Orientador: Aparecido Antonio Camacho / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Katia Mitsube Tarraga / Banca: Wagner Luís Ferreira / Resumo: A cardiotoxicidade induzida pela doxorrubicina gera remodelamento miocárdico e disfunção sistólica. O presente estudo avaliou a participação da apoptose e componentes da matriz extracelular (miofibroblastos e fibronectina) na cardiomiopatia dilatada induzida com doxorrubicina em coelhos. Foram utilizados 25 coelhos da raça Nova Zelândia, alocados em dois grupos (controle e tratados). O fármaco foi administrado por seis semanas e a ecodopplercardiografia foi realizada no momento zero e após a última administração. O remodelamento do miocárdio foi avaliado por microscopia eletrônica (varredura e transmissão) e por imunodetecção de fibras apoptóticas, miofibroblastos e fibronectina. Nos animais tratados houve redução significativa da função sistólica observada na ecodopplercardiografia e aumento das fibras apoptóticas e miofibroblastos, no ventrículo esquerdo, septo interventricular e ventrículo direito. Houve correlação negativa significativa entre o número de mitocôndrias lesadas e das células apoptóticas no septo interventricular e no ventrículo esquerdo com os índices de função sistólica. Os dados obtidos permitem inferir que a apoptose por via mitocondrial participa da disfunção sistólica observada no tratamento com doxorrubicina e que o aumento da matriz extracelular não é o principal causador de disfunção sistólica na cardiomiopatia dilatada induzida com doxorrubicina / Abstract: The cardiotoxicity induced by doxorubicin generates myocardial remodeling and systolic dysfunction. The present study evaluated the role of apoptosis and extracellular matrix components (fibronectin and myofibroblasts) in doxorubicin-induced dilated cardiomyopathy in rabbits. Twenty five New Zealand rabbits were used, allocated into two groups (control and treated). The drug was administered for six weeks and Doppler echocardiography was performed before the first and after the last administration. Myocardial remodeling was evaluated by electron microscopy (scanning and transmission) and immunodetection of apoptotic cells, myofibroblasts and fibronectin. Significant reduction in systolic function, increased apoptotic fibers and myofibroblasts were noticed in treated animals, on the left ventricle, interventricular septum and right ventricle. There was a significant negative correlation between the number of damaged mitochondria and apoptotic cells at the left ventricle and interventricular septum with systolic function, showing that the apoptosis by mitochondrial pathway plays a role on the systolic dysfunction during treatment with doxorubicin and the increase in extracellular matrix is not the primary cause of systolic dysfunction induced by doxorubicin / Doutor

Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Claudia Momo / Banca: Karen Regina Lemos / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Marcos Rogério André / Resumo: A inflamação é um componente crítico para a progressão de tumores e sua malignidade está correlacionada com a resposta inflamatória induzida por citocinas e leucócitos infiltrados no sítio tumoral. O presente estudo teve por objetivo caracterizar, por imuno-histoquímica, o infiltrado inflamatório e citocinas pró e anti-inflamatórias nos carcinomas mamários caninos e determinar a identidade molecular dos tumores em luminal A ou B, C-erbb-2 ou basal. Para isso fez-se a imunodetecção de macrófagos, linfócitos (CD4, CD8, Treg), citocinas (MIF, IL-10, IL-4 e TGF-β e IFN-ɣ), além de C-erbb-2, receptor de estrógeno e receptor de progesterona e avaliou-se as médias das imunomarcações por meio do Teste T e análise de variância nos tecidos mamários com ou sem carcinomas. Houve diferença estatística (p<0,0001) entre o grupo controle e o grupo de animais com carcinoma mamário simples em todos os parâmetros avaliados, apresentando aumento nas médias de animais acometidos por neoplasias. Quando ocorreu a divisão por tipo histológico, todos os anticorpos apresentaram diferença com o grupo controle (p<0,0001). Os carcinomas mamários simples (tubulares e papilares) apresentaram aumento na contagem de macrófagos, linfócitos T, linfócitos T auxiliares, T regulatórios, assim como, aumento na