O desenvolvimento da técnica de transferência embrionária no oviduto mediante videolaparoscopia e a avaliação de produtividade da punção folicular laparoscópica (LOPU) associada à transferência embrionária laparoscópica e/ou por laparotomia videoassistida, ambas no oviduto, foram os objetivos do presente trabalho. Foram utilizados 53 animais, sendo as punções foliculares para obtenção dos oócitos realizadas em 9 ovelhas adultas estimuladas hormonalmente, chamadas doadoras. Os oócitos foram obtidos através de LOPU repetidamente com intervalo mínimo de um mês entre os procedimentos nas mesmas doadoras. Os oócitos puncionados foram maturados, fertilizados e mantidos em cultivo por até três. Os embriões clivados foram transferidos no segundo dia após a fertilização in vitro (FIV) em ovelhas receptoras com cio sincronizado. A transferência dos embriões (TE) foi realizada primeiramente em 10 receptoras por laparoscopia e em 34 receptoras por laparotomia videoassistida, sendo esta última dividida em duas etapas cronológicas. Para a realização da TE por videolaparoscopia, foi introduzido, inicialmente, um trocarte de 5 mm na linha média ventral próximo à glândula mamária para passagem da óptica. Um segundo portal, crânio-lateral ao primeiro, foi criado para introdução de pinça de manipulação de ovário. Confirmada a existência de corpo lúteo (CL) em um dos ovários, um trocarte foi inserido no lado oposto a esse para passagem de cateter de Foley. Sua função foi auxiliar na exposição e abertura da fímbria. Um cateter urinário, contendo os embriões foi então introduzido na porção inicial do oviduto para deposição dos mesmos. Obteve-se 8 fetos resultantes da transferência por laparoscopia (10 receptoras), 10 fetos resultantes da primeira etapa da transferência por laparotomia (14 receptoras) e 30 fetos resultantes da segunda etapa da laparotomia (20 receptoras). A média de fetos por sessão de LOPU foi de 1 para transferência laparoscópica, 1,3 na primeira etapa da transferência por laparotomia e 3,3 na segunda etapa de laparotomia. A transferência embrionária videolaparoscópica de embriões clivados no oviduto mostrou resultado positivo na produção de fetos, podendo ser considerada técnica promissora. Quando associada à LOPU, a transferência embrionária no oviduto por laparoscopia / laparotomia videoassistida, apresentou resultados superiores aos relatados na literatura com a transferência intra-uterina de embriões FIV. / The development of the technique of embryo transfer in oviduct through video-assisted laparoscopy and the demonstration of productive association between laparoscopic follicle aspiration (LOPU) and embryonic transfer laparoscopy and / or open surgery (video-assisted laparotomy)both in oviduct was the goal of the work. From the 53 animals used in the study, follicular puncture was used to obtain oocytes from 9 adult ewes for super-ovulated with hormonally stimulation, referred to as the donors. The oocytes were obtained through repeated LOPU with minimum intervals of one month from the same donor. The retrieved oocytes were matured, fertilized with frozen semen and cultured in vitro for up to two days after IVF. The cleaved embryos were transferred on the second day after IVF into synchronized receptor ewes. The transfer of embryos was first done in 10 receptors through laparoscopy and then in 34 receptors through video-assisted laparotomy, the latter being divided into two chronological stages. For the development of ET by video-assisted laparoscopy, a 5mm trocar was initially introduced ventral midline near the mammary gland for passage of the laparoscope. A second portal, in a craniolateral position was used for passage of another 5 mm trocar for introduction of forceps to manipulate the ovary. After confirming the existence of CL in one of the ovaries, a trocar was inserted on the opposite side for passage of the Foley catheter, to assist in the exposure and opening of the fimbria. A urinary catheter, containing the embryo, was then introduced into the initial portion of the oviduct for deposition of the embryos. There were 8 fetuses resulting from the transfer by laparoscopy (10 receptors), 10 fetuses resulting from the first stage of the transfer by laparotomy (14 receptors) and 30 fetuses resulting from the second stage of the laparotomy (20 receptors). The average number of fetuses per session of LOPU was 1 for laparoscopic transfer, 1.3 for the first stage of the transfer by laparotomy and 3.3 in the second stage of laparotomy. The technique of embryo transfer through video-assisted laparoscopy with cleaved embryos in oviduct was thus shown to a positive fetus\'s result of production, and will be promising. When associated with LOPU, the transfer of embryos in oviduct by laparoscopy / video-assisted laparotomy presented better results then other authors when compare intrauterine IVF embryo transfer.