Os óleos essenciais cítricos possuem uma ampla variedade de aplicações em diversos ramos das indústrias químicas, farmacêuticas, de alimentos, entre outras. Na indústria de cosméticos, mais precisamente no ramo de perfumaria, os ativos naturais cítricos (provenientes dos óleos de bergamota, limão, lima, mandarina, laranja, etc) são empregados nas formulações de colônias, cremes hidratantes e loções. Além disso, estes compostos são largamente utilizados como agentes aromatizantes nas indústrias alimentícias e farmacêuticas e empregados como matéria-prima para as indústrias de aromas. Com o objetivo de melhorar a qualidade dos óleos essenciais e sua capacidade aromatizante, alguns processos têm sido desenvolvidos para enriquecer a mistura com compostos oxigenados, os quais são reportados como os principais responsáveis pelo aroma característico da fruta. Tal processo é comumente conhecido como desterpenação e consiste na concentração destes compostos pela retirada de hidrocarbonetos terpênicos do óleo e pode ser realizado por meio da extração líquida ou extração por solvente. Neste contexto, esta dissertação de mestrado teve como finalidade estudar da viabilidade técnica do processo de desterpenação de óleo essencial cítrico modelo composto por limoneno e linalol. Os experimentos foram conduzidos em coluna de discos rotativos perfurados (PRDC) sob condição de temperatura controlada e pressão ambiente local. O equipamento operou de modo contínuo e contracorrente, utilizado como solventes soluções de etanol com teores de água de 30 e 40% (em massa), velocidade de rotação dos discos de 150, 200 e 250 rpm e razão entre a vazão mássica de solvente e alimentação de 0,5; 1,25; 2,5 e 3,0. Avaliou-se, também, o comportamento da densidade e viscosidade das fases extrato e rafinado oriundas da coluna de extração. Através deste estudo foi possível verificar que a tecnologia de desterpenação de óleos essenciais por meio da extração líquido-líquido é viável podendo ser aplicada à processos contínuos utilizando equipamento PRDC, por exemplo, sendo possível a obtenção de frações enriquecidas do composto oxigenado (linalol). / Citrus essential oils are used in a wide variety of applications in various branches of the chemical, pharmaceutical, food and other industries. In the cosmetics industry, specifically in the field of perfumery, natural citrus assets (from the essential oils of bergamot, lemon, lime, mandarin, orange, etc.) are used in the formulations of colonies, moisturizing creams and lotions. Furthermore, these compounds are widely used as flavoring agents in food and pharmaceutical industries and as raw material for the flavor industry. With the aim to improve the quality of essential oils and its flavoring ability, some processes have been developed to enrich the mixture with oxygenated compounds, which are reported as the main responsible for the characteristic aroma of the fruit. Such process is commonly known as deterpenation, and consists in concentration of these compounds by the removal of terpene compounds from the essencial oil and can be performed by liquid or solvent extraction. In this context, the purpose of this dissertation of master\'s degree was to carry out a study of the technical feasibility of deterpenation process of a citrus essential oil model composed by a mixture of limonene and linalool. The experiments of deterpenation were conducted in a perforated rotating discs contactor (PRDC) under controlled conditions of temperature and local environment al pressure. The equipment was operated in continuously and countercurrently mode, using as solvents ethanol solutions with 30 and 40% of water contents (by mass), rotation of discs speed of 150, 200 and 250 rpm and the mass flow rate of the solvent and feed ratio of 0.5, 1.25, 2.5 and 3.0. The behavior of the density and viscosity of the extract and raffinate phases from the extraction column was also evaluated. It was found that the deterpenation of essential oils by liquid-liquid extraction technology is feasible and can be applied to continuous processes using PRDC column extraction type, for instance, being possible to obtain enriched fractions of oxygenated compounds (linalool).

Nesse trabalho, foram sintetizados seletivamente, a partir do óxido do limoneno em oposição a diversas aminas primárias e secundárias, onze b-aminoálcoois derivados do limoneno através de aquecimento convencional e sob irradiação com microondas, fornecendo produtos com moderados a bons rendimentos. O limoneno e nove destes aminoálcoois foram testados contra ovos e larvas de carrapatos da espécie de Rhipicephalus (Boophilus) microplusn no intervalo de concentração de 0,150-10mg/mL. Os resultados revelaram que em doses entre 10 μl/ml - 2.5 μl/ml todos os compostos testados foram letais às larvas. Frente ao teste ovicida os compostos 2, 6, 8, 9 e 10 foram os mais ativos, impedindo a eclosão total ou quase total dos ovos na menor dose utilizada (0,150 μg/ml). Este é o primeiro relato da atividade carrapaticida de limoneno, óxido de limoneno e dos b- aminoálcoois do limoneno para a espécie de carrapato Rhipichephalus (Boophilus) microplus. O limoneno e sete β-aminoálcoois foram testatdos in vitro contra forma promastigota de Leishmania (Vianna) braziliensis. Os resultados dos testes mostraram que, dentre os sete β-aminoálcoois testados dois deles foram mais ativos que o padrão pentamidina (48,5 ± 28,7 μM) e cinco foram mais ativos que o limoneno 1. Destes, dois deles (compostos 7 e 9) apresentaram alta atividade frente a formas promastigotas do ciclo parasitário numa concentração de 0,156mg/mL. O Limoneno 1 nesse teste se mostrou inativo (876,2 ± 216 μM) demonstrando que este terpeno isolado não é um bom antiparasitário contra formas promastigotas de Leishmania (Vianna) braziliensis. Este é o primeiro relato de atividade contra leishmania para amino-álcoois derivados do limoneno. / In this work, a series of seven limonene β-amino alcohols derivatives have been regioselectively synthesized from moderate to good yields. The eleven β-amino alcohols Limonene derivatives were