Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-11-09T18:30:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) AVALIAÇÃO DA CONCORDÂNCIA ENTRE OS TESTES.pdf: 9729341 bytes, checksum: 5ce0a10c9bab80b9be2c1cd61a5aca56 (MD5) / Approved for entry into archive by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2015-11-23T18:20:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) AVALIAÇÃO DA CONCORDÂNCIA ENTRE OS TESTES.pdf: 9729341 bytes, checksum: 5ce0a10c9bab80b9be2c1cd61a5aca56 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T18:20:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) AVALIAÇÃO DA CONCORDÂNCIA ENTRE OS TESTES.pdf: 9729341 bytes, checksum: 5ce0a10c9bab80b9be2c1cd61a5aca56 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introdução: Uma das principais características do M. tuberculosis (Mtb) refere-se a sua capacidade de produzir infecção latente. A Organização Mundial de Saúde (OMS) estima que dois bilhões de pessoas estejam infectadas pelo bacilo da tuberculose, e que, somente 10% dessas, desenvolvem doença ativa. Até recentemente o único exame laboratorial disponível para o diagnóstico da infecção latente pelo Mtb era a prova tuberculínica (PT). Entretanto, algumas de suas limitações estimularam o desenvolvimento de ensaios de liberação de interferongama por linfócitos T em resposta ao desafio de antígenos sintéticos específicos do Mtb (ESAT-6, CFP-10 e TB7.7). O objetivo do nosso estudo foi avaliar a concordância entre a prova tuberculínica e o teste QuantiFERON®-TB Gold in tube, no diagnóstico da infecção latente pelo Mtb, em crianças e adolescentes, contatos domiciliares de casos índices com doença pulmonar bacilífera. Métodos: Estudo comparativo, conduzido na Região Metropolitana de Vitória-ES, no período de Março de 2008 a Outubro de 2013. Dados clínicos, demográficos e epidemiológicos foram coletados de todos os participantes. A infecção latente pelo Mtb foi mensurada através da PT e do QFT-GIT. Definiu-se latência através da positividade da PT (induração ≥ 10mm) e do QFT-GIT (controle negativo ≤8.0 UI/mL, Antígeno TB menos controle negativo ≥0.35 UI/ml e ≥25% do valor do controle negativo). Os voluntários da pesquisa foram avaliados pelos dois testes entre oito a dez semanas após a identificação dos respectivos casos índices. O teste Kappa foi utilizado na comparação dos resultados dos testes para avaliação da concordância entre eles. Os fatores associados com a positividade de ambos os testes na análise bivariada (p ≤0,30) foram incluídos no modelo multivariado (regressão logística), sendo calculadas as razões de chance (OR) e os IC95%. Resultados: Foram arrolados 291 participantes. A concordância global entre os resultados da PT e do QFT-GIT foi elevada (87,6%) - k 0,75 [IC 95%: 0,63-0,86]. Nos indivíduos com idade ≤ 5 anos a concordância foi ainda maior (93,65%) - κ 0,87 [IC 95%: 0,63-1,12]. Não houve associação estatisticamente significativa entre a presença de cicatriz ao BCG e a positividade dos dois testes. Houve uma correlação positiva entre o tamanho da induração da PT e probabilidade de positividade do QFT-GIT. Conclusão: Não há vantagem na utilização do QFT-GIT em relação à PT. O segundo mês após a identificação do caso índice seria o tempo recomendado para a realização dos testes em questão. / Background: One of the main characteristics of M. tuberculosis (Mtb) is its capacity to produce latent infection. The World Health Organization (WHO) estimates that 2 billion people are infected by this bacillus, only 10% of whom develop active disease. Until recently the tuberculin skin test (TST) was the only test available for the diagnosis of latent infection. However, because of its potential limitations an effort was made to develop a more accurate method to diagnose latent tuberculosis. The interferon-gamma release assays (IGRA’s) were the result. These tests measure the interferon-gamma production by T-lymphocytes in response to a challenge of three synthetic antigens, specific for Mtb (ESAT-6, CFP-10 e TB7.7). The objective of our study was to evaluate the performance of the TST and the QuantiFERON®-TB Gold assay-in-tube (QFT-GIT), for the diagnostic of latent Mtb infection in children and adolescents identified as household contacts of smear positive pulmonary Mtb index cases. Methods: This was a comparative study conducted in the Metropolitan area of Vitória, Espírito Santo, Brazil from March 2008 through October 2013. Clinical, demographic and epidemiological data were collect from all participants. We defined latency as a positive TST (induration ≥ 10mm) or a positive QFT-GIT test (Nil ≤8.0 IU/ml, TB Antigen minus Nil ≥0.35 IU/ml and ≥25% of Nil value). Both tests were performed in each volunteer between eight and ten weeks after the identification of the respective index cases. Concordance, as defined by kappa testing, was used to compare the results of the two methods of diagnosing latency. The factors associated with positivity of both tests in bivariate analysis (p ≤0.30) were included in the multivariate model (logistic regression), and the odds ratios (OR) and 95%CI were calculated. Results: 291 subjects were enrolled in the study. The global concordance between TST and QFT-GIT was high (87,6%) - k 0.75 [CI 95%: 0.63- 0.86]. However in children age ≤ 5 years the concordance was even higher (93.65%) - κ 0.87 [CI 95%: 0,63-1,12]. The presence of BCG scar was not statistically associated with tests positivity. There was a positive correlation between the size of TST induration and the probability of a positive QFT-GIT. Conclusion: There was no advantage in the use of QFT-GIT in relation to the TST. We recommend the twomonth timeframe after the identification of the index case to perform the tests in the household contacts.

