameters and molecular subtypes in mammary carcinoma in felines. A total of 65 tumors were analyzed, from 42 cats treated in public and private veterinary hospitals. Tumors were submitted to histopathological and immunohistochemical analysis for the estrogen and progesterone receptors, HER-2, Ki67 and cytokeratin 5/6. The clinical-pathological parameters were correlated with survival by the log-rank test (p &lt;0.05). The most frequent histological types were tubulopapillary carcinomas, solid and cribiform, commonly grade II. Tumors were classified as \"normal-like\" (35.4%), triple negative \"basal-like\" (29.1%), HER-2 positive (25%) and Luminais A And B (10.5%). Regarding the prognostic factors, animals aged over 12 years (p = 0.0036) and ulcerated tumors (p = 0.0139) showed a significant correlation with a shorter survival time. The parameters race, reproductive status, use of contraceptive, treatment, tumor size and volume, tumor multiplicity, morphology, histological grade, proliferation index and molecular subtypes had no correlation with survival. The results demonstrated here emphasize the importance of clinical, pathological and molecular correlation in the determination of prognostic factors and, consequently, in the development of new procedures and therapeutic targets.

No hipotálamo, centro regulador de uma variedade de comportamentos inclusive o reprodutivo, são produzidos diversos peptídeos moduladores, dentre eles o hormônio concentrador de melanina [MCH]. Já foi observada presença do MCH também em tecidos periféricos, incluindo os testículos. Por isso buscamos sua presença no ovário de ratas nas fases do ciclo estral, gestantes e lactantes. Para a determinação da presença do peptídeo foram utilizados os métodos de imuno-histoquímica e western blotting, para a detecção do RNAm, a hibridização in situ e RT-PCR, e ensaio imunoenzimático para determinação de níveis séricos hormonais de progesterona, prolactina e MCH. Nossos experimentos indicam a presença do RNAm do ppMCH no ovário, bem como do peptídeo em todas as fases do ciclo reprodutivo, no corpo lúteo e na medula ovariana, resultado quantificado pela técnica de western blotting. Além do mais, observamos que os níveis séricos de MCH são constantes nas fases analisadas e que a contribuição do ovário nesses níveis é significativa. / In the hypothalamus, the regulatory center of a variety of behaviors, including reproductive behavior, several peptides modulating these functions are produced, among them the melanin-concentrating hormone [MCH]. In addition to the brain tissue, its presence in several peripheral tissues, including the testis, has been observed. Therefore, we used rats to investigate the presence of MCH in the estrous cycle phase, during gestation and lactation periods. In order to determine the presence of the peptide, immunohistochemistry and western blotting methods were used. To detect the preproMCH RNAm, we used in situ hybridization and RT-PCR, and immunoenzymatic assay to determine serum levels of progesterone, prolactin and MCH. Our findings demonstrated the presence of ppMCH mRNA in ovary, as well as the peptide, and it was localized in the corpus luteum and ovarian marrow. Furthermore, we observed that serum MCH levels are constant in the analyzed phases and that the contribution of the ovary at these levels is significant.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andreia Luiza Pereira Silva.pdf: 2055860 bytes, checksum: f2166a82b1799fc7eb8a400fdb18ae87 (MD5) Previous issue date: 2014-03-07 / Immunohistochemistry (IHC) is a diagnostic method used to detect tissue or cellular antigens. It has been increasingly used both in research and diagnosis. The technique is used wordwide and a greater interest in the reproducibility of the method is nowadays notticed. Thus, it becomes important to address the development of applications and innovations of this technique through quantitative analysis, and also to evaluate its contribution to the Genetic field. In order to do so, there are some methodologies for assessing scientific production in a certain field, such as Scientometric Analysis. The purpose of this study was to characterize the scientific literature on the