Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-09-04T17:22:14Z No. of bitstreams: 1 Vanessa Brandão Nardy Epidemiologia e distribuição dos loci....pdf: 968050 bytes, checksum: 2bf834f732f1945b7c707aa0ed94f21c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-04T17:22:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanessa Brandão Nardy Epidemiologia e distribuição dos loci....pdf: 968050 bytes, checksum: 2bf834f732f1945b7c707aa0ed94f21c (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose tegumentar (LT) é um problema de saúde pública, não somente por sua alta incidência e ampla distribuição geográfica, mas também, pela possibilidade de produzir lesões destrutivas. São considerados grupos de alto risco para aquisição da doença: agricultores, obreiros de fazendas, madeireiro, caçadores, excursionistas e naturalistas. Para definir estratégias e ações de controle e prevenção para LT, devemos considerar tanto os aspectos epidemiológicos quanto aspectos genéticos. Desta forma este trabalho teve como objetivo estabelecer o perfil epidemiológico da área de estudo, correlacionando os fatores de risco já bem estabelecidos na literatura com os diferentes grupos de indivíduos infectados e não infectados a partir de inquérito epidemiológico na população e caracterizar marcadores moleculares (SNP-Single Nucleotide Polymorphism) da região promotora do TNF-α, que poderão estar envolvidos na susceptibilidade ou resistência da doença LT na comunidade de Florestal-BA.Das 129 famílias que participaram do inquérito, 80,6% dos chefes de famílias pertence ao sexo masculino e possui como atividade principal o trabalho no campo, 69,8% recebe menos que um salário mínimo por mês. A análise das variáveis que se refere às condições de moradia mostra que 66,7% das residências eram construídas de alvenaria, quase todas as casas eram cobertas por telhas, com piso de cimento ou cerâmica Pouco mais que a metade das moradias tinha como fonte de água a rede pública. A maioria das casas 81,4%, possuía energia elétrica, um alto percentual 36,4% lançam lixo no terreno próximo a sua casa. 70,5% das famílias, cria em sua residência algum tipo de animal doméstico, a maior parte dos indivíduos não usam proteção individual contra mosquitos, 70,5% dos domicílios se situavam próximo às matas, rios, e criação de galinha, 77,5% domicílios, havia descrição de diversos tipos de animais nos seus arredores. A prevalência na comunidade de Florestal foi dada com a utilização do teste de Montenegro (IDRM), e do exame sorológico ELISA, sendo que os valores dessa prevalência foram praticamente similares para ambos os testes. A IDRM acusou uma prevalência de 28,9%, enquanto que, o ELISA identificou uma prevalência de 27,4%. Apesar de alguns dados não terem sido estatisticamente significativo, alguns fatores de risco analisados demonstraram maiores prevalências a infecção (IDRM+), dentre eles estão: Indivíduos do sexo masculino, adultos, trabalhadores rurais, presença de mais que uma espécie de animal na residência ou próximo a ela, residência próxima a matas e rios, construções domiciliar mais aberta, lixo no terreno, ausência de água encanada. Assim os fatores responsáveis pelo aumento de casos da doença na área, foram falta de saneamento básico, situação econômica precária, construções inadequadas, convívio com animais silvestres ou mesmo domesticados. Com relação ao estudo dos marcadores genéticos da região promotora do TNF, O loco TNF-308 mostrou estar em equilíbrio de Hardy- Weinberg, p-valor 0,464 ao contrário do loco TNF-238, que demonstrou uma deficiência na freqüência de heterozigotos para esta região. Não foi encontrada associação dos polimorfismos da região promotora do TNF com a susceptibilidade ou resistência à infecção ou com o desenvolvimento da doença LT, vale ressaltar que o alelo*A mesmo não mostrando resultado estatisticamente significativo mostrou ser um fator de risco para o desenvolvimento da doença, OR= 8,77 e 1,14 para o TNF – 238 e -308 respectivamente, sugerindo a realização de novos estudos com amostragem ampliada para esclarecimento desta questão. / The cutaneous leishmaniasis (CL) is a public health problem, not only for its high incidence and wide distribution, but also by the possibility of producing destructive lesions. Groups are considered at high risk for acquiring the disease: farmers, farm workers, loggers, hunters, hikers and naturalists. To define strategies and actions to control and prevention for LT, we must consider both the epidemiological aspects regarding genetic aspects. Thus this study aimed to establish the epidemiological profile of the study area by correlating the risk factors already well established in the literature with different groups of infected and uninfected individuals from an epidemiological survey in the population and characterize molecular markers (SNP- Single Nucleotide Polymorphism) in the promoter region of TNF-á, may be involved in susceptibility or resistance of disease in the community of Forest LT-BA. Das 129 families who participated in the survey, 80.6% of