Orientador: Helena Zerlotti Wolf Grotto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T22:39:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_LaudiceiaRodriguesde_M.pdf: 1702960 bytes, checksum: 3ba7c0babaf3b3aaba833310422371ed (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O papel da inflamação na fisiopatologia da anemia falciforme tem sido alvo de recentes investigações. O processo obstrutivo que ocorre na microcirculação, causado pelo acúmulo de células falcizadas, leva à lesão do endotélio, com migração e adesão de leucócitos, liberação de radicais oxigênio, liberação e ativação de citocinas inflamatórias. É reconhecida a participação de diversas citocinas na eritropoiese, estimulando ou inibindo a produção de células eritróides pela medula óssea, em especial na anemia que acompanha as doenças inflamatórias/infecciosas crônicas. É reconhecida a ação inibitória do interferon gama (IFN-?) sobre as células progenitoras da medula óssea, além de sua participação nos distúrbios do metabolismo do ferro (Fe), presentes na anemia de doença crônica. A Neopterina (NP) é um marcador associado à imunidade celular produzido pelos monócitos/macrófagos quando estimulados pelo IFN-?. Os dados sobre a participação do IFN-? no processo inflamatório que acompanha a Doença Falciforme são contraditórios e se restringem à Anemia Falciforme (Hb SS). O objetivo deste trabalho foi estudar a participação da Interleucina-3 (IL-3), do IFN -? e da NP em pacientes com Hb SS e hemoglobinopatia SC (Hb SC) na fase estável da doença, a fim de verificar a possível ação dessas citocinas e da NP sobre o metabolismo do Fe e da hematopoiese. Nossos resultados mostraram que as concentrações de IL-3 foram mais altas nos grupos SS e SC em relação ao controle, enquanto as determinações de IFN-? não mostraram diferenças entre os grupos. Pacientes SS com hemoglobina Fetal (Hb F) > 8,5% mostraram valores de IL-3 significativamente mais elevados do que aqueles com Hb F < 8,5% (p= 0,0338). Não foi observada correlação entre os parâmetros inflamatórios e do metabolismo do Fe. Uma correlação direta foi observada somente nos pacientes SS entre os níveis de IL-3 e hemoglobina (Hb) (r= 0,4633, p= 0,0457), IL-3 e Hb F (r= 0,6011, p= 0,0065). Os níveis de NP foram significativamente mais elevados nos pacientes SS e SC do que nos controles, mas não houve diferença entre os 2 grupos de pacientes. Não houve correlação entre NP e os parâmetros relacionados ao metabolismo de Fe. Esses dados sugerem que a IL-3 tem ação estimulante sobre a produção de Hb F e que pacientes com Hb SS, mesmo na fase estável da doença apresentam um certo grau de ativação do sistema monócito/macrófago, representado pelos altos níveis de NP, o que provavelmente contribui para a condição inflamatória crônica desses pacientes / Abstract: Sickle cell disease (SCD) has been recognized as a chronic inflammatory condition. Cytokines are released in response to stress or pathological situations and have influence on hematopoiesis. The aim of this study was to evaluate Interleukin-3 (IL-3), Interferon-? (IFN-?) and neopterin (NP) levels in steady state patients with sickle cell anemia (SS) (n= 38) and SC hemoglobinopathy (n= 17), in order to verify the possible action of those cytokines and NP on iron metabolism and hematopoiesis. Serum IL-3 concentration was higher in SS and SC groups than in controls, whereas IFN-? determinations were not different among groups. SS patients presenting HbF= 8.5% showed IL-3 levels significantly higher than those with HbF< 8.5% (p= 0.0167). No correlation was observed among inflammatory and iron metabolism parameters. It was observed a significant correlation between IL-3 and Hb levels (r= 0.4201, p= 0.0086) and a negative correlation between IL-3 and reticulocyte counting (r= - 0.4019, p= 0.0124) only in SS group. NP levels were significantly higher in SS group than in control (p< 0.0001), but not different between SSxSC and SCxControl. No correlation was observed between NP and iron metabolism parameters. In conclusion, it was confirmed that IL-3 stimulates hematopoiesis and that SS patients, even in steady-state, presenting macrophage/monocyte activation, represented by high levels of NP, that probably contributes to chronic inflammatory condition / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 eduardo bentes.pdf: 1682417 bytes, checksum: be32237b0a1e23a7f3225f1419caf484 (MD5) Previous issue date: 2012-05-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis complex species, which infect the exposed individuals, initiate an immune response with production of several cytokines, among them interferon-gamma (IFN-gamma), which is crucial for activation of cellular immune response against TB bacillus. This cytokine has been extensively studied as a possible biomarker for diagnosis of TB. In this work, we analyzed the levels of IFN-gamma in response to in vitro stimulation with ESAT-6, CFP10 and TB7.7, by QuantiFERON ®-TB Gold (In-tube method) (QTF-IT) in 155 participants: 47 patients confirmed pulmonary TB (patient group), 49 direct contacts (group contact), and 59 individuals without history or contact with TB (control group). The levels of IFN-gamma were different among the groups (p=0.0001); the highest level was observed in the patients group (median=1.43 IU/mL). In contacts group, 20/49 (40.8%) subjects were positive for the QTF-IT (median = 0.26 IU / mL), and among these positive contacts 14/20 (70.0%) exhibited high levels of IFN-gamma, (≥ 1.05 IU/mL). The performance testing of TB patients versus controls, resulted in 80.9% sensitivity (95% CI = 69.6% to 92.1%) and 93.2% specificity (95% CI = 86.8 % to 99.6%), but when the results of contacts and control group were combined, the specificity decreased to 77.8% (95% CI = 69.9% to 85.6%). Thus, according to our data, there is a distinctive profile of IFN-gamma, with higher levels in the patients group. The QTF-IT positive in contacts, especially those with high levels of IFN-gamma, should be monitored, especially those with high levels of IFN-gamma. This result may be a risk factor for developing TB disease. In addition, the QTF-IT, properly executed, can be useful in endemic areas for the diagnosis of latent and active TB (infection) when evaluated with other routine tests. / A Tuberculose (TB) é uma doença infecciosa causada por espécies do complexo Mycobacterium tuberculosis, que ao infectar os indivíduos expostos, iniciam uma resposta imunológica com produção de várias citocinas, dentre elas o Interferon-gama (IFN-gama), que é crucial para ativação da resposta imune celular contra o bacilo da TB. Esta citocina tem sido amplamente estudada como um possível biomarcador para auxiliar no diagnóstico da TB. Neste trabalho foram analisados as concentrações de IFN-gama em resposta a estímulos in vitro com ESAT-6, CFP10 e TB7.7, utilizando o QuantiFERON®-TB Gold (In-tube method) (QTF-IT), em 155 