Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2009. / Bibliogr.: f. [110]-120. Publié aussi en version électronique dans la Collection Mémoires et thèses électroniques.

Au cours de ces dernières années, le développement de la métagénomique a permis d'étendre notre compréhension du microbiote et de son rôle dans la santé de l'Homme. L'utilisation de probiotiques apparaît comme une opportunité thérapeutique pour lutter contre d'éventuelles dysbioses, mais elle nécessite au préalable une recherche accrue dans la compréhension de leurs mécanismes d'action. La souche probiotique Lactobacillus rhamnosus Lcr35®, produite depuis 1951 par les Laboratoires LYOCENTRE et commercialisée par la société PROBIONOV, constitue le principe actif de produits pharmaceutiques. Notre travail a consisté à comparer certaines propriétés "probiotiques" de cette souche bactérienne à quatre de ses préparations commerciales. Trois de ces formulations sont indiquées pour des applications intestinales : BACILOR (API Lcr Restituo® sachet ou de l'API Lcr Restituo® gélule) et FLOREA (API Lcr Lenio®). Le quatrième produit étudié, GYNOPHILUS (API Lcr Regenerans®), est indiqué pour lutter contre les dysbioses vaginales. Nous avons montré que les différents traitements subis par le micro-organisme au cours des cycles industriels généraient des modifications de ses propriétés. Ainsi, les formes APIs, notamment Lcr Lenio®, sont plus résistantes à un stress gastrique que la souche native. De même, les capacités d'adhésion de la souche vis-à-vis de cellules épithéliales intestinales Caco-2 sont augmentées suite au passage dans un cycle industriel. La caractérisation de l'enveloppe bactérienne et de ses variations de composition en fonction du cycle industriel a permis de montrer que la souche native présentait un profil d'hydrophobicité différent de celui obtenu avec les souches issues des APIs. Ces variations n'ont pourtant pas permis de mettre en évidence de variation dans les capacités d'agrégation de la souche. Inversement, l'analyse du profil d'expression de gènes codant potentiellement des protéines sécrétées ou transmembranaires ou impliquées dans des processus d'adhésion montrent des variations entre la souche native et les APIs testés. Le traitement de la souche par un cycle entraine également des modifications de ses capacités métaboliques. L'API Lcr Regenerans® voit ainsi son aptitude à dégrader le glycogène et son potentiel bactéricide et fongicide fortement augmentés. Ces résultats suggèrent que le processus de fabrication influe sur les propriétés chimiques et la composition des protéines de la paroi cellulaire bactérienne. L'étude des modifications apportées par les processus industriels devra être approfondie afin de mieux adapter les souches probiotiques d'intérêt à la conception de produits manufacturés parfaitement adaptés aux visées thérapeutiques. / In recent years, the development of metagenomics has expanded our understanding of the role played by our microbiota on our health. The use of probiotics appears to be a therapeutic opportunity but requires more research to understand their mechanisms of action. The probiotic strain Lactobacillus rhamnosus Lcr35 ®, produced since 1951 by Lyocentre Laboratories and marketed by PROBIONOV, is the active ingredient of pharmaceutical products. Our work was to compare some "probiotic" properties of bacterial strain Lactobacillus rhamnosus Lcr35 ® versus four of its commercial preparations. Three of these formulations are suitable for intestinal applications: BACILOR (API Lcr Restituo ® packet or API Lcr Restituo ® capsule) and FLOREA (API Lcr Lenio ®). The fourth product studied GYNOPHILUS (API Lcr Regenerans ®) which is indicated for the fight against vaginal dysbiosis. We have shown that the different treatments of the microorganism in industrial processes generated changes to its properties. We found that APIs forms increased the resistance of the strain to gastric stress; Lcr Lenio ® offers the most resistance. Similarly, adherence capacities of the strain were increased in Caco-2 cells following industrial processes. Characterization of the bacterial envelope and its composition were changed depending on the industrial cycle and showed that the native strain expressed a hydrophobicity profile different from the APIs. However, these changes have not show variation in the aggregation capabilities of the strain. Conversely, analysis of the expression pattern of genes encoded potentially for secreted or trans-membrane proteins show variations between the native strain and the APIs tested. Treatment of the strain by an industrial manufacturing also allowed for changes in its metabolic capabilities. The API Lcr Regenerans ® sees these abilties as glycogen degradation and its bactericidal and fungicidal potential greatly increased. These results suggest that the manufacturing process affects the chemical properties and protein composition of the cell wall. The study of changes in industrial processes must be thorough in order to better adapt the probiotic strains in the design of manufactured products perfectly suited for therapeutic purposes.

