A avaliação externa e em larga escala tem assumido papel cada vez mais central na gestão da educação e é apresentada, desde os anos 90, como um dos principais instrumentos para a tomada de decisões nas políticas públicas de educação. Esse movimento, que fez com que tais avaliações passassem a compor mais acentuadamente o debate e a própria literatura da avaliação e da qualidade educacional, se materializou numa série de iniciativas do governo federal voltadas para a avaliação, dentre as quais se destaca a criação do Exame Nacional do Ensino Médio (Enem), objeto desta Dissertação. Com o objetivo geral de expor e discutir acerca do conceito de avaliação subjacente ao Enem durante todo o seu percurso histórico, ensejando uma apreensão de seus objetos e finalidades explícitos e implícitos por meio de uma investigação qualitativa de cunho documental, a análise recaiu sobre os conteúdos conceituais que pudessem ser captados nos mais variados suportes de fundamentações teóricas do Enem. Partindo do pressuposto de que o Exame, com o passar dos anos, concretizou-se como política de Estado e não mais de governo, ocupando distintos lugares a depender das políticas educacionais a ele associadas, da mesma maneira que assumiria ou revelaria concepções de avaliação ou de medição de proficiências que lhe seriam subjacentes com distintas implicações, observou-se que o Enem aproximou-se, cada vez mais, das funções de um exame vestibular, sendo pouco a pouco dissociado de suas funções relativas à avaliação do Ensino Médio. Nesse sentido, a adequada abordagem conceitual no interior do campo da avaliação diretamente relacionado ao Enem justifica-se, por um lado, pela própria possibilidade de ampliação do campo e, por outro, pela necessidade de aclarar e superar imprecisões conceituais que estariam limitando o alcance e a potencialidade de muitas avaliações semelhantes em curso. / The external and large scale evaluation has gained a central role in Brazil since the 1990s as the main instrument for decision-making in public educational policies. This trend, which led such assessment tests to be a part of the evaluation and educational qualitys debate and literature itself, was materialized in several initiatives by the Federal Government of Brazil focused on evaluation, including especially the creation of the Exame Nacional do Ensino Médio (Enem), object of this study. With the general objective of exposing and discussing the underlying Enems evaluation Enem throughout its history, by pursuing its explicit and implicit objectives and purposes through qualitative documentary research, the analysis focused at the conceptual contents that could be captured in a range of studies and documents that compose the theoretical foundations of Enem. Assuming that, over the years, Enem has become a State policy, rather than a government policy, taking different positions depending on the educational policies associated with it, in the same way as it would undertake or reveal conceptions of evaluation or measurement of proficiencies with varied implications, we observed that Enems scholastic assessment test functions have gained increased importance, with the exam being dissociated from its High School evaluation functions. In this way, the adequate conceptual approach related to Enem as an evaluation tool is justified by the possibility of expanding the field and, on the other hand, by the necessity to clarify and overcome conceptual inaccuracies that could be limiting the scope and potentialities of current similar studies.

Esta dissertação apresenta uma proposta de um simulador de modelos de larga escala para o Ambiente de Simulação Distribuída Automático (ASDA), uma ferramenta que facilita a utilização e o desenvolvimento de simulação distribuída e que vem sendo objeto de pesquisas e estudos no Laboratório de Sistemas Distribuídos e Programação Concorrente (LaSDPC) do ICMC-USP. Tal simulador permite ao ASDA a construção de modelos e programas que simulam modelos de redes de filas de larga escala, operações estas que tornam a ferramenta ainda mais completa. O simulador é baseado no padrão público para simulação distribuída de larga escala denominado Scalable Simulation Framework (SSF). O protótipo do simulador desenvolvido é constituído de um programa cliente-servidor, mas podem ser observados três componentes principais: um compilador, que traduz os modelos escritos em linguagem de modelagem para linguagem C++; o módulo SSF que define a API utilizada pelos programas de simulação; e um módulo de execução, que executa os programas de simulação, analisa os resultados e os repassa para um gerador de relatórios. O simulador contribui ainda com mais estudos acerca de simulação, simulação distribuída e modelagem de sistemas utilizando as ferramentas desenvolvidas pelo grupo / This dissertation presents a proposal for a large-scale model simulator, that is integrated into the Automatic Distributed Simulation Environment (ASDA), a tool that supports the development of distributed simulation, and that has been under studies and investigations in the Laboratory of Distributed Systems and Concurrent Programming at ICMC-USP. The proposed simulator allows ASDA to support the development of models and programs that simulates large-scale queuing models, making ASDA more complete and efficient. The simulator is based on a public standard for large-scale distributed simulation named Scalable Simulation Framework (SSF). The simulator prototype that was developed is a client-server program in which we can observe three main components: one compiler, that translates the models written in a modeling language to a simulation program, written in C++ programming language; the SSF library, that defines the API that is used by the simulation programs; and a runtime environment, which runs the simulation programs, analyzes the results and sends the information to a report builder. The simulator prototype also aggregates to the simulation community more studies regarding simulation, distributed simulation, systems modelling using the internal tools developed by our group

