In den letzten Jahrzehnten haben sich die so genannten Biologika auch zur Therapie der Psoriasis etabliert. Zu diesen Medikamenten gehört auch Adalimumab, welches als vollständig humaner Antikörper eines der Schlüsselzytokine in der Pathogenese der Psoriasis, TNFα, neutralisiert. Allerdings führt die Therapie nicht bei allen Patienten zu ausreichendem Wirkerfolg. Da bisher vor Beginn der Therapie nicht zwischen den Patienten, die von der Therapie profitieren, und denen, die keine ausreichende Wirkung erfahren, unterschieden werden kann, werden die letzteren unnötigerweise den Risiken und Nebenwirkungen dieser Therapie ausgesetzt. In dieser Arbeit wurden die Interaktionen kultivierter Endothelzellen und Lymphozyten ex vivo unter dem Einfluss von Adalimumab untersucht. Insbesondere auf mögliche Unterschiede zwischen „Respondern“ und „Non-Respondern“ wurde im Hinblick auf die mögliche Entwicklung eines prädiktiven Tests für das Ansprechen auf Adalimumab ein Schwerpunkt gelegt. Lymphozyten gesunder Probanden und von Psoriasis-Patienten wurden ex vivo hinsichtlich ihrer Interaktion mit kultivierten Endothelzellen (HUVEC), mit und ohne TNFα-Stimulation, untersucht. Hierbei wurden sowohl frisch isolierte als auch kryokonservierte Lymphozyten verwendet, da sich zwischen diesen keine Unterschiede in den funktionellen Flusskammer-Versuchen zeigten. Nach Stimulation der Endothelzellen mit TNFα kam es zu einem deutlichen Anstieg des Rollens und der festen Adhäsion aller Lymphozyten an den Endothelzellen. Allerdings zeigten sich im Ausmaß dieser Interaktion deutliche inter-individuelle Unterschiede. Obwohl diese auch bei Psoriasis-Patienten auftraten, konnten keine signifikanten Unterschiede zwischen „Respondern“ und „Non-Respondern“ beobachtet werden. In den Untersuchungen zum Einfluss von Adalimumab auf TNFα-stimulierte Endothelzellen sowie die Interaktion dieser mit Lymphozyten ex vivo zeigte sich eine deutliche Abhängigkeit der Auswirkung vom Zeitpunkt der Behandlung. Erfolgte die Adalimumab-Behandlung vor oder gleichzeitig mit der TNFα-Stimulation der Endothelzellen, kam es zur Aufhebung der TNFα-induzierten Effekte sowohl in der Transkription der Adhäsionsmoleküle (PCR), der Expression dieser (Immunfluoreszenz-Mikroskopie) sowie der dynamischen Interaktionen mit Lymphozyten (Flusskammer). Eine dem TNFα nachfolgende Behandlung blieb ohne Wirkung, sodass davon auszugehen ist, dass sich die bereits induzierten Prozesse nicht mehr rückgängig machen lassen. Hier könnte eine Erklärung für das späte Eintreten der Adalimumab-Wirkung in vivo liegen. Somit konnten in dieser Arbeit vier zentrale Ergebnisse erzielt werden: Erstens, es wurde erstmals gezeigt, dass wichtige funktionelle Eigenschaften humaner Lymphozyten während der Kryokonservierung erhalten bleiben. Zweitens, es wurden erstmals deutliche inter-individuelle Unterschiede im Ausmaß der Interaktion zwischen Lymphozyten ex vivo mit TNFα-stimulierten Endothelzellen nachgewiesen. Adalimumab unterdrückte diese dynamischen Interaktionen, sofern seine Zugabe vor oder gleichzeitig mit der TNF-Exposition erfolgte. Drittens, diese inter-individuellen Unterschiede bestanden gleichermaßen bei gesunden Probanden und Psoriasis-Patienten. Viertens, die funktionellen Unterschiede erlaubten keine Unterscheidung zwischen Psoriasis-Patienten, deren Erkrankung sich durch Adalimumab besserte („Responder“), und denen, deren Erkrankung nicht auf diese Therapie ansprach („Non-Responder“).

The cytokine environment of early pregnancy is known to be a key determinant of the development of the pre-implantation embryo, and its subsequent implantation and growth. Factors in male seminal fluid have been identified as regulators of the expression of cytokines in the female tract of mice, humans and other mammalian species, with insemination eliciting a cascade of molecular and cellular events, reminiscent of a classic inflammatory response. In humans, perturbations in seminal fluid signalling have been proposed to predispose to pathologies of pregnancy including implantation failure, recurrent miscarriage and pre-eclampsia. Seminal transforming growth factor-beta (TGFβ) is identified as one key molecule present in seminal fluid responsible for inducing the female post-mating cytokine response in mice. Research in humans however, has shown the seminal TGFβ content of fertile versus infertile couples to be similar, while the content of other known seminal constituents such as interferon-gamma (IFNγ), correlate with reproductive success. This project aimed to investigate the nature of active factors present in seminal fluid in mice, and their interactions in regulating the uterine cytokine environment during early pregnancy, utilising a variety of in vitro and in vivo experimental strategies. Further, the effect of perturbation in the peri-conception cytokine environment on short and long term pregnancy and postnatal outcomes was investigated. Evaluation of uterine fluids from estrous and mated mice showed a marked upregulation of a number of cytokines following mating, including granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), interleukin-6 (IL-6) and the chemokine KC (rodent IL-8 homologue). Increased production of factors such as GM-CSF and subsequent generation of a receptive uterine environment is thought to be crucial for optimal embryo development and placentation. It has previously been shown that seminal factors such as TGFβ contribute to the uterine post-mating inflammatory response, however other moieties present in seminal fluid, for instance cytokines induced in response to infection such as IFNγ or products from the mucosal microflora, may also play a regulatory role. Using uterine epithelial cells cultured in vitro, it was shown that a variety of immune modulators including the cytokines TGFβ and IFNγ, as well as bacterial products, gram negative lipopolysaccharide (LPS) and gram positive lipoteichoic acid (LTA), can alter basal cytokine production. IFNγ, a pro-inflammatory cytokine secreted by activated natural killer cells and T-cells, is known to interfere with TGFβ signalling in other contexts. Independently TGFβ, LPS and LTA stimulate GM-CSF production while differentially regulating IL-6 and KC production. Conversely IFNγ inhibits GM-CSF production, without effecting IL-6 or KC. Pair wise combinations of TGFβ, LPS and LTA resulted in additive stimulation of GM-CSF, while addition of IFNγ to cultures in conjunction with any of these molecules downregulated GM-CSF and KC stimulation. These in vitro studies indicate factor-specific interactions between seminal fluid constituents and highlight the complex nature of seminal fluid signalling. Consequently we propose that the relative ratio of seminal signalling factors is likely to be more important than the absolute concentration of various regulators, in determining the optimal female reproductive tract response. Using the mouse as an in vivo model, I have in addition demonstrated