Dentre as hipóteses para explicar mecanismos utilizados por pombos-correios para se orientar e navegar no espaço destacam-se a utilização de dois fatores ambientais: gradientes de odores específicos na atmosfera e o campo geomagnético. Para determinar se há diferenças ou correlações entre áreas cerebrais envolvidas com as vias sensoriais olfatória e magnética, utilizou-se imunohistoquímica e gene de resposta imediata ZENK. Dois grupos foram expostos a estímulos olfatórios, mas um com oclusão de narinas. Um grupo foi exposto ao estímulo magnético variando em direção e intensidade semelhante ao campo geomagnético durante o voo, com narinas tampadas. Dois grupos não foram estimulados, mas um teve oclusão de narinas. Dados indicam igual marcação no bulbo olfatório, córtex pré-piriforme e córtex piriforme em animais com as narinas tampadas, expostos ou não ao estímulo magnético. O estímulo olfatório, por outro lado, foi eficaz em marcar estas estruturas. Conclui-se que o processamento central de pistas magnéticas não está intimamente correlacionado à via olfatória. / There are two main theories to explain how homing pigeons orient and navigate in their return flights from unfamiliar sites: by following olfactory cues in the atmosphere or by means of the geomagnetic field. The aim of this study was to determine whether magnetic and olfactory stimuli activate common brain areas in the pigeon, by an immunohistochemical technique using the immediate early gene ZENK. Two groups were exposed to smell, but one had their nostrils plugged. One group was exposed to a magnetic field varying in direction, of intensity similar to the geomagnetic field during flight, with nostrils plugged. Two groups were not stimulated, but one had their nostrils plugged, whereas the other did not. The data indicates that ZENK expression in the olfactory bulb, pre-piriform cortex and piriform cortex was not different in birds with nostrils plugged, whether magnetically stimulated or not. The conclusion is that central processing of magnetic cues is unlikely to be intimately related to the olfactory pathway.

As doenças benignas da mama respondem pela maior parte dos diagnósticos em patologia mamária, por esse motivo têm se tornado um problema crescente na prática clínica pela limitação diagnóstica atual em identificar o subgrupo de lesões com maior potencial de risco par neoplasia invasora. O estudo das lesões proliferativas com marcadores prognósticos do câncer de mama mostrou que o estrogênio exerce papel importante na transformação dessas lesões, através do seu receptor nuclear, induzindo a transcrição de genes, mas também pelo receptor de membrana citoplasmática, estimulando a proliferação celular através da ativação das proteína-quinases ativadas por mitógenos. Trabalhos experimentais com culturas de células de diferentes linhagens, incluindo células mamárias, identificaram a proteína S100P, uma proteína ligante de cálcio, como participante da transformação neoplásica maligna e diferenciação celular. No presente trabalho, estudamos a expressão da S100P, do receptor de estrogênio e avaliamos a proliferação celular de 155 pacientes submetidas à biópsia mamária por agulha grossa assistida a vácuo, guiada por estereotaxia, população que corresponde à rotina diagnóstica em patologia mamária. Comprovamos a associação do receptor de estrogênio com as lesões pré-malígnas, classificadas segundo seu potencial de risco para neoplasia invasora, principalmente em mulheres abaixo dos 50 anos. Demonstramos haver forte associação entre a S100P e o receptor de estrogênio na distinção do potencial de risco das lesões histológicas, confirmando o papel importante da S100P no processo de transformação maligna. Observamos que a ausência da proteína torna praticamente nula a possibilidade de progressão tumoral, e mais ainda que sua ação depende também do receptor de estrogênio / The benign breast diseases represent the major diagnose in breast pathology, so they have became an increasing problem concerning the clinical practice for limited capability diagnosis to identify a subgroup in this category with greater risk to evolve to invasive breast cancer. Studies with proliferative breast lesions and prognostic markers of breast cancer have shown that estrogen plays an important roll in malignant transforming process through its nuclear receptor which activates the transcriptional process. Moreover, the surface estrogen receptor stimulates the cell proliferation as a result of activation of mitogen-activated protein-kinases cascade. In vitro experiments with differents cell lines, including breast cell ones, have identified a protein, called S100P, a calcium-binding protein, as participating of the malignant transforming process and cell differentiation. In the present work, we studied the immunoexpression expression of S100P, estrogen receptor and evaluated the cell proliferation of 155 patients submitted to vacuum assisted core biopsy with stereotactic guidance of breast, a population that corresponds to the routine diagnose in breast pathology. We have proved the association between estrogen receptor and premalignant lesions, stratified by the relative risk for developing invasive breast cancer, mainly among women under the 50 years. We also have demonstrated a strong association of S100P and estrogen receptor concerning the distinctive relative risk of breast histologic lesions; bring up the important contribution of S100P in the carcinogenetic process. Meanwhile, the presence of S100P rises up the transforming possibility. We finally have found that the action of S100P depends on the estrogen receptor status