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-19T13:21:28Z No. of bitstreams: 1 danielaraujovignoli.pdf: 3447448 bytes, checksum: 832b71d634bfb3b5f8c8cd5182d363e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-26T13:47:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 danielaraujovignoli.pdf: 3447448 bytes, checksum: 832b71d634bfb3b5f8c8cd5182d363e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T13:47:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 danielaraujovignoli.pdf: 3447448 bytes, checksum: 832b71d634bfb3b5f8c8cd5182d363e6 (MD5) Previous issue date: 2014-03-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho é constituído por dois estudos com objetivos distintos acerca do impacto da Ansiedade Face ao Teste e das Autocrenças Acadêmicas no desempenho em avaliações em larga escala. As análises realizadas utilizaram o banco de dados do Programa de Avaliação da Rede Pública de Educação Básica (PROEB) edição de 2011, que avaliou as disciplinas língua portuguesa e matemática no 5º e 9º anos do Ensino Fundamental e 3º ano do Ensino Médio das redes municipais e estaduais de Minas Gerais. O banco de dados contou com 661.011 alunos e 9.920 escolas. Os dois estudos consistiram no aprimoramento de um estudo conduzido no PROEB 2010. No primeiro estudo, foram realizadas várias alterações nas escalas de Ansiedade Face ao Teste (AFT), Autoeficácia Acadêmica (AFA), Autoconceito Acadêmico (ACA) e Percepção de Controle de Resultados (PC). Em seguida, analisou-se o impacto das alterações na qualidade das escalas. Também foi testada a adequação de uma nova configuração de modelo estrutural composto pelas variáveis AFT, AFA, ACA e MTA e por um fator de segunda ordem denominado Autocrenças Acadêmicas. O segundo estudo avaliou o impacto dessas variáveis no desempenho dos alunos através de um modelo linear hierárquico, considerando três níveis: aluno, turma e escola. Os coeficientes de impacto das variáveis do modelo foram comparados com os obtidos na pesquisa realizada no PROEB 2010. Para avaliar as escalas, no primeiro estudo, foram conduzidas análises fatoriais em duas etapas, exploratória e confirmatória. Em seguida, foram realizadas comparações entre o alfa de Cronbach das escalas atual e anterior. O método de rotação utilizado foi Promax. A modelagem de equações estruturais permitiu que a estrutura de fatores encontrada fosse testada e comparada com a estrutura proposta no estudo realizado no PROEB 2010. No segundo estudo, o fator AFT e o fator de segunda ordem, Autocrenças Acadêmicas, tiveram seus escores gerados através da Teoria de Resposta ao Item, modelo de Samegima, e inseridos no modelo linear hierárquico, juntamente com as outras variáveis em análise. Os coeficientes dos modelos lineares hierárquicos de 2010 foram comparados aos coeficientes do presente estudo. Nos resultados do primeiro estudo, a análise fatorial indicou o surgimento de um novo fator, Motivação Acadêmica e a extinção do fator PC. O Alfa de Cronbach das escalas foi superior ao das escalas anteriores, exceto o fator AFA. Os Alfas foram: AFT: 0,842; AFA: 0,793; ACA: 0,911 e MTA: 0,754. Foram produzidos dois modelos estruturais. Um deles utilizou a estrutura de dados proposta do estudo de 2010, porém, com as medidas das novas escalas (esse modelo foi denominado de 2º modelo). O outro modelo utilizou a nova estrutura de dados encontrada na análise fatorial confirmatória e as medidas das escalas produzidas para esse estudo (3º modelo). Tais modelos foram comparados e o 3º modelo demonstrou bons índices de ajuste, superiores aos demais modelos: CFI=0,96; NFI=0,96; RMSEA=0,12 e RMR=0,05. No segundo estudo, a comparação dos coeficientes dos modelos lineares hierárquicos considerou apenas o nível do aluno e se concentrou nas variáveis emocionais. As variáveis AFT e Autocrenças Acadêmicas do presente estudo obtiveram coeficientes superiores às variáveis emocionais do modelo de 2010, principalmente o fator Autocrenças Acadêmicas. Acredita-se que a diferença se deve ao aprimoramento das escalas, que as tornou mais específicas. As variáveis emocionais apresentaram os maiores coeficientes de impacto no desempenho no modelo linear, superiores ao índice socioeconômico e a defasagem escolar, que são tradicionalmente variáveis de grande impacto no desempenho. As consequências do impacto das variáveis emocionais no desempenho são discutidas do ponto de vista psicométrico e educacional. / This work consists of two distinct studies with different objectives about the impact of the Test Anxiety and Academic self-beliefs on performance in large-scale assessments. The analyzes used the database of the Programa de Avaliação da Rede Pública de Educação Básica (PROEB) 2011 edition, which evaluated subjects Portuguese and mathematics at the 5th and 9th years of Elementary Schooll and the last year of High School of municipal and state schools of Minas Gerais.The database included 661,011 students and 9,920 schools. Both studies consisted in the improvement of a study conducted in PROEB 2010.In the first study, several changes in the Test Anxiety Scale (AFT), Academic Self-Efficacy Scale (AFA), Academic Self-Concept Scale (ACA) and Perceived Control Results Scale (PC) were performed.Then we analyzed the impact of changes in the quality of the scales. Also tested the suitability of a new structural model configuration consisted by the variables AFT, APA, ACA and MTA and a second-order factor named Academic self-beliefs.The second study assessed the impact of these variables on student performance through a hierarchical linear model, considering three levels: student, class and school. The impact coefficients of the variables of the model were compared with those obtained in research conducted in PROEB 2010.In the first study, to evaluate of the scales, a factor analyzes were conducted in two stages, exploratory and confirmatory. Then, comparisons between Cronbach's alpha of the current scale and the previous one were performed.The method used was Promax rotation. The structural equation modeling allowed that the structure of factors found were tested and compared with the structure of factors found in the study conducted in PROEB in 2010.In the second study, the AFT factor and second-order factor, Academic self-beliefs, had their scores generated by the Item Response Theory, model Samegima, and entered into the hierarchical linear model, along with the other variables in the analysis.The coefficients of hierarchical linear models of 2010 were compared to the coefficients of the present study. The results of the first study, shown the emergence of a new factor, Academic Motivation and the demise of the PC factor.The Cronbach's alpha of the scales was higher than the previous scales, except the AFA factor. Alphas were: AFT: 0.842; AFA: 0.793; ACA: MTA and 0.911: 0.754. Two structural models were produced. One of them used the data structure proposed in the 2010 study, however, the measures of the new scales (this model was called the 2nd model).The other model used the new data structure found in the confirmatory factor analysis and measures of the scales produced for this study (model 3). These models were compared and the 3rd model demonstrated good fit, superior to other models: CFI = 0.96; NFI = 0.96; RMSEA = 0.12 and RMR = 0.05.In the second study, the analisys was made by the comparison of coefficients of hierarchical linear models, considering only the level of the student and was focused only on emotional variables. The coeficients of the variables, AFT and Academic self-beliefs of this study were higher than coefficients to emotional variables in the 2010 model, especially the academic selfbeliefs factor.It is believed that the difference is due to the improvement of scales, which become more specific. The emotional variables had the greatest impact on performance coefficients in the linear model, higher then socioeconomic index and school delay, variables that are traditionally knowed as a varialble of large impact on performance . The consequences of the impact of emotional variables on performance are discussed from the point of psychometric and educational standpoint.