Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-03Bitstream added on 2014-06-13T19:54:56Z : No. of bitstreams: 1 dias_smd_me_araca.pdf: 807361 bytes, checksum: ed849363fac8aa468c1917c6eb85af8b (MD5) / Objetivo:Avaliar a atuação do E2 durante a regeneração alveolar, utilizando a expressão das proteínas OPG, RANK e RANKL como indicadores celulares de predisposição à reabsorção ou formação de tecido ósseo. Material e métodos: Após 8 dias da cirurgia SHAM ou ovariectomia (OVX), as ratas (200g) OVX receberam implantes subcutâneos contendo óleo de milho (grupo OVX/óleo) ou E2 (400μg) (grupo OVX/E2). As exodontias dos incisivos superiores direitos foram realizadas no decorrer do tratamento e agendadas para que ao término de 60 dias fosse possível obter as peças referentes a 14, 28 e 42 dias de regeneração óssea alveolar. As peças foram submetidas a processamento imunoistoquímico. Resultados: Nos animais com ciclo estral regular (grupo SHAM), foi observada expressão baixa aos 14, média/alta aos 28 e a não expressão de OPG e RANKL aos 42 dias. A expressão de RANK iniciou alta e foi diminuindo até o último período analisado. No grupo OVX/Óleo a expressão de RANKL foi crescente até o término da análise aos 42 dias, enquanto que a expressão de RANK diminuiu ao longo do período estudado. Foi observada expressão de OPG no início e ao final do período analisado. Os animais OVX/E2 apresentaram marcação semelhante para OPG, RANK e RANKL aos 14 dias. A expressão de RANKL foi observada até o final do experimento, entretanto não foi detectada expressão de OPG e RANK aos 28 e 42 dias. Conclusão: Estes resultados evidenciam a participação do E2 modulando o ciclo de remodelação óssea alveolar. / Objective: To evaluate the role of E2 during alveolar bone regeneration, using OPG, RANK and RANKL protein expression as cellular indicators of predisposition to resorption or bone tissue formation. Methods: Eight days after either SHAM surgery or ovariectomy (OVX), the OVX rats (200g) received subcutaneous implants with corn oil (OVX/oil group) or E2 (400μg) (OVX/E2 group). Extraction of the maxillary right incisors were performed during the course of the treatment and was scheduled in such a way that at the end of a 60-day period it would possible to retrieve anatomic pieces referring to 14, 28 and 42 days of alveolar bone healing. The pieces were submitted to immunohistochemical processing. Results: In the animals with regular estrous cycle (SHAM group), it was observed low expression at 14 days, medium/high expression at 28 days and no OPG and RANKL expression at 42 days. RANK expression started high and decreased continuously up to the last analyzed period. In the OVX/oil group, RANKL expression increased up to the completion of the analysis at 42 days, whereas RANK expression decreased within the studied period. OPG expression was observed in the beginning and the end of the analyzed period. The animals OVX/E2 showed similar labeling for OPG, RANK and RANKL at 14 days. RANKL expression was observed up to the end of the experiment. However, no OPG and RANK expression was detected at 28 and 42 days. Conclusion: These results demonstrate the role of E2 modulating the alveolar bone remodeling cycle.

As encefalopatias espongiformes transmissíveis (EETs), também conhecidas como doenças do príon, ocorrem tanto nos animais como no homem, são responsáveis por doenças transmissíveis e hereditárias e provocam lesões degenerativas no cérebro. A presença de uma forma anormal da proteína (PrPsc) no tecido encefálico e linforreticular é característica peculiar das EETs. Essa proteína é altamente insolúvel e resistente à degradação por proteases e se deposita eventualmente sob forma de placas amilóides na substância cinzenta. Tais placas provocam a morte maciça de neurônios e células gliais, causando vacuolização intensa no tecido afetado. Este trabalho consistiu na otimização da técnica de imuno-histoquímica para proteína priônica no tecido nervoso e no tecido linforreticular, como método diagnóstico de EETs em bovinos, ovinos e caprinos. Além disso, verificou-se a eficiência da utilização de folículos linfóides coletados por biopsia de terceira pálpebra e mucosa retal para o diagnóstico de scrapie em ovinos e caprinos. Além disso, verificou-se a eficiência da utilização de folículos linfóides coletados por biopsia de terceira pálpebra e mucosa retal para o diagnóstico de scrapie em ovinos e caprinos. Entre janeiro de 2005 e janeiro de 2008 foram realizados exames de imuno-histoquímica e coloração por hematoxilina-eosina em amostras de tecidos de 5571 ruminantes (4829 bovinos, 1 bubalino, 708 ovinos e 33 caprinos) obtidas em necropsias, biopsias e materiais enviados para diagnóstico em formalina 10% ou em blocos de parafina. Os anticorpos monoclonais anti-príon F89/160.1.5 e F99/97.6.1 foram utilizados na técnica de imuno-histoquímica. Todas as amostras de bovinos e a do bubalino analisadas foram negativas para PrPSc. Entre os 741 ovinos e caprinos pesquisados, foram diagnosticados 81 animais positivos, 16 suspeitos e, em 100 animais, o material foi insuficiente para o diagnóstico. Foram realizadas cinco repetições da imuno-histoquímica para cada amostra positiva para PrPSc. O diagnóstico por imuno-histoquímica no tecido linforreticular foi considerado positivo quando o material apresentava um número de no mínimo quatro folículos linfóides, com centros germinativos. Este trabalho inclui o primeiro diagnóstico positivo de scrapie na espécie caprina no Brasil, com marcação imuno-histoquímica nas tonsilas, terceira pálpebra e linfonodo. A marcação pela imuno-histoquímica em