Introdução - A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma antropozoonose com o envolvimento de várias espécies de Leishmania, mamíferos reservatórios e flebotomíneos (vetores). Apresenta ampla distribuição no Brasil, com registro de casos em todas as unidades da Federação. É de interesse em saúde pública devido à gravidade de algumas de suas formas e alta prevalência em algumas regiões. Em áreas de transmissão na Grande São Paulo, têm sido registradas várias espécies de flebotomíneos, merecendo destaque Pintomyia fischeri, por ser altamente antropofílica e apresentar ampla distribuição no estado de São Paulo. Objetivo - Identificar a capacidade vetora dos flebotomíneos Pintomyia fischeri para Leishmania (Viannia) braziliensis, um dos agentes da leishmaniose tegumentar americana (LTA), comparando-a com a de Nyssomyia intermedia, vetor desse parasita na região Sudeste do Brasil. Métodos - Os seguintes parâmetros foram identificados: em campo - densidade das espécies em relação a um hospedeiro (hamster), com a instalação da armadilha de Disney em duas áreas (município do Embu na Grande São Paulo e município de Iporanga, na região do Vale do Ribeira) e teste de uma nova armadilha (apenas em Iporanga); em laboratório, a partir de infecção experimental de flebotomíneos por meio da alimentação em hamsters infectados pelo parasita - probabilidade diária de sobrevivência dos flebotomíneos, duração do ciclo gonotrófico, período de incubação extrínseca dos parasitas, proporção de flebotomíneos que se alimentam em fonte infectante e que se tornaram infectivos. Com estes dados calculou-se a capacidade vetora (novas infecções que a população vetora levará adiante ao se alimentar em um hospedeiro infectado), pela expressão V = m.a.b.Einf, onde V = capacidade vetora, m = proporção de fêmeas atraídas ao hospedeiro, a = proporção de fêmeas alimentando-se no hospedeiro/duração do ciclo gonotrófico, b = proporção de fêmeas infectadas que desenvolvem a forma infectante e Einf = expectativa de vida infectiva. Resultados Em se tratando do parâmetro observado em campo (m), densidade de flebotomíneos/hamster/dia, na armadilha de Disney em Iporanga esse valor para Ny. intermedia foi de 0,027 e para Pi. fischeri (0,011), em Embu, para Pi. fischeri (0,103) e para nova armadilha, apenas em Iporanga, Ny. intermedia (7,9) e Pi. fischeri (0,11). Nos parâmetros obtidos em laboratório: sobrevida infectiva (Einf): Ny. intermedia (0,84 dias) e Pi. fischeri (0,89 dias); proporção de fêmeas alimentadas em hamster: Ny. intermedia (0,77) e Pi. fischeri (0,67) e mediana do ciclo gonotrófico, para as duas espécies de 5 dias; período de incubação extrínseca para as duas espécies de 5 dias; e proporção de fêmeas infectadas por promastigotas que chegaram à forma infectante (b) para Ny. intermedia (0,90) e Pi. fischeri (0,311). A capacidade vetora obtida com a armadilha de Disney para Ny. intermedia em Iporanga foi de 0,0027 e para Pi. fischeri (0,00089) e no Embu para Pi. fischeri de 0, 0083 e para a armadilha nova, em Iporanga apenas, Ny. intermedia (0,8) e Pi. fischeri (0,0089). Conclusão - A capacidade vetora avaliada pelas armadilhas nova e a de Disney apresentou disparidades. Para Ny. intermedia, em Iporanga o valor da primeira foi 296,3 vezes maior que o da Disney e para Pintomyia fischeri foi 10 vezes maior. Na comparação entre o mesmo tipo de armadilha, em Iporanga para Ny. intermedia o valor da capacidade vetora obtido com a Disney foi 3,03 vezes superior ao de Pi. fischeri e na nova, foi 89,9 vezes. Para Pintomyia fischeri, os valores obtidos para a capacidade vetora considerando a Disney (Embu) foram 9,3 vezes maiores que os de Iporanga. A capacidade vetorial de Pi. fischeri (Embu) foi 3,07 vezes maior do que o de Ny. intermedia (Iporanga). Possivelmente as duas espécies atuem na transmissão da LTA no estado de São Paulo. Em Iporanga Ny. intermedia atua de maneira bem mais incisiva do que a Pi. fischeri. Por outro lado, no Embu, onde Ny. intermedia não tem sido capturada, a população de Pi. fischeri apresentou capacidade vetora superior à de Ny. intermedia (Iporanga), quando avaliadas segundo o mesmo tipo de armadilha para obtenção da densidade vetora. / Introduction American cutaneous leishmaniasis (ACL) is an anthroponosis involving several species of Leishmania, mammalian reservoirs and phlebotomine vectors. It is widespread in Brazil, cases having been registered in all the states. It constitutes a serious public health problem due to the gravity of some of its forms and its high prevalence in some regions. Several species, including Pintomyia fischeri that is dominant, widespread and anthropophilic, have been registered in areas of transmission within the metropolitan region of Greater São Paulo, Objective To identify the vectorial capacity of Pintomyia fischeri for Leishmania (Viannia) braziliensis, one of the agents of ACL, comparing it with that of Nyssomyia intermedia, a vector of this parasite in Southeastern Brazil. Methods The following parameters were identified: in the field density of the species in relation to a host (hamster), with the installation of a Disney trap in two areas: Embu municipality (within Greater São Paulo) and Iporanga municipality (in the Ribeira Valley region), and a new trap (in Iporanga); in the laboratory on the basis of the experimental infection of sandflies which fed on hamsters infected with the parasite; daily probability of survival of the sandflies; duration of the gonotrophic cycle; extrinsic period of incubation of the parasite; proportion of phlebotomines which fed on the infective host and which themselves became infectious. With these data the vectorial capacity (new infections which the vector population will transmit when it feeds on an infected host) was calculated, using the expression V = m.a.b.Einf, where V = vectorial capacity, m = proportion of females attracted to the host , a = proportion of females feeding on the host/duration of gonotrophic cycle, b = proportion of infected females which develop the infective forms of the parasite and Einf = infective life expectancy. Results As regards the parameter observed in the field (m), density of insects/hamster/day, in the Disney trap in Iporanga this value for Ny. intermedia was 0.027 and for Pi. fischeri, 0.011, in Embu, for Pi. fischeri , 0.103 and for the new trap in Iporanga, for Ny. intermedia, 7.9 and for Pi. fischeri, 0.11. In the laboratory: infective life expectancy (Einf): Ny. intermedia (0.84 days) and Pi. fischeri (0.89 days); proportion of females fed on the hamster: Ny. intermedia (0.67) and Pi. fischeri (0.77) and median of the duration of the gonotrophic cycle for both species, of 5 days; and proportion of females infected by promastigotes which attained infective form (b) for Ny. intermedia (0.90) and Pi. fischeri (0.59). The vectorial capacity obtained with the Disney trap for Ny. intermedia in Iporanga was 0.0027 and for Pi. fischeri, 0.00089 and in Embu for Pi. fischeri, 0.0083 and for the new trap only in Iporanga, Ny. intermedia (0.8) and Pi. fischeri (0.0089). Conclusion The vectorial capacity