Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-12-02T15:05:49Z No. of bitstreams: 1 2014_MarciaCristinaOliveiradaRocha.pdf: 4612464 bytes, checksum: a165c67c0f9b900d45eb357bc3724bff (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-12-02T15:16:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MarciaCristinaOliveiradaRocha.pdf: 4612464 bytes, checksum: a165c67c0f9b900d45eb357bc3724bff (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-02T15:16:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MarciaCristinaOliveiradaRocha.pdf: 4612464 bytes, checksum: a165c67c0f9b900d45eb357bc3724bff (MD5) / O câncer de mama é o principal fator de morte nos países desenvolvidos e está em segundo lugar nos países em desenvolvimento, sendo o mais comum entre as mulheres. Com o aumento da incidência do câncer de mama e suas limitações terapêuticas, faz-se necessário uma busca por alternativas. Assim, a nanobiotecnologia está a progredir rapidamente, de modo a contribuir na resolução das limitações observadas na terapia convencional. O citrato de ródio II [Rh2(H2cit)4], um composto metálico, descrito como um análogo a cisplatina pertencente à família dos carboxilatos de ródio, apresentou atividade antitumoral em carcinoma ascítico de Ehrlich, entretanto possui sua atividade limitada devido à sua toxicidade. Portanto, a associação do citrato de ródio (II) a nanopartículas magnéticas [Magh-Rh2(H2cit)4], representa uma estratégia terapêutica que pode reduzir a toxicidade do citrato de ródio e, assim, melhorar sua ação terapêutica. Um dos fatores relacionados à progressão desta doença relaciona-se ao processo de degradação da matriz extracelular. Células tumorais tem a habilidade de obter as condições necessárias para crescer e sobreviver, promovendo processos de degradação de proteínas da matriz extracelular, como a laminina e fibronectina. O objetivo deste trabalho foi verificar se os tratamentos com Rh2(H2cit)4, Magh-Cit e Magh-Rh2(H2cit)4possuem alguma influência na modulação da expressão das proteínas laminina e fibronectina. Foram injetadas células da linhagem de carcinoma mamário 4T1 para o estabelecimento do tumor na mama de camundongos BALB/c fêmeas. Após 14 dias, os animais foram tratados com Rh2(H2cit)4 livre (8 mg/kg), Magh-Rh2(H2cit)4 (8 mg/kg de citrato de ródio e 216 mg/kg de ferro) e nanopartículas de maghemita (Magh-Cit) (216 mg/kg de ferro), por administração intratumoral. Os tratamentos foram realizados a cada dois dias, totalizando cinco aplicações. Os pesos dos animais não foram alterados com os tratamentos. Nos parâmetros bioquímicos houve uma redução significativa de transaminase pirúvica nos animais controle com tumor e tratados com Magh-Rh2(H2cit)4. Nos parâmetros hematológicos foi observada uma redução do volume plaquetário médio nos animais tratados com Magh-Cit e Magh-Rh2(H2cit)4 e um aumento significativo na contagem de leucócitos nos tratamentos com Magh-Cit e Rh2(H2cit)4. Não foram observadas diferenças significativas no volume e peso do tumor. Quanto à genotoxicidade, foi observado um aumento significativo da fragmentação do DNA e um aumento na proporção de células que se encontravam na fase G1 dos animais com tumor que não receberam tratamento. A expressão das proteínas laminina e fibronectina, foi analisada por imunohistoquímica e não foram observadas diferenças significativas entre os grupos. Os genes codificantes de laminina e fibronectina analisados por RTq-PCR, não apresentaram amplificação, possivelmente por ter uma baixa quantidade de transcritos, portanto, não sendo possível sua detecção. Os tratamentos não produziram uma redução significativa no tumor. Acredita-se que com o ajuste adequado da dose, essas composições podem apresentar um potencial terapêutico para o câncer de mama. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Breast cancer is the leading factor of death in developed countries and is on the second place in developing countries, and the most common among women. To the increased incidence of breast cancer and its therapeutic limitations it is necessary a search for alternatives. Thus, nanobiotechnology is progressing rapidly in order to solve these limitations of conventional therapy. The rhodium (II) citrate [Rh2(H2cit)4], a metal compound, described as a cisplatin analogue belonging to the family of the carboxylates of rhodium showed antitumor activity in Ehrlich ascites breast carcinoma, however, it has limited activity due to its toxicity. Therefore, the association of rhodium (II) citrate with magnetic nanoparticles [Magh-Rh2(H2cit)4] could represent a therapeutic strategy that can reduce the toxicity of rhodium citrate and improve a therapeutic action. One of the factors related to the progression of this disease is the process of extracellular matrix degradation. Tumor cells have the ability to obtain the necessary conditions for growth and survival, promoting the degradation processes of extracellular matrix proteins, such as laminin and fibronectin. The objective of this study was to determine if the treatments with, Rh2(H2cit)4, Magh-Cit and Magh-Rh2(H2cit)4 have some influence in modulating the expression of laminin and fibronectin proteins. 4T1 mammary carcinoma cells were used for establishing the tumor breast in BALB/c mice. After 14 days, animals were treated with free rhodium (II) citrate, rhodium (II) citrate loaded maghemite nanoparticles and maghemita nanoparticles by intratumoral administration. Treatments were carried out every two days, a total of five applications. The animal weights were not changed with the treatments. Biochemical parameters had a significant reduction of pyruvic transaminase in control animals with tumor and treated with Magh-Rh2(H2cit)4. Hematological parameters has a reduction in mean platelet volume in animals treated with Magh-Cit and Magh-Rh2(H2cit)4 and a significant increase in leukocytes count in the treatments with Magh-Cit and Rh2(H2cit)4 was observed. No significant differences in the volume and weight of tumors were observed. About genotoxicity, there were a significant increase in DNA fragmentation and an increase in the proportion of cells that were in the G1 phase of the non-treated animals. The expression of laminin and fibronectin proteins was analyzed by immunohistochemistry and no significant differences were observed between groups. The laminin and fibronectin genes, analyzed by RTq-PCR, showed no amplification, possibly by having low amount of these transcripts, so it was not possible to detect. The treatment did not produce a significant reduction in the tumor. It is believed that with appropriate dose adjustment, these compositions may have a therapeutic potential for breast cancer.