heads of households are male and has as main activity work in the field, 69.8% earn less than minimum wage per month. Analysis of variables with regard to housing conditions shows that 66.7% of the homes were built of masonry, almost all the houses were covered with tiles, with cement floors or ceramic Slightly more than half of households had a source of water to the public. Most houses 81.4% owned electric power, a high percentage 36.4% throw trash on the ground near his home. 70.5% of families, establishing his residence in some kind of domestic animal, the largest share of respondents did not use personal protection against mosquitoes, 70.5% of households were located near the forests, rivers, and creation of chicken, 77, 5% of households, there were descriptions of various types of animals in their surroundings. The prevalence in the community of Forest was given using the Montenegro skin test (IDRM), and ELISA serology, and the values of prevalence were almost similar for both tests. The MST has accused a prevalence of 28.9%, whereas the ELISA identified a prevalence of 27.4%. Although some data were not statistically significant, some risk factors analyzed showed higher prevalence infection (IDRM+), among them are: Males, adults, rural workers, the presence of more than one species of animal in the residence or nearby to her residence near forests and rivers, home building more open, trash on the ground, no running water. Thus factors responsible for increasing cases of the disease in the area were poor sanitation, poor economic status, inadequate buildings, living with wild animals or domesticated. Regarding the study of genetic markers in the promoter region of TNF, the TNF-308 locus was shown to be in Hardy-Weinberg p-value 0.464 in contrast to TNF-238 locus, which showed a deficit in heterozygote frequency for this region . There was no association of polymorphisms in the promoter region of TNF with the susceptibility or resistance to infection or disease development with LT, but it is noteworthy that the allele *A The same is not showing a statistically significant result was found to be a risk factor for the development of disease, OR = 2.00 and 1.13 respectively, suggesting the new studies with larger samples to clarify this issue.

Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-11-01T14:31:00Z No. of bitstreams: 1 karis_maria_p_rodrigues_ioc_bp_0027_2011.pdf: 37180086 bytes, checksum: 5edafa91606122063b098c48eb81a834 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-01T14:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 karis_maria_p_rodrigues_ioc_bp_0027_2011.pdf: 37180086 bytes, checksum: 5edafa91606122063b098c48eb81a834 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença que se caracteriza pela presença de lesões cultâneas (LCL) e, em um número pequeno de pacientes, pelo desenvolvimento de lesão mucosa (ML). A evolução clínica e a resposta ao tratamento dependem de múltiplos fatores, incluindo o equilíbrio entre as citocinas Th1 e Th2, influenciando no controle parasitário e na extensão da lesão. Nesse equilíbrio complexo é possível que outras citocinas inflamatórias como IL-17 e IL-18, bem como fatores que influenciem na diferenciação de queratinócitos e nos processos inflamatórios da pele, como o sistema Notch, também possam se relacionar ao prognóstico das lesões. IL-18 é uma potente citocina indutora de IFN-γ, já tendo sido observado efeito protetor em doenças por protozoários. IL-17 é produzida por uma linhagem de células T descritas mais recentemente, que são consideradas essenciais em processos inflamatórios de vários tecidos e em doenças auto-imunes. O sistema de sinalização Notch é composto por um grupo de proteínas transmembrana que regulam processos decisórios em diversos tecidos, tanto no período embrionário como na vida adulta, incluindo a diferenciação de queratinócitos e de linfócitos T, na dependência do ligante envolvido em sua ativação (Delta-like – DLL1/DLL3/DLL4 ou Jagged 1 e 2). Estudamos a expressão das proteínas do sistema Notch e das citocinas IL-17 e IL-18 em lesões e sangue de pacientes com LTA causada por Leishmania (Viannia) braz possa estar associado com reação inflamatória mais intensa e retardo na resolução das lesões. Nas lesões mucosas foi observada maior expressão do receptor Notch3 e dos ligantes Delta-like (DLL1 e DLL4). O sistema Notch está associado à homeostase da pele regulando a diferenciação de queratinócitos e a cicratização. Nas células do sistema imune, quando linfócitos T CD2+ expressando Notch são ativados por células apresentadoras de antígenos expressando ligantes Delta-like, uma resposta Th1 ou Th17 é gerada. Nesse sentido, o papel do sistema Notch nas lesões de LTA pode ser associado tanto à homeostase do tecido cutâneo quanto ao sistema imune ou a ambos, além de poder estar correlacionado ao aumento de IL-17 observado no mesmo grupo de pacientes. A alta expressão de receptores Notch, ligantes Delta-like e das citocinas inflamatórias IL-17 e IL-18 sugere que o aumento desses fatores pode indicar pacientes para os quais esteja indicado um esquema terapêutico mais agressivo, ou pelo menos, um acompanhamento mais rigoroso

