Made available in DSpace on 2014-06-12T16:32:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6461_1.pdf: 1514992 bytes, checksum: 371b23e18f6865a5dc4d02abbedf5f97 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / É prioridade de saúde pública mundial a introdução de novos agentes anti-retrovirais no mercado, e no Brasil, o Ministério da Saúde (MS), de acordo com a lei n° 9.313/96, tem garantido distribuição gratuita de medicamentos a todos os portadores do HIV e doentes de AIDS , assegurando tratamento anti-retroviral adequado para cada estágio evolutivo da doença. Atualmente, são utilizadas quatro classes terapêuticas com esta finalidade: inibidores de transcriptase reversa análogos de nucleosideo, inibidores de transcriptase reversa não análogos de nucleosídeo, inibidores de protease e inibidores de fusão. Por se tratar de uma doença com alto nível de replicação, o vírus da imunodeficiência humana (HIV) contribui para a ocorrência de mutações e, conseqüentemente, resistência aos medicamentos existentes. O tratamento anti-retroviral padrão sempre deve incluir três fármacos, podendo ser utilizados separadamente ou na forma de dose-fixa-combinada, sendo esta última, a melhor opção, uma vez que este tipo de esquema resulta em melhor adesão e conseqüentemente, diminuição do índice de falhas na terapia. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de comprimido revestido dose-fixa-combinada, à base de estavudina 40 mg, lamivudina 150 mg e nevirapina 200 mg em uma única forma farmacêutica, baseado em uma planificação quali-quantitativa dos excipientes, e sua obtenção através do método por via úmida. Para o processo de revestimento foram testados dois sistemas de dispersão com solvente aquoso. Como etapa inicial, realizou-se a caracterização dos insumos ativos. Também, foi realizado o desenvolvimento da metodologia analítica para doseamento do produto acabado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Os comprimidos revestidos desenvolvidos apresentaram qualidade aceitável do ponto de vista farmacotécnico, sendo a próxima etapa a transposição de escala e o estudo de estabilidade, com a finalidade de garantir a eficácia e a qualidade do medicamento desenvolvido. A produção desta associação é mais um passo para o tratamento da AIDS, visto que esta proposta terapêutica é inédita no país e garantirá uma maior eficácia aos tratamentos já utilizados, principalmente para países em desenvolvimento na América, Ásia e África

Made available in DSpace on 2016-06-23T12:15:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 10.pdf: 1850050 bytes, checksum: 804547cb3d127f0a68036007277f1488 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:38:02Z (GMT). No. of bitstreams: 3 10.pdf.txt: 197815 bytes, checksum: 58c7c3800c8f92b633ef651f0cc8dd67 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 10.pdf: 1850050 bytes, checksum: 804547cb3d127f0a68036007277f1488 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos/Farmanguinhos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), provocada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), é uma das mais importantes doenças infecciosas atualmente no mundo. Embora ainda não haja uma forma cientificamente comprovada de eliminar totalmente o vírus do organismo humano, a qualidade devida dos portadores melhorou significativamente com a introdução da terapia antiretroviral altamente ativa (HAART). A associação de lamivudina e zidovudina em comprimidos foi a primeira a ser aprovada pelo FDA e ainda é a mais utilizada no início do tratamento em pacientes naive. Por se tratar de um medicamento de importância estratégica para o combate à doença, é importante que os custos agregados à sua produção sejam minimizados, a fim de repassar tal redução ao seu preço final. O presente trabalho apresenta uma metodologia analítica por cromatografia a líquido de ultra eficiência para o doseamento simultâneo de ambos os fármacos, assim como de suas substâncias relacionadas, de forma mais rápida e econômica que os outros métodos cromatográficos descritos pelos documentos oficiais que contemplam tal produto. Tal método mostrou-se mais conveniente para a rotina de controle de qualidade e para estudos de estabilidade em uma indústria farmacêutica. O método foi desenvolvido e validado com sucesso nos níveis de seletividade, linearidade, precisão, exatidão, limite de quantificação e robustez,conforme determina a resolução RE 899 de 2003 publicada pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária para testes de teor e substâncias relacionadas. / The acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), caused by human immunodeficiency virus (HIV), currently is one of the most important infectious disease in the world. Although there is not yet a scientifically proven manner to completely eliminate the virus from the human body, the life quality of patients have significantly improved with the introduction of highly active antiretroviral therapy (HAART).The first association of drugs approved by the FDA was lamivudine and zidovudine and still is the most applied to begin the treatment of naïve patients. The costs associated with the production of this medicine must be minimized because it has a strategic importance to the treatment. This work presents a faster and cheaper analytical method by ultra performance liquid chromatography to assay and related substances than others described in the official papers. Therefore, it brings more convenience to be employed in quality control routine and stability analysis in a pharmaceutical industry. The method was developed and successfully validated in levels of selectivity, linearity, precision, accuracy, limit of quantification and robustness, as determined by the RE 899/2003 resolution for testing of content and related substances.