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A histoplasmose, causada pelo fungo dimÃrfico Histoplasma capsulatum, à a mais prevalente das micoses sistÃmicas nas AmÃricas, sendo frequentemente observada em pacientes com AIDS. Desde o inÃcio da epidemia de HIV, na dÃcada de 80, existe um aumento significativo no nÃmero de casos de histoplasmose no Estado do CearÃ, Nordeste do Brasil. A escassez de dados epidemiolÃgicos dos genÃtipos que circulam na regiÃo Nordeste ressalta a importÃncia de estudos mais detalhados sobre a epidemiologia molecular de H. capsulatum nessa regiÃo. Diferentes tÃcnicas moleculares tÃm sido utilizadas para melhor caracterizar o padrÃo genÃtico de cepas de H. capsulatum circulantes no mundo. Vale ressaltar que, grande parte dos estudos de H. capsulatum à realizada na sua fase leveduriforme, quando expressa as suas caracterÃsticas parasitÃrias. Assim, o uso de tÃcnicas laboratoriais para a conversÃo in vitro para a fase leveduriforme e sua manutenÃÃo à extremamente importante. Diante do exposto, o presente estudo objetivou averiguar a taxa de conversÃo in vitro dos isolados de H. capsulatum em seis meios de cultura diferentes, bem como detectar, atravÃs da tÃcnica de PCR, a presenÃa do gene ryp1, um importante regulador transcricional da conversÃo da fase filamentosa para leveduriforme. AlÃm disso, visou conhecer o perfil molecular de cepas de H. capsulatum, de origem humana e veterinÃria, oriundas do Estado do Cearà e da regiÃo Sudeste do Brasil, atravÃs da tÃcnica de RAPD-PCR e avaliar a diversidade genÃtica da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 desses isolados comparados com isolados de outros paÃses, atravÃs do sequenciamento do DNA ribossÃmico nuclear. No estudo de conversÃo in vitro, todos os meios testados foram capazes de possibilitar a conversÃo de fases, contudo, o meio Ãgar Sabouraud suplementado com 10% de sangue de carneiro mostrou a maior capacidade de conversÃo em relaÃÃo aos outros meios testados. O gene ryp1 foi detectado em 18 cepas de H. capsulatum (de origem humana e animal) e em trÃs espÃcimes clÃnicos positivos para H. capsulatum (sangue total) testados, nÃo sendo detectado, contudo, em isolados de Candida albicans, Paracoccidioides brasiliensis, Sporothrix schenckii e Coccidioides posadasii. A anÃlise da variabilidade genÃtica dos isolados de H. capsulatum, pela tÃcnica de RAPD-PCR, permitiu a detecÃÃo de dois clusters que circulam no Estado do CearÃ. O cluster 1 incluiu cepas das regiÃes Sudeste e Nordeste do Brasil, sendo observado dentro desse cluster a separaÃÃo dos isolados em trÃs subgrupos distintos (subgrupos 1a,1b e 1c). O cluster 2, por sua vez, incluiu somente cepas da regiÃo Nordeste do Brasil. NÃo foram observadas diferenÃas nas caracterÃsticas clÃnicas e epidemiolÃgicas dos indivÃduos cujas cepas pertenciam aos diferentes agrupamentos, obtidos pela tÃcnica de RAPD-PCR. O sequenciamento da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 possibilitou a detecÃÃo de dois clados principais. O clado 1 foi constituÃdo da maioria das cepas analisadas, inclusive as cepas da regiÃo Nordeste e incluiu isolados de localizaÃÃes geogrÃficas distintas. O clado 2, por sua vez, foi constituÃdo exclusivamente de isolados oriundos do Estado do Rio de Janeiro. Portanto, pode-se concluir que o Ãgar Sabouraud suplementado com 10% de sangue de carneiro apresentou maior capacidade de conversÃo das cepas de H. capsulatum em relaÃÃo aos outros meios testados, podendo ser considerado o meio de escolha para conversÃo de cepas de H. capsulatum. Ademais, o gene ryp1 pode ser utilizado para identificar isolados de H. capsulatum, bem como, detectar a presenÃa do fungo em amostras clÃnicas, podendo ser utilizado para diagnÃstico de histoplasmose. Por fim, os isolados de H. capsulatum oriundos do Estado do Cearà podem ser agrupados em dois clusters principais, detectados atravÃs da tÃcnica de RAPD-PCR. AlÃm disso, a anÃlise filogenÃtica da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 revelou que as cepas da regiÃo Nordeste apresentaram diferenÃas genÃticas quando comparadas com as cepas de outras regiÃes brasileiras, ficando agrupadas em um cluster diferente das mesmas. / Histoplasmosis, caused by the dimorphic fungus Histoplasma capsulatum, is