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2017-12-22T13:28:07Z No. of bitstreams: 1 anapaulapequenomatos.pdf: 1660293 bytes, checksum: 08349c4d837da55df30bbe6298af5a7a (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-01-22T18:22:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 anapaulapequenomatos.pdf: 1660293 bytes, checksum: 08349c4d837da55df30bbe6298af5a7a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-22T18:22:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anapaulapequenomatos.pdf: 1660293 bytes, checksum: 08349c4d837da55df30bbe6298af5a7a (MD5) Previous issue date: 2017-07-26 / O caso de gestão estudado discutiu a gestão para resultados em uma escola de ensino médio pertencente à rede pública do estado do Ceará, tendo como contexto o Sistema Permanente de Avaliação da Educação Básica do Ceará - SPAECE. Tal pesquisa justifica-se pela crescente expressividade das avaliações externas nas políticas de gerenciamento dos sistemas educacionais, a partir das quais emanam duas perspectivas que se entrelaçam no fazer didático: o binômio sucesso e fracasso escolares. Os objetivos definidos para este estudo foram analisar como a gestão tem se apropriado dos resultados do SPAECE, captando elementos que possam ser utilizados para a melhoria das práticas de gestão pedagógica e de resultados, visando contribuir para a elaboração de uma proposta de intervenção com o intuito de fomentar a aprendizagem significativa dos estudantes, tendo como questão norteadora o seguinte problema: de que forma ocorre a ação gestora em uma escola regular pertencente à Superintendência das Escolas de Fortaleza 1 (SEFOR 1) no contexto dos resultados do SPAECE? As discussões desenvolvidas basearam-se nos seguintes autores: Ball (2002; 2010), Vieira (2002; 2007; 2013); Vianna (2003; 2009), Franco (2004), Rosa et al (2006), Martins, Brocanelli (2010), Dalben (2010), Lück (2000, 2009), Luckesi (2011), Brooke, (2012), Monteiro e Mota (2013), Blasis et al (2014), Ikeshoji, Terçario, Ruiz (2015), Trojan e Corrêa (2015), Pinto e Santos (2016), Terrasêca (2016), a partir dos quais delineou-se a gestão para resultados no ambiente escolar caracterizando o papel do gestor enquanto força promotora da aprendizagem estudantil, pautada na prática colaborativa de monitoramento e avaliação do fazer escolar enquanto ferramenta para a construção de uma escola aprendente. Além disso, os autores contribuem para o delineamento do panorama da apropriação de resultados das avaliações externas enquanto processo pedagógico com vistas à qualidade educacional. Por meio de uma pesquisa qualitativa, como estudo de caso, verificou-se a interrelação entre a gestão, as avaliações externas, aqui representadas pelo SPAECE e, o sucesso da escola. O levantamento dos dados foi realizado in loco, por meio de observações na instituição-alvo da pesquisa. O instrumento de pesquisa utilizado foi a entrevista semiestruturada aos sujeitos do estudo, componentes do núcleo pedagógico: Gestora, Coordenadores Pedagógicos e Professores Coordenadores de Área de Linguagens e Códigos e, Matemática. Em razão dos resultados do estudo, concluiu-se que a gestão pedagógica da escola valida a avaliação externa enquanto mensurador da qualidade escolar, embora desconheçam as publicações do SPAECE e careçam de reordenar as práticas de gestão para que a comunidade possa apropriar-se do planejamento estratégico da escola. Assim, o Plano de Ação Educacional (PAE) apresentado compreende ações que visem a favorecer a gestão participativa no contexto de utilização pedagógica dos resultados do SPAECE e o fortalecimento dos planejamentos enquanto espaço-tempos de formação dos professores, dentre elas a formação de um grupo de estudos com foco nos resultados e planejamento estratégico da escola, estudos direcionados aos professores e, um marco festivo para apropriação dos resultados da escola. / The case in study discusses the management for results in a secondary school belonging to the public system of Ceará, taking as context the Sistema Permanente de Avaliação da Educação Básica do Ceará - SPAECE. This research is justified by the strong expressiveness of large-scale assessments in education policies, from which two perspectives that interlace in the didactic work: the binomial success and failure school. The main purpose of this study was to analyze how management has appropriated the results of SPAECE, capturing elements that can be used to improve pedagogical management practices and results, aiming to contribute to the elaboration of a proposal of intervention with the to foster significant student learning, the following problem being the guiding question: How does the management action in a public high school of Fortaleza, in the context of the SPAECE? The discussions were based on the following authors: Ball (2002; 2010), Vieira (2002; 2007; 2013); Vianna (2003; 2009), Franco (2004), Rosa et al (2006), Martins, Brocanelli (2010), Dalben (2010), Lück (2000, 2009), Luckesi (2011), Brooke, (2012), Monteiro and Mota (2013), Blasis; et al (2014), Ikeshoji, Terçario, Ruiz (2015), Trojan and Corrêa (2015), Pinto and Santos (2016), Terrasêca (2016), because they describe management for results in the school, characterizing the role of the of the principal as a strength for student learning, based on collaborative approach to monitoring and evaluating school achievement as a tool for building a learning school. They also contribute to the use to large-scale testing results as a pedagogical process for the quality education. This qualitative case study investigates the link between the management, the large-scale evaluations, represented here by SPAECE, and the success of the school. The data were collected through observations at the research institution. The research instrument was the semi - structured interview. The study subjects are components of the pedagogical leaders: Principal, Pedagogical Coordinators and Coordinating Teachers of Languages and Codes Area and Mathematics. The study was concluded that the pedagogical leaders validates the results of large-scale assessments as a measure of school quality, although they do not know the publications of SPAECE and they need to improve management practices so that the community can appropriate the planning of the school. Thus, the Educational Action Plan (PAE) presented includes actions that aim to favor participatory management in the context of pedagogical use of the results of SPAECE and the strengthening of planning as space-times of teacher training, as the formation of a group of studies focused on the results and strategic planning of the school, studies aimed at teachers and a festive framework for appropriation of the results of the school.