that LPS and LTA instilled into an estrous uterus can elicit cytokine production comparable to that observed following insemination. Further, these studies have shown that IFNγ instilled into the uterus of a recently mated mouse can reduce the post-copulatory GM-CSF and KC surge. However administration of IFNγ had no effect on near term pregnancy outcomes including fetal or placental weights, fetal crown-rump length, or implantation or resorption rates. The ‘developmental origins of adult disease hypothesis’ proposes the idea that the early uterine environment encountered by the conceptus contributes toward the risk of metabolic disorders in adulthood, hence a long term study of progeny conceived after IFNγ administration was also undertaken. Neo-natal outcomes, such as birth weight, litter size and gestation length were unaltered, as was growth trajectory to 22 weeks of age. Adult metabolic markers, glucose tolerance, organ weight, muscle weight, adiposity and systolic blood pressure were not affected by the perturbation of peri-conceptual cytokine parameters. This work has examined the potential regulatory role of a number of seminal fluid signalling agents in directing the post-mating cytokine response, and has furthermore shown the relatively resilient nature of the early cytokine environment to subtle perturbation. Delineating the identity and roles of seminal fluid factors in early pregnancy brings us closer to an understanding of the key physiological events of early pregnancy and assists in identifying potential risk factors for human pregnancy pathologies. / Thesis (Ph.D.) -- University of Adelaide, School of Paediatrics and Reproductive Health, 2008

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-02-02T11:50:38Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1446130 bytes, checksum: b1ef9c5052fd39babcc817cb3607f741 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-02T11:50:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1446130 bytes, checksum: b1ef9c5052fd39babcc817cb3607f741 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Systemic low-grade inflammation has a significant impact on human health and longevity, and nutrients appear to be able to modulate this inflammatory state. In this context, the present study aimed to assess the relationship between inflammatory markers and habitual consumption of iron and fats in general in an elderly population. A cross-sectional epidemiological design was adopted, using a stratified sample of the elderly population of the city of João Pessoa / Paraíba / Brazil. The study included 171 older adults aged over 60 years from different socio-economic conditions, with or without chronic degenerative diseases and in use or not of drugs. Socio-economic, demographic, epidemiological and food consumption data were collected and nutritional assessment and biochemical analyses were performed. The average intake of total, saturated, monounsaturated and polyunsaturated fat was 32.56 ± 26.31 (g / day) 8.69 ± 5.69 (g / day), 7.39 ± 4.98 (g / day) 6.63 ± 1.51 (g / day), respectively. The average iron consumption was 7.9 ± 2.97 (mg / day) and the amount of calories was 1260.85 ± 304.42 (kcal / day). Through multiple linear regression, a relationship between CRP concentrations and habitual consumption of saturated fat (p = 0.009) and usual iron intake (p = 0.045) was observed, demonstrating that as the saturated fat intake increases by 1g, CRP concentrations increase by 1.43 mg / dL and when iron consumption increases by 1mg, CRP values increase by 0.1493 mg / dL, compared to the consumption of monounsaturated fat, and when this consumption increases by 1g, CRP concentrations decrease by 0.23 mg / dL (p = 0.008) and when BMI increases by 1kg / m², CRP concentrations increase by 0.11 mg / dL (p = 0.001). The same regression model was applied to white blood cells and hemoglobin, and no relationship between these study variables was found. Based on correlations between CRP levels and usual food intake, adequate intake of fats and iron would be even more justified, considering their importance in the adjustment of CRP values and, consequently, in the prevention of chronic diseases. / RESUMO A inflamação sistêmica de baixo grau tem um impacto significativo na saúde humana e longevidade, sendo que os nutrientes parecem ser capazes de modular esse estado inflamatório. Neste contexto, a presente pesquisa teve como objetivo principal avaliar a relação entre marcadores inflamatórios e o consumo habitual de ferro e gorduras em geral em uma população de idosos. Adotou-se delineamento epidemiológico transversal, utilizando-se uma amostragem estratificada da população de idosos do município de João Pessoa/Paraíba/Brasil. Participaram do estudo 171 idosos com idade acima de 60 anos, de diferentes condições socioeconômicas, portadores ou não de doenças crônico-degenerativas e em uso ou não de medicamentos. Foram coletados dados socioeconômicos, demográficos, epidemiológicos e de consumo alimentar e realizaram-se a avaliação nutricional e análises bioquímicas. O consumo médio de gordura total, saturada, monoinsaturada e poli-insaturada foram de 32.56 ± 26.31 (g/dia), 8.69 ± 5.69 (g/dia), 7.39 ± 4.98 (g/dia) e 6.63 ± 1.51 (g/dia), respectivamente. O consumo médio do ferro foi 7.09 ± 2.97 (mg/dia) e a quantidade de calorias, 1260.85 ± 304.42 (kcal/dia). Através da regressão linear múltipla, observou-se relação entre as concentrações de PCR e o consumo habitual de gordura saturada (p=0,009) e consumo habitual de ferro (p=0,045), demonstrando que à medida que o consumo de gordura saturada aumenta em 1g as concentrações de PCR aumentam em 1.43 mg/dL e quando o consumo de ferro aumenta em 1mg os valores de PCR aumentam em 0.1493 mg/dL. Em relação ao consumo de gordura monoinsaturada, quando esse consumo aumenta em 1g as concentrações de PCR diminuem 0,23 mg/dL (p= 0,008) e quando o IMC aumenta em 1kg/m² as concentrações de PCR aumentam em 0.11 mg/dL (p= 0,001). O mesmo modelo de regressão foi aplicado aos leucócitos e hemoglobina, e não se encontraram relações entre essas variáveis do estudo. Com base nas correlações encontradas entre os valores de PCR e o consumo alimentar habitual mencionado, a ingestão adequada de gorduras e ferro seria ainda mais justificada, considerando também a sua importância na adequação dos valores de PCR e, consequentemente, na prevenção das doenças crônicas não transmissíveis.