Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-11T13:35:46Z No. of bitstreams: 1 fabriciaaparecidarezendesoares.pdf: 1857440 bytes, checksum: f25c08dc77a5f4ef171b000924735ca2 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-14T17:09:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabriciaaparecidarezendesoares.pdf: 1857440 bytes, checksum: f25c08dc77a5f4ef171b000924735ca2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-14T17:09:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabriciaaparecidarezendesoares.pdf: 1857440 bytes, checksum: f25c08dc77a5f4ef171b000924735ca2 (MD5) Previous issue date: 2007-12-11 / Uma ATP difosfohidrolase foi identificada em promastigotas de Leishmania braziliensis, e resultado similar foi encontrado em outra cepa de Leishmania, pertencente ao Complexo Leishmania braziliensis. Hidrólise de nucleosídeos di- e trifosfatados sob estímulo de íons bivalentes, associada à inibição por azida sódica, sugeriram que atividade ATP difosfohidrolásica está presente em promastigotas. Western blots desenvolvidos com anticorpos anti-apirase de batata produzidos em coelho revelaram bandas de 48 e 43 kDa, possivelmente sub-unidades da mesma proteína. Estes anticorpos imobilizados em Proteína A-Sepharose depletaram aproximadamente 85% da atividade ATPásica ou ADPásica da ATP difosfohidrolase solubilizada em C12E9. O complexo imunoprecipitado (resina-anticorpo-antígeno) foi separado por SDS-PAGE. Através de western blots desenvolvidos com anticorpos anti-apirase de batata produzidos em camundongos, a mesma banda de 48 kDa foi identificada nas duas cepas, confirmando que as proteínas do parasito e da batata compartilham epítopos. Além disso, o peso molecular coincidente sugeriu que esta ATP difosfohidrolase corresponde a um nucleosídeo difosfatase identificada no genoma de L. braziliensis como pertencente à família das NTPDases. Estreita relação estrutural e evolucionária foram então demonstradas entre a apirase de batata e a NDPase de L. braziliensis por cladograma, alinhamento de seqüências de aminoácidos, predição de epítopos e modelagem molecular. Domínios específicos parecem estar potencialmente envolvidos na resposta imune do hospedeiro, conservados entre estes diferentes organismos. Devido a esta imunoreatividade cruzada observada entre a apirase de batata e a ATP difosfohidrolase de L. braziliensis, também sugerido por análises in silico, western blots foram desenvolvidos com soros de pacientes com LTA, e os resultados sugeriram que estes epítopos compartilhados são antigênicos para o humano. Os níveis de anticorpos contra a proteína vegetal ou contra o homogeneizado de L. braziliensis foram então analisados em 21 amostras de soros de pacientes com LTA. Aproximadamente 84% deles têm soropositividade de IgG para Lb ou apirase de batata. Correlação positiva foi observada entre os níveis de IgG e os níveis elevados dos subtipos IgG1 e IgG3 contra Lb, ambos com 76% de soropositividade em pacientes com LTA. Interessantemente, aumentos significativos dos níveis de IgG1 (71% de soropositividade) e IgG3 (43% soropositividade) contra a apirase de batata foram também observados. Elevada soropositividade de IgG4 para Lb (62%) e apirase de batata (48%), mas não de IgG2 (<24%), evidenciaram que a ATP difosfohidrolase do parasito é também capaz de estimular este subtipo de IgG. Soropositividade de IgA para Lb ou apirase de batata foi de 62% e 14%, respectivamente, enquanto para IgM ou IgE foi baixa em ambas preparações (<14%). Estes resultados sugerem que os domínios compartilhados entre a apirase de batata e a ATP difosfohidrolase de L. braziliensis contribuem com a elevação de IgG contra antígenos de promastigota, associada a maior produção de IgG1, IgG3 e IgG4. Esta é a primeira demonstração de uma ATP difosfohidrolase ativa em promastigotas de L. braziliensis, de sua imunoreatividade cruzada com anticorpos anti-apirase de batata, e de propriedades antigênicas dos domínios conservados entre elas em pacientes com LTA. Estudos destes domínios compartilhados poderão levar ao desenvolvimento de novas drogas, marcadores moleculares ou vacinas. / ATP diphosphohydrolase was identified in Leishmania braziliensis promastigote, and similar result was found in other Leishmania strain, typified as belonging to the Leishmania braziliensis Complex. The significant hydrolysis of di- or triphosphate nucleosides upon bivalent metal ion stimulus, associated to the inhibition promoted by sodium azide, suggested strongly that ATP diphosphohydrolase activity is present in promastigote preparations. Western blots developed with rabbit polyclonal anti-potato apyrase revealed bands of 48 and 43 kDa, possibly subunits of the same protein. These antibodies immobilized on Protein A-Sepharose depleted about 85% of the ATPase or ADPase activity from C12E9-solubilized ATP diphosphohydrolase. The immunoprecipitated resin-rabbit antibody-antigen complex was separated by SDS-PAGE, and Western blots developed with mouse polyclonal anti-potato apyrase antibodies identify the same 48 kDa band in the two promastigote strains, confirming that parasite and vegetable proteins share epitopes. Furthermore, the coincident molecular weigh suggested that this active ATP diphosphohydrolase corresponds to the putative nucleoside diphosphatase identified in L. braziliensis genome as belonging to NTPDase family, whose amino acid sequence was recently deposited in GeneBank database from NCBI. Evolutionary and closer structural relationships were then demonstrated between potato apyrase and Leishmania braziliensis NDPase by phylogenetic analysis, alignment of amino acid sequences, peptides prediction and molecular modeling. Specific protein domains are suggested to be potentially involved in the immune response. They also seem to be conserved during host and parasites co-evolution. Due to this cross-immunoreactivity between potato apyrase and ATP diphosphohydrolase from Leishmania (V.) braziliensis promastigotes, also suggested by in silico analyses, Western blots were developed with antibody present in sera from patients with American cutaneous leishmaniasis (ACL), and the results suggested that these shared epitopes are antigenic for host human. The antibody levels against the vegetable protein or against Leishmania braziliensis promastigote antigens preparation were then analyzed in 21 serum samples from patients with ACL. About 84% of them have IgG seropositivity for L. braziliensis promastigote antigens (Lb) or potato apyrase. Positive correlation was observed between IgG and the elevated IgG1 or IgG3 subtypes levels against Lb, both subtypes com 76% seropositivity in ACL patients. Interestingly, significant elevations of the IgG1 (71% seropositivity) and IgG3 (43% seropositivity) levels against potato apyrase were also observed. High IgG4 seropositivity for both Lb (62%) and potato apyrase (48%), but not of IgG2 (<24%), evidenced that parasite ATP diphosphohydrolase is also capable to stimulate this IgG subtype. IgA seropositivity for Lb or potato apyrase was 62% and 14%, respectively, while IgM or IgE antibody seropositivity was low for both preparations (<14%). These results suggest that the domains shared between potato apyrase and Leishmania braziliensis ATP diphosphohydrolase contribute with IgG antibody level elevation against promastigote antigens, associated to higher IgG1, IgG3 and IgG4 subtype production. It is the first demonstration of an active ATP diphosphohydrolase in Leishmania braziliensis promastigote form, of its cross-immunoreactivity with anti-potato apyrase antibody, and antigenic properties of conserved domains in ACL patients. Further studies of these shared domains could lead to the development of new drugs targets, molecular markers or implementation of vaccines.