quatro ovinos da raça Santa Inês, todos com diagnóstico positivo nas tonsilas e linfonodos e um deles também com depósito de PrPSc na terceira pálpebra, surge como primeiro diagnóstico da doença nessa raça no Brasil. Os resultados considerados suspeitos ou insuficientes observados nas amostras de biopsias ou enviadas por terceiros indicam que há ajustes a serem estudados, especialmente quanto à coleta das amostras. O envio de material de vários órgãos linfóides possibilitaria a confirmação da presença ou não do agente em pelo menos dois deles, diminuindo o número de casos considerados suspeitos e o risco de falsos positivos. O envio de amostras de biopsia de tonsila, terceira pálpebra e mucosa retal, conjuntamente, reduziria o número de casos suspeitos e eliminaria grande parte, senão a totalidade dos casos com material insuficiente para diagnóstico. / Transmissible spongiform encephalopathies (TSEs), also known as prion diseases, occur in animals and humans and are responsible for transmissible and inherited disorders that cause fatal degenerations of the brain. A peculiar characteristic of TSEs is the conversion of a host-encoded glycoprotein termed prion protein (PrP), from a normal cellular form, PrPC, to an abnormally folded isoform, PrPSc, present in the nervous and lymphoreticular tissues. The prion protein PrPSc is highly insoluble and resistant to the proteases degradation, eventually leading its accumulation, forming amyloid protein plates deposition in the brain gray substance. These plates cause massive death of neurons and glial cells, producing intense vacuolation in the affected tissue. In this work, the immunohistochemical procedures were optimizated for prion protein in nervous and lymphoreticular tissues to provide diagnosis of TSEs in bovine, sheep and goat, and also to verify the efficiency of lymphoid follicles from third eyelid and rectal mucosa biopsies for the scrapie diagnosis in sheep and goats. Between January, 2005 and January, 2008 immunohistochemistry examinations and hematoxylin-eosin staining were accomplished in tissue samples from 5571 ruminants (4829 bovines, 1 water buffalo, 708 sheep and 33 goats), obtained from necropsies and biopsies, and samples of 10% formalin-fixed or paraffin embedded tissues submitted by other laboratories. The monoclonal antibodies anti-PrP F89/160.1.5 and F99/97.6.1 were used in the immunohistochemical procedures. All the samples from cattle and the water buffalo analyzed were negative to PrPSc. Among the 741 sheep and goats, there were 81 positive and 16 suspect samples, and 100 of them were insufficient to test. Five immunohistochemical repetitions were performed for each positive PrPSc sample. The immunohistochemistry diagnosis in the lymphoreticular tissues was considered positive when the material presented at least four lymphoid follicles with germinal centers. This work includes the first positive case in goats in Brazil (through immunohistochemical labelling in tonsils, third eyelid and lymph node) and the first four cases in Santa Inês sheep, by the same technique. The results considered as suspect or of insufficient sample indicate that some aspects associated with sample collection need further adjustment. The submission of samples from several lymphoid organs would probably make possible the confirmation or not of the agent presence in at least two of them, reducing the number of suspect and false positive cases. Simultaneous submission of biopsy samples from tonsil, third eyelid and rectal mucosa together could reduce the number of suspicious cases, besides of eliminating great part or even the totally of the insufficient samples.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-06-15T21:32:04Z No. of bitstreams: 1 VivianeAlvesDeOliveira_TESE.pdf: 3374047 bytes, checksum: 44d9876dbb2ee4424f40958d76b2c3ba (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-06-19T22:23:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 VivianeAlvesDeOliveira_TESE.pdf: 3374047 bytes, checksum: 44d9876dbb2ee4424f40958d76b2c3ba (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-19T22:23:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VivianeAlvesDeOliveira_TESE.pdf: 3374047 bytes, checksum: 44d9876dbb2ee4424f40958d76b2c3ba (MD5) Previous issue date: 2018-01-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / O carcinoma de células escamosas oral (CCEO) resulta de processos de descontroles de eventos celulares provocados por mutações decorrentes de agentes genotóxicos, o que pode levar, dentre outros fatores, à perda de controle do processo de proliferação celular, sendo este considerado um dos precursores do câncer oral. A busca por biomarcadores para o CCEO constitui alvo de várias pesquisas, dentre as quais destacam-se proteínas de reparo do DNA como a XRCC1 e APE1 e proteínas do ciclo celular como p53 e Ki67. Assim, o objetivo desta pesquisa foi analisar a expressão imunoistoquímica das proteínas de reparo APE1, XRCC1 e das proteínas envolvidas no ciclo celular p53 e ki67, associando-as entre si e com parâmetros prognósticos clínicos e histopatológicos, em carcinoma de células escamosas de língua oral (CCELO), visando contribuir para o melhor entendimento da participação dessas proteínas no desenvolvimento desta neoplasia. A expressão imunoistoquímica de APE1 e XRCC1 foi avaliada de forma semiquantitativa e a de p53 e ki67 de forma quantitativa, em 58 casos de Carcinoma de células escamosas de língua oral (CCELO). Os dados clínicos foram coletados nos prontuários médico de cada paciente e a gradação histopatológica de Brandwein-Gensler efetuada para cada caso. Para a