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Associação da incidência de dislipidemia e anormalidades de glicose com o tratamento antirretroviral em uma coorte de crianças infectadas pelo HIV na américa latina (NISDI/PLACES)Paganella, Machline Paim January 2014 (has links)
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Associação da incidência de dislipidemia e anormalidades de glicose com o tratamento antirretroviral em uma coorte de crianças infectadas pelo HIV na américa latina (NISDI/PLACES)Paganella, Machline Paim January 2014 (has links)
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Associação da incidência de dislipidemia e anormalidades de glicose com o tratamento antirretroviral em uma coorte de crianças infectadas pelo HIV na américa latina (NISDI/PLACES)Paganella, Machline Paim January 2014 (has links)
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Atividade de análogos de inibidores de protease do HIV contra Leishmania spp.Vasconcelos, Mariela Ferreira de January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os medicamentos utilizados no controle da infecção causada por espécies de Leishmania estão associados a alta toxicidade, dificuldade de administração, altos custos e crescente resistência. A procura por novas alternativas de tratamento é, portanto, uma prioridade. Na busca de outros fármacos que possam ser efetivos e menos tóxicos destacam-se os inibidores de protease. As proteases de Leishmania estão envolvidas nos mais diversos mecanismos, tais como virulência e patogênese. Dentro deste contexto, trabalhos mostram a atividade de inibidores de aspártico protease do HIV (IPs-HIV) em patógenos oportunistas, dentre eles Leishmania spp. No presente estudo trabalhamos com moléculas precursoras de síntese dos IPs-HIV, as hidroxietilaminas (HEAs). O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade leishmanicida de HEAs e suas implicações na biologia de Leishmania spp. De 23 móleculas submetidas à triagem inicial em promastigotas, 15 prosseguiram nos testes e confirmaram sua atividade sobre amastigotas intracelulares de L. amazonensis, todas com IC50 < 5,0 \F06DM. A avaliação da toxidez in vitro sobre macrófagos peritoneais murinos e células MRC5 demonstrou que as substâncias-teste PMTB1, PMTB4, PMTB11, PLIP2, PLIP19 possuem índice de seletividade superior a 20. As substâncias mais ativas sobre amastigotas foram selecionadas para testes onde diferentes variáveis foram usadas, como: espécies do parasito, razão de infecção, tempo e metodologia de contagem. Os resultados destacaram os compostos PMTB1, PMTB8, PMTB10, PLIP1, PLIP27 e PLIP33, que foram mais ativos para L. amazonensis e L. major considerando as diversas variáveis
Além disso, ficou evidente que existe uma diferença significativa no resultado de IC50/IC90 de acordo com a metodologia de contagem. Os testes de inibição da atividade proteolítica de aspártico protease mostraram que as HEAs tem perfis diferentes de inibição, e as com maior capacidade inibitória foram PLIP19, PLIP27, PMTB3, PMTB4, PMTB5, PMTB7, PMTB9 e PMTB10, não guardando correlação direta com a atividade leishmanicida. Ao analisarmos a relação estrutura/atividade das moléculas, percebemos que o grupamento NH2 mantém a atividade leishmanicida. A análise do perfil dos lipídeos neutros mostrou que não houve acúmulo de esteróis metilados na posição 14, que são caracteristíscos da inibição farmacológica da CYP51. No entanto, houve uma alteração na composição dos esteróis, principalmente pela PLIP27, cujo mecanismo necessita ser explorado. A análise in silico demostrou a aderência das moléculas à regra dos cinco (Ro5) de Lipinski, sugerindo que de acordo com parâmetros físico-químicos, elas são boas canditadas à administração oral. Juntos, estes resultados sugerem que as HEAs, principalmente PLIP27 e PMTB10, são moléculas promissoras com amplo espectro de atividade e podem auxiliar no estudo e desenvolvimento de protótipos semelhantes aos IPs-HIV para o tratamento das leishmanioses / Drugs used to control infection caused by Leishmania species are associated with poor therapeutic responses, adverse effects, high toxicity, high costs and resistance. The search for new treatment approaches is a priority. Seeking other effective and less toxic drugs there are the protease inhibitors. Leishmania proteases are involved in many mechanisms, such as virulence and pathogenesis. In this context, studies show the activity of HIV aspartic protease inhibitors (HIV-PIs) in opportunistic pathogens, including Leishmania spp. In this study we worked with hydroxyethylamines (HEAs) used as precursor molecules in the synthesis of HIV-PIs. The objective of the study was