Darbo objektas – alksnio genties medžiai (juodalksnis (Alnus glutinosa L.), baltalksnis (Alnus incana L.) ir hibridinis (gauruotasis) alksnis (Alnus x hybrida A. Braun ex Rcchb). Darbo tikslas – ištirti hibridinio alksnio (Alnus x hybrida A. Braun ex Rcchb) mikrodauginimo audinių kultūroje sąlygas ir išauginti augalus – regenerantus. Darbo metodai – šiame darbe pasirinktas informacijos rinkimo metodas – eksperimentinis tyrimas. Eksperimentinio tyrimo etapai: 1. eksplantų paruošimas sterilinimui ir sterilinimas; 2. maitinamosios terpės ruošimas; 3. augalų regenerantų kultivavimas; 4. duomenų rinkimas, apdorojimas ir rezultatų analizė. Darbo rezultatai: Dauginamosios medžiagos sterilinimui tinkamiausias yra aseptikas „ACE“ ir sidabro nitratas AgNO3, nes priklausomai nuo genotipo, 89–93 procentai eksplantų išliko be užkrato. Nepaisant genotipo kalius 100 procentų susidarė ant visų mikroūglių, skyrėsi tik jo susidarymo laikas. Nustatyta, kad tinkamiausias mikroūglių regeneracijai yra BAP (citokininas) augimo reguliatorius. Hibridinis alksnis mikroūglių skaičiumi aplenkė juodalksnį ir baltalksnį. Didžiausias dauginimo galimybes turi alksnio hibridas, nes iš vieno kaliaus išaugusių mikroūglių skaičius buvo didžiausias. / Final work of University Postgraduate Studies studied the hybrid alder tissue culture and micropropagation of plants–regenerants grown. Research subject – genus alder trees (alder (Alnus glutinosa L.), gray alder (Alnus incana L.) and hybrid (Woolly) alder (Alnus x hybrida A. Braun ex Rcchb). Research aim – to investigate the hybrid alder (Alnus x hybrida A. Braun ex Rcchb) micropropagation conditions in the culture of tissue and to grow crops–regenerants. The experimental phases of the study: 1. the preparation to sterilized explants and sterilization; 2. the preparation of nutrient medium; 3. the cultivation of regenerants–plants; 4. collection, processing of data and analysis of the results. The results – The aseptic „ACE“ and silver nitrate AgNO3 is the most suitable for the sterilization, because depending on the genotype, 89-93 percent of the explants remained free of infection. Despite of genotype callus formed 100 percent on the every microshoots, only in the different time of life. It was found out the best growth regulator of microshoots regeneration is BAP (cytokinin). Hybrid alder by the number of microshoots outsriped alder and gray alder. The biggest opportunities of propagation has hybrid alder because the biggest number of microshoots grown from a single callus.

Darbo tikslas: įvertinti gamybinėse vaistinėse pagamintų tepalų su salicilo rūgštimi kokybę nustatant veikliosios medžiagos atpalaidavimą in vitro ir pasiūlyti alternatyvios sudėties ir gamybos technologijos puskietes sistemas, pasižyminčias ne mažesniu salicilo rūgšties atpalaidavimu in vitro. Darbo uždaviniai: 1. Parinkti ir pritaikyti salicilo rūgšties kiekybinės analizės metodiką; 2. Parinkti tinkamas sąlygas salicilo rūgšties atpalaidavimo iš tepalų tyrimams in vitro; 3. Ištirti salicilo rūgšties atpalaidavimą in vitro iš Lietuvos vaistinėse pagamintų tepalų; 4. Sumodeliuoti alternatyvios sudėties puskietes sistemas su salicilo rūgštimi, jas pagaminti ir įvertinti jų kokybę; 5. Ištirti salicilo rūgšties atpalaidavimą in vitro iš sumodeliuotų puskiečių sistemų bei palyginti gautus atpalaidavimo rezultatus su vaistinėse pagamintų tepalų atpalaidavimo rezultatais. Metodai: Salicilo rūgšties išsiskyrimas iš puskiečių sistemų tirtas naudojant modifikuotas Franz tipo celes. Salicilo rūgštis kiekybiškai nustatyta spektrofotometrijos metodu naudojant spektrofotometrą Agilent 8453, bangos ilgis 296 nm. Kalibracinio grafiko koncentracija ribose 0,005-0,03 mg/ml. Tepalų kokybė nustatyta vertinant tepalo pH ir dinaminę klampą. Rezultatai: po 4 h 5 % salicilo rūgšties tepalai atpalaidavo salicilo rūgšties: LSMU vaistinės- 3,36±0,16 %, “Ąžuolyno” vaistinės- 2,54±0,12 %, UAB “VJV“- 2,71±0,20 %, eksperimentinis 1,89±0,14 %, tepalai, pagaminti sudėtines medžiagas sumaišius grūstuvėje... [toliau žr. visą tekstą] / Objective of work: to evaluate quality