imunomarcação das citocinas MIF, IL-10, IL-4 e TGF-β em comparação ao grupo controle. Os carcinomas mamários sólidos tiveram menor detecção de macrófagos e das subpopulações de linfócitos T, bem como de IFN-ɣ, IL-4 e TGF-β, possivelmente por um menor estímulo do sistema imune como mecanismo de evasão. Os macrófagos e linfócitos T CD4, bem como a citocina IL-10 foram predominantes no padrão tubular. Os carcinomas mamários caninos apresentam um perfil celular e de citocinas com ação pró-tumor, favorecendo seu crescimento e metástase. Na identificação molecular os tumores basais apresentaram menor... / Abstract: Inflammation is a critical component of tumor progression and its malignancy is correlated with the inflammatory response induced by cytokines and infiltrating leukocytes in the tumor site. This study aimed to characterize, by immunohistochemistry, the inflammatory infiltrate and pro- and anti-inflammatory cytokines in canine mammary carcinomas and determine the molecular identity of tumors in luminal A or B, C-erbB-2 or basal. For this, we made immunodetection of macrophages, lymphocytes (CD4, CD8, Treg), cytokines (MIF, IL-10, IL-4 and TGF-β and IFN-ɣ), further on c-erbB-2, estrogen receptor and progesterone receptor and evaluated the average of immunostainings through the T test and analysis of variance in the breast tissue with or without carcinomas. There was statistical difference (p <0.0001) between the control group and the group of animals with simple breast carcinoma in all parameters, an increase in average animal affected by cancer. When the split occurred by histological type, all antibodies showed differences with the control group (p <0.0001). Simple breast carcinoma (papillary and tubular) showed increased macrophage counts, T lymphocytes, T helper lymphocytes, regulatory T as well as increase in the immunostaining of the cytokines MIF, IL-10, IL-4 and TGF-β compared to control group. The solid breast carcinomas have had a decreased of macrophages and subsets of T lymphocytes and IFN-ɣ, IL-4 and TGF-β, possibly for less stimulation of the immune system as evasion mechanism. The macrophages and T CD4 + lymphocytes and IL-10 cytokine were prevalent in the tubular pattern. The canine mammary carcinomas have a cell profile and cytokines with pro-tumor action, favoring their growth and ... / Doutor

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Coorientador: Edilson Ervolino / Banca: Adriana Campos Passanezi Sant'Ana / Banca: Alvaro Francisco Bosco / Resumo: Este estudo avaliou, histoquimicamente e imunoistoquimicamente, a influência do plasma rico em plaquetas (PRP), da terapia com laser em baixa intensidade (LLLT) ou da associação de ambos na cicatrização de defeitos de fenestração periodontal (DFP) em ratos. DFP foram criados cirurgicamente na mandíbula de 80 ratos. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos: 1) C (controle) e 2) PRP - defeitos preenchidos com coágulo sanguíneo ou PRP, respectivamente; 3) LLLT e 4) PRP/LLLT - defeitos receberam aplicação da LLLT, foram preenchidos com coágulo sanguíneo ou PRP, respectivamente e irradiados novamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 ou 30 dias pós-operatórios. As fibras colágenas imaturas e maduras foram avaliadas por análise histoquímica e suas porcentagens calculadas. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para fator de transcrição relacionado à Runt (Runx2), osteocalcina (OCN), osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP). Células Runx2-positivas foram quantificadas. Um método semi-quantitativo foi usado para avaliar a imunomarcação de OCN, OPN e ALP. Os dados foram analisados estatisticamente. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas porcentagens de fibras colágenas imaturas e maduras dos grupos experimentais quando comparadas ao grupo controle. Aos 10 dias, os grupos PRP e PRP/LLLT apresentaram número de células Runx2-positivas significativamente maior que o controle; o grupo PRP/LLLT apresentou padrões de imunomarcação de OCN e OPN significativamente maiores que o controle e não houve diferenças estatisticamente significativas no padrão de imunomarcação de ALP. Aos 30 dias, diferenças estatisticamente significativas não foram Resumo observadas nos padrões de imunomarcação de OCN, OPN e ALP entre os grupos experimentais... / Abstract: This study histochemically and imunoistochemically evaluated the influence of platelet-rich plasma (PRP), low-level laser therapy (LLLT), or their combination on the healing of periodontal fenestration defects (PFD) in rats. PFD were surgically created in the mandible of 80 rats. The animals were randomly divided into 4 groups: 1) C (Control) and 2) PRP - defects were filled with blood clot or PRP, respectively; 3) LLLT and 4) PRP/LLLT - defects received laser irradiation, were filled with blood clot or PRP, respectively, and then irradiated again. Animals were euthanized at either 10 or 30 days post-operative. Immature and mature collagen fibers were histochemically evaluated and their percentages were calculated. Runtrelated transcription factor 2 (Runx2), osteocalcin (OCN), osteopontin (OPN) and alkaline phosphatase (ALP) immunohistochemical staining were performed. Runx2-positive cells were quantified. A semi-quantitative method was used to evaluate OCN, OPN, and ALP immunolabeling pattern. Data were statistically analyzed. Statistically significant differences were not observed in the percentages of immature and mature collagen fibers when each experimental group was compared to control. At 10 days, PRP and PRP/LLLT groups presented a significantly higher number of Runx2-positive cells than control; PRP/LLLT presented significantly higher OCN and OPN immunolabeling than control; and statistically significant differences were not observed in the ALP immunolabeling. At 30 days, statistically significant differences were not observed in the OCN, OPN and ALP immunolabeling among the experimental groups... / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Custódio Domingues / Banca: Maria Cláudia Nogueira Zerbini / Banca: Roberto Antonio Pinto Paes / Banca: Alexandre Todorovic Fabro / Banca: Elida Paula Benquique Ojopi / Resumo: Introdução: Linfomas Double-Hit (LDH) são neoplasias de alto grau raras, caracterizadas pela translocação do gene MYC concomitante a translocação envolvendo os genes BCL2 e/ou BCL6, cujo diagnóstico depende da realização de exame citogenético, técnica de baixa disponibilidade e elevado custo. Diante disso, tem-se valorizado a identificação de fatores morfológicos e/ou imunofenotípicos que tenham associação com a detecção de tais translocações diagnósticas. Objetivos: Identificar pacientes portadores de LDH em casuística de linfomas Não-Hodgkin de alto grau e avaliar as associações entre os resultados citogenéticos imunoistoquímicos (IHQ) relativos aos marcadores MYC, BCL2 e BCL6. Material e Métodos: Procedeu-se revisão clínico-morfológica de 120 pacientes com diagnóstico de linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) e linfoma de Burkitt (LB), com confecção de plataforma de tissue microarray (TMA) para realização IHQ (CD20, CD79a, PAX5, CD10, BCL6, BCL2, MUM1, TDT e c-MYC) e hibridação por fluorescência in situ (FISH) para detecção de translocações dos genes c-MYC, BCL6 e BCL2. Resultados: Detectaram-se três pacientes portadores de LDH: dois com translocações de MYC e BCL2 e um com translocações de MYC e BCL6, todos evoluindo para óbito em menos de seis meses. Entre 90 amostras com citogenética avaliável, houve associação entre IHQ e FISH para MYC (p=0,036) e BCL2 (p=0,001), com concordância regular indicada por valores de Kappa de 0,23 [0,0;0,49] e de 0,35 [0,13;0,56], respectivamente. No grupo de LDGCB (n=72), as translocações envolvendo individualmente os genes MYC, BCL6 e BCL2 representaram 4,1%, 12,5% e 15,2%, respectivamente, sendo a morfologia de céu estrelado fortemente associada à detecção de translocações do gene MYC (p=0,01). Conclusão: A detecção de apenas três pacientes portadores de LDH na casuística estudada, todos com evolução para óbito, corrobora... / Abstract: Background: Double-Hit Lymphomas (DHL) are rare high-grade neoplasms characterized by the translocation of gene MYC to other translocations involving genes BCL2 and/or BCL6, whose diagnosis depends on the cytogenetic examination, a technique with low availability and high cost. Therefore, it has been valued the identification of morphologic and/or immunophenotypic factors that have association with the detection of those translocations. Objectives: To identify DHL patients in group of high grade