to evaluate the leishmanicidal activity of HEAs and their implications in Leishmania biology. From 23 molecules in the initial screening with promastigotes, 15 continued in the tests and confirmed their activity on intracellular amastigotes of L. amazonensis, all of them with IC50 < 5,0 \F06DM. The toxicity assay on murine peritoneal macrophages and MRC5 cells showed that the molecules PMTB1, PMTB4, PMTB11, PLIP2, PLIP19 have selectivity index greater than 20. The most active substances on amastigotes were selected for testing in different methodologies, ranging parasitic species, infection rate, time and counting procedure. The results highlighted PMTB1, PMTB8, PMTB10, PLIP1, PLIP27 and PLIP33 as the most active compounds for L. amazonensis and L. major, considering several variables
Furthermore, it was evident that there are significant differences in results of IC50/IC90 according to the counting methodology. Inhibition tests of the proteolytic activity of aspartic protease showed that HEAs have different profiles of inhibition. PLIP19, PLIP27, PMTB03, PMTB04, PMTB05, PMTB07, PMTB09 e PMTB10 were the most potent inhibiting the protease activity, without having a direct correlation with the leishmanicidal activity. Analyzing the relationship structure / activity of molecules, we realize that the group NH2 is important for leishmanicidal activity. Analysis of neutral lipids from promastigotes of L. amazonensis treated with PLIP27 and PMTB10 showed that there was no accumulation of C14-methylated sterols, which are typical of pharmacological inhibition of CYP51. However, other changes in sterol composition induced mainly by PLIP27 were noted, but the mechanism remains to be explored. The in silico analysis demonstrated the adherence of molecules to the rule of five (Ro5) of Lipinski, suggesting that according to physicochemical parameters they are good candidates of oral treatment. Altogether, these results suggest that HEAs, mainly PLIP27 and PMTB10, are promising molecules with broad-spectrum activity, and can be useful in the study and development of prototypes similar to HIV-PI for the treatment of leishmaniasis
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Ensaios enzimáticos de proteases de HIV-1 de subtipos brasileiros / Enzimatic assays of HIV-1 proteases from brazilian subtypesMartins, Nádia Helena 17 May 2007 (has links)
Mesmo com o grande número de estudos relacionados à proteases do subtipo B e de como suas mutações podem interferir na estrutura, na resistência a inibidores e na eficiência catalítica da enzima, existe ainda uma lacuna de como as mudanças polimórficas de proteases de HIV de outros subtipos de HIV-1 interferem nesses fatores. Nesse contexto insere-se esse trabalho, que utilizou proteases de HIV-1 isoladas de pacientes brasileiros HIV-1 infectados com o subtipo F, e outros dois mutantes, sendo que um do subtipo F e outro do subtipo B para ensaios frente a seis inibidores comercialmente disponíveis: amprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir e saquinavir. Nossos resultados experimentais revelam que os seis inibidores comerciais estudados são significantemente menos ativos para o subtipo F e para as mutantes quando comparados ao subtipo B. Além disso, os valores de vitalidade dessas proteases também são considerados maiores que os obtidos para a proteína selvagem do subtipo B. O acúmulo de mutações comumente detectadas e o polimorfismo natural tornam a protease selvagem do subtipo F cataliticamente suficiente para manter a viabilidade do vírus e garantir alto grau de resistência cruzada frente a todos os inibidores estudados. / Despite years of intense research around the world, HIV continues to represent considerable therapeutical challenge. In order to gain more insights into resistance of polymorphic mutations of existing HIV subtypes toward commercially available pharmaceutics, we studied inhibition of subtypes B and F HIV proteases (PRs) [native and two mutant enzymes clinically identified in Brazilian patients] by six commercial inhibitors (amprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir and saquinavir). Our results show that all these inhibitors have significantly higher Ki values for the subtype F HIV PR (Fwt) and both mutant enzymes than that for the B subtype HIV PR (Bwt). Furthermore, the biochemical fitnesses of these proteases, or their vitalities, are also considerably higher than that of Bwt. The accumulation of commonly detected resistant mutations in HIV PRs with natural polymorphisms turns Fwt sufficiently catalytically active to guarantee the virus viability and confers it a large degree of cross resistance against all studied inhibitors.