measured by the new and the Disney traps presented considerable differences. For Ny. intermedia in Iporanga the value of the former was 296.3 times greater than that of the Disney and for Pintomyia fischeri it was 10 times greater. In the comparison between traps of the same kind, in Iporanga for Ny. intermedia the value of vectorial capacity obtained with the Disney trap was 3.03 times greater than that of Pi. fischeri and in the new trap it was 89.9 times greater. For Pintomyia fischeri, the vectorial capacity obtained with Disney (Embu) was 9.3 times greater than that for Iporanga. The vectorial capacity of Pi. fischeri (Embu) was 3.07 times greater than that of Ny. intermedia (Iporanga). Possibly both species are active in the transmission of ACL in the state of São Paulo. In Iporanga Ny. intermedia acts in a much more incisive way than Pi. fischeri. On the other hand, in Embu, where Ny. intermedia was not captured, the Pi. fischeri population presented a vectorial capacity greater than that of Ny. intermedia (Iporanga) when assessed by the same type of trap for the calculation of vector density.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CLARA MARIA CARDOSO COSTA MONTEIRO.pdf: 2892661 bytes, checksum: fe49a38a7866c07f7aeced992627f042 (MD5) Previous issue date: 2009-05-04 / The leishmaniasis (ACL) is a zoonotic disease whose etiologic agent, species of the genus Leishmania. And a disease of the skin and mucous membranes, primarily zoonotic involving a variety of wild and domestic mammals. Outbreaks of leishmaniasis occur by environmental changes due to deforestation, construction of dams, roads, mines, plant work areas, military groups with the penetration of man into the wild where are the vectors and reservoirs. There is considerable degree of exposure related to human settlement or agricultural occupation of the outskirts of cities. In these cases, there is the clearance of mammalian hosts and vectors adapting to the new environment, generating impacts on human health. The forms of the disease are characterized as localized cutaneous leishmaniasis, mucocutaneous leishmaniasis and diffuse anergic leishmaniasis. The diagnosis can be clinical, epidemiological and laboratory. Some preventive measures can be used as the vector control, the animal reservoirs and the treatment of patients. The measures in health education should be included in all services to develop control measures. They are used for the pharmacological treatment antimony compounds such as sodium stibogluconate (Pentostam ®) and antimony N-methyl-(Glucantime ®). There are medicines for the treatment of second line, such as amphotericin B (AB), Pentamidine, these are alternative drugs with significant side effects, and they are indicated only in cases of hypersensitivity phenomena to antimonials and / or high rates of secondary infection. Recurrence and resistance to treatment are factors that motivate the search for an ideal drug. Treatment of cutaneous leishmaniasis is a challenge because the avaible drugs are highly toxic. / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma zoonose que tem como agente etiológico, espécies do gênero Leishmania. E uma doença da pele e das mucosas, primariamente zoonótica que envolve uma variedade de mamíferos silvestres e domésticos. Surtos de leishmaniose ocorrem por mudanças ambientais decorrentes de desmatamento, construção de hidroelétricas, estradas, garimpos, instalação de frentes de trabalho, grupos militares com a penetração do homem no meio silvestre onde habitam os vetores e reservatórios. Há considerável grau de exposição relacionado a assentamentos populacionais agrícolas ou ocupação das periferias das cidades. Nestes casos, ocorre a domiciliação de hospedeiros mamíferos e vetores adaptando-se ao novo ambiente, gerando impactos sobre a saúde humana. As formas clínicas da doença são caracterizadas como Leishmaniose cutânea localizada, Leishmaniose mucocutânea e Leishmaniose difusa anérgica. O diagnóstico pode ser clínico, epidemiológico e laboratorial. Algumas medidas profiláticas podem ser empregadas como o combate ao vetor, aos animais reservatórios, além do tratamento das pessoas infectadas. As medidas educativas em saúde devem ser inseridas em todos os serviços que desenvolvam ações de controle. Através deste trabalho realizou-se um levantamento bibliográfico sobre a LTA enfatizando a terapêutica disponível nas diferentes formas clínicas da doença. Para o tratamento farmacológico são empregados compostos antimoniais pentavalentes como o estibogluconato de sodium (Pentostam®) e o antimoniato de N-Metil-Glucamina (Glucantime®). Existem medicamentos para o tratamento de segunda linha, como Anfotericina B (AB), Pentamidina. Estes são medicamentos alternativos com efeitos colaterais importantes, sendo indicados apenas nos casos de fenômenos de hipersensibilidade aos antimoniais e/ou altos índices de infecção secundária. A recidiva e a resistência ao tratamento são fatores que motivam a busca de um fármaco ideal. O tratamento da leishmaniose tegumentar americana é um desafio, pois os fármacos disponíveis apresentam elevada toxicidade.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoLipidicaCepas.pdf: 2897843 bytes, checksum: 9aa86804bc41e652642865ba71249b97 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / INCT/BEB - Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Biologia Estrutural e Bioimagem / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) constitui uma doença infecciosa causada por protozoários do gênero Leishmania com elevada incidência na região Amazônica. Uma variedade de espécies de leishmania é responsável por esta patologia. Desta forma, dependendo da espécie e da resposta imunológica do hospedeiro vertebrado, a doença pode apresentar diferentes formas clínicas, como a leishmaniose cutânea localizada (LCL) e a leishmaniose mucocutânea (LMC). A principal espécie responsável pela LTA é a Leishmania (Viannia) braziliensis. Contudo, devido à existência de uma multiplicidade de cepas desta espécie e ao reduzido número de estudos relacionados, torna-se importante o conhecimento dos aspectos metabólicos básicos do protozoário, como o metabolismo lipídico, na tentativa de caracterizar vias ou componentes fundamentais para seu desenvolvimento e infectividade. Desta forma, este trabalho teve como objetivo analisar distribuição de corpos lipídicos (CLs) e o perfil lipídico de duas cepas de L. (V.) braziliensis, isolada de diferentes casos clínicos, em diferentes períodos da fase estacionária do crescimento celular. As formas promastigotas das cepas M17593 (LCL) e M17323 (LMC) de L. (V.) braziliensis foram utilizadas na fase estacionária inicial (EST-I) e estacionária tardia (EST-T) de crescimento. Inicialmente, foi realizada análise ultraestrutural das formas promastigotas por microscopia eletrônica de transmissão (MET) e foram observadas estruturas sugestivas de CLs distribuídos no citoplasma do parasito, confirmados pela técnica citoquímica ósmio-imidazol, organelas necessárias para o metabolismo energético do parasito. Para quantificar a distribuição de CLs