participantes, sendo: 47 pacientes com TB pulmonar confirmada (grupo paciente), 49 contatos de pacientes com TB pulmonar (grupo contato), e 59 indivíduos sem história e/ou contato com TB (grupo controle). As concentrações de IFN-gama foram diferentes entre os grupos avaliados (p=0,0001), sendo mais elevado nos pacientes com TB (Mediana = 1.43 UI/mL). Dos contatos diretos, 20/49 (40,8%) foram positivos para o QTF-IT (Mediana=0,26 UI/mL), e destes 14/20 (70,0%) apresentaram níveis elevados de IFN-gama, superior à 1,05 UI/mL. O desempenho do teste relacionando os pacientes de TB como os doentes e os controles como sadios, resultou em 80,9% de sensibilidade (IC 95% = 69,6% a 92,1%) e 93,2% de especificidade (IC 95% = 86,8% a 99,6%), mas quando os resultados dos contatos diretos foram adicionados aos controles, a especificidade reduziu para 77,8% (IC 95% = 69,9% a 85,6%). Concluiu-se que há um perfil diferenciado na produção de IFN-gama, com níveis mais elevados nos pacientes de TB ativa, e que os contatos positivos para o QTF-IT, principalmente, aqueles com altas concentrações de IFN-gama, devem ser monitorados, considerando que o perfil ou concentração elevado desta citocina, pode ser um fator de risco para o desenvolvimento da TB doença. Além disso, o QTF-IT, executado corretamente, pode ser útil em áreas endêmicas para auxiliar no diagnóstico da TB latente (infecção) e ativa, quando avaliados com outros exames de rotina.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-01T13:35:42Z No. of bitstreams: 1 carloseduardopelinsontoledo.pdf: 607534 bytes, checksum: 4be22c339daceeb5a28d5226bd766121 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-02T12:58:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carloseduardopelinsontoledo.pdf: 607534 bytes, checksum: 4be22c339daceeb5a28d5226bd766121 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-02T12:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carloseduardopelinsontoledo.pdf: 607534 bytes, checksum: 4be22c339daceeb5a28d5226bd766121 (MD5) Previous issue date: 2012-02-14 / O ambiente bucal é particularmente favorável à biodegradação de metais devido às suas propriedades iônicas, térmicas, microbiológicas e enzimáticas. Estudos têm demonstrado que íons metálicos podem ser liberados de matérias metálicos como resultado da corrosão. Outros apontam que o Níquel é um componente comum em muitos materiais ortodônticos e uma alergia ao Níquel é comumente observada na população. Juntamente com os testes de citotoxicidade tradicionais, o estudo da produção celular de Óxido Nítrico (NO) estimulado por determinado material é um método capaz de avaliar seu potencial citotóxico. O presente estudo teve como objetivo avaliar pelo método MTT [3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil tetrazólio brometo] a viabilidade celular de macrófagos murinos J774 na presença de 9 diferentes fios ortodônticos e o estímulo dos fios à produção de NO produzido por estas células. A avaliação das culturas celulares foi realizada em três intervalos de tempo: 24, 48 e 72 horas. A viabilidade celular em todos os grupos foi maior no intervalo de tempo final, que no intervalo de tempo inicial. Este aumento foi significativo no grupo controle. Nos grupos dos materiais, a média final da viabilidade celular no tempo de 72 horas não mostrou diferença significativa quando comparado com o grupo controle. A produção de NO em todos os grupos foi maior no intervalo de tempo final, que no intervalo de tempo inicial. Este aumento foi estatisticamente significativo no grupo controle. Nos grupos dos materiais, a média final da produção de NO apresentou diferença significativa apenas no grupo 8 (beta-Titânio), quando comparado com o grupo controle. Numa segunda etapa do estudo os macrófagos foram ativados com interferon-gama (IFN-) procurando simular uma condição comum no organismo humano no qual estas citocinas são produzidas e liberadas frente à presença de antígenos. As médias da análise da viabilidade celular dos macrófagos murinos ativados com interferon-gama nos grupos dos fios ortodônticos não apresentaram diferença estatisticamente significativa quando comparada com a média das células do grupo controle. As médias da análise da produção de óxido nítrico pelos macrófagos murinos ativados com interferon-gama nos grupos dos fios ortodônticos não apresentaram diferença estatisticamente significativa quando comparada com a média das células do grupo controle. / The oral environment is particularly favorable to metal biodegradation due to is ionic, thermal, microbiological, and enzymatic properties. Studies have shown that metal ions may be released from metallic materials as the result of corrosion. Other studies demonstrate that Nickel is a common component in many orthodontic materials and that an allergy to Nickel is commonly observed in the population. In addition to the traditional cytotoxicity tests, the study of nitric oxide cellular production stimulated by a specific material has shown to be a reliable tool for evaluating its cytotoxic potential. The present study was aimed at assessing cellular viability by MTT [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] assay in a murine macrophage cell line J774 in the presence of 9 different orthodontics wires and quantify nitric oxide production by these cells. Evaluation of cell culture was undertaken in three time intervals: 24, 48 and 72 hours. The cellular viability in all groups was higher at the final time interval than at the initial time interval. This increase was statistically significant in the control group. In the material groups, the final mean of cellular viability at 72 hours showed no statistically significant difference when compared with the control group. NO production in all groups was higher at the final time interval than at the initial time interval. This increase was statistically significant in the control group. In the material groups, the final mean of NO production at 72 hours was only significant in group 8 (beta-Titanium) when compared with the control group. In a second step of the study, macrophages were activated with gamma interferon (IFN-) in order to stimulate a common condition of the human body in which these cytokines are produced and released with the presence of antigens. The means of the analysis of cell viability of murine macrophages activated with gamma interferon in the groups of orthodontic wires did not show statistically significant difference when compared to the mean of cells in the control group. The means of the analysis of NO production by the murine macrophages activated with gamma interferon in the groups of orthodontic wires did not show statistically significant difference when compared to the mean of cells in the control group.