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Carolina Campos (carolinacamposmaia@gmail.com) on 2009-11-13T19:56:50Z No. of bitstreams: 1 Sinthia Maria Benigno Puttini.pdf: 862377 bytes, checksum: e105e0b4c7b45b25d93c695e82404996 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-11-15T16:25:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Sinthia Maria Benigno Puttini.pdf: 862377 bytes, checksum: e105e0b4c7b45b25d93c695e82404996 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-15T16:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sinthia Maria Benigno Puttini.pdf: 862377 bytes, checksum: e105e0b4c7b45b25d93c695e82404996 (MD5) Previous issue date: 2006 / As telas de polipropileno (PP) e politetrafluoretileno expandido (PTFEe) representam os biomateriais mais comumente utilizados no reparo de hérnias da parede abdominal. O implante de próteses modifica o processo de cicatrização. Além dos mecanismos celulares, vários mediadores químicos estão envolvidos no processo de reparo tecidual. Apesar da resposta inflamatória desencadeadas pela presença de telas implantadas no espaço intraperitoneal já ter sido descrita, mediadores químicos envolvidos neste processo ainda não foram demonstrados. O objetivo do estudo foi avaliar a resposta inflamatória desencadeada pela presença destes biomateriais cirurgicamente implantados no espaço intraperitoneal de camundongos. Foram utilizados 32 camundongos isogênicos machos, distribuídos em 2 grupos: PP (implante de telas de PP) e PTFEe (implante de telas de PTFEe) e sacrificados no 5º, 10º, 20º e 30º dia de pós-operatório (DPO). Os fragmentos retirados foram preparados para análise histopatológica utilizando coloração Hematoxilina/Eosina e imunohistoquímica para demonstração de óxido nítrico sintase induzida (iNOS), superóxido dismutase 1 (SOD1), ciclooxigenase 2 (COX2), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e inteleucina 8 (IL-8). As telas de PP determinaram reação cicatricial, com total integração da tela aos tecidos adjacentes, enquanto as telas de PTFEe determinaram intensa reação tipo corpo estranho, com encapsulamento da tela pelo tecido conjuntivo e células gigantes distribuídas em torno da tela. A reação inflamatória foi mais intensa no grupo PP nos parâmetros: neoformação vascular, edema, necrose e fibrose. A migração celular de macrófagos e polimorfonucleares foi mais intensa no grupo PTFEe com 5 dias e 10 dias respectivamente, mas com 30 dias, a presença destas células foi mais intensa no grupo PP. A expressão das enzimas iNOS, SOD1, COX-2 e das citocinas TNF-α e IL-8 foi mais intensa no grupo PP em relação ao grupo PTFEe. As enzimas e citocinas estudadas estiveram presentes mesmo após 30 dias. A expressão de enzimas pró-inflamatórias no processo de cicatrização decorrente da presença de biomateriais sugere a presença de substâncias agressoras como radicais livres de oxigênio, óxido nítrico e prostaglandinas que podem estar envolvidos nas complicações relacionadas ao uso de telas. A forte presença das citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-8) com 30 dias sugere que o processo de inflamação persiste cronicamente e difere de acordo com o material implantado. Considerando os parâmetros utilizados neste estudo, a resposta inflamatória desencadeada pelas telas de polipropileno cirurgicamente implantadas no espaço intraperitoneal de camundongos foi mais intensa que as telas de politetrafluoretileno expandido. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Polypropylene and expanded polytetrafluoroethylene meshes represent the two most common biomaterials used in the repair of abdominal wall hernias. Prosthesis implanted into abdominal wall modify the scarring process. Beyond cellular mechanisms, chemical mediators are involved in the normal repair process. Although the inflammatory response to these biomaterials had been described, chemical mediators involved in this process have not been demonstrated yet. The aim of this study was to evaluate the inflammatory response to these biomaterials implanted into the abdominal wall of mice. Thirty two isogenic male mice were used, divided into two groups: PP (polypropylene mesh) and PTFEe (expanded polytetrafluoroethylene mesh). Each group of 4 animals were killed with 5, 10, 20 and 30 days after operation. Specimens of prosthesis and attached neoformed tissue were prepared for light microscopy using haematoxylin-eosin stain and immunohistochemical to identify the inducible nitric oxide synthase (iNOS), superoxide dismutase type 1 (SOD1), cyclooxigenase-2 (COX-2), tumor necrosis factor alfa (TNF-α) and interleukin 8 (IL-8). The PP group showed total integration of the mesh to the tissue, occupying all the internodal spaces while the PTFEe group showed foreign body reaction with gigantic cells and the mesh appeared to be encapsulated by connective tissue. The inflammatory response was significantly more strong in the PP group about angiogenesis, edema, necrosis and fibrosis. The macrophage and polymorphonuclear migration was bigger in the PTFEe group with 5 and 10 days after operation, but with 30 days these cells were more pronounced in the PP group. iNOS, SOD1, COX-2, TNF-α and IL-8 were more pronounced in the PP group. The enzymes and citokines studied were expressed even after 30 days of the operation. The presence of pro-inflammatory enzymes in the scarring process to biomaterials suggest the presence of agressive substances like reactive oxygen species, nitric oxide and prostaglandins that may be involved in the complications related to meshes. The strong presence of pro-inflammatory cytokines with 30 days after operation suggests that the inflammatory process persist chronically and is different according to the implanted material. In this study, the inflammatory response to polypropylene mesh implanted into the abdominal wall of mice was greater than that associated with PTFEe implantation.