immunohistochemistry technique in the period between 1986 and 2013. We assessed trends and prospects related to the development of the method in the field of Genetics through Scientometric Analysis. A literature survey was conducted on the site Scopus, using the words immunohistochemistry*, Genetic* and molecular biology*. We used different approaches to assess the articles: publication type (experimental or review), number of articles/year, authors, field, scientific magazines, and the impact factor of journals among other factors. As a result, there was an increase in the number of publications in genetics with the use of IHC over the years followed by a stabilization, especially in developed countries like the U.S.A. There was relevant interest for the human study. Most of the research was related to study of proteins, followed by ribonucleic acid (RNA). The main pathology associated with immunohistochemical studies was cancer, supporting its use as an important tool in the pathology laboratory. / A imuno-histoquímica (IHQ) é um método diagnóstico que tem como objetivo detectar um antígeno tissular ou celular, sendo uma técnica cada vez mais utilizada tanto em pesquisa, quanto em diagnóstico. Seu uso cada vez mais amplamente difundido também está gerando, atualmente, um maior interesse na reprodutibilidade do método. Sendo assim, tornase importante abordar, por meio de análise quantitativa, o desenvolvimento das aplicações e inovações desta técnica, bem como avaliar sua contribuição nas diversas áreas da genética. Para tanto, existem metodologias que permitem avaliar a produção científica em uma determinada área, como as análises cienciométricas. O objetivo deste estudo foi caracterizar a produção científica sobre a técnica de imuno-histoquímica, no período de 1986 a 2013, a fim de avaliar as tendências e perspectivas do desenvolvimento no campo da genética com o uso desta instrumentação, por meio da análise cienciomética. Para isso foi realizado um levantamento bibliográfico no sítio Scopus, utilizando as palavras immunohistochemistry* and genetic* and molecular* biology*. Foram realizadas diferentes abordagens de avaliação sobre os artigos: tipo de publicação (experimental ou revisão), número de artigos/ano, autores, áreas, revistas, fator de impacto das revistas que mais publicaram, dentre outros. Como resultado, constatou-se um aumento no número de publicações em genética com o uso da IHQ no decorrer dos anos seguido por uma estabilização, principalmente nos países desenvolvidos como os EUA. Observou-se relevante interesse no estudo com humanos. A maioria das pesquisas foi realizada com estudo de proteínas, seguidas por ácido ribonucleico (RNA). A principal patologia associada ao estudo imuno-histoquímico foi o câncer, confirmando seu uso com uma importante ferramenta no laboratório de patologia.

Dados recentes apontam que a desmineralização óssea pode promover a consolidação de enxertos e a proliferação e diferenciação de pré-osteoblastos, mas os mecanismos biológicos envolvidos nesse processo precisam ser esclarecidos. Neste estudo foram investigados, em calvária de 126 ratos Wistar, os efeitos da desmineralização óssea sobre o reparo de enxertos ósseos em bloco cujas superfícies de contato foram desmineralizadas por tetraciclina hidroclorada (TCN) na concentração de 50mg/ml ou ácido cítrico (AC) a 10% (pH=1) por 15, 30 ou 60 segundos (n=6). Enxertos controle foram realizados sem desmineralização. Após 7, 30 e 60 dias, blocos teciduais contendo os enxertos foram removidos dos animais e processados histotecnicamente para coloração com hematoxilina e eosina. Os espécimes de 30 dias de pós-operatório também forneceram amostras para avaliação imunohistoquímica para osteocalcina (OCN) e fosfatase ácida tartarato resistente (TRAP), marcadores de formação e reabsorção óssea respectivamente. A análise qualitativa demonstrou estágios mais avançados no processo de reparo ósseo desde os 7 dias nos grupos desmineralizados em relação ao controle, com consolidação ocorrendo a partir dos 30 dias de pós-operatório, em especial nos espécimes desmineralizados com TCN por 60 segundos. A análise quantitativa demonstrou aumento significante da área de osso neoformado e de superfícies