Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-20T18:31:48Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Melyna Chaves Leite.pdf: 1697174 bytes, checksum: 6f7bcace46236ca853b000bd01b6072b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T18:31:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Melyna Chaves Leite.pdf: 1697174 bytes, checksum: 6f7bcace46236ca853b000bd01b6072b (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / CNPQ / As infecções fúngicas invasivas causadas por leveduras representam causa frequente de óbito, especialmente em pacientes de Unidades de Terapia Intensiva. Apesar de Candida albicans ser a mais comum, espécies emergentes de Candida, tem surgido como importante causa de infecções graves, além de se mostrarem resistentes aos tratamentos. Dentre as mais importantes causas desta infecção, destaca-se a formação de biofilme. O biofilme, conjunto de microrganismos envolvidos numa matriz polimérica extracelular de carboidratos, proteínas e ácidos nucleicos, pode se aderir a tecido vivo e superfície inerte como os dispositivos médicos. Deste modo, conduz importantes repercussões clínicas, uma vez que vem sendo verificado aumento da resistência à terapia antifúngica e da habilidade das células em resistir às defesas do sistema imune. Assim, o objetivo da pesquisa foi avaliar leveduras emergentes quanto à formação de biofilme analisando arquitetura e resposta antifúngica. Foram analisadas 15 leveduras emergentes provenientes de amostras clínicas e estocadas na Micoteca URM, Universidade Federal de Pernambuco, Brasil. As culturas foram autenticadas por características morfofisiológicas e proteômica/MALDI-TOF MS. A avaliação do biofilme foi por redução do XTT (quantitativo) e então, selecionados quanto a maior capacidade de formação. A arquitetura foi avaliada em discos de cateteres, analisados em 24 e 48 horas por microscopia de varredura. Foram realizados tratamento anti-biofilme com anfotericina B e fluconazol seguindo o protocolo do M27-A3 baseado em testes de sensibilidade com células planctônicas. As leveduras testadas formaram biofilme, destacando-se o isolado clínico de C. ciferri do qual, não há relatos quanto a este potencial de virulência. Na sensibilidade antifúngica, houve mudança no perfil entre células planctônicas e as agregadas, as quais se mostram mais resistente. Diante do alto potencial de virulência verificado nos isolados, é necessário a busca por novas substâncias como futura alternativa terapêutica de candidíase invasiva. / Invasive fungal infections caused by yeast are a frequent cause of death, especially in patients of Intensive Care Units. Although Candida albicans is the most common, emerging species of Candida, it has emerged as a major cause of serious infections, in addition to being resistant to treatments. Among the most important causes of this infection is the biofilm formation. Biofilm, a collection of microorganisms involved in an extracellular polymeric matrix of carbohydrates, proteins and nucleic acids, can adhere to living tissue and inert surfaces such as medical devices. Thus, it has important clinical repercussions, since it has been verified increased resistance to antifungal therapy and the ability of cells to resist immune system defenses. Thus, the objective of the research was to evaluate emerging yeasts regarding biofilm formation analyzing architecture and antifungal response. Fifteen emerging yeasts from clinical samples and stored at the URM Micoteca, Federal University of Pernambuco, Brazil, were analyzed. The cultures were authenticated by morphological and proteomic characteristics / MALDI-TOF MS. The evaluation of the biofilm was by reduction of the XTT (quantitative) and then, selected for the greater capacity of formation. The architecture was evaluated in catheter discs, analyzed in 24 and 48 hours by scanning microscopy. Antibiofilm treatment with amphotericin B and fluconazole following the M27-A3 protocol based on sensitivity tests with planktonic cells was performed. The yeasts tested formed a biofilm, with a clinical isolate of C. ciferri, of which there are no reports of this virulence potential. In the antifungal sensitivity, there was a change in the profile between planktonic cells and aggregates, which are more resistant. In view of the high potential of virulence in isolates, it is necessary to search for new substances as a future therapeutic alternative for invasive candidiasis.