Orientadores: Patricia Sabino de Matos, Konradin Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T07:31:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_RitadeCassia_D.pdf: 3204202 bytes, checksum: 19b68934360416ff1710b9848a450ced (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O diagnóstico diferencial entre algumas lesões da tireóide é, muitas vezes, difícil de ser determinado, mesmo diante de diversas amostras de tecido. O propósito deste estudo foi o de investigar até que ponto a análise de textura da cromatina em cortes histológicos de rotina contribui para o diagnóstico diferencial entre lesões foliculares da glândula tireóide. Entraram no estudo cortes histológicos corados com hematoxilina-eosina de 12 nódulos adenomatosos hiperplásicos (NA), 18 adenomas foliculares (AF), 24 carcinomas foliculares mínimamente invasores (CFMI) e 22 variantes foliculares do carcinoma papilífero (VFCP). As amostras de tecido utilizadas foram analisadas morfologicamente por meio de estudo histológico e estudo imunoistoquímico pela expressão de diferentes proteínas ou marcadores. Os marcadores utilizados foram HBME-1, CK-19 e galectina-3. Em cada caso 100 núcleos foram aleatoriamente escolhidos, digitalizados e segmentados. A estrutura dos núcleos foi descrita por morfometria, densitometria e por variáveis derivadas da matriz de co-ocorrência. Sexo, idade do paciente e metástases foram informações pesquisadas. Os resultados da análise de imagem computadorizada foram comparados com aqueles obtidos por meio de estudo imunoistoquímico, na distinção das lesões foliculares benignas e malignas da tireóide. Os dados foram comparados por análise de variância (nível de significância p<0,05). As amostras sugerem que o HBME-1 foi um marcador mais sensível quanto à malignidade. Entretanto, o uso dos três marcadores, num painel, pode ser útil em casos específicos, como por exemplo, na diferenciação de lesões foliculares, com referência especial à variante folicular do carcinoma papilífero. Dados descritos como fatores prognósticos, nas lesões foliculares malignas, não se mostraram significantes para discriminar o carcinoma folicular da variante folicular do carcinoma papilífero. As variáveis de morfometria não apresentaram grande valor discriminante, exceto, pelo P5FF4 (quinto percentil do fator de forma) que estabeleceu diferenças significantes entre AF e VFCP e entre CFMI e VFCP. Variáveis densitométricas demonstraram diferenças significantes entre NA e AF, NA e CFMI, AF e VFCP, AF e CFMI e entre CFMI e VFCP. Variáveis derivadas da matriz de co-ocorrência demonstraram diferenças entre os subgrupos, mas somente o P5Energy (quinto percentil da variável ?energia?), demonstrou diferença entre AF e CFMI. Ainda a variável r2Mink (grau de aproximação da dimensão fractal de Minkowski) diferenciou lesões benignas de malignas (NA e CFMI, NA e VFCP, AF e CFMI, AF e VFCP). A análise de textura pôde auxiliar na discriminação entre lesões benignas e malignas da tireóide principalmente quando se tratava da discriminação entre NA ou AF e VFCP, na qual a análise histológica, baseada em características nucleares pode trazer grandes dificuldades. Por outro lado, o diagnóstico entre AF e CFMI é difícil e não se baseia em características nucleares, mas no achado de invasão capsular ou vascular. Entretanto, nestes casos, as variáveis 'energia' e r2Mink, contribuíram para o diagnóstico diferencial. Portanto, a análise de imagem computadorizada pode ser considerada como uma ferramenta que auxilia no diagnóstico diferencial de lesões foliculares da tireóide, somando-se à interpretação morfológica e imunoistoquímica / Abstract: The differential diagnosis between some thyroid lesions is often difficult to determine, even with permanent sections. The purpose of this study was to find out if chromatin texture analysis contributes to the differential diagnosis of thyroid follicular lesions. We selected slides stained with H-E (hematoxilin-eosin) of 12 hyperplastic adenomatous nodules (AN), 18 follicular adenomas (FA), 24 minimally invasive follicular carcinomas (MIFC) and 22 follicular variants of papillary carcinomas (FVPC). A total of 100 nuclei of each case were digitalized and segmented. The utility of a combination of immunostaining including galectin-3, HBME-1 and CK-19 in the routine differentiation of the histologies of thyroid malignancies was evaluated. The nuclei structure was described by morfometry, densitometry and by variables derived by co-occurrence matrix. Sex, age of the patient and metastasis were clinical and morphologic parameters searched in this study. These data, described as prognostic factors for follicular malignant tumors, were compared by variance analysis (significance value p<0,05) and did not differentiate significantly among the groups. The best marker, in terms of sensitivity and specificity, was HBME-1. The combination CK-19, HBME-1 and galectin-3, in a panel, may be useful in specific cases, for example, for differentiate folicullar lesions, with special reference for folicullar variant of papillary carcinoma. Morphometric variables did not show significant discriminant value, except, the P5FF4 (5th percentile of the form factor) which demonstrated significant differences between FA and FVPC and between MIFC and FVPC. Densitometric variables demonstrated significant differences between AN and FA, AN and MIFC, FA and FVPC, FA and MIFC and even between MIFC and FVPC. The variables derived from co-occurrence matrix demonstrated differences among the sub- groups, but only P5 Energy (fifth percent of energy variable) showed significant differences between FA and MIFC. Also, the variable r2Mink (Goodnesss of fit of the Minkowski - fractal dimension) was able to differentiate benign and malignant lesions such as: AN and MIFC, AN and FVPC, FA and MIFC, FA and FVPC. Texture analysis may help to differentiate benign and malignant follicular lesions of the thyroid, specially when one is trying to differentiate AN or FA and FVPC. In this situation the histological analysis based on nuclear characteristics may not be definitive; owing to the fact that all the nuclear criteria may not be always present in most cases. On the other hand, the differential diagnosis of