A distrofia muscular do Golden Retriever é uma doença degenerativa de caráter hereditário com alterações musculares semelhantes às descritas na distrofia muscular de Duchenne, sendo comprovada a existência de alterações na musculatura lisa do trato gastrointestinal destes animais. Alguns autores sugerem que um dos fatores responsáveis por essas alterações possa estar relacionado com a motililidade intestinal. Este trabalho tem como objetivo estudar os neurônios nitrérgicos e colinérgicos, além da expressão do receptor P2X7, no plexo mioentérico do cólon descendente de cães afetados e não afetados pela distrofia muscular. Foram utilizadas técnicas de imunohistoquímica para marcação das enzimas Óxido Nítrico Sintase (NOS) e Acetilcolina Transferase (ChAT) e da população neuronal total pelo HuC/D e analisada a presença do receptor P2X7. Também foram utilizadas técnicas de microscopia eletrônica de transmissão e histologia básica. Os resultados indicam que neurônios nitrérgicos tendem a ser maiores em cães distróficos e apresentam morfologia Dogiel tipo I; neurônios que expressam o receptor P2X7 colocalizam com neurônios nitrérgicos e colinérgicos. As análises qualitativas demonstram que cães distróficos apresentam maior quantidade de colágeno entre as fibras musculares, entre as camadas musculares circular e longitudinal e, ainda, no interior dos gânglios mioentéricos. Este estudo fornece base para futuras pesquisas e tratamentos da distrofia muscular do Golden Retriever e mais futuramente da Distrofia Muscular de Duchenne, além de poder auxiliar no entendimento das desordens gastrointestinais que são observadas nesta última. / The golden retriever muscular dystrophy is a hereditary degenerative disease characterized by muscle changes similar to those described in Duchenne muscular dystrophy, as well as by alterations in the smooth muscles of the gastrointestinal tract. Some authors suggest that these abnormalities may be associated with intestinal motility. This study evaluated nitrergic and cholinergic neurons in the myenteric plexus of the descending colon of dogs with and without muscular dystrophy, in addition to P2X7 receptor expression. Immunohistochemical techniques were used to label nitric oxide synthase (NOS) and acetylcholine transferase (ChAT), as well as to label total HuC/D-immunoreactive neurons and neurons containing the P2X7 receptor. Transmission electron microscopy and basic histology were used for analysis. Results showed that nitrergic neurons tend to be larger in dystrophic dogs and to be characterized by Dogiel type I morphology, and neurons that express the P2X7 receptor colocalize with nitrergic and cholinergic neurons. Transmission and light microscopy revealed higher collagen density between muscle fibers, between circular and longitudinal muscle layers and within myenteric ganglia of affected dogs. These findings provide support for future research and treatment of the golden retriever muscular dystrophy and hence of the Duchenne muscular dystrophy and contribute to the understanding of the gastrointestinal disorders found in these patients.

As Heat Shock Proteins (HSPs) ou proteínas do choque térmico são encontradas em todas as células e são classificadas de acordo com seu peso molecular. Dentre elas encontram-se as de 27, 60, 70, 90 e 110 kDa, sendo as mais estudadas no contexto da reprodução as da família 60 e 70. Essas proteínas são ditas como chaperoninas, em razão do seu importante papel no dobramento e desdobramento de outras proteínas celulares sem alterar sua conformação final, e são expressas frente a qualquer tipo de estresse como calor, vírus, bactéria, hormônios, diferenciação celular, etc, e influenciam nas respostas imune inata e adquirida. A placenta também expressa essas proteínas, uma vez que é um órgão de intenso estresse e diferenciação celular durante toda a gestação. Nesse estudo, busca-se avaliar a expressão ou não dessas proteínas na placenta bovina e para isso foram utilizadas 30 amostras de diferentes animais em estágios distintos de gestação, fixadas em formol tamponado a 10% e processadas pela técnica de imuno-istoquímica. O mesmo numero de amostras foi também processado para a análise de imuno-microscopia eletrônica de transmissão pelas técnicas de \"freeze-substitution\" e marcação por pós-embebição. Na imuno-istoquímica, as HSPs 60 e 70 foram localizadas nos trofoblastos, epitélio materno e células binucleadas. A expressão da HSP 60 foi maior no início declinando no segundo e terceiro terço. Já a expressão da HSP 70 manteve-se praticamente constante, evidenciando a forte expressão dessa proteína durante todo o período. Na análise de imuno-microscopia eletrônica de transmissão, ambas as famílias foram localizadas nas células binucleadas (núcleo, citoplasma e vesículas) e epitélio materno (núcleo e citoplasma) em todos os terços gestacionais. O perfil das proteínas estudadas na placenta bovina foi diferente quando comparada à placenta humana, pois nesta última, a intensidade da expressão para a HSP 70 diminuiu com o decorrer da gestação enquanto para a HSP 60 foi constante durante todo a gestação. Provavelmente essas diferenças podem estar relacionadas ao fato dessas amostras terem sido coletadas de mulheres com gravidez interrompidas e também pelo tipo de placentação distinta. A bovinocultura de corte é de extrema importância para a econômica para o Brasil e se faz necessário o conhecimento de fatores que possam melhorar suas características reprodutivas. Dessa forma os resultados obtidos nesse estudo contribuirão certamente de subsídio para experimentos futuros sobre o papel das Heat Shock Proteins na placenta bovina. / Heat Shock Proteins (HSP) can be found in any kind of cell. These proteins are classified according to their molecular weight and their known families include the HSP 27, 60, 70, 90 and 110 kDa. Among these, HSP 60 and 70 are the ones of interest in reproduction. They were known as chaperonines because of their