análise estatística foram realizados os testes de Qui-quadrado e Exato de Fisher e adotou-se significância de p<0,05. A maioria dos casos apresentou alta imunoexpressão para APE1 (n = 36; 62,1%), assim como para XRCC1 (n = 38; 65,5%). Já para as proteínas Ki67 e p53, houve uma distribuição igual quando os casos foram categorizados em baixa e alta expressão (n = 29, 50%). A imunoexpressão de XRCC1 foi significativamente maior nos casos de lesão em estágio inicial I e II (n = 23; 62,2%) em relação aos estágios avançados III e IV (n=16, 80%, p = 0,05). A imunoexpressão de p53 foi significativamente maior nos casos de lesão em estágio avançado (n = 19; 65,5%) e baixa em estágios iniciais (n=17, 60,7%; p = 0,047). Nenhuma das proteínas estudadas mostrou associação entre si, nem com os demais parâmetros clínicos e a gradação histopatológica. Apesar da associação significativa da maior imunoexpressão de XRCC1 com melhor estadiamento clínico e da p53 com o pior estadiamento clínico, estas não foram embasadas quando analisado o desfecho dos pacientes. Os resultados desta pesquisa indicam que XRCC1 e APE1 participam do processo de carcinogênese do CCELO, porém, a expressão imunoistoquímica destas e de p53 e Ki67 não mostraram associação com parâmetros prognósticos. / Oral squamous cells carcinoma (OSCC) results from processes of decontrol of cellular events caused by mutations due genotoxic agents, which may lead, among other factors, to loss of control of the cellular proliferation process, being considered as one of the precursors of oral cancer. Searching biomarkers for OSCC is the target of several studies, among the markers it is highlighted the DNA repair proteins, such as XRCC1 and APE1, and cell cycle proteins, such as p53 and Ki67. Thus, the aim of this study was to analyze the immunohistochemical expression of APE1, XRCC1 and the proteins involved in the cell cycle, p53 and ki67, associating them with clinical and histopathological prognostic parameters in oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC), in order to contribute to the better understanding of the participation of these proteins in the development of this neoplasia. The immunohistochemical expression of APE1 and XRCC1 was evaluated semiquantitatively and the expression of p53 and ki67 quantitatively, in 58 cases of OTSCC. Clinical data were collected from the medical records of each patient and the histopathological grading of Brandwein-Gensler was carried out for each case. For the statistical analysis, Chi-square and Fisher's exact test were performed, and significance was set at p <0.05. The majority of cases showed high immunoexpression of APE1 (n = 36; 62.1%), as well as of XRCC1 (n = 38; 65.5%). In relation to the Ki67 and p53 proteins, there was an equal distribution when the cases were categorized into low and high expression (n = 29, 50%). XRCC1 immunoexpression was significantly higher in cases of early stage lesions I and II (n = 23; 62.2%) compared to advanced stages III and IV (n = 16, 80%, p = 0.05). The Immunoexpression of p53 was significantly higher in cases of advanced lesion (n = 19; 65.5%) and low in early stages (n = 17, 60.7%, p = 0.047). None of the studied proteins showed association with each other, nor with the other clinical parameters and histopathological grading. Despite the significant association of the highest XRCC1 immunoexpression with better clinical staging and of p53 with the worst clinical staging, these results were not supported when the patients' outcome were analyzed. The results of this study indicate that XRCC1 and APE1 participate in the process of carcinogenesis of OTSCC, but the immunohistochemical expression of these proteins and also p53 and Ki67 did not show any association with prognostic parameters.

No indivíduo adulto, a angiogênese ocorre particularmente em situações patológicas como nos tumores em crescimento, no desenvolvimento de metástases e no processo de cicatrização, sendo o fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) o principal fator envolvido na angiogênese tumoral. Por essa razão, o presente estudo teve como objetivo avaliar os níveis circulantes de VEGF no soro de cães com sarcoma de tecidos moles e sua relação com as células sanguineas, comparados com um grupo de animais sem câncer (controle), a expressão do VEGF e a densidade de microvasos nos espécimes tumorais dos cães com sarcoma de tecidos moles. O grupo controle foi composto de 30 cães machos e o grupo de animais com sarcoma de tecidos moles foi de 25 cães (18 machos e 7 fêmeas castradas) os quais foram avaliados prospectivamente. A coleta sangüínea foi realizada apenas uma vez no grupo controle e em três tempos nos animais com sarcoma (pré-operatório, duas semanas e três meses de pós-operatório) da mesma maneira. Após a colheita o sangue foi processado, para extração do soro e determinação dos níveis de VEGF a partir de um método quantitativo ELISA (enzime-linked immunosorbent assay). A expressão do VEGF e a densidade de microvasos foi investigada por meio da prova de imunoistoquiímica utilizando-se anticorpos anti-VEGF e anti-fator VIII respectivemente. Não houve diferença entre o nível sérico de VEGF dos animais controles e portadores de sarcoma de tecidos moles no tempo pré-operatório. O nível de VEGF sérico no pré-operatório mostrou-se discretamente aumentado em relação a duas semanas e três meses de pós-operatório. Houve correlação positiva entre VEGF sérico e contagem neutrófilos e correlação negativa entre o VEGF e quantidade de hemoglobina nos animais com sarcoma. Houve uma tendência dos animais com hemangiopericitoma