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:03:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 820384 bytes, checksum: 3a4f59492492f300381b1848655d3407 (MD5) Previous issue date: 2014-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The intake of vitamins with antioxidant effect may contribute to the betterment of the elderly s health, well-being, and longevity. In this context, the present research had as it main objective to assess the relation among high sensitivity C-Reactive Protein (hs-CRP), leukocytes and lymphocytes and the habitual eating intake of vitamins with antioxidant effect, while taking into consideration the lack of study on it. The cross-sectional epidemiological design was the one adopted using a stratified representative sample of the elderly population from the city of João Pessoa/Paraíba/Brazil. The study included 174 elderly people aged between 60 and 90 years old, from different socioeconomic conditions, with or without chronic-degenerative diseases, taking some medicine or not. Questionnaires were applied to obtain socioeconomic, demographic, epidemiological and food consumption information and there were nutritional assessment and biochemical analyzes. Regarding the habitual intake of vitamins with antioxidant effect, the average consumption of vitamin A, β-carotene, vitamin E and vitamin C were 1994,39±1421,24 (μg RAE/day), 5959,29±4739,66 (μg/day), 6,01±4,44 (mg/day) e 162,10±118,12 (mg/day), respectively. To verify the correlation among the variables of the study, Spearman correlation coefficient was used. There was a negative correlation between the values of leukocytes and vitamin E (r = -0.29, p = 0.0316), β - carotene (r = -0.32, p = 0.0189) and vitamin A (r = - 0.36, p = 0.0062). No significant correlation was found between the values of leukocyte and vitamin C, as well as between PCR-us and the habitual eating intake of these vitamins. No relation was found among study variables when the multiple linear regression was applied. Based on the correlations found, for the first time in elderly, among the values of leukocytes with vitamin B, β-carotene, and vitamin E, the intake of these vitamins would be even more taking into consideration also its importance in the adequacy of the leukocyte values. / O consumo de vitaminas de ação antioxidante pode contribuir para a promoção da saúde, do bem-estar e longevidade em idosos. Neste contexto, a presente pesquisa teve como objetivo principal avaliar a relação entre os valores de proteína c-reativa ultra sensível (PCR-us), leucócitos e linfócitos e o consumo alimentar habitual de vitaminas com ação antioxidante, considerando a inexistência de estudo. Adotou-se delineamento epidemiológico transversal, utilizando-se uma amostragem estratificada da população de idosos do município de João Pessoa/Paraíba/Brasil. Participaram do estudo 174 idosos com idade entre 60 e 90 anos, de diferentes condições socioeconômicas, portadores ou não de doenças crônico-degenerativas e em uso ou não de medicamentos. Aplicaram-se questionários para obtenção de informações socioeconômicas, demográficas, epidemiológicas e de consumo alimentar e realizaram-se a avaliação nutricional e análises bioquímicas. Quanto ao consumo alimentar habitual das vitaminas com ação antioxidante, o consumo médio de vitamina A, β-caroteno, vitamina E e vitamina C foram de 1994,39±1421,24 (μg RAE/dia), 5959,29±4739,66 (μg/dia), 6,01±4,44 (mg/dia) e 162,10±118,12 (mg/dia), respectivamente. Para verificar a correlação entre as variáveis do estudo utilizou-se o coeficiente de correlação de Spearman. Houve correlação negativa entre os valores de leucócito e vitamina E (r = -0,29, p = 0,0316), β-caroteno (r = - 0,32, p = 0,0189) e vitamina A (r = -0,36, p = 0,0062). Não foi encontrada correlação significativa entre os valores de leucócito e vitamina C, como também entre PCR-us e o consumo alimentar habitual dessas vitaminas. Não encontrou-se relação entre as variáveis do estudo ao aplicar-se a regressão línea múltipla. Com base nas correlações encontradas entre os valores de leucócitos e as vitaminas mencionadas, a ingestão dessas vitaminas, seria ainda mais justificada, considerando-se também, a sua importância na adequação dos valores de leucócitos.

Diferentes populações de leucócitos desempenham papeis fundamentais na eliminação de agentes invasores através da sua fagocitose e destruição, utilizando-se de mecanismos dependentes (metabolismo oxidativo) e independentes de oxigênio. Baseando-se na hipótese de que o vírus da Leucose Enzoótica Bovina, uma enfermidade crônica, que afeta, particularmente, os órgãos ricos em tecido linfóide destes animais, altera quantitativa e qualitativamente as subpopulações de leucócitos circulantes dos bovinos, influenciando na qualidade da resposta imunológica inata destes animais, o presente estudo avaliou a produção intracelular de peróxido de hidrogênio (H2O2) por leucócitos circulantes, frente estímulo in vitro com forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), lipopolissacarídeos de Escherichia coil (LPS) e após fagocitose de Staphylococcus aureus conjugados com iodeto de propídio (Sa-PI). Para tal, células foram obtidas de cinco vacas negativas no diagnóstico para LEB, de cinco vacas naturalmente infectadas pelo vírus da leucose bovina (VLB), alinfocitóticas, e de cinco vacas infectadas, manifestando linfocitose persistente (LP), e analisadas por citometria de fluxo. Foi averiguada a normalidade da distribuição dos resultados, utilizando-se do teste de Anderson-Darling, e sua homoscedasticidade, utilizando-se do teste F ou do teste de Lavene. Para a análise das freqüências observadas, foi utilizado o teste Qui-quadrado. Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, foram feitos os testes de análise de variância (One-way ANOVA), de Tukey-Kramer, teste t de Student, de Mann-Whitney ou de Kruskal-Wallis. A porcentagem média total de células produzindo H2O2, caracterizada pela intensidade de fluorescência da 2,7-diclorofluoresceína, no ensaio sem estímulo in vitro, de 30,60%, foi menor (p=0,005) que aquela observada no ensaio com adição in vitro de LPS, de 52,00%, e que aquela obtida no ensaio com adição in vitro de PMA, de 63,13%. A porcentagem média total de células produzindo H2O2 no ensaio com estímulo por fagocitose in vitro de SaPI, de 47,47%, não diferiu da observada no ensaio sem estímulo. As porcentagens médias totais de células produzindo H2O2 não diferiram entre os ensaios em que houve prévio estímulo in vitro. Não houve diferença na porcentagem de leucócitos que estavam produzindo H2O2, entre os grupos experimentais, todavia, a produção intracelular média de H2O2, sem estímulo in vitro (p=0,007), após adição in vitro de PMA (p<0,001), de LPS (p=0,001) ou após fagocitose (p=0,002), de leucócitos obtidos de animais apresentando LP, foi menor que aquela verificada em células provenientes de animais soronegativos e de animais soropositivos alinfocitóticos. A porcentagem de leucócitos realizando fagocitose, caracterizada pela intensidade de fluorescência do iodeto de propídio, entre as células obtidas de animais com LP, de 7,20%, foi menor que aquela verificada nas amostras coletadas de animais soronegativos, de 12,90%, e soropositivos alinfocitóticos, de 14,70% (p=0,047). Além disso, as células provenientes de animais com LP apresentaram uma menor intensidade de fagocitose que aquela observada em leucócitos de animais soronegativos e soropositivos alinfocitóticos (p<0,001). Assim, os