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-09-28T18:56:49Z No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Erika Marinho Witeze - 2016.pdf: 3306415 bytes, checksum: 66e2b2e7226b65940b03a2ac68d41d52 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-30T13:09:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Erika Marinho Witeze - 2016.pdf: 3306415 bytes, checksum: 66e2b2e7226b65940b03a2ac68d41d52 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-30T13:09:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Erika Marinho Witeze - 2016.pdf: 3306415 bytes, checksum: 66e2b2e7226b65940b03a2ac68d41d52 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-04-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work discusses the issues related to the participation of the target audience of special education in Prova Brasil, covering two state schools in the city of Goiânia-GO. It adopts the historical-critical pedagogy and the cultural-historical theory as its theoretical frameworks. We investigate the conditions of these students participation in Prova Brasil, considering the special features arising from the deficiencies, global development disorders and high skills/giftedness and also knowing that they are enrolled in regular rooms. In addition, it makes explicit the articulations between the policies of inclusion and large-scale evaluation, revealing the developments of the neotechnicist proposal in the field of special education. Finally, it seeks to identify the proposals and/or alternatives suggested by teachers and managers regarding to the demands brought by Basic Education Evaluation System (SAEB) in Brazil. Based on the legal frameworks and academic production on inclusive education and largescale assessments, we talk about the consequences of regulating and monitoring the quality of education. We also show how the increased visibility of the Basic Education Development Index (IDEB) and the vertical control of the results intensifies the competition between schools, justifying mechanisms such as accountability, meritocracy and privatization of public education. Moreover, from a documentary and bibliographic research, participant observation of school routines and semi-structured interviews with managers, support staff and specialized teachers, we underline the tensions and contradictions experienced by the establishments investigated in reconciling two different models of evaluation and organization of pedagogical work: the first, based on the recognition of diversity and on the flexibilization of curricular contents, didactic resources and temporality; the second, founded on the homogenization of students performance on standardized tests, in a classificatory and market perspective. Finally, we evidence the coexistence between processes of inclusion/exclusion as a result from the use of Prova Brasil for measuring the students performance in specific areas of the curriculum. Considering the neoliberal context, we question the limits of the speech defending differences and its power to confront the various forms of exclusion and marginalization of students with disabilities and other special needs. In this perspective, we point out the possible contributions of Participatory Institutional Assessment (PIA) – as an anti-regulatory strategy – on developping socially referenced quality standards, which may provide support for the educational work in inclusive schools. / O presente trabalho discute os aspectos envolvidos na participação do público-alvo da educação especial na Prova Brasil, a partir de duas escolas estaduais situadas na cidade de Goiânia- GO. Adotando como referencial teórico a pedagogia histórico-crítica e a teoria histórico-cultural, investigamos em que condições esses estudantes, matriculados nas salas regulares, têm realizado a Prova Brasil, tendo em vista as particularidades decorrentes das deficiências, dos transtornos globais de desenvolvimento e das altas habilidades/superdotação. Além disso, explicitamos as articulações entre as políticas de inclusão e avaliação em larga escala, revelando os desdobramentos da proposta neotecnicista no campo da educação especial. Por fim, buscamos apontar as propostas e/ou alternativas sugeridas pelos professores e gestores no que se refere às demandas trazidas pelo Sistema de Avaliação da Educação Básica (SAEB) no Brasil. Tendo como ponto de ancoragem os marcos legais e a produção acadêmica na área, falamos das consequências das práticas de regulação e monitoramento da qualidade da educação, indicando como a emergência do Índice de Desenvolvimento da Educação Básica (IDEB) e o controle verticalizado dos resultados, os quais acirram a competição entre as escolas, justificando mecanismos como a responsabilização, a meritocracia e a privatização do ensino público. Ademais, a partir de pesquisa documental/bibliográfica, da observação participante das rotinas escolares e de entrevistas semiestruturadas com gestores, profissionais de apoio e professores de recursos, explicitamos as tensões e contradições vividas pelos estabelecimentos investigados na compatibilização entre dois modelos distintos de avaliação e organização do trabalho pedagógico: o primeiro, fundamentado no reconhecimento da diversidade e na flexibilização dos conteúdos curriculares, dos recursos didáticos e das temporalidades; o segundo, ordenado a partir da homogeneização do desempenho dos alunos nos testes padronizados, numa perspectiva classificatória e mercadológica. Evidenciamos, finalmente, a coexistência de processos de inclusão/exclusão, resultantes da utilização da Prova Brasil como instrumento de aferição do desempenho dos alunos em áreas específicas do currículo. Outra dimensão desvelada em nosso estudo refere-se aos limites do discurso em defesa das diferenças no enfrentamento das várias formas de exclusão e marginalização de alunos com deficiências e outras necessidades especiais no contexto neoliberal. Nessa perspectiva, sinalizamos as possíveis contribuições da Avaliação Institucional Participativa (AIP) – como estratégia de cunho contra regulatório – na elaboração de padrões de qualidade socialmente referenciados, que possam servir de suporte para o trabalho educativo nas escolas inclusivas.