Magister En Ciencias Odontológicas Con Mención En Cariología / INTRODUCCIÓN. Laclobaci/¡us rhamnosus es una bacteria probiótica ampliamente estudiada en el área de la medicina y la odontología y que ha demostrado presentar antagonismo con diversas bacterias orales en estudios clínicos e in vitro, incluyendo mutans streptococci (MS). Se ha sugerido además. que reduce la incidencia de caries en niños. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto del consumo diario de leche enriquecida con Lactobaciilus rhamnosus SP1, en la incidencia de canes y en el recuento salival de mutans streptococci (MS) y Laciobacìllus spp. en niños preescolares, en comparación a aquellos que consumieron regularmente leche sin probióticos. MATERIALES Y MÉTODOS. Ensayo clínico comunitario controlado aleatorizado por conglomerados. triple ciego. La población objetivo estuvo compuesta por preescolares de 2 a 3 años, que asistieron a establecimientos educacionales pertenecientes a la Fundación Integra. Región Metropolitana. Santiago. Chile. La muestra consistió de 261 'niños en total. Se conformaron dos grupos: experimental y control, previo consentimiento informado de los apoderados. Los niños asignados al grupo experimental recibieron 150 ml de leche parcialmente descremada con 107 UFC/mi de Lactobaci/lus rhamnosus SP1 (Sacco, italia), mientras que los asignados al grupo control recibieron 150 ml de la misma leche sin la cepa probiótica (Macro Food S.A4 Santiago, Chile). Se realizaron exámenes clínicos según criterio ICDAS ll para determinar incidencia de lesiones de caries y exámenes microbiológicos de saliva al inicio y final de la intervención. Se calcularon las diferencias en el recuento bacteriano (para MS y Lactobaci//us spp.) y la incidencia de caries para ambos grupos, posterior a 14 meses de consumo. RESULTADOS. El 34.1% de los individuos del grupo probiotico presentaron lesiones cavitadas versus el 53,4% encontrado en el grupo control, OR de 0,50 en favor del grupo probiótico (p<0,05). El número de nuevos individuos que desarrollaron lesiones cavitadas fue significativamente mayor en el grupo control (315%) que en el grupo que consumió probióticos (19,3%), OR de 0,38 (p<0,05) en favor del consumo de probiótico. Tras el periodo de consumo de leche se observó una disminución en el recuento bacteriano de MS y de Lactobaci//us spp. en ambos grupos de estudio (p>0,05). CONCLUSIONES. El consumo diario a largo plazo (durante 14 meses) de leche suplemenfada con Lacfobacil/us rhamnosus SP1 reduce la incidencia de caries en niños en edad preescolar y no afecta el recuento salival de mutans streptococci ni de Lactobacillus spp.

L'augmentation de la prévalence de l'obésité observée au cours des trois dernières décennies a favorisé le développement de la recherche afin de mieux comprendre les effets d'un mode de vie moderne sur l'équilibre énergétique, la composition corporelle et la santé métabolique. Depuis maintenant quelques années, on compte le microbiote intestinal parmi les déterminants de l’obésité car celui-ci aurait un impact sur l'équilibre énergétique chez les humains. Les probiotiques et les prébiotiques sont reconnus pour avoir des effets bénéfiques sur la santé en améliorant, entre autres, l'équilibre microbien intestinal. Des études récentes suggèrent que les probiotiques et les prébiotiques peuvent améliorer l'équilibre énergétique chez les humains en modulant le microbiote intestinal. Jusqu'à présent, quelques groupes de chercheurs ont étudié l'impact de certaines souches de probiotiques sur le poids corporel et les variables métaboliques. Cette thèse a donc pour but de présenter les résultats novateurs d’une étude visant à évaluer l'impact d'une formulation de Lactobacillus rhamnosus CGMCC1.3724 (LPR) sur la perte de poids et sur le maintien du poids chez les hommes et les femmes obèses. Plusieurs autres variables d’intérêt seront également présentées dans cette thèse. / The increase in the prevalence of obesity over the last three decades has fostered the development of research to better understand the effects of a modern lifestyle on energy balance, body composition and metabolic health. For a few years now, the intestinal microbiota has been one of the determinants of obesity because it has an impact on energy balance in humans. Probiotics and prebiotics are known to have beneficial effects on health by improving, among other things, the intestinal microbial balance. Recent studies suggest that probiotics and prebiotics can improve energy balance in humans by modulating the intestinal microbiota. So far, some groups of researchers have studied the impact of certain strains of probiotics on body weight and metabolic variables. This thesis aims to present the innovative results of a study that evaluated the impact of a formulation of Lactobacillus rhamnosus CGMCC1.3724 (LPR) on weight loss and weight maintenance in obese men and women. Several other variables of interest will also be presented in this thesis.