resultados obtidos demonstram uma vulnerabilidade funcional em leucócitos sangüíneos obtidos de animais infectados pelo VLB, manifestando LP. / Different leukocyte populations play key roles on the elimination of foreign antigens through phagocytosis and killing by oxygen-independent and -dependent (respiratory burst) mechanisms. Assuming that Enzootic Bovine Leukosis virus (BLV), that causes a chronic disease, and affects, mainly, lymphoid tissues, alters bovine circulating leukocyte subpopulations quantitatively and qualitatively, and influences the innate immune response, this study evaluated the intracellular production of hydrogen peroxide (H2O2) of circulating leukocytes after in vitro stimuli with phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), Escherichia coli lipopolysaccharides (LPS), or phagocytosis of propidium iodide-labeled Staphylococcus aureus (PI-Sa). Cells were obtained from five BLV-negative cows, five naturally BLV-infected, non-lymphocytotic cows, and five BLV-positive cows with persistent lymphocytosis (PL), and analyzed by flow cytometry. Normality was tested using the Anderson-Darling test, followed by an F test or a Lavene\'s test to analyze the equality of variances. Differences among frequencies were tested using the Qui-square test. Differences among means were verified by a one way analysis of variance (ANOVA), followed by a Turkey-Kramer test, or a Student t-test, a Mann-Whitney U-test, or a Kruskal-Wallis test. Mean total percentage of H2O2-producing cells, characterized by the intensity of 2,7-dichlorofluorescein fluorescence, in the assay without in vitro stimulus (30.60%) was smaller (p=0.005) than that verified in the assay after in vitro addition of LPS (52.00%), and after addition of PMA (63.13%). Mean total percentage of H2O2-producing cells in the assay with stimulus by in vitro phagocytosis of PI-Sa (47.47%) was not different from that verified in the assay without in vitro stimulus. Mean total percentages of H2O2-producing leukocytes did not differ among assays with previous in vitro stimuli. There was no difference in the percentages of H2O2-producing leukocytes, among cells obtained from cows that belonged to different groups. However, mean intracellular H2O2-production of leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, without in vitro stimulus (p=0.007), after in vitro addition of PMA (p<0.001), or LPS (p=0.001), or after phagocytosis (p=0.002) was smaller than that verified in leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. The percentage of leukocytes that were carrying out phagocytosis, characterized by the intensity of propidium iodide fluorescence, among cells obtained from BLV-infected cows, presenting PL (7.20%), was smaller (p=0.047) than that verified among cells obtained from non-infected and from BLV-infected (12.90%), non-lymphocytotic (14.70%), cows. Furthermore, leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, showed smaller phagocytosis intensity (p<0.001) than leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. Therefore, results show a functional vulnerability of circulating leukocytes obtained from BLV-infected, lymphocytotic cows.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-30T15:53:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Moisés Queiroz Resende - 2014.pdf: 891007 bytes, checksum: 48a7b34dc669b45819e19f6d364dfdb5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-30T15:54:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Moisés Queiroz Resende - 2014.pdf: 891007 bytes, checksum: 48a7b34dc669b45819e19f6d364dfdb5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-30T15:54:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Moisés Queiroz Resende - 2014.pdf: 891007 bytes, checksum: 48a7b34dc669b45819e19f6d364dfdb5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-08-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / ABSTRACT: Two experiments were conduct to evaluate the effect of using soy protein concentrate (SPC) in pre-starter piglet diets over performance, intestinal histomofometria and blood parameters. In the first trial 72 piglets weaned at 21 days of age were used and 54 for the second trial. Both were conducted as a randomized blocks design with six replications and three piglets per unit. The first trial had four diets (0% SPC, 3% SPC, 6% SPC and 9% SPC), which evaluated different levels of SPC inclusion in diets, and the second trial, which evaluated the replacement of spray dried blood plasma (SDP) by SPC, had three diets (0.0%-SPC + 5.0-SDP, 2.5%-SPC + 2.5%-SDP and 5.0%-SPC + 0.0%-SDP). In both trials, diets and water were offered ad libitum in pre-starter l (21-32 days old) and pre-starter ll (33-42 days old) phases, but during the starter phase (43-66 days old) all piglets received a single diet. At 32 days of age, blood was collected from one animal per experimental unit and then these animals were euthanized to collect samples of the small intestine. Linear effect was observed In the first trial, over feed conversion (FC) as the level of CPS in diet was increased in the period between 21 and 32 days of age. Linear effect was also observed on the FC in the period of 33-42 days old, however in a reverse form from the previous period, wherein the increase of the SPC level in diets resulted in the increase of FC. In the total period of this trial (21-66 days old), it was found a quadratic effect of SPC on piglets FC. In the second trial, the replacement of SDP by CPS caused effect on performance variables, except for feed conversion (FC) during 21-32 days of piglets age. The average daily feed intake (ADFI) was higher for pigs fed 2.5%-SPC + 2.5%-SDP and the average daily gain (ADG) and the final body weight (FBW) of the piglets in this period was higher for 2.5%-SPC + 2.5%-SDP compared to 5.0%-SPC + 0.0%-SDP. In the period of 21-42 days old, it was observed best results of ADFI and FBW for piglets fed diet containing 2.5%-SPC + 2.5%-SDP compared to piglets fed 5.0%-SPC + 0.0%-SDP. The ADG showed better results for diets containing 0.0%-SPC + 5,0-SDP and 2.5%-SPC + 2.5%-SDP and FC was higher for the diet with 0.0%-SPC + 5.0%-SDP compared to the diet with 5.0%-SPC + 0.0%-SDP. During total period of the experiment (21-66 days old) ADG and ADFI was influenced by substitution of SDP for SPC, wherein the best results was presented by piglets fed 2.5%-SPC + 2.5%-SDP compared to those fed 5.0%-SPC + 0.0%-SDP. In both trials, no effect was observed upon histomorphometric variables (villus height, crypt depth and villus: crypt). Regarding the blood variables (leukocytes, eosinophils and lymphocytes), no effect of SPC at 32 days of age the piglets was observed in the first trial. But in the second trial, total leukocyte count was higher in animals fed 5.0%-SPC + 0.0%-SDP compared to ones fed 0.0%-SPC + 5.0%-SDP and lymphocyte count was lower in piglets receiving 0.0%-SPC + 5.0%-SDP. In the first trial, the use of SPC