non-Hodgkin lymphoma (NHL-B) and evaluate the associations between the cytogenetic and immunohistochemical (IHC) results for the MYC, BCL2 and BCL6 markers. Design: Clinical and morphological review of 120 patients diagnosed with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and Burkitt lymphoma (BL) was proceeded, with production of a tissue microarray platform (TMA) to perform IHC (CD20, CD79a, PAX5, CD10, BCL6, BCL2, MUM1, TDT and c-MYC) and fluorescence in situ hybridization (FISH) for detection of c-MYC, BCL2 and BCL6 gene translocations. Results: Three patients with DHL were detected: two with translocations of MYC and BCL2 and one with translocations of MYC and BCL6, all leading to death in less than six months. Among 90 cytogenetically evaluable samples, associations were determined between IHC and FISH for MYC (p=0.036) and BCL2 (p=0.001), though with regular compliance testing, indicated by Kappa value of 0.23 [0.0;0.49] and 0.35 [0.13;0.56], respectively. In the DLBCL group (n=72), MYC, BCL6 and BCL2 translocations were present in 4.1%, 12.5% and 15.2%, respectively. "Starry sky" morphology was strongly associated with MYC positivity (p=0.01). Conclusion: The detection of only three DHL patients in this series, all evolving to death, confirms the rarity and aggressiveness of this neoplasm. The morphological pattern "starry sky" and the expression by IHC of MYC and BCL2 can represent possible selection factors for the ... / Doutor

Orientador: Noeme Sousa Rocha / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Cleverson Teixeira / Resumo: O carcinoma mamário é uma doença relativamente frequente entre as cadelas na faixa etária de 10 anos e apresenta morbidade importante, com expectativa de sobrevida média de 5 anos. A citoinclusão é usada rotineiramente na Medicina como método de escolha na investigação, pela rapidez que fornece subsídios para prever a resposta terapêutica. Entretanto, para a cadela se desconhece a aplicação da tal técnica, portanto, o estudo objetivou correlacionar os padrões morfológicos dos tumores mamários caninos encontrados na técnica de citoinclusão e na análise histológica da peça cirúrgica e comparar a marcação de RE, RP e CK5 nos os dois métodos em 25 amostras de carcinoma mamário. A citoinclusão e espécime cirúrgico foram submetidos ao processamento histológico, confecção das lâminas para coloração de hematoxilina-eosina (HE) e posterior reação imunoistoquímica (IQ) para receptores de estrógeno α (RE), progesterona (RP) e citoqueratina 5 (CK5). Foram consideradas positivas as marcações das células neoplásicas acima de 1% para RE e RP, e acima de 10% para CK5. Pela coloração de HE houve 100% de concordância no diagnóstico das neoplasias entre técnica de citoinclusão e análise histopatológica. A imunoistoquímica apresentou sensibilidade de 85,71%, 95,45% e 100% e índice Kappa de Cohen de 0,78, 0,84, e 0,95 para o RE, RP e CK5 respectivamente, e 100% de especificidade e p<0,01 para os três marcadores. Portando, a citoinclusão trata-se de um método acessível, rápido e de baixo custo, que oferece alta sensibilidade no diagnóstico citomorfológico e imunoistoquímico de carcinoma mamário em cadelas / Abstract: Breast carcinoma in a dog is a disease relatively frequent in bitches of 10 years old, displays important morbidity and evolve to death. The cell block for the diagnosis of injury in women is the method of choice in the investigation, because it provides subsidies to provide for response to therapy. However, for the dog is unknown the application of this technique, therefore, this study aimed to correlate the morphological patterns of canine mammary tumors between cell block technique and surgical specimen and compare the immunohistochemical marking of ER, PR and CK5 between the two methods in 25 samples. The cell block and surgical specimens were submitted to histological processing, preparation of slides for HE and subsequent immunohistochemistry (IQ) for estrogen receptor α (ER), progesterone (PR) and cytokeratin 5 (CK5). Were considered positive for ER and PR cases where there was marking on more than 1% of neoplastic cells and for CK5 the cases where there was marking on more than 10% of neoplastic cells. The level of agreement between the cell block and the surgical specimen was 86.9% for CK5 and 82.6% for the RE. For the HE staining was 100% agreement for the diagnosis of cancer between the techniques. Immunohistochemistry showed a sensitivity of 85.71%, 95.45% and 100% and Cohen's Kappa index of 0.78, 0.84, and 0.95 for ER, PR and CK5 respectively, and 100% specificity and p <0.01 for all three markers. Therefore the citoinclusão it is an affordable method, fast and low cost, which offers high sensitivity in immunohistochemical marker and in cytomorphological diagnosis of mammary carcinoma in female dogs / Mestre