A caracterização de sequências codificadoras presentes nas vizinhanças do gene META 1 permitiu a identificação de alguns genes expressos preferencialmente em estágios infectivos de L. (L.) amazonensis. Um dos genes presentes é regulado de forma distinta, observando-se maior abundância do RNA em formas amastigotas. Este gene foi denominado LaLRR17 por codificar uma proteína contendo em sua região central 6 repetições ricas em leucina (LRR). As LRR são motivos presentes em diversas famílias de proteínas e são responsáveis pela formação de uma estrutura capaz de estabelecer interações protéicas. A região central da proteína LRR17 apresentou similaridade com a porção carboxi-terminal da proteína NOD 3 humana. A proteína LRR17 foi localizada no citosol de macrófagos infectados com L. (L.) amazonensis. Para caracterizar a função da proteína LRR17 foram obtidas linhagens de L. (L.) amazonensis expressoras do gene LmjLRR17. Essas linhagens mutantes foram mais infectivas em macrófagos in vitro quando comparadas com a linhagem selvagem. Avaliamos também o papel das proteínas NOD 1 e NOD 2 na infecção por L. (L.) amazonensis e L. (L.) major para estabelecer a possível relação da proteína LRR17 na interação com essas vias de defesa celular do macrófago. / The characterization of coding sequences in the vicinity of the META 1 gene allowed the identification of some genes preferentially expressed in L. (L.) amazonensis infective stages. One of the identified transcripts presents a distinct pattern of expression with higher levels of mRNA in amastigotes. This gene was named LaLRR17 since it encodes a 72 kDa protein with 6 leucine-rich repeats (LRR) in its central region. Leucine-rich repeats (LRR) are present in several families of proteins and are responsible for the formation of a structure capable of establishing protein interactions. The central region of the LRR17 protein showed similarity with the carboxyl-terminal portion of the NOD 3 human protein. The LaLRR17 protein is secreted to the cytoplasm of L. (L.) amazonensis-infected macrophages. To characterize the function of the LRR17 protein we obtained strains of L. (L.) amazonensis expressing the LmjLRR17 gene. These mutant strains were more infective to macrophages in vitro when compared with the wild type strain. We also evaluated the role of NOD 1 and NOD 2 proteins in infections with L. (L.) amazonensis and L. (L.) major to investigate a possible role of the LRR17 protein in the interaction with these defense pathways in macrophages.

Introdução. O Litoral Norte Paulista, até a década de 1980, era hipoendêmico para transmissão de leishmaniose tegumentar americana (LTA). A partir da década de 1990, esta parasitose adquiriu caráter epidêmico em todos os municípios: Caraguatatuba, Ilhabela, São Sebastião e Ubatuba. Objetivo. Realizar análise descritiva da ocorrência dos casos de LTA autóctone no Litoral Norte Paulista, entre 1993 e 2005 e registrar as espécies de flebotomíneos na área de transmissão. Métodos. Foram analisados dados secundários obtidos das fichas de casos de LTA autóctones, notificados ao serviço de vigilância epidemiológica da Secretaria Estadual de Saúde, segundo distribuição espacial, temporal, atributos pessoais e dados das fichas de captura entomológica da Superintendência de Controle de Endemias. Resultados. A LTA apresentou distribuição espacial heterogênea, com casos isolados e agrupados. Houve sincronismo na manifestação do agravo, com ciclicidade, em intervalo de seis a oito anos. Todas as faixas etárias e sexo foram acometidos, sem evidência de risco com ocupação específica. A fauna flebotomínea foi composta por dezesseis espécies, com predomínio de Ny. intermedia (>80,4%), no peri e intra domicílio. Conclusões. A LTA apresenta estreita relação com a floresta e a transmissão ocorre no peri e no intradomicílio, tanto no ambiente periurbano como no interior da mata. Neste caso, a transmissão estaria mais relacionada com os focos enzoóticos. / Introduction. The northern coast of the State of São Paulo was, up to the decade of the 1980´s, hypoendemic for the transmission of American cutaneous leishmaniasis (ACL). However, as from the decade of the 1990´s this disease acquired epidemic characteristic in all the municipalities: Caraguatatuba, Ilhabela, São Sebastião and Ubatuba. Objective. To undertake a descriptive study of the occurrences of the autochthonous cases of ACL in the four municipalities of the northern coast of the state of São Paulo, between 1993 and 2005, and to record the phlebotomine species in the area of transmission. Methods. Secondary data of spatial and temporal distribution and personal characteristics were analyzed from the records of autochthonous ACL cases notified to the epidemiological surveillance service of the State Health Secretariat. Information on phlebotomines were obtained from data of entomological captures undertaken by the Superintendência de Controle de Endemias. Results. The ACL presented heterogeneous spatial distribution with both isolated and clustered cases. There was synchronicity in the occurrence of the disease in all the municipalities, with cyclicality at intervals of from six to eight years. All age groups and both sexes were affected, without any particular profession. The phebotomine fauna consisted of sixteen species, with Ny. intermedia predominating (>80.4%) both in the peri and intra domicíle. Conclusions. ACL presented a close relation with the forest and its transmission occurs in the peri and intra-domicile, in the periurban environment and within the forest. In this latter case the transmission is more closely related to the enzootic foci.