of salicylic acid ointments manufactured by pharmacies by assessing release of salicylic acid in vitro and suggest alternative composition and technique semi- solid preparation, characterized by the same or better release of salicylic acid. Main tasks: 1. To select and adapt a suitable method for quantity analysis for salicylic acid; 2. To select appropriate conditions for salicylic acid release in vitro from semi- solid preparation; 3. To research release of salicylic acid in vitro from semi-solid preparations made by Lithuanian pharmacies; 4. To formulate semi- solid preparations containing salicylic acid and evaluate quality; 5. To research release of salicylic acid in vitro from formulated semi- solid preparations and compare release results with release results of semi- solid preparations made by Lithuanian pharmacies. Methods: release of salicylic acid from semi- solid preparations executed by using modificated vertical diffusion Franz cells. The quantity analysis executed by using spectrophotometric methods. UV- Vis spectrophotometer Agilent 8453, wavelength 296 nm, calibration curve within 0,005- 0,03 mg/ml. Ointments quality evaluated by pH and dynamic viscosity. Results: after 4 h 5 % salicylic acid ointments released salicylic acid: LSMU pharmacy‘s ointment- 3,36 %, “Ąžuolyno” pharmacy‘s ointment- 2,54 %, UAB “VJV“ ointment- 2,71 %, experimental ointment- 1,89 %; ointments made by mixing in mortar with glycerol- 2,27 %... [to full text]

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-12-05T18:04:29Z No. of bitstreams: 1 Marcelo Dos Santos Teixeira Obtencao de celulas... 2003.pdf: 28318419 bytes, checksum: a1e439159f78f314897b74a003f09de9 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-05T18:04:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Dos Santos Teixeira Obtencao de celulas... 2003.pdf: 28318419 bytes, checksum: a1e439159f78f314897b74a003f09de9 (MD5) Previous issue date: 2003 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil

A regeneração de plantas de Eucalyptus viminalis Labill. Foi obtida através da micropropagação de segmentos nodais de mudas. O desenvolvimento da técnica consistiu da adequação das fases de desinfestação dos explantes e multiplicação, alongamento e enraizamento de brotações sob condições assépticas e controladas de incubação. O meio de cultura básico foi o de MURASHIGE & SKOOG (MS), suplementado com 2% (P/V) de sacarose e solidificado com 0,8 % (P/V) de ágar , além das vitaminas descritas por GAMBORG & WETTER. Segmentos modais com aproximadamente 1 cm de comprimento, obtidos de mudas de 1 ano, foram desinfestados em solução de 1 ou 2% de hipoclorito de sódio durante 5, 10 ou 15 minutos. Tais explantes foram cultivados em meio MS com metade da concentração sais, com adição de BAP e ANA, ambos na concentração de 0,1 mg.l-1 . Na multiplicação empregou-se a combinação de BAP e ANA. Na fase de alongamento, efetuou-se a combinação de concentrações de sais no meio de cultura com adição suplementar de nitrogênio e regimes de luz, além da combinação de carvão ativado com GA3 e AIB. No enraizamento, empregaram-se diferentes concentrações de AIB combinadas com cinetina, em meio MS ou MS/2. Explantes tratados com solução de 1% de hipoclorito de sódio por 10 min. Apresentaram menores taxas de contaminação e oxidação e maior sobrevivência em relação aos demais tratamentos. Múltiplas brotações foram induzidas pela adição de 0,2 mg.l-1 de BAP e 0,1 mg.l-1 de ANA ao meio MS. No alongamento, o uso do carvão ativado, isoladamente, no meio MS, resultou no maior crescimento em altura das brotações. O uso do GA3 mostrou-se detrimental para o alongamento. O melhor enraizamento foi obtido no meio MS/2 suplementado com 0,5 mg.l-1 de AIB. Nesta fase, o meio MS/2 foi mais eficaz que o MS na formação das raízes. Na micropropagação de Eucalyptus viminalis a máxima taxa de multiplicação obtida foi de 5 a 6 brotações por explante, a cada 8 semanas, com percentagem de enraizamento de 66,6 %. Considerando-se o aspecto das brotações, a taxa ótima de multiplicação foi de 4,6 brotações por explante.