synthesized through aminólisis of Limonene oxide, using several primary and secondary amines by both conventional heating and under microwave irradiation. Limonene, Limonene oxide and nine ß-amino alcohol derivatives were investigated for the effect on egg hatchability and mortality rates of newly hatched larvae of cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. At the doses between 10 μl/ml to 2.5 μl/ml all compounds were highly lethal to the larvae and at lower concentrations some of them (2, 6, 8, 9 and 10) showed activity. The effect on hatchbility of the eggs was observed in all treatments. This is the first report of carrapicide activity for Limonene, Limonene oxide and nine ß-amino alcohol derivatives against cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The leishmanicidal activity was performed and according to the results two of these compounds were more powerful against in vitro cultures of Leishmania (Vianna) braziliensis promastigote form in a range of μM. The activities observed for 3b and 3f were about 100 folds more potent than the drug standard Pentamidine, while the limonene hasn’t shown any activity in the same test. This is the first report of antileishmanial activity of Limonene β-amino alcohol derivatives.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2017-06-20T14:50:48Z No. of bitstreams: 1 2015 - Uir? do Amaral.pdf: 1011379 bytes, checksum: cf85bc1dcca1c891320f8683e0b406b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-20T14:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015 - Uir? do Amaral.pdf: 1011379 bytes, checksum: cf85bc1dcca1c891320f8683e0b406b1 (MD5) Previous issue date: 2015-12-17 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Biodiversity, one of the fundamental properties of nature, is a source of immense economic potential. Brazil holds a rich biodiversity, and is considered one of the most important mega-diverse countries on the planet. Among the various links that make up this biodiversity Brazilian native flora noteworthy. Despite this, there have been few studies that promote intelligent and rational use of this genetic resource. Domestication and breeding of native plants, including those already known and used by local or regional populations, but without penetration at the national or international market is the great opportunity offered to the countries rich in genetic resources. Medicinal and aromatic plants represent a significant part of this potential market, and the lemongrass-Brazilian species (Lippia alba) is an important example of medicinal and aromatic plant, long used in folk medicine for his duties as soothing, antispasmodic, sedative, and produce various kinds of essential oils can be used by the perfume industry, food and cleaning products, beyond the control of pests and diseases in agriculture. Thus, the objective of this study was to evaluate the genetic variability, genetic parameters and the agronomic behavior of different accesses of L. alba, coming from the metropolitan region of the State of Rio de Janeiro. The experiment was conducted in November 2011 on Medicinal Plants Sector of Agronomy Institute of Rural Federal University of Rio de Janeiro, and crops were obtained in the spring of 2013 and summer of 2014. This study was divided into three chapters: Polymorphism in clones of L. alba coming from the metropolitan area of Rio de Janeiro (Chapter I); Genetic variation for morphological characters in clones of A. alba (Chapter II) and seasonality effect in producing chemotypes of L. alba (Chapter III). In Chapter I the accessions were grouped into dendrogram, five groups being formed and the group I met two similar access (UFRRJLA 17 and UFRRJLA 18). In Chapter II it was shown that the characters analyzed showed variability according to the season (spring or summer) confirming the strong influence of the environment on quantitative variables. The total dry matter and yield were higher in access UFRRJLA05 with citral chemotype, which showed the highest average values in the two seasons in which the data were evaluated. As for the essential oil yield and productivity stood out access UFRRJLA03 with limonene-carvone chemotype, both in spring and in summer. / A biodiversidade, uma das propriedades fundamentais da natureza, ? fonte de imenso potencial de uso econ?mico. O Brasil ? detentor de uma rica biodiversidade, e ? considerado um dos pa?ses megadiversos mais importantes do planeta. Dentre os v?rios elos que comp?e esta biodiversidade a flora nativa brasileira merece destaque. Apesar disto, poucos t?m sido os estudos que promovem a utiliza??o inteligente e racional destes recursos gen?ticos. A domestica??o e o melhoramento de plantas nativas, incluindo aquelas j? conhecidas e utilizadas por popula??es locais ou regionais, por?m sem penetra??o no mercado nacional ou internacional, ? a grande oportunidade que se oferece aos pa?ses ricos em recursos gen?ticos. As plantas medicinais e arom?ticas representam uma parte expressiva deste mercado em potencial, sendo que a esp?cie erva-cidreira-brasileira (Lippia alba) ? um exemplo importante de planta medicinal e arom?tica, h? muito tempo utilizada pela medicina popular por suas fun??es como calmante, antiespasm?dica, sedativo, al?m de produzir v?rios tipos de ?leos essenciais podendo ser utilizada pela ind?stria de perfumes, alimentos e produtos de limpeza, al?m do controle de pragas e doen?as na agricultura. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade gen?tica e par?metros gen?ticos de acessos de L. alba e o comportamento agron?mico de diferentes clones oriundos da regi?o Metropolitana do Estado do Rio de Janeiro. O experimento foi instalado em novembro de 2011 no Setor de Plantas Medicinais do Instituto de Agronomia da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, e as colheitas foram obtidas na primavera de 2013 e no ver?o de 2014. Este estudo foi dividido em tr?s cap?tulos: Polimorfismo em clones de L. alba oriundos da regi?o Metropolitana do Rio de Janeiro (Cap?tulo I) e Par?metros gen?ticos e avalia??o agron?mica em clones de L. alba (Mill) N.E.Brown em duas esta??es no ano (Cap?tulo II). No cap?tulo I os acessos foram agrupados em dendrograma, sendo formados cinco grupos e o grupo I reuniu os dois acessos similares (UFRRJLA 17 e UFRRJLA 18). No cap?tulo II foi demonstrado que os caracteres analisadas apresentaram comportamento vari?vel conforme a esta??o do ano (primavera ou ver?o) confirmando a forte influ?ncia do ambiente sobre as vari?veis quantitativas. A mat?ria seca total e a produtividade foram maiores no clone com quimiotipo citral (UFRRJLA05), com os maiores valores m?dios nas duas esta??es do ano em que os dados foram avaliados. J? para o rendimento e produtividade de ?leo essencial destacou-se o acesso com quimiotipo limoneno-carvona (UFRRJLA03), tanto na primavera quanto no ver?o