FA and MIFC is difficult and it is not based on nuclear characteristics, but on the finding of capsular or vascular invasion. However, in these cases, the variables energy and r2Mink contributed to the differential diagnosis. Therefore, the computerized image analysis may be considered as a tool that helps the differential diagnosis of follicular thyroid lesions, added to the morphological and immunohistochemical analysis / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Fabio Ramoa Pires / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T12:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Romanach_MarioJose_M.pdf: 13585930 bytes, checksum: 1f4259a1bbb4368dbbba0d6f8a98f50f (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O carcinoma espinocelular (CEC) é a neoplasia maligna mais comum da boca, possuindo diversas variantes clinicopatológicas incomuns, incluindo o carcinoma de células fusiformes (CCF), que diferem quanto ao comportamento clínico, critérios diagnósticos e prognóstico. Os objetivos deste estudo foram analisar a expressão imunohistoquímica de marcadores epiteliais no CCF de cabeça e pescoço, avaliando sua importância diagnóstica, comparar os achados histopatológicos e imunohistoquímicos do CCF de cabeça e pescoço com os CECs convencionais da cavidade oral e definir um perfil sócio-demográfico e clinicopatológico do CCF oral. Para isso, foram analisados ao todo 20 casos de CECs: 10 casos de CCF, e 10 casos de CECs orais convencionais como controle, sendo 5 casos de CECs bem diferenciados e 5 casos de CECs pouco diferenciados. A metodologia incluiu avaliação de todos os casos em microscopia óptica em cortes corados em hematoxilina e eosina e reações imunohistoquímicas para anticorpos contra citoqueratinas, vimentina, desmina, actina músculoespecífica, actina de músculo liso, proteína S100, EMA, p53 e ki-67, usando a técnica da peroxidase. Os achados morfológicos dos CCFs estudados mostraram maior proximidade entre estes tumores e os CECs pouco diferenciados e a expressão imunohistoquímica das citoqueratinas AE1/AE3, 6, 8 e 14 e de EMA nos componentes carcinomatoso e fusocelular do CCF mostrou-se útil como auxiliar em seu diagnóstico final. Ainda, os CCFs apresentaram índices de expressão de p53 e de Ki-67 superiores àqueles encontrados nos CECs bem diferenciados. O CCF oral apresentou predileção por homens na 6ª década de vida, manifestando-se através de úlceras infiltrativas ou lesões polipóides ulceradas, usualmente dolorosas, localizadas preferencialmente no rebordo alveolar e lábios / Abstract: Squamous cell carcinoma (SCC) is the most common malignant oral tumor and several uncommon clinicopathological variants, including spindle cell carcinoma (SpCC), which differ on clinical behaviour, diagnostic criteria and prognosis, have been described. The aims of this study were to analyze the immunohistochemical expression of epithelial markers on head and neck SpCC, evaluating their diagnostic relevance, to compare the histopathological and immunohistochemical features of head and neck SpCC and conventional oral SCC, and to define a socio-demographic and clinicopathological profile of oral SpCC. Material included a total of 20 cases, including 10 cases of head and neck SpCC, and 10 cases of oral SCC used as controls (5 well-differentiated SCC and 5 poorly-differentiated SCC). Methods included evaluation of hematoxilin and eosinstained histological slides from all cases through optic microscopy and immunohistochemical reactions for antibodies against cytokeratins, vimentin, desmin, smooth-muscle actin, muscle-specific actin, S-100 protein, EMA, p53 and ki-67, using the peroxidase technique. Morphological features of SpCC showed similarities to the features from poorly differentiated SSC and immunohistochemical expression of the cytokeratins AE1/AE3, 6, 8 and 14, and EMA on both carcinomatous and spindle cell components of the tumor, proved to be useful as an auxiliary tool on final diagnosis. In addition, SpCC presented higher p53 and ki-67 expression indexes when compared to well-differentiated SCC. Oral SpCC showed predilection for males on their 6th decade of life, presenting clinically either as painful infiltrative ulcers or ulcerated exophytic polypoid masses, preferally located on the alveolar mucosa and lips / Mestrado / Estomatologia / Mestre em Estomatopatologia

Orientador: Marcio Ajudarte Lopes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T15:19:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_LucielmaSalmitoSoares_D.pdf: 2009810 bytes, checksum: e857bd28ac572f1423b462c29e7a2583 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O carcinoma espinocelular (CEC) bucal recorre em cerca de 30% dos casos. O reconhecimento de fatores prognósticos confiáveis pode resultar na predição do comportamento tumoral e prevenção de falhas no tratamento. O objetivo deste estudo foi analisar a correlação entre as características clínicas, histopatológicas e imunohistoquímicas em casos de CEC bucal com recidiva local precoce. Desta forma, 69 casos de carcinoma bucal sem tratamento prévio para tumores de cabeça e pescoço foram selecionados, sendo que 23 apresentaram recidiva precoce e 46 sem recidiva. Informações clínicas foram obtidas dos prontuários e as características histopatológicas foram avaliadas de acordo com os sistemas de gradação de Anneroth et al. (1987) e Bryne et al. (1992). Reações imunohistoquímicas foram feitas para FAS e ErbB2. Nossos resultados mostraram uma predileção pelo gênero masculino (89,85%) com idade média de 55,5 anos. Apesar de não ser estatisticamente significante, observou-se um risco relativo de 2,62 e 2,89 para que usuários de fumo e o álcool desenvolvam recidiva local, respectivamente. Notou-se relação estatisticamente significante entre o tratamento apenas cirúrgico e o desenvolvimento de recidivas (p = 0,03). A soma dos escores de Anneroth et al. (1987) maior que 15 foi estatisticamente associada à recidiva (p = 0,03). Menor expressão de FAS e maior expressão de ErbB2 citoplasmático foram estatisticamente associadas à recidiva tumoral (p = 0,01). Estiveram associados à pior sobrevida: o uso de álcool (p = 0,0028), e piores escores obtidos nos parâmetros queratinização (p < 0,0001), padrão