Orientador: Rejane Maria Tommasini Grotto / Resumo: Embora as células alvo do Vírus da Hepatite C (VHC) sejam hepatócitos, o RNA do vírus já foi descrito em outros compartimentos extra-hepáticos como células dendríticas, linfócitos, macrófagos e plaquetas. Estas últimas, são responsáveis pelo carreamento do vírus no paciente infectado, e apesar da ausência do principal receptor associado à entrada do vírus nas células alvo, o CD81, o VHC é capaz de interagir com plaquetas depois de incubação in vitro. Ainda, o vírus carreado pela plaqueta apresenta uma maior estabilidade quando comparado ao vírus circulante no plasma, o que faz com que o vírus presente na plaqueta adquira considerável importância no curso da Hepatite C crônica, podendo funcionar como reservatório para o vírus. No entanto, pouco se conhece se a presença do vírus em plaquetas pode advir de uma prévia interação do vírus com as células precursoras da plaqueta na medula óssea, os megacariócitos. Assim, o presente estudo avaliou a presença do VHC em megacariócitos expostos, in vitro, ao VHC. Material excedente de doadores voluntários e saudáveis de medula óssea foi utilizado como fonte para o isolamento dos megacariócitos, os quais, foram incubados in vitro com 100.000UI/mL de VHC de genótipo 1 (39 horas; 5% de emissão de CO2; homogeinização 3x/dia no mesmo horário). Depois da incubação, os megacariócitos foram isolados e submetidos a análise qualitativa e quantitativa buscando a presença do vírus. Os resultados do presente estudo demonstraram que o VHC pode interag... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Visando o desenvolvimento de um protocolo para a regeneração dos genótipos superiores da Araucaria angustífolia (Bert) O. Ktze, procurou-se verificar os aspectos básicos envolvidos e o comportamento da espécie quanto à micropropagação, através do cultivo dos segmentos caulinares de mudas de 30 a 60 dias, com a obtenção de brotos axilares ortotrópicos. Dos oito a 10 meristemas axilares presentes nestes segmentos, em cultivos no meio MS/2, desenvolveram-se em média dois a três brotos, dos quais, um a dois dominantes. Das citocininas utilizadas para a obtenção de maior número de brotos, verificou-se que a espécie é sensível à zeatina, mas em combinação com o meio MCM. As gemas apicais e os brotos dominados somente cresceram no meio básico MS/2, com o acréscimo de carvão ativado (5g, lOg ou 20 gil), e ácido giberélico (2 mg/l). O enraizamento (60% a 80%) dos brotos dominantes, foi obtido mediante o tratamento indutivo prévio por seis ou 12 dias, com o ácido indol-3-butírico (6 e 12 mg/I) em meio básico simples, contendo somente 30 g/l de sacarose e 6 g/l de ágar. A emergência e o desenvolvimento das raizes ocorreram nos meios MS/2 ou M514, com duas fases: uma superior com vermiculita e 4,5 g/l de ágar, na qual foram inseridas as bases dos brotos, e a inferior com 6 g/l de ágar, sem vermiculita. Embriões maduros da espécie não mostraram competência para a organogênese, face aos tratamentos testados, mas mostraram que é possível a multiplicação do meristema apical, por meio de tratamentos citocininicos indutivos com altas concentrações e curto prazo (duas-três horas). Para se contornar a limitação da pesquisa a três-quatro meses por ano, imposta pela periodicidade da frutificação, foram testados, com sucesso, dois tipos de armazenamento a frio: o dos pinhões, a -2°C, com 80% de germinação após seis meses; das mudas de 30 a 60 dias, a 4°C, com inibição total do crescimento; também por seis meses. Verificou-se ser viável o rejuvenescimento ex vitro dos indivíduos adultos da espécie, mediante enxertias sucessivas em mudas de 4-6 cm de altura, e em condições ambientais controladas (17 °C ± 2 °C, 60 a 90% de umidade relativa). Os estudos anatômicos mostraram que a Araucária tem grande poder de regeneração, pela rapidez (15 dias) da organização dos meristemas axilares em brotos; capacidade de desdiferenciação das células parenquimáticas do córtex, para a formação do tecido pró-vascular para a conexão dos brotos e segmento caulinar de origem e formação das raizes a partir de células pró-vasculares do calo basal dos brotos. As raízes formadas provaram ser funcionais pela boa sobrevivência das mudas obtidas e transplantadas para o solo. O desenvolvimento do protocolo da multiplicação da espécie via microestacas de mudas é possível, havendo no entanto a necessidade de se ampliar os estudos relativos à obtenção de brotos multiplos a partir dos meristemas axilares do caule.

