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Estrutura oligomérica e dinâmica de Major Royal Jelly Protein 1 (MRJP1)/apisimina analisadas por espectrometria de massas e técnicas complementares

Mandacaru, Samuel Coelho 01 March 2017 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-06-23T16:23:53Z No. of bitstreams: 1 2017_SamuelCoelhoMandacaru.pdf: 9292757 bytes, checksum: 1a53ba8cc877a93480f8a2d77b63ff6d (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-07-27T20:55:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_SamuelCoelhoMandacaru.pdf: 9292757 bytes, checksum: 1a53ba8cc877a93480f8a2d77b63ff6d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-27T20:55:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_SamuelCoelhoMandacaru.pdf: 9292757 bytes, checksum: 1a53ba8cc877a93480f8a2d77b63ff6d (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / Geleia Real (GR) dispara o desenvolvimento de larvas de abelhas fêmeas até rainhas. Este efeito tem sido atribuído à presença de Major Royal Jelly Protein 1 (MRJP1) presente na geleia real. MRJP1 isolada de GR está intimamente associada a apisimina, um peptídeo helicoidal com 54 resíduos de aminoácidos que promove uma associação não covalente de MRJP1 em oligômeros de diferentes tamanhos. Não existem dados de alta resolução disponíveis para essas estruturas e até mesmo sua estequiometria ainda não é clara. Nesta tese, examinamos a relação MRJP1/apisimina usando um arsenal de técnicas biofísicas. Também, investigamos o comportamento de MRJP1/apisimina em amostras após remoção de seus carboidratos e de apisimina associada. Nossos dados de espectrometria de massas (MS) nativos demonstraram que os complexos existem predominantemente numa estequiometria de MRJP14/apisimina4. Blue native PAGE demonstrou a prevalência de estruturas tetraméricas e monoméricas. Microscopia de força atômica demonstrou a presença de populações que puderam ser agrupadas em dois grandes grupos. Troca do hidrogênio por deutério (HDX) seguida de análises por espectrometria de massas revelaram que MRJP1, nesses complexos, é desordenada na extensão dos resíduos 20-265. Estruturas secundárias (provavelmente folhas beta antiparalelas) estáveis são encontradas marginalmente ao redor dos resíduos 266-432. Estas são regiões fracamente estruturadas com conformações que variam entre estruturada e desestruturada, gerando uma distribuição isotópica bimodal (EX1). Nós propomos que os complexos nativos (tetrâmeros) têm uma estrutura quaternária formada por “dímero de dímero”, onde as cadeias de MRJP1 são ligadas por apisimina. Especificamente, nossos dados sugerem que apisimina age como um ligante que forma contatos hidrofóbicos envolvendo o segmento 316VLFFGLV322 de MRJP1. Esta proteína tem dois sítios de glicosilação localizados nos resíduos de aminoácidos 144 e 177. Por 2DE podemos ver 9 proteoformas de MRJP1, mesmo após a remoção dos carboidratos. Deglicosilação produz grandes agregados solúveis, enfatizando o papel dos glicanos como inibidores de agregação. Amostras com apisimina parcialmente removida formam complexos diméricos com estequiometria (MRJP12/apisimina1). As informações produzidas neste trabalho podem contribuir para uma melhor compreensão da relação estrutura/função de MRJP1, que possui papéis únicos na biologia da abelha. / Royal jelly (RJ) triggers the development of female honeybee larvae into queens. This effect has been attributed to the presence of major royal jelly protein 1 (MRJP1) in RJ. MRJP1 isolated from royal jelly is tightly associated with apisimin, a 54-residue -helical peptide that promotes the noncovalent assembly of MRJP1 into multimers. No high resolution structural data are available for these complexes, and their binding stoichiometry remains uncertain. We examined MRJP1/apisimin using a range of biophysical techniques. In addition, we investigated the behavior of deglycosylated samples, as well as samples with reduced apisimin content. Our mass spectrometry (MS) data demonstrated that the native complexes predominantly exist in a (MRJP14 apisimin4) stoichiometry. Blue native and showed the prevalence of tetrameric and monomeric structures in native conditions. Atomic force microscopy also showed two populations. Hydrogen/deuterium exchange (HDX) MS revealed that MRJP1 within these complexes is extensively disordered in the range of the residues 20-265. Marginally stable secondary structure (likely antiparallel -sheet) exists around residues 266-432. These weakly structured regions interchange with conformations that are extensively unfolded, giving rise to bimodal (EX1) isotope distributions. We propose that the native complexes have a “dimer of dimers” quaternary structure in which MRJP1 chains are bridged by apisimin. Specifically, our data suggest that apisimin acts as a linker that forms hydrophobic contacts involving the MRJP1 segment 316VLFFGLV322. MRJP1 has 2 glycosites located at amino acids 144 and 177. By using 2-DE, we observed 9 MRJP1 proteoforms, even after carbohydrate removal. Deglycosylation produces large soluble aggregates, highlighting the role of glycans as aggregation inhibitors. Samples with reduced apisimin content form dimeric complexes with a (MRJP12 apisimin1) stoichiometry. Therefore, the information uncovered in this work should help pave the way towards a better understanding of the structure/function relationship for MRJP1, which possesses unique roles in the honey bee biology.
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Ctenóforos da costa brasileira: considerações taxonômicas e biológicas / On the systematics and biology of the ctenophores from Brazilian coast