apresentarem níveis maiores de VEGF sérico em relação aos portadores de tumor maligno da bainha neural periférica. Houve expressão do VEGF em 65% dos casos, sendo o hemangiopericitoma aquele que expressou maior quantidade de VEGF intratumoral. Não houve diferença na densidade de microvasos entre os tumores negativos e positivos ao VEGF. Os resultados encontrados sugerem contribuição das células do sangue circulante para os níveis de VEGF do soro de cães portadores de sarcomas de tecidos moles, células tumorais e outros tipos celulares parecem ser responsáveis pela angiogênese tumoral, mas não contribuem para elevação da concentração sérica desse fator. / In adult individual, angiogenesis occurs particularly in pathological situations as tumors growth, development of metastasis and in the wound healing process. The vascular endothelial growth factor (VEGF) is the main agent involved in tumor angiogenesis. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the circulating levels of VEGF in the serum of dogs suffering from soft tissue sarcoma and its relation with the blood cells, and also the expression of VEGF and the micro vascular density in tumors specimens. A group of health animals was used as control. The control group and treatment group were composed of 30 male dogs 25 dogs (18 males and 7 castrated females) respectively. The blood collection was carried once in the control group and three times in the animals with sarcoma (timely, pre-surgery, two weeks and three months post-surgery) following the same protocol. The blood was processed and a quantitative method ELISA (enzime-linked immunosorbent assay) was used to determinate of the levels of VEGF. The expression of the VEGF and the microvascular density were investigated by means of the immunohistochemical test using anti-VEGF and anti-factor VIII antibodies respectively. There was no difference between serum level of VEGF of the controls animals and serum level of VEGF in the animal with soft tissue sarcoma in pre-surgical time. Serum level of VEGF in pre-surgical time revealed discrete increased in relation the two weeks and three months of post-surgery. There was a positive correlation between serum VEGF and neutrophils counting and negative correlation between the VEGF and amount of haemoglobin in the animals with sarcoma. The animals with hemangiopericytoma showed a trend to higher levels of VEGF in relation to the malignant peripheral nerve sheath tumor. The expression of the VEGF was detected in 65% of the cases; the hemangiopericytoma is the one that expressed greater intratumoral amount of VEGF. There was no difference in the microvascular density between the negative and positive tumors to the VEGF. The results suggest contribution of the circulating blood cells for the levels of serum VEGF of the of the dogs with of soft tissue sarcomas, tumors cells and other cells types seem to be responsible for tumor angiogenesis, but they don\'t contribute for rise serum level of VEGF.

Introdução: Um dos primeiros sistemas de defesa contra os microrganismos é a via dos receptores Toll-like (TLRs). A ativação destes receptores leva à síntese de citocinas, dando início à resposta imune inata. Em modelos animais, o TLR2, TLR4 e TLR9 parecem estar relacionados com o reconhecimento de antígenos de Leishmania. A relação entre TLRs e leishmânia pode ser um mecanismo chave no desenvolvimento da doença ou no controle da mesma. Até o momento não existem estudos de TLRs na leishmaniose cutânea humana. Objetivo: Determinar o padrão de expressão e as células associadas com o TLR2, TLR4 e TLR9 na leishmaniose cutânea. O objetivo secundário é correlacionar a quantidade de TLRs com a quantidade de citocinas e células inflamatórias na pele. Métodos: Cem biópsias de pacientes com leishmaniose cutânea causadas por Leishmania (V.) braziliensis foram selecionadas inicialmente. Apenas os casos confirmados (presença de amastigotas no raspado, teste de Montenegro positivo, imunoistoquímica com presença de antígenos de Leishmania e reação em cadeia da polimerase com DNA de Leishmania (V.) braziliensis foram incluídos. Um grupo controle de pele normal foi incluído para comparação (quatro casos). A expressão de TLR2, TLR4 e TLR9 foi determinada por técnica imunoistoquímica, da mesma forma que os fenótipos celulares (células NK, macrófagos, células dendríticas, células CD4 e CD8) e citocinas (IL-1, IL-6, IL-12, TNF-alfa, IFN-gama). Dupla-marcação foi realizada para identificar as células que expressaram os TLRs analisados. Análise semi-quantitativa foi utilizada para avaliação da expressão de TLRs na epiderme, enquanto na derme foi realizada análise quantitativa. O nível de significância foi estabelecido com p<0,05. Resultados: Doze casos preencheram os critérios de inclusão. Os pacientes eram todos masculinos, com lesões apenas em membros inferiores e mediana de idade de 23 anos [16-47]. A expressão de TLR2, TLR4 e TLR9 na epiderme da pele normal foi alta. Quando comparados com pele normal, tanto TLR4 quanto TLR2 mostraram menor expressão no epitélio dos pacientes com leishmaniose e não houve expressão de TLR9. A média de células expressando TLR2 na derme foi de 136,36±82,46 células/mm2, ao passo que a média de células expressando TLR4 foi de 3,21±4,11 células/mm2. A contagem de TLR9 foi de 86,15±88,36 células/mm2 predominando em áreas de formação de granulomas. A regressão linear não demonstrou relação entre a contagem de células marcadas ou citocinas com TLR2 ou TLR4. O aumento proporcional da expressão de TLR9 relacionou-se com maior expressão de IL-12 e IL-4 (p < 0,05). A dupla marcação demonstrou que os macrófagos