Este trabalho teve como objetivo propor novo método para estudar a permeabilidade de fármacos, utilizando epitélio intestinal de rã-touro (Rana catesbeiana) em método ex vivo, empregando células de Franz. Por utilizar epitélio intestinal, um material de descarte proveniente de um animal utilizado como alimento humano, pode ser considerado um método alternativo, pois não implica no sacrifício de animais. A quantidade de fármaco permeada foi determinada por método de eletroforese capilar com detecção ultravioleta e validado para os antivirais lamivudina, zidovudina e aciclovir, na presença de metoprolol e floridizina. O fármaco escolhido como modelo nos ensaios de permeabilidade foi a lamivudina. Para estabelecimento do protocolo experimental dos estudos de permeabilidade, foi proposta uma análise de variância three-way para verificar a influência na permeabilidade dos fármacos, das seguintes variáveis: secção intestinal, pH da solução de Ringer e temperatura. Foram determinados a quantidade total de fármaco permeado (Qt), o coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) e a constante de absorção de primeira ordem (ka). A partir da análise do planejamento experimental, os efeitos das variáveis não foram significativos, exceto para a secção intestinal. Os resultados de coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) obtidos foram de 0,09 x 10-4 cm/s para lamivudina e de 0,22 x 10-4 cm/s para o metoprolol. O valor de Papp obtido de para o metoprolol é próximo dos valores encontrados na literatura para outras técnicas. Para a lamivudina, entretanto, a diferença encontrada em comparação às células Caco-2 pode ser devida às diferentes técnicas empregadas. / This work aimed to propose a new method for studying drug permeability using frog intestinal epithelium (Rana catesbeiana) in ex vivo method, using Franz cells. By using intestinal epithelium, a disposal material from an animal used as human food, can be considered an alternative method, because it doesn\'t involve the sacrifice of animals. The amount of permeated drug was determined by capillary electrophoresis method with UV detection and validated for antiviral drugs lamivudine, zidovudine and acyclovir in the presence of metoprolol and floridizina. The drug chosen as a model in permeability studies was lamivudine. To establish the experimental protocol for the permeability studies, a three-way analysis of variance was proposed to check the influence of intestinal section, pH of Ringer\'s solution and the temperature on the permeability. Total amount of drug permeated (Qt), apparent permeability coefficient (Papp) and first-order constant absorption (ka) were determined. By the analysis of experimental design, the effects of the variables were not significant, except for intestinal section. The results of apparent permeability coefficient (Papp) obtained were 0.09 x 10-4 cm/s for lamivudine and 0.22 x 10-4 cm/s for metoprolol. The value of Papp obtained for metoprolol is quite close to the values found in literature for other methods. For lamivudine, however, the difference found in comparison to Caco-2 cells may be due to different techniques.

A zidovudina, conhecida como AZT, é um inibidor da transcriptase reversa, enquanto que a lamivudina é um fármaco antirretroviral que atua na inibição da síntese de ácidos nucléicos. Estes são dois dos 21 fármacos componentes dos medicamentos distribuídas pelo Ministério da Saúde Brasileiro em programas de combate a Síndrome da imunodeficiência Adquirida (Acquired Immunodeficiency Syndrome - AIDS), configurando-se assim uma grande demanda de produção de medicamentos com estes fármacos. Programas de Tecnologia Analítica em Processo (Process Analytical techology - PAT), embasadas por avanços nos guias internacionais da Conferência Internacional sobre a Harmonização dos Requerimentos Técnicos para o Registro de Produtos Farmacêuticos para o uso Humano (International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use - ICH) e pela agência norte-americana para a Administração de Alimentos e Medicamentos (Food and Drugs Administration - FDA), estão ganhando força como alternativas para aumentar a eficiência e a segurança na produção de medicamentos, tanto para aqueles já em processo produtivo como também para medicamentos em fase de desenvolvimento. Estes últimos são denominados desenvolvimento em programas de Qualidade por Design (QbD). Métodos de quantificação por espectroscopia (NIR, MID, RAMAM, entre outras) são reconhecidos como ferramentas para a PAT. Neste contexto propôs-se comparar objetivamente o método tradicional de quantificação destes dois fármacos frente a um método de quantificação desenvolvido utilizando-se a espectroscopia no infravermelho médio (MID). Prepararam-se assim 41 amostras de calibração e 23 amostras de validação, compostas por misturas de zidovudina, lamivudina e placebo (qs) em escala laboratorial, na faixa de 80 a 120% da concentração nominal de uma associação comercial dos dois fármacos. As concentrações de referência de todas as preparações foram determinadas empregando-se o método de referência por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) da Farmacopeia Americana (United States Pharmacopeia - USP). Subsequentemente, obtiveram-se cinco espectros no infravermelho de cada uma das preparações, na faixa de 450 a 4000 cm-1. Os espectros foram então pré-processados e utilizados para a construção de um modelo de calibração multivariado por PLS (mínimo quadrados parciais), de acordo com a ASTM E1655-05. Adicionalmente, o método de CLAE foi transferido para um método de UPLC de acordo com o Capitulo Geral descrito no volume 37(3) do Fórum da USP (United States Pharmacopeia). O desempenho do método MID foi então comparado com o método tradicional, bem como com o novo método de quantificação por UPLC. Foram definidaLs assim regiões de confiança para embasar a utilização dos métodos desenvolvidos. O método de quantificação por MID apresentou uma grande variabilidade enquanto que o método por UPLC foi totalmente comparável com o método tradicional, reduzindo o tempo de corrida de 60 minutos para 12.55 minutos. / Zidovudine, also known as AZT is a reverse transcriptase inhibitor, whereas lamivudine is an antiretroviral drug that acts on the inhibition of nucleic acid synthesis. These are two of the 21 active ingredients components of medicines distributed by Brazilian Health Ministry in programs against the Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS), becoming thus a great demand for production of these two drugs. Process Analytical Technology (PAT) programs, supported by advances in international guides from the International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH) and by the FDA (Food and Drugs Administration), are gaining momentum as alternatives to increase efficiency and safety in the production of medicines, both for those medicines already in the production process as well as to those medicines under development. The latter are called Quality by Design (QbD) programs. Spectroscopy quantification methodologies methodologies (NIR, MID, Ramam, among others) are recognized as PAT tools. In this context it was proposed to compare objectively the traditional method for quantification of these two drugs against a quantification method developed using the MID (middle infrared spectroscopy). Thus 41 calibration and 23 validation samples, comprising of laboratorial scale mixtures of lamivudine, zidovudine and placebo (qs), were prepared in the range equivalent to 80 to 120% of the nominal concentration of the commercial tablets product. The concentrations of all calibration and validation samples were determined using the HPLC reference method of USP (United States Pharmacopeia). Subsequently, there were obtained five infrared spectra of each of the preparations in the range 450-4000 cm-1. The spectra were then pre-processed and used to build a multivariate calibration model for PLS (Partial Least Squares) according to ASTM E1655-05. Additionally, the HPLC method was transferred to a UPLC method according to General Chapter described in volume 37 (3) Forum USP (United States Pharmacopeia). The performance of the method MID was then compared with the traditional method and with the new method of quantification by UPLC. Confidence regions were built to support the use of the methods developed. The MID quantification method presented considerable variability, while the method the UPLC method was fully comparable to the traditional method. Another advantage of the UPLC method was the reduction of running time from 60 minutes to 12:55 minutes.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-11-19T19:26:40Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_EricaAlessandraRAlves.pdf: 1225470 bytes, checksum: 1bdf066ff4cc5dac11f9085df9118f7d (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-03-05T14:09:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_EricaAlessandraRAlves.pdf: 1225470 bytes, checksum: 1bdf066ff4cc5dac11f9085df9118f7d (MD5) / Made available in DSpace on 2009-03-05T14:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_EricaAlessandraRAlves.pdf: 1225470 bytes, checksum: 1bdf066ff4cc5dac11f9085df9118f7d (MD5) / A introdução da terapia antiretroviral de alta eficácia em 1996 determinou uma queda substancial da morbidade e mortalidade associadas ao Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH). Embora a infecção seja controlada pelos antiretrovirais, observam-se efeitos colaterais indesejados, fato que demonstra a capacidade de interação destes fármacos com as células dos indivíduos que os recebem. Recentemente, estes medicamentos têm sido relacionados à modulação do sistema imunitário inato e adaptativo, entretanto pouco se sabe acerca da influência dos protocolos rotineiramente utilizados pelos indivíduos infectados por este vírus, já que a maior parte das pesquisas investiga a influência de drogas isoladas sobre o sistema imunitário. Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar a influência, in vitro, da zidovudina (AZT), da lamivudina (3TC), do efavirenz (EFV) e do lopinavir/ritonavir (LPV/RTV) isoladamente ou das associações AZT/3TC/EFV e AZT/3TC/LPV/RTV sobre a capacidade fagocitária e produção de ânions superóxido por neutrófilos e monócitos de indivíduos saudáveis. Foram retirados 20 ml do sangue periférico de 20 voluntários, após consentimento informado, para realização dos ensaios e avaliadas tanto a capacidade fagocitária dos neutrófilos e monócitos pelos receptores para padrões moleculares de patógenos (rPMP) quanto pelos receptores para opsoninas. Os fármacos foram utilizados nas concentrações plasmáticas máximas observadas após ingestão, sendo para o AZT 1,64 µg/ml, para o 3TC 1,5µg/ml, para o EFV 3,7 µg/ml, para o LPV 11,45 µg/ml e para o RTV 2,86 µg/ml. O índice fagocitário foi determinado pela multiplicação da média de Saccharomyces cerevisiae aderidas/ingeridas