in diets of post-weaning piglets during pre-starter period (21-42 days old) did not influence performance from 21 to 66 days of life, or intestinal morphology and leukocyte, lymphocytes and eosinophils count in these animals. In the second, the combined use of SPC and SDP in the diets of pigs between 21 and 42 days of age reduces the activation of the immune system and improves productive performance. / Foram conduzidos dois experimentos com objetivo de avaliar o efeito da utilização de Concentrado proteico de soja (CPS) em dietas pré-inicias de leitões sobre o desempenho, histomofometria intestinal e alguns parâmetros sanguíneos. Foram utilizados 72 leitões machos castrados desmamados aos 21 dias de idade no primeiro experimento e 54 no segundo. Ambos foram delineados em blocos ao acaso com seis repetições e três leitões por unidade experimental, tendo o primeiro quatro tratamentos (0% CPS, 3% CPS, 6% CPS e 9% CPS), o qual avaliou diferentes níveis de inclusão de CPS nas dietas, e o segundo, para avaliar a substituição de plasma sanguíneo (SDP) por CPS, três (0,0%-CPS + 5,0-SDP, 2,5%-CPS + 2,5%-SDP e 5,0%-CPS + 0,0%-SDP). Em ambos as rações experimentais e água foram fornecidas à vontade nas fases pré-inicial l (21 a 32 dias de idade) e pré-inicial ll (33 a 42 dias de idade), sendo que na fase inicial (43 a 66 dias de idade) todos os leitões receberam uma única dieta. Aos 32 dias de idade foi coletado sangue de um animal por unidade experimental e em seguida estes animais foram eutanasiados para coleta de amostras de intestino delgado. No primeiro experimento, foi observado efeito linear decrescente sobre a conversão alimentar (CA) à medida que aumentou o nível de CPS na dieta no período entre 21 e 32 dias de idade. Efeito linear também foi observado sobre a CA no período entre 33 e 42 dias de idade dos leitões, entretanto de forma inversa ao período anterior, ou seja, à medida que se aumentou o nível de CPS na dieta a CA aumentou. Foi observado no período total (21 a 66 dias de idade) do primeiro experimento efeito quadrático do CPS sobre a CA dos leitões. No segundo experimento a substituição de SDP por CPS causou efeito sobre as variáveis de desempenho no período entre 21 e 32 dias de idade, exceto sobre a CA. O CDR foi superior para os leitões alimentados com 2,5%-CPS + 2,5%-SDP e o GDP e o peso final (PF) dos animais neste período foi superior com 2,5%-CPS + 2,5%-SDP comparado a 5,0%-CPS + 0,0%-SDP. No período entre 21 e 42 dias de idade foi observado melhores resultados de CDR e PF para a dieta com 2,5%-CPS + 2,5%-SDP comparado a 5,0%-CPS + 0,0%-SDP. O GDP apresentou melhores resultados para as dietas com 0,0%-CPS + 5,0-SDP e 2,5%-CPS + 2,5%-SDP e a CA foi superior para a dieta com 0,0%-CPS + 5,0%-SDP diante da dieta com 5,0%-CPS + 0,0%-SDP. No período total do experimento (21 a 66 dias de idade) foi observado efeito da substituição dos SDP por CPS sobre o GDP e o CDR, sendo que os animais alimentados com 2,5%-CPS + 2,5%-SDP apresentaram resultados superiores aos alimentados com 5,0%-CPS + 0,0%-SDP. Emambos os experimentos nenhum efeito foi observado sobre as variáveis histomorfométricas (altura de vilosidade, profundidade de cripta e relação vilo:cripta). Em relação às variáveis sanguíneas (leucócitos, linfócitos e eosinófilos) do primeiro experimento, não foi observado nenhum efeito do CPS aos 32 dias de idade dos leitões. No segundo experimento, a contagem total de leucócitos foi superior para os animais alimentados com 5,0%-CPS + 0,0%-SDP sobre os alimentados com 0,0%-CPS + 5,0%-SDP e a contagem de linfócitos foi menor nos leitões que receberam 0,0%-CPS + 5,0%-SDP. No primeiro experimento, a utilização de CPS em dieta de leitões pós-desmame no período préinicial (21 a 42 dias de idade) não influenciou o desempenho produtivo dos leitões no período entre 21 e 66 dias de vida, nem a histomorfometria intestinal e a contagem de leucócitos, linfócitos e eosinófilos desses animais. No segundo, a utilização conjunta de CPS e SDP nas rações reduz a ativação do sistema imune e melhora o desempenho produtivo.

LOPAP (Lonomia obliqua prothrombin activator protease) é uma serino protease isolada das cerdas da Lagarta Lonomia obliqua que induz efeitos sobre a coagulação sanguínea, semelhantes ao extrato de cerdas bruto. Recentemente, foi obtido um peptídeo do LOPAP, P4, que parece possuir efeitos similares à proteína. No sentido de complementar os dados sobre estas toxinas, este estudo investigou os efeitos do LOPAP ou do P4 sobre interações leucócito-endotélio in vivo; expressão de moléculas de adesão, síntese de mediadores inflamatórios, apoptose e necrose de leucócitos e célula endotelial, além de suas possíveis ações sobre a formação de novos vasos. Aplicação tópica de 30&#181;g/mL ou 300&#181;g/mL (10&#181;L) de LOPAP ou de P4 na rede microvascular do mesentério de ratos Wistar machos não alterou o diâmetro de vênulas pós-capilares, as interações dos leucócitos ao endotélio, nem a reatividade microvascular frente à acetilcolina ou noradrenalina. Somente a concentração de 1000&#181;g/mL aumentou o número de leucócitos aderidos à parede vascular, simultaneamente a estases intermitentes nos vasos da microcirculação. Ensaios de citometria de fluxo mostraram que a incubação de LOPAP ou P4 (300&#181;g/mL) não modificou a expressão de L-selectina e &#946;2-integrina em neutrófilos circulantes obtidos de ratos Wistar. Por outro lado, incubações do LOPAP ou do P4 com célula endotelial (cultura primária obtida do músculo cremaster de ratos Wistar; 300&#181;g/mL) induziram a expressão da molécula ICAM-1 , e somente o P4 promoveu a expressão de VCAM-1. Diferentemente, nenhuma das toxinas alterou a expressão de PECAM-1. Ensaios imuinoenzimáticos realizados em sobrenadantes de neutrófilos e de célula endotelial incubadas com LOPAP ou P4 (300&#181;g/mL) mostraram que as toxinas não alteraram a secreção de interleucina-6 (IL-6), interleucina-10 (IL-10), fator de necrose tumoral-&#945; (TNF-&#945;) por neutrófilos; as toxinas não induziram a secreção de TNF-&#945; pela célula endotelial, mas aumentaram a secreção de IL-6 e IL-10. A concentração de óxido nítrico (NO), quantificado pela reação de Griess, estava aumentada nos sobrenadantes dos dois tipos celulares incubados com LOPAP ou P4. A incubação de LOPAP ou P4 com neutrófilos ou célula endotelial não alterou a viabilidade celular, mas preveniu a apoptose da célula endotelial ou neutrófilo provocada pela carência de soro bovino fetal. A incubação simultânea com L-NAME (1 mM) reduziu a proteção conferida pelo LOPAP ou pelo P4. A investigação dos efeitos das toxinas sobre a formação da rede microcirculatória foi realizada em camundongos Swiss, machos, utilizando o modelo da câmara dorsal por microscopia intravital. A aplicação tópica do LOPAP ou P4 (30&#181;g/mL, 300&#181;g/mL; 10&#181;L; 3 doses a cada 96 horas) no leito microvascular dorsal reduziu significantemente o número de vasos na rede microcirculatória em condições