Oliveira, Otto Muller Patrão de 23 August 2007 (has links)
O filo Ctenophora tem sido negligenciado em estudos faunísticos e ecológicos no Brasil. São escassos os registros de espécies e pouco se sabe sobre a distribuição e abundância destes animais em águas brasileiras. Muito dessa falta de informações sobre o grupo se deve às dificuldades em se coletar e preservar espécimes. O presente estudo consistiu em um esforço no sentido de se conhecer um pouco mais sobre os ctenóforos, nos âmbitos faunístico, taxonômico e ecológico. A tese foi dividida em seis capítulos: o primeiro faz uma introdução ao estudo dos Ctenophora; o segundo traz descrições das sete espécies que ocorrem no Canal de São Sebastião; o terceiro traz uma chave de identificação para as treze espécies registradas para a costa brasileira, incluindo um glossário de termos específicos; o quarto aborda o problema taxonômico relativo ao ctenóforo Mnemiopsis leidyi, apresentando uma solução para tal; o quinto contempla a biologia populacional de M. leidyi na costa brasileira, a questão do impacto predatório da espécie em diversas regiões do mundo e sua recente introdução nos mares do Norte e Báltico; o último apresenta considerações gerais sobre os resultados dos capítulos anteriores. Desta forma, procurei abordar diversos aspectos da taxonomia e biologia dos ctenóforos presentes na costa brasileira e espero, assim, ter conseguido efetuar algum avanço no conhecimento deste grupo, ainda muito carente de estudos no Brasil e no mundo. / The phylum Ctenophora is pour studied in Brazil. Species records for the Brazilian coast are scarce in the literature. The distribution patterns and abundance of ctenophores in the region are almost unknown. The scarcity of data aims mostly to the difficulties in collecting and preserving specimens. This study consisted in an effort to increase knowledge on the faunistics, taxonomy and ecology of the ctenophores from Brazilian waters. Dissertation was divided in six chapters. The first on introduces the Ctenophora study. The second presents description of the seven species found in the São Sebastião Channel. The third chapter is an identification key to the species reported for the Brazilian coast, with a glossary on specific terms. The fourth regards the taxonomical problem of Mnemiopsis leidyi and suggests a solution for it. The fifth presents the population biology of M. leidyi from the Brazilian coast, the predatory impact of the species in several areas of the world and its recent introduction in the North and Baltic seas. The last chapter summarizes the final conclusions of the previous chapters. Thus, in hope of fulfilling a gap on these animals knowledge, I tried to contemplate several aspects of taxonomy and biology of the ctenophore species from the Brazilian coast.
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Avaliação de efeitos neuroprotetores e comportamentais do tratamento com geleia real em ratos Wistar submetidos à administração intracerebroventicular de estreptozotocina, um modelo da doença de Alzheimer esporádica / Not informed by the author