por fagócito pelo percentual de fagócitos envolvidos na fagocitose. A avaliação da capacidade oxidativa dos fagócitos foi feita pelo teste do nitroblue tetrazolium. O EFV isoladamente aumentou o percentual de neutrófilos envolvidos na fagocitose pelos rPMP (p=0,004) e para opsoninas (p=0,020) enquanto que a préincubação com LPV/RTV (p=0,024) e com a associação AZT/3TC/LPV/RTV (p=0,008) por 60 minutos diminuiu o índice fagocitário dos neutrófilos quando avaliada a capacidade fagocitária destas células pelos rPMP. A pré-incubação dos fagócitos por 30 minutos com LPV/RTV aumentou a capacidade fagocitária dos monócitos pelos rPMP (p=0,003) tanto pelo aumento da média de leveduras aderidas/ingeridas por monócito quanto pelo percentual de monócitos envolvidos na fagocitose, resultado semelhante ao da pré-incubação dos monócitos com a associação AZT/3TC/LPV/RTV por 30 minutos e tendeu a aumentar o percentual de neutrófilos envolvidos na fagocitose (p=0,077) quando avaliada a fagocitose por meio dos receptores para opsoninas. Entretanto, quando avaliada a influência do pré-tratamento dos monócitos com LPV/RTV por 60 minutos, a capacidade fagocitária destas células pelos rPMP diminuiu (p=0,013) devido ao decréscimo do percentual de monócitos envolvidos na fagocitose. Estes fármacos isoladamente também diminuíram a capacidade fagocitária dos monócitos (p=0,020) mediada por receptores para opsoninas pela diminuição da média de leveduras aderidas/ingeridas por monócito, enquanto que o AZT tendeu a aumentar a capacidade fagocitária destas células pelos receptores para padrões moleculares de patógenos (p=0,097), pois tendeu a aumentar o percentual de monócitos envolvidos na fagocitose. A produção de radicais de oxigênio foi mais abrangentemente influenciada pelos antiretrovirais estudados. O AZT (p=0,027) e o 3TC (p=0,004) isoladamente e as associações LPV/RTV (p=0,0001) e AZT/3TC/LPV/RTV (p=0,0001) diminuíram a produção estimulada do ânion superóxido pelos fagócitos. O percentual de redução do NBT basal também foi deprimido pela associação LPV/RTV (p=0,0007) e AZT/3TC/LPV/RTV (p<0,0001) e tendeu a ser reduzido pelo 3TC isoladamente (p=0,071). Os demais tratamentos não influenciaram a capacidade fagocitária ou a produção de ânions superóxido pelos fagócitos. Os resultados sugerem que o protocolo AZT/3TC/EFV, por não interferir com a capacidade fagocitária, seja mais adequado para o tratamento inicial dos indivíduos infectados pelo VIH enquanto que o protocolo contendo AZT/3TC/LPV/RTV, por sua propriedade imunomoduladora, deveria ser reservado para aqueles pacientes que apresentem intolerância ou resistência ao EFV. É possível também que pacientes com resistência a múltiplos esquemas antiretrovirais se beneficiem de protocolos que contenham LPV/RTV, pois como evidenciado diminuem a produção de radicais de oxigênio, podendo contribuir para taxas mais baixas de replicação do viral, de apoptose de linfócitos e da neurodegeneração relacionada ao VIH. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The introduction of highly active antiretroviral therapy (HAART) in 1996 has decreased the morbidity and the mortality rates associated with the HIV infection. Though the infection can be controlled by antiretrovirals, these medicines may cause undesirable side effects due to their capacity to interact with cells of patients. It has been reported that these drugs may modulate the innate and adaptative immnune system. However, few is known about the influences on immune functions by protocols routinely used in the treatment of HIV infected patients, constituted by reverse transcriptase and protease inhibitors, because most of researches have just investigated the influence restricted to isolated drugs. So, this work aimed to evaluate the influence of the isolate treatment with zidovudine (AZT), lamivudine (3TC), efavirenz (EFV), lopinavir/ritonavir (LPV/RTV) and of the associations AZT/3TC/EFV or AZT/3TC/LPV/RTV on phagocytic capacity and superoxide production by neutrophils and monocytes of healthy individuals, in vitro. It was collected 20 ml of peripheral blood from 20 healthy volunteers and the phagocytic capacity was assessed through pathogen-associated molecular patterns receptors (PAMPr) and through opsonin receptors. The drugs were used on maximum plasma levels considering pharmacokinetic studies after ingestion and the concentration applied for each one was 1,64 µg/ml for AZT, 1,5µg/ml for 3TC, 3,7 µg/ml for EFV and 11,45 µg/ml and 2,86 µg/ml for LPV and RTV, respectively. The phagocytic index was calculated as the average number of ingested Saccharomyces cerevisiae per phagocyte multiplied by the percentage of these cells engaged in phagocytosis. The oxidative capacity was assessed by the nitroblue tetrazolium (NBT) test. The isolated treatment with EFV increased the percentual of neutrophils engaged in phagocytosis through PAMPr (p=0,004) and through opsonin receptors (p=0,020), while the preincubation with LPV/RTV (p=0,024) and AZT/3TC/LPV/RTV (p=0,008) for 60 minutes decreased neutrophil phagocytic index when phagocytosis through PAMPr was investigated. The pretreatment of phagocytes for 30 minutes with LPV/RTV increased the monocyte phagocytic capacity through PAMPr (p=0,003) due to both the increase of the ingested yeasts average and the percentual of monocytes involved in phagocytosis, similar to the result observed to the pretreatment of these cells with AZT/3TC/LPV/RTV for 30 minutes and tended