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"Prevalência e covariação de mutações relacionadas à resistência aos inibidores de protease no subtipo F do HIV-1" / Prevalence and covariation of protease inhibitor resistance related mutations of HIV type 1 subtype FOliveros, Marcia Perez Resende 23 August 2005 (has links)
Cada subtipo de HIV-1 tem um padrão mutacional próprio. Dados sobre mutações de resistência aos antiretrovirais foram obtidos com o subtipo B, primeiro em prevalência no Brasil. O segundo em algumas regiões é o subtipo F. Foram analisados padrões mutacionais em seqüências brasileiras de protease do subtipo F e levantou as seqüências deste subtipo disponíveis na base de dados de Stanford. A análise de dois grupos de seqüências (pacientes não tratados e tratados com inibidores de protease) mostrou 19 mutações associadas ao tratamento comuns ao subtipo B e 17 duplas de mutações associadas ao tratamento que diferem das descritas para o subtipo B, indicando a necessidade de estudos sobre rotas mutacionais no subtipo F. / Each HIV-1 subtype has a specific mutation pattern. Data on HIV-1 antiretroviral resistance mutations were obtained with subtype B, the first in prevalence in Brazil. The second in some regions is subtype F. Mutation patterns of Brazilian subtype F protease sequences were analyzed and performed a research of the sequences of Stanford Database. The analysis of two groups of sequences (untreated and treated patients with protease inhibitors) showed 19 treatment associated mutations also common in subtype B and 17 combinations of statistically treatment associated mutations that were quite different to those described for subtype B, indicating the need of studies to evaluate specific mutation pathways of subtype F.
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Avaliação da atividade leishmanicida de uma nova hidroxietilpiperazina sintética e de Momordica charantia (CUCURBITACEAE)Vasconcelos, Mariela Ferreira de January 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As leishmanioses constituem um conjunto de doenças negligenciadas que afetam cerca
de 12 milhões de indivíduos em 98 países. Os medicamentos utilizados no controle da
infecção estão associados à baixa eficácia, alta toxicidade, dificuldade de administração,
altos custos e crescente resistência. A procura por novas alternativas de tratamento é,
portanto, uma prioridade. Este trabalho tem como objetivo avaliar a atividade
leishmanicida de novas hidroxietilpiperazinas sintéticas e de Momordica charantia
(Cucurbitaceae). Uma série de oito hidroxietilpiperazinas foi sintetizada e testada, a que
demonstrou ser mais ativa e com menor citotoxidade, PMIC4, foi selecionada.
Promastigotas de Leishmania amazonensis foram cultivadas em diferentes
concentrações da PMIC4, que inibiu acentuadamente a multiplicação do parasito, com
IC50 de 11,6 μM. Em amastigotas, os resultados mostraram que macrófagos tratados
com 20 μM de PMIC4 apresentaram uma redução de 82% nos níveis de infecção, com
IC50 de 1,8 μM. Uma vez que hidroxietilpiperazinas são utilizadas como precursores na
síntese dos inibidores de protease do HIV, foram realizados ensaios para detectar se a
PMIC4 seria capaz de inibir a atividade de aspártico proteases em promastigotas de L.