Silva, Tiago Guardia de Souza e 18 May 2017 (has links)
A doença de Alzheimer (AD) é uma desordem neurodegenerativa caracterizada pelo declínio progressivo da função cognitiva. Esta é a maior causa de demência, sendo que a grande maioria dos casos da AD é do tipo esporádica (SAD), a qual tem como principal fator de risco o envelhecimento. A injeção intracerebroventricular de estreptozotocina (icv-STZ) tem sido utilizada como modelo experimental da SAD em roedores e representa uma promissora ferramenta para análises etiopatogênicas e avaliação de novas propostas terapêuticas para a AD. O modelo icv-STZ mostra muitos aspectos das anormalidades da SAD, produzindo decréscimo no metabolismo cerebral de glicose e energia, prejuízo cognitivo, estresse oxidativo, astrogliose, perda neuronal e angiopatia amiloide. A geleia real (GR), substância produzida pelas abelhas operárias da espécie Apis mellifera, vem sendo popularmente utilizada há mais de 30 anos em áreas relacionadas à alimentação saudável e medicina natural. Pesquisas apontam que a GR possui uma série de atividades farmacológicas, incluindo ação neuroprotetora, antioxidante, anti-inflamatória e melhora da função cognitiva. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do tratamento oral prolongado com geleia real em ratos Wistar submetidos ao modelo icv-STZ sobre o aprendizado e memória, e na neuroproteção, esta avaliada pela neurogênese, neurodegeneração e estresse oxidativo. A injeção icv-STZ utilizada neste trabalho induziu efeitos deletérios no hipocampo de ratos, sendo estes representados por déficit cognitivo avaliado no labirinto aquático de Morris, e desenvolveu acentuada neurodegeneração, além da redução da neurogênese e aumento do estresse oxidativo. Por outro lado, a administração oral prolongada da GR foi capaz de induzir efeitos benéficos em animais lesionados pela injeção icv-STZ, ampliando o tempo de retenção da memória espacial operacional dos animais, reduzindo a neurodegeneração, aumentando a proliferação de novos neurônios e reduzindo o nível de estresse oxidativo na região do giro denteado do hipocampo. Assim, a Geleia Real mostrou efeitos benéficos em funções cognitivas e uma ação neuroprotetora no modelo experimental de AD esporádica / Alzheimer\'s disease (AD) is a neurodegenerative disorder characterized by progressive decline in cognitive function. This is the major cause of dementia and the sporadic AD (SAD) represents the majority of cases which aging is the main risk factor. Intracerebroventricular injection of Streptozotocin (icv-STZ) has been used as an experimental model of SAD in rodents and represents a promising tool for etiopathogenic analysis and evaluation of new therapeutic proposals for AD. The icv-STZ model shows many aspects of SAD abnormalities, resulting in decreased brain glucose and energy metabolism, cognitive impairment, oxidative stress, astrogliosis, neuronal loss, and amyloid angiopathy. Royal jelly (RJ), a substance produced by worker honeybees of the Apis mellifera species, has been popularly used for more than 30 years in areas related to healthy eating and natural medicine. Researches indicate that RJ has a series of pharmacological activities, including neuroprotective, antioxidant, anti-inflammatory action and improvement of cognitive function. The objective of this study was to investigate the effects of long-term oral treatment with royal jelly in Wistar rats submitted to the icv-STZ on working memory version of the Morris\' water maze task and neuroprotection, evaluated by neurogenesis, neurodegeneration and oxidative stress. In this work, the icv-STZ injection induced deleterious effects in the hippocampus, which were represented by cognitive impairments, and developed marked neurodegeneration, besides the reduction of neurogenesis and increased oxidative stress. On the other hand, RJ long-term oral administration was able to induce beneficial effects in animals lesioned by icv-STZ injection, increasing the retention time on working spatial memory, reducing neurodegeneration and oxidative stress level and increasing the proliferation of new neurons in the hippocampus. Thus, Royal Jelly showed beneficial effects on cognitive functions and a neuroprotective action in the STZ experimental model of sporadic AD
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Desenvolvimento de uma bala adicionada de ingredientes funcionais e sialogogos