expressaram TLR2. A dupla marcação não mostrou expressão de TLR2 nas células dendríticas e nas células NK. Conclusão: A leishmaniose cutânea localizada associa-se com a presença de TLR2, TLR4 e TLR9. No epitélio a expressão de TLR2 e TLR4 em pacientes com leishmaniose está diminuída em relação aos pacientes controles. A expressão do TLR2 na derme é estatisticamente maior que a de TLR4 e TLR9, a qual é expressa pelos macrófagos. A expressão de TLR9 ocorre principalmente nas áreas de granulomas havendo relação com a expressão de IL-12 e IL-4 / Introduction: One of the first systems of defense against microorganisms is the Toll-like receptors (TLRs) pathway. The activation of these receptors promotes the cytokine synthesis, initiating the innate immune response. In animal models, TLR2, TLR4 and TLR9 appear to be related to the recognition of antigens of Leishmania. The relationship between TLRs and Leishmania can be a key mechanism in the development of the disease or it control. Until now, there are not studies about TLRs in human cutaneous leishmaniasis. Objective: To determine the expression pattern and the cells associated with TLR2, TLR4 and TLR9 in cutaneous leishmaniasis. The secondary objective is to correlate the amount of TLRs with the amount of cytokines and inflammatory cells. Methods: One hundred biopsies from patients with cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania (V.) braziliensis were initially selected. Only confirmed cases of cutaneous leishmaniasis were included in the analysis (presence of amastigotes in the scraping, positive Montenegro test, immunohistochemistry with the presence of Leishmania antigens and polymerase chain reaction with DNA from Leishmania (V.) braziliensis. A control group (4 cases) of normal skin was included for comparison. The expression of TLR2, TLR4 and TLR9 was determined by immunohistochemistry, as well as cell phenotypes (NK cells, macrophages, dendritic cells, CD4 and CD8) and cytokines (IL-1, IL-6, IL-12, TNF-alpha, IFN-gamma). Double-staining was used to determine the cells expressing TLRs. Semi-quantitative analysis was used for evaluation of the expression of TLRs in the epidermis. Quantitative analysis was performed to evaluate the expression in the dermis. The level of significance was defined as p <0.05. Results: 12 cases fulfilled inclusion criteria. The patients were all male, with lesions in lower limbs and median age of 23 years [16-47]. The expression of TLR2 and TLR4 in the epidermis of normal skin was high. When compared with normal skin, TLR2 and TLR4 showed lower expression in the epidermis. There was no expression of TLR9 in the epidermis in cases of cutaneous leishmaniasis and normal skin. The mean number of cells expressing TLR2 in the dermis was 136.36±82.46 cells/mm2, while the average of cells expressing TLR4 was 3.21±4.11 cells/mm2. The count of TLR9 was 86.15±88.36 cells/mm2, and it was found mainly in the areas of granuloma formation. Linear regression showed no relationship between the number of labeled cells or cytokines with TLR2 or TLR4. There was an association between TLR9 and two cytokines (IL-12 and IL-4). This correlation suggested that the proportional increase in the expression of TLR9 was related to greater expression of IL-12 and IL-4 (p<0.05). The double staining showed that macrophages and endothelial cells expressed TLR2. The double staining showed no expression of TLR2 in dendritic cells and NK cells. Conclusion: The localized cutaneous leishmaniasis associated with the presence of TLR2, TLR4 and TLR9. The expression of TLR2 in the dermis was statistically greater than that of TLR4 and TLR9, which is expressed by macrophages. The expression of TLR9 occurs primarily in the areas of granulomas was associated with the expression of IL-12 and IL-4

Objetivos: Recentemente, a Espectroscopia de Fluorescência (EF) tem sido estudada como método de análise de propriedades da pele de forma nãoinvasiva e em tempo real, utilizada em uma variedade de aplicações, incluindo avaliação e diagnóstico do tecido in vivo. Contudo, na cicatrização da pele, essa técnica não tem sido completamente explorada. Visto que a determinação da idade de uma lesão é um aspecto importante na medicina forense, esse trabalho tem por objetivo testar a aplicabilidade da medida da Intensidade de Fluorescência (IF) após o uso de metil-aminolevulinato (MAL) na estimativa da idade de lesão incisa, através da EF ao longo do tempo e fazer a correlação desta com os achados histológicos. Materiais e Métodos: Foram utilizados camundongos hairless como modelo experimental. Os animais foram divididos em dois grupos: com (+) e sem (-) o uso de MAL antes da EF. Incisões cirúrgicas lineares foram realizadas no dorso de cada animal. Espectros na faixa de 480 e 800 nm foram coletados da lesão e da pele normal adjacente, usando o sistema Ocean Optics, correspondendo a quatro condições: a) IF da lesão após MAL (+/+); b) IF da pele normal após MAL (-/+); c) IF da lesão sem MAL (+/-) e d) IF da pele normal sem MAL (-/-). Após a cirurgia, os animais foram monitorados periodicamente até 3 meses de pós-operatório e eutanaziados em grupos. Fragmentos de pele, contendo todo o ferimento, foram removidos e processados para análise histológica por métodos estereológicos. Vários cortes histológicos foram analisados para avaliar a organização da derme e da epiderme, deposição de colágeno e proliferação celular (imunoistoquímica por PCNA). Resultados: Nas fases iniciais da cicatrização, a EF in vivo mostrou acúmulo preferencial de protoporfirinas na lesão com uso de MAL (+/+), quando comparado à pele