de invasão (p < 0,0001) e inflamação (p < 0,0001) segundo Anneroth et al. (1987). A maior expressão de FAS esteve também significativamente associada à maior sobrevida global dos pacientes (p = 0,0002). Apesar de não estatisticamente significante, FAS foi correlacionada com a queratinização (p = 0,08) e de forma significante estatisticamente, a queratinização relacionou-se com ErbB2 expresso em membrana (p = 0,0006). De acordo com os nossos resultados, sugerimos a utilização do sistema de Anneroth et al. (1987), bem como o estudo imunohistoquímico com os marcadores FAS e ErbB2 para melhor compreensão do comportamento dos CECs bucais / Abstract: Oral squamous cell carcinoma (SCC) recurs locally in about 30% of cases. The recognition of reliable factors may result in the tumor behavior prediction and prevent treatment failures. The purpose of this study was to evaluate the correlation among clinical, histopathological and immunohistochemical features in oral SCC with early local recurrence. Sixty-nine cases of oral SCC without previous treatment for head and neck tumors were selected, being: 23 cases with early local recurrence and 46 cases without recurrence. Clinical data were obtained from the medical records and the histopathological features were assessed according Anneroth¿s and Bryne¿s histological grading of malignancy. Immunohistochemical reactions for FAS and ErbB2 were performed. Our results showed a male predilection (89.85%), with a mean age of 55.5 years. Although there were no statistical differences, relative risks of 2.62 and 2.89 were observed for smokers and alcohol drinkers have local recurrence, respectively. Significant differences were observed between surgical treatment and local recurrence (p = 0.03). The sum of the Anneroth¿s histological grading degrees exceeding 15 was statistically associated to local recurrence (p = 0.03). Lower FAS and more cytoplasmic ErbB2 expression were statistically correlated to local recurrence (p = 0.01). An association between overall survival and alcohol use was observed (p = 0.0028). The parameters keratinization (p < 0.0001), mode of invasion (p < 0.0001) and lymphoplasmocytic infiltration (p < 0.0001) according Anneroth¿s histological grading were related to overall survival. More FAS expression was also associated with better overall patients survival (p = 0.0002). Although there was no statistical difference, FAS was related to keratinization (p = 0.08), similar but statistically, keratinization was associated with membrane ErbB2 expression (p = 0.0006). According our results, we suggest the use of Anneroth¿s histological grading system as well as the immunohistochemical markers FAS and ErbB2, for best comprehension of OSCC¿s behavior / Doutorado / Estomatologia / Doutor em Estomatopatologia

O hipocampo compõe uma das estruturas do sistema límbico, suas funções são variadas, tendo seu papel na regulação do comportamento emocional e em processos relacionados com a estocagem de memórias. Apesar de ter pouco ou nenhum papel no controle da função reprodutiva, o hipocampo é ainda assim um alvo sensível aos esteróides gonadais. Filamentos intermediários, como a proteína ácida fibrilar glial (GFAP) é um eficiente marcador do citoesqueleto de astrócitos e sofrem modificações sob ação de hormônios gonadais. Os objetivos do presente estudo foram mensurar o numero de células imunorretivas à GFAP (GFAP-ir), avaliar a imunorreatividade dos marcadores para filamentos intermediários astrocitários, bem como sua morfologia pelo método de Scholl, a GFAP-ir, no estrato radiatum da região CA1 do hipocampo, de ratos machos e fêmeas durante o desenvolvimento pós-natal. Além disso, também foi investigada a GFAP-ir nas mesmas regiões de fêmeas adultas, tanto em condições fisiológicas de variação hormonal (ao longo do ciclo estral), como em situações suprafisiológicas (reposição hormonal após ovariectomia). Três experimentos foram realizados: no primeiro foram utilizados ratos machos e fêmeas durante o desenvolvimento pós-natal (n = 48), cujas idades foram: 11 dias pós-natal (PN11), 21 (PN21), 31 (PN31) e 45 (PN45). No segundo experimento, utilizou-se ratos Wistar adultos machos e fêmeas nulíparas adultas durante as fases do ciclo estral (diestro, proestro, estro e metaestro; n = 30) para revelar diferenças provocadas pelos hormônios gonadais femininos na composição astrocitária do hipocampo. No terceiro experimento utilizaram-se fêmeas adultas nulíparas submetidas à ovariectomia (OVX) (n = 18) e tratadas com substituição hormonal de benzoato de estradiol adicionado ou não à progesterona. Os dados foram comparados entre os grupos por meio de um teste de análise da variância (ANOVA) de uma via, sendo aplicado o teste post-hoc Bonfferoni. A comparação dos dados de GFAP-ir apresentou diferenças significativas no número de células e na orientação dos prolongamentos. O número de prolongamentos centrais, aumentaram com a idade, sendo mais significativo para as fêmeas (F45xF11, p≤ 0,001, F45xF21, p≤ 0,01 e F45xF31 p≤ 0,01) que nos machos (M45x M21 p≤ 0,05). Já o número de processos laterais mostrou um aumento mais significativo com a idade nos machos (M45XM11, p≤ 0,001; M45XM21, p≤ 0,001 e M45xM31, p≤ 0,01) que nas fêmeas (F45xF11, p≤ 0,01). Havendo ainda diferenças quando analisados a orientação dos processos primários separadamente de suas ramificações. Os ratos machos apresentaram maior GFAP-ir do que as fêmeas em todas as fases do ciclo estral (diestro, proestro, estro e metaestro; p < 0,001), assim como apresentaram mais células que as fêmeas (p<0,001). Para orientação mais uma vez as diferenças ficaram restritas aos machos, tanto para os processos centrais como para os laterais (p<0,001 e p<0,05 respectivamente). Em fêmeas ovariectomizadas, injeções de estradiol provocaram aumento da GFAP-ir (P < 0,001), assim como houve um aumento do numero de células (P < 0,05) enquanto a morfologia não mostrou diferenças entre os grupos. Esses achados sugerem que a GFAP astrocitária pode ser afetada tanto por níveis fisiológicos de hormônios ovarianos quanto por manipulação hormonal destes esteróides, o que pode contribuir para a plasticidade neuro-glial relacionada a atividades locais e integradas destas áreas encefálicas