Made available in DSpace on 2015-12-06T23:48:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Na ausência de estímulo antigênico, células B-1 são importantes produtoras de anticorpos naturais em camundongos e humanos e são consideradas como a primeira linha de defesa contra patógenos. Por causa disso, o papel dessas células em respostas imunes mediadas por células T é comumente negligenciado. No entanto recentemente foram descritas participações de células B-1 nas hipersensibilidades tardia e imediata. O presente trabalho verificou o papel de células B-1 na rejeição aguda de aloenxertos no camundongo, um processo orquestrado por células T. Para tal, foram transplantados coração e pele alogênicos para camundongos selvagens e camundongos deficientes em células B-1. A cinética de rejeição, as células infiltrantes no enxerto e a migração de células B-1 foram analisadas. Foi observado um atraso na cinética de rejeição do camundongo deficiente em células B-1, quando comparado com o camundongo selvagem. A transferência adotiva de células B-1 eliminou tal atraso. A sobrevida estendida do enxerto foi concomitante com menos células T CD8+ e mais mastócitos infiltrantes no enxerto. Células B-1 foram encontradas infiltrando o enxerto poucos dias após os transplantes. Os resultados deste trabalho mostram que há uma participação de células B-1 na rejeição aguda de aloenxertos e colaboram para o entendimento da biologia dessas células. / B-1 B cells are important producers of natural antibodies in mice and humans and, therefore, are considered as the first line of defense against pathogens. Because of that, their role in T-cell mediated immune responses is commonly underrated. However, recent studies have described the participation of B-1 cells in immediate and delayed-type hypersensitivity. The present work assessed the role of B-1 cells in the rejection of allografts in mice, an immune reaction mainly orchestrated by T cells. We have transplanted allogeneic skin and heart to wild-type and B-1 cell-deficient mice, and followed rejection kinetics. Skin graft-infiltrating cells were analyzed by flow cytometry. We observed a delay in rejection kinetics of B-1 cell-deficient mice when compared to wild-type mice. Adoptive transfer of B-1 cells into B-1 cell-deficient mice abrogated this delay. The longer survival observed in the absence of B-1 cells correlated with less CD8+ T cells infiltrating the grafts, as well as with more mast cells. Collectively, our results show the participation of B-1 cells in the allograft rejection process in mice, thus collaborating to the understanding of B- 1 cell biology. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-04-15T12:58:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 jesuito_dantas_ioc_mest_2015.pdf: 8011040 bytes, checksum: c494775b2a194ca3921d445d202df24a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os pacientes infectados pelo vírus HIV apresentam alta frequência de dermatoses, sendo essas a primeira (sinal precoce) e, às vezes, a única manifestação do estágio da doença. Para tanto, torna-se imprescindível conhecer a distribuição dessas doenças cutâneas nos pacientes acometidos pelo HIV/AIDS no Instituto de Doenças Tropicais Natan Portella \2013 IDTNP, considerado hospital de referência para o tratamento do HIV no Estado do Piauí. O objetivo deste trabalho foi, portanto, identificar as dermatoses que afetam os pacientes com HIV/AIDS no IDTNP, segundo o grau de imunossupressão por eles apresentado, e correlacioná-las com variáveis clínicas e epidemiológicas. O estudo foi descritivo do tipo relato de série de casos. Foram analisados 151 pacientes com HIV/AIDS, atendidos no IDTNP no período de janeiro a abril de 2015. As doenças cutâneas foram caracterizadas, do ponto de vista clínico-epidemiológico, em sete grupos: I) fúngicas; II) virais; III) bacterianas; IV) por protozoários; V) por artrópodes; VI) neoplasias cutâneas; e VII) miscelânea, assim entendidas aquelas não enquadradas nas categorias anteriores. Para o diagnóstico das dermatoses, foram utilizados exames clínicos e laboratoriais, dos quais se podem destacar: micológico direto, cultura de bactérias e fungos, estudo anatomopatológico, contagem de linfócitos CD4, carga viral etc. Constatou-se que, entre os pacientes, a maioria eram homens (n=110 72,8%). A média de idade dos homens (40,9 ± 11,9 anos) foi ligeiramente inferior à das