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2017-10-04T21:38:34Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o - D?bora Marchesine. vers?o final.pdf: 1771951 bytes, checksum: 203519d3cb711fb7c54beb6fc48672cb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-04T21:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o - D?bora Marchesine. vers?o final.pdf: 1771951 bytes, checksum: 203519d3cb711fb7c54beb6fc48672cb (MD5) Previous issue date: 2017-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Aromatic plants of the genus Lippia (Verbenaceae) are widely used in traditional medicine. A number of Lippia species can be found in the Caatinga biome in Northeastern Brazil, such as Lippia bromelyana Moldenke, endemic to the state of Bahia. This study investigated the chemical composition, acute toxicity, antinociceptive and anti-inflammatory effect of the leaf essential oil of L. bromelyana (EOLB) in mice.The chemical composition of EOLB, assessed by gas chromatography with flame ionization detection (GC/FID) and gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS), detected limonene (29.90%) and piperitenone oxide (26.91%) as major compounds. Intraperitoneal administration of 300 mg/kg of EOLB caused no acute toxic effects or deaths in the mice. At doses of 75, 150 and 300 mg/kg caused no changes in their motor activity in the rotarod test, but promoted a significant antinociceptive effect on abdominal contortions in the acetic acid-induced constriction test, in both phases of the formalin test, glutamate or cinnamaldehyde-induced nociception tests and the Randall-Selitto test. In the hot plate test, EOLB (150 or 300 mg/kg) increased latency at 30, 60 and 120 min after administration; at a dose of 300 mg/kg, the action reversed by naloxone suggests participation of the opioid pathway. Moreover, EOLB (75, 150 or 300 mg/kg) significantly reduced the inflammatory effect of carrageenan in the paw edema test. Thus, these results suggest that EOLB promotes antinociceptive and anti-inflammatory activity by central and peripheral action. / Plantas arom?ticas do g?nero Lippia (Verbenaceae) s?o muito utilizadas pela medicina tradicional no tratamento de dist?rbios relacionados ao sistema respirat?rio e a problemas gastrointestinais. Algumas esp?cies de Lippia podem ser encontradas na caatinga, localizado na regi?o Nordeste do Brasil. Dentre essas esp?cies Lippia bromelyana Moldenke, ? end?mica do estado da Bahia. Este trabalho procurou investigar a composi??o qu?mica, o efeito t?xico agudo, antinociceptivo e anti-inflamat?rio do ?leo essencial das folhas de L. bromelyana (OELB) em camundongos. A composi??o qu?mica do OELB avaliada por CG/EM e CG/DIC, detectou limoneno (29,90%) e ?xido de piperitenona (26,91%) como compostos majorit?rios. A administra??o intraperitoneal do OELB na dose 300 mg/kg n?o causou efeitos t?xicos agudos nem mortes nos camundongos. Nas doses 75, 150 ou 300 mg/kg OELB n?o causou altera??es na atividade motora dos camundongos no teste do rota-rod, mas promoveu significante efeito antinociceptivo no teste de contor??es abdominais induzidas por ?cido ac?tico, em ambas as fases do teste da formalina, nos testes de nocicep??o induzida por glutamato ou cinamalde?do e no teste de Randall-Selitto. No teste da placa quente, OELB (150 ou 300 mg/kg) provocou o aumento na lat?ncia aos 30, 60 e 120 min ap?s sua administra??o; na dose 300 mg/kg a a??o do OELB revertida pela naloxona, sugere a participa??o da via opi?ide. Al?m disso, OELB (75, 150 ou 300 mg/kg) reduziu significativamente o efeito inflamat?rio da carragenina no teste de edema de pata. Esses resultados sugerem, portanto, que OELB promove a??o antinociceptiva e anti-inflamatoria por a??o central e perif?rica.

A incorporação de substâncias antimicrobianas, entre elas os óleos essenciais, em embalagens tem como objetivo minimizar a contaminação microbiana em alimentos. No entanto, essa utilização é limitada por critérios sensoriais, sendo necessário determinar a concentração mínima necessária para inibir o desenvolvimento de micro-organismos sem afetar sensorialmente as características do alimento. Assim, os objetivos dessa pesquisa foram: determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de óleos essenciais (OE) para Listeria monocytogenes (LM); avaliar do efeito da combinação de óleos essenciais para a redução da população de LM; avaliar a combinação de compostos ativos presentes em óleos essenciais para a inibição de LM, Pseudomonas spp e Salmonella spp; avaliar in vitro e in situ a eficiência antimicrobiana do filme à base de alginato incorporado de compostos ativos presentes em óleos essenciais; determinar a disponibilidade dos compostos ativos incorporados ao filme pela determinação dos compostos fenólicos totais; caracterizar o filme frente às propriedades mecânicas e propriedades de barreira, e verificar a aceitação pelo consumidor, através da análise sensorial, de fatias de salame embaladas com o filme antimicrobiano. Constatou-se que a combinação de eugenol (0,01%) e limoneno (0,04%) apresentou um maior efeito para a redução da população de LM comparado ao uso individual desses compostos, confirmando, portanto, a existência de sinergismo entre esses dois compostos. Em relação à Pseudomonas spp, o sinergismo foi constatado quando as concentrações de