Resumo:Nós investigamos a presença de formas promastigotas de Leishmania spp. pelo método de imuno-histoquímica em intestinos, ovários e glândulas salivares de carrapatos Rhipicephalus sanguineus em cães. Neste estudo, foram utilizados, 66 cães positivos e 33 negativos para Leishmania spp. pelo teste Imunoenzimático (ELISA), por exame citológico direto e por meio do método da Reação em cadeia da polimerase (PCR). Um total de 990 carrapatos foram colhidos desses 99 cães, sendo 10 por animal e estes foram dissecados, com posterior separação dos intestinos, ovários e glândulas salivares. Lâminas contendo os órgãos supramencionados foram confeccionadas para a execução da imuno-histoquímica (IHQ). Também foi efetuada a PCR em tempo real desses órgãos, bem como a quantificação da sua carga parasitária. Pela PCR em tempo real dos intestinos, ovários e glândulas salivares dos carrapatos, foram detectadas positividades de 93,94%, 46,97% e 27,27%, respectivamente. As cargas parasitárias médias no intestino foram de 9027,90 Leishmania/μL, nos ovários 411,66 Leishmania/μL e nas glândulas salivares 305,56 Leishmania/μL. Com relação as leituras das lâminas de IHQ, em 98,48% dos intestinos, 13,64% dos ovários e 7,58% das glândulas salivares houve imunomarcação positiva para Leishmania spp. Em virtude destes resultados evidenciados pela técnica de IHQ, com utilização do anticorpo primário lipofosfoglicano (LPG), nós consideramos a possibilidade da presença de formas promastigotas de Leishmania spp. em órgãos de R. sanguineus / Abstract:We investigated the presence of promastigotes of Leishmania spp. by immunohistochemical method in intestines, ovaries and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus ticks in dogs. In this study, was used, 66 dogs positive and 33 negative for Leishmania spp. by immunoenzymatic test (ELISA), direct cytological examination and by polymerase chain reaction (PCR). A total of 990 ticks were collected from these 99 dogs, 10 per animal and these were dissected, with further separation of the intestines, ovaries and salivary glands. Slides of these organs were made for the implementation of immunohistochemistry (IHC). Also the real-time PCR was performed in these organs as well as the quantification of that parasite load. For real-time PCR of the guts, ovaries and salivary glands of ticks were detected positivities 93.94%, 46.97% and 27.27%, respectively. The average parasitic loads in the intestine were 9027.90 Leishmania/μL, the ovaries 411.66 Leishmania/μL and salivary glands 305.56 Leishmania/μL. Regarding the readings of IHC slides in 98.48% of the intestines, 13.64% of the ovaries and 7.58% of the salivary glands were positive for Leishmania spp. In view of these results shown by IHC technique, using the lipofosfoglicano primary antibody (LPG), we consider the possibility of the presence of promastigotes of Leishmania spp. in R. sanguineus organs / Orientador:Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Jancarlo Ferreira Gomes / Banca:Suely Regina Mogami Bomfim / Banca:Gisele Fabrino Machado / Banca:Mônica Regina Vendrame Amarante / Doutor

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Carlos Roberto Teixeira / Banca: Lílian Rigatto Martins / Banca: Nei Moreira / Resumo: O acetato de deslorelina promove uma contracepção de longa duração segura e eficaz, porém a reversibilidade espontânea é progressiva e assincrônica. O objetivo geral foi avaliar os efeitos do acetato de deslorelina sobre a produção in vivo e in vitro de embriões de gatas domésticas. Para tanto foram realizados 2 experimentos. Experimento 1: Objetivou-se avaliar a taxa de produção de embriões in vitro em gatas tratadas com acetato de deslorelina. Foram utilizadas 21 fêmeas (Tratado n=11 e Controle n=10). Onze gatas