the most prevalent systemic mycosis in the Americas and it is frequently observed in AIDS patients. Since the beginning of the HIV epidemic, there has been a significant increase in the number of histoplasmosis cases in the Cearà state, Northeast Brazil. The lack of epidemiological data of the genotypes circulating in the Northeast region shows the importance of more detailed studies on the molecular epidemiology of H. capsulatum in this region. Different molecular techniques have been used to better characterize the genetic profile of H. capsulatum strains. It is noteworthy that, most studies of H. capsulatum are performed in the yeast phase due to its parasitic characteristics. Thus, the use of laboratory techniques for in vitro conversion and maintenance is extremely important. Given the above, this study aimed to determine the in vitro conversion rate of H. capsulatum isolates in six different culture media, as well as to detect by PCR the presence of ryp1 gene, an important transcriptional regulator of the conversion from filamentous to yeast phase. In addition, it aimed to establish the molecular profile of H. capsulatum strains, from human and veterinary source, from Cearà and Southeast region of Brazil through RAPD-PCR assay and to assess the genetic diversity of the ITS1-5.8S-ITS2 region of these isolates compared with isolates from other countries, through the sequencing of nuclear ribosomal DNA. In the study of in vitro conversion, all tested media allowed the conversion, however, the Sabouraud agar media supplemented with 10% sheep blood showed the highest conversion capacity in relation to the other tested media. The ryp1 gene was detected in 18 H. capsulatum strains (from human and animal source) and in three tested clinical specimens (whole blood), not being detected, however, in isolates of Candida albicans, Paracoccidioides brasiliensis, Sporothrix schenckii and Coccidioides posadasii. The analysis of the genetic variability of the H. capsulatum isolates, by RAPD-PCR assay, allowed the detection of two clusters circulating in the state of CearÃ. The first cluster included strains from Southeast and Northeast regions of Brazil, being observed, within this cluster, the separation of isolates into three distinct subgroups (subgroups 1a, 1b and 1c). The second cluster included only strains from Northeast region of Brazil. There were no differences in clinical and epidemiological characteristics of individuals whose isolates belonged to different groups, obtained by RAPD-PCR. The sequencing of the ITS1-5, 8S-ITS2 region allowed the detection of two major clades. The clade 1 comprised the majority of the isolates tested, including strains from the Northeast, and included isolates from different geographical locations. The clade 2 was composed exclusively of isolates from the state of Rio de Janeiro. Therefore, it can be concluded that the Sabouraud agar supplemented with 10% sheep blood showed higher conversion capacity of H. capsulatum strains compared to the other tested media, and may be considered the medium of choice for converting of H. capsulatum strains. Furthermore, the ryp1 gene can be used to identify and detect H. capsulatum from clinical specimens, may be used for diagnosis of histoplasmosis. Finally, the H. capsulatum isolates from the state of Cearà can be grouped into two main clusters, detected by RAPD-PCR. In addition, phylogenetic analysis of the ITS1-5.8S-ITS2 region revealed that strains from the Northeast presented genetic differences compared with strains from other Brazilian regions, being grouped in a different cluster of them.

Orientadores: Clarice Weis Arns, Fernando Rosado Spilki / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T04:41:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_MarciaMercesAparecidaBianchidos_D.pdf: 3376725 bytes, checksum: 4e17791ec1d7e56265e067f2ce1f62bf (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O Metapneumovirus aviário (aMPV) pertence à família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae, gênero Metapneumovirus. O vírus, relatado pela primeira vez no Brasil em 1995, é o agente etiológico da Rinotraqueíte em perus (TRT) e está associado também à Síndrome da Cabeça Inchada (SHS) em frangos e poedeiras comerciais. O presente estudo foi dividido em três partes. Na primeira foi avaliada a suscetibilidades de oito sistemas celulares para a propagação de amostras virais do aMPV subtipos A e B. As células chicken embryo related (CER), Vero e baby hamster kidney cells (BHK-21) demonstraram ser as mais apropriadas