to increase (p=0,077) the percentual of neutrophils engaged in phagocytosis through opsonin receptors. However, when LPV/RTV was incubated with monocytes for 60 minutes, the monocyte phagocytic index through PAMPr decreased (p=0,013) due to the diminished percentual of monocytes engaged in phagocytosis. The LPV/RTV isolately decreased the monocyte phagocytic capacity (p=0,020) due to the reduction of the number of ingested yeasts by these cells. The AZT tended to increase the monocyte phagocytic capacity when phagocytosis through PAMPr was analyzed (p=0,097), because it tended to increase the percentual of monocytes engaged in phagocytosis. The production of reactive oxygen species (ROS) were more intensely influenced by the studied antiretrovirals. The AZT (p=0,027) and the 3TC (p=0,004) isolately and the associations LPV/RTV (p=0,0001) and AZT/3TC/LPV/RTV (p=0,0001) decreased the stimulated production of ROS by phagocytes. The percentual of baseline NBT reduction was also depressed by the associations LPV/RTV (p=0,0007) e AZT/3TC/LPV/RTV (p<0,0001) and tended to be reduced by the treatment with 3TC alone (p=0,071). These results suggest that the protocol AZT/3TC/EFV can be more adequate to the initial treatment of those individuals infected by HIV because it has not changed the phagocytic capacity or ROS production by neutrophils and monocytes, while the association AZT/3TC/LPV/RTV could be more interesting to patients with intolerance or viral resistance to EFV. It is also possible that patients with multiple resistances to antiretrovirals can be benefited by protocols containing LPV/RTV, because the reduction of ROS determined by these drugs, as demonstrated in this research, can contribute for the lowest rates of viral replication, lymphocyte apoptosis and HIV-related neurodegeneration.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:30:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3430_1.pdf: 5795505 bytes, checksum: 9150fb45737f337821ddcd9910cb61c2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / A validação de limpeza na produção farmacêutica é imprescindível para o cumprimento das Boas Práticas de Fabricação, conferindo qualidade e segurança aos medicamentos produzidos. Esta atividade é composta por diferentes passos: desenvolvimento e implantação dos procedimentos de limpeza, definição dos limites de aceitação de resíduos, validação do método analítico para determinação dos resíduos e aplicação de método de amostragem reprodutível e adequado à detecção e quantificação de traços dos resíduos pesquisados. Neste trabalho foi avaliada a limpeza dos equipamentos envolvidos na produção do medicamento LAFEPE Zidovudina (AZT) + Lamivudina (3TC), 300 mg + 150 mg comprimidos revestidos. A validação de limpeza verificou a remoção dos resíduos de ativos farmacêuticos AZT e 3TC, do agente de limpeza Extran® MA 02 Neutro e verificou a possível contaminação microbiológica residual após o procedimento de limpeza. Considerando que o ambiente pode contribuir para a contaminação microbiológica foi avaliada a qualidade do ar de duas áreas controladas da linha produtiva. Um método analítico para determinação simultânea de AZT e 3TC em HPLC-UV apresentou-se seletivo e linear numa faixa de 2,5 a 15 &#956;g/mL, apresentando como Limites de Detecção (LD) (AZT: 0,13 &#956;g/mL; 3TC: 0,15 &#956;g/mL) e Limites de Quantificação (LQ) (AZT: 0,20 &#956;g/mL; 3TC: 0,23 &#956;g/mL). O método de amostragem com swabs obteve uma recuperação adequada de AZT e 3TC em superfícies de aço 316L, respectivamente 82,04% e 83,32%. Na determinação do resíduo de detergente foi aplicada a amostragem dos equipamentos por água de rinsagem e utilizados os métodos analíticos de potenciometria e condutimetria, sendo conhecidas as respostas analíticas para uma curva de 2,0 a 20,0 &#956;g/mL de Extran® MA 02 Neutro em água purificada. A avaliação da contaminação microbiológica nas superfícies dos equipamentos foi determinada através de placas de contato RODAC® com meio de crescimento Tryptic Soy Agar acrescido de polissorbato 80 e lecitina de soja como agentes neutralizantes dos detergentes e desinfetantes para verificação do crescimento de bactérias heterotróficas. Para a determinação da qualidade do ar foram utilizadas placas de petri com os meios de crescimento Tryptic Soy Agar e Agar Sabouraud, também acrescidos de polissorbato 80 e lecitina de soja como agentes neutralizantes expostas no ambiente em condição de operação por 4 horas. Neste caso foi avaliado o crescimento de bactérias heterotróficas, fungos filamentosos e leveduriformes. O procedimento de limpeza e amostragem foi aplicado a 3 (três) lotes industriais consecutivos e os resultados obtidos atenderam às especificações de limites dos contaminantes AZT e 3TC, e contaminação microbiológica residual. Os resultados das análises de pH dos resíduos de detergente não apresentaram diferenças estatisticamente significativas entre as amostras coletadas e seus respectivos brancos analíticos (água purificada). Portanto, sugere-se a implementação de técnicas complentares como análise de Carbono Orgânico Total - TOC. Os resultados da avaliação da qualidade do ar confirmaram a permanência do status de limpeza do ambiente e dos equipamentos nele dispostos. Assim, o procedimento de limpeza, o método analítico e de amostragem foram considerados adequados e aplicáveis à validação de limpeza dos equipamentos de uma produção farmacêutica dedicada à produção de antirretrovirais