normal adjacente (-/+). Contudo, nas fases avançadas, ocorreu o inverso. Houve uma diferença estatisticamente significante neste grupo (+/+) ao longo do tempo (p < 0,0001), o que não aconteceu com os demais ((-/+); (+/-) e (-/-)). O modelo apresentado permitiu a estimativa da idade de lesão incisa no intervalo de dois meses, sendo possível estimar a fase de cicatrização em que esta se encontra. Achados histológicos confirmaram as fases da cicatrização, mostrando correlação com os achados de fluorescência. Conclusão: Os resultados mostraram que a técnica de EF usando MAL é um método promissor na análise dos estágios da cicatrização da pele / Background and Objective: In recent years, Fluorescence Spectroscopy (FS) has been explored as a novel noninvasive and real-time technique for analysis of skin properties, useful in a wide variety of applications, including tissue evaluation and diagnosis. However, the use of FS in skin wound healing has not been fully explored. Since aging of injuries on a victims body is an important aspect of forensic medicine, this paper intended to test the usefulness of collecting Fluorescence Intensity (FI) after topical MAL on age estimate of the incised lesion, through the study by FS over time and correlation with histological findings. Materials and Methods: As experimental model, was used hairless mice. The mice were divided into two groups: with (+) and without (-) use MAL before FS. Standardized linear wounds were made on the dorsum of each mice. Spectra in the 480-800 nm wavelength range were collected from normal and wound skin using Ocean Optics system, corresponding to four conditions: a) FI of skin wound after MAL (+/+); b) FI of normal skin after MAL (- /+); c) FI of skin wound without MAL (+/-) and d) FI of normal skin without MAL (- /-). After wounding, the animals were monitored periodically until 3 months and killed in groups. Tissue specimens, containing the whole wound, were removed and processed for histological analysis using stereological techniques. Several cross-sections were analyzed to evaluate the organization of the dermis and epidermis, collagen deposition and cellular proliferation (PCNA - imunohistochemistry antigen). Results: In vivo FS of skin wound healing with MAL (+/+) showed that there was a protoporphyrin preferential accumulation in healing site as compared to adjacent normal skin (+/-) in the early stage of healing. However, in the later stages, the reverse happened. There was statistically significant into this group (+/+) along the time (p < 0,0001); what not happened with another groups ((-/+); (+/-) and (-/-)). The model allows to estimate the age of an incised injury into interval of two months. Its possible to estimating his healing phase. Histological findings confirm the stages of healing and agree well with the fluorescence findings. Conclusion: The results showed that FS using MAL appears to be a promising approach for the analysis of stages of skin wound healing

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-18Bitstream added on 2014-06-13T19:56:57Z : No. of bitstreams: 1 alves_mgo_me_sjc.pdf: 834163 bytes, checksum: 8578bf554b74c355303c43996ea144dd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O líquen plano (LP) é caracterizado como uma doença crônica de cunho autoimune que apresenta prevalência estimada de 2% na população em geral. Há grande controvérsia quanto à classificação da Organização Mundial de Saúde de que este seria uma desordem potencialmente maligna. O presente trabalho tem como proposição avaliar a expressão das proteínas p53, MDM2 e SUMO-1 em lesões de LP bucal e comparar a expressão destas proteínas com a observada em displasia epitelial (DE) bucal e carcinoma de células escamosas (CCE) bucal. A amostra por interesse foi constituída por cinco grupos de lesões em mucosa jugal. O primeiro grupo foi constituído por amostras de mucosa com aspecto clínico de normalidade (MN), o segundo por hiperplasia fibrosa inflamatória (HFI), o terceiro por LP, o quarto por DE e o quinto grupo por CCE. Estas amostras teciduais foram submetidas a exame histoquímico pela técnica da hematoxilina-eosina e exame imunoistoquímico para anticorpo anti-p53, anti-MDM2 e anti-SUMO-1. Os dados foram tabulados e tratados pelos testes de Kolmogorov-Smirnov e exato de Fisher. Os resultados do presente estudo mostraram que não houve diferença estatisticamente significante da expressão de p53 quando comparado LP com DE (p=0.2042) e com CCE (p=0.0656), esta diferença estava presente quando o LP foi comparado a HFI (p=0.00001) e a MN (p=0.0007). A diferença na expressão da MDM2 não foi estatisticamente significante quando comparado LP com DE (p=1.0) e com CCE (p=0.9972), mas não estava presente quando o LP foi comparado a HFI (p=0.0005) e a MN (p=0.0052). Em relação à proteína SUMO-1, houve diferença estatisticamente significante quando comparado LP com DE (p=0.0492) e com CCE (p=0.0001), na comparação de LP com HFI (p=1.0) e com MN (p=0.8302) não houve diferença estatisticamente significante. Conclui-se pela necessidade de estudos para esclarecer... / Lichen planus (LP) is a chronic autoimmune disease with an estimated prevalence of 2% in the general population. Controversy exists regarding the World Health Organization classification of LP as a potentially malignant disease. The objective of this study was to investigate the expression of proteins p53, MDM2 and SUMO-1 in oral LP lesions and to compare the expression of these proteins between LP and oral epithelial dysplasia (OED) and oral squamous cell carcinoma (OSCC). The sample consisted of the following five groups