para a multiplicação de ambos os subtipos. Além disso, cultivo de anel de traquéia (TOC) e cultivo primário de embrião de galinha (CEF) foram permissíveis à infecção por aMPV após terem sido isolados e propagados em CER. As curvas da cinética viral foram realizadas nas três linhagens celulares e ambos os subtipos tiveram títulos mais altos em CER durante as primeiras 30 horas após a infecção. Não foram observadas diferenças significativas entre os títulos obtidos em células CER e Vero, demonstrando que as células CER são tão adequadas à propagação do aMPV quanto as células Vero. A segunda parte do trabalho consistiu em analisar a virulência de uma amostra de aMPV subtipo B após sofrer passagens seriadas em células CER. Cinco variantes provenientes das passagens em CER foram inoculadas em galinhas e a excreção viral foi analisada. Os resultados obtidos com as amostras de traquéia demonstram que a virulência do aMPV diminui gradualmente enquanto o título viral aumenta com o número de passagens. Em contrapartida, nas amostras de seio nasal foi observado aumento da carga viral, demonstrando que não houve diminuição no fitness viral para este órgão. As seqüências do gene G das amostras utilizadas para desafio foram obtidas, porém este gene parece não ser afetado pela propagação em células CER. Na terceira e última parte deste estudo, foi avaliada a proteção viral conferida por uma vacina comercial contra isolados brasileiros do aMPV subtipos A e B em frangos de corte. Para tanto, uma amostra de cada subtipo foi avaliada quanto à sua virulência. O isolado do subtipo B foi detectado em um período mais longo e em maiores quantidades quando comparado ao subtipo A. Os resultados da analise da proteção demonstram que algumas aves imunizadas receberam proteção viral completa contra o vírus virulento heterólogo. Porém, a mesma vacina forneceu proteção viral parcial quando as aves foram desafiadas com o vírus virulento homologo ao vacinal / Abstract: Avian metapneumovirus (aMPV) belongs to the Paramyxoviridae family, Pneumovirinae subfamily, within the genus Metapneumovirus. The virus, first described in Brazil in 1995, is responsible for an acute rhinotracheitis in turkeys (TRT) and is associated with swollen head syndrome in broiler chickens and layer hens. The present study is divided in three parts. In the first part, eight cell culture systems were evaluate for the propagation of aMPV subtypes A and B. The chicken embryo related (CER) cells, Vero and baby hamster kidney cells (BHK-21) cells were shown to be the most appropriate for propagation of both subtypes of aMPV. In addition, propagation of aMPV in chicken embryo fibroblasts (CEF) and tracheal organ culture (TOC) remained efficient after the primary isolation and several passages of viruses in the CER cell line. The growth curves were created using CER, Vero and BHK-21 cell lines. Compared with growth, both yielded higher titres in CER cells during the first 30 hours after infection, but no significant difference was observed in the results obtained from CER and Vero cells. This data show that CER cell are adequate for aMPV propagation, giving similar results to Vero cells. The second part of this study was conducted to analyze the virulence of an aMPV subtype B strain after serial passage in CER cells. To accomplish this, chickens were infected with 5 different variants derived from serial passage and the amount of viral shedding was determined. The results of tracheal samples showed that the virulence decreases gradually with passage, while in vitro viral titre increases. However, an increase in viral shedding was observed in sinusal samples, demonstrating no decrease in fitness for this organ. The G gene sequences of challenge samples were analyzed, however this gene appears to not be affected when aMPV is propagated in CER cells. Finally, the last part of this study aimed to examine a commercially available vaccine in broiler chickens in terms of it ability to provide virological protection against aMPV subtypes A and B. To accomplish this, the virulence of each virulent strain was analyzed. The results demonstrate that the subtype B virulent strain could be observed longer and in larger quantities compared to subtype A. A complete heterologous virological protection was provided by the subtype B vaccine; however, a lack of complete homologous virological protection was observed when chickens were challenged with the homologous subtype B strain / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Não consta resumo na publicação. / Abstract not available.