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:21Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf: 1050545 bytes, checksum: 214327e202e5f77522b5e0c404d3b245 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf.txt: 135213 bytes, checksum: 5eb01e27d296b3812060dc1731d17b03 (MD5) cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf.jpg: 1359 bytes, checksum: cdb43a52a4259c711a5d91bfbc82d127 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença endêmica, causada por diferentes espécies de Leishmania e distribuída por todos os estados brasileiros. No entanto, não estão estabelecidos os critérios de cura clínica definitiva, nem a participação da resposta imunológica na manutenção do estado de cura, na reativação de lesões e no desenvolvimento da forma mucosa. A persistência parasitária após a cura clínica, já demonstrada anteriormente, poderia estar relacionada a estes fenômenos. Este estudo objetivou identificar DNA de Leishmania e a presença de parasitas através do cultivo, do exame direto e do exame histopatológico, em cicatrizes cutâneas e em pele sadia de pacientes com LTA tratados e clinicamente curados. Cinquenta pacientes com LTA e 30 com esporotricose (grupo controle) foram submetidos a avaliação dermatológica, avaliação otorrinolaringológica com fibra óptica, intradermorreação de Montenegro (IDRM), e sorologia para leishmaniose por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) Após consentimento livre e esclarecido, fragmentos de cicatriz e de pele sadia foram obtidos por biópsia, com o auxílio de "punch" 6mm. O tempo mediano decorrido entre a cicatrização da lesão e entrada no projeto foi de 25 (LTA) e 46 meses (controle) respectivamente. Os fragmentos teciduais, cujo peso mediano foi de 7,1mg, foram subdivididos em pequenas amostras submetidas à: a) extração de DNA e amplificação genérica e subgenérica por reação em cadeia da polimerase (PCR) com revelação em gel de agarose dos produtos amplificados; b) isolamento de formas promastigotas em meio de cultura bifásico (NNN enriquecido com meio Schneider e soro fetal bovino); c) investigação de formas amastigotas por exame direto corado pelo Giemsa; e d) exame histopatológico. Todos os pacientes encontravam-se clinicamente curados, com lesões cutâneas cicatrizadas e sem lesões mucosas em atividade. A IDRM foi positiva em 88% dos pacientes, a sorologia por ELISA em 44% e a RIFI em 26%. Foram encontradas duas amostras de cicatriz cutânea positivas para Leishmania, uma na PCR e outra no "imprint", ambas do grupo de LTA. As demais amostras de cicatriz e de pele sadia foram negativas Os presentes resultados confirmam achados anteriores que Leishmania pode persistir em lesões cicatrizadas. A negatividade para Leishmania nas amostras de pele sadia não apóia a hipótese do ser humano como fonte de infecção. A baixa frequência de positividade encontrada nas cicatrizes pode ser parcialmente explicada pela realização das biópsias no bordo da cicatriz, região por onde se inicia o processo de cicatrização durante o tratamento, pelo tamanho diminuto dos fragmentos cutâneos estudados e pela baixa carga parasitária / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is an endemic disease caused by different species of Leishmania and distributed in all Brazilian states. However, there are neither established criteria for definitive clinical cure, nor on the immune response participation in the maintenance of the state of cu re, in the reactivation of the lesions, and in the development of the mucosal form. The parasite persistence after clinical cure, previously demonstrated, could be related to these phenomena. This study aimed to identify Leishmania DNA and the presence of parasites through cultivation, direct examination and histopathology studies on skin scars and healthy skin of patients with ACL treated and clinically cured. Fifty patients with ACL and 30 with s porotrichosis (control group) underwent dermatologic assessm ent, EENT fiber optics evaluation, Montenegro skin test (MST), and leishmaniasis serology by enzyme immunoassay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA). After informed consent, fragments of scarred and healthy skin were obtained by punch 6 mm b iopsy. The median time between the healing of the lesion and study entry was 25 (ACL) and 46 months (control) respectively. The tissue samples, whose average weight was 7.1 mg, were further divided into small samples submitted to: a) DNA extraction and gen eric and subgeneric amplification by polymerase chain reaction (PCR) with in agarose gel revelation of amplified products, b) isolation of promastigotes in biphasic medium (NNN medium enriched with fetal calf serum in Schneider media), c) investigation of amastigotes forms by Giemsa - stained direct examination, and d) histopathological studies. All patients were clinically cured, with healed skin lesions and no mucosal lesions in activity. The MST was positive in 88% of patients, ELISA serology in 44% and IF AT in 26%. Two cutaneous scarring samples were found positive for Leishmania , one by PCR and one in the "imprint" , both ACL group . Additional samples of scarred and healthy skin were negative. The present results confirm earlier findings that Leishmania ma y persist in healed lesions. The samples negative for Leishmania in the healthy skin does not support the hypothesis of human beings as a source of infection. The low frequency of positivity found in the scarred tissues may be partially explained by the pe rformance of biopsies at the edge of the scarred region, where the healing process begins during treatment, and the extremely small size of the skin fragments studied and low parasite load