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-23T22:02:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilberto Henrique Teles Gomes Da Silva.pdf: 1461753 bytes, checksum: c17c5c29241b95c71a94f9ae937992f6 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-30T19:09:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilberto Henrique Teles Gomes Da Silva.pdf: 1461753 bytes, checksum: c17c5c29241b95c71a94f9ae937992f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-30T19:09:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilberto Henrique Teles Gomes Da Silva.pdf: 1461753 bytes, checksum: c17c5c29241b95c71a94f9ae937992f6 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES / A levedura Dekkera bruxellensis é um micro-organismo muito adaptado aos processos de fermenta-ção alcoólica industrial, sendo encontrada em indústrias que realizam a produção de cerveja, vinho e etanol combustível. Na maioria desses processos, incluindo a produção de bioetanol, D. bruxel-lensis é considerada uma levedura contaminante, pois compete com Saccharomyces cerevisiae pe-los substratos industriais, ocasionando redução no rendimento e produtividade etanólica. Apesar disso, D. bruxellensis é capaz de produzir etanol, mesmo que em menor produtividade e, assim, apresenta potencial de uso industrial. Um dos problemas associados à baixa produtividade deve estar relacionado com o elevado fluxo metabólico para a produção de acetato citosólico a partir do acetaldeído, que desvia o carbono que seria utilizado para produção de etanol. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo estudar o metabolismo do acetaldeído como ponto de ramifi-cação no metabolismo fermentativo de D. bruxellensis. Para isso, a atividade da enzima aceltaldeído desidrogenase (AldH) foi bioquimicamente inibida pelo uso do composto disulfiram (DSF) em dife-rentes formulações do meio de cultivo. Os dados mostraram que D. bruxellensis é mais resistente ao DSF do que S. cerevisiae, sendo a concentração de 100 µM inibitória para ambas as leveduras. A adição de acetato ao meio contendo glicose promoveu pequeno, porem significativo aumento no crescimento de S. cerevisiae, sendo moderadamente tóxico para D. bruxellensis. Juntamente com os dados de crescimento em galactose e glicerol, isso mostra que D. bruxellensis é capaz de exportar acetato da mitocôndria para o citoplasma na ausência de AldH. A adição dos agentes antioxidantes glutationa e N-acetilcisteína bloqueou completamente o efeito tóxico da adição de DSF, mostrando que o acúmulo de acetaldeído induz estresse oxidativo nas leveduras. Quando utilizado nos ensaios de fermentação, DSF promoveu aumento inicial do fluxo glicolítico com consequente aumento na produção de etanol e, paradoxalmente, de acetato. / Dekkera bruxellensis is a microorganism highly related to industrial fermentation processes, especially in brewing, winemaking and fuel ethanol industries. In most of these processes, including the production of bioethanol, D.bruxellensis is considered a contaminant yeast, since it competes with Saccharomyces cerevisiae for the industrial substrates, resulting in low ethanol yield and pro-ductivity. Nevertheless, D. bruxellensis is able to produce ethanol, showing potencial for industrial use. One of the problems associated with low productivity must be related to the high metabolic flux towards the production of cytosolic acetate from acetaldehyde, which deviates the carbon from ethanol fermentation. In this context, the present study aimed to study the metabolism of acetalde-hyde as a branch point in the fermentative metabolism of D. bruxellensis. Therefore, the activity of the enzyme aceltaldehyde dehydrogenase (AldH) was biochemically inhibited by the use of disul-firam compound (DSF) in different formulations of the culture medium. The data showed that D. bruxellensis is more resistant to DSF than S. cerevisiae, with a inhibitory concentration of 100 μM for both yeasts. Addition of acetate to the medium containing glucose promoted a small but signifi-cant increase in S. cerevisiae growth, being somewhat toxic to D. bruxellensis. Together with the growth data on galactose and glycerol, this shows that D. bruxellensis is able to export acetate from the mitochondria to the cytoplasm in the absence of AldH. The addition of the antioxidant agents glutathione and N-acetylcysteine completely blocked the toxic effect of the addition of DSF, show-ing that the accumulation of acetaldehyde induces oxidative stress in the yeast. When used in the fermentation tests, DSF promoted initial increase in glycolytic flow with a consequent increase in the production of ethanol and, paradoxically, of acetate.