O gengibre é uma das especiarias mais importantes e amplamente utilizadas no mundo. Atualmente, a maior produção desta cultura concentra-se nos estados do sul do Brasil, sendo grande parte destinada para exportação. A geração de renda e a manutenção da variabilidade genética do gengibre são feitas principalmente pela agricultura familiar. Portanto, com o objetivo de continuar incrementando a diversidade genética do gengibre e contribuir com uma adoção rápida de variedades com melhor rendimento, adaptadas às características dos campos dos agricultores, e com resistência à principal doença desta cultura (Fusariose), este trabalho visou selecionar genótipos de gengibre do banco de germoplasma da ESALQ/USP com características relacionadas às prioridades dos agricultores do vale de Caraguatatuba - Ubatuba e que possuam algum nível de resistência a Fusarium oxysporum. Para tal, esta pesquisa foi dividida em duas partes. Primeiramente, desenvolveu-se um processo de melhoramento genético participativo, onde os agricultores ajudaram a identificar as prioridades de seleção de gengibre, procurando características que sejam adequadas às suas necessidades e na identificação da sintomatologia de fusariose mediante escala de notas. Na segunda parte, foi feita uma seleção de genótipos promissores por meio de avaliações em campo e casa de vegetação, através de uma análise de interação genótipo x ambiente. Os resultados mostraram que as prioridades de melhoramento escolhidas pelos agricultores foram resistência a doenças e pragas, altos rendimentos, estabilidade no tempo, variedades que consigam suprir necessidades de venda in natura e industrializado e com capacidade de atender diferentes tipos de mercado. Dentre os genótipos avaliados pelos agricultores, foram selecionados os genótipos G7, G16, G20, G22, G29, G31, G33, G47, G49, G51, G53, G58, G61 e G66 como resistentes e com características agronômicas promissoras. Nas avaliaçãoes de campo e casa de vegetação observou-se que dos 49 genótipos analisados, G47 apresentou o maior nível de resistência, enquanto que G11, G23, G30, G43 e G64, foram identificados como genótipos resistentes. Desses genótipos selecionados como resistentes apenas os genótipos G23 e G64 foram promissores, apresentando estabilidade na resistência, produção, formação de perfilhos, e caracteres qualitativos de interesse agronômico. Entre os genótipos selecionados mediante melhoramento clássico e os selecionados com melhoramento participativo houve apenas uma coincidência na seleção (G47) referente à sintomatologia, mas ao ser testado para estabilidade referente à doença, este genótipo apresentou alta inestabilidade no tempo, não se mostrando adequado para recomendação como variedade resistente. Dessa forma, novos estudos deverão ser desenvolvidos visando testar estes genótipos em outros ambientes. / Ginger is the most important and widely used spice in the world. Currently, the greater production of this crop is focused in the southern states of Brazil, where most of the production is destined for export. The generation of income and the maintenance of genetic variability of ginger are provided mainly by family farming. Therefore, with the objective to continue increasing genetic diversity of ginger and contribute with a rapid adoption of varieties with better yield, adapted to farmers\' fields characteristics, and resistance to the main disease of this crop (fusariosis), this work aimed at selecting ginger genotypes from the germplasm bank of ESALQ/USP with characteristics related to the priorities of the farmers from Caraguatatuba-Ubatuba Valley, presenting some level of resistance to Fusarium oxysporum. Therefore, this research was divided in two parts. First, a participatory breeding process was developed, where farmers helped to identify the priorities of selection in ginger, searching for features that are appropriate to their needs and to identify the symptoms of Fusarium by grading scale. In the second part, a selection was made of promising genotypes through evaluations in the field and in a greenhouse, through an analysis of genotype x environment interaction. Results showed that the farmers’ breeding priorities were resistance to diseases and pests, high income, stability in time, varieties that are able to meet sales requirements both in natura and industrialized, including ability to supply different market types. Among the genotypes evaluated by the farmers, the genotypes G7, G16, G20, G22, G29, G31, G33, G47, G49, G51, G53, G58, G61 and G66 were selected as being resistant and with promising agronomic characteristics. In the field and greenhouse evaluations, it was observed that from the 49 genotypes analyzed, genotype G47 showed the highest level of resistance, while G11, G23, G30, G43 and G64, and were identified as resistant genotypes. From these genotypes selected as resistant only G23 and G64 were promising, showing stability in resistance, production, tillers production, and qualitative traits of agronomic interest. Among the genotypes selected by classical breeding and those selected through participatory breeding, there was only one coincidence in the selection (G47) related to symptoms, but when tested for disease stability, it presented high instability in time, not being suitable for recommendation as a resistant variety. Thus, further studies should be developed aiming to test these genotypes in other environments.