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T13:34:00Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_JanainadeMouraFreire.pdf: 5984147 bytes, checksum: 0307f6bd7decdd19b3cf8165ec5f0460 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T13:34:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_JanainadeMouraFreire.pdf: 5984147 bytes, checksum: 0307f6bd7decdd19b3cf8165ec5f0460 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T16:14:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_JanainadeMouraFreire.pdf: 5984147 bytes, checksum: 0307f6bd7decdd19b3cf8165ec5f0460 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T16:14:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_DIP_JanainadeMouraFreire.pdf: 5984147 bytes, checksum: 0307f6bd7decdd19b3cf8165ec5f0460 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A comunidade indígena Xakriabá, localizada no município de São João das Missões, norte de Minas Gerais/Brasil, tem registrado casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) desde 2001. O presente estudo teve como objetivo descrever os casos identificados desde Junho de 2008 a setembro de 2010 , bem como acompanhar a evolução a evolução clínica dos casos até 12 meses após o fim do tratamento. Os casos suspeitos foram identificados em um levantamento da população e pelos agentes de saúde indígenas. Após a assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, os pacientes foram entrevistados e avaliados clinicamente, e as informações foram registradas em questionários estruturados e pré-codificados. O diagnóstico foi confirmado por testes intradérmicos de reação (IDR), exames parasitológicos ( exame direto, fragmento de biópsia ou aspirado cultura e técnicas moleculares ( PCR- RFLP). Os diagnósticos confirmados foram aqueles que testou positivo para pelo menos um dos testes. Hematológica , testes bioquímicos e eletrocardiograma (ECG) foram realizados antes, durante e no final do tratamento com antimónio pentavalente meglumina. Doses de 15 mg/kg/dia durante 20 dias (leishmaniose cutânea) e 20 mg/kg/dia durante 30 dias ( leishmaniose mucosa) foram utilizados . Entre os 94 pacientes com lesões cutâneas avaliadas, 89 foram confirmados como LTA e 60 tratados e monitorados. os casos vieram de cinco áreas existentes, com maior ocorrência nas áreas conhecidas como "Brejo Mata Fome" (47,5% casos) e "Itapicuru" ( 43,8% dos casos). A distribuição dos casos foi semelhante entre os homens (51,7%) e mulheres (48,3%) . Idade dos pacientes variou de 1 a 72 anos, com a mediana de 18 anos. Os casos ocorreram predominantemente entre os trabalhadores rurais que ganham menos de um salário mínimo. Maioria dos pacientes apresentava lesões atípicas (70,1%) e uma única lesão (60,7%). O tempo entre o início da lesão eo diagnóstico variou de menos de um mês até 72 meses. Não houve contra-indicações para o uso de antimônio pentavalente. Sessenta pacientes foram tratados e, após o 20 º dia, 24 (40,0%) apresentavam lesões que foram completamente epitelizadas enquanto outros apresentaram os parcialmente cicatrizadas. Esses dois grupos foram comparados por características demográficas, co-infecções, número, tamanho, aparência e localização das lesões, tempo de início dos sintomas, infecções bacterianas, uso de medicamentos caseiros ou comerciais, tamanho de endurecimento, a descontinuidade do tratamento , resultados de testes de diagnóstico e genótipos de Leishmania braziliensis. Após 20 dias de tratamento, epitelização completa esteve associada a lesões parcialmente epitelizadas no primeiro exame clínico (OR = 6,5, IC 95 % = 2,0-21,7) e infecção bacteriana (OR = 0,1, IC 95 % = 0,0-0,7) . Uma avaliação realizada 90 dias após o final do tratamento indicou que 44 pacientes (73,3%) apresentaram lesões completamente epitelizadas. Quando estes pacientes foram comparados aos com lesões não-cicatrizadas houve uma associação entre a falha do tratamento e LTA anterior no passado (OR = 8,2, IC 95% = 1,5-46,3), uso de medicação caseira (OR = 7,10 , IC 95 % = 1,6-71,9) e tempo de início dos sintomas superior a 8 meses (OR = 6,3, IC95% = 1,1-36,7). Seis ( 10%) recidivas foram observados casos. Entre os 60 pacientes tratados, 35 não havia completado um ano de monitoramento, no momento da análise de dados. Esperamos que com este estudo possa ampliar o conhecimento a respeito de