of cheek mucosa lesions was studied: normal oral mucosa (NM), inflammatory fibrous hyperplasia (IFH), LP, OED, and OSCC. The tissue samples were stained with hematoxylineosin for histochemical analysis and submitted to immunohistochemistry using anti-p53, anti-MDM2 and anti-SUMO-1 antibodies. The results were analyzed by the Kolmogorov-Smirnov test and Fisher’s exact test. No significant difference in the expression of p53 was observed between LP and OED (p=0.2042) or OSCC (p=0.0656). However, there was a significant difference when LP lesions were compared to IFH (p=0.00001) and NM (p=0.0007). Expression of MDM2 differed significantly between LP and IFH (p=0.0005) and NM (p=0.0052), but not between LP and OED (p=1.0) or OSCC (p=0.9972). A significant difference in the expression of SUMO-1 was observed between LP lesions and OED (p=0.0492) and OSCC (p=0.0001), but not between LP and IFH (p=1.0) or NM (p=0.8302). Further studies are needed to determine the role of inflammation as a possible malignant transformation in cases of LP.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-11Bitstream added on 2014-06-13T20:08:38Z : No. of bitstreams: 1 murakawa_ac_me_araca.pdf: 2456403 bytes, checksum: 0b8fd6ef9c787a2f0e9cbb4bc43f1a21 (MD5) / Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da ovariectomia (depleção de estrógeno), no processo de reparo de enxertos ósseos autógenos em bloco por meio da imunomarcação da PECAM-1 e osteocalcina (OCN), em ratas jovens e senis. Material e Métodos: Foram utilizadas 96 ratas (Wistar) fêmeas, sendo 48 ratas com idade de 3 meses, divididas em subgrupo Ovx, submetidas a cirurgia de ovariectomia e subgrupo Sham submetidas ao mesmo procedimento cirúrgico sem a remoção dos ovários; e 48 ratas com idade de 12 meses, também divididas em subgrupos Ovx e Sham. Transcorridos 30 dias da Ovx ou sham, todos os animais receberam enxerto ósseo autógeno em bloco na mandíbula, tendo como área doadora o osso parietal da calvária. Os animais foram submetidos a eutanásia em 7, 14 e 28 dias. As peças foram submetidas à análises histométrica e imunoistoquímica. Esta foi realizada de forma semi-quantitativa, visando analisar as imunomarcações contra PECAM-1 e osteocalcina, avaliando-se a interferência do estrógeno neste processo. Resultados: Durante os períodos analisados, os subgrupos Sham apresentaram marcações da osteocalcina mais intensas quando comparadas com os subgrupos Ovx, independente da idade do animal. As marcações de PECAM-1 foram mais intensas nos subgrupos Sham aos 7 e 14 dias. Conclusão: Dentro dos limites deste estudo, concluímos que a depleção de estrógeno afeta negativamente o processo inicial da angiogênese e diminui a mineralização óssea. / Objectives: The aim of this study was to evaluate the influence of the ovariectomy (estrogen depletion), on healing process of autogenous bone block grafts in young and aged rats, through the immunocolocalization of the PECAM-1 and osteocalcin (OC). Material and Methods: 96 female rats (Wistar) were used, being 48 rats with 3 months-old, divided in subgroups: Ovx, submitted the ovariectomy surgery and Sham, submitted to the same surgical procedure without the removal of the ovaries; and 48 female rats with 12 months-old, also divided in Ovx and Sham subgroups. After 30 days of Ovx or sham operation, all the animals received autogenous bone block graft in the jaw, harvested from the calvaria. The animals were euthanized in 7, 14 and 28 days postoperatively. The specimens were submitted to histometric and immunohistochemistry analysis. This was accomplished in a semi-quantitative way, to analyze the immunolocalizations against PECAM-1 and osteocalcin, evaluating the interference of the estrogen in this process. Results: During the analyzed periods, the Sham subgroups presented more intenses demarcations of osteocalcin when compared with the subgroups Ovx, regardless of age. The demarcations of PECAM-1 were more intenses in the sham subgroups to the 7 and 14 days. Conclusion: Within the limits of this study, the estrogen depletion affects the initial process of angiogenesis negatively and it reduces bone mineralization.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-20Bitstream added on 2014-06-13T20:50:49Z : No. of bitstreams: 1 souza_fa_me_araca.pdf: 9106608 bytes, checksum: bdf2875ef072ff8cbc586f8e3743f207 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Aplicação do copolímero PLA/PGA adicionado ao fosfato de cálcio ao redor de implantes osseointegráveis sem estabilidade primária instalados em tíbia de coelhos. Estudo biomecânico, histométrico e imunoistoquímico. Proposição: O objetivo do presente trabalho foi avaliar comportamento mecânico e biológico do tecido ósseo ao redor de implantes associados ao copolímero ácido polilático/poliglicólico adicionado ao fosfato de cálcio. Materiais e Métodos: Para tal foram usados vinte e cinco coelhos Albinus. Após procedimento cirúrgico os animais foram divididos em 4 períodos, sendo o último período, 60 dias, composto por 10 animais. Os animais tiveram perfurações realizadas com sobrefresagem na porção medial das tíbias direita e esquerda. Na tíbia direita o leito cirúrgico foi preenchido com coágulo sanguíneo e na tíbia esquerda com o copolímero. Em ambos leitos cirúrgicos a instalação dos implantes osseointegráveis ocorreu imediatamente após a fresagem. Nos períodos de 5, 15, 40 e 60 dias os animais foram anestesiados e sofreram eutanásia por meio de perfusão de Formaldeído 4% no ventrículo esquerdo. Nos períodos de 40 e 60 dias realizou-se o torque reverso para remoção dos implantes. As peças dos 5 animais restantes