mulheres (41,4 ± 10,2 anos). Entre os homens, 31% declararam manter relações sexuais com homens. O grau de instrução predominante foi o Ensino Fundamental. Cerca de um quarto dos pacientes atendidos não residia no Piauí Entre estes, predominaram pacientes do estado do Maranhão (22,5%) e, entre os municípios, da cidade de Teresina/PI (58,3%). Foram frequentes os estágios avançados da infecção pelo HIV. As médias de contagem de linfócitos CD4 foram 272,6 ± 271,1 entre os homens e 338,9 ± 351 entre as mulheres. De acordo com a categoria etiológica, 93 (61,6%) tinham afecções do grupo miscelânea, 50 (33,1%) tinham infecções cutâneas de etiologia fúngica, 40 (26,4%) tinham infecções bacterianas, 35 (23,2%) apresentavam dermatoses virais, 16 (10,6%) dos pacientes tinham dermatoses neoplásicas, 5 (3,3%) tinham doenças causadas por artrópodes e 4 (2,6%) doenças causadas por protozoários. As dermatoses prevalentes nos pacientes observados foram prurigo do HIV com 35 pacientes acometidos, seguida de onicomicose (n=28), dermatite seborréica (n=18), hanseníase (n=17), herpes simples (n=14), candidose oral (n=12) e farmacodermia (n=10). Os grupos de dermatoses neoplásicas e virais foram mais comumente vistos em casos avançados de imunossupressão. Esta tendência não foi observada em pacientes com dermatoses bacterianas ou fúngicas. Observaram-se médias de contagem de CD4 inferiores e cargas virais superiores no grupo de pacientes com sarcoma de Kaposi e prurigo do HIV quando comparados com os pacientes com sífilis e hanseníase A candidose oral foi a patologia isolada que mais suscitou o médico a pedir o teste diagnóstico de infecção pelo HIV nos pacientes que ainda desconheciam seu estado sorológico e o sarcoma de Kaposi a patologia que mostrou maior correlação inversa entre número de linfócitos CD4 e superfície corpórea atingida. Percebeu-se uma média de número de dermatoses por pacientes superior nos pacientes com contagem de linfócitos CD4 inferior. Pretendeu-se com este estudo contribuir para o conhecimento sobre as doenças cutâneas encontradas nos pacientes com HIV/AIDS e propor uma melhor atenção a esses pacientes, por meio sobretudo de uma visão holística/interdisciplinar da doença / Abstract: Patients infected with HIV often have skin diseases such as dermathosis, this being the first (early sign) and sometimes the only manifestation of the disease. To this end, it is essential to know the distribution of these skin diseases in patients affected by HIV / AIDS at the Instituto de Doenças Tropicais Natan Portella - IDTNP, considered a reference whe it comes to hospitals for the treatment of HIV in the state of Piaui, Brazil. The objective of this study was therefore to identify the skin diseases that affect patients with HIV / AIDS in IDTNP according to the degree of immunosuppression they presented, and correlate them with clinical and epidemiological variables. The study was descriptive of the kind reported case series. This study analyzed 151 patients with HIV / AIDS who were attended at IDTNP from January to April 2015. Skin diseases have been characterized, from a clinical and epidemiological point of view, into seven groups: I) yeast; II) virus; III) bacterial; IV) by protozoa; V) by arthropods; VI) skin cancer; and VII) miscellany, understood those not falling into the above categories. For the diagnosis of skin diseases, they used clinical and laboratory tests, of which the following stand out: mycological, culture of bacteria and fungi, pathological studies, CD4 count, viral load, etc. It was found that, among patients, most were men (n = 110 72.8%). The average age of men (40.9 ± 11.9 years) was slightly lower than that of women (41.4 ± 10.2 years). Among men, 31% reported having sex with men. The predominant degree of education was elementary school. About a quarter of the patients seen were not resident in Piauí. Among these, the predominant patients were from the State of Maranhão (22.5%) and among the municipalities, the city of Teresina / PI (58.3%) It was quite frequente cases of advanced stages of HIV infection. The average CD4 count was 272.6 ± 271.1 for men and 338.9 ± 351 among women. According to etiological category 93 (61.6%) were miscellaneous group of diseases, 50 (33.1%) had skin infections fungal etiology, 40 (26.4%) had bacterial infections, 35 (23.2 %) had viral dermatoses, 16 (10.6%) patients who had neoplastic