capacity to fold and unfold other proteins into the cell, without changing their own conformation. They are expressed during several stress conditions likes virus and bacteria infections, hormones, heat, cellular differentiation, etc, and also take part signalizing for innate and acquired immune responses. Heat shock proteins are expressed in several tissues and organs, including the placenta. In this study we have evaluated the expression of these proteins in the bovine placenta, using thirty samples from different animais with distinct gestational periods, fixed in 10% formalin and processed for immunohistochemistry. The same numbers of samples were processed for immunoelectron microscopy using freeze-substitution and post embedding labeling techniques. The immunohistochemistry results show the expression of HSP 60 and 70 in trophoblasts, maternal epithelia and binucleated cells. The HSP 60 expression was higher in the beginning of gestation, becoming lower during the second and third trimester. Heat shock protein 70 expression were practically constant throughout the gestation. The immunoelectron microscopy analysis revealed that both HSP 60 and 70 were located in the cytoplasm and nucleio binucleated cells and maternal epithelia from the beginning to the end of pregnancy. The immunolocalization of HSP 60 and 70 in the bovine placenta were distinct from the ones found in studies on women, probably due to the differences of the placentation type and to the fact that those samples were collected from abnormal or discontinuous pregnancy. Beef production in Brazil is an important economical activity and studies to improve the bovine reproductive characteristics are necessary and must be expended, therefore our results certainly contributes for further studies on HSP function during pregnancy in this species.

O saco vitelino é uma estrutura única dos vertebrados que evoluiu uma grande diversidade de características de desenvolvimento, estrutural e funcional. É considerado de fundamental importância para a sobrevivência inicial do embrião. Apesar dos intensos estudos sobre a placentação no guinea pig, ainda existem lacunas importantes para a sua compreensão, no que se refere ao saco vitelino. Esta pesquisa visa detalhar a caracterização morfológica e do desenvolvimento do saco vitelino no Cavia porcellus. Dezessete amostras foram coletadas em idades gestacionais de 12 a 55 dias e investigadas mediante histologia convencional, histoquímica, imunohistoquímica incluindo o marcador de proliferação e microscopia eletrônica de transmissão. O material histórico da implantação embrionária foi utilizado da Embryological Collection of the Museum of Natural History Berlim, Germany. Foi observada a presença temporária do saco vitelino parietal e da cavidade do saco vitelino, durante a implantação do blastocisto. O saco vitelino, que recobre a placenta corioalantoica, mostrou uma grande diferença estrutural entre o 12º e 18º dia, como a transição do epitélio pseudoestratificado para projeções, que se assemelham a uma árvore. A membrana de Reichert não está desenvolvida no 12º dia, entretanto verifica-se um espaço preenchido de material extracelular e vacúolos. A membrana de Reichert foi encontrada a partir do 16º dia de gestação e com o desenvolvimento gestacional e se tornou cada vez mais espessa e constituída de material amorfo e acelular. Os dados morfológicos sugerem que a transferência de nutrientes do saco vitelino para o feto foi mais intensa entre o 22º e 40º dia, especialmente no 40º dia. No último terço da gestação, houve uma diminuição dos tecidos de ambos os sacos vitelinos placentário e visceral. Em conclusão, o desenvolvimento do saco vitelino do guinea pig revela grande semelhança com os outros caviomorfos. Os dados sugerem que o saco vitelino nos caviomorfos é fundamental na gestação média, mas, não tanto, para os períodos iniciais da gestação, como é o caso dos outros vertebrados. / The yolk sac is a unique structure of vertebrates that evolved a great diversity of developmental, structural and functional features. It is regarded to have a fundamental role for early embryo survival. Although placentation has been intensely studied in the guinea pig, there are important gaps as in regard to the yolk sac. This research will undergo a detailed morphological and developmental characterization of the yolk sac in Cavia porcellus. Seventeen specimens have been collected at gestational ages from day 12 to 55 and investigated by conventional histology, histochemistry, immunohistochemistry including proliferation marker and transmission electron microscopy. Historical material on earlier stages was used from the Embryological Collection of the Museum of Natural History Berlin, Germany. A temporary parietal yolk sac and yolk sac cavity occurred during the blastocyst implantation. The yolk sac covering the chorioallantoic placenta showed great structural differentiation between day 12 and 18 such as a transition from a pseudostratified epithelium to projections that resemble a tree. A Reicherts membrane was not developed on day 12, but a space filled with extracellular material and vacuoles was present. The membrane was found from day 16 onward and became thick and composed of amorphous and acellular material. The morphological data suggest that a transfer of nutrients from the yolk sac to the fetus was most advanced between 22th and 40th day, especially on the 40th day. In the last third of gestation a decrease in both, placenta and visceral, yolk sacs tissues was observed. In conclusion, the development of the yolk sac in the guinea pig showed similarities to other caviomorphs. Data suggest that the yolk sac in caviomorphs is most important for mid gestation, but not so much for early pregnancy as it is for other vertebrates.