O trabalho teve por finalidade avaliar o efeito da adição de cepa de bactéria ácido-lática e biomassa de Saccharomyces cerevisiae resultante da fermentação alcoólica de cerveja em rações sobre o desempenho de frangos de corte intoxicados com aflatoxina B1 (AFB1). Para este fim, selecionou-se a cepa bacteriana (Lactobacillus rhamnosus, LYO) que apresentou maior crescimento celular médio, sendo seca posteriormente. O resíduo da fermentação alcoólica (RFC) contendo S. cerevisiae foi obtido em microcervejaria, seco e triturado. Preliminarmente, foram realizados ensaios in vitro para avaliação da capacidade de remoção da AFB1 pela LYO (inviabilizada por tratamento térmico a 121ºC por 15 minutos, em solução ou seca por atomização ou por liofilização) e RFC em solução tampão (pH 3,0 e 6,0) a 25ºC. O experimento in vivo foi conduzido utilizando-se 200 pintos machos de um dia de idade, provenientes de matrizes comerciais de frangos de corte. As aves foram distribuídas aleatoriamente em 8 tratamentos com 25 aves cada, em arranjo fatorial 2 x 2 x 2, correspondendo a dois níveis (0 e 2.000 µg/kg) de incorporação de AFB1 às rações e dois níveis (0 e 1%) de incorporação de LYO (seca por atomização) e RFC. As aves receberam as rações experimentais do 1º ao 21º dia de vida. Semanalmente, avaliou-se o ganho de peso (GP), consumo de ração (CR) e a conversão alimentar (CAL), e ao término do experimento, determinou-se a viabilidade das aves sobreviventes comparado ao total. Análises de bioquímica sérica aos 14 e 21 dias das aves incluíram a determinação de proteína total (PT), glicose (GLI), albumina (ALB), globulina (GLO), cálcio (CA), ácido úrico (AU) e as enzimas aspartato-amino-transferase (AST) e gama-glutamil-transferase (GGT). Ao final do período de intoxicação, todas as aves foram sacrificadas e pesadas, determinando-se o peso relativo do fígado, rins e bursa de Fabricius, além das análises histopatológicas desses órgãos. Nos ensaios in vitro, LYO em solução conseguiu remover a AFB1 em 46,0% e 35,8% em pH 3,0 e 6,0, respectivamente, enquanto que RFC mostrou-se capaz de adsorver a AFB1 em 50,5% e 48,5% nos respectivos valores de pH. No entanto, LYO atomizada perdeu completamente sua capacidade de adsorção, enquanto que LYO liofilizada conseguiu manter a sua habilidade em adsorver a AFB1 em 36,6% em pH 3,0 e 27,2% em pH 6,0. No estudo in vivo, os tratamentos com LYO isolada ou associada com RFC não apresentaram efeitos satisfatórios sobre as variáveis estudadas nos frangos de corte, exceto pelo aumento no CA, ALB, PT e GLO. O RFC resultou em uma maior amenização dos efeitos nos índices de produtividade e bioquímica sérica, como aumento do GP, ALB, PT, GLO e CA, além de diminuição das alterações histopatológicas, em comparação ao grupo controle. Os experimentos demonstraram que o RFC apresenta potencial para uso como aditivo anti-aflatoxinas para frangos de corte, e que novos estudos são necessários para viabilizar a produção em escala de LYO liofilizada para uso na alimentação animal. / The study aimed to evaluate the effect of adding strain of lactic acid bacteria and biomass of Saccharomyces cerevisiae from the beer alcoholic fermentation in diets on performance of broilers intoxicated with aflatoxin B1 (AFB1). For this purpose, the bacterial strain (Lactobacillus rhamnosus, LYO), which presented higher cell growth, was selected and subsequently dried. The residue of alcoholic fermentation (RAF) containing S. cerevisiae was obtained in microbrewery, dried and ground. Preliminarily, it was accomplished in vitro tests to evaluate the capacity of AFB1 removal by LYO (non-viable by heat treatment at 121ºC for 15 minutes, in solution or dried by spray-drying or lyophilization) and RAF in buffer solution (pH 3.0 and 6.0) at 25ºC. The in vivo test was conducted using 200 one day old male chicks, from arrays of commercial broilers. The birds were randomly assigned to 8 treatments with 25 birds each in a factorial 2 x 2 x 2, corresponding to two levels (0 and 2,000 µg/kg) of AFB1 incorporation to feed and two levels (0 and 1%) of incorporation of LYO (spray-dried) and RAF. The chicks received the experimental diets from 1st to 21st days of life. Weight gain (WG), feed intake (FI) and calculation of feed conversion (FC) were assessed weekly and at the end of the experiment, it was determined the viability of the surviving broilers compared to the total. Serum biochemical analysis at days 14 and 21 included the determination of total protein (TP), glucose (GLU), albumin (ALB), globulin (GLO), calcium (CA), uric acid (UA) and the enzymes aspartate-aminotransferase (AST) and gamma-glutamyl-transferase (GGT). At the end of the intoxication period, broilers of all treatments were sacrificed and weighed, determining the relative weights of liver, kidneys and bursa of Fabricius, beside the histopathological analysis of these organs. in vitro tests showed that LYO in solution could bind 46.0% and 35.8% of AFB1 at pH 3.0 and 6.0, respectively, while RFC was able to bind 50.5% and 48.5% of AFB1 the respective pH values. However, atomized LYO completely lost its adsorption capacity, whereas lyophilized LYO could maintain its ability to bind AFB1 by 36.6% at pH 3.0 and 27.2% at pH 6.0. in vivo study results demonstrated that the treatments with LYO, isolated or associated with RFC, showed no satisfactory effect on the variables analyzed in broilers, except for an increase in CA, ALB, PT and GLO. The use of RFC resulted in greater mitigation of effects on performance and serum biochemistry parameters, such as increased GP, ALB, PT, GLO and CA, besides the reduction of histopathological changes, compared to the control group. The experiments demonstrated that RFC has potential for use as anti-aflatoxin additive for broilers, and further studies are necessary to enable the scale production of LYO lyophilized for use in animal feed.