eugenol (0,15%) e de limoneno (0,30%) foram utilizadas, no entanto, para Salmonella spp o mesmo efeito não foi observado. Em ensaios in vitro apesar do aumento na concentração de eugenol e limoneno incorporados à matriz do filme, não houve diferença significativa para os valores de zona de inibição antimicrobiana porém, em ensaios in situ, a utilização desse filme como embalagem primária promoveu a redução de 2 log UFC/g da população de LM até o 10º dia de análise permanecendo constante até o 30º dia o que não ocorreu com a combinação de eugenol (0,15%) e limoneno (0,3%). A quantificação dos compostos fenólicos totais nas amostras mostrou que há correlação entre o teor de compostos fenólicos extraídos da amostra do filme e o comportamento de LM. As propriedades mecânicas e de barreira do filme à base de alginato não foram significativamente afetadas pelas concentrações de eugenol e limoneno avaliadas neste estudo. O sabor, o aroma e a aparência das amostras de salame foram aceitos pelos provadores mostrando que o uso do filme à base de alginato incorporado com eugenol e limoneno é viável para a aplicação como embalagem antimicrobiana para o controle de L. monocytogenes em salame fatiado. Este resultado é considerado importante, pois em alimentos com atividade de água e valores de pH adequados à multiplicação desse patógeno e armazenados sob refrigeração, a temperatura é capaz de selecionar a microbiota presente no alimento, favorecendo a multiplicação de micro-organismos psicrotróficos, como L. monocytogenes. / The incorporation of antimicrobial substances in packages aims at reducing food microbial contamination among which the phenolic compounds extract from plants have received special attention being natural and attending consumer demand. However, the use of these compounds is limited by sensory criteria and it is necessary to determine the minimum concentration required to inhibit the growth of microorganisms without affecting the sensory characteristics of the food. The aim of this research were: to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of essential oils (EO) for Listeria monocytogenes (LM); to evaluate effect of the combination of essential oils in order to reduce LM population; to evaluate the active compounds combination for the inhibition of LM, Pseudomonas spp, and Salmonella spp; to evaluate the antimicrobial efficiency in vitro and in situ of the alginate film incorporated with the active compounds; to determine the availability of the active compounds incorporated into the film for the determination of total phenolic compounds; to characterize the mechanical and barrier properties of the film, and to verify consumer acceptance of slices of salami packaged with the antimicrobial film. The combination of eugenol (0.01%) and limonene (0.04%) showed a greater effect for reducing LM population compared to the individual use of these compounds, confirming the existence of synergism between these two compounds. Regarding Pseudomonas spp, synergism was observed when the concentrations of eugenol (0.15%) and limonene (0.30%) were used, however, the same effect was not observed for Salmonella spp. In in vitro tests, despite of the increase in the concentration of limonene and eugenol incorporated in the film matrix, no significant difference for the antimicrobial inhibition zone values was observed. In in situ tests, the film containing eugenol (0.3%) and limonene (0.6%) promoted the reduction of 2 log CFU/g of LM population in sliced salami, while the combination of eugenol (0.15%) and limonene (0.3%) did not have the same effect. The quantification of the phenolic compounds in the film samples showed that there is correlation between the content of phenolic compounds extracted from the film sample and LM behavior. The mechanical properties of the barrier film and the alginate were not significantly affected by eugenol, and limonene concentrations evaluated in this study. The taste, flavor and appearance of the salami samples were accepted by the panel showing that the use of the alginate-based film incorporated with limonene and eugenol are feasible for use as antimicrobial packaging for the control of L. monocytogenes in sliced salami. This is an important result, because in food matrix with water activity and pH suitable for the pathogen growth, the storage under refrigerated condition is able to select the psycrothophic microorganisms, such as L. monocytogenes.

BERTOLINI, WAGNER L. H. M. A influência do D-limoneno como promotor de absorção do ácido 5-aminolevulínico para Terapia Fotodinâmica do câncer de pele: avaliação in vitro e in vivo da permeação e retenção cutâneas. 2009 118f. Tese (Doutorado). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. O câncer é a segunda doença principal do planeta, muito próximo de se tornar a mais incidente. Os tratamentos tradicionais do câncer, tais como cirurgia, radioterapia e quimioterapia apresentam severos efeitos colaterais ao paciente devido à citotoxicidade que podem causar às células normais, além das cancerosas. Objetivando minimizar estes efeitos indesejáveis pesquisadores de diversas áreas afins vislumbram novas técnicas, novos tipos e formas de tratamentos que apresentem um melhor perfil terapêutico; que possam agir de forma mais seletiva contra as células cancerosas, minorando os efeitos indesejáveis em relação às células saudáveis. Dentre as técnicas pesquisadas destaca-se a Terapia Fotodinâmica (TFD). Esta é uma técnica de tratamento nova e promissora. A técnica do tratamento consiste em aplicar, no tecido alvo, substâncias fotossensibilizantes, posteriormente ativadas com luz de comprimentos de onda específicos, com a finalidade de produzir destruição celular, por meio da ação de produtos citotóxicos fotoativados. Destaca-se a seletividade apresentada pela técnica, que deve ser reconhecida como uma das vantagens entre as técnicas empregadas no tratamento do câncer. O presente trabalho objetiva verificar a influência do D-limoneno como promotor de permeação do ácido 5-aminolevulínico (5-ALA) em aplicação tópica. Isto visa aumentar