dermatoses 5 (3.3%), diseases caused by arthropod and 4 (2.6%) protozoal diseases. The prevalent dermatoses in patients observed were prurigo HIV with 35 patients affected, followed by onychomycosis (n = 28), seborrheic dermatitis (n = 18), leprosy (n = 17), herpes simplex (n = 14), oral candidiasis (n = 12) and adverse drug (n = 10). The groups of neoplastic and viral dermatoses are commonly seen in advanced cases of immunosuppression. This trend was observed in patients with bacterial or fungal skin diseases They observed mean CD4 count and viral load higher in patients with Kaposi's sarcoma and prurigo HIV compared with patients with syphilis and leprosy. Oral candidiasis was isolated pathology that most provoked the doctor to ask for the diagnosis of HIV infection in the patients still unaware of their HIV status and Kaposi's sarcoma pathology which showed higher inverse correlation between the number of CD4 lymphocytes and affected body surface. It was realized an average number of dermatoses per patient higher in patients with lower CD4 lymphocyte count. It was intended with this study contribute to knowledge about skin diseases found in patients with HIV / AIDS and offer better care to these patients, especially through a holistic / interdisciplinary view of the disease

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:55:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 larissa_fontes_ioc_mest_2016.pdf: 4617034 bytes, checksum: eee0cf93cb18ec86d4b978b114c27212 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS \2013 \201CWiskott-Aldrich Syndrome\201D) é uma imunodeficiência primária associada a infecções recorrentes e ao desenvolvimento de doenças autoimunes e linfomas. Essa imunodeficiência se desenvolve em consequência de mutações no gene que codifica a proteína WASP (\201CWAS Protein\201D), expressa em células hematopoiéticas, e com funções reguladoras sobre os rearranjos do citoesqueleto de actina e na ativação de linfócitos T. Nesse sentido, camundongos deficientes em Wasp (Wasp \201Cknockout\201D \2013 WKO) apresentam desregulação de processos centrais para a resposta imunológica, resultando em migração leucocitária aberrante, proliferação linfocitária deficiente, e disfunção de células T reguladoras (Treg). De forma interessante, foi demonstrado que as células Treg, definidas pelo fenótipo CD4+CD25+Foxp3+ e com função imunossupressora, já se encontram em menor número no timo desses animais. Esse dado sugere que a deficiência em Wasp resulta em defeito na geração intratímica de células Treg. Nesse contexto, é importante salientar que a migração do timócito através do microambiente tímico é crucial para a formação das células T e, particularmente, a matriz extracelular exerce uma função determinante para os eventos de adesão e de-adesão da célula migrante. Assim, podemos postular que a matriz extracelular medeia interações cruciais para as células Treg tímicas (tTreg), fornecendo e facilitando o acesso aos diferentes sinais celulares durante o processo de maturação dessas células Nesse projeto, decidimos estudar a participação de ligantes e receptores da matriz extracelular na maturação de células tTreg e o possível envolvimento dessas moléculas na deficiência numérica de células tTreg em camundongos WKO. Foi observada uma diminuição da rede de fibronectina na região medular do timo dos animais WKO em relação ao controle. Além disso, observamos uma redução de células tTreg expressando VLA-4 e VLA-5 nos animais WKO em relação ao controle. As análises de proliferação, ativação e morte demonstraram que as células Treg de animais WKO apresentam alterações em relação às células precursoras (CD4+CD8-CD25+Foxp3-). De forma interessante, as análises de adesão em fibronectina demonstraram que as células Treg dos animais WKO apresentam menos filopódios que as células Treg do controle, e que essa diminuição é proeminente comparando-se às células T CD4 SP. Esses resultados sugerem que a fibronectina tenha importância na diferenciação das células tTreg / Abstract: The Wiskott-Aldrich syndrome (WAS) is a primary immunodeficiency associated with recurrent infection and development of autoimmune diseases and lymphomas. This immune deficiency develops as a result of mutations in the gene encoding the WASP protein ("WAS protein"), expressed in hematopoietic cells, and with regulatory functions on the actin cytoskeleton rearrangements