entre os dias de cultivo e entre as cepas, foi realizada análise por citometria de fluxo com Bodipy® 493/503. Os resultados indicaram que a cepa responsável pela LMC apresentou maior quantidade de CLs durante a fase estacionária tardia. Na cepa LCL não foi observado diferença significativa entre as fases estudadas. Assim, pode ser sugerido que a exacerbada resposta inflamatória que ocorre em pacientes com LMC, esteja relacionada com o acúmulo de CLs no parasito, fonte de energia e eicosanoides, como prostaglandinas. Outra hipótese é a possível correlação de CLs com a baixa exposição do fosfolipídio fosfatidilserina para a superfície externa da membrana, importante para a infectividade do parasito. Para análise dos lipídios totais, os parasitos foram submetidos à extração lipídica, seguido da técnica de HPTLC, onde foram encontrados predominantemente fosfolipídios, esterol esterificado, esteróis, triglicerídeos e ácidos graxos compondo o parasito, com variações entre as cepas e entre as fases estudadas. A cepa LCL na fase estacionária tardia possui maior quantidade de lipídios totais, que pode ser justificado por já ser conhecida como a cepa mais infectiva e possivelmente apresentar maior quantidade de glicoconjugados associados com subdomínios lipídicos importantes para o reconhecimento de fagócitos. É importante ressaltar que a maior infectividade da cepa LCL quando comparada à cepa LMC, resulta em um menor processo inflamatório. Estes resultados indicam que há uma variação no perfil lipídico e na distribuição de CLs entre as diferentes cepas de L. (V.) braziliensis, que pode estar relacionado com a infectividade do parasito e com a manifestação clinica da doença. / The american cutaneous leishmaniasis (ACL) is an infectious disease caused by protozoa of the genus Leishmania with high incidence in the Amazon region. A variety of leishmania species are responsible for this pathology. Thus, depending on the species and the immune response of the vertebrate host, the disease can display different clinical forms, including localized cutaneous leishmaniasis (LCL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL). The main species responsible for the LTA is Leishmania (Viannia) braziliensis. However, due to existence of a multiplicity of strains of this species and reduced number of related studies, it is important to know the basic metabolic aspects of the protozoa such as lipid metabolism in an attempt to characterize pathways or components essential to their development and infectivity. This study aimed to analyze the distribution of lipid droplets (LD) and lipid profile of two strains of L. (V.) braziliensis isolated from different clinical cases at different periods of the stationary phase of cell growth. The promastigotes of strains M17593 (LCL) and M17323 (LMC) of L. (V.) braziliensis were used in early stationary phase (STAT-E) and late stationary (STAT-L) of the growth. Initially, was performed ultrastructural analysis of promastigotes by transmission electron microscopy (TEM) and we could observe structures suggestive of LD distributed in the cytoplasm of the parasite, confirmed by imidazole-osmium cytochemical technique, organelles required for energy metabolism of the parasite. To quantify the LD distribution between the days of cultivation and between the different strains, analysis was performed by flow cytometry with BODIPY ® 493/503. The results showed that the MCL strain had a higher amount of LD during the late stationary phase. In LCL strain no significant difference was observed between the phases studied. Thus, it can be suggested that the increase inflammatory response that occurs in patients with MCL, is associated with LD accumulation in parasite, energy and eicosanoids source, such prostaglandins. Another hypothesis is the possible correlation between LD and the low phosphatidylserine exposure to the external surface of the membrane, important to parasite infectivity. For the total lipids analysis, parasites were subjected to lipid extraction, followed by HPTLC technique, which were found predominantly phospholipids, sterol esterified, sterols, triglycerides and fatty acids composing the parasite, with variations between strains and between phases studied. The LCL strain in late stationary phase has a higher amount of total lipids, which can be explained because this strain already known as the infective one, and possibly present high quantities of glycoconjugates associated with lipid subdomains important for the recognition of phagocytes. It is important to know the high infectivity of LCL strain compared to MCL strain, results in less inflammation. These results indicate that exist difference in lipid profile and LD distribution between different strains of L. (V.) braziliensis, which may be related to the parasite infectivity and the clinical manifestation of the disease.

A leishmaniose é uma ameaça para cerca de 350 milhões de pessoas em 88 países no mundo. No município de Bandeirantes, estado do Paraná, Brasil, foram notificados 183 casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) entre 2000 a 2013. Objetivos: Descrever e analisar os casos de LTA ocorridos no município de Bandeirantes Paraná, entre 2007 e 2013 e investigar os fatores de risco associados à ocorrência da doença, considerando-se fatores socioeconômicos, condições habitacionais e do entorno das residências, atividades ocupacionais e de lazer, conhecimento sobre a LTA na população de estudo e algumas práticas; investigar a presença de anticorpos anti Leishmania sp. na população canina e descrever as características socioeconômicas, condições habitacionais e do entorno das residências, atividades ocupacionais, de lazer nos casos que evoluíram para óbitos bem como as características clínicas. Métodos: estudo caso-controle não pareado. A amostra constou de 104 casos autóctones de LTA notificados na Secretaria Municipal de Saúde de Bandeirantes e 90 controles, residentes selecionados aleatoriamente que apresentassem reação de imunofluorescência indireta (RIFI) negativa. A amostra da população canina foi composta por animais presentes nas residências dos casos e dos controles. Foram investigados os óbitos entre os indivíduos que tiveram LTA no período do estudo. Resultados: O sexo feminino prevaleceu entre os casos (62,50 por cento ) e controles (68,89 por cento ), bem como a faixa etária maior ou igual a 60 anos em ambos os grupos (46,15 por cento e 33,33 por cento , respectivamente). Todavia estas condições não se mostraram como fatores de risco significante. Mostraram-se como fatores de risco significantes (p < 0,05) as seguintes variáveis: ser analfabeto (OR = 10,09), aposentados (OR = 2,35), praticar atividades de lazer relacionadas à zona rural (OR = 4,47), frestas na casa (OR = 2,15), presença de matos próximos ao domicílio (OR = 6,92), presença de plantas frutíferas no peridomicílio (OR=2,02), anexos peridomicilares (OR = 4,30), galinheiro (OR=2,15) e canil (OR = 3,90), dormir fora do quarto (OR=4,97), 8 combate a animais sinantrópicos (OR = 2,69), uso de repelente corporal (5,43) e conhecer o mosquito