em machos e fêmeas. Esses achados permitem concluir que esta influência hormonal sobre o hipocampo está presente ainda em fases iniciais do desenvolvimento do SN de ratos, apresentando particularidades morfológicas acima de tudo. Além disso, as diferenças de composição astrocitárias encontradas, ao longo do desenvolvimento, provavelmente se relacionam com a interação neurônio-glia em consonância com aspectos comportamentais e ajustes neuroendócrinos pertinentes a cada sexo, e a cada fase de diferenciação do sistema nervoso. / The hippocampus is part of the limbic system, its functions are varied, and their role in the regulation of emotional behavior and in processes related to the memories storage. Despite having little or no role in the control of reproductive function, the hippocampus still a sensitive target to gonadal steroids. Intermediate filaments such as glial fibrillary acidic protein (GFAP) is an efficient marker of the cytoskeleton of astrocytes and the action of gonadal hormones could alter this structure. The objectives of this study were to measure the number of GFAP imunorreactive cells (GFAP-ir), analysing the immunoreactivity the intermediate filaments of astrocyte, and their morphology by the Scholl‟s method, GFAP-ir in the stratum radiatum of the CA1 region from dorsal hippocampus of male and female rats during postnatal development. In addition, we investigated the GFAP-ir in the same regions of adult males and females, these under physiological hormonal changes (during the estrous cycle), as shown by supraphysiological (hormone replacement after ovariectomy). Three experiments were performed: the first was used male and female rats during postnatal development (n = 48), whose ages were 11 days postnatal (PN11), 21 (PN21), 31 (PN31) and 45 ( PN45). In the second experiment, we used adult male Wistar rats and nulliparous adult females during the estrous cycle (diestrus, proestrus, estrus and metestrus, n= 30) to reveal differences caused by female gonadal hormones on the content of astrocytes in the hippocampus. In the third experiment, a nulliparous adult females subjected to ovariectomy (OVX) (n = 18) and treated with hormone replacement therapy of estradiol benzoate added or not with progesterone. Data were compared between groups by means of a test analysis of variance (ANOVA) one-way, and applied post-hoc Bonfferoni‟s test. A comparison of the GFAP-ir showed significant differences in cell number and orientation of the extensions. The number of central extensions, increased with age, being more significant for females (F45xF11, p ≤ 0,001, F45xF21, p ≤ 0,01 and F45xF31 p ≤ 0,01) than in males (M45x M21 p ≤ 0,05). Since the number of lateral processes showed more significantly with age in males (M45XM11, p ≤ 0,001; M45XM21, p ≤ 0,001 and M45xM31, p ≤ 0,01) than in females (F45xF11, p ≤ 0,01). We also found differences when analyzed the orientation of primary processes separately from their branches. Male rats showed higher GFAP-ir than females at all stages of the estrous cycle (diestrus, proestrus, estrus and metestrus, p <0,001) and had more cells than females (p <0,001). About cell orientation, the differences were observed just in males, both for the core processes and to the lateral (p <0,001 and p <0,05 respectively). In ovariectomized females, injections of estradiol benzoate caused an increase in GFAP-ir (P <0,001), as well as an increase in the number of cells (p <0,05), but the morphology did not differ between groups. These findings suggest that the GFAP astrocyte can be affected both by physiological levels of ovarian hormones and on the hormonal manipulation of these steroids, which may contribute to neuro-glial plasticity related to local activities and integrated these brain areas in males and females. These findings show that hormonal influence on the hippocampus were present in early stages of development of the SN of rat, specially in the morphological characteristics. In addition, differences in astrocytic composition found throughout the development, probably were related to the neuron-glia interaction in accordance with aspects of behavioral and neuroendocrine adjustments, specific to each gender, and each stage of differentiation of the nervous system.

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Orientador: Pablo Agustin Vargas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-16T16:11:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gondak_RogeriodeOliveira_M.pdf: 4633053 bytes, checksum: caf2bde22b30d4aa164517dc0dd6ffaf (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A língua de pacientes com AIDS é acometida freqüentemente por infecções oportunistas e neoplasias. O objetivo deste estudo foi quantificar as células de Langerhans (CL) presentes em regiões lesionais e não lesionais na língua de pacientes autopsiados com AIDS em fase avançada, correlacionando a diminuição das CL com a presença de patologias infecciosas em diferentes regiões da língua (anterior, média, posterior e lateral) e comparar estes achados com a língua de pacientes HIV negativos. Foram utilizadas neste trabalho as línguas de 40 pacientes autopsiados com AIDS divididos em 04 grupos (10 com candidose lingual, 10 com herpes lingual, 10 com leucoplasia pilosa oral e 10 sem lesões em língua) e as línguas de 23 pacientes autopsiados (grupo controle) que morreram por outras patologias não associadas à AIDS e que não apresentaram patologias em língua. Realizamos estudo imunoistoquímico com os marcadores HLA-DR, CD1a e CD83 para identificar as CL e quantificá-las por meio de análise histomorfométrica. O índice de positividade foi obtido através da leitura de 7 campos seqüenciados orientados por ocular micrométrica. As células positivas foram contadas para cada um dos anticorpos nas quatro diferentes regiões da língua e os resultados expressos em células positivas por área de epitélio e por comprimento de membrana basal. O anticorpo HLA-DR mostrou a presença média das CL na língua dos pacientes com AIDS (LA=24,28/mm2 e 3,64/mm, LM=24,60/mm2 e 3,68/mm, LP=20,95/mm2 e 3,14/mm, LL=19,84/mm2 e 2,97/mm) e no grupo controle (LA=68,18/mm2 e 10,23/mm, LM=60,73/mm2 e 9,11/mm, LP=62,94/mm2 e 9,44/mm, LL=50,24/mm2 e 7,53/mm). O