Introdução: Fibrose hepática é a resposta cicatricial a lesões celulares agudas ou crônicas do fígado. Produtos derivados do intestino podem chegar ao fígado através da veia porta e mediar resposta inflamatória via receptores TLR4. O aumento de citocinas inflamatórias induz a ativação de células estreladas, fibroblastos periportais e células de Kupffer. A ativação destas células estimula a secreção de TGFβ e a deposição excessiva de colágeno. Assim, a modulação da microbiota intestinal com uso de probióticos poderia reduzir a inflamação e fibrogênese hepática. Objetivo: Avaliar o efeito do Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) sobre a fibrose hepática em modelo de hepatopatia colestática crônica em ratos. Métodos: Ratos Wistar (n = 29) adultos machos (299,89g ± 42,89 g) foram submetidos a ligadura de ducto biliar (BDL) ou a manipulação de ducto biliar comum sem ligadura (Ctrl). Após 14 dias, os grupos foram novamente divididos para receber gavagens durante 14 dias: os grupos Ctrl e BDL receberam 1 ml de PBS e os grupos Ctrl-P e BDL-P, 1 ml de PBS contendo 2,5 × 107 UFC de LGG. A eutanásia ocorreu 5 dias após o término do tratamento quando foram coletados amostras de sangue e fígado. Resultados: A ligadura de ducto biliar promoveu redução no peso e na albumina plasmática acompanhado da elevação das provas de disfunção hepatobiliar em comparação aos grupos controle. O tratamento com LGG não alterou os parâmetros séricos ou o peso corporal dos animais. Não houve diferença na atividade de superóxido dismutase (SOD) entre os grupos. A atividade de catalase (CAT) e os níveis de sulfidrilas foram significativamente menores no grupo BDL em relação aos controles. O tratamento com LGG mostrou uma tendência ao aumento dos níveis de sulfidrilas. A razão SOD/CAT foi maior no grupo BDL em relação aos controles e o tratamento com LGG preveniu este desequilíbrio. O tratamento com LGG mostrou uma tendência a redução da razão SOD / CAT. A expressão gênica de Tlr4, Tnfα e Il6 e os níveis de IL1β foram maiores no grupo BDL em relação ao controle. O tratamento com LGG atenuou parcialmente a elevação de IL1β e Tlr4. O grupo BDL-P teve redução da expressão gênica de Il6 em relação ao grupo BDL. A expressão gênica de Tgfβ foi maior no grupo BDL em comparação ao Ctrl. A expressão de metaloproteinases 2 e 9 foi significativamente maior nos grupos BDL e BDLP, sem diferença em relação ao tratamento com LGG. A deposição de colágeno e a reação ductular avaliado pelo conteúdo de citoqueratina 7 (CK7) foi maior nos animais submetidos a ligadura de ducto biliar. O tratamento com LGG reduziu significativamente a deposição de colágeno e conteúdo de CK7 no fígado em comparação com grupo de BDL. Conclusão: O tratamento com LGG foi capaz de reduzir a fibrose hepática, a reação ductular e a expressão gênica de Il6 em modelo de hepatopatia colestática crônica em ratos. / Introduction: Liver fibrosis is a wound-healing response to acute or chronic cellular liver injury. Gut-derived products can reach the liver through the portal vein and mediate inflammatory response via TLR4. The increase of inflammatory cytokines induces the activation of stellate cells, periportal fibroblasts and Kupffer cells. The activation of these cells stimulates the secretion of TGFβ and the excessive collagen deposition. Thus, modulation of gut microbiota using probiotics could reduce inflammation and hepatic fibrogenesis. Aim: To evaluate the effect of Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) on liver fibrosis in a model of cholestatic liver disease in rats. Methods: Adult male (n = 29) Wistar rats (299.89 g ± 42.89 g) were subjected to bile duct ligation (BDL) or the manipulation of common bile duct without ligation (Ctrl). After 14 days, groups were again divided to receive gavagens during 14 days: Ctrl and BDL groups received 1 ml of PBS and Ctrl-P and BDL-P groups, 1 ml of PBS containing 2.5 × 107 CFU of LGG. Euthanasia occurred five days after the end of the treatment when were collected samples of blood and liver tissue. Results: The bile duct ligation promoted a reduction in body weight and plasma albumin levels followed by an increase of liver dysfunction parameters in comparison to control groups. LGG treatment did not change serum analyses or body weight of animals. There was no difference in superoxide dismutase activity (SOD) between groups. The catalase activity (CAT) and sulfhydryl levels were significantly lower in the BDL group compared to controls. Treatment with LGG showed a tendency to increase sulfhydryl levels. The SOD / CAT ratio was higher in BDL group compared to controls and treatment with LGG prevented this imbalance. Treatment with LGG showed a tendency to decrease SOD / CAT ratio. The gene expression of Tlr4, Tnfα and Il6 and IL1β levels were higher in the BDL group compared to the control. Treatment with LGG partially attenuated the increase of IL1β and Tlr4. The BDL-P group had decreasing in Il6 gene expression compared to the untreated group. The gene expression of Tgfβ was higher in the BDL group compared to the Ctrl. The expression of metalloproteinases 2 and 9 was significantly higher in BDL and BDL-P groups, with no difference in comparison to treatment with LGG. The collagen deposition and ductular reaction evaluated by the content of cytokeratin 7 (CK7) was higher in animals submitted to the bile duct ligation. The hepatic collagen deposition and CK7 content was significantly decreased in BDL-P compared to BDL group. Conclusion: Treatment with LGG was able to reduce liver fibrosis, ductular reaction and Il-6 gene expression in a model of chronic cholestatic liver disease in rats.