Estudos de variações genéticas raras têm caracterizado com sucesso regiões do genoma e processos biológicos envolvidos no risco de desenvolver transtornos psiquiátricos. Dentro deste contexto, o sequenciamento de nucleotídeos em larga escala de exons do genoma inteiro para a observação de variações raras, conhecidas em inglês como single-nucleotide variation (SNV), e mutações espontâneas (\"de novo\" - DNM) tornou-se uma abordagem essencial na descoberta de novos genes de risco para transtornos psiquiátricos. Até o presente momento, nenhum estudo de SNV e variações de novo com sequenciamento de todas as regiões codificantes foi relatado no transtorno obsessivo-compulsivo (TOC). No presente estudo, este sequenciamento foi feito em 20 casos esporádicos de TOC e seus pais, para investigar a presença de variações raras de novo e herdadas nos probandos. A partir da observação de que os produtos de genes (proteínas) associados a uma mesma doença interagem em uma rede de interação proteína-proteína (IPP), foi feita uma rede de IPP com os genes (proteína) que apresentaram variações de novo não sinônimas, para observar dentre estes genes o de maior importância na rede de IPP. A fim de investigar a relevância desta rede, foi aplicado um algoritmo de grau informativo para redes, baseado na priorização de genes relacionados com doenças (Degree-Aware Algorithms for Network-Based Disease Gene Prioritization - DADA) que ordenou os genes com variações de novo não sinônimas, embasado na associação destes com uma lista de genes envolvidos em conferir risco para TOC provenientes de uma meta-análise de genética em TOC. Além disso, foi feita uma análise de processos biológicos envolvidos com os genes que apresentavam variações raras herdadas. No total, 10 variações de novo não sinônimas (9 missense e 1 nonsense) foram validadas utilizando-se o sequenciamento Sanger. Os genes WWP1, AP1G1 e CR1, advindos da lista inicial de genes com variações não sinônimas, foram altamente conectados na rede de IPP. O gene WWP1 foi o gene com maior pontuação no ranking de resultados do algoritmo DADA. Os resultados de processos biológicos envolvendo estes genes sugerem o envolvimento do sistema imunológico em TOC. Além disso, todos os genes com variações de novo não sinônimas, exceto um, são genes com expressão no cérebro e envolvidos com sinaptogênese e morte neuronal / Studies of rare variations have been used successfully to characterize regions of the genome and molecular pathways conferring risk for developmental neuropsychiatric disorders. Within this context, whole-exome sequencing for rare single-nucleotide variation (SNV) and de novo mutation (DNM) mutation has become an essential approach for gene discovery in psychiatric disease. To date, few if any studies of SNVs and de novo variation using this technology have been reported for obsessive-compulsive disorder (OCD). In the present study, all coding regions of the genome were sequenced for 20 sporadic probands with OCD and their parents, to investigate de novo and inherited rare variations in probands. Subsequently, based on the observation that the products of genes associated with similar diseases are likely to interact with each other heavily in a network of proteinprotein interactions (PPIs), a PPI network was generated, with the genes (protein) with non-synonymous de novo variation, to observe the most important genes in the network. To investigate the relevance of this network to OCD further, degree-aware disease gene prioritization (DADA) was applied, to rank all genes with non-synonymous de novo variation based on their relatedness to a set of genes previously identified in an OCD genetics meta-analysis. In addition, pathway analyses using de novo and inherited variation were completed. Altogether, 10 non-synonymous de novo variations (9 missense, 1 nonsense) were successfully validated by Sanger sequencing. We found that the genes WWP1, AP1G1 and CR1, from the initial non-synonymous de novo variation gene list, were highly interconnected in the PPI. The WWP1 gene had the highest rank in the DADA analyses. Results of the pathway analyses suggest the enrichment of genes involved in immunological systems. In short, almost all genes involved in the DNMs of the present study are expressed in the human brain and implicated in synaptogenesis and neuronal apoptosis

O diabetes mellitus tipo MODY (maturity-onset diabetes of the young) é caracterizado por defeito na secreção de insulina, herança autossômica dominante, hiperglicemia de início precoce e anticorpos anti-células beta negativos. Até o momento, já foram descritas mutações em 14 genes diferentes. A confirmação do diagnóstico de MODY é feita por estudo genético-molecular, tradicionalmente pelo método de Sanger. Diante da grande heterogeneidade genética de MODY, acrescida da dificuldade de estudo de alguns genes por seu grande tamanho e ausência de hotspots, o sequenciamento em larga escala (SLE) mostra-se promissor para uma análise genética custo-efetiva na suspeita de MODY. No Brasil, existem poucos estudos genéticos de rastreamento de MODY e uma alta prevalência de casos sem mutações identificadas nos genes testados (MODY X). Os objetivos deste estudo foram: 1) analisar simultaneamente todos os genes associados a MODY em uma coorte de pacientes com suspeita clínica, utilizando um painel de SLE; 2) avaliar a patogenicidade das variantes alélicas identificadas de acordo com os critérios da Sociedade Americana de Genética Médica (ACMG). Foram selecionados 80 casos com fenótipo de MODY e análise prévia negativa dos 2 genes mais prevalentes, GCK e HNF1A, pelo método de sequenciamento de Sanger. Estes casos foram analisados pelo método de SLE, direcionado para regiões gênicas alvo, por meio de um painel customizado, com sequenciamento simultâneo de 51 genes nucleares e do genoma mitocondrial. As mutações identificadas foram correlacionadas com o fenótipo e foi realizada a segregação familiar. Uma cobertura de no mínimo 20x foi obtida em 98% das regiões alvo. Dos 80 pacientes avaliados, foram detectadas variantes patogênicas/potencialmente patogênicas em 16 casos (20%), confirmando o diagnóstico genético de MODY. Em 15 dos 80 pacientes foram identificadas 16 variantes de significado incerto, restando ainda 42 casos com diagnóstico molecular não esclarecido. Dos 16 casos confirmados geneticamente: 6 foram no gene GCK, 1 no HNF1A, 1 no HNF4A, 1 no HNF1B, 6 em genes raros associados a MODY (1 no ABCC8, 1 no KCNJ11, 1 no PDX1, 2 no PAX4, 1 no NEUROD1), e 1 no NEUROG3, gene associado a diabetes neonatal. Dentre estas 16 variantes, 2 não haviam sido descritas previamente. As 6 mutações no GCK não tinham sido detectadas na análise prévia por: a) 4 casos falso negativos no sequenciamento por Sanger (3 devido ao fenômeno genético de allelic dropout e 1 por erro na leitura do eletroferograma); b) 2 erros na hipótese clínica inicial do subtipo de MODY (baseada no padrão glicêmico e na resposta terapêutica dos pacientes), levando ao sequenciamento prévio de outro gene. A variante no HNF1A não foi detectada previamente por erro na leitura do eletroferograma (caso falso negativo no Sanger). Uma variante foi identificada no gene HNF4A, que não tinha sido sequenciado anteriormente e apresenta fenótipo semelhante ao do HNF1A. O paciente com variante no HNF1B não apresentava relato prévio de cistos renais ou malformações genito-urinárias e por isso não tinha sido considerada a hipótese clínica de MODY5. Além disso, o SLE confirmou o diagnóstico genético de 6 pacientes com variantes em genes de MODY considerados raros, que habitualmente não são sequenciados na rotina de Sanger e ainda detectou uma variante em um gene de diabetes neonatal (sendo necessário maiores estudos para estabelecer uma relação causal com MODY). Em 13 dos 16 casos índices diagnosticados, os familiares encontravam-se disponíveis para exame genético e a co-segregação foi concordante em 8 famílias. Todos os probandos avaliados apresentavam características clínico-laboratoriais típicas de MODY. Os achados deste estudo mostraram que o SLE foi capaz de aumentar a acurácia no diagnóstico de