amazonensis. Concentrações de até 200 μM de PMIC4 não foram capazes de inibir esta
atividade enzimática. Para avaliar se houve diferença na composição dos esteróis de
membrana entre L. amazonensis tratadas com a PMIC4 e não tratadas, os lipídeos
neutros foram analisados por cromatografia de camada fina. Foi possível notar uma
diferença significativa entre os grupos tratados e o grupo controle. Para avaliar o efeito
desta hidroxietilpiperazina no controle da infecção por L. amazonensis em
camundongos BALB/c, os animais foram tratados com a PMIC4, que mostrou possuir
atividade leishmanicida in vivo por via oral. Paralelamente, também foi demonstrada a
atividade leishmanicida de frações de Momordica charantia em promastigotas e
amastigotas intracelulares de L. amazonensis. Ao longo do trabalho, foi realizado o
fracionamento do extrato bruto das partes aéreas da planta, guiado pela atividade
leishmanicida, até a obtenção de três frações semi-purificadas ativas. Em amastigotas
intracelulares, as frações ativas MSØAc e F7 apresentaram IC50 de 1,69 μg/mL e 1,08
μg/mL, respectivamente. Este é o primeiro relato tanto da atividade de uma
hidroxietilpiperazina quanto de Momordica charantia contra Leishmania amazonensis.
Os extratos, frações e substâncias aqui apresentados podem ser considerados candidatos
potenciais para o desenvolvimento de novos fitoterápicos e/ou quimioterápicos contra a
leishmaniose cutânea. / Leishmaniasis is a group of neglected diseases that affect approximately 12 million
people in 98 countries. The drugs used to control the disease are associated with low
efficacy, high toxicity, difficulties of administration, high costs and increasing
resistance. The search for new alternatives of treatment is a priority. This study aims to
evaluate the leishmanicidal activity of new synthetic hidroxyethylpiperazines and of
Momordica charantia (Cucurbitaceae). A series of eight hidroxyethylpiperazines was
synthesized and the PMIC4 showed to be more active and less cytotoxic. Leishmania
amazonensis promastigotes were cultivated in different concentrations of PMIC4, which
strongly inhibited the multiplication of the parasite, with IC50 of 11.6 μM. In
amastigotes, the results demonstrated that macrophages treated with 20 μM of PMIC4
presented 82% reduction in infection levels, with IC50 of 1.8 μM. Once
hidroxyethylpiperazines are used as precursors in the synthesis of protease inhibitors of
HIV, we tested whether the PMIC4 could inhibit the activity of aspartic proteases in
promastigotes of L. amazonensis. Concentrations up to 200 μM of PMIC4 were not able
to inhibit this enzyme activity. To determine differences in the composition of
membrane sterols between L. amazonensis treated with PMIC4 and untreated, the
neutral lipids were analyzed by thin layer chromatography. It was possible to observe a
significant difference between treated and control groups. To evaluate the effect of this
hidroxyethylpiperazine in controlling infection by L. amazonensis in BALB/c mice,
animals were treated with PMIC4, which showed in vivo leishmanicidal activity orally.
Moreover, we also demonstrated the leishmanicidal activity of fractions of Momordica
charantia in promastigotes and intracellular amastigotes of L. amazonensis. Throughout
the work, we performed the fractionation of crude extract of aerial parts of the plant,
guided by the leishmanicidal activity until we get three very active fractions. In
intracellular amastigotes, the active fractions MSØAc and F7 showed IC50 of 1,69
μg/mL and 1,08 μg/mL, respectively. This is the first report of the activity of
hidroxyethylpiperazines and Momordica charantia against Leishmania amazonensis.
The extracts, fractions and substances presented here can be considered potential
candidates for the development of new phytotherapy and/or chemotherapy against
cutaneous leishmaniasis.