A zidovudina, conhecida como AZT, é um inibidor da transcriptase reversa, enquanto que a lamivudina é um fármaco antirretroviral que atua na inibição da síntese de ácidos nucléicos. Estes são dois dos 21 fármacos componentes dos medicamentos distribuídas pelo Ministério da Saúde Brasileiro em programas de combate a Síndrome da imunodeficiência Adquirida (Acquired Immunodeficiency Syndrome - AIDS), configurando-se assim uma grande demanda de produção de medicamentos com estes fármacos. Programas de Tecnologia Analítica em Processo (Process Analytical techology - PAT), embasadas por avanços nos guias internacionais da Conferência Internacional sobre a Harmonização dos Requerimentos Técnicos para o Registro de Produtos Farmacêuticos para o uso Humano (International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use - ICH) e pela agência norte-americana para a Administração de Alimentos e Medicamentos (Food and Drugs Administration - FDA), estão ganhando força como alternativas para aumentar a eficiência e a segurança na produção de medicamentos, tanto para aqueles já em processo produtivo como também para medicamentos em fase de desenvolvimento. Estes últimos são denominados desenvolvimento em programas de Qualidade por Design (QbD). Métodos de quantificação por espectroscopia (NIR, MID, RAMAM, entre outras) são reconhecidos como ferramentas para a PAT. Neste contexto propôs-se comparar objetivamente o método tradicional de quantificação destes dois fármacos frente a um método de quantificação desenvolvido utilizando-se a espectroscopia no infravermelho médio (MID). Prepararam-se assim 41 amostras de calibração e 23 amostras de validação, compostas por misturas de zidovudina, lamivudina e placebo (qs) em escala laboratorial, na faixa de 80 a 120% da concentração nominal de uma associação comercial dos dois fármacos. As concentrações de referência de todas as preparações foram determinadas empregando-se o método de referência por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) da Farmacopeia Americana (United States Pharmacopeia - USP). Subsequentemente, obtiveram-se cinco espectros no infravermelho de cada uma das preparações, na faixa de 450 a 4000 cm-1. Os espectros foram então pré-processados e utilizados para a construção de um modelo de calibração multivariado por PLS (mínimo quadrados parciais), de acordo com a ASTM E1655-05. Adicionalmente, o método de CLAE foi transferido para um método de UPLC de acordo com o Capitulo Geral descrito no volume 37(3) do Fórum da USP (United States Pharmacopeia). O desempenho do método MID foi então comparado com o método tradicional, bem como com o novo método de quantificação por UPLC. Foram definidaLs assim regiões de confiança para embasar a utilização dos métodos desenvolvidos. O método de quantificação por MID apresentou uma grande variabilidade enquanto que o método por UPLC foi totalmente comparável com o método tradicional, reduzindo o tempo de corrida de 60 minutos para 12.55 minutos. / Zidovudine, also known as AZT is a reverse transcriptase inhibitor, whereas lamivudine is an antiretroviral drug that acts on the inhibition of nucleic acid synthesis. These are two of the 21 active ingredients components of medicines distributed by Brazilian Health Ministry in programs against the Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS), becoming thus a great demand for production of these two drugs. Process Analytical Technology (PAT) programs, supported by advances in international guides from the International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH) and by the FDA (Food and Drugs Administration), are gaining momentum as alternatives to increase efficiency and safety in the production of medicines, both for those medicines already in the production process as well as to those medicines under development. The latter are called Quality by Design (QbD) programs. Spectroscopy quantification methodologies methodologies (NIR, MID, Ramam, among others) are recognized as PAT tools. In this context it was proposed to compare objectively the traditional method for quantification of these two drugs against a quantification method developed using the MID (middle infrared spectroscopy). Thus 41 calibration and 23 validation samples, comprising of laboratorial scale mixtures of lamivudine, zidovudine and placebo (qs), were prepared in the range equivalent to 80 to 120% of the nominal concentration of the commercial tablets product. The concentrations of all calibration and validation samples were determined using the HPLC reference method of USP (United States Pharmacopeia). Subsequently, there were obtained five infrared spectra of each of the preparations in the range 450-4000 cm-1. The spectra were then pre-processed and used to build a multivariate calibration model for PLS (Partial Least Squares) according to ASTM E1655-05. Additionally, the HPLC method was transferred to a UPLC method according to General Chapter described in volume 37 (3) Forum USP (United States Pharmacopeia). The performance of the method MID was then compared with the traditional method and with the new method of quantification by UPLC. Confidence regions were built to support the use of the methods developed. The MID quantification method presented considerable variability, while the method the UPLC method was fully comparable to the traditional method. Another advantage of the UPLC method was the reduction of running time from 60 minutes to 12:55 minutes.