transmissor (OR = 3,48), a relação com outros animais (OR =2,51) e prevenção (OR = 2,24). Como fatores de proteção: renda familiar > 3 salários mínimo (OR = 0,22), casa de alvenaria e reboco (OR = 0,41), abastecimento de água de rede (OR = 0,41), presença de rede de esgoto (OR = 0,33), coleta de lixo pública (OR = 0,35). Os exames sorológicos realizados nos cães do estudo demonstraram que 38,23 por cento foram reagentes para os casos e 2,12 por cento nos controles. Os cães dos casos possuem 28,47 vezes mais chance de contrair a LTA quando comparados com os cães dos controles (p<0,0001). Foram investigados 14 óbitos, 35,71 por cento estavam em tratamento da LTA e 42,86 por cento apresentavam lesões compatíveis com a LTA. Conclusões: A ocorrência da LTA em Bandeirantes mostrou-se associada estatisticamente às variáveis: idade, escolaridade, renda familiar, atividades de lazer relacionadas à zona rural, presença de anexos domiciliares e vegetação próximo ao domicílio, assim como o uso de repelente corporal, dormir fora do quarto e conhecer o mosquito vetor da LTA e a sua forma de prevenção. / The leishmaniasis threat around 350 million people in 88 countries around the world. In Bandeirantes - Parana from 2000 to 2013 183 cases of American tegumentary leishmaniasis (ATL) were reported. Objectives: to describe and analyze the occurrence of ATL in human population in Bandeirantes - Parana, between 2007 and 2013; to investigate the risk factors associated with the disease considering socioeconomic factors, housing conditions and the surrounding residences, occupational and leisure activities, knowledge of the LTA in the study population and some practical; investigate the presence of antibodies against Leishmania sp. the canine population and describe the socio-economic characteristics, housing conditions and the surrounding residences, occupational activities, leisure in cases that evolved to death and the clinical characteristics. Methods: A not paired case-control study was performed in with 104 cases, individuals who had autochthonous ATL notified in the Municipal Health Department of Bandeirantes and 90 controls were randomly selected out of those who presented negative reaction of indirect immunofluorescence (IIF). The canine population was selected from the cases and controls. The deaths among those individuals who had ATL during the study period were investigated. Results: Females were more abundant in case (62,5 per cent ) and control groups (68.89 per cent ) with predominance of age equal or greater than 60 years in both groups (46,15 and 33.33 per cent respectively). However, these conditions were not significant risk factors. The significant risk factors (p < 0,05) were: illiterate people (OR = 10,09), those who receive one to three minimum wages (OR =4,48), retired people (OR=2,35), to practice leisure activities related to rural area (OR=4,47), openings on the house (OR=2,15), presence of forests near the domicilie (OR = 6,92), presence of fruit plants near the house (OR=2,02), attachments to the house (OR = 4,30), chicken stay (OR=2,15), kennel (OR = 3,90), to sleep out of the bedroom (OR=4,97), to combat urban plagues (OR = 2,69), to use repellent (5,43) and to know the phlebotomine (OR = 3,48) and its relation with other animals (OR =2,51), and prevention (OR = 2,24). The protective factors were house of masonry and plaster (OR = 0.41), water supply network (OR = 0.41), 10 presence of sewage (OR = 0.33), public garbage collection (OR = 0.35). The serological tests performed in dogs of the study showed that 38.23 per cent were reactive to the cases and 2.12 per cent to the controls. The dogs of the cases have 28.47 times more chance of catching the ATL when compared with the dogs of the controls (p< 0.0001). Fourteen deaths were investigated, out of which 35.71 per cent were in treatment of ATL and 42.86 per cent had lesions compatible with the ATL. Conclusions: The occurrence of ATL in Bandeirantes proved to be statistically associated with the variables: age, education, family income, leisure activities related to rural area, presence of attachments to the house and vegetation near the domicile, as well as the use of repellent, sleeping outside of the room and knowing the disease vector of ATL and its prevention.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:06:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tullio.pdf: 2981239 bytes, checksum: d6f78923df4523264147690fa8713589 (MD5) Previous issue date: 2013-08-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Insects from the subfamily Phlebotominae (Diptera: Psychodidae) are of medical interest because they are vectors of protozoa of the genus Leishmania transmitted when the insect feeds. Approximately 500 species are known in the Americas and 133 registered in the state of Amazonas. Caused by different species of Leishmania, cutaneous leishmaniasis (ACL) affects humans and other animals, affecting skin and mucosa. This work is part of the project " Condições de vida e saúde de populações indígenas na Amazônia", PRONEX, which has an interdisciplinary approach to study eco-epidemiological and anthropological aspects of leishmaniasis in the Middle Purus, funded FAPEAM / CNPq, and is in progress in the municipality of Lábrea, where there are records of cases and suspected underreporting. Therefore, it was thought appropriate to the study sand flies of the municipality as a contribution to the knowledge of the epidemiology of ACL. The aim of this study was to investigate the entomological aspects related to the epidemiology of ACL in an indigenous area of the municipality of Lábrea. The collection of sand flies was carried out in February 2012 in the Aldeia Castanheira, Indian Reserve Caititú, municipality of Lábrea using light traps. After identification of insects, we performed detection and identification of Leishmania present in the collected sand flies using a molecular approach. A total of 1,267 sandflies was collected, 819 (64.6%) females and 448 (35.4%) males, distributed in 10 genera and 32 species. The most abundant genera were Psychodopygus, Nyssomyia and Trichophoromyia, the species Trichophoromyia ubiquitalis was the most abundant with 235 (18.5%) specimens, followed by Psychodopygus davisi with 228 (18%) and Nyssomyia antunesi with 135 (10.7%) individuals. The presence of Leishmania was detected in six species: Sciopemyia servulolimai, Trichophoromyia ubiquitalis, Evandromyia apurinan, Nyssomyia umbratilis, Nyssomyia yuilli yuilli, Psychodopygus davisi, the estimated minimum infection rate was 0.84%.The Leishmania species were: Leishmania (L.) amazonensis, Leishmania (V.) braziliensis and a sample identified only to the level of subgenus Leishmania (Viannia) sp. The Leishmania infection detected in vector species / suspected vectors found in this work, suggests the involvement of these species in the transmission cycle of leishmaniasis in the municipality. Future investigations should be made to help elucidate the epidemiology of cutaneous leishmaniasis in the municipality of Lábrea as well as the state of