Este trabalho é um estudo ecológico descritivo sobre a leishmaniose tegumentar americana (LTA) na região do Vale do Ribeira paulista (composto por 23 municípios), que teve como objetivo correlacionar a incidência da doença com fatores determinantes ambientais e sociais. O trabalho se refere ao período de 1998 a 2006 o qual foi divido em três triênios, o primeiro de 1998 a 2000, o segundo de 2001 a 2003 e o terceiro de 2004 a 2006. Os coeficientes de incidência da LTA foram calculados para estes períodos (Coefmtr1, Coefmtr2 e Coefmtr3) segundo Szklo. Essa divisão de triênios se deu de acordo com as características gráficas dos coeficientes de incidência da LTA no período, que demonstraram haver num primeiro período uma fase endêmica da doença, no segundo período (2001 a 2003) a análise mostra picos de incidência que caracteriza um período epidêmico acentuado. No terceiro período alguns municípios mostram picos de incidência de proporções menores que os observados no período anterior, contudo ainda característicos de fase epidêmica. Os coeficientes de incidência são as variáveis dependentes dos três modelos de regressão realizados. As variáveis independentes foram obtidas de fontes de dados secundários e são de natureza sócio-demográfica, relacionadas as condições climáticas, de natureza político-geográficas e físico-biológicas. Essas variáveis foram separadas em qualitativas e quantitativas e analisadas respectivamente por testes não paramétricos de Mann Whitney e Spearman e selecionou-se para o processo de modelagem múltipla, as variáveis com p<0,20. Houve a necessidade de três modelos diferentes para verificar se os fatores determinantes que levaram as séries a se comportar de maneira diferenciada, seriam os mesmos ou não. O que se percebe é que há uma mudança no padrão do primeiro para os dois outros períodos. O trabalho aponta para fatores sócio-demográficos como determinantes na incidência de LTA, bem como a presença do vetor / This work is an ecological descriptive study on the American cutaneous leishmaniasis (ACL) in the Ribeira Valley region of Sao Paulo (composed of 23 municipalities), which aimed to correlate the incidence of the disease with environmental and social factors. The paper refers to the period 1998 to 2006 which was divided into three years, the first from 1998 to 2000, the second from 2001 to 2003 and the third from 2004 to 2006. The rates of incidence of ACL were calculated for these periods (Coefmtr1, Coefmtr2 and Coefmtr3) Szklo seconds. This division was made in accordance with the graphics characteristics of the coefficients of incidence of ACL in the period, which has shown a period in a first stage of the disease endemic in the second period (2001 to 2003) the peak incidence analysis shows that characterizes a epidemic period strong. In the second period some municipalities show peaks of incidence of proportions lower than those observed in the previous period, yet still features the epidemic stage. The rates of incidence are dependent variables of the three regression models performed. The independent variables were obtained from sources in secondary databases, and are: in nature and socio-demographic, related climatic conditions, a political-geographical and physical and biological. These variables were separated in quality and quantity respectively and analyzed by non-parametric tests for Spearman and Mann Whitney and selected for the process of regress multiple model, the variables with p <0.20. There was a need for three different models to see if the determining factors that led to the series to behave in a different way, would be the same or not. What we understand is that there is a change in the pattern of the first to the other two periods. The study points to socio-demographic factors as determinants in the incidence of ACL and the presence of vector

A leishmaniose tegumentar (LT) é uma zoonose causada por protozoário do gênero Leishmania e transmitida pela picada de diferentes espécies de flebotomíneos infectados. Pode acometer o ser humano no momento em que este participa acidentalmente do ciclo silvestre de manutenção da doença, por meio de atividades que necessitem de sua entrada no ambiente de mata ou mesmo devido a existência de moradias próximas a borda da floresta ou até mesmo no interior da mesma. Atualmente há cada vez mais evidências da transmissão por consequência das modificações no ambiente causadas pelo ser humano, levando à migração de algumas espécies de Leishmania e de seus vetores para as imediações dos domicílios. A LT tem como principal agente etiológico a Leishmania (Viannia) braziliensis na Amazônia brasileira e esta é responsável por uma forma extremamente grave de leishmaniose anérgica. Este parasito caracteriza-se por apresentar espectro de manifestações clínicas e imunológicas que variam do pólo anérgico ao polo hiperérgico. O presente estudo faz-se necessário para avaliar: a adaptabilidade de populações humanas residentes em áreas endêmicas de LT; como elas procuram se ajustar ao ambiente no qual vivem; como a evolução destas populações humanas pode se refletir nos seus sistemas imunológicos e, consequentemente, nas formas, mais ou menos graves, de apresentação da LT em área hiperendêmica. Foram identificados 17647 flebotomíneos, sendo esses classificados em 86 espécies. Dessas, 14 espécies atendem a classificação de vetores de Leishmania sp. e outras 7 espécies são apontadas como potenciais vetores de Leishmania sp. O presente estudo comprova a existência da espécie Lutzomyia longipalpis, espécie vetor da leishmaniose visceral (LV), patologia na qual pode evoluir ao quadro de óbito senão ocorrer o devido tratamento. Este é o primeiro registro da espécie no estado do Acre e na porção sul-ocidental da Amazônia, e corrobora os atuais estudos que apontam a expansão territorial da ocorrência da LV no Brasil e com a hipótese de expansão até áreas Andinas. / Cutaneous leishmaniasis (CL) is a zoonosis caused by a protozoan of the genus Leishmania and transmitted by the bite of different species of infected sand flies. It may affect the human being at the time when it accidentally enters the wild cycle of the maintenance of the disease, through activities requiring its entry into the forest environment or even due to the existence of households near the edge of the forests or even within the same. Currently there is increasingly evidence of transmission due to changes in the environment caused by the human being, leading to the migration of some species of Leishmania and its vectors to the immediate vicinity of households. The CL has as the main agent etiological the Leishmania (Viannia) braziliensis in the Brazilian Amazon and this is responsible for an extremely serious form of leishmaniasis anergic. This parasite is characterized by presenting a spectrum of clinical and immunological manifestations ranging from the pole anergic to the pole hyperergic. The present study is necessary to evaluate: the adaptability of human populations resident in the endemic areas of CL; how they seek to adjust to the environment in which they live; how the evolution of these human populations can reflect on their immune systems and, consequently, in the more or less severe forms of presentation of the CL in hyperendemic area. 17647 phlebotomines were identified, being classified in 86 species. Among them, 14 species meet the classification of vectors of Leishmania sp. and 7 other species are pointed out as potential vectors of Leishmania sp. The present study proves the existence of the species Lutzomyia longipalpis, vector species of visceral leishmaniasis (VL), pathology in which it may evolve into the death frame, but due treatment. This is the first record of the species in the state of Acre and in the western portion of the Amazon, and corroborates the current studies that point the territorial expansion of the occurrence of LV in Brazil and with the chance of expansion to Andean areas.