Dalmagro, Maristela Fátima January 2014 (has links)
Submitted by William Justo Figueiro (williamjf) on 2015-06-17T20:39:09Z No. of bitstreams: 1 28.pdf: 565889 bytes, checksum: 692a178a5e90d0450796ed3ddc637d61 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-17T20:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 28.pdf: 565889 bytes, checksum: 692a178a5e90d0450796ed3ddc637d61 (MD5) Previous issue date: 2014 / Nenhuma / A xerostomia, conhecida como boca seca, pode ser uma consequência ou não do declínio ou interrupção da função das glândulas salivares com redução do fluxo salivar. A xerostomia possui variada etiologia e múltiplas consequências podendo comprometer o estado nutricional e a saúde do indivíduo e, poucas são as opções hoje existentes no mercado para amenizar seus sintomas. A proposta deste estudo foi desenvolver uma bala de goma mastigável acrescida de substâncias com potencial sialogogo em quantidades permitidas pela Legislação Brasileira. Foram desenvolvidas três balas nos sabores tangerina, morango e menta, as quais foram submetidas a análises microbiológicas, físico-químicas e sensoriais. Os resultados da análise sensorial foram obtidos através da aplicação do Teste de Aceitação com escala hedônica de nove pontos, variando de desgostei muitíssimo até gostei muitíssimo, cujos atributos considerados foram aparência, sabor, textura e aroma. Os resultados mostraram por meio da análise microbiológica que as balas estavam aptas para o consumo. Quanto às análises físico-químicas, a bala em estudo apresentou 308 kcal/100g sendo 75,90 % provenientes de carboidratos, 23,69 % provenientes de proteínas e 0,41 % provenientes de lipídeos. Com relação à análise sensorial, não houve diferença quanto aos atributos aparência e textura. Quanto ao atributo aroma, a bala de sabor morango diferiu estatisticamente entre as demais balas e em relação ao atributo sabor todas as balas foram diferentes, sendo a de sabor morango a de melhor aceitação pelo painel. O desenvolvimento de uma bala como um produto inovador que atenda às necessidades de pacientes com xerostomia pode ser uma alternativa na contribuição da melhoria na qualidade de vida, pois além do potencial sialogogo, a bala pode ser saborosa e um interessante veículo de nutrientes essenciais à saúde humana. / Xerostomia, known as dry mouth, may be a consequence, or not, of the decline or interruption of salivary gland function with reduced salivary flow. Xerostomia has a varied etiology and multiple consequences which may compromise the nutritional status and health of the individual, and there are few options in the market to minimize its symptoms. The purpose of this study was the development of a jelly candy with addition of sialogogue substances with amounts in accordance to the Brazilian law. Three jelly candies were developed in tangerine, strawberry and mint flavors, and they were submitted to physicochemical, microbiological and sensory analysis. The results of sensory analysis were obtained by applying the Acceptance Test with a nine-point hedonic scale ranging from dislike extremely to like extremely, whose considered attributes were appearance, flavor, texture and aroma. The microbiological analysis results showed the jelly candies were suitable for the consumption. Regarding the physicochemical analysis, the jelly candies presented 308 kcal/100g, being 75.90% from carbohydrates, 23.69% from proteins and 0.41% from lipids. In the sensory analysis, there was no difference in the appearance and texture attributes. As to aroma attribute, the strawberry jelly candy differed from the others and as flavor attribute, all of them were different, being the strawberry jelly candy the best accepted. The development of a jelly candy as an innovative product that answers the needs of patients with xerostomia may be an alternative to improve the quality of life, because besides the sialogogue effect, the jelly candy can be a tasty vehicle for essential nutrients to the human health.
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Isolamento, cultivo, caracterização e criopreservação de células tronco mesenquimais derivadas de membrana amniótica, geléia de Wharton e sangue do cordão umbilical de fetos bovinos /

Campos, Loreta Lemes. January 2014 (has links)
Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Coorientador: Bruna De Vita / Banca: Leandro Maia / Banca: Cláudia Barbosa Fernandes / Resumo: As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação, o que as tornam muito atrativas para a terapia celular, tanto na medicina humana como na medicina veterinária . Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. Atualmente há uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (CU) e sangue do cordão umbilical (SCU), podendo ser obtidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA, CU e SCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e em abatedouro. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e CU no momento do parto (n=6) e de MA e CU no terço inicial de gestação (n=6), bem como de SCU no terço médio de gestação em abatedouro (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e criopreservação. Além disso, foram criopreservadas e analisadas por citometria de fluxo para observação da viabilidade celular. Todas as amostras dos diferentes períodos gestacionais demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para CD34 e baixa expressão de MHC II. Apresentaram também capacidade de diferenciação in vitro nas três linhagens mesodermais e quando analisadas ... / Abstract: Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell type, in both human and veterinary field, is the mesenchymal stem cells (MSC). Nowadays, there is a great tendency to use stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM), extravascular matrix of umbilical cord (EMUC) and umbilical cord blood (UCB), which can be obtained non-invasively at delivery time. Thus, the aim of this study was to isolate, characterize and differentiate. MSC derived from bovine fetal annexes cow dairy neonates after assisted delivery and of fetus obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0,1% collagenase solution. Six samples of AM and EMUC at delivery time, six samples of AM and EMUC at first third of pregnancy and six samples of UCB at secondary third of pregnancy were subjected to morphology evaluation, immunocytochemistry, flow cytometry and in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation. Moreover, sample were cryopresrved and evaluated for viability by flow citometri. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, lacked CD 34 expression and showed low expression of MHC II. They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80-90% viability after cryopreservation. According to the results, AM, EMUC and UCB, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, are a painless and non-invasive source of MSC and can be used for stem cell bank creation / Mestre
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Small-Scale Exertion in Sports Video Games