anticorpo CD1a mostrou a presença média das CL na língua dos pacientes com AIDS (LA=17,30/mm2 e 2,59/mm, LM=21,11/mm2 e 3,16/mm, LP=13,48/mm2 e 2,02/mm, LL=15,55/mm2 e 2,33/mm) e no grupo controle (LA=205,38/mm2 e 30,81/mm, LM=218,36/mm2 e 32,75/mm, LP=167,29/mm2 e 25,09/mm, LL=223,60/mm2 e 33,54/mm). O anticorpo CD83 mostrou a presença média das CL na língua dos pacientes com AIDS (LA=6,19/mm2 e 0,92/mm, LM=6,34/mm2 e 0,95/mm, LP=6,82/mm2 e 1,02/mm, LL=7,14/mm2 e 1,07/mm) e no grupo controle 68,18/mm2 e 10,23/mm, LM=68,46/mm2 e 10,27/mm, LP=69,28/mm2 e 10,39/mm, LL=63,49/mm2 e 9,52/mm), sendo que foram extremamente significantes as diferenças entre ambos os grupos em todas as regiões e anticorpos estudados (p<0,001). Portanto, podemos concluir que as CL estavam degeneradas e diminuídas em número em todas as regiões da língua e em todos os grupos com AIDS em relação ao grupo controle e as lesões infecciosas orais oportunistas não influenciaram na depleção das CL nas línguas / Abstract: The tongues of AIDS patients can be affected by opportunistic infections and neoplasms. Objectives: to quantify and compare the expression of Langerhans cells (LC) in lesional and non lesional areas in the tongue from patients with and without AIDS (control group), using autopsy material. Methods: we analysed the expression of CD1a, HLA-DR and CD83 using immunohistochemistry to identify and quantify LC in the tongues of AIDS patients (n=40), which were divided into 04 groups (10 lingual candidiasis, 10 lingual herpes, 10 oral hairy leukoplakia and 10 none lesions), and 23 tongues from HIV-negative controls. The immunoreactivity rate was obtained after reading at least seven fields sequenced driven ocular micrometer. The positive LC were detected in the lingual surface epithelium in four different regions (anterior, middle, posterior and lateral) and the results expressed as positive cells per area of epithelium and basement membrane length. Results: LC showed the following immunoreactivity for CD1a in the tongue of AIDS patients (LA=17.30/mm2 and 2.59/mm, LM=21.11/mm2 and 3.16/mm, LP=13.48/mm2 and 2.02/mm, LL=15.55/mm2 and 2.33/mm), and in the control group (LA=205.38/mm2 and 30.81/mm, LM=218.36/mm2 and 32.75/mm, LP=167.29/mm2 and 25.09/mm, LL=223.60/mm2 and 33.54/mm); HLA-DR (AIDS patients) (LA=24.28/mm2 and 3.64/mm, LM=24.60/mm2 and 3.68/mm, LP=20.95/mm2 and 3.14/mm, LL=19.84/mm2 and 2.97/mm), and the control group (LA=68.18/mm2 and 10.23/mm, LM=60.73/mm2 and 9.11/mm, LP=62.94/mm2 and 9.44/mm, LL=50.24/mm2 and 7.53/mm); CD83 (AIDS patients) (LA=6.19/mm2 and 0.92/mm, LM=6.34/mm2 and 0.95/mm, LP=6.82/mm2 and 1.02/mm, LL=7.14/mm2 and 1.07/mm), and the control group (LA=68.18/mm2 and 10.23/mm, LM=68.46/mm2 and 10.27/mm, LP=69.28/mm2 and 10.39/mm, LL=63.49/mm2 and 9.52/mm). The statistical analysis identified significant differences in the both groups and in all regions, and among the 3 antibodies (p<0.001). Conclusions: LC were degenerated and reduced in number in all regions of the tongue of AIDS patients in relation to the control group and the depletion of LC in the tongues of AIDS patients is not associated with oral opportunistic infections / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

Orientador: Jose Vassallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T04:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Schenka_AndreAlmeida_D.pdf: 18079229 bytes, checksum: 1a4e4ec904fda3a265e3105ba384546f (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Uma nova linhagem de glioma humano, NG97, foi estabelecida por Grippo et al. em 2001 a partir de um astrocitoma grau III (OMS, 2000). Neste primeiro estudo, o cultivo da linhagem revelou a existência de duas subpopulações morfologicamente distintas: uma constituída por células fusiformes/dendríticas e outra, por células pequenas e redondas. A injeção de células NG97 em camundongos nude induziu a formação de um tumor agressivo caracterizado por atipia citológica intensa, proliferação vascular e necrose em pseudopaliçadas (achados sugestivos, mas não diagnósticos de glioblastoma multiforme). O objetivo do presente estudo foi caracterizar os aspectos imunofenotípicos e ultraestruturais desta linhagem celular, utilizando o tumor parental, as células em cultura e o xenotransplante, com o intuito de avaliar sua natureza glial e possíveis diferenciações divergentes. A comprovação de sua natureza glial é de fundamental importância para a caracterização e validação desta linhagem como um modelo de glioma. As células NG97 e o xenotransplante expressaram os principais marcadores neurogliais (GFAP, proteína S-100, NSE e Leu-7) e não apresentaram qualquer expressão aberrante de outros marcadores de histogênese. GFAP foi expressa de maneira similar no tumor parental e nas células em cultura, diminuindo significativamente no xenotransplante. A expressão de NSE era reduzida nas células NG97, em comparação ao tumor parental, sendo substancialmente recuperada no xenotransplante. Esta variabilidade de expressão de GFAP e NSE foi interpretada como um fenômeno de indiferenciação ou, alternativamente, como um fenômeno relacionado a uma possível seleção microambiental de subclones específicos. A proteína S-100 foi expressa de maneira semelhante nos três contextos de análise (tumor original, células de cultura e transplante). A análise ultraestrutural do xenotransplante revelou uma neoplasia altamente indiferenciada compatível com um glioblastoma. Não foram observadas diferenças imunofenotípicas ou ultraestruturais significativas entre as duas subpopulações morfologicamente distintas. Assim, nossos dados demonstram que as células NG97 constituem uma linhagem celular pura, comprometida com o fenótipo glial, que poderá ser útil como um modelo de glioma maligno em estudos direcionados a questões fisiopatológicas, diagnósticas e terapêuticas / Abstract: A human glioma cell line, NG97, was established by Grippo et al. in 2001 from tissue obtained from a grade III astrocytoma (WHO, 2000). In this first study, the cell line grew as two morphologically distinct subpopulations: dendritic/spindle cells and small round cells. The injection of NG97 cells into nude mice induced an aggressive tumor characterized by: severe cytological