No estado do Paraná a leishmaniose tegumentar americana (LTA) é endêmica, ocorrendo em 276 dos seus 399 municípios. Dos 12.304 casos da doença registrados no Sul do Brasil de 1980 a 2003, 12.220 (99,3 por cento) ocorreram no Estado do Paraná, sendo notificados 123 casos autóctones no município de Bandeirantes de 2000 a 2009. Objetivos. 1) Descreve a ocorrência da LTA no município de Bandeirantes entre 2000 e 2009, segundo a distribuição espacial, temporal e atributos pessoais; 2) relatar aspectos das formas clínicas e terapêuticos da LTA; identificar: 3) as espécies de Leishmania circulante na população humana e 4) as espécies de flebotomíneos capturadas em ambiente de transmissão da doença no município, de modo a 5) apontar para as espécies vetoras. Métodos. Desenvolveu-se estudo epidemiológico retrospectivo e descritivo de base de dados secundária da LTA e ecológico do grupo dos insetos vetores de Leishmania. Foram utilizados dados das fichas de investigação epidemiológica de LTA notificados à Secretaria Municipal de Saúde de Bandeirantes. Para a identificação da Leishmania sp, foram utilizadas amostras de tecidos das feridas de pacientes com suspeita de LTA e submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR). Para a análise entomológica foram realizadas capturas com armadilhas automáticas luminosas tipo CDC, durante um ano, com periodicidade quinzenal em 11 pontos peridomiciliares da zona urbana, e mensal, em 12 pontos da zona rural, a maioria deles selecionados tendo como referência a presença de casos de LTA. Além destes, foram feitas coletas com armadilha Shannon modificada nas cores branca e preta em um ponto da zona rural, nas três estações do ano (primavera, verão e outono). Resultados. No período de estudo a evolução da doença evidenciou um momento epidêmico em 2007, quando o coeficiente de incidência representou 1,038 casos/1.000 habitantes/ano. A distribuição dos casos no espaço ocorreu de forma heterogênea, com maior concentração na zona urbana. Das 123 notificações de LTA, 76 (61,79 por cento) foram do sexo feminino e 47 (38,21 por cento) do masculino. A faixa etária predominante foi a de 60 anos, em ambos os sexos. Houve predomínio da atividade doméstica (40,65 por cento), da forma clínica cutânea (95,94 por cento) e o Antimonial Pentavalente foi a droga mais utilizada a (98,37 por cento). Leishmania (Viannia) braziliensis foi identificada por meio da PCR em três pacientes de LTA. Na pesquisa do grupo de vetores, nos 24 pontos amostrados com as armadilhas CDC e Shannon, capturou-se um total de 5.652 flebotomíneos (51,66 por cento machos e 48,33 por cento fêmeas) pertencentes a 17 espécies. Nyssomyia neivai predominou (47,36 por cento), seguida de Nyssomyia whitmani (35,77 por cento), Pintomyia pessoai (6,51 por cento), Brumptomyia brumpti (5,54 por cento) e Expapillata firmatoi (2,30 por cento). Na zona urbana foram capturados apenas 22 flebotomíneos pertencentes a seis espécies: Br. brumpti, Evandromyia cortelezzii, Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai e Sciopemyia sordellii. Na zona rural capturou-se com as CDC, 3.843 flebotomíneos pertencentes a 15 espécies: Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Pi. fischeri, Br. brumpti, Br. cunhai, Br. nitzulescui, Br. sp., Ev. correalimai, Ev. cortelezzii, Ex. firmatoi, Mg. migonei, Mi. ferreirana, Mi. longipennis e Sc. sordellii. A espécie mais abundante foi Ny. neivai, cujo valor do índice de abundância padronizado foi de 0,89, seguida por Ny. whitmani (0,85) e Pi. pessoai (0,69). Os maiores índices de diversidade (H) ocorreram em uma margem de mata (1,45) e chiqueiro (1,42) de um bairro rural, e num outro, a maior equitabilidade entre o número de exemplares coletados em domicílio (0,96) e galinheiro (0,92). No total de espécimes capturados, as médias mensais mais elevadas ocorreram nos meses de março (6,92) e dezembro (6,45), Ny. neivai apresentou a maior média nos meses de dezembro (4,28 insetos/ armadilha) e Ny. whitmani em março (4,34). Na armadilha Shannon modificada foram capturados 1.787 espécimes, destacando-se Ny. neivai (56,86 por cento) e Ny. whitmani (32,79 por cento). A média horária mais elevada para Ny. neivai ocorreu das 23:0024:00 horas e Ny. whitmani entre 20:00 e 21:00 horas. Conclusão. Os dados sócio-econômicos apresentados mostram a LTA afetando predominantemente mulheres, porém crianças também foram atingidas, sugerindo que a transmissão da Leishmania pelos principais prováveis vetores, Ny. neivai e Ny. whitmani, esteja ocorrendo em área domiciliar e peridomiciliar. Áreas estas, cuja atração aos flebotomíneos pode aumentar o risco de aquisição da doença pelos moradores / In the state of Paraná, American cutaneous leishmaniasis (ACL) is endemic, occurring in 276 of its 399 municipalities. Of the 12,304 cases of ACL registered in the Southern Region of Brazil between 1980 and 2003, 12,220 (99.3 per cent) of them occurred in the State of Paraná. In this state, 123 autochthonous cases were registered in the Bandeirantes municipality between 2000 and 2009. Objectives. To describe: 1) the occurrence of ACL in the municipality of Bandeirantes between 2000 and 2009, in terms of its