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Avaliação da digestibilidade e da qualidade protéica de linhagens de soja com ausência do inibidor de tripsina Kunitz e das isoenzimas lipoxigenases / Digestilility and protein quality evaluation from soy strains in absence of Kunitz trypsin and isoenzymes lipoxygenasesMonteiro, Márcia Regina Pereira 04 October 2000 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-21T13:46:54Z
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Previous issue date: 2000-10-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As farinhas de soja integrais utilizadas neste trabalho foram obtidas, a partir de grupos de sementes (bulks) derivadas de linhagens que diferem entre si com relação à presença de lipoxigenases (LOX) e/ou inibidor de tripsina Kunitz (KTI). Para essa seleção e confirmação dos genótipos realizaram-se análises de lipoxigenases, de inibidores de tripsina e de quimotripsina. Realizou-se ainda, análise da composição química centesimal para caracterização das farinhas e atividade hemaglutinante nas sementes e nas farinhas de soja derivadas. Constatou-se , através da atividade hemaglutinante, que o tratamento térmico (89oC por 5 minutos) aplicado no processamento das farinhas foi suficiente para inativar as lectinas presentes na soja. Com o objetivo de avaliar a qualidade protéica e digestibilidade in vivo das farinhas de soja, procedeu-se aos ensaios biológicos com ratos, em que foram avaliados o PER (Relação da Eficiência Protéica), NPR (Razão Protéica Líquida), NPU (Utilização Protéica Líquida) e a digestibilidade. Os valores de PER, NPR, NPU para as variedades de soja foram inferiores aos valores obtidos para caseína, possivelmente em virtude da deficiência da proteína de soja em algum tipo de aminoácido essencial. Para as farinhas sem KTI foram obtidos valores de digestibilidade maiores que para as farinhas com KTI, e esses foram bem próximos aos da caseína. Isto comprova que a eliminação genética do KTI melhora consideravelmente a digestibilidade da proteína de soja. No entanto, essa diferença não refletiu em melhor qualidade protéica dessa variedade, visto que não houve diferença nos valores de PER, NPR e NPU entre as variedades estudadas. Procedeu-se a determinação da composição aminoacídica das farinhas e cálculo do PDCAAS (Escore Químico Corrigido pela Digestibilidade) , constatando-se que o aminoácido limitante dessa soja é lisina e não metionina, ao contrário do que aponta a literatura, possivelmente em decorrência do melhoramento genético que levou a essa alteração. Os resultados do PDCAAS não indicaram diferença entre as farinhas sem KTI das farinhas derivadas de linhagens com KTI, como foi observado pelos resultados da digestibilidade in vivo. Conclui-se que a retirada genética do inibidor de tripsina Kunitz melhora significativamente a digestibilidade da proteína de soja, eliminando a necessidade de se empregar altas temperaturas nos produtos de soja visando inativação desse inibidor e, conseqüentemente, evitando o superaquecimento com insolubilização de proteínas, perdas de características funcionais e destruição de alguns aminoácidos. / The whole soy flours used in this work were obtained from seed bulks derived from strains differing in relation to presence of lipoxygenases (LOX) and/or Kunitz trypsin (KTI). Analyses for lipoxygenase and trypsin and chemotrypsin inhibition were performed in order to select and confirm the genotypes. Chemical content analysis was also performed so as to characterize the flours and the hemaglutinating activity in the seeds and the derived soy flour. It was observed from that activity that the thermal treatment (89 o C for 5 min) on the flour processing was enough to inactivate the lectins present in the soy. In order to evaluate the in vivo digestibility and protein quality for the soy flours, biological tests with rats were performed and from these tests, PER, NPR, NPU and digestibility were evaluated. PER (Protein Efficiency Ratio), NPR (Net Protein Ratio) and NPU (Net Protein Utilization) values were obtained below the values for casein. This result may be due to the deficiency of sulfured amino acids in soy protein. Flours without KTI showed higher values for digestibility than flours with KTI. These values were quite close to the ones for casein. This indicates that the KTI genetic elimination in soy improves the digestibility for the soy protein a lot. However, this difference did not reflect in better protein quality of this soy strain, since there was no differences in the values of PER, NPR and NPU between the strains. Amino-acidic content for the flours and PDCAAS (Protein Digestibility Corrected Amino Acid Score) values were determined showing that lysine rather than methionine is the limiting amino acid for this soy, different of that pointed by literature, possibly because the genetic enhancements. PDCAAS showed no difference between flours without KTI and the flours derived from KTI strains as it was observed from the in vivo digestibility results. It follows that the genetic withdrawal of Kunitz trypsin inhibitor significantly improves digestibility of soy protein, eliminating the need to deploy high temperatures in soy products to inactivate this inhibitor and, consequently, avoiding overheating with protein insolubilization, characteristics and loss of some aminoacids. loss of functional / Tese importada do Alexandria