Introdução: Fibrose hepática é a resposta cicatricial a lesões celulares agudas ou crônicas do fígado. Produtos derivados do intestino podem chegar ao fígado através da veia porta e mediar resposta inflamatória via receptores TLR4. O aumento de citocinas inflamatórias induz a ativação de células estreladas, fibroblastos periportais e células de Kupffer. A ativação destas células estimula a secreção de TGFβ e a deposição excessiva de colágeno. Assim, a modulação da microbiota intestinal com uso de probióticos poderia reduzir a inflamação e fibrogênese hepática. Objetivo: Avaliar o efeito do Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) sobre a fibrose hepática em modelo de hepatopatia colestática crônica em ratos. Métodos: Ratos Wistar (n = 29) adultos machos (299,89g ± 42,89 g) foram submetidos a ligadura de ducto biliar (BDL) ou a manipulação de ducto biliar comum sem ligadura (Ctrl). Após 14 dias, os grupos foram novamente divididos para receber gavagens durante 14 dias: os grupos Ctrl e BDL receberam 1 ml de PBS e os grupos Ctrl-P e BDL-P, 1 ml de PBS contendo 2,5 × 107 UFC de LGG. A eutanásia ocorreu 5 dias após o término do tratamento quando foram coletados amostras de sangue e fígado. Resultados: A ligadura de ducto biliar promoveu redução no peso e na albumina plasmática acompanhado da elevação das provas de disfunção hepatobiliar em comparação aos grupos controle. O tratamento com LGG não alterou os parâmetros séricos ou o peso corporal dos animais. Não houve diferença na atividade de superóxido dismutase (SOD) entre os grupos. A atividade de catalase (CAT) e os níveis de sulfidrilas foram significativamente menores no grupo BDL em relação aos controles. O tratamento com LGG mostrou uma tendência ao aumento dos níveis de sulfidrilas. A razão SOD/CAT foi maior no grupo BDL em relação aos controles e o tratamento com LGG preveniu este desequilíbrio. O tratamento com LGG mostrou uma tendência a redução da razão SOD / CAT. A expressão gênica de Tlr4, Tnfα e Il6 e os níveis de IL1β foram maiores no grupo BDL em relação ao controle. O tratamento com LGG atenuou parcialmente a elevação de IL1β e Tlr4. O grupo BDL-P teve redução da expressão gênica de Il6 em relação ao grupo BDL. A expressão gênica de Tgfβ foi maior no grupo BDL em comparação ao Ctrl. A expressão de metaloproteinases 2 e 9 foi significativamente maior nos grupos BDL e BDLP, sem diferença em relação ao tratamento com LGG. A deposição de colágeno e a reação ductular avaliado pelo conteúdo de citoqueratina 7 (CK7) foi maior nos animais submetidos a ligadura de ducto biliar. O tratamento com LGG reduziu significativamente a deposição de colágeno e conteúdo de CK7 no fígado em comparação com grupo de BDL. Conclusão: O tratamento com LGG foi capaz de reduzir a fibrose hepática, a reação ductular e a expressão gênica de Il6 em modelo de hepatopatia colestática crônica em ratos. / Introduction: Liver fibrosis is a wound-healing response to acute or chronic cellular liver injury. Gut-derived products can reach the liver through the portal vein and mediate inflammatory response via TLR4. The increase of inflammatory cytokines induces the activation of stellate cells, periportal fibroblasts and Kupffer cells. The activation of these cells stimulates the secretion of TGFβ and the excessive collagen deposition. Thus, modulation of gut microbiota using probiotics could reduce inflammation and hepatic fibrogenesis. Aim: To evaluate the effect of Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) on liver fibrosis in a model of cholestatic liver disease in rats. Methods: Adult male (n = 29) Wistar rats (299.89 g ± 42.89 g) were subjected to bile duct ligation (BDL) or the manipulation of common bile duct without ligation (Ctrl). After 14 days, groups were again divided to receive gavagens during 14 days: Ctrl and BDL groups received 1 ml of PBS and Ctrl-P and BDL-P groups, 1 ml of PBS containing 2.5 × 107 CFU of LGG. Euthanasia occurred five days after the end of the treatment when were collected samples of blood and liver tissue. Results: The bile duct ligation promoted a reduction in body weight and plasma albumin levels followed by an increase of liver dysfunction parameters in comparison to control groups. LGG treatment did not change serum analyses or body weight of animals. There was no difference in superoxide dismutase activity (SOD) between groups. The catalase activity (CAT) and sulfhydryl levels were significantly lower in the BDL group compared to controls. Treatment with LGG showed a tendency to increase sulfhydryl levels. The SOD / CAT ratio was higher in BDL group compared to controls and