Em roedores, o aumento da permeabilidade vascular, a transformação decidual, e angiogênese são eventos cruciais para o sucesso da gestação. O fator endotelial vascular (VEGF) é um mitogênico para células endoteliais e um indutor de angiogênese. O VEGF age via dois receptores da família das tirosina quinases: VEGFR1 e VEGFR2. O objetivo deste estudo foi investigar usando o método imunohistoquímico, a expressão espacial e temporal do VEGF e os receptores VEGFR1 e VEGFR2 em células endometriais de camundongo entre o 4º e 8º dias de gestação. No 4º dia de gestação, VEGF, VEGFR1 e VEGFR2 foram expressos pelo epitélio luminal e glandular e fracamente pelo estroma endometrial. Do 5º ao 8º dias de gestação, o VEGF foi expresso nas células deciduais mesometriais. VEGFR1 e VEGFR2 foram expresso pelas células do epitélio luminal e glandular e mostraram uma marcação diferencial na decídua mesometrial e antimesometrial. Os receptores VEGFR1 e VEGFR2 foram intensamente expressos pelas células endoteliais dos capilares sinusóides mesometriais e pelas células Nk uterinas. / In rodents, increase of vascular permeability, decidual cell transformation, and uterine angiogenesis are crucial events for the success of pregnancy. Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a mitogen for endothelial cells and an inducer of angiogenesis. VEGF acts via two tyrosine kinase family receptors: VEGFR1 and VEGFR2. The aim of this study was to investigate using the immunohistochemical method, the spatiotemporal expression of VEGF and its receptors VEGFR1 e VEGFR2 by mouse endometrial cells on days 4 to 8 of pregnancy. On day 4, VEGF, VEGFR1 and VEGFR2 were expressed mostly by the luminal and glandular epithelium. Stromal cells showed a very weak labeling. On days 5-8, VEGF and its receptors showed an increased labeling throughout the mesometrial decidua. The expression of VEGF, VEGFR1, and VEGFR2 were differentially expressed in the mesometrial cells and in the predecidual cells of the antimesometrial decidua. VEGFR1 and VEGF R2 were highly expressed by endothelial cells of the mesometrial sinusoids, and Nk uterine cells.

O exercício é hoje reconhecidamente um fator de proteção para morbidade e mortalidade cardiovascular. Apesar de extensos dados de estudos epidemiológicos e de intervenção, os mecanismos subjacentes cardioprotetores do exercício ainda não estão bem elucidados. Alguns autores acreditam que o treinamento físico induz o desenvolvimento de células miocárdicas mais resistentes a agressões externas e maior vascularização. Além disso, o exercício parece exercer grande influência sobre o sistema imunológico. O entendimento dos mecanismos através dos quais o exercício influencia o desfecho clínico do infarto agudo do miocárdio (IM) pode trazer uma melhor compreensão das diferentes evoluções clínicas de indivíduos aparentemente semelhantes. O estudo de quais moléculas e sistemas estão envolvidas nessa cardioproteção e de como medeiam e integram a resposta miocárdica ao estresse pode influenciar futuras terapias. O objetivo do presente trabalho é testar a hipótese de que a ocorrência de IM em animais previamente treinados é acompanhada de melhor função ventricular pós-IM, maior vascularização, em associação com menor expressão de marcadores inflamatórios e moduladores do metabolismo, e menos apoptose. Materiais e Métodos: Sessões de 60 min/dia, 05 dias/semana, por 08 semanas foram aplicadas no grupo exercício. Após este período os animais exercitados e sedentários foram randomizados para cirurgia de IM através da ligadura da artéria coronária esquerda (EI e SI, respectivamente), ou cirurgia controle (ES e SS, respectivamente), seguido de um período de sedentarismo de 04 semanas. A função ventricular esquerda foi obtida através da ecocardiografia, bem como o tamanho do infarto. A técnica de imunohistoquímica foi utilizada para detecção de PPAR-&#945;, PPAR-&#947;, TNF-&#945;, NF-kB, e &#945;-actina, e os resultados foram quantificados através de um sistema de análise de imagens automática por detecção de cores. A técnica de TUNEL foi utilizada para marcação de apoptose. Foram estudadas três regiões do coração: infarto (I), peri-infarto (P), e miocárdio sem infarto (M). Resultados: a mortalidade relacionada ao infarto foi maior no grupo sedentário em relação ao exercitado (25% vs 12%; P<0,05), sem diferença em relação a tamanho de IM. Comparado ao grupo EI, SI exibiu menor fração de encurtamento, maior taxa de apoptose, e aumento dos marcadores inflamatórios NF-kB e TNF-&#945; em I. O grupo SI mostrou correlações negativas entre quantidades de: a) PPAR-&#945; em M vs TNF-&#945; em I (R:-0,826, P=0,005); b) PPAR-&#945; vs