and activation of T lymphocytes. Accordingly, mice deficient in Wasp (Wasp "knockout" - WKO) present disruption in central processes to the immune response, resulting in aberrant leukocyte migration, impaired lymphocyte proliferation and dysfunction of regulatory T cells (Treg). Interestingly, it was shown that Treg cells defined by the CD4+CD25+Foxp3+ phenotype and immunosuppressive function, already decreased in the thymus of the animals. This suggests that the Wasp deficiency results in defective intrathymic generation of Treg cells. In this context, it is important to note that the migration of the thymocyte through the thymic microenvironment is crucial for the formation of T cells and, particularly, the extracellular matrix has a decisive role in the events of adhesion and de-adhesion of migrant cell Thus, we postulated that the extracellular matrix mediates interactions crucial for thymic Treg cells (tTreg) by providing and facilitating access to different cellular signals during the maturation process of these cells. In this project, we decided to study the role of ligands and receptors of extracellular matrix in the maturation of tTreg cells and the possible involvement of these molecules in numerical deficiency tTreg WKO cells in mice. We observed a decrease in fibronectin network in the medulla of the thymus of WKO animals compared to the control. In addition, a decrease in cells expressing VLA-4 and VLA-5 in WKO animals compared to the control. The analysis of proliferation, activation, and death demonstrated that Treg cells animals in WKO showed changes from precursor cells (CD4+CD8-CD25+Foxp3-). Interestingly, adhesion on fibronectin showed that Treg cells from WKO animals present less filopodia compared to control Treg cells and that this is a marked decrease as compared to the CD4 SP cells. These results suggest an important role for fibronectin in the differentiation of Treg cells

Submitted by Angelo Silva (asilva@icict.fiocruz.br) on 2016-07-20T13:42:38Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 71854.pdf: 3870328 bytes, checksum: e6d51ee1222bd1369079ed339e270c1b (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-08-24T19:10:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 71854.pdf: 3870328 bytes, checksum: e6d51ee1222bd1369079ed339e270c1b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T19:10:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71854.pdf: 3870328 bytes, checksum: e6d51ee1222bd1369079ed339e270c1b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A infecção pelo HIV se caracteriza pela existência de um período de latência clínica (ou período assintomático) entre a infecção aguda e a fase de AIDS, cuja duração é extremamente variável, gerando distintos perfis de progressão entre os indivíduos infectados pelo HIV. Uma pequena fração de indivíduos infectados (5-10%), denominados não progressores de longo termo (LTNP), permanece clinicamente assintomática e com altos valores de TCD4+ (>500 cells/\F06Dl) durante mais de 8 anos de infecção na ausência de tratamento. Alguns desses indivíduos conseguem ainda bloquear quase totalmente a replicação e a evolução viral, gerando uma verdadeira latência evolutiva. O objetivo do presente estudo foi analisar o perfil mutacional do HIV-1 e a dinâmica de emergência e manutenção de mutantes virais de escape da resposta imune em pacientes HIV-1 positivos classificados como LTNPs com diferentes níveis de controle da replicação viral. Para tal, utilizou-se uma casuística de 12 indivíduos LTNPs, classificados como controladores virêmicos (VC) e controladores de elite com (ECB) e sem Blips (EC) de acordo com os seus níveis de controle da infecção. Para cada indivíduo, foram extraídas amostras de DNA a partir de PBMCs obtidos durante a visita mais antiga (V1) e mais recente (VX) disponíveis. O DNA extraído foi utilizado para amplificação e sequenciamento, através de uma metodologia de NGS, dos genes Gag e Nef. As sequências obtidas permitiram o mapeamento do gene nef inteiro (cobertura média de 212.674 seqs/pb) e dos primeiros 1000pbs de Gag (cobertura média de 286.463 seqs/pb) Os consensos de cada mapeamento foram utilizados para as análises de divergência entre V1 e VX e variantes com frequências maior que 0,5% em cada pb mapeado foram consideradas verdadeiras. As análises de evolução evidenciaram o baixo nível de diversidade e divergência dos