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-22T11:45:37Z No. of bitstreams: 1 juliacristinadeandradevitral.pdf: 529680 bytes, checksum: 9fd909fe70a3ba1771ad60581b326891 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-22T17:23:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 juliacristinadeandradevitral.pdf: 529680 bytes, checksum: 9fd909fe70a3ba1771ad60581b326891 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-22T17:23:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 juliacristinadeandradevitral.pdf: 529680 bytes, checksum: 9fd909fe70a3ba1771ad60581b326891 (MD5) Previous issue date: 2008-02-19 / Estudos apontam para o fato de os bráquetes cerâmicos serem quimicamente inertes no meio bucal, enquanto os bráquetes de policarbonato podem degradar-se liberando bisfenol-A (BPA) e os bráquetes de polioximetileno, o formaldeído. Juntamente com os testes de citotoxicidade tradicionais, o estudo da produção celular de Óxido Nítrico (NO) estimulado por determinado material é um método capaz de avaliar seu potencial citotóxico. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade celular (citotoxicidade) destes três grupos de bráquetes sobre cultura celular da linhagem de macrófagos murinos J774 pelo método MTT {3,(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide} e o estímulo dos bráquetes à produção de óxido nítrico pelos macrófagos. A avaliação das culturas celulares foi realizada em três intervalos de tempo: 24, 48 e 72 horas. A viabilidade celular em todos os grupos foi maior no período final da avaliação (72 horas) em relação ao período inicial (24 horas), aumento este significativo nos grupos controle e bráquetes cerâmicos. As médias finais nos grupos de bráquetes não apresentaram diferenças significativas em relação ao controle. A produção de NO foi significativamente maior em todos os grupos no período final em relação ao período inicial. Não houve diferença significativa entre as médias finais dos grupos de bráquetes e do grupo controle, embora os bráquetes de polioximetileno tenham apresentado médias significativamente maiores nos períodos de 24 e 48 horas. Numa segunda etapa do trabalho os macrófagos foram ativados com interferon-gama (IFN-Y) procurando simular uma condição comum no organismo humano no qual estas citocinas são produzidas e liberadas frente à presença de antígenos. A viabilidade celular em todos os grupos foi significativamente maior no período final da avaliação em relação ao período inicial. As médias finais da viabilidade celular nos grupos de bráquetes não apresentaram diferenças significativas em relação ao controle. A produção de NO foi significativamente maior em todos os grupos no período final da avaliação em relação ao período 24 horas. Todavia não houve uma maior produção de óxido nítrico relacionado à presença dos bráquetes associada ao estímulo com Interferon-Y. / Studies point to the fact that ceramic brackets are chemically inert to the oral cavity, whereas polycarbonate and polyoxymethylene brackets may degradate releasing bisphenol-A and formaldehyde, respectively. In addition to the traditional cytotoxicity tests, the study of nitric oxide cellular production stimulated by a specific material has shown to be a reliable tool for evaluating its cytotoxic potential. The present study was aimed at assessing cellular viability by MTT {3,(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide} assay in a murine macrophage cell line J774 in the presence of esthetic brackets, and quantify nitric oxide production by these macrophages. Evaluation of cell culture was undertaken in three time intervals: 24, 48, and 72 hours. Cellular viability in all groups was higher at the final time interval (72 hours) in relation to the initial time (24 hours). This increase was significant in the control and ceramic bracket groups. Final means in the bracket groups did not show significant differences when compared to the control group. Nitric oxide production was significantly greater in all groups at the final time interval in relation to the initial time. There was no significant difference between the final means of the bracket groups and the control group, although polyoxymethylene brackets have shown significantly greater means at times 24 and 48 hours. In a second step of the study, macrophages were activated with gamma interferon (IFN-γ) in order to simulate a common condition of the human body in which these citocines are produced and released with the presence of antigens. Cellular viability in all groups was higher at the final time interval (72 hours) in relation to the initial time. Final means in the bracket groups did not show significant differences when compared to the control group. Nitric oxide production was significantly greater in all groups at the final time interval in relation to the initial time. However, there was not an increase of nitric oxide production in relation to the presence of brackets associated with the Interferon-Y stimulus.

A produção noturna de melatonina pela glândula pineal é fundamental no controle do sistema oscilatório endógeno de mamíferos. Sua síntese é iniciada pela ativação de receptores adrenérgicos em resposta à liberação noturna de noradrenalina (NA) por terminais simpáticos. A ativação adrenérgica induz, em roedores, a transcrição do gene e a ativação da enzima arilalquil-N-acetiltransferase (AA-NAT) que converte a serotonina em N-acetilserotonina (NAS). A NAS é então convertida em melatonina pela ação da enzima hidroxiindol-O-metiltransferase (HIOMT). Além das funções cronobiológicas, a pineal apresenta comunicação bidirecional com o sistema imunológico, descrita pelo conceito do eixo imune-pineal. Nosso grupo de pesquisa tem demonstrado que mediadores imunológicos, como o lipopolissacarídeo (LPS) de bactérias gram-negativas e o fator de necrose tumoral (TNF), inibem a síntese de melatonina pela pineal por um mecanismo dependente da ativação do fator nuclear de transcrição kappa B (NF-&kappa;B). Por outro lado, fatores que inibem esta via (glicocorticoides) aumentam a produção de melatonina pela glândula pineal. Outros mediadores imunológicos que sinalizam por vias distintas à do NF-&kappa;B também são capazes de atingir e modular a produção de melatonina. A citocina inteferon-gama (IFN-&gamma;) classicamente sinaliza pela via do STAT1 (do inglês Signal Transducer and Activator of Transcription) e é capaz de aumentar a produção de melatonina em pineais. Contudo, não existem relatos do papel desta via de sinalização sobre a síntese hormonal da glândula pineal. Sabendo-se que o IFN-&gamma; também é capaz de sinalizar pela ativação do NF-&kappa;B, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar e avaliar o papel destas duas vias de sinalização ativadas pelo IFN-&gamma; sobre as produções de NAS e melatonina, induzidas por NA, em pineais em cultura. Nossos dados mostram que o aumento da síntese de NAS e melatonina induzida pelo IFN-&gamma; está associado ao aumento da expressão dos genes Aanat e Hiomt. A incubação das glândulas com IFN-&gamma; aumenta a translocação