a permeação do 5-ALA quando aplicado topicamente. O 5-ALA é convertido a protoporfirina-IX (PpIX) pela via do ciclo Heme. Esta é um potente agente fotossensibilizador endógeno. O interesse no uso deste promotor foi aumentar a taxa de penetração do 5-ALA, possibilitando a permeação de maiores quantidades do fármaco em questão. Para isto foram realizados estudos de permeação in vitro do 5-ALA, em concentração de 1% (p/p) utilizando-se formulações (emulsões O/A) com diferentes concentrações do promotor D-limoneno (0, 5, 10, 20 e 30%), (p/p). Observou-se que o fluxo in vitro do 5-ALA através da pele de orelha de porco aumentou para todas as formulações empregadas quando comparado ao controle, sem D-limoneno, para um período de estudo de 12h. A retenção no estrato córneo e na [epiderme + derme] apresentou aumento significativo, evidenciando, assim, um efeito eficiente do D-limoneno como promotor. Experimentos in vivo foram conduzidos em camundongos objetivando a análise do efeito da formulação na produção e acúmulo de PpIX na pele. Observou-se que o D-limoneno aumentou significantemente a quantidade de PpIX extraída da pele. Os resultados in vitro e in vivo mostraram o potencial do D-limoneno como promotor de absorção cutânea para o 5-ALA para a TFD tópica do cancer de pele. / BERTOLINI, WAGNER L. H. M. D-limonene influence in the cutaneous penetration enhancer for 5-aminolevulinic acid in photodynamic therapy of skin cancer: in vitro and in vivo skin permeation and retention studies. 2009 118f. Thesis (Doctoral). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. The topical administration of 5-ALA has been distinguished on skin cancer photodynamic therapy (PDT) because of its efficiency in the treatment of tumors and the reduced phototoxic collateral effects. However, this effectiveness is limited by its low penetration in the skin. A proposal to optimize the 5-ALA penetration in the skin is the use of cutaneous penetration enhancers, which seek to alter the cutaneous barrier for many bioactive molecules. The aim of this work was the pharmaceutical development of formulations containing D-limonene as a cutaneous penetration enhancer, seeking the increase of the cutaneous penetration of 5-ALA for skin cancer PDT. The in vitro flux of 5-ALA present in 1% (w/w) from different formulations containing D-limonene (20 e 30% w/w) was significantly increased after 12 hours of experiment, in comparison with formulations without D-limonene, mainly for the formulations containing 20% and 30% of D-limonene with 1% of 5-ALA (1,45 and 2,01 times, respectively). The stratum corneum (SC) and [epidermis + dermis] without SC retention were also significantly increased, showing an enhancer effect of the promoter. In addition, in vivo experiments were accomplished in mice, with the purpose of analyzing the formulation effect on the PpIX production and accumulation in the skin. It was observed that the penetration enhancer\'s presence significantly increased the amount of PpIX extracted from the skin. Both in vitro and in vivo results showed the potentiality of the formulations containing D-limonene as a cutaneous penetration enhancer for 5-ALA delivery on the skin cancer PDT.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-30Bitstream added on 2014-06-13T20:33:01Z : No. of bitstreams: 1 rozza_al_me_botib.pdf: 637817 bytes, checksum: 8ebe24dd454c0104e96eebe3786bda97 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve como objetivos testar a atividade gastroprotetora de úlceras gástricas e mecanismos de ação do óleo essencial de Croton cajucara (CC), do óleo essencial de Citrus lemon (CL) e dos constituintes majoritários de CL, que são o Limoneno (L) e o β- pineno (P). Assim, foram realizados modelos de indução de úlcera gástrica por etanol absoluto para CL, L, P e CC e por droga anti-inflamatória não esteroidal (Indometacina) para CL, L e P. Todos os resultados foram expressos em média  epm (p<0.05). No modelo de indução de úlceras por etanol absoluto, a área das lesões (mm2) foi 0.00  0.00** para CL, L e CC (100% de gastroproteção), 73.20  27.32 para P, que não exerceu efetiva gastroproteção (53.26%), 22.27  8.21** para o controle positivo (85.80%) e 156.60  36.30 para o veículo. O escore microscópico indicou excelente preservação da mucosa por CL**, L*** e CC***. A área de marcação imunoistoquímica para heat shock protein 70 foi estatisticamente maior nos grupos CL, L, P e CC e para peptídeo intestinal vasoativo foi maior nos grupos CL, L e P. Os níveis de glutationa (GSH, em μg/ml) foram 1182.00  52.47** para CL, 1316.6  67.75** para L, 1286.5  93.15* para CC, 1195.60  37.57** para o controle positivo, 982.8  79.07** para o veículo e 1704.30 ± 149.03 para o grupo branco. Na indução de úlcera por Indometacina, CL exerceu gastroproteção de 98.3% com área de lesão (mm2) 0.85 ± 0.85**, L exerceu gastroproteção de 50.1% (área lesada 24.34 ± 5.3**), P não exerceu efetivo efeito gastroprotetor (37%) com área lesada 30.66 ± 4.22, contra 66.6% de gastroproteção e 16.27 ± 4.49** para o controle positivo e 48.72 ± 6.64 de área lesada para o veículo. CL administrado isoladamente manteve os níveis gástricos de PGE2 (em ng/ml) em 18,25 ± 2,58, mesmo com a administração em conjunto com... / This study aimed to test the gastroprotective activity and the mechanism of action of the essential oil of Croton cajucara (CC), the essential oil of Citrus lemon (CL) and the majoritary substances present in CL, wich are Limonene (L) and β-pinene (P). Then, gastric ulcers in rats were induced by absolute ethanol after oral treatment with CL, L, P and CC and by indometacin (non-steroidal anti-inflamatory drug) after oral treatment with CL, L and P. All results were expressed in mean  standard error mean (p<0.05). In ethanol-induced gastric ulcer, the ulcer area (mm²) were 0.00  0.00** for CL, L and CC (100% of gastroprotection), 73.20  27.32 for P (53.26% of the ulcer area was reduced, however there was no effective gastroprotection), 22.27  8.21** for the positive control (85.80%) and 165.60  36.30 for the vehicle. The microscopic score