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Ensaios enzimáticos de proteases de HIV-1 de subtipos brasileiros / Enzimatic assays of HIV-1 proteases from brazilian subtypesNádia Helena Martins 17 May 2007 (has links)
Mesmo com o grande número de estudos relacionados à proteases do subtipo B e de como suas mutações podem interferir na estrutura, na resistência a inibidores e na eficiência catalítica da enzima, existe ainda uma lacuna de como as mudanças polimórficas de proteases de HIV de outros subtipos de HIV-1 interferem nesses fatores. Nesse contexto insere-se esse trabalho, que utilizou proteases de HIV-1 isoladas de pacientes brasileiros HIV-1 infectados com o subtipo F, e outros dois mutantes, sendo que um do subtipo F e outro do subtipo B para ensaios frente a seis inibidores comercialmente disponíveis: amprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir e saquinavir. Nossos resultados experimentais revelam que os seis inibidores comerciais estudados são significantemente menos ativos para o subtipo F e para as mutantes quando comparados ao subtipo B. Além disso, os valores de vitalidade dessas proteases também são considerados maiores que os obtidos para a proteína selvagem do subtipo B. O acúmulo de mutações comumente detectadas e o polimorfismo natural tornam a protease selvagem do subtipo F cataliticamente suficiente para manter a viabilidade do vírus e garantir alto grau de resistência cruzada frente a todos os inibidores estudados. / Despite years of intense research around the world, HIV continues to represent considerable therapeutical challenge. In order to gain more insights into resistance of polymorphic mutations of existing HIV subtypes toward commercially available pharmaceutics, we studied inhibition of subtypes B and F HIV proteases (PRs) [native and two mutant enzymes clinically identified in Brazilian patients] by six commercial inhibitors (amprenavir, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir and saquinavir). Our results show that all these inhibitors have significantly higher Ki values for the subtype F HIV PR (Fwt) and both mutant enzymes than that for the B subtype HIV PR (Bwt). Furthermore, the biochemical fitnesses of these proteases, or their vitalities, are also considerably higher than that of Bwt. The accumulation of commonly detected resistant mutations in HIV PRs with natural polymorphisms turns Fwt sufficiently catalytically active to guarantee the virus viability and confers it a large degree of cross resistance against all studied inhibitors.
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"Prevalência e covariação de mutações relacionadas à resistência aos inibidores de protease no subtipo F do HIV-1" / Prevalence and covariation of protease inhibitor resistance related mutations of HIV type 1 subtype FMarcia Perez Resende Oliveros 23 August 2005 (has links)
Cada subtipo de HIV-1 tem um padrão mutacional próprio. Dados sobre mutações de resistência aos antiretrovirais foram obtidos com o subtipo B, primeiro em prevalência no Brasil. O segundo em algumas regiões é o subtipo F. Foram analisados padrões mutacionais em seqüências brasileiras de protease do subtipo F e levantou as seqüências deste subtipo disponíveis na base de dados de Stanford. A análise de dois grupos de seqüências (pacientes não tratados e tratados com inibidores de protease) mostrou 19 mutações associadas ao tratamento comuns ao subtipo B e 17 duplas de mutações associadas ao tratamento que diferem das descritas para o subtipo B, indicando a necessidade de estudos sobre rotas mutacionais no subtipo F. / Each HIV-1 subtype has a specific mutation pattern. Data on HIV-1 antiretroviral resistance mutations were obtained with subtype B, the first in prevalence in Brazil. The second in some regions is subtype F. Mutation patterns of Brazilian subtype F protease sequences were analyzed and performed a research of the sequences of Stanford Database. The analysis of two groups of sequences (untreated and treated patients with protease inhibitors) showed 19 treatment associated mutations also common in subtype B and 17 combinations of statistically treatment associated mutations that were quite different to those described for subtype B, indicating the need of studies to evaluate specific mutation pathways of subtype F.
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