MODY, permitindo a confirmação molecular de 20% dos casos antes negativos e reduzindo, assim, o número de casos MODY X no Brasil. A abordagem genética por painel de SLE para diagnosticar casos com suspeita clínica de MODY mostrou-se promissora para elucidar as bases genéticas desse tipo de diabetes monogênico / Diabetes mellitus type MODY (maturity-onset diabetes of the young) is characterized by defects in insulin secretion, autosomal dominant inheritance, early onset of hyperglycemia, and negative anti-beta cell antibodies. To date, mutations in 14 genes are associated with MODY. The definitive diagnosis relies on genetic tests, traditionally by Sanger sequencing. However, given the genetic heterogeneity of this condition, added to the difficulty of studying some genes due to their large size and lack of hotspots, large-scale sequencing (LSS) seems promising for cost-effective genetic analysis on suspicion of MODY. In Brazil, there are few cohorts screened for MODY and a high prevalence of MODY X (unclear genetic diagnosis). This study aimed to analyze simultaneously all MODY genes in a cohort of clinically suspected patients using a LSS panel; and to evaluate the pathogenicity of identified allelic variants according to the criteria of the American College of Medical Genetics and Genomics (ACMG). We selected 80 subjects with MODY phenotype and negative previous analysis of the 2 most prevalent genes, GCK and HNF1A, by Sanger sequencing method. These cases were analyzed by LSS method, with simultaneous sequencing of target genes. We designed a customized panel, including 51 nuclear genes and the mitochondrial genome. The identified mutations were correlated to the phenotype and family segregation was evaluated. At least 20x coverage was obtained in 98% of the targeted regions. Of 80 evaluated subjects, pathogenic/probably pathogenic variants were detected in 16 cases (20%), confirming the genetic diagnosis of MODY. In 15 of 80 patients, 16 variants of uncertain significance were identified, remaining 42 cases with unexplained molecular diagnosis. Of the 16 genetically confirmed cases: 6 were in the GCK gene, 1 in HNF1A, 1 in HNF4A, 1 in HNF1B, and 6 in rare genes associated with MODY (1 in ABCC8, 1 in KCNJ11, 1 in PDX1, 2 in PAX4 and 1 in NEUROD1), and 1 in NEUROG3, a gene associated with neonatal diabetes. Of these 16 variants, 2 had not been previously described. Those 6 variants in GCK were not detected in the prior analysis because of: a) 4 false negative cases in Sanger sequencing (allelic dropout had occurred in 3 cases and one variant was overlooked, due to electropherogram interpretation failure); b) 2 errors in the initial clinical hypothesis of the MODY subtype (based on the glycemic pattern and therapeutic response), leading to the prior sequencing of another gene. The variant in HNF1A was not previously identified due to misinterpretation in electropherogram (Sanger false negative case). One variant were detected in the HNF4A gene, not formerly sequenced, and had a similar phenotype to that of HNF1A. The patient with HNF1B variant did not have a previous report of renal cysts or genito-urinary malformations and therefore the clinical hypothesis of MODY5 was not considered. In addition, LSS confirmed the genetic diagnosis of 6 patients harboring variants in MODY genes considered to be rare, which are not usually sequenced in the Sanger routine, and also detected one variant in a neonatal diabetes gene (further studies are necessary to establish a causal relationship with MODY). Relatives were available for genetic testing in 13 of these 16 index cases diagnosed and co-segregation was concordant in 8 families. All probands evaluated showed typical clinical and laboratory characteristics of MODY. These study findings showed that targeted-LSS could increase accuracy in MODY diagnosis, enabling molecular confirmation of 20% of previous negative cases and thus reducing the number of MODY X cases in Brazil. The genetic approach of LSS panel to diagnose cases with clinical suspicion of MODY has shown promise for elucidating the genetic basis of this type of monogenic diabetes

Submitted by Neusa Fagundes (neusa.fagundes@unioeste.br) on 2018-09-04T20:06:13Z No. of bitstreams: 2 Lidia_Assis2018.pdf: 2114943 bytes, checksum: e0a414fa2fb378ed68136126f2147a14 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T20:06:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Lidia_Assis2018.pdf: 2114943 bytes, checksum: e0a414fa2fb378ed68136126f2147a14 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-04-20 / In this research, we seek to examine the current educational indicators used to verify the quality of basic education in Brazil, focusing mainly on the Basic Education Development Index (IDEB) and the International Student Assessment Program (PISA). We intended to verify, from the perspective of the teaching subjects, whether these indicators, besides the quantitative diagnosis, induce the adoption of policies for the effective improvement of basic education in municipal and state public school networks in the city of Cascavel, Paraná, in the period of 2010 to 2016. In order to understand the centrality of this large-scale evaluation from the 1990s, we performed a brief retrospective of the educational reforms implemented at that time, as well as consider the definition of the categories of evaluation and school performance and the categories of school performance and educational quality to assist in the interpretation of data analysis. We also believe it is necessary to reflect on the current National Education Plan (PNE) Law 13.005/2014, PISA and IDEB, due to the discourse that the three are configured as guiding educational policies for educational quality. Thus, we collect data to verify, from the teaching subjects, whether the quality of public basic education measured by the IDEB is reflected in the working conditions of the teachers and the quality of student care in the municipality of Cascavel, Paraná. We conclude that, by the way in which the large scale evaluation is carried out, the results expressed by the indicators prove to be insufficient to reveal the quality of basic education, since in some moments the indexes can point to numerical advances without the full realization taking place of learning. / Nesta pesquisa buscamos examinar os atuais indicadores educacionais utilizados para verificação da qualidade da educação básica no Brasil, tendo como foco principal a análise do Índice de Desenvolvimento da Educação Básica (IDEB) e do Programa Internacional de Avaliação de Estudantes (PISA). Pretendemos verificar, na perspectiva dos sujeitos docentes, se os referidos indicadores, além do diagnóstico quantitativo, induzem à adoção de políticas para efetiva melhoria da educação básica nas escolas das redes públicas municipais e estaduais na cidade de Cascavel, no Paraná, no período de 2010 a 2016. Para compreensão da centralidade da avaliação em larga escala a partir dos anos 1990, realizamos uma breve retrospectiva das reformas educacionais implementadas nesse período, bem como, buscamos a definição das categorias avaliação e rendimento escolar e as categorias desempenho escolar e qualidade educacional para auxiliar na interpretação da análise dos dados. Consideramos também necessário refletir sobre o atual Plano Nacional de Educação (PNE), Lei 13.005/2014, o PISA e o IDEB, devido ao discurso apregoado de que os três se configuram como norteadores de políticas educacionais para qualidade educacional. Sendo assim, realizamos coleta de dados para verificarmos, a partir dos sujeitos docentes, se a qualidade da educação básica pública mensurada pelo IDEB, reflete-se nas condições de trabalho dos professores e na qualidade do atendimento ao estudante, no município de Cascavel, Paraná. Levando-nos a concluir que, da forma como vem se realizando a avaliação em larga escala, os resultados expressos pelos indicadores demonstram ser insuficientes para revelar a qualidade da educação básica, pois em alguns momentos, os índices podem apontar avanços numéricos sem que ocorra a plena efetivação do aprendizado.