spatial and temporal distribution and the personal characteristics of the population affected and 2) the clinical and therapeutic aspects of ACL; to identify: 3) the Leishmania species infecting the human population and 4) the phlebotomine species captured in the environments where the disease may be transmitted, so as 5) to indicate the possible vectors. Methods. A retrospective and descriptive epidemiological study was undertaken based on a secondary database together with an identification of the Leishmania sp. and ecological study of the vectors. The secondary data used were derived from the ACL epidemiological investigation cards of the Municipal Health Service of Bandeirantes. For the identification of the Leishmania spp., samples of tissue taken from the wounds of suspected ACL patients were submitted to the polymerase chain reaction (PCR). For the entomological analysis, captures with automatic light traps (CDC type) were carried out during one year: fortnightly at 11 urban peridomiciliary sites and monthly at three sites, including domestic animal shelters, peridomiciles and forest edge, in each of four rural localities. Cases of ACL had occurred at the majority of the urban sites and rural localities. Captures were also undertaken (one in each season, spring, summer and fall) with modified black and white Shannon traps at one of the rural sites. Results. The progression of the disease reached an epidemic peak in 2007, when the incidence coefficient attained 1.038 cases/1,000 inhabitants per year. The spatial distribution of the cases presented its highest concentration in the urban zone. Of the 123 notifications of ACL, 76 (61.79 per cent) occurred in females and 47 (38.21 per cent) in males. The age group 60 years predominated in both sexes as also did domestic activity (40.65 per cent). The cutaneous form accounted for 95.94 per cent of the cases, the drug most utilized being Antimony Pentavalent (98.37 per cent). Leishmania (Viannia) braziliensis was identified by PCR in three patients. At the 24 sites sampled with CDC and Shannon traps, 5,652 sand flies (51.66 per cent males and 48.33 per cent females) belonging to 17 species were captured, with the predominance of Nyssomyia neivai (47.36 per cent), Nyssomyia whitmani (35.77 per cent), Pintomyia pessoai (6.51 per cent), Brumptomyia brumpti (5.54 per cent) and Expapillata firmatoi (2.30 per cent). Only 22 specimens belonging to 6 species (Br. brumpti, Ev. cortelezzii, Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Sciopemyia sordellii) were captured in the urban zone. In the rural zone 3,843 sand flies belonging to 15 species (Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Pi. fischeri, Br. brumpti, Br. cunhai, Br. nitzulescui, Br, sp., Ev. correalimai, Ev. cortelezzii, Ex. firmatoi, Migonemyia migonei, Micropygomyia ferreirana, Mi. longipennis and Sc. sordellii) were captured, with CDC. Ny. neivai presented the highest standardized abundance index (0.89), followed by Ny. whitmani (0.85) and Pi. pessoai (0.69). The highest diversity indices (H) observed were on the forest edge (1.45), and in a pigsty (1.42). As regards evenness, there was a greater balance between the number collected in a house (0.96) and poultry coop (0.92). Considering all the specimens captured, the highest monthly average occurred in March (6.92) and December (6.45), Ny. neivai showed the highest average in December (4.28 specimens/trap) and Ny. whitmani in March (4.34). With the modified Shannon traps, 1,787 specimens were captured, Ny. neivai (56.86 per cent) and Ny. whitmani (32.79 per cent) predominating. The highest hourly average of Ny. neivai occurred between 23.00 and 24.00 hours and that of Ny. whitmani between 20.00 and 21.00 hours. Conclusions. The socio-economic data presented show that ACL affects women predominantly; however, infants were also affected, suggesting that the transmission of Leishmania by the principal probable vectors (Ny. neivai and Ny. whitmani) is occurring in domiciliary and peridomiciliary environments, whose attractiveness to sand flies may increase the risk of the transmission of the disease to the residents

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-10T16:33:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EpidemiologiaLeishmanioseTegumentar.pdf: 2943387 bytes, checksum: bdad5034fef1859cb0d6d16086a10724 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-07T16:57:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EpidemiologiaLeishmanioseTegumentar.pdf: 2943387 bytes, checksum: bdad5034fef1859cb0d6d16086a10724 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-07T16:57:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EpidemiologiaLeishmanioseTegumentar.pdf: 2943387 bytes, checksum: bdad5034fef1859cb0d6d16086a10724 (MD5) Previous issue date: 2008 / IEC - Instituto Evandro Chagas / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / ALCOA / A leishmaniose tegumentar (LT) encontra-se em expansão no Estado do Pará, Brasil. Juruti é um dos 143 municípios desse Estado e atualmente cenário de grandes transformações ambientais devido à mineração de bauxita, o que poderá influenciar o padrão de