showed gastric mucosa was preserved in CL**, L*** and CC***. The marked area for heat shock protein 70 (HSP-70) and vasoactive intestinal peptide (VIP) immunohistochemistries were statistically augmented in CL, L and P groups. The levels of glutathione (GSH, μg/ml) were 1182.00  52.47** for CL, 1316.6  67.75** for L, 1286.5  93.15* for CC, 1195.60  37.57** for the positive control, 982.8  79.07** for the vehicle and 1704.30 ± 149.03 for the sham group. In the indomethacin-induced gastric ulcer, CL offered 98.3% gastroprotection (ulcer area 0.85 ± 0.85**), L offered 50.1% gastroprotection (ulcer area 24.34 ± 5.3**), P did not show gastroprotective effect (37%) and presented ulcer area 30.66 ± 4.22. The positive control offered 66.6% gastroprotection (ulcer area 16.27 ± 4.49**) and the vehicle presented ulcer area 48.72 ± 6.64. CL was able to maintain the PGE2 levels (ng/ml) 18.25 ± 2.58 near to sham group (21.14 ± 1.14), even with indomethacin (PGE2 inhibitor) administration (17.89 ± 1.55), compared with ... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: O presente trabalho teve como objetivos testar a atividade gastroprotetora de úlceras gástricas e mecanismos de ação do óleo essencial de Croton cajucara (CC), do óleo essencial de Citrus lemon (CL) e dos constituintes majoritários de CL, que são o Limoneno (L) e o β- pineno (P). Assim, foram realizados modelos de indução de úlcera gástrica por etanol absoluto para CL, L, P e CC e por droga anti-inflamatória não esteroidal (Indometacina) para CL, L e P. Todos os resultados foram expressos em média  epm (p<0.05). No modelo de indução de úlceras por etanol absoluto, a área das lesões (mm2) foi 0.00  0.00** para CL, L e CC (100% de gastroproteção), 73.20  27.32 para P, que não exerceu efetiva gastroproteção (53.26%), 22.27  8.21** para o controle positivo (85.80%) e 156.60  36.30 para o veículo. O escore microscópico indicou excelente preservação da mucosa por CL**, L*** e CC***. A área de marcação imunoistoquímica para heat shock protein 70 foi estatisticamente maior nos grupos CL, L, P e CC e para peptídeo intestinal vasoativo foi maior nos grupos CL, L e P. Os níveis de glutationa (GSH, em μg/ml) foram 1182.00  52.47** para CL, 1316.6  67.75** para L, 1286.5  93.15* para CC, 1195.60  37.57** para o controle positivo, 982.8  79.07** para o veículo e 1704.30 ± 149.03 para o grupo branco. Na indução de úlcera por Indometacina, CL exerceu gastroproteção de 98.3% com área de lesão (mm2) 0.85 ± 0.85**, L exerceu gastroproteção de 50.1% (área lesada 24.34 ± 5.3**), P não exerceu efetivo efeito gastroprotetor (37%) com área lesada 30.66 ± 4.22, contra 66.6% de gastroproteção e 16.27 ± 4.49** para o controle positivo e 48.72 ± 6.64 de área lesada para o veículo. CL administrado isoladamente manteve os níveis gástricos de PGE2 (em ng/ml) em 18,25 ± 2,58, mesmo com a administração em conjunto com ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to test the gastroprotective activity and the mechanism of action of the essential oil of Croton cajucara (CC), the essential oil of Citrus lemon (CL) and the majoritary substances present in CL, wich are Limonene (L) and β-pinene (P). Then, gastric ulcers in rats were induced by absolute ethanol after oral treatment with CL, L, P and CC and by indometacin (non-steroidal anti-inflamatory drug) after oral treatment with CL, L and P. All results were expressed in mean  standard error mean (p<0.05). In ethanol-induced gastric ulcer, the ulcer area (mm²) were 0.00  0.00** for CL, L and CC (100% of gastroprotection), 73.20  27.32 for P (53.26% of the ulcer area was reduced, however there was no effective gastroprotection), 22.27  8.21** for the positive control (85.80%) and 165.60  36.30 for the vehicle. The microscopic score showed gastric mucosa was preserved in CL**, L*** and CC***. The marked area for heat shock protein 70 (HSP-70) and vasoactive intestinal peptide (VIP) immunohistochemistries were statistically augmented in CL, L and P groups. The levels of glutathione (GSH, μg/ml) were 1182.00  52.47** for CL, 1316.6  67.75** for L, 1286.5  93.15* for CC, 1195.60  37.57** for the positive control, 982.8  79.07** for the vehicle and 1704.30 ± 149.03 for the sham group. In the indomethacin-induced gastric ulcer, CL offered 98.3% gastroprotection (ulcer area 0.85 ± 0.85**), L offered 50.1% gastroprotection (ulcer area 24.34 ± 5.3**), P did not show gastroprotective effect (37%) and presented ulcer area 30.66 ± 4.22. The positive control offered 66.6% gastroprotection (ulcer area 16.27 ± 4.49**) and the vehicle presented ulcer area 48.72 ± 6.64. CL was able to maintain the PGE2 levels (ng/ml) 18.25 ± 2.58 near to sham group (21.14 ± 1.14), even with indomethacin (PGE2 inhibitor) administration (17.89 ± 1.55), compared with ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Cláudia Helena Pellizon / Coorientador: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Banca: Maria de Lourdes Mendes Vicentini Paulino / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Mestre

This study involved the isolation, characterization, quantification and evaluation of the enantiomeric purity of linalool in the essential oil of aromatic species Lippia alba (Mill.) NE Brown (chemotype linalol-1,8-cineole), Ocimum basilicum L., Pelargonium graveolens L'Herit, Cinnamomum camphora Nees and Eberm var. linaloolifera Fujita, Aniba rosaeodora Ducke and Coriandrum sativum L., and carvone and limonene in the essential of Lippia alba (chemotype carvone-limonene). The quantification of monoterpenes was performed by GC-FID method for the internal standard. The analytical curves for quantification were linear in the range 1.0 to 10.0 mg mL-1 and showed appropriate values of correlation coefficients (0.996 to 0.999). The linalool was found with 91.38% (w/w) in essential oil of A. rosaeodora, 84.00% in C. camphora, 79.25% in L. alba, 79.00% in C. sativum, 73.33% in O. basilicum and 13.60% in P. graveolens. The carvone showed 58.13% and limonene showed 31.71% (w/w) of essential oil of L. alba. The enantiomeric purity analysis performed by GC-FID, using