LTA e contribuir para a melhoria do diagnóstico e tratamento da a doença na comunidade indígena Xakriabá. / The Xakriabá indigenous community located in the municipality of São João das Missões, north of Minas Gerais has recorded, since 2001, cases of American cutaneous leishmaniasis (ACL). This study aimed to describe the cases identified from June 2008 to September 2010, as well as treat and monitor their clinical course for 12 months after the end of treatment. Suspected cases were identified in a population survey and by indigenous health agents. After signing the Informed Consent Form, patients were interviewed and clinically evaluated, and the information was recorded in structured and pre-coded questionnaires. The diagnosis was confirmed by intradermal reaction assays (IDR), parasitological exams (direct examination, fragment from biopsy or aspirate culture and molecular techniques (PCR-RFLP). The confirmed diagnoses were those which tested positive for at least one of the tests. Hematological, biochemical and electrocardiographic (ECG) tests were performed before, during and at the end of treatment with pentavalent antimony Meglumine. Doses of 15 mg / kg / day for 20 days (cutaneous leishmaniasis) and 20 mg / kg / day for 30 days (mucosal leishmaniasis) were used. Among the 94 patients with skin lesions evaluated, 89 were confirmed as LTA and 60 treated and monitored. The cases came from five existing areas, with higher occurrence in the areas known as “Brejo Mata Fome" (47.5% cases) and "Itapicuru "(43.8% cases). The distribution of cases was similar among men (51.7%) and women (48.3%). Patients’ ages ranged from 1 to 72 years old, with the median of 18. The cases occurred predominantly among rural workers earning less than the minimum wage. Most of the patients presented atypical lesions (70.1%) and a single lesion (60.7%). The time between the onset of injury and diagnosis ranged from less than one month to 72 months. There were no contraindications for using pentavalent antimony. Sixty patients were treated, and after the 20th day, 24 (40.0%) presented lesions which were completely epithelialized while others presented partially healed ones. These two groups were compared for demographic characteristics, co-infections, number, size, appearance and location of lesions, time of onset of symptoms, bacterial infections, use of homemade or commercial medications, size of induration, discontinuation of treatment, results of diagnostic tests and Leishmania braziliensis genotypes. After 20 days of treatment, complete epithelialization was associated with lesions partially epithelialized in the first clinical examination (OR = 6.5, CI 95% = 2.0-21.7) and bacterial infection (OR = 0.1, CI 95% = 0.0-0.7). An evaluation carried out 90 days after the end of the treatment indicated that 44 patients (73.3%) presented completely epithelialized lesions. When these patients were compared to the nonhealed ones, there was an association between treatment failure and previous LTA in the past (OR = 8.2, IC 95% = 1.5-46.3), use of homemade medication (OR = 7.10, CI 95% = 1.6-71.9) and time of onset of symptoms greater than 8 months (OR = 6.3, CI95%= 1.1-36.7). Six (10%) relapses cases were observed. Among the 60 patients treated, 35 had not completed one year of monitoring at the time of data analysis. The objective of this study is to expand knowledge regarding LTA and to contribute to improving the diagnosis and treatment of the disease in the Xakriabá indigenous community.

Made available in DSpace on 2016-07-01T12:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 906.pdf: 1335777 bytes, checksum: 47b1473cd090edd0a2c8273edb76d8b6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2000 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:00:02Z (GMT). No. of bitstreams: 3 906.pdf.txt: 117789 bytes, checksum: 173535bf38187be37f57fe698f585adb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 906.pdf: 1335777 bytes, checksum: 47b1473cd090edd0a2c8273edb76d8b6 (MD5) Previous issue date: 2000 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O controle da leishmaniose depende da disponibilidade de métodos acurados e sensíveis para detecção das espécies de Leishmania. Duas abordagens moleculares foram avaliadas para o diagnóstico de leishmaniose tegumentar americana (LTA) em pacientes provenientes de zonas endêmicas de Pernambuco. Uma delas era gênero específica, enquanto que a outra era específica para o subgênero Viannia. Os limiares de detecção de DNA foram determinados e a sensibilidade e especificidade calculadas, sendo subsequentemente comparadas com outros testes diagnósticos mais convencionais. O limiar de detecção de DNA da PCR específica para o subgênero Viannia foi de 10 fg de DNA total, enquanto que o limiar de detecção para a PCR gênero específica foi de 1 pg de DNA total. Para a definição de caso de LTA adotou-se a presença de critérios clínico-epidemiológicos, associados à positividade em pelo menos um dos seguintes testes: pesquisa direta, exame histopatológico e isolamento por