nuclear de STAT1 e de dímeros de NF-&kappa;B ativadores da transcrição gênica. Além disso, a incubação de pineais com IFN-&gamma; aumenta a transcrição de 27 genes relacionados com a via das STATs. IFN-&gamma; tende a aumentar a ligação da STAT1 com uma região do promotor do gene Aanat e a utilização de uma droga que potencia a ativação da STAT1 também aumenta a produção de NAS e melatonina. Por fim, o bloqueio da via do NF-&kappa;B inibe o aumento na produção de NAS e melatonina e da expressão de Aanat e Hiomt induzido pelo IFN-&gamma;. Nossos dados demonstram, pela primeira vez, a importância da via da STAT1 em associação com a via NF-&kappa;B sobre a produção hormonal da glândula pineal / The nocturnal production of melatonin by the pineal gland is crucial in the control of the mammalian endogenous oscillatory system. Melatonin synthesis is initiated by the activation of adrenergic receptors in response to nocturnal release of noradrenaline (NA) by sympathetic terminals. The adrenergic activation induces, in rodents, gene transcription and activation of the arylalkyl-N-acetyltransferase enzyme (AA-NAT) that converts serotonin into N-acetilserotonin (NAS). NAS is then converted to melatonin by the action of the enzyme hydroxyindole-O-methyltransferase (HIOMT). In addition to the chronobiological functions, the pineal has a bidirectional communication with the immune system as described by the concept of the immune-pineal axis. Our research group has demonstrated that immunological mediators as the lipopolysaccharide (LPS) of gram-negative bacteria and the tumor necrosis factor (TNF) inhibit the synthesis of melatonin by the pineal in a mechanism dependent on the activation of the nuclear transcription factor kappa B (NF-&kappa;B). Moreover, factors that inhibit NF-&kappa;B pathway (glucocorticoids) increase the production of melatonin by the pineal gland. Other immunological mediators that signalize by distinct signaling pathways are also able to target and modulate the melatonin production. The cytokine interferon-gamma (IFN-&gamma;) classically signals trough STAT1 (Signal transducer and Activator of Transcription) and is able to increase the production of melatonin by the pineal. However, there are no reports of the role of STAT1 pathway on the hormonal synthesis of the pineal gland. Considering that IFN-&gamma; is also able to signalize through NF-&kappa;B, the aim of this study was to characterize and evaluate the role of these two signaling pathways activated by IFN-&gamma; on the production of NAS and melatonin induced by NA in cultured pineals. Our data show that the increase in NAS and melatonin synthesis induced by IFN-&gamma; is associated with increased expression of the genes Aanat and Hiomt. Incubation of the glands with IFN-&gamma; increases the nuclear translocation of STAT1 and of p50:RelA NF-&kappa;B dimers. In addition, pineal incubation with IFN-&gamma; increases the transcription of 27 related to STAT pathway. IFN-&gamma; tends to increase the binding of STAT1 to a promoter region and the Aanat gene and the use of a STAT1-enhancer also increased the production of NAS and melatonin. Finally, the blockade of NF-&kappa;B pathway inhibits the increase in melatonin and NAS productions and also of Aanat and Hiomt genes expression induced by IFN-&gamma;. Our data demonstrate, for the first time, the importance of the STAT1 pathway in association with NF-&kappa;B pathway on the hormonal production of the pineal gland

O objetivo central desta dissertação de mestrado foi analisar se, pela sua resposta ao interferon-g (IFNg), as células não leucocitárias contribuem ao controle dos protozoários Trypanosoma cruzi, Plasmodium chabaudi AS e Plasmodium berghei ANKA. O IFNg é uma citocina que promove a ativação de diversos tipos de leucócitos, a sua ação sobre as células mononucleares fagóciticas merece um destaque especial. Apesar de conhecermos os pormenores do papel desta citocina na ativação dos leucócitos, desconhecemos se o IFNg exerce ação ativadora sobre as células estruturais (não leucocitárias), ou seja, sobre as células não profissionais da resposta imune. A nossa hipótese de trabalho é que, no caso dos parasitas intracelulares, o IFNg poderia reforçar a ação sinalizadora e efetora das células estruturais infectadas. Por outro lado, em ambas as situações de parasitas intracelulares e extracelulares, o IFNg, ao agir sobre diversas células estruturais, poderia induzir a produção de mediadores inflamatórios (citocinas, quimiocinas, etc) que contribuiriam direta ou indiretamente à remoção/controle do parasita. A nossa abordagem tem sido o estudo da infecção por estes protozoários em quimeras de medula óssea B6/IFNgRKO, nas quais as células não leucocitárias são deficientes em receptores para IFNg e as células leucocitárias são normais. A análise por imunofluorescência de cortes histológicos mostrou uma alta expressão de IFNgR pelas células estruturais do coração dos animais B6 e quimeras controle B6/B6, mas nenhuma expressão deste receptor nos cortes histológicos correspondentes de animais IFNgRKO e quimeras experimentais B6/IFNgRKO, apesar de grande parte dos leucócitos dos animais deste último grupo ter se tornado IFNgR+. Após infecção pelo T. cruzi, o coração e músculo esquelético dos animais quiméricos B6/IFNgRKO mostraram maior carga parasitária e menor intensidade dos infiltrados 8 inflamatórios do que aqueles dos animais quiméricos B6/B6, resultados que sugerem o envolvimento das células estruturais no controle do parasita e promoção do recrutamento leucocitário. Na infecção pelo Plasmodium chabaudi AS a análise comparativa dos grupos IFNgRKO e quimera B6/IFNgRKO mostrou que no início da infecção as curvas de parasitemia destes grupos são idênticas sugerindo que nesta fase da infecção a presença do IFNgR nos leucócitos em pouco contribui na evolução da parasitemia. Por outro lado, a análise comparativa dos grupos quimera B6/IFNgRKO e quimera B6/B6 mostrou níveis mais elevados de parasitemia e maior índice de mortalidade nos animais B6/IFNgRKO, sugerindo que as células estruturais participam no controle do parasita através da sua resposta ao IFNg. Entretanto, em uma experiência preliminar de infecção pelo Plasmodium berghei ANKA não observamos grandes diferenças entre os animais dos grupos B6/IFNgRKO e B6/B6, não somente no que se refere à curva de parasitemias, como também na indução de morte precoce decorrente de malária cerebral. / The main purpose of our work was to analyze if by their response to Interferon-g (IFN-g), the non-leucocyte cells are able to control Trypanosoma cruzi, Plasmodium chabaudi AS and Plasmodium berghei ANKA protozoans. IFNg was described as a cytokine that promote activation on different types of leucocytes, its action on mononuclear phagocytic cells is important. Despite the fact that this cytokine activate leucocytes, it is unknown whether IFNg activates the structural