basais. Adicionalmente, o tratamento com P4 inibiu a formação de novos vasos provocada pela aplicação tópica de suplemento de fatores de crescimento vascular. O tratamento de célula endotelial de microcirculação de camundongos imortalizadas (tENd) com LOPAP ou P4 (300&#181;g/mL) reduziu a capacidade de migração destas células. Em conjunto, os dados obtidos até o momento mostram que o LOPAP e o P4 não induziram as interações leucócito-endotélio in vivo e que a secreção de mediadores por neutrófilos e célula endotelial, como o NO, podem estar envolvidos com suas atividades anti-apoptótica. Ademais, o LOPAP e o P4 inibem o crescimento de novos vasos, e um dos possíveis mecanismos pode ser a interferência nos mecanismos de migração da célula endotelial. / LOPAP (Lonomia obliqua prothrombin activator protease) is a serine protease isolated from the crude extract of Lonomia obliqua caterpillar, which induces effects on blood coagulation comparable to the extract. Recently it was obtained a peptide fragment from LOPAP, P4, with similar activities with the protein. This study aimed to complete data about these toxins, LOPAP and P4, on in vivo leukocyte-endothelial interactions; adhesion molecule expressions, synthesis of inflammatory mediators, necrosis and apoptosis of neutrophils and endothelial cells, besides possible actions on angiogenesis. Topical applications of 30&#956;g/mL or 300&#181;g/mL (10&#181;L) of LOPAP or P4 on microvascular network of mesentery of Male Wistar rats did not affect the diameter of postcapillary venules, leukocyte-endothelial interactions, either vascular reactivity to acetylcholine or norepinephrine. Only topical application of 1000&#181;g/mL (10 &#181;L) promoted increment on the number of leukocytes adhered to vessel wall, simultaneously to intermittent blood stasis in the microvascular network. Flow cytometry assays showed that incubations with LOPAP or P4 (300&#181;g/mL) did not modify the expression of L-selectin or &#946;2-integrin in neutrophils from Male Wistar rats. On the other hand, incubations of LOPAP or P4 with primary cultured endothelial cells evoked expressions of ICAM-1, and only incubation with P4 promoted expression of VCAM-1. Differently, the treatments did not affect PECAM-1 expression in endothelial cells. Immunoenzimatic assays carried out in supernatants of neutrophils and endothelial cells incubated with LOPAP or P4 (300&#181;g/mL) showed that both toxins did not alter the basal secretion of interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10), tumor necrosis factor-&#945; (TNF-&#945;) by neutrophils; both toxins did not promote secretion of TNF-&#945; by endothelial cells, however they enhanced the secretion of IL-6 and IL-10. Concentrations of nitric oxide (NO), quantified by Griess reaction, were enhanced in the supernatant of neutrophils or endothelial cells incubated with LOPAP or P4. LOPAP or P4 treatments did not alter the viability of neutrophils or endothelial cells, but prevented the apoptosis of both type cell caused by fetal bovine serum deprivation. Simultaneous incubation with L-NAME (1 mM) and LOPAP or P4 reduced the protection on apoptosis exerted by the toxins. The action of toxins on formation of microcirculatory network was investigated in Male Swiss mice. Topical application of LOPAP or P4 (30&#181;g/mL, 300&#181;g/mL; 10&#181;L; 3 times each 96 hours) in the microvascular network significantly reduced the number of vessels in basal conditions. Additionally, treatment with P4 inhibited the new vessel formation provoked by topical application of vascular growth factor supplement. Immortalized endothelial cells of mice (tEnd) incubated with toxins presented lower migration than cells incubated with saline. Together, data herein obtained showed that LOPAP and P4 did not evoke in vivo leukocyte-endothelial interactions and secretions of chemical mediators by neutrophils and endothelial cells, as NO, seem to be related to anti-apoptotic activities. Additionally LOPAP or P4 inhibit the microcirculatory network formation, by interfering, at least in part, by altering the migration of endothelial cells.

Este estudo teve por objetivos: a) caracterizar o influxo de leucócitos (LC) induzido pelo veneno de Bothrops moojeni (VBm); b) avaliar o papel dos mastócitos (MC) e da histamina neste evento; c) analisar a liberação de TXA2, PGD2, LTB4, MCP-1 e KC e d) avaliar a capacidade do VBm desgranular MC in vivo e in vitro. A injeção intraperitoneal de VBm, em camundongos, causou o recrutamento de LC e neutrofilia. O tratamento dos animais com cromoglicato aboliu o influxo de LC enquanto a difenidramina, ranitidina e a tioperamida, antagonistas da histamina, reduziram o influxo de neutrófilos. Ainda, o veneno induziu a liberação de PGD2, TXA2, LTB4, MCP-1 e de KC e causou a desgranulação de MC in vivo e a liberação de -hexosaminidase de MC in vitro. Em conclusão, o VBm induz influxo de LC para o local de sua injeção. Este efeito depende da histamina, via receptores H1, H2 e H4 e da desgranulação de MC, que decorre de ação direta do veneno nestas células. A neutrofilia e o TXA2, LTB4, MCP-1 e KC devem contribuir para o influxo de leucócitos causado pelo VBm. / In this study the effects of Bothrops moojeni venom (BmV) on the cellular component of inflammatory responses and the mechanisms involved in this effect were investigated. The effects of venom on peritoneal and circulating leukocyte numbers and on the release of inflammatory mediators, such as LTB4, TXA2, PGD2, MIP-1 and KC, were assessed. The role of both mast cells and histamine receptors in leukocyte recruitment induced by BmV was assessed by selected pharmacological treatments. BmV caused a marked infiltration of leukocytes (3-24 h) when injected into the peritoneal cavity of mice. Neutrophils (PMN) were the predominant cell type in the early stages of response whereas macrophages (MN) were accumulated from 3 up to 24 h. Moreover, BmV increased blood neutrophil numbers at 3 h after injection. The BmV-induced leukocyte influx was abrogated by cromoglicate and significantly reduced either by difenidramine or ranitidine or tioperamide, histamine H1, H2 and H4 receptor antagonists, respectively, at 6 h after injection. Significant increments in peritoneal levels of LTB4, TXA2, PGD2, MIP-1 and KC were detected at distinct periods of time after venom injection. In addition, BmV induced mast cell degranulation both in vivo and in vitro. In conclusion, obtained data demonstrated the ability of BmV induce leukocyte recruitment into the site of its injection. This effect is dependent on mast cell activation and degranulation, which may be due to a direct effect of venom on these cells, and is mediated at least in part by histamine via H1, H2 and H4 receptors. Moreover, the ability of venom to mobilize leukocytes from bone marrow reserve compartments and to release the chemotactic mediators TXA2, LTB4, MCP-1 and KC may be relevant for leukocyte infiltration.