cultura. Dessa forma dos 98 pacientes inicialmente diagnosticados com base puramente clínico-epidemiológica, 87 foram considerados casos de LTA, e utilizados para o cálculo da sensibilidade. Trinta e um pacientes com lesões cutâneas de outras etiologias foram incluídos como controles para o cálculo da especificidade. A PCR gênero específica foi positiva em 60/67 das biópsias de LTA, resultando em uma sensibilidade de 89,6 por cento, enquanto que a PCR específica para o subgênero Viannia foi positiva em biópsias de 82/87 casos de LTA, resultando em uma sensibilidade de 94,3 por cento. Contudo, essas diferenças não foram significantes. Esse dado associado a outros, sugere que apenas o subgênero Viannia tem participação como agente etiológico de LTA em Pernambuco Ambas as PCRs demonstraram 100 por cento de especificidade. O diagnóstico através da pesquisa direta apresentou um percentual de positividade dentre os casos de LTA de 68,2 por cento, o exame histopatológico 89,9 porcento, o isolamento através de cultura 44,0 por cento e a imunofluorescência indireta 81,3 por cento. Visando a utilização em regiões endêmicas com poucos recursos foram realizados alguns experimentos preliminares bem sucedidos com PCR/hibridização com sondas não radioativas. Em conclusão, as abordagens moleculares avaliadas mostraram alta sensibilidade e especificidade, permitindo uma delas o diagnóstico ao nível do subgênero Vianna.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-25T15:21:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ludmila Porto Mendes Polari.pdf: 1622619 bytes, checksum: 95b9c669923025a1b43b0a5623e3ab64 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-25T15:21:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ludmila Porto Mendes Polari.pdf: 1622619 bytes, checksum: 95b9c669923025a1b43b0a5623e3ab64 (MD5) / Introdução. A leishmaniose cutânea (LC) causada por Leishmania braziliensis é caracterizada por forte resposta imune do tipo Th1, importante para a eliminação do parasito, mas associada com o desenvolvimento das lesões. Apesar dos vários estudos sobre a imunologia da LC, vários aspectos sobre os estágios iniciais da infecção permanecem desconhecidos. Os receptores toll-like (TLR) são expressos em diversos tipos celulares, como monócitos, e a ativação desses receptores está associada à síntese de citocinas pró-inflamatórias, que iniciam a resposta imune inata. Entretanto, ainda não se tem certeza do papel dos TLRs na LC humana. Objetivo: Caracterizar a expressão dos TLRs 2 e 4 nas subpopulações de monócitos de pacientes com leishmaniose cutânea. Materiais e métodos: As expressões dos TLRs 2 e 4 e de TNF e de IL-10 foram avaliadas por citometria de fluxo nas subpopulações de monócitos de 37 pacientes com LC e 21 indivíduos sadios (CS), ex-vivo e após infecção in vitro com L. braziliensis marcados com CFSE. Resultados: A expressão dos TLRs 2 e 4, ex-vivo e após infecção com L. braziliensis, foi maior nos pacientes com LC quando comparada com CS. A expressão desses receptores é maior nos monócitos infectados com L. braziliensis em relação aos não infectados, e também é maior nas células CD14highCD16+ (monócitos intermediários) quando comparado com células CD14highCD16- (monócitos clássicos) e CD14lowCD16+ (monócitos não-clássicos). A expressão intracelular de TNF e de IL-10 foi maior nos monócitos CD14high (clássicos e intermediários) infectados com L. braziliensis que expressam os TLRs 2 e 4. Conclusão: O aumento na expressão dos TLRs 2 e 4 em monócitos de pacientes com LC, após infecção com L. braziliensis, está associado ao aumento intracelular de TNF, sugerindo que a ativação desses receptores pode contribuir para a forte resposta inflamatória observada na leishmaniose tegumentar.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-26T13:38:28Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Rosana Santos Sousa.pdf: 1130049 bytes, checksum: 655b2327510139c0f35ca9ce002df7b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T13:38:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Rosana Santos Sousa.pdf: 1130049 bytes, checksum: 655b2327510139c0f35ca9ce002df7b4 (MD5) / Apoio Financeiro NIH R03AI067663-02 NIH P50-AI30639-16 / Diferentes espécies do gênero Leishmania podem ser associadas com as diferentes formas de doença, evidenciando a contribuição do conteúdo genético do parasito sobre as manifestações clínicas e o prognóstico das infecções. A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é caracterizada por um amplo espectro de manifestações clínicas e imunológicas, que envolve a pele e mucosas. Três formas diferentes de LTA resultantes da infecção humana por Leishmania braziliensis - Leishmaniose Tegumentar Localizada (LC), Leishmaniose Cutâneo-Mucosa (LM) e Leishmaniose Disseminada (LD) - podem ser encontradas simultaneamente em Corte de Pedra, área endêmica de L. braziliensis no estado da Bahia. Estudos prévios indicaram que subpopulações (clados) de L. braziliensis geneticamente distintas foram associadas com diferentes tipos clínicos de infecção, sugerindo um alto grau de