transmissão. Objetivo: Este estudo buscou elucidar aspectos epidemiológicos relevantes para o controle da LT em Juruti. Materiais e Métodos: A frequência de LT e o perfil dos pacientes no hospital municipal "Francisco Barros" foram determinados de janeiro a dezembro/2007. Espécies de flebotomíneos silvestres existentes no entorno de uma área de prospecção da bauxita foram também descritas, durante levantamento entomológico em janeiro/2008 (armadilha Shannon/18h às 20h/2 noites). Em 21 indivíduos, portadores de lesão cutânea suspeita de LT, biópsias de pele foram realizadas entre fevereiro e junho de 2007. Neste grupo procedeu-se ao diagnóstico parasitológico (esfregaço corado e cultura), molecular e teste intradérmico de Montenegro. Utilizaram-se sondas de DNA ribossomal (PCR-SSUrDNA) gênero específicas (S4, S12; S17, S18) e de G6PD, para distinguir o subgênero Viannia (ISVC, ISVA: ISVC, ISVG) e a espécie L. (V.) braziliensis (ISVC, ISVA; ISVC, ISVB). Resultados: No ano de 2007 foram confirmados 42 casos novos de LT, com média mensal inferior a quatro (3,5 ± 0,8), maior frequência em julho (11) e menor em junho e novembro (0). A maioria dos pacientes foi de homens (41/42, 98%) com menos de 20 anos (<10 anos: 30%; 10-20: 57%; 20-40: 12%). A maioria também residia em localidades rurais (33/42, 79%), incluindo áreas impactadas pela mineração (19/42, 45%), e exercia atividades de risco (28/42, 67%). Doze eram funcionários de empresas (29%). A análise molecular das 21 amostras identificou 12 resultados positivos para o gênero Leishmania (57%), sendo 11 (52%) parasitologicamente confirmados. A PCRG6PD identificou 75% das amostras como sendo L. (V.) braziliensis. As demais (3/12, 25%) não hibridizaram com os oligonucleotídeos da PCR-G6PD e, por isso, os produtos da reação de nested-PCR SSUrDNA foram clonados e sequenciados, confirmando que se tratavam de Leishmania (Viannia) sp. Apenas 9/12 (75%) casos confirmados pelos métodos parasitológico e/ou olecular tiveram reações de hipersensibilidade tardia em resposta ao antígeno de Montenegro, cujos diâmetros variaram de 7 a 40mm (16,3 ± 3,2). Capturaram-se 105 flebotomíneos de 13 espécies nas seguintes frequências: 1- Lutzomyia (Ps.) geniculata (23, 22%), 2- Lutzomyia (Ps.) paraensis (21, 20%), 3- Lutzomyia (Ps.) complexa (18, 17%), 4-Lutzomyia (Ps.) davisi (10, 10%), 5- Lutzomyia (N.) flaviscutellata (13, 13%) e outras oito espécies (20, 18%). Discussão: Espécies de Leishmania do subgênero Viannia, sobretudo L. (V.) braziliensis predominam em Juruti, o que é compatível com o extenso diâmetro das reações cutâneas observadas ao antígeno de Montenegro e com os relatos comuns de persistência e recidiva, apesar do tratamento específico. Entre os flebotomíneos antropófilos destacam-se L. (Ps.) complexa (17%) e L. (Ps.) flaviscutellata (13%) por serem vetores de L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis respectivamente, associadas às formas severas da LT humana. Conclusão: Medidas de controle em Juruti devem priorizar a redução da morbidade, diagnóstico precoce, busca ativa de LT humana, vigilância entomológica e de microambientes no entorno da área de impacto de mineração. / The tegumentary leishmaniasis (TL) is expanding in Pará State, Brazil. Juruti is one of its 143 municipalities and current scenery of huge environmental changes due to bauxite mining, what can influence the transmission patterns. The aim of this study was to elucidate epidemiological features relevant for the TL control in Juruti. The TL frequency and patients profile in the Municipal Hospital Francisco Barros were determined from January to December/2007. Silvatic phlebotomines species around an area of bauxite prospection were also described during an entomological screening in January, 2008 (Shannon trap/6:00pm to 8:00pm/2 nights). In 21 individuals having cutaneous lesions suspected of TL, skin biopsies were done among February and June, 2007. In this group the parasitological (stained smear and culture), molecular diagnosis (PCR; nested-PCR) and Montenegro Skin Test were done. Primers of ribossomal enusspecific (S4, S12; S17, S18) and of G6PD DNA were used for distinguish subgenus Viannia (ISVC, ISVG) and L. (V.) braziliensis species (ISVC, ISVA; ISVC, ISVB). In 2007, there were confirmed 42 new cases of LT, with mensal average lower than four (3,5 + 0,8), highest frequency in July (11) and lowest in June and November (0). Most patients were represented by men (41/42, 98%) younger than 20 years old (<10 years old: 30%; 10-20: 57%; 20-40: 12%). Most were also resident in rural localities (33/42, 79%) including impact mining area (19/42, 45%) and performed activities of risk (28/42, 67%). The companies’ workers were 12 (29%). The molecular analyses of the 21 samples identified 12 positive for the genus Leishmania (57%), within 11(52%) were parasitologically confirmed. Most positives hybridized extracted DNA with species specific primers (9/12, 75%), while the others were incompatible with primers for subgenus Viannia and for L. (V.) braziliensis species, so the samples were cloned and sequencing, what confirmed L. Viannia) sp. Only 9/12 (75%) confirmed cases by parasitological