Amazonas. / Os insetos da subfamília Phlebotominae (Diptera: Psychodidae) são de interesse médico por serem vetores de protozoários do gênero Leishmania transmitidos no momento da alimentação do inseto. Cerca de 500 espécies são conhecidas paras as Américas e 133 registradas no estado do Amazonas. Causada por diferentes espécies de Leishmania, a leishmaniose tegumentar americana (LTA) acomete o homem e outros animais, afetando pele e mucosa. Este trabalho está inserido no projeto Condições de vida e saúde de populações indígenas na Amazônia , PRONEX, que possui abordagem interdisciplinar para estudar aspectos eco-epidemiológicos e antropológicos da LTA no Médio Purús, financiado pela FAPEAM/CNPq, e em andamento no município de Lábrea, estado do Amazonas onde há registros de casos e suspeita de subnotificações. Por isso, achou-se oportuno o estudo de flebotomíneos do município como contribuição para o conhecimento da epidemiologia da LTA. O objetivo deste trabalho foi estudar os aspectos entomológicos relacionados a epidemiologia da LTA em uma área indígena do município de Lábrea. A coleta de flebotomíneos foi realizada em fevereiro de 2012, na Aldeia Castanheira, Terra Iindígena Caititú, município de Lábrea, utilizando armadilhas com atrativo luminoso. Após a identificação dos insetos, foi realizada a detecção e identificação de leishmânias presentes nos flebotomíneos coletados utilizando uma abordagem molecular. Um total de 1.267 flebotomíneos foi coletado, 819 (64,6%) fêmeas e 448 (35,4%) machos, distribuídos em 10 gêneros e 32 espécies. Os gêneros mais abundantes encontrados foram Psychodopygus, Nyssomyia e Trichophoromyia, já a espécie Trichophoromyia ubiquitalis foi a mais abundante com 235 (18,5%) espécimes coletados, seguida de Psychodopygus davisi com 228 (18%) e Nyssomyia antunesi com 135 (10,7%) indivíduos. Foi detectada a presença de DNA de Leishmania em seis espécies: Sciopemyia servulolimai, Trichophoromyia ubiquitalis, Evandromyia apurinan, Nyssomyia umbratilis, Nyssomyia yuilli yuilli, Psychodopygus davisi, sendo a taxa de infecção mínima estimada foi de 0,84%. As espécies de leishmânias detectadas foram: Leishmania (L.) amazonensis, Leishmania (V.) braziliensis e uma amostra identificada somente ao nível de subgênero Leishmania (Viannia) sp. A infecção por Leishmania detectada em espécies vetoras encontradas neste trabalho, é um indício da participação das mesmas no ciclo de transmissão de LTA no município. Futuras investigações devem ser realizadas para ajudar a elucidar a epidemiologia da LTA não só no município de Lábrea mas para o estado do Amazonas.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:14:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO kARINA.pdf: 1878961 bytes, checksum: f6896d6307a1bc7e9fd5b8e1379c4194 (MD5) Previous issue date: 2008-11-25 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The protozoa of the genus Leishmania has a great diverty of species and are related whith the clinical form of American tegumentary Leishmaniasis (ATL) and Visceral Leishmaniasis (VL) distinguish through the geographical distribuition, the reservoir hosts and the vectors involved in the cycle, with incidence and mortality variation according with the region. Although the clinical variation forms found in patients with ATL the ilness could be grouped in three basics types: cutaneous leishmaniasis (CL), mucocutaneous leishmaniasis (ML) and diffuse cutaneous leishmaniasis. The immune response profile differs in the linfocyte activation of TCD4+ Th1 or Th2. The Th1 and Th2 cells could be identidied through the secreted cytokines, the Th1 linfocytes produced activators cytokines by immunity cells mediated as well as the INFg, INF a, IL-2 and IL-12. Howerver the infection susceptibility is related to Th2 cell response that secreted cytokine IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TGF-B, promoting the antibody response. In the mucosal leishmaniasis has a misture of Th1 and Th2 response profile, before and after treatment, with higt levels of IgA. The leterature shows that there is a positive correlation between the high levels of IgE and the Montenegro reaction, suggesting that these antigens guide the TCD+ response to a Th1 profile. For this one, the levels of immunoglobulins isotypes (IgG, IgM, IgA and IgE) were measured in the serum samples of 36 patients infected with cutaneos and mucosal leishmaniasis caused by Leishmania (Viannia) guyanensis, from the Manaus municipality, Amazonas State, Brazil. The technicals employed were ELISA and Western Blotting. This study showed low levels of IgM and IgG in patients infected with L.(V.) guyanensis by the ELISA method using the OPD substract tht was sinsible to detect the serics immunoglobulins, for this method could not be used as diagnostic but is indicate to follow-up the infection evolution. / Os protozoários do gênero Leishmania, compreendem uma vasta diversidade de espécies e estão relacionados com a forma clínica da leishmaniose (LTALeishmaniose Tegumentar Americana e LV- Leishmaniose Visceral) diferindo quanto a distribuição geográfica, aos hospedeiros e vetores envolvidos, com variações nas taxas de incidência e mortalidade de acordo com a região. Apesar da ampla variedade de formas clínicas encontradas em pacientes com LTA, podemos agrupá-las em três tipos básicos: leishmaniose cutânea (LC), leishmaniose cutâneo-mucosa (LCM) e leishmaniose cutânea difusa (LCD). O perfil da resposta imunológica na leishmaniose cutânea difere na ativação de linfócitos T CD4+ Th1 ou Th2. As células Th1 e Th2 se identificam segundo o perfil de citocinas que elas secretam, os linfócitos Th1 produzem fundamentalmente citocinas ativadoras da imunidade mediada por células tais como o INF-γ, INFa, IL-2 e IL12. Por outro lado, a sucetibilidade à infecção está relacionada à resposta de célula Th2, que secretam citocinas do tipo IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TGF-b, promovendo a resposta de anticorpos. Por outro lado, na leishmaniose mucosa há um mistura de perfil de resposta Th1 e Th2, antes e após tratamento, com altos índices de IgA. Dados de literatura demonstram que existe uma correlação positiva entre altos índices de IgE e a reação de Montenegro, sugerindo que antígenos orientam a resposta T CD4+ para um perfil Th2. Desta forma, buscou-se detectar níveis séricos de isotipos de imunoglobulinas (IgG, IgM, IgA e IgE) em amostras de soros de pacientes infectados com Leishmaniose cutânea e mucosa causada por Leishmania (Viannia) guyanensis, proveniente do município de Manaus, estado do Amazonas, Brasil. A técnica empregada foi o ELISA. Esta técnica utiliza extratos ou frações antigênicas do parasita. Este estudo demonstrou que a técnica sorológica pelo método de ELISA utilizando como substrato OPD é sensível para detectar a presença de imunoglobulinas séricas IgG e IgM em humanos infectados com a Leishmania (Viannia) guyanensis assim como a infecção por esta espécie leva a produção de baixo níveis de IgG e IgM, não devendo ser considerada como método útil no diagnóstico e sim como acompanhamento da evolução da infecção.