receberam um implante de deslorelina (4,7mg/animal) e o tratamento durou 6 meses. Após o tratamento, todas as fêmeas (Tratado e Controle) foram submetidas à OSH para que seus ovários fossem incluídos em rotinas de produção de embriões in vitro (PIV). A taxa de recuperação de COC foi submetida ao teste t de Student. As taxas de clivagem e blastocisto foram expressas em porcentagem e submetidas ao teste exato de Fisher. Todas as análises foram realizadas no programa GraphPad v5.0, P<0.05. Uma gata apresentou galactorréia e foi retirada do grupo experimental. Foram obtidos 184 COC grau I, a taxa de clivagem foi em média de 55,97% (total de 103 mórulas) e de blastocisto de 33,99% (total de 33 blastocistos) no grupo Controle. Já no grupo Tratado foram obtidos 83 COC grau I e a taxa de clivagem foi em média 60,24% (total de 50 mórulas) e de blastocisto foi de 36% (total de 18 blastocistos). Só houve diferença estatística entre os grupos na taxa de recuperação de COC grau I. A taxa de recuperação de COC foi menor em gatas tratadas, porém a PIV apresentou taxas similares à de fêmeas não tratadas. Devem-se considerar as variações individuais no grupo tratado. Experimento 2: Objetivou-se avaliar a produção de embriões in vivo, a taxa de concepção, bem como a presença de receptores de estrógeno e progesterona no útero, e receptores de LH e FSH em ovários de gatas submetidas ao tratamento com... / Abstract: Deslorelin acetate promotes a long, safe and efficient contraception; however reversibility is consider progressive and asynchronous. We aim to evaluate the effects of deslorelin acetate on in vitro and in vivo embryo production in domestic cats. For that 2 experiments were performed. Experiment 1: The objective was to investigate the effect of contraceptive treatment with deslorelin acetate in in vitro embryo production and oocyte recovery in domestic queens. Twenty one queens (Treated n=11 and Control n=10) and one tom were used. Eleven queens were treated with deslorelin acetate (4.7mg/animal) during 6 months. Thereafter all females (treated and control) were spayed and the ovaries were included in in vitro embryo production routines (PIV). Rate of COC recovery was submitted to t test. Cleavage and blastocyst rate were expressed in percentage and submitted to Fisher's exact test. All analyses were performed in GraphPad Pisma v5.0 program, P < 0.05. One female developed galactorrhoea and was removed from experimental group. In Control group we recovered 18.4±3.21 of COC I, cleavage rate was 55.97% and blastocyst rate was 33.99%.In Treated group we recovered 8.3±1.15 of COC I, cleavage rate was 60.24% and blastocyst rate was 36%. Statistical difference was only observed in COC recovery, were treated cats had fewer than control group. Although we didn't found differences on embryo production, individual variation must be considered. Experiment 2: We aimed to evaluate in vivo embryo production, trough pregnancies, and also identify estrogen (ER-α) and progesterone (PgR) receptors in uterus and FSH (FSH-R) and LH (LH-R) receptors in ovaries from queen treated with deslorelin acetate. We used 25 queens and one tom, 15 queens were treated with deslorelin acetate (4.7mg/animal) for 3 months. After that, all implants were removed and estrous and ovulation was induced. After 24hs five queens were maintained with one tom and mating was ... / Doutor

Orientador: Luiz Henrique de Araújo Machado / Banca: Marconi Rodrigues de Farias / Banca: Priscylla Tatiana Chalfun Guimarães-Okamoto / Resumo: A dermatite atópica é uma doença de pele alérgica, inflamatória e pruriginosa que acomete cães geneticamente predispostos. A característica mais comum é o prurido que exerce impacto significativo na qualidade de vida do animal bem como do seu proprietário. A interleucina-31 (IL-31) é uma citocina envolvida com o grau de prurido nas alergopatias, enquanto a filagrina (FLG) é uma proteína relacionada com a adequada queratinização e hidratação do estrato córneo. O intuito desse estudo foi padronizar e quantificar a técnica de imunohistoquímica (IHQ) para IL-31 e filagrina e associa-las ao grau de prurido e restauração de barreira cutânea na dermatite atópica antes e após o tratamento tópico com repositor de lipídeos na epiderme. Todos os cães foram provenientes do atendimento clínico