and/or molecular methods had delayed hipersensibility in response to Montenegro antigen, which diameter varied from 7 to 40mm (16,3 + 3,2). There were captured 105 phlebotomines of 13 species in the following frequency: 1-Lutzomyia geniculata (23, 22%), 2-Lutzomyia paraensis (21, 20%), 3-Lutzomyia complexa (18, 17%), 4-Lutzomyia davisi (10, 10%), 5-Lutzomyia flaviscutellata (13, 13%) and other eight species (20, 18%). Leishmania species of the subgenus Viannia, particularly L. (V.) braziliensis, predominate in Juruti, what is compatible with the large diameter of the cutaneous lesions observed in response to Montenegro antigen and with the common reports of persistence and reactivation even though the specific treatment. Within the antropophilic phlebotomines highlighted Lu. complexa (17%) e Lu. flaviscutellata (13%) since are vectors of L. (V.) braziliensis and L. (L.) amazonensis respectively, associated to the severe forms of human TL. Control measures in Juruti should focus morbidity reduction, early diagnosis, active surveillance of human TL, entomological and microenvironmental surveillance around the impact mining area.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-11T13:46:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao_EstudoEpidemiologicoLeishmaniose.pdf: 1020988 bytes, checksum: d526cfc660cd7b131687ddb9005238f6 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-14T14:44:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_EstudoEpidemiologicoLeishmaniose.pdf: 1020988 bytes, checksum: d526cfc660cd7b131687ddb9005238f6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-14T14:44:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_EstudoEpidemiologicoLeishmaniose.pdf: 1020988 bytes, checksum: d526cfc660cd7b131687ddb9005238f6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2007 / A Leishmaniose Tegumentar Americana no estado do Amapá ainda está restrita às áreas rurais. Para estratificar o Amapá em áreas de risco para LTA, e conhecer seu perfil epidemiológico, foram coletados casos registrados no Sistema de Informação Nacional de Agravos de Notificação e classificados os municípios quanto ao risco, de acordo com as médias dos coeficientes de prevalência de 2002 a 2006 de cada município. Foram registrados 2.664 casos autóctones de LTA: 2002 (353 casos); 2003 (481); 2004 (968), 2005 (422) e 2006 (440). Desses, 653 (24,5%) com origem da infecção no município de Porto Grande. A média do coeficiente de prevalência do estado nos 5 anos estudados foi de 95,51/100.000hab. Os municípios foram agrupados em áreas quanto ao grau de risco: de baixo risco para LTA (Macapá, Cutias, Santana e Amapá); médio risco (Itaubal, Pracuúba, V. do Jari e Ferreira Gomes); alto risco (L. do Jari, Mazagão, Tartarugalzinho e Oiapoque) e muito alto risco (Calçoene, P. Grande, P. B. do Amapari e S. do Navio). O Amapá apresentou 72% dos casos no 1ºsemestre, com 16,6% dos casos no mês de abril; 38,8% em pacientes com idade entre 20 a 34 anos; 79,7% de ocorrência no sexo masculino, variando na área de médio risco 83% e baixo risco 72%; 29% em pacientes com escolaridade de 4 a 7 anos de estudo. Com 96,2% com confirmação laboratorial na área de muito alto risco; 98,9% casos de leishmaniose cutânea e apenas 42,9% com cura confirmada, na área de alto risco ocorreram 65,3% de cura. A LTA apresenta 100% de autoctonia no estado do Amapá, com um importante surto em 2004 e o município de P. Grande é o que mais contribui para a manutenção desta endemia. / The LTA is an endemic disease in high expansion for the world, with differentiated epidemiologist profiles. In the Amapá the cases are restricted in agricultural areas. To considerate Amapá as areas of risk for LTA, and to know the epidemiologistic profile, had been collected cases in the SINAN and classified the cities how much to the risk, in accordance with the averages of the coefficients of prevalence of 2002 to 2006 of each city. It had been registered 2,664 authoctous cases of LTA: 2002 (353); 2003 (481); 2004 (968), 2005 (422) e 2006 (440). Of these, 653 (24,5%) with infection source the city of Porto Grande. The average of the coefficient of prevalence of the state in the 5 studied years was of 95,51/100.000inhab.:cities of low risk to LTA (Macapá, Cutias, Santana and Amapá); average risk (Itaubal, Pracuúba, V. do Jari and Ferreira Gomes); high risk (L. do Jari, Mazagão, Tartarugalzinho e Oiapoque) and much high risk (Calçoene, P. Grande, P. B. do Amapari and S. do Navio). The state of the Amapá presented 72% of the cases in the 1º semester and 16,6% in the april; 38,8% of the cases in patients among 20 the 34 years of age; 79.7% cases in masculine sex in the area of average risk 83% and low risk 72%;29% of the patients with 4 to 7 years of study. With 96,2% of cases with laboratorial confirmation in the area of very high risk; 98,9% leishmaniasis of cutaneous form and only 42.9% of the cases with confirmed cure, in the area of high risk had occurred 65.3% of cure. The LTA presents 100% of autoctonia in the Amapá, with an important outbreak in 2004 and the city of P. Grande is that more contributes for the maintenance of this endemic disease.