Introdução - A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma antropozoonose com o envolvimento de várias espécies de Leishmania, mamíferos reservatórios e flebotomíneos (vetores). Apresenta ampla distribuição no Brasil, com registro de casos em todas as unidades da Federação. É de interesse em saúde pública devido à gravidade de algumas de suas formas e alta prevalência em algumas regiões. Em áreas de transmissão na Grande São Paulo, têm sido registradas várias espécies de flebotomíneos, merecendo destaque Pintomyia fischeri, por ser altamente antropofílica e apresentar ampla distribuição no estado de São Paulo. Objetivo - Identificar a capacidade vetora dos flebotomíneos Pintomyia fischeri para Leishmania (Viannia) braziliensis, um dos agentes da leishmaniose tegumentar americana (LTA), comparando-a com a de Nyssomyia intermedia, vetor desse parasita na região Sudeste do Brasil. Métodos - Os seguintes parâmetros foram identificados: em campo - densidade das espécies em relação a um hospedeiro (hamster), com a instalação da armadilha de Disney em duas áreas (município do Embu na Grande São Paulo e município de Iporanga, na região do Vale do Ribeira) e teste de uma nova armadilha (apenas em Iporanga); em laboratório, a partir de infecção experimental de flebotomíneos por meio da alimentação em hamsters infectados pelo parasita - probabilidade diária de sobrevivência dos flebotomíneos, duração do ciclo gonotrófico, período de incubação extrínseca dos parasitas, proporção de flebotomíneos que se alimentam em fonte infectante e que se tornaram infectivos. Com estes dados calculou-se a capacidade vetora (novas infecções que a população vetora levará adiante ao se alimentar em um hospedeiro infectado), pela expressão V = m.a.b.Einf, onde V = capacidade vetora, m = proporção de fêmeas atraídas ao hospedeiro, a = proporção de fêmeas alimentando-se no hospedeiro/duração do ciclo gonotrófico, b = proporção de fêmeas infectadas que desenvolvem a forma infectante e Einf = expectativa de vida infectiva. Resultados Em se tratando do parâmetro observado em campo (m), densidade de flebotomíneos/hamster/dia, na armadilha de Disney em Iporanga esse valor para Ny. intermedia foi de 0,027 e para Pi. fischeri (0,011), em Embu, para Pi. fischeri (0,103) e para nova armadilha, apenas em Iporanga, Ny. intermedia (7,9) e Pi. fischeri (0,11). Nos parâmetros obtidos em laboratório: sobrevida infectiva (Einf): Ny. intermedia (0,84 dias) e Pi. fischeri (0,89 dias); proporção de fêmeas alimentadas em hamster: Ny. intermedia (0,77) e Pi. fischeri (0,67) e mediana do ciclo gonotrófico, para as duas espécies de 5 dias; período de incubação extrínseca para as duas espécies de 5 dias; e proporção de fêmeas infectadas por promastigotas que chegaram à forma infectante (b) para Ny. intermedia (0,90) e Pi. fischeri (0,311). A capacidade vetora obtida com a armadilha de Disney para Ny. intermedia em Iporanga foi de 0,0027 e para Pi. fischeri (0,00089) e no Embu para Pi. fischeri de 0, 0083 e para a armadilha nova, em Iporanga apenas, Ny. intermedia (0,8) e Pi. fischeri (0,0089). Conclusão - A capacidade vetora avaliada pelas armadilhas nova e a de Disney apresentou disparidades. Para Ny. intermedia, em Iporanga o valor da primeira foi 296,3 vezes maior que o da Disney e para Pintomyia fischeri foi 10 vezes maior. Na comparação entre o mesmo tipo de armadilha, em Iporanga para Ny. intermedia o valor da capacidade vetora obtido com a Disney foi 3,03 vezes superior ao de Pi. fischeri e na nova, foi 89,9 vezes. Para Pintomyia fischeri, os valores obtidos para a capacidade vetora considerando a Disney (Embu) foram 9,3 vezes maiores que os de Iporanga. A capacidade vetorial de Pi. fischeri (Embu) foi 3,07 vezes maior do que o de Ny. intermedia (Iporanga). Possivelmente as duas espécies atuem na transmissão da LTA no estado de São Paulo. Em Iporanga Ny. intermedia atua de maneira bem mais incisiva do que a Pi. fischeri. Por outro lado, no Embu, onde Ny. intermedia não tem sido capturada, a população de Pi. fischeri apresentou capacidade vetora superior à de Ny. intermedia (Iporanga), quando avaliadas segundo o mesmo tipo de armadilha para obtenção da densidade vetora. / Introduction American cutaneous leishmaniasis (ACL) is an anthroponosis involving several species of Leishmania, mammalian reservoirs and phlebotomine vectors. It is widespread in Brazil, cases having been registered in all the states. It constitutes a serious public health problem due to the gravity of some of its forms and its high prevalence in some regions. Several species, including Pintomyia fischeri that is dominant, widespread and anthropophilic, have been registered in areas of transmission within the metropolitan region of Greater São Paulo, Objective To identify the vectorial capacity of Pintomyia fischeri for Leishmania (Viannia) braziliensis, one of the agents of ACL, comparing it with that of Nyssomyia intermedia, a vector of this parasite in Southeastern Brazil. Methods The following parameters were identified: in the field density of the species in relation to a host (hamster), with the installation of a Disney trap in two areas: Embu municipality (within Greater São Paulo) and Iporanga municipality (in the Ribeira Valley region), and a new trap (in Iporanga); in the laboratory on the basis of the experimental infection of sandflies which fed on hamsters infected with the parasite; daily probability of survival of the sandflies; duration of the gonotrophic cycle; extrinsic period of incubation of the parasite; proportion of phlebotomines which fed on the infective host and which themselves became infectious. With these data the vectorial capacity (new infections which the vector population will transmit when it feeds on an infected host) was calculated, using the expression V = m.a.b.Einf, where V = vectorial capacity, m = proportion of females attracted to the host , a = proportion of females feeding on the host/duration of gonotrophic cycle, b = proportion of infected females which develop the infective forms of the parasite and Einf = infective life expectancy. Results As regards the parameter observed in the field (m), density of insects/hamster/day, in the Disney trap in Iporanga this value for Ny. intermedia was 0.027 and for Pi. fischeri, 0.011, in Embu, for Pi. fischeri , 0.103 and for the new trap in Iporanga, for Ny. intermedia, 7.9 and for Pi. fischeri, 0.11. In the laboratory: infective life expectancy (Einf): Ny. intermedia (0.84 days) and Pi. fischeri (0.89 days); proportion of females fed on the hamster: Ny. intermedia (0.67) and Pi. fischeri (0.77) and median of the duration of the gonotrophic cycle for both species, of 5 days; and proportion of females infected by promastigotes which attained infective form (b) for Ny. intermedia (0.90) and Pi. fischeri (0.59). The vectorial capacity obtained with the Disney trap for Ny. intermedia in Iporanga was 0.0027 and for Pi. fischeri, 0.00089 and in Embu for Pi. fischeri, 0.0083 and for the new trap only in Iporanga, Ny. intermedia (0.8) and Pi. fischeri (0.0089). Conclusion The vectorial capacity measured by the new and the Disney traps presented considerable differences. For Ny. intermedia in Iporanga the value of the former was 296.3 times greater than that of the Disney and for Pintomyia fischeri it was 10 times greater. In the comparison between traps of the same kind, in Iporanga for Ny. intermedia the value of vectorial capacity obtained with the Disney trap was 3.03 times greater than that of Pi. fischeri and in the new trap it was 89.9 times greater. For Pintomyia fischeri, the vectorial capacity obtained with Disney (Embu) was 9.3 times greater than that for Iporanga. The vectorial capacity of Pi. fischeri (Embu) was 3.07 times greater than that of Ny. intermedia (Iporanga). Possibly both species are active in the transmission of ACL in the state of São Paulo. In Iporanga Ny. intermedia acts in a much more incisive way than Pi. fischeri. On the other hand, in Embu, where Ny. intermedia was not captured, the Pi. fischeri population presented a vectorial capacity greater than that of Ny. intermedia (Iporanga) when assessed by the same type of trap for the calculation of vector density.