de consolidação óssea com o tempo (ANOVA a dois critérios, p<0,05). Maior porcentagem de área de osso neoformado ocorreu nos grupos AC15 e TCN60 quando comparados ao grupo controle em todos os períodos avaliados (p = 0,02). Aos 30 dias, o grupo C apresentou menor porcentagem de extensão de superfícies consolidadas em relação aos grupos TCN60, TCN30 e AC15 (p = 0,0015). Aos 60 dias, o grupo AC60 apresentou a totalidade das superfícies ósseas do enxerto e do leito consolidadas ao osso neoformado na interface com diferença em relação ao grupo controle (p = 0,0015), que também apresentou menores resultados em relação aos grupos AC15, TCN15 e TCN60. A análise imunohistoquímica foi inconclusiva para explicar os achados histomorfométricos. A relação OCN/TRAP foi maior nos grupos controle, AC30, TCN30 e TCN60, mas a localização da imunomarcação margeando as superfícies do osso neoformado e no interior dos espaços medulares sugere que a observação revela fenômenos de remodelação óssea normal, sem distinção entre os grupos. Concluiu-se que a desmineralização das superfícies ósseas de contato entre o enxerto ósseo e o leito receptor com AC ou TCN durante 15, 30 ou 60 segundos promoveu maior área de tecido ósseo neoformado na interface enxerto-leito do que a não desmineralização, principalmente nos períodos mais precoces de reparação. A consolidação do osso neoformado ao enxerto e ao leito receptor também foi maior em todos os grupos desmineralizados em relação ao controle. Os melhores resultados, entretanto foram apresentados pelos grupos AC15 e TCN60. / Recent data suggest that bone demineralization may promote graft consolidation and proliferation as well as differentiation of pre-osteoblasts, but the biological mechanisms involved in this process need to be clarified. In this study, the effects of bone demineralization were studied on the repair of onlay bone grafts whose contact surfaces were demineralized by tetracycline hydrochloride (TCN) at a concentration of 50mg / ml or citric acid (AC) a 10% (pH = 1) for 15, 30 or 60 seconds (n = 6). Control grafts were performed without demineralization. After 7, 30 and 60 days, tissue blocks containing the grafts were removed from the animals and processed histotechnically for hematoxylin and eosin staining. The 30-day post-operative specimens also provided samples for immunohistochemical evaluation for osteocalcin (OCN) and tartrate resistant acid phosphatase (TRAP), markers of formation and bone resorption respectively. The qualitative analysis demonstrated more advanced stages of bone repair early in the 7 days evaluation in the demineralized groups in relation to the control. The quantitative analysis showed a significant increase in the area of newly formed bone and bone consolidation with time (two way ANOVA, p<0.05). A higher percentage area of newly formed bone occurred in the AC15 and TCN60 groups when compared to the control group in all the evaluated periods (p = 0.02). At 30 days, group C had lower percentage of consolidated surfaces than groups TCN60, TCN30 and AC15 (p = 0.0015). At 60 days, the AC60 group presented bone surfaces totally consolidated to the newly formed bone at the interface with difference in relation to the control group (p = 0.0015), which also presented lower results in relation to the AC15, TCN15 and TCN60. The immunohistochemical analysis was inconclusive to explain the histomorphometric findings. The OCN / TRAP ratio was higher in the control, AC30, TCN30 and TCN60 groups, but the localization of the immunostaining, lining the surfaces of the newly formed bone and within the medullary spaces, suggests that the observation reveals normal bone remodeling phenomena. It was concluded that the demineralization of the bone surfaces of contact between The bone graft and the receptor bed with AC or TCN for 15, 30 or 60 seconds promoted a greater area of newly formed bone tissue at the graft-bed interface than non-demineralization, especially in the earlier periods of healing. The consolidation of the newly formed bone to the graft and to the recipient bed was also higher in all the demineralized groups in relation to the control. The best results, however, were presented by groups AC15 and TCN60.