Orientadores: Gláucia Maria Pastore, Rosângela dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T19:39:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adami_AngelicaAparecidaVieira_M.pdf: 12653852 bytes, checksum: a5b3e75b4c45344be161ab51a7df7f0a (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Estudos sao realizados com oligossacarideos, probioticos e a combinação deles; sao varios os fatores que envolvem os beneficios que estes em combinacao podem agregar para a saude dos consumidores. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar o comportamento simbiotico in vitro das linhagens probioticas Bifidobacterium animalis (Bb-12) e Lactobacillus acidophillus (LA-05), em substratos enriquecidos com oligossacarideos, ou seja, avaliar se esses potencializavam a capacidade probiotica das linhagens estudadas. Os oligossacarideos utilizados no estudo foram o galactooligossacarideo (GOS) sintetizado pela ?-galactosidase de Scopulariops sp., frutooligossacarideo (FOSOrafti) e extrato bruto de Yacon. Avaliou-se o efeito bifidogenico de diferentes concentracoes de GOS, FOS e Yacon utilizando as culturas probioticas e sua capacidade de acidificacao do meio. Foi avaliado o perfil hidrofobico e acido da membrana celular dos probioticos usando meio enriquecido com GOS, FOS e controle meio MRS (Man Rogosa e Sharpe) sem fonte de dextrose; pelo método MATH (aderencia microbiana de hidrocarbonetos). Realizou-se tambem a producao, extracao e quantificacao de exopolissacarideos (EPS) por Lactobacillus acidophillus (LA-05) em meios enriquecidos com FOS e GOS, a quantificacao foi pelo metodo fenol-sulfurico seguida de leitura de absorbancia a 490nm, os resultados foram submetidos a uma curva padrao de glicose. Verificou-se ainda o antagonismo das linhagens probioticas cultivadas em meios suplementados com GOS, FOS, Yacon, MRS sem fonte de dextrose e controle MRS adicionado de NaOH, sobre linhagens patogenicas; o antagonismo foi avaliado atraves do metodo de difusao em agar. Avaliou tambem a capacidade de producao de acido latico. Na avaliacao bifidogenica os resultados revelaram que os substratos estimularam o metabolismo dos probioticos estudados. A melhor atividade para as linhagem de Lactobacillus acidophillus (LA-05) foi com o substrato GOS com atividade de 11,56 LogUFC (na concentracao de 200mg de GOS, em 12 horas de incubacao), e para e Bifidobacterium animalis (Bb12) foi com o substrato FOS com atividade de 11,3 LogUFC (na concentracao de 100mg FOS, em 12 horas de incubacao), na medida que se aumentou a concentracao dos substratos, houve a reducao da atividade bifidogenica. Os resultados revelaram que os prebioticos GOS e FOS estimularam o perfil de adesao e acidez da membrana celular das linhagens probioticas estudadas, quando comparado com o controle meio MRS sem fonte de dextrose. Quanto a producao de EPS, o maior valor (13,53 \g.mL) foi obtido apos 48 horas de cultivo em caldo MRS suplementado com GOS (25% v/v), enquanto que o FOS (25% v/v) tambem estimulou a producao (7,68 \g.mL) em 12 horas, seguida da queda de producao apos este periodo. Verificou-se que os oligossacarideos estimularam a acao antagonica dos probioticos sobre os micro-organismos patogenicos, e que esta inibicao do crescimento pode estar ligada com a producao de acidos pelos probioticos em conjunto com os oligossacarideos. Em sintese, os resultados revelaram que os oligossacarideos estimularam o potencial probiotico das linhagens estudadas / Abstract: Several studies have been conducted with oligosaccharides in general and also with probiotics, or combination of them, due to factors involving the combined benefits they can add to the health of consumers. This research aimed to evaluate in vitro the behavior of symbiotic probiotic strains Bifidobacterium animalis (Bb-12) and Lactobacillus acidophilus (LA-05), on substrates enriched with oligosaccharides in the case to assess whether the oligosaccharides intensified the ability of probiotic strains studied. The oligosaccharides used in this study were synthesized by the galactooligosaccharide ?-galactosidase Scopulariops sp., fructooligosaccharide and crude extract of yacon. We evaluated the bifidogenic effect of different concentrations of GOS, FOS and Yacon using probiotic cultures and their ability to acidification of the medium. Was evaluated the profile acid and hydrophobic cellular membrane of probiotics using medium supplemented with GOS, FOS and control MRS medium without added dextrose; MATH method (microbial adherence to hydrocarbons). Was also conducted production, extraction and quantification of exopolysaccharides (EPS) by Lactobacillus acidophilus (LA-05) media supplemented with FOS and GOS, quantification was by the phenolsulfuric method followed by absorbance reading at 490nm, the results were subjected to a standard curve of glucose. It was further antagonism of probiotic strains grown in media supplemented with GOS, FOS, yacon, MRS without dextrose and source control MRS added NaOH on pathogenic strains; antagonism was assessed by the agar diffusion method; also evaluated the ability to produce lactic acid. In evaluating the results revealed that bifidogenic substrates stimulated metabolism studied probiotics, the best activity for the strain of Lactobacillus acidophilus (LA-05) was the substrate with GOS activity of 11.56 LogUFC (200mg in 12 hours incubation), and for and Bifidobacterium animalis (Bb-12) was with the FOS substrate with