treatment with LGG prevented this imbalance. Treatment with LGG showed a tendency to decrease SOD / CAT ratio. The gene expression of Tlr4, Tnfα and Il6 and IL1β levels were higher in the BDL group compared to the control. Treatment with LGG partially attenuated the increase of IL1β and Tlr4. The BDL-P group had decreasing in Il6 gene expression compared to the untreated group. The gene expression of Tgfβ was higher in the BDL group compared to the Ctrl. The expression of metalloproteinases 2 and 9 was significantly higher in BDL and BDL-P groups, with no difference in comparison to treatment with LGG. The collagen deposition and ductular reaction evaluated by the content of cytokeratin 7 (CK7) was higher in animals submitted to the bile duct ligation. The hepatic collagen deposition and CK7 content was significantly decreased in BDL-P compared to BDL group. Conclusion: Treatment with LGG was able to reduce liver fibrosis, ductular reaction and Il-6 gene expression in a model of chronic cholestatic liver disease in rats.

Introdução: Fibrose hepática é a resposta cicatricial a lesões celulares agudas ou crônicas do fígado. Produtos derivados do intestino podem chegar ao fígado através da veia porta e mediar resposta inflamatória via receptores TLR4. O aumento de citocinas inflamatórias induz a ativação de células estreladas, fibroblastos periportais e células de Kupffer. A ativação destas células estimula a secreção de TGFβ e a deposição excessiva de colágeno. Assim, a modulação da microbiota intestinal com uso de probióticos poderia reduzir a inflamação e fibrogênese hepática. Objetivo: Avaliar o efeito do Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) sobre a fibrose hepática em modelo de hepatopatia colestática crônica em ratos. Métodos: Ratos Wistar (n = 29) adultos machos (299,89g ± 42,89 g) foram submetidos a ligadura de ducto biliar (BDL) ou a manipulação de ducto biliar comum sem ligadura (Ctrl). Após 14 dias, os grupos foram novamente divididos para receber gavagens durante 14 dias: os grupos Ctrl e BDL receberam 1 ml de PBS e os grupos Ctrl-P e BDL-P, 1 ml de PBS contendo 2,5 × 107 UFC de LGG. A eutanásia ocorreu 5 dias após o término do tratamento quando foram coletados amostras de sangue e fígado. Resultados: A ligadura de ducto biliar promoveu redução no peso e na albumina plasmática acompanhado da elevação das provas de disfunção hepatobiliar em comparação aos grupos controle. O tratamento com LGG não alterou os parâmetros séricos ou o peso corporal dos animais. Não houve diferença na atividade de superóxido dismutase (SOD) entre os grupos. A atividade de catalase (CAT) e os níveis de sulfidrilas foram significativamente menores no grupo BDL em relação aos controles. O tratamento com LGG mostrou uma tendência ao aumento dos níveis de sulfidrilas. A razão SOD/CAT foi maior no grupo BDL em relação aos controles e o tratamento com LGG preveniu este desequilíbrio. O tratamento com LGG mostrou uma tendência a redução da razão SOD / CAT. A expressão gênica de Tlr4, Tnfα e Il6 e os níveis de IL1β foram maiores no grupo BDL em relação ao controle. O tratamento com LGG atenuou parcialmente a elevação de IL1β e Tlr4. O grupo BDL-P teve redução da expressão gênica de Il6 em relação ao grupo BDL. A expressão gênica de Tgfβ foi maior no grupo BDL em comparação ao Ctrl. A expressão de metaloproteinases 2 e 9 foi significativamente maior nos grupos BDL e BDLP, sem diferença em relação ao tratamento com LGG. A deposição de colágeno e a reação ductular avaliado pelo conteúdo de citoqueratina 7 (CK7) foi maior nos animais submetidos a ligadura de ducto biliar. O tratamento com LGG reduziu significativamente a deposição de colágeno e conteúdo de CK7 no fígado em comparação com grupo de BDL. Conclusão: O tratamento com LGG foi capaz de reduzir a fibrose hepática, a reação ductular e a expressão gênica de Il6 em modelo de hepatopatia colestática crônica em ratos. / Introduction: Liver fibrosis is a wound-healing response to acute or chronic cellular liver injury. Gut-derived products can reach the liver through the portal vein and mediate inflammatory response via TLR4. The increase of inflammatory cytokines induces the activation of stellate cells, periportal fibroblasts and Kupffer cells. The activation of these cells stimulates the secretion of TGFβ and the excessive collagen deposition. Thus, modulation of gut microbiota using probiotics could reduce inflammation and hepatic fibrogenesis. Aim: To evaluate the effect of Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) on liver fibrosis in a model of cholestatic liver disease in rats. Methods: Adult male (n = 29) Wistar