A micróglia é essencial para a homeostase do Sistema Nervoso Central (SNC), função neuro-imune inata, e exerce papel importante na neurodegeneração, envelhecimento cerebral e tumorigênese. Gliomas difusos são tumores cerebrais primários caracterizados por crescimento infiltrativo e altas taxas de heterogeneidade, o que torna a doença praticamente incurável. Avanços em análises genéticas caracterizaram alterações moleculares relacionadas ao tempo de sobrevida e à resposta clínica desses pacientes, especialmente em glioblastomas (GBM). No entanto, a tumorigenicidade dos gliomas não é controlada unicamente por suas alterações genéticas. As interações entre as células tumorais, a micróglia residente e os macrófagos/monócitos infiltrados desempenham um papel crucial na modulação do crescimento e agressividade do glioma. Neste estudo, analisamos o fenótipo de ativação da micróglia/macrófagos em gliomas, incluindo astrocitomas e oligodendroglimas de diferentes graus de malignidade, apresentamos o perfil de expressão gênica da população pura de micróglia cortical e do tecido cerebral total correspondente. Usando sequenciamento de DNA de alta performance, classificamos as amostras de GBM em Proneural, Clássico e Mesenquimal. Em seguida, avaliamos os status de ativação da micróglia/macrófagos dessas amostras. Apesar do alto grau de heterogeneidade, pudemos observar níveis mais altos dos marcadores mielóides (IBA1, CD11b and CD68) em tumores astrocíticos comparados a tumores de origem oligodendrocítica e ao tecido não-neoplásico. Marcadores de anti-inflamação, como CD163, foram mais abundantes em astrocitomas, bem como em GBMs do subtipo Mesenquimal e Clássico; enquanto que marcadores de pró-inflamação, como IL1-beta, mostraram uma expressão mais heterogênea entre as amostras. Em seguida, micróglia foi isolada de 25 amostras de córtex parietal provenientes de autópsia de indivíduos cognitivamente preservados e foi feito o RNA-seq. Os resultados foram comparados à micróglia de camundongo e a outras células mielóides. Boa parte dos genes expressos pela micróglia humana foram similares àqueles expressos pela micróglia murina, como CX3CR1, P2YR12 e ITGAM. Porém, foram identificados genes de característica imune, abundantemente expressos na micróglia humana e não identificados na micróglia de camundongos, como TLR, Fcy, receptores do tipo SIGLEC, e fatores de transcrição NLRC5 e CIITA. A comparação dos dados de expressão gênica da micróglia com monócitos e macrófagos identificou novos marcadores que distinguem a micróglia humana de outras células mielóides. Nossos dados sobre a micróglia em gliomas sugerem características de imunossupressão e de pró-crescimento em tumores de pior prognóstico, ligado a um fenótipo específico de ativação das células mielóides. Este é o primeiro estudo a identificar o transcriptoma da micróglia humana pura, demonstrando que ela é claramente diferente da micróglia murina e de outras células mielóides. Esses resultados abrem portas para estudos de populações específicas de células mielóides em gliomas / Microglia are essential for central nervous system (CNS) homeostasis and innate neuroimmune function, and play important roles in neurodegeneration, brain aging and tumorigenesis. Diffuse gliomas are primary brain tumors characterized by infiltrative growth and high heterogeneity, which renders the disease mostly incurable. Advances in genetic analysis have characterized molecular alterations leading to impact on patients\' overall survival and clinical outcome, particularly in glioblastoma (GBM). However, glioma tumorigenicity is not controlled uniquely by its genetic alterations. The crosstalk between tumor cells, resident microglia and infiltrating monocytes/macrophages plays a crucial role in modulating glioma growth and aggressiveness. Here, we assess the activation status of microglia/macrophages in gliomas,including astrocytomas and oligodendrogliomas of different grades of malignancy, and present the gene expression profile of pure cortical human microglia and corresponding unsorted brain tissue. Using high-throughput DNA sequencing, we have classified GBM samples in Proneural, classical and mesenchymal. Next, we evaluated the activation status of microglia/macrophages within these samples. Despite the great heterogeneity, we observed higher levels of myeloid markers (IBA1, CD11b and CD68) in astrocytic tumors compared to oligodendrocytic ones and to non-neoplastic (NN) tissue. Anti-inflammation markers, such as CD163, are also more abundant in astrocytomas, as well as in the mesenchymal and classical GBM subtypes, while pro-inflammation markers, such as IL1-beta, show a more widespread expression throughout samples. Next, microglia were isolated from the parietal cortex of 25 autopsy samples of cognitively preserved humans and RNA sequenced. Overall, genes expressed by human microglia are similar to mouse microglia, such as CX3CR1, P2YR12, and ITGAM. Interestingly, a number of immune genes, not identified as mouse microglia signature genes, were abundantly expressed in human microglia, such as TLR, Fcy and SIGLEC receptors and NLRC5 and CIITA transcription factors. Comparison of microglia to monocyte and macrophage expression data underscored the CNS-specific functions of microglia and new markers were identified that distinguish human microglia from other myeloid cells. Our glioma-related data suggests an immune-suppressive and growth supportive characteristic for tumors with worse clinical outcome, linked to an activation profile of myeloid cells. This data is the first comprehensive pure human microglia gene expression profile; human microglia clearly differ from mouse microglia and other myeloid cells. These results will help further studies focusing on pure myeloid cells populations in glioma