2015 April 1900 (has links)
Sports video games should be inherently competitive, but they fall short in providing competition between player skills. The translation of real-world physical activities to a game controller and the emphasis on statistical simulations in traditional sports video games leads to a limited opportunity for expertise development, individual differentiation, and fatigue. These are three very important aspects of real-world sports that are lacking in sports video games. One possible solution to these difficulties is to use small-scale exertion. This method requires the design of an input mechanic that requires only the use of hands and fingers (or feet). We created two small-scale exertion sports video games (Track and Field Racing and Jelly Polo) and ran four studies to compare our small-scale exertion games to traditional rate-based sports video games. Qualitative and quantitative results suggest that using small-scale exertion increases the amount of expertise development, individual differentiation, and fatigue in sports video games. Results also suggest small-scale exertion controls are more engaging than traditional rate-based controls. By using small-scale exertion to add physicality into sports video games, we are able to increase richness, competitiveness, and realism in order to create a game which is competitive, in terms of player skill, and sport-like.
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Xenotransplantation of Human Umbilical Cord Perivascular Cells in a Femoral Defect

Matta, Rano 15 February 2010 (has links)
This work examines the osteogenic potential and immune-privileged properties of human umbilical cord perivascular cells (HUCPVCs) in normal Wistar rats and athymic rnu/rnu rats for up to 60 days. HUCPVCs demonstrated a mesenchymal stromal cell phenotype, assayed through flow cytometry, and RT-PCR analysis detected their expression of osteogenic genes. A bone tissue engineering construct was developed through centrifugal seeding of HUCPVCs onto calcium phosphate-coated PLGA scaffolds. These cell-scaffold constructs were transplanted into bilateral femoral defects. HUCPVCs did not induce any systemic biological response in normal rats; however, they did not engraft and impaired bone healing up to 60 days. When transplanted into athymic rats, HUCPVCs were detected up to 30 days in the femoral defects, improved bone regeneration at 15 and 30 days, as measured by micro computed tomography, and expressed osteogenic proteins. These findings demonstrate that HUCPVCs are suitable for bone tissue engineering studies in larger animals.
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Xenotransplantation of Human Umbilical Cord Perivascular Cells in a Femoral Defect

Matta, Rano 15 February 2010 (has links)
This work examines the osteogenic potential and immune-privileged properties of human umbilical cord perivascular cells (HUCPVCs) in normal Wistar rats and athymic rnu/rnu rats for up to 60 days. HUCPVCs demonstrated a mesenchymal stromal cell phenotype, assayed through flow cytometry, and RT-PCR analysis detected their expression of osteogenic genes. A bone tissue engineering construct was developed through centrifugal seeding of HUCPVCs onto calcium phosphate-coated PLGA scaffolds. These cell-scaffold constructs were transplanted into bilateral femoral defects. HUCPVCs did not induce any systemic biological response in normal rats; however, they did not engraft and impaired bone healing up to 60 days. When transplanted into athymic rats, HUCPVCs were detected up to 30 days in the femoral defects, improved bone regeneration at 15 and 30 days, as measured by micro computed tomography, and expressed osteogenic proteins. These findings demonstrate that HUCPVCs are suitable for bone tissue engineering studies in larger animals.
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Isolamento, cultivo, caracterização e criopreservação de células tronco mesenquimais derivadas de membrana amniótica, geléia de Wharton e sangue do cordão umbilical de fetos bovinos