cells (non-leucocytes), that is, the non-professional cells of the immune response. Our hypotheses suggest that in the case of intracellular parasites, IFNg could help the infected structural cells by increasing their signaling and effect actions. In addition, during the response against intracellular and extracellular parasites, IFNg could induce the production of inflammatory mediators by these cells guaranteeing direct or indirectly the parasite clearance. In the present study, we analyzed the infection of diferente protozoans on bone marrow B6/IFNgRKO chimeras, in which the non-leukocyte cells are deficient in IFNg receptor and the leukocyte cells are normal. Immunofluorescence analyses of histological sections revealed a high expression of IFNgR on the structural cells from the heart of B6 and control chimeras B6/B6 animals, but non-expression of this receptor on histological sections from IFNgRKO and experimental chimeras B6/IFNgRKO, despite the fact that a great part of leucocytes from the last group of animals express the receptor. After T. cruzi infection, the cardiac and skeletal muscle from B6/IFNgRKO chimera animals showed a huge amount of parasite and less infiltration inflammatory than B6/B6 animals, suggesting that the structural cells are involved in the parasite control and leukocyte recruitment. During Plasmodium chabaudi AS infection, comparative analyses from IFNgRKO and 10 B6/IFNgRKO groups showed that parasitemia curves at the early phase are similar, suggesting that during this phase IFNgR expression on leukocytes are not important. On the other hand, parasitemia and mortality levels on B6/IFNgRKO and B6/B6 groups were higher than those on B6/IFNgRKO animals, determining that structural cells participate during the course of infection through their response to IFNg. However, when B6/IFNgRKO and B6/B6 animals were infected with Plasmodium berghei ANKA no significantly difference was observed between these groups related to the course of parasitemia and cerebral malaria.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-27T17:22:07Z No. of bitstreams: 1 Andréa Mendes Pereira Ativação de celulas... 2006.pdf: 40276494 bytes, checksum: 9f4656b98e4c74bae9c81e7797e85988 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-27T17:22:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andréa Mendes Pereira Ativação de celulas... 2006.pdf: 40276494 bytes, checksum: 9f4656b98e4c74bae9c81e7797e85988 (MD5) Previous issue date: 2006 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Visando avaliar futuramente o potencial de citocinas na indução de resposta imune celular específica do tipo ThI quando associadas a antígeno(s) recombinante(s) de Leishmania chagasi/infantum no cão, a combinação de IL-2 e IL-12 caninas recombinantes é analisada no presente trabalho. Aqui, descrevemos a clonagem do DNA complementar (cDNA) e, pela primeira vez, a expressão de IL-2 canina recombinante biologicamente ativa em Escherichia coli e por células de mamífero. Para expressão em E. coli, utilizou-se a construção pRSET-calL- 2, anteriormente gerada por nosso grupo. Para expressão em células de mamíferos, foi realizada a clonagem do cDNA de IL-2, sintetizado por reação de transcrição reversa seguida de reação da polimerase em cadeia (RT-PCR) a partir do RNA total de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de cão estimuladas com concanavalina A (Con-A), no vetor pcDNAS.l, gerando a construção pcDNA3.1-caIL-2. O sucesso da clonagem em ambos os vetores de expressão foi confirmado a partir do sequenciamento de DNA e comparação dos resíduos de nucleotídeos com a seqüência de IL-2 canina previamente descrita por outro grupo de investigadores. A IL-2 canina recombinante (rcaIL-2) foi obtida como proteína de fiisão contendo cauda de histidina a partir da transformação de E. coli BL21(DE3)pLysS com pRSET- caIL-2, purificada por cromatografia de afinidade e renaturada por diálise. Além disso, a forma nativa de rcaIL-2 foi secretada no sobrenadante de cultura de células COS-7 transfectadas com a construção pcDNA3.1-caIL-2. A atividade proliferativa de rcaIL-2 sobre células CTLL-2 foi demonstrada em concentrações de até 220 pg/mL da citocina purificada a partir da expressão em E. coli e até a diluição de 1:256 do sobrenadante de COS-7 contendo rcaIL-2. A proteína biologicamente ativa foi capaz de manter a proliferação de CMSP de cães sadios por até 12 dias de cultivo quando as células foram tratadas com 50 ng/mL de IL-2 canina obtida de E. coli e por 10 dias com diluições de até 1:200 do sobrenadante de COS-7 contendo a citocina, na ausência de estímulo prévio ou concomitante. A proliferação foi dose-dependente, com ponto máximo ocorrendo no 8° dia de cultivo. A produção de interferon gama (IFN-y) por CMSP de cães sadios estimuladas com sobrenadante de COS-7 contendo IL-2 ou contendo IL-12 não foi significantemente maior que a produção basal. No entanto, um efeito sinérgico sobre a produção in vitro de IFN-y ocorreu quando concentrações subótimas de ambas as citocinas foram associadas. Diante dos resultados obtidos, a construção pcDNA3.1-caIL-2 e ambas as formas de IL-2 canina recombinante obtidas, assim como as condições experimentais aqui descritas, poderão ser utilizadas no futuro para o estudo do potencial de IL-2, associada ou não a IL-12, como modulador da resposta imune in vitro e in vivo de cães, durante o desenvolvimento de uma vacina ou imunoterapia para leishmaniose visceral canina. / Aiming to study in the fiiture the role of cytokines in inducing specific ThI cellular immune response when associated to Leishmania chagasi/infantum recombinant antigen(s) in dogs, the combination of recombinant canine IL-2 and IL-12 is analysed in the present study. Herein, we describe complementary DNA (cDNA) cloning and, for the first time, the expression of biologically active recombinant canine IL-2 in Escherichia coli and mammal cells. The construction pRSET-caIL-2, previously generated by our group, was used for E. coli expression. For mammalian expression, canine IL-2 cDNA was synthesized by reverse transcription followed by polymerase chain reaction (RT-PCR), using cDNA from a healthy dog’s peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulated with concanavalin A (Con-A) and cloned into pcDNA3.1, generating the construction pcDNA3.1-caIL-2. Success in canine IL-2 cDNA cloning was accessed in both expression vectors by DNA sequencing and was confirmed by comparing nucleotides residues with canine IL-2 sequence previously described by other investigators. Recombinant canine IL-2 (rcaIL-2) was expressed as His-tag fiision protein after E. coli BL21(DE3)pLysS transformation with pRSET-caIL-2, purified by affinity chromatography and renatured through dialysis. In addition, the native form was secreted in culture supematants of pcDNA3.1-caIL-2 transfected COS-7 cells. A proliferative activity was demonstrated in CTLL-2 cells