rats (299.89 g ± 42.89 g) were subjected to bile duct ligation (BDL) or the manipulation of common bile duct without ligation (Ctrl). After 14 days, groups were again divided to receive gavagens during 14 days: Ctrl and BDL groups received 1 ml of PBS and Ctrl-P and BDL-P groups, 1 ml of PBS containing 2.5 × 107 CFU of LGG. Euthanasia occurred five days after the end of the treatment when were collected samples of blood and liver tissue. Results: The bile duct ligation promoted a reduction in body weight and plasma albumin levels followed by an increase of liver dysfunction parameters in comparison to control groups. LGG treatment did not change serum analyses or body weight of animals. There was no difference in superoxide dismutase activity (SOD) between groups. The catalase activity (CAT) and sulfhydryl levels were significantly lower in the BDL group compared to controls. Treatment with LGG showed a tendency to increase sulfhydryl levels. The SOD / CAT ratio was higher in BDL group compared to controls and treatment with LGG prevented this imbalance. Treatment with LGG showed a tendency to decrease SOD / CAT ratio. The gene expression of Tlr4, Tnfα and Il6 and IL1β levels were higher in the BDL group compared to the control. Treatment with LGG partially attenuated the increase of IL1β and Tlr4. The BDL-P group had decreasing in Il6 gene expression compared to the untreated group. The gene expression of Tgfβ was higher in the BDL group compared to the Ctrl. The expression of metalloproteinases 2 and 9 was significantly higher in BDL and BDL-P groups, with no difference in comparison to treatment with LGG. The collagen deposition and ductular reaction evaluated by the content of cytokeratin 7 (CK7) was higher in animals submitted to the bile duct ligation. The hepatic collagen deposition and CK7 content was significantly decreased in BDL-P compared to BDL group. Conclusion: Treatment with LGG was able to reduce liver fibrosis, ductular reaction and Il-6 gene expression in a model of chronic cholestatic liver disease in rats.

O trabalho teve por finalidade avaliar o efeito da adição de cepa de bactéria ácido-lática e biomassa de Saccharomyces cerevisiae resultante da fermentação alcoólica de cerveja em rações sobre o desempenho de frangos de corte intoxicados com aflatoxina B1 (AFB1). Para este fim, selecionou-se a cepa bacteriana (Lactobacillus rhamnosus, LYO) que apresentou maior crescimento celular médio, sendo seca posteriormente. O resíduo da fermentação alcoólica (RFC) contendo S. cerevisiae foi obtido em microcervejaria, seco e triturado. Preliminarmente, foram realizados ensaios in vitro para avaliação da capacidade de remoção da AFB1 pela LYO (inviabilizada por tratamento térmico a 121ºC por 15 minutos, em solução ou seca por atomização ou por liofilização) e RFC em solução tampão (pH 3,0 e 6,0) a 25ºC. O experimento in vivo foi conduzido utilizando-se 200 pintos machos de um dia de idade, provenientes de matrizes comerciais de frangos de corte. As aves foram distribuídas aleatoriamente em 8 tratamentos com 25 aves cada, em arranjo fatorial 2 x 2 x 2, correspondendo a dois níveis (0 e 2.000 µg/kg) de incorporação de AFB1 às rações e dois níveis (0 e 1%) de incorporação de LYO (seca por atomização) e RFC. As aves receberam as rações experimentais do 1º ao 21º dia de vida. Semanalmente, avaliou-se o ganho de peso (GP), consumo de ração (CR) e a conversão alimentar (CAL), e ao término do experimento, determinou-se a viabilidade das aves sobreviventes comparado ao total. Análises de bioquímica sérica aos 14 e 21 dias das aves incluíram a determinação de proteína total (PT), glicose (GLI), albumina (ALB), globulina (GLO), cálcio (CA), ácido úrico (AU) e as enzimas aspartato-amino-transferase (AST) e gama-glutamil-transferase (GGT). Ao final do período de intoxicação, todas as aves foram sacrificadas e pesadas, determinando-se o peso relativo do fígado, rins e bursa de Fabricius, além das análises histopatológicas desses órgãos. Nos ensaios in vitro, LYO em solução conseguiu remover a AFB1 em 46,0% e 35,8% em pH 3,0 e 6,0, respectivamente, enquanto que RFC mostrou-se capaz de adsorver a AFB1 em 50,5% e 48,5% nos respectivos valores de pH. No entanto, LYO atomizada perdeu completamente sua capacidade de adsorção, enquanto que LYO liofilizada conseguiu manter a sua habilidade em adsorver a AFB1 em 36,6% em pH 3,0 e 27,2% em pH 6,0. No estudo in vivo, os tratamentos com LYO isolada ou associada com RFC não apresentaram efeitos satisfatórios sobre as variáveis estudadas nos frangos de corte, exceto pelo aumento no CA, ALB, PT e GLO. O RFC resultou em uma maior amenização