Moléculas HLA-DR e co-estimulatórias tem papel central na função imune de leucócitos. Diferentes emulsões lipídicas (EL) podem alterar funções imunes de leucócitos. Para avaliar os efeitos de diferentes EL sobre a expressão de moléculas HLA-DR, CD80 e CD86 presentes na superfície de monócitos/macrófagos (MO/M?) e CD28 e CD152 presentes na superfície de linfócitos T auxiliares (L? CD4) humanos, células mononucleares do sangue periférico de voluntários saudáveis (n=10) foram separadas com uso de Ficoll Hypaque (d=1,007) e incubadas por 48 horas (MO/M?) e 72 horas (L?) em meio RPMI 1640 acrescidas ou não (controle negativo) de diferentes EL comerciais ou misturas experimentais na concentração de 1mg/mL. De acordo com o tipo da emulsão lipídica adicionada ao meio de cultura, as células foram divididas em seis grupos experimentais: a) Controle negativo - células mononucleares cultivadas sem o acréscimo de EL b) TCLn-6 - células mononucleares cultivadas com EL a base de óleo de soja rica em ácidos graxos poliinsaturados tipo n-6 (AGPI n-6), c) TCLn-6/TCLn-3 - células mononucleares cultivadas com mistura experimental contendo 80% da EL a base de óleo de soja e 20% de EL a base de óleo de peixe rica em AGPI tipo n-3, d) TCM/TCLn6 - células mononucleares cultivadas com EL composta por 50% óleo de coco, rico em triglicérides de cadeia média e 50% de óleo de soja, e) TCM/TCLn-3 - células mononucleares cultivadas com mistura experimental contendo 80% de EL composta por 50% óleo de coco e 50% de óleo de soja e 20% de EL a base de óleo de peixe, f) SMOF - células mononucleares cultivadas com a nova EL contendo 30% de óleo de soja, 30% de triglicérides de cadeia média, 25% de óleo de oliva e 15% de óleo de peixe. As células mononucleares foram ativadas pelo uso de 10?g/mL de fitohemaglutinina. A expressão das moléculas de superfície foi analisada por citometria de fluxo. A porcentagem de fluorescência, que indica o número de células expressando as moléculas em estudo e a intensidade de fluorescência, que indica de forma indireta o número de moléculas expressas por células, foram medidas. Os resultados obtidos foram submetidos à teste estatístico Friedman e pós-teste Student-Newman-Keuls, adotando-se nível de significância de p<0,05. Devido às diferenças na expressão basal dos doadores, os resultados de intensidade de fluorescência foram transformados em porcentagem relativa ao controle basal (Basal=100). Nos grupos TCLn-6, TCLn-6/TCLn-3, TCM/TCLn-6, TCM/TCLn-3 e SMOF, a intensidade de fluorescência de moléculas HLA-DR expressas na superfície de monócitos/macrófagos diminuiu (medianas = 87,6; 84,0; 81,0; 85,0 e 80,0 respectivamente) em relação ao controle negativo (CN) (mediana=100,0) p=0,01. Todos os grupos tratados com EL aumentaram o número de linfócitos T auxiliares expressando moléculas CD28 (medianas = 90,9; 90,4; 91,5; 92,6 e 90,1 respectivamente) em relação ao CN (mediana=82,8) p=0,001 e também o número de moléculas CD152 expressas por células na superfície de linfócitos T auxiliares (medianas = 120,6; 108,8; 127,7; 114,6 e 121,3 respectivamente) em relação ao CN (mediana=100,0), p=0,03. Não foram encontradas diferenças estatísticas na expressão de moléculas CD80 e CD86 na superfície de monócitos/macrófagos cultivados com diferentes EL. Ainda não foram encontradas diferenças no número de linfócitos T auxiliares expressando CD152. Finalmente a expressão por células de moléculas CD28 na superfície de linfócitos T auxiliares também não mostrou alteração significante com as diferentes emulsões lipídicas. Conclusão: Emulsões lipídicas parenterais in vitro, diminuem a expressão de moléculas HLA-DR na superfície de monócitos/macrófagos e aumentam a expressão de moléculas CD28 e CD152 na superfície de linfócitos T auxiliares humanos. Estas alterações podem ser um dos mecanismos pelos quais as EL modulam funções de células imunes / HLA-DR and co-stimulatory molecules play a central role on leucocytes immune function. Different lipid emulsions (LE) may change leucocytes immune function. It is of interest to study the effect of different LE on HLA-DR and costimulatory molecules expression. To access the effect of LE on the HLA-DR, CD80 and CD86 expression on monocytes/macrophages (MO/MØ) surface and CD28 and CD152 (CD80/CD86 co-stimulatory molecules receptor) expression on human T helper lymphocytes (LØ CD4) surface we obtained mononuclear cells from peripheral blood of healthy volunteers (n=10) by using ficoll hypaque (d=1.077). The cells were cultured for 48 hours (MOMØ) and 72 hours (LØ CD4) and incubated with RPMI 1640 medium without (negative control) or added with 1mg/mL of commercial or experimental mixtures of five LE. Groups: a) NC - negative control without LE, b) LCTn-6 - n-6 polyunsaturated fatty acids (PUFA) rich LE ( soybean oil), c) LCTFO - 80% of LCT and 20% of n-3 PUFA rich LE (FO) (fish oil), d) MCT/LCT - LE containing 50% of medium chain triglycerides and 50% of n-6 PUFA rich LE, e) MCT/LCTFO - 80% of MCT/LCT LE and 20% of FO LE and f) SMOF - a new LE containing 30% of soybean oil, 30% of medium chain triglycerides, 25% of olive oil and 15% of fish oil. Mononuclear cells were activated by using 10?g/mL of phytohemagglutinin. Surface molecules expression was measured by flow cytometry. Percentage and intensity of fluorescence were recorded and the data were submitted to Friedman statistical test and Student-Newman-Keuls post test (p<0,05). Due the differences in basal expression between donors, prior to statistical tests, data from intensity of fluorescence were transformed of percentage relative of basal expression (where basal=100). All LE groups LCT, LCTFO, MCT/LCT, MCT/LCTFO and SMOF decreased HLA-DR intensity of fluorescence on monocytes/macrophages (mean= 87.6, 84.0, 81.0, 85.0, and 80.0 respectively) in relation to negative control (NC) (mean=100.0) cultured without LE (p=0,01). All LE groups increased the percentage of lymphocytes expressing CD28 (means=90.9, 90.4, 91.5, 92.6 and 90.1 respectively) in relation to control (mean=82.8) p=0,001 and CD152 intensity of fluorescence on lymphocytes cultured with all different LE (mean=120,6; 108,8; 127,7; 114,6 and 121,3 respectively) in relation to NC (mean=100,0), p=0,03. No significant differences were found on CD80 and CD86 expression on monocytes/macrophages surface, CD28 intensity of fluorescence and the percentage of lymphocytes expressing CD152 on lymphocytes cultured with the different studied LE. Conclusion: In vitro parenteral LE decreased HLA-DR expression on human monocytes/macrophages surface and increase co-stimulatory molecules receptor expression on human lymphocytes surface. These changes could be one of the mechanisms of LE modulation of immune cells functions