A Leishmaniose é uma doença parasitária emergente em algumas regiões do Brasil causada por protozoário do gênero Leishmania. No ano de 2002 foi notificado o primeiro caso humano autóctone de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no município de Porto Alegre/RS, Bairro Lomba do Pinheiro. No meio urbano, o cão tem papel importante, servindo como fonte de infecção e reservatório do protozoário. Este estudo teve como objetivo avaliar o emprego de ELISA e PCR no diagnóstico da LTA em cães domiciliados na Estrada do Rincão, Bairro Lomba do Pinheiro, Porto Alegre. JESUS (2006) coletou e submeteu 200 amostras de soro de cães oriundos desta área de risco à Imunofluorescência Indireta (IFI) encontrando uma soroprevalência de 3,5% (7/200). Em nosso estudo, empregaram-se o ensaio imunoenzimático para diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina, kit Biomanguinhos/FIOCRUZ, com 61 (30,5%) dos 200 soros caninos sororeagentes e nestes foi realizada a reação em cadeia da polimerase (PCR) na qual apenas a amostra 12C de uma fêmea, sem raça definida, com quatro anos de idade, replicou o DNA de Leishmania spp. Utilizando o Teste Exato de Fisher para a análise estatística quanto à idade, sexo e raça, observou-se que houve associação significativa com a positividade em ELISA e a idade dos cães (p=0,0037), enquanto que quanto ao sexo (p=0,0687) e raça (p=0,1261) não encontramos associação significativa na positividade em ELISA. O Teste de McNemar`s foi aplicado aos resultados obtidos pelas técnicas de ELISA e IFI evidenciando uma diferença muito significativa entre as duas técnicas (p<0,0001). A identificação de cães soropositivos, sem sintomatologia, em área de baixa endemicidade no município de Porto Alegre, com casos humanos autóctones, serve como alerta e ponto de partida para mais investigações sobre a epidemiologia da LTA no RS e também sobre o emprego de outras técnicas de diagnóstico mais sensíveis. / Leishmaniasis is an emerging parasitic disease in some areas of Brazil caused by a protozoa of the genus Leishmania. In the year of 2002 it was notify the first autochthon human case of American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) in the city of Porto Alegre /RS, Bairro Lomba do Pinheiro. In the urban way, the dog has important paper, serving as source of infection and reservoir of the protozoa. This study it had as objective to evaluate the job of ELISA and PCR in the diagnosis of the ATL in dogs domiciliated in the Road of the Rincão, Bairro Lomba do Pinheiro, Porto Alegre. JESUS (2006) collected and submitted 200 samples of serum of deriving dogs of this area of risk to Indirect immunofluorescent reaction (IFI) finding a soroprevalence of 3,5% (7/200). In our study, they had used for diagnosis Canine Visceral Leishmaniasis, kit Biomanguinhos/FIOCRUZ, with 61 (30.5%) positives samples of the 200 canine serum and in these the reaction in chain of polimerase in which only the sample 12C of a female, without defined race, with four years of age, presented the response of the DNA of the Leishmania genus in the PCR. Using the Accurate Test of Fisher for the analysis statistics how much to the age, sex and race, it was observed that it had significant association it enters the positividade in ELISA and the age of the dogs (p=0,0037), whereas how much to the sex (p=0,0687) and race (p=0,1261) we do not find significant association with the positividade in ELISA. The Test of McNemar `s was applied to the results gotten for the techniques of ELISA and IFI having evidenced a significant difference very between the two techniques (p< 0,0001). The identification of soropositives dogs, without symptons, in area of low endemicity in the city of Porto Alegre, with autochthon human case, also serves as alert and starting point for more inquiries on the epidemiology of the ATL in the RS and on the job of others techniques of more sensible diagnosis.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T17:10:38Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Walker Oliveira.pdf: 646440 bytes, checksum: 715267f8e674a7d1a347adde1fef2b75 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-12T17:10:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Walker Oliveira.pdf: 646440 bytes, checksum: 715267f8e674a7d1a347adde1fef2b75 (MD5) / NIH Grant; CAPES / Introdução: A forte resposta do tipo Th1, com produção exagerada de IFN- e TNF-α, observada na leishmaniose tegumentar humana causada por Leishmania braziliensis está associada com a destruição tecidual e desenvolvimento de lesão observada em pacientes com leishmaniose cutânea (LC) e em pacientes com leishmaniose mucosa (LM). Em contraste com essas formas clínicas, 10% dos indivíduos residentes em área endêmica, apesar de apresentarem reação de hipersensibilidade tardia para o antígeno de Leishmania, não apresentam evidências de doença clínica e são considerados como tendo a forma subclínica (SC) da doença. A produção de IFN-γ e TNF-α nestes indivíduos é menor quando comparada com pacientes com LC. Existem várias evidencias que a forte resposta inflamatória não modulada está associada com a patogênese da LC e da LM. Embora os indivíduos SC apresentem uma resposta inflamatória mais fraca, ainda não é bem conhecido como eles controlam a infecção. Uma resposta Th1 eficiente e modulada pode estar envolvida na proteção da infecção por L. braziliensis. A modulação da resposta imune é feita principalmente por citocinas moduladoras como IL-10, TGF-β e mais recentemente por IL-27. Objetivo: Avaliar o papel de citocinas regulatórias e de antagonistas de citocinas na modulação da resposta imune na infecção por L. braziliensis. Metodologia: Células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de 40 pacientes com LC, 18 com LM e 13 indivíduos com infecção subclínica foram estimuladas com antígeno solúvel de Leishmania (SLA) na presença e ausência de citocinas regulatórias (IL-10, IL-27 e TGF-β) ou antagonistas de citocinas (α-TNF-α e α-IFN-γ). A produção de citocinas (IL-10, IL-17, TNF-α e IFN-γ) foi mensurada através da técnica de ELISA e de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Resultados: IL-10 e TGF-β apresentaram atividade moduladora da produção de TNF-α e IL-17, sobretudo na LC, enquanto IL-27 não apresentou efeito modulador na produção de TNF-α, IFN-γ e IL-17 em nenhuma das formas clínicas da leishmaniose tegumentar. A neutralização de TNF-α diminuiu a produção de IFN-γ, mas não alterou a produção de IL-10, enquanto a neutralização de IFN-γ diminuiu a produção de TNF-α e aumentou a produção de IL-10 nesses pacientes. A produção de IL-17 foi maior nos indivíduos SC, embora sem significância estatística e a neutralização de IL-10 não alterou a produção de IFN-γ nesses indivíduos. Entretanto a expressão de IL-27 foi maior em pacientes com LC quando comparado com os indivíduos SC. Conclusões: IL-10 e TGF-β parecem ser as citocinas mais envolvidas na modulação da resposta imune em pacientes com LC e LM, principalmente IL-10, desde que a neutralização de IFN-γ diminui a produção de TNF-α de uma forma dependente de IL-10. A produção de IL-17 nos indivíduos SC sugere que essa citocina pode estar envolvida na proteção contra a infecção por L. braziliensis. / Salvador