O linfoma canino é uma das neoplasias mais prevalentes em cães, diagnosticado frequentemente através de exame citológico de aspirados. A imunofenotipagem para diferenciação entre linfomas de células B e T é importante para definição prognóstica e tratamento, entretanto, dificilmente é realizada em materiais provenientes de aspirados citológicos. A citologia em meio líquido (CML) é uma metodologia automatizada de produção de esfregaços citológicos, que permite a conservação de todo o material da aspiração, e utilização do material residual para, por exemplo, produção de emblocado celular (EC) e imunocitoquímica. Este trabalho teve como objetivo aplicar a CML e EC com imunocitoquímica em amostras de linfonodos caninos suspeitos para linfoma. Além disso, pretendeu caracterizar morfologicamente as células linfoides neste tipo de preparado, comparando ao esfregaço convencional. Para isto, foram selecionados 54 cães com linfadenomegalia, 10 deles sorologicamente positivos para leishmaniose canina. Comparou-se a CML com a citologia convencional, quanto às características técnicas e testou-se dois métodos diferentes de EC: Bouin e agarose com formalina. Aplicou-se painel imunocitoquímico de anticorpos anti-CD3, anti-CD79a, anti-Pax-5 e anti-Ki67, para imunofenotipagem e determinação da proliferação celular. Adicionalmente, realizaram-se análises estatísticas para avaliação do desempenho e concordância interobservador comparada entre citologia convencional, CML e o uso conjunto de CML e imunocitoquímica do emblocado celular. Como resultado, as células linfoides apresentaram-se preservadas, com melhor definição de cromatina e nucléolos, porém com tamanho reduzido e pior definição citoplasmática, na CML. O EC de Bouin revelou grupos densos e bem definidos, que permitiram a aplicação da imunocitoquímica. Por outro lado, os emblocados de agarose, apresentaram-se frouxos, com células marcadamente dispersas, revelando-se inadequados para preparados de células linfoides. O anticorpo anti-Pax-5 mostrou-se mais adequado do que o anti-CD79a para marcação de células B em emblocados, por produzir menos fundo e pela marcação nuclear ser mais distinguível do que a citoplasmática. A concordância interobservadores da CML foi moderada (k= 0,434), enquanto a da citologia convencional foi boa (k=0,762). Ambas as técnicas exibiram a mesma acurácia e, com aplicação da CML, houve redução do percentual de amostras insatisfatórias. A CML em conjunto com EC e imunocitoquímica apresentou maior sensibilidade (75%), especificidade (99%) e acurácia (89,47%). Como conclusão, a CML em conjunto com EC e imunocitoquímica pode ser aplicada para diagnóstico de linfoma canino, com maior sensibilidade, especificidade e acurácia / Canine lymphoma is one of the most commonly treated neoplasia in dogs, frequently diagnosed through cytological smears. Differentiating B lymphomas from T lymphomas is important for prognosis and treatment, however, immunophenotyping is rarely applied to cytological preparations. Liquid-based cytology (LBC) is an automated method for producing cytological smears, allowing preservation of the residual material for other analysis, as cell block (CB) immunocytochemistry. The aim of this study was to apply LBC and cell block immunocytochemistry in the diagnosis of lymphoid samples from dogs suspected of lymphoma. Besides, we intended to characterize the lymphoid cells regarding to its morphology, comparing to conventional cytology. To accomplish these goals, 54 dogs were selected, being 10 of them with canine leishmaniasis. LBC smears were compared to conventional smears, with production of two types of CB: bouin and formalin with agarose. Also, an immunocytochemistry panel with anti-CD3, anti-CD79a, anti-Pax-5 and anti-Ki-67 was applied, for immunophenotyping and cellular proliferation determination. As results, lymphoid cells were well preserved, with better nuclear definition, but smaller size and worst cytoplasmic definition, in LBC. Bouin CBs revealed cohesive groups, which allowed immunocytochemistry. In the other hand, agarose CBs were loose, with disperse cells, inadequate for lymphoid aspirates. Anti-Pax-5 antibody was more adequate than anti-CD79a, once it produced less background and the nuclear marking was more distinct than cytoplasmic. CML interrater agreement was moderate (k=0,434), while conventional cytology agreement was good (k=0,762). Both techniques exhibited the same accuracy, and, with CML, there was reduction of unsatisfactory results. LBC with cell block immunocytochemistry presented the higher sensitivity (75,00%), specificity (99,99%) and accuracy (89,47%). As conclusion, LBC with immunocytochemistry CB can be applied for canine lymphoma diagnosis, with higher sensitivity, specificity and accuracy