polimorfismo fenotípico e genético intraespecífico. Leishmania reside preferencialmente em macrófagos nos hospedeiros mamíferos. Nossa hipótese é que L. braziliensis de diferentes clados induzem perfis de expressão gênica distintos nos macrófagos infectados do hospedeiro, que favorecem a sua sobrevivência e que levariam aos vários desfechos clínicos de LTA. Este estudo visa avaliar se cepas pertencentes a subtipos diferentes de L. braziliensis de Corte de Pedra causam padrões distintos na expressão gênica de macrófagos após infecção. A infecção in vitro de macrófagos derivados de monócitos (MDM) humanos de doadores sadios foi realizada em paralelo por quatro horas com L. braziliensis de cada um dos diferentes clados - A, B e C, os quais estão associados com LD, LC e LM respectivamente. Utilizando a técnica de microarranjo de DNA, comparamos os padrões globais de expressão gênica entre os macrófagos infectados pelas diferentes cepas e os não infectados. Foram avaliados os níveis de expressão de 47.000 transcritos de sequências funcionalmente caracterizadas de 6.500 genes do genoma humano e os nossos resultados indicam que a maioria dos transcritos permaneceu inalterada e entre os transcritos significativamente alterados (cerca de 500), houve uma repressão causada por todos os isolados de L. braziliensis no estágio precoce da infecção. Dentre os transcritos para genes dramaticamente reprimidos temos os que codificam proteínas associadas com funções celulares importantes, como propagação de estímulos, apoptose e metabolismo oxidativo mitocondrial. Poucos transcritos de genes que codificam proteínas envolvidas na resposta ao estresse tiveram a sua expressão induzida. As diferenças entre os três isolados de L. braziliensis foram observadas na magnitude da alteração do que no tipo de transcrito envolvido e de uma maneira geral os isolados derivados das formas metastáticas da doença (LD e LM) induziram uma maior magnitude de repressão do que o isolado proveniente da forma LC. Os achados sugerem que a L. braziliensis estimula a sua sobrevivência através de modulação negativa de genes importantes das MDM do hospedeiro durante o processo de infecção, e que as cepas destinadas à disseminação exercem uma mais profunda repressão do que cepas que permanecem próximas ao sítio cutâneo de inoculação, reforçando a distinção genética entre as formas clínicas de doença.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-27T15:45:24Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Thiago Marconi de Souza Cardoso.pdf: 2610900 bytes, checksum: 39ec1903c01809723208857851e6be48 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2015-03-30T12:07:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Thiago Marconi de Souza Cardoso.pdf: 2610900 bytes, checksum: 39ec1903c01809723208857851e6be48 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-30T12:07:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Thiago Marconi de Souza Cardoso.pdf: 2610900 bytes, checksum: 39ec1903c01809723208857851e6be48 (MD5) / CNPq / Introdução: A leishmaniose cutânea (LC) causada por Leishmania braziliensis é caracterizada por uma forte resposta tipo Th1, que está envolvida no desenvolvimento das lesões. Em áreas endêmicas de transmissão de L.braziliensis, indivíduos que apresentam reação de hipersensibilidade tardia positiva para antígeno de leishmania (SLA) e sem história atual ou passada de doença são considerados como tendo uma infecção subclínica (SC). Esses indivíduos produzem menos IFN- e TNF-α em comparação com pacientes com LC e os mecanismos pelos quais os indivíduos SC controlam a infecção ainda não são compreendidos Objetivo: O objetivo deste estudo é caracterizar o papel de células T CD8+ na infecção SC e em pacientes com LC. Materiais e Métodos: Os monócitos isolados a partir de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de indivíduos LC e SC foram infectados com L.braziliensis e co-cultivadas com células T CD8+. A avaliação da infecção de monócitos, marcadores citotóxicos e a apoptose de células alvo foi realizada por citometria de fluxo (FACS). A frequência de células T e a produção intracelular de IFN- após estimulação com SLA foi avaliada por FACS. A avaliação da granzima B (GrB) nos sobrenadantes de co-cultura foi realizada por ELISA Resultados: Apesar de não haver diferença na frequência de células T CD4+ e CD8+ entre indivíduos SC e pacientes com LC, após estimulo com SLA observou-se que células T CD8+ são a principal fonte de IFN- em indivíduos SC. Os monócitos de indivíduos SC foram menos susceptíveis à infecção do que os monócitos de LC. As células T CD8+ de pacientes com LC apresentaram um maior efeito citotóxico sobre monócitos infectados em comparação com células T CD8+ de indivíduos SC. Além disso, a produção de GrB por células T CD8+ foi superior em LC do que em indivíduos SC Conclusão: Esses resultados sugerem que enquanto em indivíduos SC as células T CD8+ apresentam funções inflamatórias associadas a bom prognóstico, nos pacientes com LC estas células parecem estar mais envolvidas na patologia.