a column with enantioselective phase (β-cyclodextrin) and co-injection with commercial patterns, revealed the presence of the enantiomer (S)-(+)-linalool in L. alba and (R)-(-)-linalool in O. basilicum and C. camphora. The two enantiomeric forms of linalool were found in the P. graveolens, A. rosaeodora and C. sativum species. In the L. alba species (chemotype carvone-limonene) was observed a single enantiomeric form (R)-(-)-carvone and limonene showed the enantiomeric forms (S)-(-)-limonene and (R)-(+)-limonene, with predominance of the latter. The linalool was isolated from the essential oil of L. alba by TLC and subjected to analysis of GC-MS, GC-FID, 1H and 13C NMR and [α]D, which elucidated its structure and stereochemistry. The (S)-(+)-linalool isolated from L. alba (> 99%) was used to obtain the analytical curve. This isolation was necessary due to unavailability of acquire the (S)-(+)-linalool commercially pure. / Este estudo envolveu isolamento, caracterização, quantificação e avaliação da pureza enantiomérica do linalol nos óleos essenciais das espécies aromáticas Lippia alba (Mill.) N. E. Brown (quimiotipo linalol-1,8-cineol), Ocimum basilicum L, Pelargonium graveolens L Herit, Cinnamomum camphora Nees e Eberm var. linaloolifera Fujita, Aniba rosaeodora Ducke e Coriandrum sativum L. e da carvona e do limoneno no óleo essencial de Lippia alba (Mill.) N. E. Brown (quimiotipo carvona-limoneno). A quantificação dos monoterpenos foi realizada por CG-DIC pelo método do padrão interno. As curvas analíticas para a quantificação foram lineares no intervalo de 1,0 a 10,0 mg mL-1 e apresentaram valores adequados de coeficientes de correlação (0,996 a 0,999). O linalol foi encontrado com 91,38% (m/m) no óleo essencial de A. rosaeodora, 84,00% em C. camphora, 79,25% em L. alba, 79,00% em C. sativum, 73,33% em O. basilicum e 13,60% em P. graveolens. A carvona apresentou 58,13% e o limoneno 31,71% (m/m) no óleo essencial de L. alba (quimiotipo carvona-limoneno). As análises de purezas enantioméricas realizadas por CG-DIC, utilizando uma coluna com fase enantiosseletiva (β-ciclodextrina) e a co-injeção com padrões comerciais, revelaram a presença do enantiômero (S)-(+)-linalol em L. alba e do (R)-(-)-linalol em O. basilicum e em C. camphora. As duas formas enantioméricas do linalol foram encontradas nas espécies P. graveolens, A. rosaeodora e C. sativum. Na espécie L. alba (quimiotipo carvona-limoneno) foi observada uma única forma enantiomérica (R)-(-)-carvona e o limoneno apresentou as formas enantioméricas (S)-(-)-limoneno e (R)-(+)-limoneno com predominância desta última. O linalol foi isolado do óleo essencial de L. alba por CCD e submetido à análise por CG-EM, CG-DIC, RMN de 1H e 13C e [α]D, as quais elucidaram sua estrutura e estereoquímica. O (S)-(+)-linalol isolado de L. alba (> 99%) foi utilizado na obtenção da curva analítica. Esse isolamento foi necessário devido à indisponibilidade em adquirir o (S)-(+)-linalol comercialmente puro.

Fundação de Apoio a Pesquisa e à Inovação Tecnológica do Estado de Sergipe - FAPITEC/SE / Limonene (LIM) is a monocyclic monoterpene, and one of the main constituents of several essential oils of citric fruits such as orange, tangerine and lemon. Among the essential oils found in citric fruits in general, R-(+)-limonene is the majoritarian component, which can reach concentrations from 90 to 96%. Cyclodextrins (CDs) are cyclic oligosaccharides, most commonly found with six, seven or eight glucose units, known respectively as α-CD, β-CD and γ-CD. They are obtained through the action of the enzyme cyclomaltodextrin glucanotransferase (CGTase) on starch. The CDs are able to form inclusion complexes, altering the physical and chemical properties of the complexed compounds. The objective with this work was to prepare and characterize physical-chemically inclusion complexes of limonene in α-and β-cyclodextrin, studying the properties of the supposed complex formed. Such complex was prepared by means of physical mixture, malaxage and co-evaporation, and was characterized through thermal analysis (differential scanning calorimetry– DSC – and thermogravimetry/derivative thermogravimetry – TG/DTG); gas chromatography coupled to a mass spectrometry -GC/MS; X-ray diffraction – DRX; Fourier infrared transform – FTIR – absorption spectrophotometry; electronic scanning microscopy – ESM;molecular modeling (Docking)and kinetic study of first-phase mass loss. From the results obtained through the analyses, it was possible to point out that both the α-CD and the β-CD formed inclusion complexes with limonene. However, in the DSC curves of the α-CD, which correspond to the methods of MA and CE, it was possible to observe a profile that is different from that observed for pure α-CD and MF. In the DSC curves for β-CD, we observed that the CE presented an endothermic profile that was more significant than were the MF and MA methods. According to the TG/DTGanalyses for α-CD, we can observe that the thermoanalytical profile of the complexes obtained through the MF, MA and CE methods were similar to that of -CD. The TG/DTG curves of limoneneshow mass loss around 100% in the interval of 30-169°C. The TG/DTG curve of α-CD showed two phases of mass loss (between 25 and 120°C) that add up to 10.7% of mass loss followed by decomposition and elimination of carbonaceous material. The TG/DTG curves of β-CD, MF, MA and CE presented a thermoanalytical profile that was similar to the complexes obtained with α-CD. After the evaluation of the mass losses shown on Table 2, we can see figures around 8% for MA and CE in the temperature range between 120 and 270º C, what is an indicator of the higher capacity of limonene complexation. In the results of CG/EM for α-CD, it was possible to observe that MA encapsulated limonene in a ratio of 1:0.49 (limonene: α-CD), but in a ratio that was lower to CE 1:18.11 (limonene: α-CD). Thus, it is shown that CE was the best method, and also that β-CD did not show any complexation in MF and MA. CE showed complexation efficiency of 1:1.44, being considered as the best method