activity of 11.3 LogUFC (100mg in 12 hours incubation), as it increased the concentration of the substrates decreased the activity of microorganisms. The results revealed that prebiotic GOS and FOS stimulated acid profile of adhesion and cell membrane of probiotic strains studied, as compared to the MRS control medium without added dextrose. As for the highest production of EPS production (13.53 ?g.ml) was after 48 hours of culture in MRS broth supplemented with GOS, while also stimulated FOS production (7.68 ?g.ml) for 12 hours followed by production decrease thereafter. It was found that the oligosaccharides stimulated antagonistic action of probiotics on pathogenic microorganisms and that this growth inhibition is connected with acid production by probiotics together with the oligosaccharides. In summary, the results revealed that the oligosaccharides stimulated the potential probiotic strains studied / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Em bovinos, o desenvolvimento embrionário é caracterizado pelo surgimento de duas camadas de células distintas, o trofectoderma e a massa celular interna. Esta última sofrerá diferenciação para formar o disco embrionário constituído pelo epiblasto e hipoblasto. Os trabalhos de caracterização morfológica do epiblasto e hipoblasto em bovinos são necessários uma vez que podem ajudar a elucidar as causas de perdas gestacionais, principalmente nos casos de embriões derivados de produção in vitro. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar ultraestruturalmente o embrião bovino em diferentes fases do desenvolvimento com ênfase nas células do hipoblasto. Para isso, os embriões bovinos com 7, 14 e 16 dias de gestações derivados de técnicas de produção in vitro foram fixados para processamento e realização de microscopia eletrônica de transmissão. De acordo com os resultados obtidos observou-se que os embriões derivados de transferência nuclear de células somáticas e de partenogênese apresentaram grandes modificações na estrutura macro e microscópica. Nestes embriões, o tamanho estava reduzido, a massa celular interna não se apresentou de forma definida. Além disso, as organelas destes embriões, responsáveis por processos de absorção, comunicação, crescimento e metabolismo celular estavam em menor quantidade e tinham modificações quanto à forma, quando comparados aos resultados vistos nos embriões derivados de fertilização in vitro. Assim, verificamos que os blastocistos D7 derivados de transferência nuclear e partenogênese apresentaram graves modificações morfológicas, assim como verificou-se também nas células do hipoblasto dos embriões D14 e D16. / In cattle, the embryo development is characterized by the apperance of two distinct cell layers, the trophectoderm and the inner cell mass. This latter one will siffer a differentiation to form the embryonic disc constituted by the epiblasto and hypoblast. The works on the morphological characterization of the epiblasto and hypoblast in cattle are needed because they may help to elucidate the causes of pregnancy loss, especially in cases of embryos derived from in vitro production. Considering this, the objective of this study was to characterize ultrastrcturally the bovine embryo at different stages of development with emphasis on the hypoblast cells. To do so, bovine embryos at 7, 14 and 16 days of pregnancies derived from in vitro production techniques were fixed for processing and performing transmission electron microscopy. According to the results observed that embryos derived from the nuclear transfer of somatic cells and from parthenogenesis showed significant changes in the macroscopic and microscopic structure. In these embryos, the size was reduced, the inner cell mass has not show a defined shape. Furthermore, the organelles from such embryos, responsible for the absorption processes, communication, growth and cellular metabolism were fewer in number and have changes in shape, when compared to the results seen in embryos derived from in vitro fertilization. Thus, we observed that the blastocyst D7 derived from nuclear transfer and from the parthenogenesis, showed severe morphological changes, as well as for the hypoblastic cells in the D14 and D16 embryos.

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology & Toxicology Student: Dominik Jandura Supervisor: PharmDr. Ivan Vokřál, Ph.D. Title of diploma thesis: In vitro cultivation of tapeworm Hymenolepis diminuta - 2 Aim of this diploma thesis was to obtain cycticercoids of the rat tapeworm (Hymenolepis diminuta), excyst them and find out the conditions for the maximal in vitro incubation period. As the intermediate host mealworm beetle (Tenebrio molitor) infected by the rat feces containing tapeworm eggs was used. Excystment was done using L-cystein and sodium tauroglycocholate. Excysted larvae were cultured in vitro (37 řC, 5 % CO2) in RPMI 1640 medium enriched with other substances chosen according previously published methods. Mainly sheep, mouse or rat liver extracts eventually in combination with yeast extract and sheep bile were used. The effect of tested substances on the cultivation was evaluated by measuring of the tapeworm's growth. The best effect on the grow of the tapeworms was observed using medium containing serum, yeast extract and sheep liver extract where tapeworms achieved length of 1561 µm after 16 days of incubation. The further growth was limited by appearance of pathologic formations.