A Leishmaniose é uma doença parasitária emergente em algumas regiões do Brasil causada por protozoário do gênero Leishmania. No ano de 2002 foi notificado o primeiro caso humano autóctone de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no município de Porto Alegre/RS, Bairro Lomba do Pinheiro. No meio urbano, o cão tem papel importante, servindo como fonte de infecção e reservatório do protozoário. Este estudo teve como objetivo avaliar o emprego de ELISA e PCR no diagnóstico da LTA em cães domiciliados na Estrada do Rincão, Bairro Lomba do Pinheiro, Porto Alegre. JESUS (2006) coletou e submeteu 200 amostras de soro de cães oriundos desta área de risco à Imunofluorescência Indireta (IFI) encontrando uma soroprevalência de 3,5% (7/200). Em nosso estudo, empregaram-se o ensaio imunoenzimático para diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina, kit Biomanguinhos/FIOCRUZ, com 61 (30,5%) dos 200 soros caninos sororeagentes e nestes foi realizada a reação em cadeia da polimerase (PCR) na qual apenas a amostra 12C de uma fêmea, sem raça definida, com quatro anos de idade, replicou o DNA de Leishmania spp. Utilizando o Teste Exato de Fisher para a análise estatística quanto à idade, sexo e raça, observou-se que houve associação significativa com a positividade em ELISA e a idade dos cães (p=0,0037), enquanto que quanto ao sexo (p=0,0687) e raça (p=0,1261) não encontramos associação significativa na positividade em ELISA. O Teste de McNemar`s foi aplicado aos resultados obtidos pelas técnicas de ELISA e IFI evidenciando uma diferença muito significativa entre as duas técnicas (p<0,0001). A identificação de cães soropositivos, sem sintomatologia, em área de baixa endemicidade no município de Porto Alegre, com casos humanos autóctones, serve como alerta e ponto de partida para mais investigações sobre a epidemiologia da LTA no RS e também sobre o emprego de outras técnicas de diagnóstico mais sensíveis. / Leishmaniasis is an emerging parasitic disease in some areas of Brazil caused by a protozoa of the genus Leishmania. In the year of 2002 it was notify the first autochthon human case of American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) in the city of Porto Alegre /RS, Bairro Lomba do Pinheiro. In the urban way, the dog has important paper, serving as source of infection and reservoir of the protozoa. This study it had as objective to evaluate the job of ELISA and PCR in the diagnosis of the ATL in dogs domiciliated in the Road of the Rincão, Bairro Lomba do Pinheiro, Porto Alegre. JESUS (2006) collected and submitted 200 samples of serum of deriving dogs of this area of risk to Indirect immunofluorescent reaction (IFI) finding a soroprevalence of 3,5% (7/200). In our study, they had used for diagnosis Canine Visceral Leishmaniasis, kit Biomanguinhos/FIOCRUZ, with 61 (30.5%) positives samples of the 200 canine serum and in these the reaction in chain of polimerase in which only the sample 12C of a female, without defined race, with four years of age, presented the response of the DNA of the Leishmania genus in the PCR. Using the Accurate Test of Fisher for the analysis statistics how much to the age, sex and race, it was observed that it had significant association it enters the positividade in ELISA and the age of the dogs (p=0,0037), whereas how much to the sex (p=0,0687) and race (p=0,1261) we do not find significant association with the positividade in ELISA. The Test of McNemar `s was applied to the results gotten for the techniques of ELISA and IFI having evidenced a significant difference very between the two techniques (p< 0,0001). The identification of soropositives dogs, without symptons, in area of low endemicity in the city of Porto Alegre, with autochthon human case, also serves as alert and starting point for more inquiries on the epidemiology of the ATL in the RS and on the job of others techniques of more sensible diagnosis.

Tem-se atribuído ao flebotomíneo o papel de transmissor das leishmanioses. Com relação a leishmaniose tegumentar americana, 23 espécies parecem estar incriminadas na transmissão. Contudo, somente em Psychodopygus trapidoi, Ps.ylephiletor, Ps. intermedius, Ps. welcomei, Ps. flaviscutellatus, Ps. panamensis, Ps. olmecus, Lutzomyia gomezi e Pinzomyia pessoai, foi possível o isolamento da Leishmania. O caráter zoonótico desta doença denota uma situação ainda complexa devido aos escassos conhecimentos sobre os hospedeiros, vetores e epidemiologia das diversas Leishmania. A presente revisão confirma que esta função é desempenhada por dípteros da subfamília Phlebotominae. / The function of transmitting Leishmaniasis is generally attributed to phlebotomine sandfly. In relation to American Cutaneous Leishmaniasis, 23 species appears to be involved in the transmission process. However, Leishmania organisms could be isolated from only Psychodopygus trapidoi, Ps. ylephiletor, Ps. intermedius, Ps. welcomei, Ps. flaviscutellatus, Ps. panamensis, Ps. olmecus, Lutzomyia gomezi and Pintomyia pessoai. The zoonotic charater of this disease is yet a complex situation due to lack of adequate knowledge about host, vector and epidemiology of various Leishmania. The present revision confirms that the function is perfomed by diptera of sub-family, Phlebotominae.