Este trabalho teve como objetivo propor novo método para estudar a permeabilidade de fármacos, utilizando epitélio intestinal de rã-touro (Rana catesbeiana) em método ex vivo, empregando células de Franz. Por utilizar epitélio intestinal, um material de descarte proveniente de um animal utilizado como alimento humano, pode ser considerado um método alternativo, pois não implica no sacrifício de animais. A quantidade de fármaco permeada foi determinada por método de eletroforese capilar com detecção ultravioleta e validado para os antivirais lamivudina, zidovudina e aciclovir, na presença de metoprolol e floridizina. O fármaco escolhido como modelo nos ensaios de permeabilidade foi a lamivudina. Para estabelecimento do protocolo experimental dos estudos de permeabilidade, foi proposta uma análise de variância three-way para verificar a influência na permeabilidade dos fármacos, das seguintes variáveis: secção intestinal, pH da solução de Ringer e temperatura. Foram determinados a quantidade total de fármaco permeado (Qt), o coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) e a constante de absorção de primeira ordem (ka). A partir da análise do planejamento experimental, os efeitos das variáveis não foram significativos, exceto para a secção intestinal. Os resultados de coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) obtidos foram de 0,09 x 10-4 cm/s para lamivudina e de 0,22 x 10-4 cm/s para o metoprolol. O valor de Papp obtido de para o metoprolol é próximo dos valores encontrados na literatura para outras técnicas. Para a lamivudina, entretanto, a diferença encontrada em comparação às células Caco-2 pode ser devida às diferentes técnicas empregadas. / This work aimed to propose a new method for studying drug permeability using frog intestinal epithelium (Rana catesbeiana) in ex vivo method, using Franz cells. By using intestinal epithelium, a disposal material from an animal used as human food, can be considered an alternative method, because it doesn\'t involve the sacrifice of animals. The amount of permeated drug was determined by capillary electrophoresis method with UV detection and validated for antiviral drugs lamivudine, zidovudine and acyclovir in the presence of metoprolol and floridizina. The drug chosen as a model in permeability studies was lamivudine. To establish the experimental protocol for the permeability studies, a three-way analysis of variance was proposed to check the influence of intestinal section, pH of Ringer\'s solution and the temperature on the permeability. Total amount of drug permeated (Qt), apparent permeability coefficient (Papp) and first-order constant absorption (ka) were determined. By the analysis of experimental design, the effects of the variables were not significant, except for intestinal section. The results of apparent permeability coefficient (Papp) obtained were 0.09 x 10-4 cm/s for lamivudine and 0.22 x 10-4 cm/s for metoprolol. The value of Papp obtained for metoprolol is quite close to the values found in literature for other methods. For lamivudine, however, the difference found in comparison to Caco-2 cells may be due to different techniques.

[pt] O comportamento eletroquímico e o desenvolvimento de metodologias eletroanalíticas para a determinação de zidovudina (AZT), lamivudina (3TC) e zalcitabina (DDC) em medicamentos foram investigados no presente trabalhoatravés de técnicas voltamétricas. Estas substâncias possuem atividade antiretroviral, sendo utilizadas no tratamento de indivíduos portadores de HIV. AZT, 3TC e DDC sofrem redução na superfície do eletrodo de mercúrio. Ainfluência dos parâmetros eletroquímicos, tais como, velocidade de varredura, amplitude, natureza do eletrólito suporte e pH foram estudados para selecionar as melhores condições para quantificar estes princípios ativos em formulações farmacêuticas. A redução da zidovudina ocorre em apenas uma etapa, sendo esta atribuída à redução do grupo azida (-N3), originando em um pico de potencial de-970 mV vs Ag/AgCl (3 mol L-1), utilizando tampão fosfato, pH 8,0. A faixa linear encontrada foi de 0,25 a 1,25 mg L-1. O mecanismo de redução da zidovudina envolve a participação de 4 elétrons e 2 prótons. Adicionalmente novos estudos eletroquímicos foram desenvolvidos para a determinação de lamivudina e de zalcitabina através da voltametria em pulso diferencial em tampão Clark-Lubs, pH 2,0, onde se obteve um pico no potencial de -1160 e -1180 mV, respectivamente. Lamivudina obteve faixa linear de 2,28 a 8,85 mg L-1 e zalcitabina de 10,0 a 23,3 mg L-1. O mecanismo de redução destas drogas envolve a participação de números iguais de prótons e elétrons. Todas as metodologias desenvolvidas também foram validadas. / [en] The electrochemical behaviour and the development of an analytical methodology for the zidovudine (AZT), lamivudine (3TC) and zalcitabine (DDC)determination in drugs using voltammetrics techniques were the objectives of the current study. These drugs have been extensively used in the treatment of HIV patients because its antiretroviral activity. The AZT, 3TC and DDC are reduced at a hanging mercury drop electrode (HMDE). The influence of electroanalytical parameters such as, scan rate, amplitude, nature of the support electrolyte and pH in the signal was verified to select the best conditions for quantifying these drugs in pharmaceutical forms. The obtained results had showed AZT, in solution of pH 8.0 of phosphate buffer, with only one reduction in -970 mV vs Ag/AgCl (3 mol L-1). This peak is due to reduction of the azido group present on zidovudine molecule. The linear range of standards is from 0.25 to 1.25 mg L-1. The electrodic mechanism involving the participation of 4 electrons and 2 protons in the reduction of AZT molecules. News studies were development for lamivudine and zalcitabine determination by differential pulse voltammetry in solution of pH 2.0 of Clark-Lubs buffer, with only one reduction in - 1160 and -1180 mV, respectively. Lamivudine has been the linear range of standards from 2.28 to 8.85 mg L-1 and zalcitabine from 10.0 to 23.3 mg L-1. The mechanism of these drugs involving the participation of the same number of electrons and protons. All these analytical methods were validated.