when the recombinant protein was diluted at 220 pg/mL of purified cytokine from E. coli expression or when COS-7 supernatant was diluted at 1:256. The biologically active protein was able to induce proliferation of PBMC of six healthy dogs until 12 days of culture when cells were treated with 50 ng/mL of E. coli expressed-IL-2 or until 10 days when treated with 1:200 COS-7 supernatant dilution containing the cytokine, without previous or concomitant stimulus. The proliferative effect was dose-dependent and maximum at 8th day of culture. Interferon-gamma (IFN-y) production by PBMC of eight healthy dogs induced by COS-7 IL-2 or IL-12-containing supematants was not significantly higher than the baseline production. However, the association of suboptimal concentrations of both cytokines induced synergistic effect upon in vitro IFN-y production by PBMC. Based on the presented results, the construction pcDNA3.1-caIL-2 or both recombinant protein forms obtained, as well as the experimental conditions described here, can be used in the future to evaluate the potential role of IL-2, associated or not to canine IL-12, as a modulator of in vitro and in vivo immune response of dogs during the development of a vaccine or immunotherapy for canine visceral leishmaniasis.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 bruno_nunes_ioc_mest_2014.pdf: 816582 bytes, checksum: df0c77d440b819eb23207534911162dd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, um parasita intracelular obrigatório com tropismo para Macrófagos na pele e células de Schwann nos nervos periféricos. As manifestações clínicas da hanseníase correspondem ao tipo de resposta imune do hospedeiro ao patógeno para conferir suscetibilidade. Muitas doenças têm sido relacionadas com o sistema HLA devido à sua importância na resposta imune adaptativa. Diversos estudos genéticos, em diferentes populações, têm sido realizados com o propósito de associar o HLA-DRB1 com a ocorrência da hanseníase per se e suas formas clínicas. Porém, os trabalhos realizados com HLA classe I são limitados. O presente estudo teve como objetivo analisar possíveis associações entre os alelos e haplótipos HLA classe I, além do polimorfismo TNF -308G>A e a hanseníase per se. Dessa forma, um estudo de caso-controle foi realizado em uma população de 778 pacientes não relacionados, portadores de hanseníase e 661 controles residentes na mesma área geográfica do Rio de Janeiro. Inicialmente, foram identificadas as frequências alélicas e haplotípicas de HLA-A, HLA-B e HLA-C, assim como o polimorfismo TNF -308G>A, que foram comparadas entre os casos e controles. Posteriormente, foram identificadas as frequências dos haplótipos estendidos (HLA-A-B-C-DRB1-TNF -308G>A) e comparadas entre as duas populações do estudo Os resultados demonstraram uma associação entre os alelos HLA-A* 11 e HLA-A* 30 com a susceptibilidade à hanseníase (p= 0,009 e p= 0,017, respectivamente), enquanto os alelos HLA-A* 01, HLA-B27, HLA-B*50 e HLA-C*05 sugeriram uma associação com a resistência à doença (p= 0,029, p= 0,005, p= 0,002 e p= 0,039, respectivamente). As análises dos haplótipos revelaram associação significativa de HLA-A*11-B*15 (OR=6,15) e HLA-A*30-B*42-C*17 (OR=4,16) com a susceptibilidade à hanseníase, assim como o HLA-A*11-B*35-C*04 (OR=2,37), mas com perda de significância do teste quando corrigido para as covariáveis sexo e etnia (p=0,117). Por outro lado, os haplótipos HLA-A*01-C*06 (OR=0,34), HLA-B*27-C*02 (OR=0,10) e HLA-B*50-C*06 (OR=0,18) demonstraram associações significativas com a resistência à doença. Os resultados também mostraram que o genótipo GA do TNF -308 esteve associado com a proteção à hanseníase (OR=0,74), porém com o nível de significância considerado \201Cborderline\201D quando corigido (p=0.06). Em relação ao haplótipo estendido, o estudo indicou associação entre HLA-A*02-B*07- C*07-DRB1*15-TNF -308G (OR=4,66) e HLA-A*03-B*07-C*07-DRB1*15-TNF -308G (OR=4.72) e a suscetibilidade à hanseníase, porém com perda de nível de significância quando corrigido para as covariáveis sexo e etnia (p=0,077 e p=0,101, respectivamente). Muitas dessas associações já foram encontradas em outras populações, confirmando a importância desse sistema no desenvolvimento da doença / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae that is an obligate intracellular parasite with tropism for Macrophages in the skin and Schwann cells in the peripheral nervous system. Clinical manifestations of Leprosy correlate with the type of immune response from the susceptible host to the pathogen. The HLA system has been related to several diseases, due to its important role in the adaptive immune re sponse. Several genetic studies of different populations have been conducted to correlate suscep tibility or resistance of the HLA-DRB1to leprosy per se and its clinical forms, whereas HLA class I studie s are limited. This present study aimed to analyze the possible association between a lleles and haplotypes HLA class I and the TNF -308G>A polymorphism and leprosy per se. Therefore, we used a population-based case control study with 778 unrelated patients with leprosy and 661 controls from de same geographic area of Rio de Janeiro. First, HLA-A, HLA-B and HLA-C were evaluated, resulting in the allele and haplotype frequencies that were compared between ca ses and controls, as well as the TNF - 308G>A polymorphisms. Lastly, the extensive haploty pe frequencies (HLA-A-B-C-DRB1- TNF - 308G>A) were performed and compared between both po pulations. Our results suggested association of the HLA-A*11 and A*30 alleles and le prosy susceptibility (p=0.009 and p=0.017, respectively), whereas HLA-A*01; HLA-B*27; HLA-B*50 and HLA-C*05 appeared associated with resistance to leprosy (p=0.029; p=0.005; p=0.0 02 and p=0.039, respectively). Analyses of the haplotypes demonstrated significant association of HLA-A*30-B*15 (OR=6.15) and A*30-B*42- C*17 (OR=4.15) with susceptibility of leprosy, as w ell as the HLA-A*11-B*35-C*04 (OR=2.37), but did not significant level when adjusted for the covariates gender and ethnicity (p=0.117). In opposite, HLA-A*01-C*06 (OR=0.34), B*27-C*02 (OR=0. 10) and B*50-C*06 (OR=0.17) haplotypes demonstrated significant association wit h resistance to leprosy. Results also showed that the GA genotype of TNF -308 was associated to prote ction to leprosy (OR=0.74), but with the significance level considered “borderline” when adj usted (p=0.06). For the extensive haplotype, the study indicated association between HLA-A*02-B*07-C *07-DRB1*15- TNF -308G (OR=4.66) and HLA-A*03-B*07-C*07-DRB1*15- TNF -308G (OR=4.72) and susceptibility to leprosy, but with lost significance level when adjusted for the covar iates gender and ethnicity (p=0.077 and p=0.101, respectively). Many of these associations have alre ady been found in other populations with leprosy, which confirmed the importance of this sys tem in the disease development.