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4454_1.pdf: 392006 bytes, checksum: e8f5bc9f6f98c60799a917f03f3408c6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Foram isoladas leveduras dos seguintes ambientes climatizados, enfermaria 4 (ENF4), sala de quimioterapia (SQT) e do serviço de pronto atendimento (SPA) do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE); bloco cirúrgico (BC), unidade de tratamento intensivo (UTI) e unidade de pacientes graves (UPG) do Hospital Getúlio Vargas (HGV), Recife. Foram expostas placas com 5 diferentes meios de cultura, em Dezembro/2001, Janeiro e Fevereiro/2002, do período sem chuvas e em Maio, Junho e Julho/2002 do período com chuvas. As exposições foram realizadas com o condicionador de ar ligado, em 3 pontos eqüidistantes em relação à saída do ar condicionado, P1 (ponto da saída do ar condicionado), P2 (ponto eqüidistante do lado direito do condicionador de ar) e P3 (ponto eqüidistante do lado esquerdo do condicionador de ar). Do HEMOPE, foram isoladas 16 amostras de leveduras no período sem chuvas e 27 no período com chuvas; do Hospital Getúlio Vargas, foram isoladas 17 amostras de leveduras no período sem chuvas e 19 no período com chuvas. Foi isolado maior número de leveduras no período com chuvas. Foram isoladas, entre outras, Candida guilliermondii, C. membranaefaciens, C. parapsilosis, Cryptococcus albidus, C. uniguttulatus, Rhodotorula glutinis, R. graminis, R. minuta, R. mucilaginosa, Sporobolomyces roseus, S. salmonicolor, Trichosporon cutaneum, T. pullulans, espécies estas de interesse médico. Houve significância estatística entre pontos eqüidistantes e ambientes; espécies isoladas e ambientes; número de amostras de C parapsilosis e R. mucilaginosa; número esperado de leveduras isoladas nos pontos eqüidistantes. Todas as amostras de leveduras expressaram sensibilidade a anfotericina B e fluconazol quando submetidas aos testes de susceptibilidade de acordo com o documento M27-A2 do NCCLS

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4622_1.pdf: 1855167 bytes, checksum: b92825c7a2872b9154e8b5c02996b842 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Com a finalidade de caracterizar o potencial biotecnológico de leveduras isoladas de sedimento do Manguezal Barra das Jangadas, amostras de sedimento foram coletadas nos meses de março e abril/2004 e outubro/2005 (período de estiagem), junho e julho/2004 e julho/2005 (período chuvoso). Foram isoladas 32 espécies de leveduras distribuídas nos gêneros; Candida (25), Trichosporon (3), Kluyveromyces (2), Rhodotorula (1), Debaryomyces (1). Os isolados das leveduras em duplicata (64) foram testados para produção qualitativa e quantitativa dos aminoácidos lisina e metionina. As culturas foram inoculadas em meio líquido com 10g de glicose, 0,3g de NH4H2PO4, 0,5g de extrato de levedura, 0,1g de KH2PO4, 0,05g de MgSO47H2O acrescido de 15mg/L de vermelho de fenol sob rotação de 200rpm a 28ºC. Após o período de 30h foi observado como resultado positivo a mudança da cor do meio como indicativo da atividade qualitativa de produção dos aminoácidos. Para confirmação da produção dos aminoácidos os filtrados das leveduras foram submetidos a cromatografia em camada delgada (CCD). As espécies que apresentaram resultado positivo foram Trichosporon cutaneum, T. aquatile, T. brassicae e Rhodotorula minuta. Estas foram submetidas a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para quantificar os aminoácidos lisina e metionina

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4514_1.pdf: 661182 bytes, checksum: 022b50f4e5cd794c4ef3cf92b67504aa (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / O uso de extratos de plantas com propriedades antimicrobianas tem grande significado no tratamento terapêutico. No Brasil, somente 5% das espécies de plantas foram estudadas fitoquimicamente e uma porcentagem ainda menor foi avaliada sob aspectos biológicos. Este trabalho avaliou a atividade antifúngica das folhas e cascas de Avicennia sp., Conocarpus erectus, Laguncularia racemosa e Rhizophora mangle coletadas no estuário do rio Paripe (Vila Velha, Itamaracá, PE), frente a dermatófitos e leveduras. Após a secagem, o material coletado foi reduzido a pó e submetido a extrações sucessivas com metanol. A abordagem fitoquímica foi realizada para detectar os principais grupos químicos presentes nessas plantas. Para determinação da atividade antifúngica dos extratos foram realizados o método de difusão em disco e a determinação da concentração mínima inibitória pelo método de microdiluição e macrodiluição. Os microrganismos utilizados foram às leveduras Candida albicans, C. parakrusei, C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis, Trichosporon beigelii e T. pullulans e os dermatófitos Epidermophyton floccosum, Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes e T. rubrum. A abordagem fitoquímica revelou a presença de flavonóides, terpenos e esteróides e taninos nessas plantas. Os taninos representam o principal grupo existente nas plantas testadas e a casca da amostra 1 de Avicennia apresentou terpenos e esteróides com grande intensidade. No teste de atividade pelo método de difusão em disco foram ativos, para as leveduras, os extratos da casca da amostra 1 de Avicennia, da casca de C. erectus, da folha de L. racemosa e da folha e casca de R. mangle e, os dermatófitos, foram sensíveis a todos os extratos, com exceção da amostra 2 de Avicennia. Para o teste de difusão em disco C. albicans foi à espécie mais resistente enquanto T. pullulans foi mais sensível, seguido por C. parakrusei, C. glabrata e C. parapsilosis e para os dermatófitos E. floccosum foi o microrganismo mais sensível, seguido por T. rubrum, T. mentagrophytes e M. gypseum. Na determinação da concentração mínima inibitória das espécies de leveduras T. beigelii, T. pullulans, C. parakrusei e C. parapsilosis foram as mais sensíveis, com CMI de 15,625 mg/mL. Para os fungos dermatofíticos, E. floccosum foi o mais sensível, apresentando CMI de 15,625 mg/mL, enquanto M. gypseum foi o mais resistente com CMI de 1000 mg/mL. O presente trabalho indica que as espécies estudadas, em especial a casca da amostra 1 de Avicennia, possuem relevante potencial antifúngico e estudos posteriores devem ser conduzidos para isolar os compostos ativos

Orientador: Maria Luiza Moretti Branchini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:05:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_LucianaSarmento_M.pdf: 615387 bytes, checksum: 42dae5da9ccb25a99c7957261e5866ca (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O crescente aumento de casos de candidemia nas últimas décadas vem sendo um fato preocupante devido a diversos fatores, e dentre eles destacam-se a mortalidade, o aumento de casos de espécies não-albicans como causadoras de candidemia, e a crescente emergência da resistência de leveduras aos antifúngicos. Para o tratamento da candidemia, temos como drogas mais usadas a anfotericina B (ANF), o itraconazol (ITZ), o fluconazol (FCZ), a 5-fluorocitosina (5-FC), como também as combinações de ANF com FCZ ou 5-FC que visam favorecer a terapia. Porém, atualmente, ainda pouco se sabe a respeito das respostas clínicas dadas por Candida sp. ás terapias utilizadas quando comparadas com testes de suscetibilidade in vitro. Os testes padronizados para estudar a suscetibilidade de Candida sp. in vitro não avaliam as células individualmente, e sim uma população celular. O sistema automatizado Bio-Cell Tracer ® (BCT®), surge como uma nova ferramenta complementar para o estudo da dinâmica da formação de hifas, pseudo-hifas e germinação de conídios e de respostas quanto a suscetibilidade aos antifúngicos. Neste trabalho, utilizamos o BCT® para avaliar o crescimento de cepas de Candida albicans frente aos seguintes antifúngicos: FCZ, 5-FC e ANF, além das combinações 5-FC/ANF e FCZ/ANF em adições com tempos simultâneos e seqüenciais. O sistema BCT® consiste de uma base para placas, microscópio, digitalizador de imagem e computador com programa que permitiu o acompanhamento do crescimento automático das extremidades das pseudo-hifas estudadas. Os resultados para Candida albicans obtidos com o teste de resistência ao FCZ, encontrados no BCT® foram correspondentes àqueles utilizando o teste padrão de microdiluição em caldo (NCCLS A27), sugerindo diferentes classes de taxas de inibição que poderiam ser agrupadas como valores associados a suscetibilidade e resistência. Os estudos com drogas combinadas, em tempos seqüenciais, revelou que a cepa (UN 219) apresentou comportamento de antagonismo para a combinação de FCZ/ANF, dado que diferiu do encontrado na microdiluição em caldo. Neste caso, a possibilidade de monitoramento de hifas, pseudo-hifas pode permitir maior versatilidade e induzir respostas biológicas antes não encontradas nos testes in vitro. Este estudo contribuiu com novas informações a respeito de um sistema automatizado para análise de pseudo-hifas e germinação de conídios, que pode vir a ser utilizado no desenvolvimento de novas estratégias para uma rápida determinação de suscetibilidade antifúngica de C. albicans ou de outros fungos patogênicos / Abstract: Candida species are opportunistic fungal pathogens that are often the causative agents of infections in immunocompromised patients. amphotericin B (AMPH), itraconazole (ITCZ), fluconazole (FLCZ) and 5-flucytosine (5-FC) are the principal drugs used on the treatment of candidemic patients. However, in some cases, the clinical responses of Candida are different from those obtained with the in vitro susceptibility tests. Moreover, the standard methods of monitoring the susceptibility of Candida to antifungal agents are unable to evaluate single cells, true hyphae or pseudohyphae forms. Thus, new techniques developed to measure the growth rate of true hyphae or pseudohyphae forms in vitro could contribute to better understand the dynamics of the formation of these invasive structures and the response of the organism to antifungal agents. Here we describe the application of an automated system (Bio-Cell Tracer® - BCT®) to examine the responses of Candida albicans to AMPH, FLCZ, 5-FC, as well as AMPH/FLCZ and AMPH/5-FC combinations, in simultaneous and distinct addiction times. The BCT® consists of a culture vessel, a microscope and a image analyzer with a computer program system that traces the growth of a hyphal tip automatically. The results obtained using the BCT® system were correspondent to those using the standard MIC (NCCLS A27) assay on the detection of susceptibility and resistance in clinical isolates and reference samples. The combinatory studies show an antagonistic pattern on the UN 219 strain, differently from the MIC studies. The possibility of tracing pseudohyphae structures allows a larger versatility and biological responses not found on the other tests. This work contributed with new information about an automated system for analysis of pseudohyphal structures, that may be used on the development of new strategies for a rapid and reliable assessment of antifungal susceptibility in Candida albicans or other infectious species / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Angelica Zaninelli Schreiber, Anibal E. Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:29:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cavalheiro_RenataAlves_M.pdf: 4268889 bytes, checksum: 5376f92a4294a0902998a087e75a9a41 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Nos últimos 15 anos, as infecções sistêmicas por patógenos fiíngicos oportunistas vêm aumentando assustadoramente. Entretanto, as alternativas terapêuticas continuam restritas. Em busca de novos alvos para alternativas terapêuticas, este trabalho busca conhecer melhor o metabolismo de algumas leveduras. Assim, foram estabelecidas curvas de crescimento para Candida albicans ATCC 90028, Candida krusei ATCC 6258, Cândida parapsilosis ATCC 22019 e Cryptococcus neoformans ATCC 90112, e determinados os tempos para início da fase exponencial, metabolicamente mais ativa. Para os estudos, necessita-se de células permeáveis a íons, assim, avaliou-se a produção de esferoplastos, com a determinação dos tempos de contato com a enzima específica para cada espécie. Avaliando mitocôndrias in situ e isoladas de C. albicans ATCC 90028, testes bioquímicos apontaram a presença de uma proteína desacopladora, confirmada por munodetecção. Foi também possível sugerir a presença desta proteína em Candida krusei ATCC 6258. Pode-se relatar a presença de vacúolo ácido nas células de Candida albicans ATCC 90028 e sugerir sua presença nas células de Candida krusei ATCC 6258. A cepa de C. albicans ATCC 90028 também possui um P-type W ATPase sensível a ortovanadato e insensível a bafilomicina e não possui trocador ea2+j W, por sua vez, C. krusei possui um P-type W ATPase insensível a bafilomicina, sensível a ortovanadato e um trocador Ca2+1'Ir. Características como uma cadeia alternativa para a transferência de elétrons, de oxidase alternativa e proteínas desacopladoras, são potencias alvos para estudos de alternativas terapêuticas para tratamento de infecções por estes agentes. Maior aprofundamento dos estudos aqui iniciados, poderão trazer grandes contn"buições para um melhor conhecimento do metabolismo destes agentes infecciosos / Abstract: In the last 15 years, opportunistic systemic fungal are increasing. However, the therapeutical alternatives are still restricted. In search of new targets for therapeutical drugs, this work proposes to understand better the metabolism of some yeasts. Growth curves of Candida albicans ATCC 90028, Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 22019 and Cryptococcus neoformans ATCC 90112 was performed and the middle of the exponential phase of growth was determinated. For metabolic studies, is necessary to obtain permeable cells, withouth cell wa11. In order to have spheroplasts, the time of contact with the specific enzyme for each specie was evaluated. Biochemical tests, evaluating in situ and isolated C. albicans ATCC 90028 mitochondria showed the existence of an uncoupling protein, confumed by imunodetection. It was also possible to suggest the presence of this protein in Candida krusei ATCC 6258. Also can be related an acid vacuole in Candida albicans ATCC 90028 and suggest its presence in C. krusei ATCC 6258 cells. C.albicans ATCC 90028 strain also possess a P-type W ATPase sensible to orthovanadate and insensible to bafilomycin and does not have an Ca2+ Ilr exchanger, in turn, C. krusei A TCC 6258 possess a P-type W ATPase insensible to bafilomicin, sensible to ortovanadate and a ea2+1lr exchanger. Characteristics as an alterna tive chain to electrons transference, alternative oxidase and uncoupling proteins are potential targets to alternative therapeutic studies for treatment of infections caused by these agents. More studies in addition to these initiated here, will be of great contnoution for a better knowledge of these infectious agents / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-14T12:35:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 521734 bytes, checksum: b98f356f3d3fb71da116b49bc39739b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-14T12:35:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 521734 bytes, checksum: b98f356f3d3fb71da116b49bc39739b3 (MD5) Previous issue date: 2001-08-14 / Foram avaliadas duzentos e cinquenta e duas leveduras isoladas do ambiente da indústria de laticínios, dezoito leveduras isoladas de frutos de café e onze fungos filamentosos da micoteca do Departamento de Microbiologia da Universidade Federal de Viçosa, para obtenção de xilitol a partir de D-xilose. Esses microrganismos foram cultivados em meio mineral D-xilose e 0,5% leveduras, que acrescido de 1% de de extrato de levedura, a 30°C e 100 rpm. Dezenove apresentaram produtividade volumétrica (Q P ) entre 0,06 e 0,12 g L -1 h -1 e rendimento (Y P/S ) de 0,14 a 0,57 g g -1 , foram selecionadas. Os fungos filamentosos apresentaram baixa produção de xilitol variando de 0,14 a 0,52 g L -1 , e leveduras produtividade volumétrica (Q P ) de 0,002 a 0,006 g L -1 h -1 . As selecionadas foram avaliadas numa segunda triagem, com padronização do inóculo inicial. Para seis isolados, a produção de xilitol variou de 4,60 a 6,23 g L -1 , a partir de 10,73 g L -1 de D-xilose com produtividade específica (q P ) entre 0,17 e 0,26 mmol g -1 h -1 , Q P =0,10 a 0,13 g L -1 h -1 e Y P/S =0,43 a 0,58 g g -1 . Destacou-se a levedura 1.70, produzindo 6,23 g L -1 de xilitol (Q P =0,13 g L -1 h -1 , q P =0,26 mmol g -1 h -1 e Y P/S =0,58 g g -1 ), a qual foi selecionada para determinação das melhores condições de cultivo. A melhor -1 concentração de D-xilose foi 51,35 g L , com produção de 32,70 g L -1 de xilitol (Q P =0,49 g L -1 h -1 , q P =0,49 mmol g -1 h -1 e Y P/S =0,64 g g -1 ). Utilizando 1,45 g L -1 de massa celular, como parâmetros inóculo inicial, foram obtidos os melhores fermentativos (36,2 g L -1 de xilitol a partir de 56,80 g L -1 de D-xilose, Q P =0,60 g L -1 h -1 , q P =0,58 mmol g -1 h -1 e Y P/S =0,65 g g -1 ). A melhor taxa de aeração foi obtida com 200 rpm, produzindo 27,20 g L -1 de xilitol a partir de 46,70 g L -1 de D-xilose (Q P =0,90 g L -1 h -1 , q P =0,74 mmol g -1 h -1 e Y P/S =0,57 g g -1 ). Para 0,5% de extrato de levedura 33,00 g L -1 de xilitol a partir de 50,00 g L -1 de q P =0,67 mmol g -1 h -1 levedura DIFCO  e Y P/S =0,65 g g -1 ), e para MERCK  , obteve-se D-xilose (Q P =0,64 g L -1 h -1 , 0,5% de extrato de obteve-se 33,65 g L -1 de xilitol a partir de 47,00 g L -1 de D-xilose (Q P =0,67 g L -1 h -1 , q P =0,60 mmol g -1 h -1 e Y P/S =0,72 g g -1 ). A levedura 1.70 foi caracterizada por provas fisiológicas, bioquímicas e morfológicas, visando a identificação de gênero e espécie. Entretanto, os resultados não foram conclusivos, apesar da semelhança morfológica com o gênero Pichia. / Selection of microorganisms for conversion of xylose to xylitol. Adiviser: J orge Luiz Cavalcante Coelho. Committee Members: Flávia Maria Lopes Passos e Virgínia Maria Chaves-Alves. Two hundred fifty-two yeast isolated from a dairy industry environment, eighteen yeast isolated from coffee fruits and eleven filamentous fungi from the Universidade Federal de Viçosa, Microbiology Department fungal collection were screened for xylitol production by growing them in mineral medium supplemented with 1% D-xylose and 0.5% yeast extract, at 30°C and 100 rpm. Nineteen yeast that presented volumetric productivities (Q P ) between 0.06 and 0.12 g L -1 h -1 and yields (Y P/S ) from 0.14 to 0.57 g g -1 were selected. Xylitol production by the filamentous fungi was low, varying from 0.14 to 0.52 g L -1 presenting volumetric productivities (Q P ) from 0.002 to 0.006 g L -1 h -1 . In a second screening of the nineteen yeast selected, for six isolated, xylitol production varied -1 10.73 g L 4.60 to 6.23 g L -1 when starting with D-xylose. Specific productivities (q P ) varied between 0.17 and -1 0.26 mmol g 0.58 g g -1 . from h -1 , Q P from 0.10 to 0.13 g L -1 h -1 and Y P/S from 0.43 to Yeast 1.70 stood out, producing 6.23 g L -1 xylitol (Q P =0.13 g L -1 h -1 , q P =0.26 mmol g -1 h -1 and Y P/S =0.58 g g -1 ). Yeast 1.70 proved promising for xylitol production and its optimal growth conditions were therefore determined. The best D-xylose concentration was 51.35 g L -1 , resulting in production of 32.70 g L -1 xylitol (Q P =0.49 g L -1 h -1 , q P =0.49 mmol g -1 h -1 and Y P/S =0.64 g g -1 ). The best fermentation parameters were obtained using 1.45 g L -1 of cellular mass as initial inoculum (36.2 g L -1 xylitol from 56.80 g L -1 D-xylose, Q P =0.60 g L -1 h -1 , q P =0.58 mmol g -1 h -1 and Y P/S =0.65 g g -1 ). aeration rate 46.70 g L -1 was The best obtained at 200 rpm, producing 27.20 g L -1 xylitol from D-xylose (Q P =0.90 g L -1 h -1 , q P =0.74 mmol g -1 h -1 and Y P/S =0.57 g g -1 ). The addition of 0.5% MERCK  yeast extract produced 33.00 g L -1 xylitol from 49.40 g L -1 D-xilose (Q P =0.64 g L -1 h -1 , q P =0.67 mmol g - h -1 and Y P/S =0.65 g g -1 ) while the addition of 0.5% DIFCO  yeast extract produced 33.65 g L -1 xylitol from 47.00 g L -1 D-xylose (Q P =0.67 g L -1 h -1 , q P =0.60 mmol g -1 h -1 and Y P/S =0.72 g g -1 ). Yeast 1.70 was characterized through physiological, biochemical and morphological tests, in an attempt to identify it. However, in spite of a morphological similarity to the genus Pichia, results were inconclusive. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-18T18:04:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Rafael Barros de Souza.pdf: 1547796 bytes, checksum: f616604f41e0fde5d0278a8232ac2c12 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T18:04:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Rafael Barros de Souza.pdf: 1547796 bytes, checksum: f616604f41e0fde5d0278a8232ac2c12 (MD5) Previous issue date: 2012-08-24 / CNPQ / Apesar dos grandes avanços para melhorar as características das variedades de cana-de-açúcar, pouco se sabe sobre o impacto da qualidade do caldo da cana-de-açúcar no processo de fermentação industrial, mais especificamente sobre o metabolismo fermentativo da levedura. No presente trabalho analisamos a relação entre a variação da composição mineral do caldo de cana e a capacidade fermentativa das células de Saccharomyces cerevisiae, determinando a cinética de consumo de sacarose e produção de etanol e glicerol, bem como o efeito cumulativo desses minerais ao longo de reciclos fermentativos. Foram utilizados meios de fermentação suplementados com os principais macro e micronutrientes encontrados no caldo de cana de açúcar. Entre os minerais avaliados todos os meios suplementados apresentaram um resultado superior ao meio padrão (meio controle), exceto o meio com cobre. Os meios com maior influência no rendimento em etanol foram os meios com ureia, magnésio e manganês que apresentaram um aumento de 18,4% em relação ao meio padrão. O meio com cobre apresentou o menor valor em comparação a todos o meios analisados, contudo, sem diferenciar na viabilidade celular. Esses resultados sugerem que de fato os minerais desempenham importantes papeis no metabolismo fermentativo das células de S. cerevisiae e que determinados minerais como nitrogênio na forma de ureia, magnésio e manganês são mais significativos para o aumento do rendimento em etanol do que os outros minerais. / Despite great advances to improve the characteristics of the varieties of sugar cane, less is known about the impact of the sugar cane juice quality in the fermentation industry, more specifically on the fermentative metabolism of yeast. In this study we analyzed the relationship between variation of mineral composition of sugarcane juice and fermentative ability of Saccharomyces cerevisiae cells, determining the kinetics of sucrose intake and ethanol and glycerol production, as well as the cumulative effect of these minerals along recyclings fermentation. Fermentation media were supplemented with the main macro and micro nutrients found in sugar cane juice. Among the minerals examined all media supplemented showed a superior result to the standard medium (control medium), except the medium with excess copper. The medium with the greatest influence on the yield of ethanol was medium with urea, magnesium and manganese in which showed an 18.4% increase over the standard medium. The medium with copper with the lowest value compared to all the medium types, however, no difference in cell viability. These results suggest that in fact the minerals play important roles in the fermentative metabolism of the S. cerevisiae cells and that certain minerals, such as nitrogen as urea, magnesium and manganese are the most significant increase in ethanol yield than other minerals.

A pesquisa foi realizada para verificar a influência da trealose endógena e o uso da trealose como crioprotetor na manutenção da viabilidade celular de leveduras submetidas à liofilização. Foi utilizada a levedura Saccharomyces Cerevisiae (TA, IZ-1904 E 5A), as quais, após tratamento térmico para o acúmulo da trealose endógena (45 graus C por 2 horas), foram suspensas em três soluções crioprotetoras (leite desnatado, 10% sacarose, 10% e trealose 10%), as culturas de levedura foram liofilizadas e aos 10, 40 e 90 dias após a liofilização foram determinadas as suas viabilidades. Com o tratamento térmico, o teor de trealose endógena da levedura TA passou de 0,84 para 6,33%, da levedura IZ-1904 de 0,64 para 5,15% e da levedura SA de 0,82 para 6,24%. Dentre os crioprotetores, a solução de leite desnatado foi o que proporcionou melhor crioproteção às células de levedura. As culturas de levedura que passaram pelo tratamento de acúmulo da trealose endógena apresentaram maior manutenção da viabilidade após a liofilização, a qual, para o crioprotetor leite desnatado e aos 10 dias após a liofilização, passou de 31,04 para 58,92% para a levedura TA, de 28,29 para 53,38% para a levedura IZ-1904 e de 32,80 para 59, 62% para a levedura SA, com o acúcar endógeno da trealose. Após a liofilização, a viabilidade das leveduras se manteve constante / not available