NF-kB em I (R: -0,576, P=0,02) e em P (R:-0,505, P=0,03); c) TNF-&#945; em I e PPAR-alpha e PPAR-&#947; em M (R:-0,826, P=0,005 e R:-0,786, P=0,02); d) NF-kB em I e PPAR-&#945; em M (R:- 0,576, P=0,01) e e) NF-kB em P e PPAR-&#945; em M (R:-0,505, P=0,03). Houve correlação positiva entre NF-kB e PPAR-&#947; em P (R: 0,596, P=0,02). A densidade arteriolar não diferiu entre os dois grupos infartados, porém no grupo EI houve correlação negativa entre a densidade arteriolar em I e PPAR-&#947; em P (R: - 0,76, P=0,02). O número de células apoptóticas por campo (mediana) em SI e EI foi, respectivamente, 3,97 e 1,90 em I; 3,67 e 1,57 em P; e 1,41 e 1,13 em M. Houve menor número de células em apoptose em M em relação a I e P (P < 0,001) no grupo SI. Em EI, o número de células em apoptose/campo não diferiu entre as regiões estudadas. O número de células em apoptose por campo foi maior em SI comparado a EI em I (3,97 ± 0,61 vs 1,90 ± 1,82; P < 0,05) e em P (3,67 ± 0,73 vs 1,57 ± 1,07; P < 0,01). Conclusão: Os achados do presente trabalho suportam a hipótese de que a ocorrência de IM em animais previamente treinados é acompanhada de menor inflamação, menores taxas de apoptose, melhor função ventricular e possivelmente melhor interrelação entre moduladores do metabolismo energético e do sistema imunológico. / Exercise is a well recognized protective factor for cardiovascular morbidity and mortality. In spite of extensive data from epidemiologic studies and intervention, the subjacent cardioprotective mechanisms of exercise are still non clear. Some authors believe that the physical training induces development of more resistant myocardial fibers against external injuries and increased vascularization. Also, exercise seems to influence the modulation of the immune system. The understanding of mechanisms by which the exercise acts in the acute myocardial infarction (MI) progression may bring a better comprehension of different clinical outcome in apparently similar individuals. The knowledge of which molecules and systems are involved in this cardioprotection and how they mediate and integrate the stress myocardial response may help future therapies. The objective of the present work is to test the hypothesis that the occurrence of MI in previously trained animals is associated with a better post MI ventricular function, major vascularization, in association with lower expression of inflammatory markers and of metabolic modulators, and less apoptosis. Material and Methods: Sessions of 60 min/day, 05 days/week, for 08 weeks were applied in the exercised group. After this period, the exercised and sedentary animals were randomized to surgery for myocardial infarction, through the ligature of left coronary artery (EI and SI, respectively), or control surgery (ES and SS, respectively), followed by a 04 week sedentary period. The left ventricular function was obtained by the echocardiography as also the infarct size. Immunohistochemistry was used for detection of PPAR-&#945;, PPAR-&#947;, TNF-&#945;, NF-kB, ad &#945;-actin, and the results were quantified in an image analysis system by automatic collor detection. TUNEL technique was used for detection of apoptosis. Three regions of the heart were studied: infarcted (I), peri-infarcted (P), and non infarcted myocardium (M). Results: Infarction-related mortality was higher in SI comparing to EI group (25% vs 12%; P < 0.05), without differences in MI size. Compared to EI, SI group exhibited lower shortening fraction, higher apoptosis rate and higher local levels of inflammatory markers, such as NF-kB and TNF-&#945; at I. SI group showed negative correlations between the quantities of PPARs and inflammatory cytokines: a) PPAR-&#945; at M vs TNF-&#945; at I (R:-0.826, P=0.005); b) PPAR-&#945; vs NF-kB at I (R: -0.576, P=0.02) and P (R:-0.505, P=0.03); c) TNF-&#945; at I vs PPAR-&#945; and PPAR-&#947; at M (R:-0.826, P=0.005 e R:-0.786, P=0.02); d) NF-kB at I vs PPAR-&#945; at M (R:-0.576, P=0.01); and e) NF-kB at P vs PPAR-&#945; at M (R:-0.505, P=0.03). There was a positive correlation between NF-kB vs PPAR-&#947; at P (R: 0.596, P=0.02). The arteriolar density did not differ between the two infarcted groups. However, the exercised infarcted group showed a negative correlation between the arteriolar density at I and PPAR-&#947; at P (R:-0.76, P=0.02). Conclusion: These findings support the hypothesis that the occurrence of MI in previously trained animals is followed by lower local inflammatory markers, better ventricular function, and possibly a better interrelationship between modulators of the energetic metabolism and of the immune system.