do Hospital Veterinário da FMVZ- Unesp Botucatu-SP. Sobre a IL-31 não houve diferença significativa entre sua expressão quando comparadas as regiões dorsal e axilar de cães normais. Quando comparamos a expressão da IL-31 entre cães com dermatite atópica e saudáveis foi possível notar maior expressão de IL-31 em cães com dermatite atópica. Quando comparamos os cães com dermatite atópica antes e após aplicação do repositor de lipídeos na epiderme a expressão da IL-31 diminuiu significativamente após a aplicação. Em se tratando da proteína filagrina não foi encontrada diferença significativa entre sua expressão quando comparadas a região axilar e cervical de cães saudáveis, o mesmo ocorreu entre essas regiões em cães com dermatite atópica antes do tratamento e após o tratamento, quando comparados de maneira isolada. Quando comparamos as regiões axilar e cervical dos cães com dermatite atópica antes e após o tratamento não houve o aumento da expressão da proteína filagrina como o esperado. Houve diferença significativa entre as regiões cervical e axilar de cães com dermatite atópica quando comparados... / Abstract: Atopic dermatitis is an allergic, inflammatory and pruritic skin disease affecting genetically predisposed dogs. The most common feature is cutaneous rash that significantly impacts the animals' and owners' quality of life. Interleukin-31 (IL-31) is a cytokine involved in the degree of itching in allergies, while filaggrin (FLG) is a protein associated with adequate hydration and keratinization of the stratum corneum. The purposes of this study were to standardize the technique of immunohistochemistry (IHC) for IL-31 and filaggrin and to quantify and associate them to the degree of itching and skin barrier recovery in dogs with atopic dermatitis before and after topical treatment for lipids restitution in the epidermis. All dogs came from the clinical care of the Veterinary Hospital of FMVZ- Unesp Botucatu. There was no significant difference on the expression of IL-31 between samples obtained either from the dorsal or axillary regions of healthy dogs. When atopic dermatitis and healthy animals were compared, expression of IL-31 was noticeable higher in atopic dermatitis animals. IL-31 quantification in the atopic dermatitis animals evidenced significantly lower expression after the use of skin lipids complex in the epidermis. In the case of filaggrin protein, there was no significant difference between its expression when the axillary and cervical sites were compared both in healthy dogs and atopic dermatitis dogs and also when atopic dermatitis dogs were compared before and after treatment. Nevertheless significant difference in fillagrin levels was observed between the cervical and axillary regions of atopic dermatitis dogs when compared to healthy dogs; filagrina levels in healthy animals were larger than in atopic dermatitis dogs. IL-31 results suggest that this cytokine is involved in the physiology of atopic pruritus and that restitution of the skin epidermal barrier is essential so that we can control the pruritus and immunological... / Mestre

Orientador: Eduardo Hochuli-Vieira / Banca: Idelmo Rangel Garcia Júnior / Banca: Leonardo Perez Faverani / Banca: Nicolas Homsi / Banca: Joel Ferreira Santiago Junior / Resumo: A deficiência óssea vertical do seio maxilar impossibilita a instalação de implantes dentais necessários para a reabilitação protética contudo, técnicas cirúrgicas para a elevação da membrana sinusal e o uso dos biomateriais para enxertia óssea permitiram alterar esta condição. O ósseo autógeno é considerado o mais previsível e o padrão ouro para tal finalidade porém, biomateriais como o vidro bioativo, amplamente utilizado na odontologia, permitem substituí-lo. O objetivo deste estudo foi avaliar formação óssea, o comportamento celular e a taxa de reabsorção do vidro bioativo em 2 proporções: puro (grupo 1); adicionado ao osso autógeno 1:1 (grupo 2), comparando com o osso autógeno (grupo 3) em seios maxilares de humanos. Com 15 dias de operados os pacientes realizaram um tomografia computadorizada (TC) cone beam para determinar o volume inicial do enxerto (T1). Após 6 meses uma nova TC foi realizada determinando o volume ósseo final (T2) e também, a coleta das biópsias com a instalação simultânea de implantes