A biodisponibilidade de um fármaco é o fator determinante da eficácia clínica e depende principalmente das seguintes etapas: liberação da substância ativa a partir da forma farmacêutica e absorção. Assim, o controle da extensão e da velocidade de absorção de um fármaco administrado por via oral depende basicamente de dois aspectos: solubilidade nos líquidos fisiológicos e permeabilidade através das membranas biológicas. Fundamentado nestas características, o Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) foi proposto como ferramenta que permite a classificação dos fármacos e tem como finalidade auxiliar nas bioisenções e na predição da biodisponibilidade in vivo. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a solubilidade da estavudina e a permeabilidade intestinal de fármacos antirretrovirais por meio do modelo de perfusão in situ. Os meios empregados nos estudos de solubilidade e dissolução intrínseca foram: água purificada, tampão pH 1,2, tampão pH 4,5, tampão pH 6,8 e tampão pH 7,5. Para a determinação da solubilidade pelo método do equilíbrio (técnica shake-flask), quantidades conhecidas do fármaco foram adicionadas em cada meio até atingir a saturação e esta mistura foi submetida à agitação de 150 rpm por 72 horas a 37°C. Para os ensaios de dissolução intrínseca, quantidade conhecida de estavudina foi compactada na matriz do aparato de Wood e submetida à dissolução em cada meio, sob agitação de 50 rpm a 37°C. A determinação da permeabilidade dos antirretrovirais foi realizada empregando o modelo de perfusão in situ em ratos machos Wistar. Uma porção do jejuno foi isolada e a solução de perfusão (pH 6,5) contendo o fármaco foi perfundida a um fluxo de 0,2 mL.min-1 a 37°C por 120 minutos. Os resultados obtidos referentes à solubilidade da estavudina pelo método do equilíbrio foram (em mg.mL-1): 146,49 (água), 149,22 (pH 4,5), 139,43 (pH 6,8) e 130,15 (pH 7,5). A determinação da razão dose:solubilidade (D:S) em cada meio permitiu a obtenção dos seguintes resultados (em mL): 0,27 (água), 0,27 (pH 4,5), 0,29 (pH 6,8) e 0,31 (pH 7,5). Tais dados indicaram que este fármaco apresenta alta solubilidade nos meios utilizados no estudo, exceto em meio pH 1,2, onde a estavudina apresentou instabilidade demonstrada pela presença de coloração e odor alterados, inviabilizando a determinação da solubilidade nestas condições. Os ensaios de dissolução intrínseca da estavudina permitiram a determinação das taxas de dissolução intrínseca (TDI), as quais foram (em mg/min/cm²): 2,3570 (água), 2,7389 (pH 1,2), 2,7590 (pH 4,5) e 2,5947 (pH 6,8), demonstrando que este fármaco apresenta alta velocidade de dissolução nos meios utilizados. Com relação ao estudo de permeabilidade por meio do modelo de perfusão in situ, nas condições experimentais empregadas, os resultados obtidos foram (em cm.s-1): 3,96 x 10-5 (estavudina), 3,08 x 10-5 (lamivudina) e 4,17 x 10-5 (zidovudina) sugerindo que os fármacos estavudina e zidovudina apresentam alta permeabilidade. Para a lamivudina não é descartada a possibilidade de ser considerada como fármaco de alta permeabilidade, mesmo apresentando resultado ligeiramente abaixo em relação aos outros dois antirretrovirais utilizados no estudo. / Drug\'s bioavaliability is a determinant factor of clinical efficacy and it depends on the following steps: release of active ingredient from the dosage form and absorption. Thus, control of extend and rate of absorption of a drug orally administered depends on two aspects: the drug solubility in physiological fluids and permeability across biological membranes. Based on these characteristics, the Biopharmaceutical Classification System (BCS) was proposed as a tool that allows the drug\'s classification and it assists in biowaiver and in vivo bioavailability prediction. The aim of this study was to evaluate stavudine solubility and intestinal permeability of antiretroviral drugs through the in situ perfusion model. The means employed in the solubility studies and intrinsic dissolution were: purified water, buffer pH 1.2, buffer pH 4.5, buffer pH 6.8 and buffer pH 7.5. For solubility study by equilibrium method (shake-flask technique), known amounts of the drug were added in each media to reach saturation and the mixture was subjected to agitation of 150 rpm for 72 hours at 37°C. For intrinsic dissolution test, known amount of stavudine has been compressed in the matrix of Wood\'s apparatus and subjected to dissolution in each media with agitation of 50 rpm at 37°C. Permeability evaluation of antiretroviral drugs was performed using the in situ perfusion model in male Wistar rats. A portion of jejunum was isolated and perfusion solution (pH 6.5) with the drug was perfused at 0.2 mL/min at 37°C for 120 minutes. Results of stavudine solubility by equilibrium method were (in mg/mL): 146.49 (water), 149.22 (pH 4.5), 139.43 (pH 6.8) and 130.15 (pH 7.5). Dose:solubility (D:S) ratio determinations allowed to obtain the following results (in mL): 0.27 (water), 0.27 (pH 4.5), 0.29 (pH 6.8) and 0.31 (pH 7.5). These results indicate that stavudine has high solubility in the means employed in this study, except in buffer pH 1.2, where stavudine showed instability demonstrated by presence of stain and odor changed, which prevented the determination of solubility in these conditions. The intrinsic dissolution study allowed the determination of intrinsic dissolution rates (IDR), which were (in mg/min/cm²): 2.3570 (water), 2.7389 (pH 1.2), 2.7590 (pH 4.5) and 2.5947 (pH 6.8), demonstrating that this drug has a high dissolution rate in each media used. In permeability study through the in situ perfusion model, under experimental conditions adopted, the results obtained were (in cm/s): 3.96 x 10-5 (stavudine), 3.08 x 10-5 (lamivudine) and 4.17 x 10-5 (zidovudine), suggesting that stavudine and zidovudine have high permeability. It\'s possible that lamivudine might be considered high permeability drug, although its effective permeability result was slightly lower compared to effective permeability of stavudine and zidovudine.