Submitted by LEONARDO DE FREITAS SILVA null (leonardofreitas86@gmail.com) on 2016-10-20T13:26:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado- reapresentação 1.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-10-26T17:52:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_lf_me_arafo.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-26T17:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_lf_me_arafo.pdf: 1472109 bytes, checksum: e157f95a9ba34bce0469c51f091af276 (MD5) Previous issue date: 2016-10-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A estabilidade primária de implantes dentários corresponde a um fenômeno mecânico relativo à qualidade ou quantidade óssea, ao tipo de implante e a técnica de instalação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o tempo de fresagem, aquecimento dos sítios fresados e a estabilidade dos implantes instalados em cavidades realizadas com ultrassom cirúrgico e instrumentos rotatórios. Foram realizadas 64 cavidades em 04 blocos de poliuretano simulando as densidades de ossos tipo I, II, III e IV. A temperatura da superfície do bloco nos leitos foi medida durante a fresagem. A estabilidade dos implantes foi mensurada por meio do torque de inserção, de remoção e frequência de ressonância. O implante cilíndrico TitaOss 3,75 x 11 mm foi instalado em todas as cavidades. Os resultados mostraram maior tempo e temperatura para o grupo em que foi usado o ultrassom. Quanto à estabilidade primária não houve diferença significante entre os grupos estudados. Pôde-se concluir que a estabilidade primária dos implantes não foi influenciada pelos métodos de fresagem utilizados e que o ultrassom cirúrgico necessitou de mais tempo e gerou mais calor do que o instrumento rotatório para o preparo das cavidades. / The primary stability of dental implants corresponds to a mechanical phenomenon related to bone quality or quantity, type of implant and installation technique. The objective of this study was to evaluate the time of drilling, heating drilled sites and stability of implants placed in cavities made with piezosurgery and rotary instruments. Polyurethane blocks were used simulating the densities of bone type I, II, III and IV. The surface temperature of the block was measured in the cavity during drilling, and recorded the highest temperature variation. The stability of the implants was measured with a torque insertion, torque of removal and resonance frequency. The cylindrical implant TitaOss 3.75 x 11 mm was used in all cavities. The results showed greater time and temperature for the group that was used piezosurgery. The primary stability was no significant difference between groups. It could be concluded that implant primary stability was not influenced by the used methods and piezosurgery took more time and generated more heat than the conventional rotatory instruments to prepare the cavities.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-30Bitstream added on 2014-06-13T20:38:41Z : No. of bitstreams: 1 cruz_mhc_me_jabo.pdf: 449643 bytes, checksum: 0e9dfaf9ccce6d16d2b674ee50050873 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo objetivou avaliar a influência do fluido folicular (FF) e da proteína recombinante humana GDF9 adicionados ao meio de maturação sobre a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro. Foram realizados três experimentos utilizando o meio TCM199 como meio básico de maturação. No primeiro experimento, os oócitos foram maturados em cinco diferentes meios (0%, 25%, 50%, 75% ou 100% de FF) em quatro tempos de maturação (22, 24, 26 ou 28 h). No segundo experimento, os oócitos foram maturados nos mesmos meios utilizados no primeiro experimento e fecundados em três diferentes tempos (24, 26 ou 28 h). No terceiro experimento, foram utilizados dois meios: controle (sem FF) ou com 25% de FF e quatro níveis de suplementação (0, 25, 100 ou 200 ng/mL) com GDF9. O FF promoveu retardo da progressão meiótica, afetando a maturação nuclear e a migração de grânulos corticais para a periferia dos oócitos. O FF em altas concentrações influenciou