Made available in DSpace on 2014-03-18T17:13:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf: 1050545 bytes, checksum: 214327e202e5f77522b5e0c404d3b245 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença endêmica, causada por diferentes espécies de Leishmania e distribuída por todos os estados brasileiros. No entanto, não estão estabelecidos os critérios de cura clínica definitiva, nem a participação da resposta imunológica na manutenção do estado de cura, na reativação de lesões e no desenvolvimento da forma mucosa. A persistência parasitária após a cura clínica, já demonstrada anteriormente, poderia estar relacionada a estes fenômenos. Este estudo objetivou identificar DNA de Leishmania e a presença de parasitas através do cultivo, do exame direto e do exame histopatológico, em cicatrizes cutâneas e em pele sadia de pacientes com LTA tratados e clinicamente curados. Cinquenta pacientes com LTA e 30 com esporotricose (grupo controle) foram submetidos a avaliação dermatológica, avaliação otorrinolaringológica com fibra óptica, intradermorreação de Montenegro (IDRM), e sorologia para leishmaniose por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) Após consentimento livre e esclarecido, fragmentos de cicatriz e de pele sadia foram obtidos por biópsia, com o auxílio de "punch" 6mm. O tempo mediano decorrido entre a cicatrização da lesão e entrada no projeto foi de 25 (LTA) e 46 meses (controle) respectivamente. Os fragmentos teciduais, cujo peso mediano foi de 7,1mg, foram subdivididos em pequenas amostras submetidas à: a) extração de DNA e amplificação genérica e subgenérica por reação em cadeia da polimerase (PCR) com revelação em gel de agarose dos produtos amplificados; b) isolamento de formas promastigotas em meio de cultura bifásico (NNN enriquecido com meio Schneider e soro fetal bovino); c) investigação de formas amastigotas por exame direto corado pelo Giemsa; e d) exame histopatológico. Todos os pacientes encontravam-se clinicamente curados, com lesões cutâneas cicatrizadas e sem lesões mucosas em atividade. A IDRM foi positiva em 88% dos pacientes, a sorologia por ELISA em 44% e a RIFI em 26%. Foram encontradas duas amostras de cicatriz cutânea positivas para Leishmania, uma na PCR e outra no "imprint", ambas do grupo de LTA. As demais amostras de cicatriz e de pele sadia foram negativas Os presentes resultados confirmam achados anteriores que Leishmania pode persistir em lesões cicatrizadas. A negatividade para Leishmania nas amostras de pele sadia não apóia a hipótese do ser humano como fonte de infecção. A baixa frequência de positividade encontrada nas cicatrizes pode ser parcialmente explicada pela realização das biópsias no bordo da cicatriz, região por onde se inicia o processo de cicatrização durante o tratamento, pelo tamanho diminuto dos fragmentos cutâneos estudados e pela baixa carga parasitária / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is an endemic disease caused by different species of Leishmania and distributed in all Brazilian states. However, there are neither established criteria for definitive clinical cure, nor on the immune response participation in the maintenance of the state of cu re, in the reactivation of the lesions, and in the development of the mucosal form. The parasite persistence after clinical cure, previously demonstrated, could be related to these phenomena. This study aimed to identify Leishmania DNA and the presence of parasites through cultivation, direct examination and histopathology studies on skin scars and healthy skin of patients with ACL treated and clinically cured. Fifty patients with ACL and 30 with s porotrichosis (control group) underwent dermatologic assessm ent, EENT fiber optics evaluation, Montenegro skin test (MST), and leishmaniasis serology by enzyme immunoassay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA). After informed consent, fragments of scarred and healthy skin were obtained by punch 6 mm b iopsy. The median time between the healing of the lesion and study entry was 25 (ACL) and 46 months (control) respectively. The tissue samples, whose average weight was 7.1 mg, were further divided into small samples submitted to: a) DNA extraction and gen eric and subgeneric amplification by polymerase chain reaction (PCR) with in agarose gel revelation of amplified products, b) isolation of promastigotes in biphasic medium (NNN medium enriched with fetal calf serum in Schneider media), c) investigation of amastigotes forms by Giemsa - stained direct examination, and d) histopathological studies. All patients were clinically cured, with healed skin lesions and no mucosal lesions in activity. The MST was positive in 88% of patients, ELISA serology in 44% and IF AT in 26%. Two cutaneous scarring samples were found positive for Leishmania , one by PCR and one in the "imprint" , both ACL group . Additional samples of scarred and healthy skin were negative. The present results confirm earlier findings that Leishmania ma y persist in healed lesions. The samples negative for Leishmania in the healthy skin does not support the hypothesis of human beings as a source of infection. The low frequency of positivity found in the scarred tissues may be partially explained by the pe rformance of biopsies at the edge of the scarred region, where the healing process begins during treatment, and the extremely small size of the skin fragments studied and low parasite load