atypia, vascular proliferation and pseudopalisading necrosis (features which are suggestive but not conclusive for the diagnosis of glioblastoma multiforme). The purpose of the present study was to characterize the immunophenotype and ultrastructural aspects of this cell line, using the parental tumor, cultured cells and the xenotransplant, in order to assess its glial nature and possible divergent differentiation. Proof of glial differentiation is fundamental to the process of characterization and validation of this cell line as a glioma model. NG97 cells and xenotransplant expressed the main neuroglial markers (GFAP, S-100 protein, NSE and Leu-7) and showed no aberrant expression of other histogenetic markers. GFAP was similarly expressed in the parental tumor and in the cells in culture, but decreased in the xenotransplant. NSE expression was reduced in NG97 cells, but substantially recovered in the xenotransplant. This variability in expression of GFAP and NSE was interpreted as either a phenomenon of dedifferentiation or due to microenvironmental selection of specific subclones. S-100 was equally expressed in the three contexts. The xenotransplant¿s ultrastructural features were those of a highly undifferentiated tumor consistent with glioblastoma. No significant immunophenotypic or ultrastructural differences between the two morphologically distinct populations were found. Thus, our data demonstrate that NG97 cells constitute a pure glial-committed cell line, which may prove useful as a malignant glioma model in studies addressing pathophysiological, diagnostic and therapeutic issues / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Sophie Françoise Mauricette Derchain / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T06:11:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sarian_LuisOtavioZanatta_D.pdf: 4408688 bytes, checksum: dcbae8c6070aa5e846def7d66a3c81e2 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Objetivos: Avaliar a expressão da ciclo-oxigenase-2 (COX-2) em lesões escamosas da cérvice uterina e suas relações com a expressão nuclear do Ki67, a detecção do papilomavírus humano (HPV) e com a persistêncialrecorrência de neoplasia intra epitelial cervical (NIC) após conização diatérmica. Sujeitos e métodos: Este foi um estudo de coorte, com análise intermediária em corte transversal, para o qual foram selecionadas mulheres submetidas à conização diatérmica para o tratamento de anormalidades cervicais, entre fevereiro de 2001 e abril 2004. O estudo é apresentado em dois artigos: o primeiro consiste de análise transversal, incluindo os espécimes cirúrgicos de 164 mulheres submetidas à conização. Foram avaliadas a expressão citoplasmática da COX-2 e a expressão nuclear do Ki67, determinadas por imuno-histoquímica, segundo a gravidade da lesão cervical e a detecção do HPV de alto risco oncogênico, realizada através de Captura de Híbridos 11. No segundo artigo, com análise longitudinal, foram incluídas 104 mulheres com NIC, seguidas por até 36 meses após conização diatérmica, para avaliar possíveis relações entre a expressão da COX-2 e Ki67, comprometimento das margens do cone e d_tecção do HPV (durante o seguimento), com a persistêncialrecorrência da NIC. Resultados: No primeiro artigo pode-se observar que não houve diferença na expressão citoplasmática da COX-2 relacionada à gravidade da lesão cervical, à expressão do Ki67 e à detecção do HPV de alto risco. Houve maior expressão de Ki67 nos espécimes com NIC 3. No segundo artigo, 14 casos de recorrência/persistência da NIC foram detectados durante o seguimento. A expressão citoplasmática da COX-2 e a expressão nuclear do Ki67 foram semelhantes nos casos com ou sem recorrêncialpersistência, e apenas a detecção do HPV de alto risco oncogênico durante o seguimento esteve associada ao maior risco de persistêncialrecorrência da NIC (Razão de risco 7,6; Intervalo de confiança 95% 2,1-28,6). Conclusões: A expressão citoplasmática da COX-2 não esteve relacionada à gravidade da lesão cervical, à expressão de Ki67 ou à infecção pelo HPV. As expressões da COX-2 e do Ki-67 não se relacionaram com a persistência/recorrência da NIC em até 36 meses de seguimento / Abstract: Objectives: To assess the expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) in squamous lesions of the uterine cervix and its possible relations to nuclear expression of Ki67, Human papillomavirus (HPV) detection and to the persistence/recurrence of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) after diathermic conization. Subjects and methods: This was a prospective study with intermediate cross-sectional analysis, in which women subjected to diathermic conization due to cervical abnormalities were selected between February 2001 and April 2004. The first article is a cross sectional study, including surgical specimens of 164 women subjected to conization. Cytoplasmic expression of COX-2 and nuclear expression of Ki67, ascertained through immunohistochemistry, was evaluated according to cervicallesion grade and high-risk HPV detection through Hybrid Capture 11. In the second article, 104 women ith CIN were included, followed-up for 36 months after diathermic conization, in order to assess possible relation between COX-2 and Ki67 expression, adjusted by the cone margin status and high-risk HPV detection during follow-up with persistentlrecurrent CIN. Results: Cross-sectional analysis of baseline data disclosed that COX-2 protein expression did not differ in relation to grade of cervical lesion, Ki67 expression and high-risk HPV detection. A higher expression of Ki67 was associated exclusively with CIN 3. In the follow-up series, fourteen cases of recurrentlpersistent CIN were detected after diatherrny conization. Persistence/recurrence of CIN were not related to cytoplasmic COX-2 and nuclear Ki67 expression, but had a positive association with high-risk HPV detection during follow-up (Risk Ratio 7.6; 95% confidence interval 2.1-28.6). Conclusion: The cytoplasmic expression of COX 2 did not correlate with cervical lesion grade, nuclear Ki67 expression and high-risk HPV detection. COX-2 and Ki67 expression was not related to persistence/recurrence of CIN / Doutorado / Tocoginecologia / Doutor em Tocoginecologia