Made available in DSpace on 2016-05-11T12:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 leonardo_ruivo_ioc_mest_2016.pdf: 2337878 bytes, checksum: 69b7ee821ee7eed53dca00b82150fc69 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Alterações no perfil de glicosilação de proteínas, células e tecidos têm sido utilizadas como marcadores biológicos para processos fisiológicos e patológicos. Glicoconjugados contendo o ácido siálico (Neu5Ac) estão envolvidas em interações celulares e parasito-hospedeiro, tráfego de linfócitos e regulação do sistema imune. O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas (DC), expressa em sua superfície e libera no plasma do hospedeiro, uma enzima restrita ao gênero Trypanosoma, a trans-sialidase (TS). Esta é capaz de transferir Neu5Ac de moléculas doadoras e realocá-las em moléculas na superfície do parasito ou sialilar glicoproteínas de células do hospedeiro. A molécula CD43 é um importante aceptor de Neu5Ac em células T e um provável sítio de ação da TS. Na infecção experimental pelo T. cruzi, as células T CD8+ apresentam, majoritariamente, perfis segregados (i) perforina+ (Pfn+), com ação citotóxica, ou (ii) interferon-gama+ (IFN\03B3+), com perfil inflamatório. Estas células estão diferencialmente compartimentalizadas e atuam de forma antagônica, enquanto as Pfn+ se acumulam na inflamação cardíaca e contribuem para a injúria tecidual, as IFN\03B3+ estão majoritariamente na periferia (sangue e baço) e atuam de forma benéfica. Neste trabalho, propomos que na infecção pelo T. cruzi há alterações de glicofenótipos em proteínas séricas e subpopulações de linfócitos T CD8+ funcionalmente segregadas. Camundongos C57BL/6 foram infectados pela cepa Colombiana do T. cruzi e analisados clinicamente. O glicofenótipo de proteínas séricas foi analisado por espectrometria de massas (MALDI-TOF) e o glicofenótipo de tecido cardíaco e de células do baço foi analisado usando lectinas por histoquímica e citometria de fluxo, respectivamente Não detectamos modificação no perfil glicosídico em proteínas séricas em animais infectados. Observamos, no tecido cardíaco, reduzida marcação para a lectina Peanut agglutinin (PNA), aumento para Sambucus nigra (SNA) e não alteração para Maackia amurensis (MAL) em células musculares e inflamatórias. Notamos nas fases aguda (42 dpi) e crônica (120 dpi) aumento na frequência de células PNA+ nas células T CD8+CD43+ e CD4+CD43+, redução no percentual de células SNA+ nas células T CD8+ e CD4+ e diminuição na proporção de células MAL+ nas células T CD4+ e CD8+CD4+. Células T CD8+ totais ou CD8+PNA+ apresentaram perfis semelhantes de ativação (CD44+CD62L-), migração (LFA-1+CCR5+ ou LFA-1+CCR1+) e funcionalidade (Pfn+, Pfn+IFN\03B3+ ou IFN\03B3+). Em 120 dpi, detectou-se enriquecimento de células CD8+PNA+IFN\03B3+ no baço. Assim, durante a DC experimental, células T CD8+PNA+ apresentam-se ativadas e com potencial de migrar e exercer atividade inflamatória (IFN\03B3+), contudo estas não foram detectadas em tecido cardíaco. Resta-nos esclarecer se estas células não migram para este tecido, acumulando-se na periferia, ou se ao entrarem no tecido cardíaco têm seu glicofenótipo alterado ou morrem de modo seletivo. Embora nossos achados não permitam a identificação de biomarcadores de natureza glicosídica de progressão e/ou gravidade da DC, abrem perspectivas para explorar outros modelos experimentais de infecção e para estudos sobre a compartimentalização de células fenotipicamente distintas e funcionalmente relacionadas à proteção contra a injúria cardíaca na infecção pelo T. cruzi / Changes in glycosylation profile of proteins, cells and tissues have been used as biological markers of physiological and pathological processes. Glicoconjugates containing sialic acid (Neu5Ac) are involved in cell and host-parasite interactions, lymphocyte traffic and regulation of the immune system. Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease (CD), expresses on the surface and releases in the host plasma, a restricted enzyme to the genus Trypanosoma, the trans-sialidase (TS). This enzyme transfers Neu5Ac from donor molecules and relocates them on parasite surface molecules or sialylates glycoproteins of the host cells. The CD43 molecule is a major acceptor of Neu5Ac on T cells and a target site for TS. In experimental T. cruzi infection, CD8+ T cells have, mostly, segregated profiles (i) perforin+ (Pfn+) with cytotoxic action, or (ii) interferon-gamma+ (IFN\03B3+), with inflammatory profile. These cells are differentially compartmentalized and play antagonistic roles, while the Pfn+ cells accumulate in cardiac inflammation and contribute to tissue injury, the IFN\03B3+ are, mostly, at the periphery (blood and spleen) and play a beneficial role. In the present study, we propose that in T. cruzi infection there are glycophenotype changes in serum proteins and subpopulations of functionally segregated CD8+ T lymphocytes. C57BL/6 mice were infected with the Colombian strain of T. cruzi and analyzed for clinical changes. The glycophenotype of serum proteins was analyzed by mass spectrometry (MALDI-TOF) and glycophenotypes of the cardiac tissue and splenic cells were analyzed using a lectin-based immunohistochemistry and flow cytometry, respectively In infected mice, we did not detect changes in glycoside profile of serum proteins. In the cardiac tissue, we observed reduced staining for the lectin Peanut agglutinin (PNA), increased for Sambucus nigra (SNA) and no alterations for Maackia amurensis (MAL) in muscle and inflammatory cells. In the acute (42 dpi) and chronic (120 dpi) phases, we noticed increased frequency of PNA+ cells among CD8+CD43+ and CD4+CD43+ T cells, reduced percentage of SNA+ cells among CD8+ and CD4+ T cells and decreased proportion of MAL+ cells among CD4+ and CD8+CD4+ T cells. Total and PNA+ CD8+ T cells showed similar profiles of activation (CD44+CD62L-), migration (LFA-1+CCR5+ cells or LFA-1+CCR1+) and functionality (Pfn+, Pfn+IFN\03B3+ or IFN\03B3+). At 120 dpi, there is an enrichment in IFN\03B3+ cells among splenic CD8+PNA+. Thus, in experimental CD PNA+ CD8+T cells are activated and potentially able to migrate towards heart tissue and show inflammatory profile (IFN\03B3+); however, PNA+ cells were not detected in this tissue. It remains to be clarified whether these cells do not migrate to this tissue, accumulating in peripheral tissues, or whether they enter the cardiac tissue but have their glycophenotype modified or selectively dye. Although, our finds do not allow identifying glycosidic biomarkers of progression and/or severity of CD, they open new pathways to be explored using other experimental models of infection and studying the compartmentalizationof phenotypically and functionally distinct cells associated with detrimental or protective role in heart injury in T. cruzi infection