negativamente as taxas de clivagem e de blastocisto. O GDF9, com (25%) ou sem FF, não influenciou as taxas de clivagem e de blastocisto, no entanto, interferiu positivamente sobre o percentual de embriões considerados superiores. O percentual mais elevado (82,22%) de embriões classificados como superiores foi obtido com o uso de 200 ng de GDF9 em meio de maturação acrescido de 25% de FF. Em conclusão, a adição do fluido folicular (75% e 100%) ao meio de maturação in vitro retarda a progressão meiótica, sincronizando a maturação nuclear com a citoplasmática e a suplementação do meio de maturação com proteína recombinante humana GDF9 melhora a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro, baseando-se na avaliação da proporção do número de células da massa celular interna (MCI) em relação ao número total de células / This study aimed to evaluate the effects of follicular fluid (FF) and recombinant human GDF9 added to the maturation media on the quality of in vitro produced bovine embryos. Three experiments using TCM199 medium as basic maturation media were performed. In the first experiment oocytes were matured in five different media (0%, 25%, 50%, 75% or 100% of FF) during four maturation times (22, 24, 26 or 28 h). In the second experiment, the oocytes were matured in the same five media used in the first experiment and fertilized at three different times (24, 26 or 28 h). In the third experiment were used two media: control (without FF) or with 25% FF combined with four levels of supplementation (0, 25, 100 or 200ng/mL) with GDF9. The FF promoted delay of the meiotic progression, affecting nuclear maturation and cortical granules migration to the oocyte periphery. In addition FF influenced the cleavage and blastocyst rates. GDF9, without or added to FF did not affect the cleavage and blastocyst rates, however, a positive influence on the percentage of embryos considered superior was observed. The highest percentage (82.22%) of embryos considered superior was obtained with maturation media added with 25% of FF and supplemented with 200 ng of GDF9. In conclusion, addition follicular fluid (75% and 100%) to the in vitro maturation media delays meiotic progression, synchronizing nuclear to cytoplasmic maturation, and supplementation of maturation media with recombinant human GDF9 improves the quality of bovine embryos in vitro produced, based on inner cell mass cells (ICM) proportion, relative to the total cell number

Orientador: Mario Tanomaru Filho / Banca: Gisele Faria / Banca: Marco Antônio Húngaro Duarte / Resumo: Cimentos à base de silicato tricálcico são desenvolvidos como alternativa ao Mineral Trióxido Agregado (MTA). O objetivo do estudo foi avaliar a biocompatibilidade e bioatividade do cimento experimental silicato tricálcico com 20% de óxido de zircônio (ZrO2) (STC) e MTA Plus (MTAP). Capítulo1- Células humanas de osteoblastos (Saos-2) foram utilizadas para análise da viabilidade celular por meio dos ensaios de MTT e Vermelho Neutro (NR), da bioatividade pela atividade da enzima fosfatase alcalina (ALP) e da presença de área mineralizada pela coloração de Vermelho de Alizarina (ARS). Os dados obtidos para MTT, NR e ALP foram analisados por ANOVA e Bonferroni, e ARS, por ANOVA e Tukey (p ≤ 0,05). Nos ensaios de viabilidade celular, os materiais não foram citotóxicos. Maior atividade de ALP ocorreu aos 7 dias para todos materiais avaliados. Área mineralizada foi observada em todos os grupos, sendo menor para o grupo STC. Concluiu-se que o cimento experimental silicato tricálcico com 20% de óxido de zircônio e MTA Plus apresentam citocompatibilidade e potencial bioativo. Capítulo 2- A reação inflamatória induzida pelo STC e MTAP foi investigada em subcutâneo de ratos. Tubos de polietileno foram preenchidos com STC (n= 20) e MTAP (n= 20) e implantados no subcutâneo dorsal de quarenta ratos. No grupo controle (GC; n= 20), tubos vazios foram implantados. Após 7, 15, 30 e 60 dias, os tubos de polietileno com o tecido conjuntivo circundante foram fixados e embebidos em parafina. O núme... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tricalcium silicate- based cements have been developed as an alternative to Mineral Trióxido Agregado (MTA). The aim of the study was to evaluate biocompatibility and bioactivity of the tricalcium silicate cement replaced with 20% zirconium oxide (STC) e MTA Plus (MTAP). Chaper 1- Human osteoblastic cells (Saos-2) were exposed to test materials and assessed for viability, MTT and Neutral Red (NR) assay, and bioactivity for ALP activity assay and alizarin red staining (ARS). Unexposed cells acted as the control group. Statistical analysis was performed using ANOVA and the Bonferroni post- test (P < 0.05) to MTT, NR and ALP, and ANOVA and Tukey post- test (P ≤ 0.05) to ARS. MTT and NR results, all tested cements were non-cytotoxic. The highest ALP activity occurred at the 7th days. Mineralized area was observed in all materials, STC group showed lower mineralized area. Experimental tricalcium silicate with 20% zirconium oxide and MTA Plus have present biocompatibility and bioactive potential. Chapter 2- The inflammatory reaction induced by tricalcium silicate cement replaced with 20% zirconium oxide (STC) e MTA Plus (MTAP) was evaluated in rat subcutaneous tissues. A polyethylene tube filled with STC (n= 20) and MTAP (n= 20) was placed into the dorsal subcutaneous of forty rats; in the control group (GC; n= 20), empty tubes were implanted. After 7, 15, 30 and 60 days, the polyethylene tubes surrounded by connective tissue were embedded in paraffin. The number of inflammatory ce... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Banca: Juliana Corrêa Borges Silva / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Foram estudadas modificações feitas no tempo de maturação in vitro de oócitos bovinos, incubação dos espermatozóides e separação dos mesmos por gradiente de densidade de PercollTM, bem como a associação dessas técnicas antes da fecundação para que se consiga desviar a proporção sexual dos embriões para fêmeas. O controle de qualidade foi feito em cada etapa dos procedimentos avaliando-se os parâmetros de motilidade, vigor e concentração dos espermatozóides, bem como taxa de clivagem e produção in vitro dos embriões. A proporção sexual foi avaliada pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e por transferências de embriões em receptoras. Pela técnica da PCR concluiu-se que a incubação dos espermatozóides em meio FIV sem heparina por 12 horas, desviou 59% o sexo dos embriões para fêmeas, a diminuição do tempo de maturação não desviou e essas duas técnicas associadas a centrifugação em gradiente não aumentaram o desvio da proporção sexual, porém o gradiente de sexagem foi eficaz em sexar 64% dos espermatozóides para fêmeas. Obteve-se uma taxa média de prenhez de 36,73% e uma proporção de fêmeas de 88,88% com embriões produzidos a partir da associação da redução no tempo de maturação dos oócitos ao gradiente de sexagem / Abstract: Were studied modifications made at the time of in vitro maturation of oocytes, sperm incubation and separation thereof by density gradient PercollTM as well as the combination of these techniques prior to fertilization to be able to divert the sex ratio of embryos females. Quality control was done at each stage of the procedures by evaluating the parameters of motility, vigor and concentration of spermatozoa and rate of cleavage and in vitro production of embryos. The sex ratio was assessed by means of Polymerase Chain Reaction (PCR) and embryo transfer into recipients. By the technique of PCR it was found that incubation of spermatozoa in IVF medium without heparin for 12 hours, 59% deviated sex of embryos for females, the reduction time of maturation is not shifted and associated with these two techniques do not increase the deviation of the sex ratio by gradient centrifugation, but the gradient was effective in sexing 64% of sperm to females. We obtained a mean pregnancy rate of 36.73% and a ratio of 88.88% of females with embryos produced from the combination of the reduction in the time of oocyte maturation to the gradient of sexing / Doutor