do período de 60 dias foram levadas ao micrótomo Exakt para realização de cortes histológicos com os implantes. Nas demais peças, realizou-se análise imunoistoquímica mediante a utilização dos anticorpos primários contra as proteínas OPG, RANK e RANKL. Resultados: As médias de torque para o grupo controle foram de 10,2 e 5,6 N/cm nos períodos de 40 e 60 dias respectivamente, enquanto para o grupo tratado foram de 7,6 e 7,0 N/cm nos mesmos períodos. Houve um balanço na expressão das proteínas com leve predomínio de RANKL. / Application of PLA/PGA copolymer added to calcium phosphate around osseointegrated implants with no primary stability in rabbits's tibia. A biomecanical, histometric and immunohistochemistry study. Purpose: The aim of the present study was to evaluate the mechanical and biological behaviour of bone tissue formed around the implants associated to copolymer polilactic/poliglicolic acids added to calcium phosphate. Materials and Methods: In the present study, twenty five Albinus rabbits, divided in 4 periods, and the last period, referred to 60 days, was composed by 10 animals. The animals had perfurations performed with osteotomy in the medial portion of right and left tibias. In the right tibia, the surgical bed was filled with blood clot and in the left tibia, the copolymer was used. In the same way in both surgical beds, the osseointegrated implants installation occurred immediately after the osteotomy. In the periods of 5, 15, 40 and 60 days, the animals were anesthetized and were sacrificed by perfusion with 4% formaldehyde, in the left ventricule. In the periods of 40 and 60 days, the reverse torque was performed in order to remove the implants. The pieces of the 5 remaining animals of the 60 days period were processed in the Exakt microtome in order to realize undecalcified histological sections with the implants. In the other pieces, the immunohistochemical analysis was performed in order to detect the presence of the OPG, RANK and RANKL proteins in the bone tissue. Results: The mean of torque for the control group were 10.2 and 5.6 N/cm in the periods of 40 and 60 days respectly, while in the treated group were 7.6 and 7.0 N/cm in the same periods. There was a balance in the expression of the proteins with moderate predominance of RANKL protein. There were no statistically differences between the groups in relation to the linear extension of contact between bone and implant.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-19Bitstream added on 2014-06-13T19:09:44Z : No. of bitstreams: 1 guskuma_mh_me_araca.pdf: 1219994 bytes, checksum: 484d9c888788d9dd3dad64af3c3a8f74 (MD5) / A proposta deste estudo foi avaliar a expressão das proteínas que participam do processo de reparo ósseo, nas fases de revascularização (VEGF), osteoindução (BMP2 e CBFA1) e mineralização (OCN), quando da utilização de uma associação do vidro bioativo e osso autógeno em proporção de 1:1 em defeitos criados em calvária de ratos. MATERIAIS E MÉTODOS: Para o presente estudo foram utilizados 40 ratos adultos machos (Rattus norvegicus albinus, Wistar) que receberam dois defeitos ósseos de 5 mm cada, em calvária. Os defeitos ósseos constituiram quatro grupos experimentais (n=10): Grupo CONT (reparação apenas com o próprio coágulo); Grupo ENX (defeitos preenchidos com OA removido do defeito contralateral); Grupo ENX VB (defeitos preenchidos com uma associação de vidro bioativo e osso autógeno 1:1); e Grupo VB (defeitos ósseos preenchidos com vidro bioativo). Os animais foram submetidos a eutanásia nos períodos de 7 e 30 dias pós-operatórios. RESULTADOS: O VB não alterou de forma significativa as reações celulares do reparo ósseo, no entanto, a presença do osso autógeno no defeito causou uma redução importante da expressão das proteínas estudadas. O Grupo ENX foi o que obteve a maior AON e o Grupo VB a menor. CONCLUSÕES 1) Em defeitos de tamanho crítico em calotas, o osso autógeno em bloco continua sendo o tratamento padrão ouro; 2) Para o tratamento destes defeitos, pode-se indicar a utilização dos vidros bioativos sem a necessidade de associação ao osso autógeno. / AIMS: The aim of this study is to evaluate the expression of the proteins that participate in the bone repair process, during the revascularization step (VEGF), osteoinduction (BMP2 and CBFA1) and mineralization (OCN), after the use of an association of bioactive glass and autogenous bone in 1:1 rate, in rats calvária defects. METHODS: 40 male adult rats (Rattus novergicus albinus, Wistar) received two calvarial defects created with 5mm diameter. The bone defects constituted 4 experimental groups (n=10): Control group (the defects were filled with blood clot), Graft Group (the defects were filled with autogenous bone removed from the contralateral defect), Graft and Bioactive Glass Group (the defects were filled with an association of bioactive glass and autogenous bone in 1:1 rate); and Bioactive Glass Group ( the bone defects were filled with bioactive glass). The animals were sacrificed at 7 and 30 days post operative periods. RESULTS: The bioactive glass did not alter, in a significant way, the cellular responses of the bone repair, otherwise, the presence of autogenous bone in the defect caused an important reduction in the expression of the studied proteins. The graft group achieved the better bone neoformed area and the bioactive glass achieved the smaller. CONCLUSIONS: 1. In the calvaria critical-size defects, the block autogenous bone is still the gold standard treatment; 2) For this defects treatment, bioactive glasses may be indicated without the autogenous bone association.