Campos, Loreta Lemes [UNESP] 10 November 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:21Z : No. of bitstreams: 1 000831319.pdf: 1267209 bytes, checksum: c23ca8ee7c298aed36bdf625fb1e71a9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação, o que as tornam muito atrativas para a terapia celular, tanto na medicina humana como na medicina veterinária . Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. Atualmente há uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (CU) e sangue do cordão umbilical (SCU), podendo ser obtidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA, CU e SCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e em abatedouro. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e CU no momento do parto (n=6) e de MA e CU no terço inicial de gestação (n=6), bem como de SCU no terço médio de gestação em abatedouro (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e criopreservação. Além disso, foram criopreservadas e analisadas por citometria de fluxo para observação da viabilidade celular. Todas as amostras dos diferentes períodos gestacionais demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para CD34 e baixa expressão de MHC II. Apresentaram também capacidade de diferenciação in vitro nas três linhagens mesodermais e quando analisadas ... / Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell type, in both human and veterinary field, is the mesenchymal stem cells (MSC). Nowadays, there is a great tendency to use stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM), extravascular matrix of umbilical cord (EMUC) and umbilical cord blood (UCB), which can be obtained non-invasively at delivery time. Thus, the aim of this study was to isolate, characterize and differentiate. MSC derived from bovine fetal annexes cow dairy neonates after assisted delivery and of fetus obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0,1% collagenase solution. Six samples of AM and EMUC at delivery time, six samples of AM and EMUC at first third of pregnancy and six samples of UCB at secondary third of pregnancy were subjected to morphology evaluation, immunocytochemistry, flow cytometry and in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation. Moreover, sample were cryopresrved and evaluated for viability by flow citometri. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, lacked CD 34 expression and showed low expression of MHC II. They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80-90% viability after cryopreservation. According to the results, AM, EMUC and UCB, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, are a painless and non-invasive source of MSC and can be used for stem cell bank creation
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Aplicação do método flash para a estimação da difusividade térmica da geléia de acerola / Flash application of the method for estimation of thermal diffusivity jelly acerola

Silva, Mirtes Aparecida da Conceição 07 April 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2015-05-08T14:59:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2230755 bytes, checksum: ca3daa0f19b4271abeb34495fd22c22f (MD5) Previous issue date: 2011-04-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The analysis of the properties of heat and mass transfer in foods has been studied for many researchers due to their need for knowledge to feed the codes of optimization calculations and equipment design involving the addition and removal of energy. This work deals with the solution of an inverse problem of parameter estimation to estimate the thermal diffusivity and thermal conductivity of a sample of acerola jam. The direct problem is solved numerically using finite differences and the system of algebraic equations arising from the method is solved by explicit method. The experimental transient temperature profile required for the solution of the inverse problem is obtained by a thermal pulse method, specifically, via flash method. The experimental procedure consists of submitting a sample of acerola jelly confined in a cylindrical cavity with a thermal disturbance of short duration on one side (front) and measure the transient temperature evolution on the other side (back side). The acerola jelly was specially produced and analyzed physical and chemical for this purpose. For the thermal disturbance of the sample we used a device called a micro-flash, LFA model 457, manufactured by Netzsch. The pulse of short duration is from a power system that releases an energy equivalent to 15 joules per pulse and records the evolution of temperature using an infrared sensor, type ISB. This equipament has a system for generating laser pulse. The results are shown in terms of thermal diffusivity and thermal conductivity and are compared with the values available in literature for similar products. The values found for the thermal diffusivity of 0,121 to 0,148 mm2s-1 and the thermal conductivity of 0,372 to 0,497Wm-1 are in agreement with the values found by other techniques. / A estimação das propriedades termodinâmicas e de transportes tem sido objeto de estudo de diversos pesquisadores devido à necessidade de seu conhecimento para alimentar os códigos de cálculos de otimização e projetos de equipamentos que envolvam adição e remoção de energia. Esse trabalho trata da solução de um problema inverso de estimação de parâmetros para estimar a difusividade térmica e a condutividade térmica de uma amostra de geléia de acerola. O problema direto é resolvido numericamente utilizando diferenças finitas e o sistema de equações algébricas advindo da aplicação do método é resolvido pelo método explicito. O perfil de temperatura transiente experimental necessário para a solução do problema inverso é obtido através de um método de pulso térmico, especificamente, via método flash. O procedimento experimental consiste de submeter uma amostra de geléia de acerola confinada em uma cavidade cilíndrica a uma perturbação térmica de curta duração em uma das faces (anterior) e medir a evolução da temperatura transiente na outra face (face posterior). A geléia de acerola foi especialmente produzida e analisada físico-quimicamente com essa finalidade. Para a perturbação térmica da amostra foi utilizado um dispositivo, denominado de micro-flash, modelo LFA 457, fabricado pela Netzsch. O pulso de curta duração é originário de um sistema de potencia que libera uma energia equivalente a 15 Joules por pulso e registra a evolução da temperatura através de um sensor infravermelho, tipo ISb. Esse equipamento dispõe de um sistema de geração de pulso laser. Os resultados são mostrados em termos da difusividade térmica e da condutividade térmica e são comparados com os valores disponíveis na literatura para produtos da mesma natureza. Os valores encontrados para a difusividade térmica de 0,121 à 0,148 mm2s-1 e para a condutividade térmica de 0,372 à 0,497Wm-1°C-1 estão em acordo com os valores encontrados por outras técnicas.

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