dentais. As amostras foram divididas em 3 áreas: leito, intermediária e apical onde foram avaliadas a histomorfometria e imunomarcações para Runx2, VEGF, osteocalcina e TRAP. No grupo 1 os resultados foram de 42.6%, 44.5% e 48% de formação óssea no leito, intermediária e apical respectivamente. No grupo 2 as taxas encontradas foram de 36.6% no leito, 33.2% na intermediária e 45.8% na apical. No grupo 3 foi de 34.4% para o leito, 35.0 na intermediária e 42.0% na apical. (p>0.05) Os 3 grupos apresentaram-se com comportamento semelhante nas imunomarcações realizadas mostrando estar maturado e calcificado o suficiente para receber implantes dentais. As taxas de reabsorção também mostraram-se semelhantes com 44.2% para o grupo 1, 37.9% para o grupo 2 e 45.7% no grupo 3. (p>0.05) Assim, podemos concluir que o vidro bioativo possui resultados equiparados ao osso autógeno / Abstract: Vertical bone deficit due maxillary sinus pneumatization forbid the dental implants placement required for prosthetic rehabilitation however, surgical techniques to elevate maxillary sinus membrane and studies about biomaterials, allows repair these situation. Autogenous bone graft is considered the most predictable and the gold standard for this nevertheless, biomaterials as bioactive glass, has been widely used in dental surgery and allows substitute it. The aim of this study was evaluate the bone formation, the cellular behavior and the resorption rates of bioactive glass in 2 proportions: pure (group 1); add to autogenous bone graft (group 3), comparing then with autogenous bone graft in human maxillary sinus. Post-operative cone beam computed tomography (CT) was used to measure the initial graft volume after 15 days (T1). Six months later, another CT was performed to evaluate the final graft volume (T2) and determine the graft resorption rate and the harvest of biopsies with dental implants placement simultaneously. The samples were divided in 3 areas: bed, intermediately and apical which were evaluated to histomorphometric and immunostaining to Runx2, VEGF, osteocalcin and TRAP. In group 1 the bone formation were 42.6%, 44.5 and 48.0% for bed, intermediately and apical respectively. In group 2 the rates were 36.6% in bed, 33.2% in intermediately and 45.8% in apical. In group 3 were 34.4% in bed, 35.0% in intermediately and 42.0% in apical. (p>0.05) the 3 groups had the same behavior for the 4 proteins showing be matured and calcified to receive dental implants. The resorption rates were similar for the 3 groups with 44.2% % for group 1, 37.9% for group 2 and 45.7% for group 3. (p>0.05) In conclusion, the bioactive glass is a good substitute to autogenous bone graft in both proportions evaluated / Doutor

Orientador: Noeme Sousa Rocha / Resumo: O Osteossarcoma (OSA) refere-se ao tumor ósseo mais comum em cães. A citoinclusão compreende o ato de inserir amostras citológicas em blocos de parafina, auxiliando na qualidade do diagnóstico citológico e obtendo espécimes de reserva para serem utilizadas em outras técnicas, incluindo imunoistoquímica. Com o intuito de avaliar a sensibilidade, especificidade e descrição da técnica de citoinclusão no diagnóstico de OSA de ossos longos de cães, 11 cães de oito a 13 anos com diagnóstico de OSA foram submetidos a exames citológicos, histopatológicos e, técnica da citoinclusão. Para a citoinclusão, foi feita a punção do tumor, fixação com 1mL de álcool a 95%, deixado em repouso por cinco minutos na própria seringa e, aspirou-se aproximadamente 9 mL de formol a 10% e manteve-se fixado por mais 24 horas, mantendo a seringa posicionada para cima para decantação das células. Como imunomarcador, utilizou-se a osteopontina. Em razão da maior preservação arquitetural, a avaliação a partir das amostras de citoinclusão, verificou-se parte de relações arquiteturais mais bem estabelecidas do que em amostras de esfregaços, auxiliando na caracterização do processo. Houve concordância da citoinclusão com a histopatologia e marcação imunoistoquímica de osteopontina positiva com alta sensibilidade e especificidade. É possível afirmar, que a técnica de citoinclusão é eficaz, segura para pesquisa de marcadores prognósticos de tumores ósseos em menor espaço de tempo e baixo custo podendo ser utiliz... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor