Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-11-29Bitstream added on 2014-06-13T20:32:27Z : No. of bitstreams: 1 bonafini_fc_me_rcla.pdf: 1838703 bytes, checksum: e6e94a0dda9b5c52f22e85afcd8dd427 (MD5) / Este estudo nasce de uma inquietação sobre a possibilidade de se integrar a Matemática à Física no Ensino Superior, utilizando tecnologias informáticas. Assim, esta dissertação objetiva analisar como os alunos trabalham conceitos matemáticos e físicos em um ambiente de experimentação, lançando mão de tecnologias portáteis, especificamente, a calculadora gráfica e o CBL (Calculator Based Laboratory). O referencial teórico se apóia nas noções de Reorganização do Pensamento e seres-humanos-com-mídia, estabelecendo a importância das tecnologias informáticas no processo de mediação, enquanto atores, na produção do conhecimento. A modalidade de pesquisa utilizada foi o Experimento de Ensino (E.E.), que se enquadra dentro de procedimento que vem sendo denominado de pesquisa qualitativa. Os dados foram construídos e transcritos sob a forma de episódios, dentre os quais destaco: a) o Resfriamento, sendo possível verificar o comportamento deste fenômeno, utilizando recipientes de materiais diferentes; b) Luminosidade, em que tanto o CBL quanto a calculadora gráfica propiciaram aos estudantes a análise das variações dos coeficientes da expressão y = a.xb, obtendo respostas gráficas em tempo real, de forma que a Matemática e a Física se apresentaram sem estarem dissociadas; c) Mistura, onde os alunos chegaram à generalização da média aritmética e, respectivamente, a média ponderada, ao observarem a temperatura da mistura de duas substâncias para volumes iguais e sua extensão para volumes diferentes; d) Filtros sobre uma fonte de luz (acetatos), ao apresentar o caminhar dos alunos do ajuste linear para o exponencial, na escolha do modelo, utilizando o ZOOM da calculadora. Com isso, esta dissertação expõe caminhos para que alunos, servindo-se da calculadora gráfica e do CBL produzam conhecimentos relativos a tópicos, como:... / This study grew out of an interest in the possibility of integrating the teaching of Mathematics and Physics in university-level courses, using information technology. The objective was to analyze how students work with mathematics and physics concepts in an environment of experimentation, using portable technologies, specifically graphing calculators and the Calculator-Based Laboratory (CBL). The theoretical reference is based on the notions of Reorganization of Thinking and Humans-with-Media, which establish the importance of information technologies in mediating and being actors in the production of knowledge. The research methodology used was Teaching Experiments (T.E.), within a qualitative research perspective. The data were constructed and transcribed in the form of episodes, of which the following are highlighted: a) Cooling, in which it was possible to verify the behavior of this phenomenon, using containers made of different materials; b) Luminosity, in which the CBL and graphing calculator enabled the students to analyze variations in the coefficients of the expression y = a.xb, providing graphic responses in real time in such a way that the Mathematics and the Physics are associated; c) Mixture, in which students arrived at generalizations regarding the arithmetic mean and, respectively, the weighted mean, when observing the temperature of a mixture of two substances of equal volume, and its extension to different volumes; d) Filters over a light source (acetates), when presenting the students' steps from the linear fit to the exponential fit, in the choice of the model, using the zoom on the calculator. This study describes the paths followed by the students, using the graphing calculator and the CBL, to produce knowledge about topics such as: differential equations, curve fit, and coordination between analytical models...(Complete abstract click electronic access below)

A pneumonia é a principal causa de morte dentre as infecções hospitalares. Quando associada à ventilação mecânica (VM) desenvolve-se após 48 horas da sua instalação. É um importante fator independente de mortalidade para os doentes graves. As limitações e imprecisões dos recursos diagnósticos incentivaram o emprego de técnicas diagnósticas de PAV (pneumonia associada à ventilação mecânica), que incluem uma variedade de métodos para coleta de material, tais como aspirado traqueal, métodos broncoscópicos e não broncoscópicos. A escolha de uma ou de outra técnica diagnóstica depende da experiência local, dos custos e da disponibilidade das diferentes técnicas. E o tratamento da pneumonia pode ser baseado nestes testes diagnósticos.

Orientador: Sheila Canevese Rahal / Banca: Carlos Alberto Hussni / Banca: Fernando diBiase / Resumo: O estudo teve por objetivo comparar parâmetros cinéticos e têmporo-espacias, em gatos machos e fêmeas clinicamente saudáveis, com o emprego de uma plataforma de pressão. Foram utilizados 18 gatos adultos, sem raça definida, divididos em dois grupos: Grupo 1 - 10 machos, com peso variando entre 3,1 e 6,8Kg; Grupo 2 - oito fêmeas, com peso variando entre 3,3 e 4,75Kg. Os parâmetros cinéticos e têmporo-espacias foram aferidos com emprego de uma plataforma de pressão de 1.951mm x 447 mm. Para cada animal foram selecionadas cinco trilhas válidas, que foram consideradas válidas se o gato caminhou na velocidade de 0,54 até 0,74 m/s e aceleração de -0,20 e 0,20 m/s2. Foram determinados o Pico de Força Vertical (PFV), o Impulso Vertical (IV), a duração do ciclo da passada completa, o tempo de apoio, o tempo de balanço, o comprimento da passada e a distribuição do peso para os quatro membros. Para cada grupo, não foram observadas diferenças entre os lados direito e esquerdo, tanto nos membros pélvicos como torácicos. Para ambos os grupos, o PFV, o IV e a distribuição de peso foram estatisticamente maiores para o membro torácico que o membro pélvico. Com exceção do comprimento da passada, que foi maior para os machos, as demais variáveis não apresentaram diferenças entre os grupos. Houve diferença no comprimento dos membros torácicos e pélvicos, sendo maior para os gatos machos. Houve correlação entre o comprimento da passada e o comprimento dos membros. Foi possível concluir que entre os gatos machos e fêmeas a única diferença observada foi no comprimento da passada, consequente ao maior tamanho corpóreo dos gatos machos. Essa diferença não foi suficiente para interferir nos valores cinéticos e demais parâmetros têmporo-espaciais / Abstract: The aim of this study was to compare kinetic and temporospatial parameters in clinically healthy male and female cats with a pressure-sensing walkway. Eighteen crossbreed adult cats were divided into two groups: G1 - ten male cats weighing 3.1-6.8 kg; G2 - eight female cats weighing 3.3-4.75 kg. The data from the first five valid trials were collected for each cat. A trial was considered valid if the cat walked within the velocity of 0.54-0.74 m/s and acceleration from -0.20 to 0.20 m/s2. The peak vertical force (PVF), vertical impulse (VI), gait cycle time, stance time, swing time, stride length, and the percentage body weight distribution among the four limbs were determined. For each group, no significant differences were observed, in either the forelimbs or the hind limbs, between the left and right sides for any of the variables. For both groups PVF (%BW), VI, and percentage of body weight distribution were higher to forelimbs than hind limbs. Except the stride length that was larger for male, the other kinetic and temporospatial variables did not show any statistical significance between groups. There was difference in the lengths of the forelimbs and hind limbs that were larger in male cats. There was correlation between stride length and length of the limbs. In conclusion, the only difference observed between males and female cats was the stride length, and this was due to greater body size of male cats. The difference was not enough to interfere in the kinetic data and other temporospatial parameters / Mestre

Orientador: Carmelinda Schmidt Unterkircher / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Keila Maria Roncato Duarte / Banca: Luiz Antonio Guimaraes Cabral / Banca: Mario Tsunezi Shimizu / Resumo: O presente estudo teve como objetivo a produção de um anticorpo monoclonalreativo com leveduras do gênero Candida. Esplenócitos de camundongosBALB/c previamente imunizados com Candidaforam fusionados in vitro comcélulas de mieloma Sp2-0Ag14 e os híbridos resultantes mantidos em cultura a37°C com 5% de C02. Os sobrenadantes das células em crescimento foram testados por ELISA para a produção de anticorpos. Os pontos positivos {0,29%)foram clonados para obter-se o anticorpo monoclonal e posteriormenteexpandidos in vivo emperitônio de camundongo. O anticorpo produzido peloclone foi purificado e isotipado. O anticorpo monoclonal foi denominado 76C e éuma lgMK. O 76C é dirigido para um epítopo de mananoproteína da paredecelular de Candida, cuja natureza ainda não foi completamente elucidada. Oanticorpo 76C foi analisado por DOT SLOT contra diferentes cepas de Candidareagindo positivamente com 87,5% das amostras testadas. O anticorpomonoclonal (76C) será uma ferramenta útil no estudo sorológico de pacientescom candidose invasiva. / Abstract: The aim of this study was to obtain a reactive monoclonal antibody against Candida albicans. Spleen celIs of BALB/c mice previously immunized withCandida were fused in vitro with mielorna cells Sp2-0Ag14. The resultant hybridcells were kept in culture medium at 5% C02.The suspension growing cells were tested by ELISA to check the antibodies titer. The positive colonies were cloned to achieve the monoclonal antibody and further expanded in mice peritoneum. The antibody produced was purified and isotope. The monoclonal antibody was denominated 76C. The 76C was directed against mannoprotein molecules from Candida cell surface, which has not yet been completely investigated to find outlhe specific nature of epitope. The antibody 76C was analyzed by DOT BLOTagainst different Candida species and there were positives results in 87,5% of the tested samples_ The monoclonal antibody 76C will be a useful tool to investigate oligomannoside epitope from mannan and could be applied in sera diagnosis in invasive candidiasis and in studies of glicidic epitope / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-16Bitstream added on 2014-06-13T20:09:44Z : No. of bitstreams: 1 durao_fp_me_ilha.pdf: 1411774 bytes, checksum: b86b191770eac7faa5247647ef6dc46b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A utilização de ferramentas computacionais para estimular e facilitar o ensino tem se mos- trado uma tendência. Em vista disto, foi criada uma proposta para o desenvolvimento de um laboratório de automação e máquinas elétricas acessível remotamente. Foram feitas pesquisas por softwares gratuitos e de código aberto para a criação de um servidor de aplicações SCADA. Optou-se pela utilização de dois softwares supervisórios, o ScadaBR que é o principal utilizado neste trabalho e o iPHC, voltado para acesso por celulares e dispositivos móveis. Foi implemen- tado com sucesso um servidor web para aplicações SCADA, desenvolvido sobre a plataforma Linux. Também foi criado um processo de mistura de líquidos e um ensaio virtual de motor de indução trifásico no ScadaBR e iPHC, os quais podem ser realizados e supervisionados a distância. A supervisão e a integração dos supervisórios mostrou a viabilidade da criação do laboratório remoto utilizando softwares gratuitos e de cógido aberto / The use of computational tools to encourage and facilitate teaching have shown a trend. In view of this, we created a proposal for the development of a laboratory automation and electrical machines remotely accessible. Research was done by free software and open source to create a server SCADA applications. We opted for the use of two supervisory software, ScadaBR which is the main used in this study and IPHC, to access from mobile phones and mobile devices. Successfully implemented a web server for SCADA applications, developed on the Linux platform. They also created a process of mixing liquids and a virtual testing of induction motor three-phase in ScadaBR and iPHC, which can be performed and supervised from a distance. The integration of supervisory oversight and showed the feasibility of the remote laboratory using free software and open source

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-11-17Bitstream added on 2014-06-13T19:48:54Z : No. of bitstreams: 1 rapanello_rm_me_ilha.pdf: 1922181 bytes, checksum: f51fd8af3ee67a87d783c8707f8a7040 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Com a crescente importância do estudo da Qualidade da Energia Elétrica, o objetivo deste trabalho é disponibilizar um Laboratório Remoto de Qualidade da Energia para acionamento via Internet - LRQEE. Na sua concepção, o LRQEE destaca-se pelos vários recursos técnicos disponibilizados e pela agilidade na integração entre instituições de ensino, contribuindo em muito para a evolução do aprendizado e racionalização no uso dos recursos financeiros. Permite o acesso e controle a diversos equipamentos e cargas que possibilitam o apoio ao ensino prático à distância e um melhor entendimento do assunto em pauta. No texto enfoca-se a utilização do ambiente laboratorial para o ensino da qualidade da energia, utilizando conhecimentos teóricos e implementações práticas. Propõe-se a montagem de simulações de diversos experimentos, cuja realização é conseguida utilizando-se como ferramenta principal o software LabVIEW da National Instruments para controle dos dispositivos e equipamentos e também programação PHP para controle do acesso via internet pelos usuários. Com as diversas experiências de laboratório possíveis, e o controle dos equipamentos via internet, é fornecida, ao aluno ou pesquisador, a possibilidade de ampliar seus conhecimentos, proporcionada pelo fato de que eles têm a oportunidade de realizar experiências relevantes para o estudo da qualidade da energia elétrica, e colocar em prática os conhecimentos adquiridos nas disciplinas relacionadas ao tema. / With the increasing importance of the study of the Electric Power Quality, the objective of this work is to make available a Remote Laboratory of Electric Power Quality via Internet for electric drive - LRQEE. In its basic conception, the LRQEE stands out for the several made available technical resources and for the agility in the integration among teaching institutions, contributing a lot to the evolution of the learning as well to the rationalization in the use of the financial resources. It allows the access and control to several pieces of equipment and loads that make it possible the support to a long distance practical teaching and a better understanding of this subject. In the text it is focused use of the laboratorial environment for the education of the quality of the power, using theoretical knowledge and practical implementations. It is considered assembly of simulation of diverse experiments, whose accomplishment is obtained using itself as main tool LabVIEW software of the National Instruments for control of the devices and equipment and also programming PHP for control of the access saw Internet for the users. With the diverse experiences of laboratory proposals, and the control of the equipments way Internet, is supplied, to the pupil or researcher, the possibility to extend ours knowledge, proportionate for the fact of that they have the chance to make excellent experiences for the study of the quality of the electric power, and to place in practical the knowledge acquired in disciplines them related to the subject.

Orientador: Lineu Cesar Werneck / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná. Curso de Pós-Graduação em Medicina Interna / Sem resumo e abstract

Made available in DSpace on 2016-11-30T14:53:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 110923_Drielly.pdf: 1423856 bytes, checksum: 49d3213badf69244142db38f9743998d (MD5) license.txt: 214 bytes, checksum: a5b8d016460874115603ed481bad9c47 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introducao: A sepse e uma importante complicacao infecciosa na area da saude, tanto para sua incidencia e severidade, bem como para o seu potencial de progressao a morte. Estrategias futuras de tratamento podem se concentrar no equilibrio entre as acoes imunes e antiinflamatorias em tempo habil. Objetivo: Avaliar a influencia da administracao de lipolissacarideo (LPS) no periodo neonatal sobre a disfuncao cerebral em ratos submetidos a sepse polimicrobiana severa na idade adulta. Metodos: Ratos Wistar machos com idade de 14 dias foram tratados com LPS (100 ¿Êg/kg) ou salina, intraperitoneal. Completando 60 dias de idade, foram submetidos ao modelo de sepse por ligacao e perfuracao cecal (CLP). Os grupos foram divididos em salina+sham, LPS+sham, salina+CLP e LPS+CLP, 24 horas apos CLP, foi avaliado no liquido cefalorraquidiano (LCR), as citocinas (TNF-¿¿, IL-1¿À e IL-6) os niveis de nitrito e nitrato (N/N). No hipocampo e cortex pre-frontal foi avaliado a mieloperoxidase (MPO), dano oxidativo em lipidios (TBARS), proteinas carboniladas,grupamentos sulfidrilas (SH), atividade da catalase (CAT), superoxido dismutase (SOD) e a permeabilidade da barreira hematoencefalica (BHE). Resultados: Demonstrou-se que os niveis de citocinas e de N/N estao aumentados no grupo CLP e o LPS foi eficaz em reduzir somente os niveis de citocinas. Na MPO e grupamentos SH, nao foram observados resultados significativos. No dano em lipidios e proteinas encontrou-se no pre-frontal um aumento dos niveis no grupo CLP, em ratos pre-imunizados com LPS houve uma diminuicao desses niveis. Na atividade das enzimas antioxidantes, houve uma diminuicao dos niveis somente na CAT, no hipocampo, no grupo imunizado. Para a quebra da BHE, houve um aumento nos grupos CLP, o grupo imunizado diminuiu seus niveis, no pre-frontal. Conclusao: O pre-tratamento com LPS preveniu o dano de marcadores ligados a inflamacao e ao estresse oxidativo, e diminuiu a permeabilidade da BHE apos a sepse na idade adulta. / Introduction: The sepsis is an important infectious complication in the health area, both for its incidence and severity, and for its potential of progression to death. Future strategies of treatment can concentrate on the balance among the immune and anti-inflammatory actions in time. Aim: Evaluate the influence of the administration of lipopolysaccharide (LPS) in the neonatal period over the brain dysfunction in rats submitted to severe polymicrobial sepsis at adult age. Methods: Male Wistar rats at 14 days of age treated with LPS (100 ìg/kg) or saline, intraperitoneal. At 60 days of age, the rats were submitted to the sepsis model by cecal ligation puncture (CLP). The groups were divided in saline+sham, LPS+sham, saline+CLP and LPS+CLP, 24 hours after CLP, the cerebrospinal fluid (CSF) was evaluated, besides the cytokines (TNF-á, IL-1â e IL-6) and the levels of nitrite and nitrate (N/N). On hippocampus and prefrontal cortex was evaluated the myeloperoxidase (MPO), oxidative damage to lipids (TBARS), carbonyl proteins, sulfhydryl groups (SH), catalase activity (CAT), superoxide dismutase (SOD) and the permeability of the blood-brain barrier (BBB). Results: We have demonstrated that the cytokine levels and N/N are increasing in the group CLP and LPS was effective in reduce only the cytokine levels. In MPO and SH groups, we have not observed significant results. In the damage to lipids and proteins, we have found in the prefrontal an increase of the levels in the group CLP and in rats preimmunized with LPS there was a decrease of these levels. In the activity of the antioxidant enzymes there was a reversal of the levels only in CAT, in the hippocampus, in the immunized group. For the breaking of BHE, there was an increase in the groups CLP, the immunized group decreased its levels, in the prefrontal. Conclusion: The pretreatment with LPS prevented the damage of markers connected to inflammation and oxidative stress, and decreased the permeability of BBB after the sepsis at adult age.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437829-Texto+Completo-0.pdf: 3097644 bytes, checksum: 63052063f3fb08648c7ca5a4506262bc (MD5) Previous issue date: 2011 / The genus Angiostrongylus Kamensky, 1905 belongs to the Phylum Nematode, with round shape as its main feature. Two species have medical importance, A. costaricensis living in mesenteric arteries of wild mice and causing abdominal angiostrongyliasis in human and A. cantonensis which lives in pulmonary arteries of rats and may cause eosinophilic meningoencephalitis in humans. The diagnosis of both diseases is difficult due to absence of parasite in feces in case of the infection by A. costaricensis and seldom detected larvae in the cerebrospinal fluid in case of eosinophilic meningoencephalitis. Several studies have been performed to improve the diagnosis of angiostrongyliasis which should be able to differentiate in a specific and sensitive way among other parasitic infections. The 31kDa antigen has been considered the main antigen for eosinophilic meningoencephalitis diagnosis due to A. cantonensis infection. However this antigen is obtained from crude extracts of the worm by a laborious process of purification with low yielding and insufficient amount for large distribution to other diagnostic centers. In order to improve the serologic diagnostic of angiostrongyliasis and make the antigens widely available the present work aimed to identify new antigenic targets and also characterize the 31kDa antigen for further recombinant production. Besides that, essential molecules for parasite survival were investigated which in the future may be targets for disease treatment. Two sources of antigen from female worms were used: excretion and secretion products (ES) and total extract (TE). In ES, sample antioxidant enzymes activity were detected such as catalase and superoxide dismutase. Also was identified by Western blot and Mass spectrometry (MS), 17 proteins target for disease diagnosis and treatment like hemoglobinases, heat shock proteins and proteases inhibitors. In TE sample antioxidant enzymes as well as glutathione transferases (GST) which is another kind of defense enzyme were also detected. GSTs were purified by affinity chromatography and analyzed by MS. Peptide sequences from this experiment matched with homologous sequences of sigma class GST. In TE samples was possible to characterize the 31kDa and after two-dimensional electrophoresis was shown to be composed of four spots around 4. 5 of isoelectric point (pI) and being recognized by sera from patients infected with Angiostrongylus spp. The spots were analyzed by MS and three different proteins were identified: 14-3-3 protein, NAC domain containing protein, and epsilon subunit of the coatomer protein complex isoform 2. The 31kDa antigen was characterized as a glycoprotein through studies of oxidation of carbohydrate where it was observed that the antigenicity of four spots was dependent on sugar residues. The DNA sequences of the antigens were obtained by random sequencing of the genome for 454 platform (Roche) and deposited in Genbank. The data generated in this study contribute significantly to the development of recombinant antigens that may be widely distributed for independent diagnostic validation. / O gênero Angiostrongylus Kamensky, 1905 agrupa animais pertencentes ao filo Nematoda, cuja característica marcante é a forma corporal cilíndrica. Duas espécies possuem importância médica: A. costaricensis cujo habitat natural são as artérias mesentéricas de camundongos silvestres e na infecção humana pode levar ao desenvolvimento de angiostrongilíase abdominal; e A. cantonensis que habita as artérias pulmonares de roedores e na infecção humana pode causar meningoencefalite eosinofílica. O diagnóstico de ambas as doenças é dificultado pela ausência de formas parasitárias nas fezes, no caso de infecções por A. costaricensis e raramente encontradas no líquido cefaloraquidiano no caso de meningoencefalite eosinofílica. Muitos estudos vêm sendo desenvolvidos para o aprimoramento da detecção das angiostrongilíases visando testes que sejam capazes de discernir das diferentes infecções parasitárias de forma sensível e específica. O antígeno de 31kDa é considerado atualmente o principal antígeno para o diagnóstico da meningoencefalite eosinofílica, causada por A. cantonensis, entretanto é proveniente da purificação de extratos brutos do parasito o que acarreta num processo laborioso e dispendioso que em última análise gera quantidades insuficientes para que haja ampla distribuição e compartilhamento entre os centros de diagnóstico. Com o intuito de aprimorar o diagnóstico sorológico das angiostrongilíases e tornar os antígenos disponíveis globalmente o presente trabalho buscou identificar novos alvos antigênicos e caracterizar o antígeno de 31kDa para posterior propagação de formas recombinantes. Além disso, foram estudadas moléculas que podem ser fundamentais na manutenção do parasitismo, que futuramente poderão ser alvos para o tratamento das angiostrongilíases. Duas fontes de antígenos a partir de vermes adultos fêmeas foram empregadas: produtos de excreção e secreção (ES) e extrato bruto (TE). Nos ES foi detectada a atividade de enzimas antioxidantes como catalase e superóxido dismutase e identificadas, por western blot e espectrometria de massas (MS), 17 proteínas alvo para o diagnóstico e tratamento das angiostrongilíases dentre elas hemoglobinases, proteínas de choque térmico e inibidores de proteases. Nas amostras de TE além da identificação de enzimas antioxidantes, estavam presentes glutationas transferases (GST), outra classe de enzimas de defesa. Estas proteínas foram purificadas por cromatografia de afinidade e analisadas por MS o que revelou sequencias peptídicas homólogas a GST de classe sigma. Em TE também foi possível a caracterização do antígeno de 31kDa que quando submetido a eletroforese bidimensional mostrou-se ser composto por 4 spots com ponto isoelétrico (pI) em torno de 4,5 sendo reconhecidos pelo soro de pacientes infectados com Angiostrongylus spp. Os spots foram analisados por MS e três diferentes proteínas foram identificadas: 14-3-3; proteína com domínio NAC e a subunidade épsilon do coatamero. O antígeno de 31kDa foi caracterizado como uma glicoproteína através de estudos de oxidação de glicídeos, onde se observou que a antigenicidade dos 4 spots foi dependente de resíduos de açúcar. As sequências de DNA dos antígenos foram obtidas pelo sequenciamento aleatório do genoma pela plataforma 454 (Roche) e depositadas no Genbank. Os dados gerados no presente trabalho contribuem de forma significativa para o desenvolvimento de antígenos recombinantes que poderão ser amplamente distribuídos para validação e aplicação em diagnóstico.

Made available in DSpace on 2014-11-04T01:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000462324-Texto+Completo-0.pdf: 3205960 bytes, checksum: 9ae99a266b918522a991ea13e531b2fb (MD5) Previous issue date: 2014 / Schistosomiasis is endemic in 74 countries, affecting more than 200 million people. In Brazil, Schistosoma mansoni is the only causative agent of schistosomiasis, which affects 19 states. Control measurements and effective treatment can result in a decrease of the parasitic load of individuals with the severe form. In this matter, when diagnostic methods with adequate sensitivity for monitoring are not used, those measurements may difficult diagnosis, favoring the persistence of the infection for long periods, as well as the environmental contamination and consequently exposure to local population reinfection. In these areas, or where there was recent introduction of S. mansoni, classic parasitological methods to find eggs in feces are not efficient. Although immunological and molecular techniques are currently considered as main diagnostic tools, parasitological methods re necessary to confirm the infection. Helmintex™ has been recently described as highly sensitive diagnostic method that isolates eggs from 30 gram of feces through the interaction of eggs with paramagnetic microspheres in a magnetic field. Despite the sensibility, its limitation lies in the number of slides to be analyzed, making the process time consuming and not applicable for clinical routine. In this context, this work opens perspectives for the use of new tools in an attempt to optimize S. mansoni egg detection in the last step of the Helmintex™, using chemiluminescence, and ninhydrin staining. Another alternative tested was the ninhydrin staining. Helmintex™ sediments containing S. mansoni eggs were fixed with 70% ethanol and deposited on Whatman Grade 541 filter paper, immersed in a solution of ninhydrin:ethanol (30: 70 %) for later eggs visualization at the optical microscope. Reading time for each filter was counted and registered. Ideal conditions for incubation with ninhydrin were established in 15 minutes at 24 °C. Reading time for each sample was, in general, of 23 minutes. When compared to the original Helmintex™ method, the use of ninhydrin decreased the reading time of the final sediment in, at least, 450 minutes. The results of this work showed that the implementation of new tools in existent diagnostic methods may contribute to a better performance of sensitive techniques with limited application in field studies, and open perspectives to new studies that aim to investigate and to optimize primordial steps of concentration methods. / A esquistossomose é endêmica em 74 países, afetando mais de 200 milhões de pessoas. No Brasil, o Schistosoma mansoni é o único agente etiológico da esquistossomose, que atinge 19 estados. Medidas de controle e tratamento efetivo podem resultar em diminuição da carga parasitária de indivíduos com a forma severa da doença. Assim, quando não forem utilizados métodos diagnósticos com sensibilidade adequada para acompanhamento, essas medidas podem dificultar o diagnóstico, favorecendo a permanência da infecção por longos períodos, além da contaminação ambiental e consequentemente a exposição à população local à reinfecção. Nestas áreas, ou onde ocorreu introdução recente de S. mansoni, os métodos parasitológicos clássicos para encontrar ovos nas fezes não demonstram eficácia. Embora as técnicas imunológicas e moleculares sejam consideradas atualmente as principais ferramentas de diagnóstico, são necessários métodos parasitológicos para a confirmação da infecção. Recentemente, o Helmintex® foi descrito como um método diagnóstico altamente sensível que isola ovos a partir de 30 gramas de fezes através da interação dos ovos com microesferas paramagnéticos em um campo magnético. Apesar da sensibilidade, sua limitação está no número de lâminas a serem analisadas, tornando o processo demorado e inviável para aplicação na rotina clínica. Neste contexto, este trabalho abre perspectivas para a utilização de novas ferramentas na tentativa de otimizar a detecção de ovos de S. mansoni na última etapa do método Helmintex®, utilizando a quimioluminescência, e a coloração por ninidrina. Outra alternativa testada foi a coloração do sedimento final com ninidrina. Os sedimentos de Helmintex® contendo ovos de S. mansoni foram fixados com etanol 70 % e depositados em papel filtro Whatman Grau 541, imersos em uma solução de ninidrina:etanol (30:70%) para posterior visualização dos ovos corados em microscópio óptico. O tempo de leitura de cada filtro foi cronometrado. As condições ideais para incubação com a ninidrina foram estabelecidas em 15 minutos à 24 °C. O tempo de leitura para cada amostra foi, em média, de 23 minutos. Em comparação com o método Helmintex® original, a utilização de ninidrina diminuiu o tempo de leitura do sedimento final em, ao menos, 450 minutos. Os resultados deste trabalho mostraram que a implementação de novas ferramentas em métodos diagnósticos já existentes podem contribuir para um melhor desempenho de técnicas sensíveis, porém com aplicação limitada em estudos de campo, e abrem perspectivas para novos estudos que visam investigar e otimizar etapas primordiais de métodos de concentração.