A osteoporose é uma doença de alta prevalência na população geral, e a ocorrência de fraturas se associa a grande morbi-mortalidade e impacto econômico. Na maioria dos indivíduos afetados, a osteoporose tem etiologia multifatorial, com herdabilidade estimada entre 50 e 85%, atribuível a um conjunto de variantes genéticas de pequeno efeito individual. Raramente, há casos de osteoporose associada a síndromes monogênicas, decorrentes de defeitos genéticos de grande impacto. Postula-se que indivíduos com quadros extremos de osteoporose não sindrômica possam ter causa genética mono- ou oligogênica, atribuível a variantes de impacto intermediário sobre o fenótipo, ainda pouco reconhecidas. Nos últimos anos, o avanço das tecnologias de sequenciamento permitiu o reconhecimento de novos genes associados à fragilidade óssea e atualmente possibilita a análise simultânea de múltiplos genes. Neste contexto, os objetivos deste projeto de pesquisa foram: 1) buscar genes candidatos para fragilidade óssea previamente associados a doenças Mendelianas com alto impacto na resistência óssea, fenótipos extremos de osteoporose e estudos de associação genética em escala genômica (GWAS) para osteoporose; e 2) pesquisar a presença de variantes alélicas patogênicas nestes genes candidatos em indivíduos com osteoporose grave, familiar ou idiopática. A partir de revisão sistemática, 128 genes candidatos foram selecionados para compor um painel de sequenciamento paralelo em larga escala. O sequenciamento incluiu todos os éxons e 25 pares de bases das junções íntron-éxon. Foram consideradas variantes genéticas de interesse aquelas raras (frequência alélica < 1%) e com predição de alto impacto sobre a proteína codificada. Trinta e sete indivíduos (7 famílias e 21 casos isolados) foram selecionados seguindo critérios clínicos, laboratoriais e densitométricos restritivos, excluindo-se pacientes com causas secundárias de osteoporose. A coorte foi composta por homens em 54%, a mediana de idade ao diagnóstico foi 44 anos e 86% tinham histórico de fratura. Dentre os 28 casos índices, foram identificadas 33 variantes de interesse. Após análise de segregação familiar, foi possível excluir patogenicidade de cinco destas variantes, restando 28 variantes potencialmente patogênicas, presentes em 71% da coorte. Todas as variantes foram encontradas em heterozigose, sendo 26 variantes de ponto não-sinônimas, uma deleção de 9 pares de bases, e uma grande deleção envolvendo o único éxon codificador do gene candidato GPR68. Foi encontrada uma associação de variantes em genes diferentes em 21% da coorte, incluindo uma mulher jovem com osteoporose grave e variantes em WNT1, PLS3 e NOTCH2. A análise de segregação familiar neste caso sugeriu um efeito patogênico aditivo das variantes. Vinte e cinco porcento das variantes potencialmente patogênicas foram identificadas em genes candidatos bem estabelecidos (WNT1, PLS3, COL1A1, COL1A2), e 57% se localizam em novos genes candidatos identificados inicialmente por GWAS, como NBR1 e GPR68, também associados à alteração da remodelação óssea em modelos animais. Os resultados deste trabalho dão relevância a novos genes na fisiologia da resistência óssea e indicam um papel proeminente de interações digênicas/oligogênicas em casos de osteoporose grave, familiar ou idiopática. O reconhecimento de novas vias associadas à fragilidade óssea pode levar ao desenvolvimento de novos tratamentos, e a identificação de variantes patogênicas associadas à osteoporose pode, futuramente, permitir um manejo clínico personalizado de pacientes e seus familiares / Osteoporosis is a highly prevalent disorder resulting in fragility fractures and incurring in great morbi-mortality and economic burden. In most cases, osteoporosis has a multifactorial etiology, with an estimated heritability of 50-85% attributable to a combination of several low-impact genetic variants. Rarely, cases of syndromic osteoporosis due to high-impact genetic defects are seen. It is therefore hypothesized that severe/idiopathic cases of otherwise inconspicuous osteoporosis may have a monoor oligogenic etiology due to genetic variants with an intermediate effect. During the past years, advances in molecular sequencing have revealed novel candidate genes for bone fragility, and have enabled simultaneous sequencing of multiple genes. In this context, the objectives of this research project were: 1) to identify candidate genes for bone fragility, as previously reported in association to Mendelian disorders with high impact on bone resistance, idiopathic or familial osteoporosis, and genome-wide association studies (GWAS) for bone mineral density and fragility fractures; and 2) to perform molecular analysis of these candidate genes in patients with severe, familial or idiopathic osteoporosis. Through a systematic review, 128 candidate genes were identified and included in a panel for massively parallel sequencing. Coding regions and 25-bp boundaries were captured and sequenced. Rare variants (allele frequency < 1%), with a predicted high impact on protein function were initially selected as variants of interest. Thirty-seven subjects (21 sporadic cases and 7 families) were included according to stringent criteria based on clinical and densitometric evaluation, excluding individuals with secondary osteoporosis. Males represented 54% of the cohort, median age at diagnosis was 44 years, and 84% of subjects had a history of fractures. Thirtythree variants of interest were identified initially. After familial segregation analysis, 5 variants were considered as benign in regard to bone fragility, resulting in 28 potentially pathogenic variants, all heterozygous, present in 71% of the cohort. Of these variants, 26 were nonsynonymous, there was one 9-bp deletion and one large deletion involving the only coding exon of candidate gene GPR68. An association of two or more variants in different genes was present in 21% of the cohort, including a young woman with severe osteoporosis and variants in WNT1, PLS3 and NOTCH2. Familial segregation in this case suggested an additive pathogenic effect of these variants. Twenty-five percent of potentially pathogenic variants were identified in well-established candidate genes (WNT1, PLS3, COL1A1, COL1A2), and 57% located to novel candidate genes initially identified by GWAS, such as NBR1 and GPR68, which have been previously associated to changes in bone remodeling in mouse models. These results support the involvement of GWAS genes in the pathophysyiology of osteoporosis, and indicate a prominent role for digenic/oligogenic interactions in cases of severe, familial or idiopathic osteoporosis. Recognition of new molecular pathways in the determination of bone fragility may lead to the development of new drugs, and the identification of pathogenic variants associated to osteoporosis may allow individualized clinical management of patients and their relatives