A leprose é uma das principais doenças na citricultura brasileira devido à sua ocorrência difundida nos pomares e aos altos custos para o controle químico do ácaro vetor. A doença compromete a produção da planta e sua vida útil, manifestando-se através de lesões locais cloróticas ou necróticas em folhas, ramos e frutos, levando à queda prematura destes órgãos e à seca de ramos. O patógeno, Citrus leprosis virus C (CiLV-C), recentemente classificado como espécie tipo de um novo gênero de vírus de planta, Cilevirus, é transmitido pelo ácaro Brevipalpus phoenicis (Geijskes). Apesar de haver consenso de que a doença tem etiologia viral, ainda existem muitas questões pendentes sobre as interações vírus-planta-vetor, cujas soluções contribuirão para o controle integrado da doença. O presente trabalho teve como objetivo obter informações sobre a interação do vírus com células hospedeiras através de ensaios de imunolocalização das proteínas MP (putativa proteína de movimento), helicase (associada à replicação) e p29 (putativa proteína capsidial) do CiLV-C. Para tal, as sequências codificadoras das ORFs mp e hel foram amplificadas via RT-PCR e clonadas em vetor de expressão. Em seguida, promoveu-se a expressão in vitro das respectivas proteínas em células de E. coli e purificação por cromatografia de afinidade e troca iônica. A proteína MP pura foi utilizada para produção de antissoro policlonal específico que foi testado quanto à especificidade por métodos sorológicos. Os resultados do ELISA mostraram que o antissoro apresentou reação positiva com extratos foliares de lesões lepróticas em todos os estágios de desenvolvimento da doença, quando utilizado em altas concentrações. Além disso, lesões maduras reagiram mais intensamente que lesões mais novas. Por Western Blot, detectou-se somente a proteína pura, não sendo possível obter reação positiva em extrato de lesões foliares. Também não foi possível detectar a MP por imunolocalização in situ. Os resultados em conjunto sugerem que ocorre baixo nível de expressão da MP nos tecidos do hospedeiro. Empregando-se anticorpo policlonal contra proteína p29 do CiLV-C, foi possível detectar o CiLV-C em extratos de lesões foliares de leprose por ambos os métodos sorológicos testados e também por Tissue Blotting. Ensaios de imunolocalização in situ permitiram confirmar que as partículas baciliformes presentes em cisternas do retículo endoplasmático de tecidos de lesões lepróticas em plantas representam de fato vírions do CiLV-C. Além disso, também demonstrou-se que o viroplasma que ocorre no citoplasma representa o sítio de acúmulo da proteína p29. Este mesmo ensaio revelou que partículas baciliformes que ocorrem entre membranas de células adjacentes (intestino médio, glândulas prosomais, músculos e epiderme) de B. phoenicis virulíferos são de fato do CiLV-C. A ausência de viroplasma no ácaro sugere que a relação vírus/vetor seria do tipo circulativo, sem replicação. Baseado neste fato discutem-se alternativas para explicar como o vírus trafegaria do lúmen do intestino até o duto salivar para causar infecção numa planta sadia. / Citrus leprosis is one of the most important diseases in the Brazilian citrus production due to the wide occurrence in orchards and also to the high costs involved in the chemical control of the mite vector. The disease affects the plant production and longevity and it is characterized by localized chlorotic and/or necrotic spots on the leaves, stems and fruits. Affected leaves and fruits may drop prematurely and dieback can be observed in stems. The pathogen, Citrus leprosis virus C (CiLV-C), recently considered as the type member of a new genus, Cilevirus, is transmitted by the mite Brevipalpus phoenicis Geijskes. Despite the consensus that citrus leprosis has viral etiology, there are many pending questions regarding the viral interactions with the infected plant and the viruliferous mites. The solution of these questions may contribute to a better disease integrated management. This work aimed to obtain a better understanding about the virus-plant-vector relationship with the host cell by immunolocalization assays of the putative movement protein (MP), helicase (protein involved in the viral replication) and p29 (putative coat protein) of the CiLV-C. ORFs coding sequences of mp and hel was amplified by RT-PCR and cloned in the expression vector. Afterwards, in vitro expression of these proteins in E. coli and its purification by affinity chromatography were realized. The purified MP was used to produce specific polyclonal antibody that was tested for specificity by serological methods. The ELISA results showed that high concentration antibody reacted with the leaves extracts from lesions in all the disease stage of development. Furthermore, the