for complexation when compared to CE of α-CD. The standard of X-ray diffraction of MF was shown to be quite similar to those found for pure α-CD and β-CD. That is an indicator of low efficiency of complexation. By observing the reflections of MA and CE, we can verify the onset of new peaks and the absence of characteristic peaks of pure α-CD and β-CD. In the analysis of the FTIR spectra corresponding to the inclusion complexes obtained through the methods of MF, MA and CE, it was possible to observe a profile that was quite similar among all the samples. They resemble the spectrum ofpure α-CD and β-CD due to the fact that the complexes have been prepared in a molar ratio of 1:1 (limonene 136.24 g/mol andα-CD 972 g/mol). MEV was performed to evaluate the changes in the crystalline characteristics on the surfaces of pure α-CD and β-CD and after the formation of the inclusion complex, where the results corroborate other findings of the characterization tests. In the molecular modeling (docking), the theoretical results showed more stability in the ligations between α-CD/LIM (-4.49 kcal/mol) than what was observed between β-CD/LIM (-4.04 kcal/mol), once that a lesser expenditure of energy was necessary between α-CD/LIM in relation tothat between β-CD/LIM. The kinetic study of the first phase of decomposition was introduced in this work in order to observe the thermal behavior of the pure α-CD and β-CD, as well as of the complexes obtained in the warming ratios of 2.5-5.0-10 and 15 ºC.min-1, under nitrogen dynamic atmosphere (100 mL. min-1). / O limoneno (LIM) é um monoterpeno monocíclico, sendo um dos principais constituintes de vários óleos essenciais de frutas cítricas, como laranja, tangerina e limão. Dentre os óleos essenciais encontrados nos cítricos em geral, o R-(+)-limoneno é seu componente majoritário, podendo atingir concentrações de 90 a 96%. As ciclodextrinas (CDs) são oligossacarídeos cíclicos, mais comumente encontradas com seis, sete ou oito unidades de glicose, denominadas respectivamente de α-CD, β-CD e γ-CD. São obtidas pela ação da enzima ciclomaltodextrina glucanotransferase (CGTase) sobre o amido. As CDs são capazes de formar complexos de inclusão, alterando as propriedades físicas e químicas dos compostos complexados. O objetivo com este trabalho foi preparar e caracterizar físico-químicamente complexos de inclusão de limoneno em α e β-ciclodextrina, estudando as propriedades do suposto complexo formado. Tal complexo foi preparado por meio das técnicas de mistura física, malaxagem e co-evaporação, e foi caracterizado por análise térmica (calorimetria exploratória diferencial-DSC e termogravimetria/termogravimetria derivada-TG/DTG); cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas-CG/EM; difração de raios X-DRX; espectrofotometria de absorção na região do infravermelho com transformada de Fourier-FTIR; microscopia eletrônica de varredura-MEV, modelagem molecular (Docking) e estudo cinético de primeira etapa de perda de massa. Por meio dos resultados obtidos pelas análises foi possível evidenciar que tanto a α-CD quanto a β-CD formaram complexos de inclusão com o limoneno. No entanto, nas curvas DSC da α-CD que correspondem aos métodos de MA e CE foi possível observar um perfil diferente daquele observado para α-CD pura e MF. Nas curvas DSC para β-CD, observou-se que para o método CE apresentou perfil endotérmico mais significativo do que os métodos de MF e MA. De acordo com as análises TG/DTG para α-CD pode-se observar que o perfil termoanalítico dos complexos obtidos pelo método da MF, MA e CE foram semelhantes a -CD. As curvas TG/DTG do limoneno mostra perda de massa em torno de 100% no intervalo de 30-169°C. A curva TG/DTG da α-CD mostrou duas etapas de perdas de massa (entre 25-120°C) somam 10,7% de perda de massa seguidas de decomposição e eliminação do material carbonáceo. Nas curvas TG/DTG da β-CD, MF, MA e CE que apresentaram um perfil termoanalítico similar aos complexos obtidos com a α-CD. Após a avaliação das perdas de massa mostradas na Tabela 2 pode-se verficar valores em torno de 8% para o MA e CE na faixa de temperatura entre 120 e 270º C, o que é um indicativo da maior capacidade de complexação do limoneno. Nos resultados para o CG/EM para α-CD foi possível observar que o MA encapsulou o limoneno em uma razão de 1:0,49 (limoneno: α-CD), mas em uma razão inferior ao CE 1:18,11 (limoneno: α-CD). Mostrando desta forma que a CE foi o melhor método, e para β-CD pode-se observar que não exibiu nenhuma complexação na MF e MA. Já a CE mostrou uma eficiência de complexação igual a 1:1,44, sendo assim considerado o melhor método de complexação quando comparado com o CE da α-CD. No padrão de difração de raios X da MF mostrou ser bastante similar aos encontrados da para a α-CD e β-CD puras. Esse é um indicativo da baixa eficiência de complexação. Ao observar as reflexões da MA e CE, pode-se verificar o surgimento de novos picos e a ausência de picos característicos da α-CD e β-CD puras. Na análise dos espectros no FTIR correspondentes aos complexos de inclusão obtidos pelos métodos da MF, MA e CE foi possível observar um perfil muito semelhante entre todas as amostras. Elas se assemelham a espectro da α-CD e β-CD puras devido aos complexos terem sido preparados em razão molar 1:1 (limoneno 136,24 g/mol e α-CD 972 g/mol). A MEV foi realizada para avaliar as mudanças nas características cristalinas na superfície das α-CD e β-CD puras e após a formação do complexo de inclusão, onde os resultados corroboram com os outros achados dos testes de caracterização. Na modelagem molecular (docking), os resultados teóricos mostraram estabilidade nas ligações entre α-CD/LIM (-4,49 kcal/mol) do que os observados entre β-CD/LIM (-4,04 kcal/mol), pois foi necessário menor gasto de energia entre α-CD/LIM do que entre β-CD/LIM. O estudo cinético da primeira etapa de decomposição foi introduzido neste trabalho para observar o comportamento térmico das α-CD e β-CD puras e dos complexos obtidos nas razões de aquecimento de 2,5-5,0-10 e 15 ºC.min-1, sob atmosfera dinâmica de nitrogênio (100 mL. min-1).