La radiothérapie est l'une des principales modalités de traitement du cancer. Néanmoins, son utilisation est limitée du fait des dommages induits dans les tissus sains et de la radiorésistance de certains cas. En vue d’améliorer le ciblage tumoral et l'efficacité du traitement, des améliorations sont nécessaires. L'une des améliorations proposées est l'utilisation de nanoparticules composées d'éléments à nombre atomique élevé qui présentent la propriété d’amplifier l’effet des rayonnements ionisants. Les nanoparticules d'or constituent un des agents les plus prometteurs en raison de leur faible toxicité et de la possibilité d’y lier des molécules en surface. L’efficacité de petites nanoparticules d'or fonctionnalisées avec du DTDTPA (< 3 nm) a été prouvée. En revanche, peu de données existent quant au lien entre ces effets d’amplification et la dynamique d’internalisation et leur localisation dans les cellules.Ce travail a porté sur l’étude de la dynamique d'internalisation et d’excrétion de ces nanoparticules, ainsi que sur leur localisation dans différentes lignées cellulaires cancéreuses et dans les fibroblastes humains. Une tentative de corrélation entre les effets d’irradiation et ces données est proposée.Les résultats obtenus dans ce travail montrent que la dynamique d'absorption et d'excrétion, ainsi que les voies prédominantes d'internalisation des nanoparticules d'or, dépendent fortement de la lignée cellulaire. La quantité d'or internalisée résultant de ces mécanismes varie également. Ces mécanismes d’internalisation impactent la localisation des nanoparticules dans les différents organites subcellulaires, conséquence des voies spécifiques d'internalisation. Enfin un lien est proposé entre localisation intracellulaire des nanoparticules d'or et leur localisation avec les organites subcellulaires.En conclusion, ces résultats indiquent que l'efficacité des nanoparticules dépend de la lignée cancéreuse à traiter. Même si des expériences in vivo restent nécessaires à la validation de ces résultats, ce travail propose des méthodes originales qui permettent de caractériser et prévoir rapidement l’effet des agents sur les cellules. / Radiation therapy is one of the main modalities for cancer treatment. However, its use is limited due to damage induced in healthy tissues and radioresistance in some cases. However, improvements are needed to improve tumor targeting and treatment effectiveness. One of the proposed improvements is the use of nanoparticles composed of high-atomic number elements that have the property of amplifying the effect of ionizing radiation. Gold nanoparticles are one of the most promising agents, because of their low toxicity and the possibility of binding molecules on their surface. The effectiveness of small gold nanoparticles functionalized with DTDTPA (< 3 nm) has been proven. However, little data exists on the link between the amplification effects in respect to the internalization dynamics and their location in cells. This work focused on studying the internalization and excretion dynamics of these nanoparticles, as well as their location in different cancer cell lines and in human fibroblasts. An attempt to correlate the radiation effects with these data is proposed. The results obtained in this work show that the dynamics of absorption and excretion, as well as the predominant internalization pathways of gold nanoparticles, strongly depend on the cell line. The amount of internalized gold, resulting from these mechanisms, also varies. These internalization mechanisms impact the localization of nanoparticles in the various subcellular organelles, due to the specific internalization pathways. Finally, a link is proposed between the intracellular localization of gold nanoparticles and their colocalization with subcellular organelles.In conclusion, these results indicate that the effectiveness of nanoparticles depends on the cancerous line that is treated. Although in vivo experiments are still needed to validate these results, this work proposes original methods for rapid characterization and prediction of the effects of agents on cells.

One of the possibilities how to increase the production of secondary metabolites (SM) in plant in vitro cultures is the method of elicitation. The aim of this work was to determine the effect of an abiotic elicitor from the class of pyrazine derivatives 1-benzyl-3-(pyrazin-2-yl)urea on the production of flavonolignans of silymarin complex and flavonoid taxifolin in the plant culture Silybum marianum (L.) Gaertn. Pyrazine derivatives are investigated for their herbicidal properties, so elicitation proceeds by the mechanism of stress inducing effect. Tissue cultures were grown on Murashige and Skoog growth medium with the addition of the growth regulator α-naphthylacetic acid. Elicitation was performed on both callus and suspension cultures. The elicitor was used in three different concentrations: c1 = 100.0 mg/100 ml; c2 = 10.0 mg/100 ml; c3 = 1.00 mg/100 ml. Particular samples were taken after 6, 24, 48, 72 and 168 hours of elicitor effect, control samples after 6, 48 and 168 hours. After drying, the callus and suspension tissues were extracted with methanol and the content of the monitored secondary metabolites was determined by HPLC. It was also tested if SM are released into the growth medium. Flavonolignans silybinin A and silybinin B were not detected in any of the analyzed samples. The...