Nós investigamos os efeitos da saliva de Lutzomyia longipalpis capturados no campo e colonizados em laboratório, na evolução da lesão e imunomodulação da infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis, uma espécie que é endêmica na América do Sul, onde causa Leishmaniose Cutânea, Leishmaniose Cutânea Disseminada Bordeline e Leishmaniose Cutânea Difusa Anérgica, com conseqüências graves aos pacientes. Com o intuito de comparar o efeito dos dois tipos de extrato de glândula salivar, camundongos C57BL/6 foram inoculados subcutaneamente no coxim plantar das patas traseiras e nas orelhas com 106 formas promastigotas de Leishmania (L.) amazonensis na presença de extrato de glândula salivar de vetores de captura e de colônia. O tamanho da lesão foi significantemente menor nos camundongos infectados com extrato de glândula salivar de vetores capturados, o que também determinou uma infiltração menos proeminente de macrófagos nas lesões e uma resposta Th2 mais branda quando comparada com aqueles inoculados com extrato de glândula salivar de vetores colonizados. Recentemente, foi mostradas diferenças nos compostos protéicos das glândulas salivares que poderiam parcialmente justificar a expressão da lesão. Portanto, nossos achados ressaltam que a extrato de glândula salivar de flebótomos provavelmente não desempenha um papel importante na exacerbação da infecção por Leishmania já que a transmissão natural do parasito ocorre através de vetores selvagens e não através de vetores colonizados em laboratório / We investigated the effects of Lutzomyia longipalpis saliva of vectors captured in the field and colonized in laboratory on the lesion evolution and immunomodulation of the infection by Leishmania (Leishmania) amazonensis, a species that is endemic in South America where it causes cutaneous leishmaniasis, borderline disseminated cutaneous leishmaniasis and anergic diffuse cutaneous leishmaniasis, with devastating consequences to the patients. In order to compare the effect of both salivas, C57BL/6 mice were inoculated subcutaneously into the hind footpads or into the ear dermis with 106 promastigotes in the presence of salivary gland homogenate from wildcaught and lab-colonized vectors. Lesion size was significantly lower in the mice infected with saliva from wild-caught sandflies that also determined a less prominent infiltration of macrophages in the lesions and a weaker Th2 response in comparison with those co-inoculated with colonized saliva. Recently, differences were shown in the protein compounds in the salivary glands that could partially account for the lesion size outcome. In conclusion, our findings highlight that phlebotomine saliva probably does not play an important role in the exacerbation of Leishmania infection as the natural parasite transmission occurs through wild and not laboratory colonized vectors.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-16T17:05:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InvestigacaoPerfilSorologico.pdf: 1859308 bytes, checksum: 3420510bcc0c06288788cb45f60d85fa (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-10-20T13:15:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InvestigacaoPerfilSorologico.pdf: 1859308 bytes, checksum: 3420510bcc0c06288788cb45f60d85fa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-20T13:15:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InvestigacaoPerfilSorologico.pdf: 1859308 bytes, checksum: 3420510bcc0c06288788cb45f60d85fa (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Apesar dos registros de cães infectados por Leishmania spp., o papel destes animais no ciclo de transmissão dos agentes da leishmaniose tegumentar americana (LTA) não foi elucidado. Este estudo teve como objetivo investigar a frequência da infecção canina em localidades rurais dos municípios de Ulianópolis, Dom Eliseu e Rondon do Pará, onde até o momento não há casos registrados de leishmaniose visceral (LV) humana ou canina. Entre Maio e Dezembro de 2011, foram investigados 224 cães em localidades rurais de três municípios. Dos cães que apresentavam lesão foi coletado material para a pesquisa direta do parasito. Para a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), foram utilizados como antígeno formas promastigotas de L. (V.) braziliensis, L. (V.) shawi, L. (L.) amazonensis e L. (L.) infantum chagasi, sendo considerados reagentes soros com título igual ou superior a 40. A extração de DNA do material sanguíneo foi realizada através da técnica do fenol: clorofórmio: álcool isoamílico, sendo este utilizado posteriormente para a detecção molecular através da PCR, onde foram utilizados os primers S1629 e S1630, que amplificam genes do mini-exon. Dos 224 cães estudados, 18 (8,04%) apresentaram lesões sugestivas de LTA, dos quais apenas cinco foram positivos para a pesquisa direta do parasito. Na pesquisa sorológica, 118 (52,68%) soros caninos foram reagentes em pelo menos um dos antígenos testados, sendo que a maior porcentagem de concordância global (91,96%) foi encontrada na associação entre os resultados dos antígenos de L. (V.) braziliensis e de L. (V.) shawi. Na pesquisa molecular, dentre os 74 (33,04%) cães com PCR positiva foi detectado DNA de Leishmania do subgênero Viannia em 68 (91,89%) animais e em quatro (5,40%) DNA de L. (L.) amazonensis, enquanto que dois (2,70%) cães apresentaram infecção mista. Não foi detectado DNA compatível com L. (L.) infantum chagasi. A alta frequência de cães sororeagentes e a detecção de DNA de Leishmania indicam a presença de cães infectados e a maior circulação de Leishmania do subgênero Viannia do que L. (L.) amazonensis nessa região, porém mesmo com grande número de animais sem sinais clínicos ainda serão necessários maiores estudos para esclarecer sobre o papel do cão no ciclo de transmissão dos agentes da LTA. / Despite the records of dogs infected by Leishmania spp., the role of animals in the transmission cycle of the agents of American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) transmission has not been elucidated. This study aimed to investigate the frequency of the canine infection in rural localities from Ulianópolis, Dom Eliseu and Rondon do Pará county, where so far no reported cases of human or canine visceral leishmaniasis (VL). From May to December 2011, were investigated 224 dogs in rural areas of three counties. From dogs with lesions were collected material for the direct detection of parasites. For indirect immunofluorescence assay (IFA) were used as antigen promastogotes L. (V.) braziliensis, L. (V.) shawi, L. (L.) amazonensis e L. (L.) infantum chagasi, reagents be considered sera with titers equal to or greater than 40. The DNA extraction from blood sample was performed using phenol:chloroform:isoamyl alcohol, which was subsequently used for molecular detection by the Polymerase Chain Reaction technique (PCR). Primers S1629 and S1630 were used to amplify the mini-exon genes. Of the 224 dogs studied, 18 (8,04%) had lesions suggestive of ATL, of which only five was positive for the direct detection of parasites. In the serologic survey, 118 (52,68%) canine serum were reagent at least on of the antigens tested, with the highest percentage of global agreement (91,96%) was found in the association between the results of the antigens of L. (V.) braziliensis and L. (V.) shawi. In molecular research, among the 74 (33,04%) dogs with positive PCR detected DNA from Leishmania subgenus Viannia in 68 (91,89%), and four (5,40%) animals DNA L. (L.) amazonensis, whereas two (2,70%) dogs had mixed infection. No DNA was found compatible with L. (L.) infantum chagasi. The high frequency of dogs with reactive serum and the detection of DNA from Leishmania indicating the presence of infected dogs and greater circulation of the subgenus Leishmania Viannia than L. (L.) amazonensis in this region, however even with a large number of animals without clinical signs lerger studies are still needed to clarify the role of dogs in the transmission cycle of agents of the ATL.