dos efeitos nos índices de produtividade e bioquímica sérica, como aumento do GP, ALB, PT, GLO e CA, além de diminuição das alterações histopatológicas, em comparação ao grupo controle. Os experimentos demonstraram que o RFC apresenta potencial para uso como aditivo anti-aflatoxinas para frangos de corte, e que novos estudos são necessários para viabilizar a produção em escala de LYO liofilizada para uso na alimentação animal. / The study aimed to evaluate the effect of adding strain of lactic acid bacteria and biomass of Saccharomyces cerevisiae from the beer alcoholic fermentation in diets on performance of broilers intoxicated with aflatoxin B1 (AFB1). For this purpose, the bacterial strain (Lactobacillus rhamnosus, LYO), which presented higher cell growth, was selected and subsequently dried. The residue of alcoholic fermentation (RAF) containing S. cerevisiae was obtained in microbrewery, dried and ground. Preliminarily, it was accomplished in vitro tests to evaluate the capacity of AFB1 removal by LYO (non-viable by heat treatment at 121ºC for 15 minutes, in solution or dried by spray-drying or lyophilization) and RAF in buffer solution (pH 3.0 and 6.0) at 25ºC. The in vivo test was conducted using 200 one day old male chicks, from arrays of commercial broilers. The birds were randomly assigned to 8 treatments with 25 birds each in a factorial 2 x 2 x 2, corresponding to two levels (0 and 2,000 µg/kg) of AFB1 incorporation to feed and two levels (0 and 1%) of incorporation of LYO (spray-dried) and RAF. The chicks received the experimental diets from 1st to 21st days of life. Weight gain (WG), feed intake (FI) and calculation of feed conversion (FC) were assessed weekly and at the end of the experiment, it was determined the viability of the surviving broilers compared to the total. Serum biochemical analysis at days 14 and 21 included the determination of total protein (TP), glucose (GLU), albumin (ALB), globulin (GLO), calcium (CA), uric acid (UA) and the enzymes aspartate-aminotransferase (AST) and gamma-glutamyl-transferase (GGT). At the end of the intoxication period, broilers of all treatments were sacrificed and weighed, determining the relative weights of liver, kidneys and bursa of Fabricius, beside the histopathological analysis of these organs. in vitro tests showed that LYO in solution could bind 46.0% and 35.8% of AFB1 at pH 3.0 and 6.0, respectively, while RFC was able to bind 50.5% and 48.5% of AFB1 the respective pH values. However, atomized LYO completely lost its adsorption capacity, whereas lyophilized LYO could maintain its ability to bind AFB1 by 36.6% at pH 3.0 and 27.2% at pH 6.0. in vivo study results demonstrated that the treatments with LYO, isolated or associated with RFC, showed no satisfactory effect on the variables analyzed in broilers, except for an increase in CA, ALB, PT and GLO. The use of RFC resulted in greater mitigation of effects on performance and serum biochemistry parameters, such as increased GP, ALB, PT, GLO and CA, besides the reduction of histopathological changes, compared to the control group. The experiments demonstrated that RFC has potential for use as anti-aflatoxin additive for broilers, and further studies are necessary to enable the scale production of LYO lyophilized for use in animal feed.

Riboflavin is an essential part of the human diet. Although the United States does not have a major problem with a riboflavin deficiency, other regions of the world do. This is especially true for those regions whose main subsistence is rice. To help prevent and control riboflavin deficiencies, many cereal grains are now being fortified with riboflavin. The recommended dietary allowance of riboflavin is 1.1-1.6 mg per day. This value increases slightly for pregnant women, breast feeding women, and athletes. Because riboflavin is an essential part of the diet, it is important to ensure that the minimum requirements for this nutrient are met. By determining the amount of riboflavin in food products, an accurate estimate of daily riboflavin intake can be determined. The AOAC (Association of Official Analytical Chemists) approved microbiological riboflavin assay can be tedious and time consuming. A faster approach to the riboflavin assay would greatly benefit the food industry. By scaling down the assay to microtiter plates both, time and materials can be conserved. Use of microtiter plates would also allow for numerous samples to be assayed simultaneously. The goal for developing the microtiter plate assay is to obtain results more rapidly while maintaining the accuracy and precision of the AOAC ( method 940.33I) tube assay.