old lesions reacted more intensely than the younger. Western blot (which detected only the pure protein) and in situ immunolocalization assays failed to detect the native MP in lesioned leave extracts. The results as a hole suggest the occurrence of low expression of MP in host tissue. The polyclonal antibody against p29 was able to detect the virus in lesioned plant extracts by PTA-ELISA, Western Blot, and Tissue Blotting. The viral nature of the putative viral particles, present within endoplasmic reticulum cisternae of infected leaf tissue, was confirmed by immunogold label. The labeling also occurred intensely in the viroplasmas, indicating that these structures represent p29 protein accumulation site. Putative virus particles, visualized in viruliferous B. phoenicis, between membranes of adjacent cells (midgut, prosomal glands, epidermis, muscles), was also immunogold labeled indicating that they represent CiLV-C. The absence of viroplasma in the mite tissues suggests that CiLV-C / B. phoenicis relationship is of the circulative type, without replication. Based on this finding, we search for possible alternatives for the viral circulation in the mite body from the midgut lumen to the salivary duct for the infection of a healthy plant to occur.

Estudos prévios demonstram projeções dos núcleos da rafe para áreas clássicas relacionadas ao controle do sistema cardiovascular, como locus coeruleus, núcleo do trato solitário, coluna intermédio lateral da medula espinal, núcleos motor dorsal do vago e ambíguo. Baseado nesta informação este estudo investigou a participação dos núcleos da rafe nas respostas adaptativas a estímulos de hipervolemia e hipovolemia. Foram utilizados ratos machos (Wistar), adultos, mantidos em biotério sob condições controladas, divididos em cinco grupos: hipovolemia (Hipo, submetidos à punção cardíaca com remoção sangüínea), controle da hipovolemia (C hipo, submetidos à punção cardíaca sem remoção sangüínea), hipervolemia (Hiper, submetidos à cirurgia para canulação da veia jugular externa e adição de solução salina no sexto dia pós-cirúrgico), controle da hipervolemia (C hiper, submetidos à cirurgia para canulação da veia jugular externa sem adição de solução salina) e basal (BS). Após 90 minutos do estímulo, os animais foram profundamente anestesiados e perfundidos transcardiacamente com salina seguida de fixador Paraformaldeído + Bórax 4%, 4ºC, pH 9,5. Os encéfalos foram removidos pós-fixados, crioprotegidos e seccionados em cortes coronais de 40 µm e processados com técnicas de imunohistoquímica contra Fos e 5-HT. Os estímulos de hipo e hipervolemia não causaram aumento significativo dos neurônios Fos-imunoreativos ou 5HT/Fos-imunoreativos. Nos núcleos Li, DR, MnR, RMg e ROb o grupo C hipo apresentou maior número de neurônios Fos-IR e 5HT/Fos-IR em relação ao grupo C hiper. Os resultados sugerem que os núcleos da rafe não participam nas repostas adaptativas aos estímulos aplicados. Entretanto, os mesmos parecem estar envolvidos em processos de nocicepção, seja através da 5-HT ou de outras substâncias neuroativas, presentes nestes núcleos. / Previous studies presented projections from the raphe nuclei to areas related to the cardiovascular control, like the locus coeruleus, nucleus of the solitary tract, spinal cord intermedium lateral column, dorsal motor vagus and ambiguus nuclei. Based in this information, the present work analyzed the participation of the raphe nuclei in the adaptative responses to hypovolaemia and hypervolaemia. Were used wistar rats, kept in controlled conditions, divided in 5 groups: hypovolaemia (Hypo, cardiac puncture and blood extraction), hypovolaemia control (C Hypo, cardiac puncture without blood extraction), hypervolaemia (Hyper, external jugular vein canulation surgery and saline addition), hypervolaemia control (C Hyper, external jugular vein canulation surgery and no saline addition) and basal condition (BS). Ninety minutes after the stimulus, the animals were anesthetized and perfused with saline followed by 4% paraformaldehyde plus borax, pH 9.5 at 4ºC. The brains were removed, pos-fixated, cryoprotected, sectioned in 40µm thickness coronal slices and proceeded with double-labeling immunohistochemistry techniques against Fos protein and serotonin. The Hypo and Hyper stimuli presented no significant increase of Fos-IR and double-labeled neurons. The C Hypo group presented higher number of labeled neurons in the Li, DR, MnR, RMg and ROb nuclei in comparison to the group C Hyper. These results suggest that the raphe nuclei have no participation in the adaptative responses to the volemy stimuli. However, this nuclei seems to be related to the nociception no modulated just by the serotonin but by others neurotransmitters too.