INTRODUÇÃO: A interação entre leucócitos e plaquetas é fundamental para o início e a progressão da reestenose e da aterosclerose. Recentemente foi evidenciado em estudos in vitro que a integrina Mac-1 dos leucócitos se liga à glicoproteína Ibalfa (GP Ibalfa) das plaquetas e que esta interação possui uma função central na firme adesão e transmigração de leucócitos em locais de deposição de plaquetas. Entretanto, não há estudos in vivo que avaliam a importância da interação entre a integrina Mac-1 dos leucócitos e a GP Ibalfa das plaquetas (alfaMbeta2-GP Ibalfa) em modelo experimental de lesão vascular. MÉTODO: Um peptídeo denominado M2 ou anticorpo anti-M2 foi desenvolvido para bloquear a interação da integrina Mac-1 dos leucócitos com a GP Ibalfa das plaquetas, visando, deste modo, inibir a adesão de leucócitos na superfície do vaso coberta por plaquetas, a proliferação celular e a hiperplasia neointimal. Este peptídeo foi injetado e comparado com anticorpo-controle em camundongos C57B1/6J submetidos à lesão vascular da artéria femoral com corda-guia. Um dia (controle: n= 6; anti-M2: n= 6), 5 dias (controle: n= 9; anti-M2: n= 9) ou 28 dias (controle: n= 9; anti-M2: n= 9) após a lesão vascular, as artérias femorais foram retiradas para a realização de morfometria e imunohistoquímica. RESULTADOS: O bloqueio da interação alfaMbeta2-GP Ibalfa promoveu redução estatisticamente significativa de 75% do número de leucócitos na camada média no primeiro dia após a lesão vascular (controle: 7,9 ± 5,0% do total de células na camada média; versus anti-M2: 2,0 ± 1,6%; p=0,021), bem como determinou diminuição estatisticamente significativa de 42% em 5 dias (controle: 42,3 ± 12,9% do total de células na neoíntima; versus anti-M2: 24,6 ± 10,8%; p=0,047) e de 58% em 28 dias do acúmulo de leucócitos na neoíntima em desenvolvimento (controle: 7,9 ± 3,0% versus anti-M2: 3,3 ± 1,3%; p=0,012). A proliferação celular na camada média do vaso em 5 dias pós-lesão vascular apresentou redução estatisticamente significativa de 64% com o bloqueio da interação alfaMbeta2-GP Ibalfa (controle: 5,0 ± 2,9% do total de células na camada média; versus anti-M2: 1,8 ± 0,5%; p=0,043), assim como houve diminuição significativa de 47% da proliferação celular na camada íntima do vaso em 28 dias (controle: 3,8 ± 1,7% do total de células na camada íntima; versus anti-M2: 2,0 ± 1,2%; p=0,047). O bloqueio da interação alfaMbeta2-GP Ibalfa também determinou redução estatisticamente significativa de 56% do espessamento intimal em 28 dias (controle: 10.395 ± 3.549um2; versus anti-M2: 4.561 ± 4.915um2; p=0,012). CONCLUSÕES: O recrutamento de leucócitos após a lesão vascular é dependente da interação alfaMbeta2-GP Ibalfa e a neutralização desta interação inibe a proliferação celular e a formação neointimal. / INTRODUCTION: The interaction between leukocytes and platelets is fundamental for the beginning and the progression of restenosis and atherosclerosis. Recent in vitro studies have shown that the leukocyte integrin Mac-1 binds to the platelet glycoprotein (GP) Ibalfa, and this interaction plays a central role in the leukocyte firm adhesion and transmigration at sites of platelet deposition. However, there is no in vivo study evaluating the importance of the integrin Mac-1 and GP Ibalfa (alfaMbeta2-GP Ibalfa) interaction in experimental models of vascular injury. METHODS: A peptide termed M2 or anti-M2 antibody was developed to block the leukocyte Mac-1 and platelet GP Ibalfa interaction, aiming to inhibit the adhesion of leukocytes to the platelet-coated surface of vessels as well as the cellular proliferation and the neointimal hyperplasia. The peptide was injected and compared with a control-antibody in C57B1/6J mice subjected to wire-induced femoral artery injury. One day (control: n= 6; anti-M2: n= 6), 5 days (control: n= 9; anti-M2: n= 9) or 28 days (control: n= 9; anti-M2: n= 9) after vascular injury, the femoral arteries were harvested for morphometry and immunohistochemistry. RESULTS: The alfaMbeta2-GP Ibalfa interaction blockade promoted a statistically significant 75% reduction in leukocytes in the medial layer on the first day after vascular injury (control: 7.9 ± 5.0% out of the total cells in the medial layer versus anti-M2: 2.0 ± 1.6%; p=0.021), as well as determined a statistically significant 42% decrease 5 days later (control: 42.3 ± 12.9% out of the total cells in the neointima versus anti-M2: 24.6 ± 10.8%; p=0.047), and a 58% decrease in leukocyte accumulation in the developing neointima 28 days later (control: 7.9 ± 3.0% versus anti-M2: 3.3 ± 1.3%; p=0.012). The cellular proliferation in the vessel medial layer 5 days after vascular injury presented a statistically significant 64% reduction by the alfaMbeta2-GP Ibalfa interaction blockade (control: 5.0 ± 2.9% out of the total cells in the medial layer versus anti-M2: 1.8 ± 0.5%; p=0.043), and there was also a significant 47% decrease in the vessel intimal layer cellular proliferation 28 days later (control: 3.8 ± 1.7% out of the total cells in the intimal layer versus anti-M2: 2.0 ± 1.2%; p=0.047). Furthermore, the alfaMbeta2-GP Ibalfa interaction blockade determined a statistically significant 56% reduction in the intimal thickening 28 days after vascular injury (control: 10,395 ± 3,549um2 versus anti-M2: 4,561 ± 4,915um2; p=0.012). CONCLUSIONS: The leukocyte recruitment after vascular injury depends on the alfaMbeta2-GP Ibalfa interaction, and its neutralization inhibits cellular proliferation and neointimal formation.