INTRODUÇÃO: A deiscência das anastomoses colorretais continua uma grave complicação da cirurgia colorretal. Pouco se sabe sobre as alterações moleculares que podem influenciar esse processo, mas entende-se que a síntese do colágeno é fundamental para uma adequada cicatrização. As Heat Shock Proteins (HSP) estão expressas em situações de estresse, tais como a hipovolemia, além de participarem da síntese do colágeno. Além disso, há poucas informações sobre a expressão da HSP70 nos processos cicatriciais. OBJETIVOS: Determinar a expressão da HSP70 no intestino grosso e nas anastomoses intestinais de ratos normo e hipovolêmicos, bem como a quantidade do colágeno total e a qualidade das células inflamatórias envolvidas nesse processo, além de correlacioná-las. MÉTODOS: Utilizaram-se 40 ratos Wistar que foram divididos em seis grupos. Submeteram-se 24 animais a cateterização da artéria carótida, seguida de sangramento (20% da volemia); destes, 8 foram submetidos somente à hipovolemia e, os outros 16, à hipovolemia seguida de colectomia (direita e esquerda). Dividiram-se os outros 16 animais em dois grupos: em oito realizou-se colectomia direita e nos outros oito, esquerda. Os espécimes foram avaliados no 7º e no 14º dia de pósoperat ório (PO). Pela coloração de Hematoxilina-eosina, avaliaram-se as células inflamatórias e a presença de necrose nas anastomoses, pelo método de Picrossírius, a quantidade de colágeno e por imunohistoquímica, a expressão da HSP70. RESULTADOS: A expressão da HSP70 no intestino grosso diminuiu com a hipovolemia (p<0,05). Não houve diferença estatística entre as células inflamatórias encontradas nas anastomoses dos grupos estudados. A quantidade de colágeno foi menor no 7º que no 14º dia de pósoperat ório (p<0,05), diferentemente da expressão da HSP70, que foi maior no 14º que no 7º dia (p<0,05). No 7º dia, a quantidade de colágeno estava menor no grupo desafio que no grupo controle (p<0,05), fato que não se repetiu no 14º dia de pós-operatório. Em relação à expressão da HSP70 nas anastomoses intestinais, não houve diferença estatística entre o grupo desafio e o controle, mas no à direita, tanto no 7º quanto no 14º dia houve tendência à diferença significativa. CONCLUSÕES: A expressão da HSP70 no intestino grosso é afetada pela hipovolemia, aumenta na cicatrização das anastomoses e é mais evidente quando a quantidade de colágeno é menor. A expressão da HSP70 pode ser um potencial marcador biológico das complicações das anastomoses intestinais. / INTRODUCTION: The anastomotic leakage remains a serious complication in surgery of large bowel. The influence about the molecular mechanisms involved at this process is barely known, but its well known that collagen synthesis is essential for good healing. The Heat Shock Proteins (HSP) are expressed at stress situations, such as hypovolemia, also they are involved at the process of collagen synthesis. Besides, there are a few information about HSP70 expression at the healing process. OBJECTIVES: To determine the HSP70 expression at large bowel and intestinal anastomoses in normal and hypovolemic rats, as well as the amount of collagen and the quality of the inflammatory cells involved at this process, and correlate them. METHODS: It was used fourty Wistar rats divided into six groups. Twenty-four rats were submitted to catheterization of carotida artery followed by withdraw of 20% of their blood volume; eight of them were underwent just to hypovolemia and the others sixteen to hypovolemia followed by colectomy (right and left). The remaining sixteen rats were divided into two groups: eight of them were underwent to right colectomy and eight to the left. The specimens were analyzed at the seventh and fourteenth postoperative (PO) days. The inflammatory cells were assessed by Hematoxilin-eosin, the amount of collagen was stained by red Picrossirius and the HSP70 expression was determined by immunohistochemical study. RESULTS: The HSP70 expression at the large bowel gets lower when there is hypovolemia (p<0.05). There was no statistic difference on the inflammatory cells found in the groups. The amount of collagen was lower at the seventh than the fourteenth day (p<0.05), unlikely the HSP70 expression, which was the opposite (p<0.05). At the seventh day, the amount of collagen was lower at the study group than at the control group (p<0.05), otherwise at the fourteenth postoperative day. There was no statistic difference in HSP70 expression at the anastomoses of the groups, but at the right colon, there was disposition to significative difference at both days. CONCLUSION: The HSP70 expression at the large bowel is modified by hypovolemia, increases at the anastomoses healing and is more evident when the amount of collagen is lower. The HSP70 expression can be a potential biological marker of the complication of these anastomoses