genes Gag e Nef entre os indivíduos controladores. Indivíduos ECs apresentaram menor perfil mutacional em ambos os genes analisados quando comparados com indivíduos ECB e VC. Enquanto Gag apresentou maior conservação que Nef em VCs, ambos os genes apresentaram semelhante variabilidade in ECs, indicando que o maior controle da viremia limita a evolução em nas duas regiões. Em alguns indivíduos ECBs, evidências de superinfecção e hipermutação mediada por APOBEC3G foi observada. As análises das mutações em regiões de epítopos restritos por CTL demonstraram a presença de mutações indicativas de escape da resposta imune surgidas entre V1 e VX na maioria dos indivíduos. Mutações não sinônimas foram encontradas em baixas frequências para todos os indivíduos, incluindo ECs, indicando que tais variantes surgem, mas a grande maioria não obtém sucesso evolutivo / The HIV infection is characterized by the existence of a clinical latency period (os asymptomatic period) between the acute infection and the AIDS phase, whose duration is extremely variable, generating distinct progression profiles between Hiv infected individuals. A small fraction of infected individuals (5-10%), named long term non progressors (LTNP), remains clinically asymptomatic and with high TCD4+ levels (>500cells/ul) during more than 8 years of infection in absence of treatment. Some of these individuals can even block almost all the viral replication and evolution, generating an evolutionary latency. The objective of this study was to analyze the mutational profile of HIV-1 and the emergency and maintenance dynamic of immune response escape mutants in HIV-1 positive patients classified as LTNPs and with different levels of viral replication control. For this end, a group of 12 LTNP patients, classified as viremic controllers (VC) and Elite Controllers with (ECB) and without Blips (EC) according to their level of viremia control, was used. For each individual, DNA samples were extracted from PBMCs obtained during the earliest (V1) and most recent visits (VX) available. The extracted DNA was used to amplification and sequencing, through a NGS methodology, of the Gag and Nef genes. The sequences obtained allowed to map the whole Nef gene (medium coverage of 286.463 reads/pb) and the first 1000bps of Gag (medium coverage of 212.674 reads/pb) The consensus sequences of each mapping were used to divergence analyses between V1 and VX and variants with frequencies higher than 0,5% in each mapped bp were considered real. The evolution analyses showed a lower degree of diversity and divergence of Gag and Nef genes between controllers. EC individuals presented lower mutational profile in both genes when compared with ECB and VC patients. While Gag presented higher conservation than Nef in VCs, both genes had showed similar variability in ECs, indicating that a higher viremia control limit the evolution in both regions. In some ECB individuals, evidence of superinfection and APOBEC3g mediated Hypermutation was observed. The analyses of mutation along regions of CTL-restricted epitopes had showed the presence of mutations arised between V1 and VX, which were indicative of imune response escape, in most individuals. Non synonymous mutations had been found in lower frequencies in all individuals, including ECs, indicating that those escape variantes arise, but most don\2019t manage to obtain evolutionary success

A coevolução parasita-hospedeiro pode ser apontada como uma das principais responsáveis pela grande diversificação de genes envolvidos na resposta imunológica. A chamada “região do MHC” (na sigla em inglês para Major Histocompatibility Complex), localizada no braço curto do cromossomo 6 humano, é a região mais polimórfica e densa do nosso genoma. Os três genes mais polimórficos deste locus codificam a cadeia pesada de um complexo referido como MHC de classe I, responsável pela apresentação (na superfície celular) de peptídeos provenientes da degradação de proteínas intracelulares. Este mecanismo é central na resposta antiviral, permitindo que células infectadas sejam identificadas e eliminadas pelos Linfócitos T Citotóxicos. Apesar de estruturalmente similares, cada molécula de MHC apresenta maior afinidade por peptídeos com determinadas características bioquímicas. Assim, quanto maior a variabilidade de MHCs em uma dada população, menor o risco de que todos os indivíduos sejam incapazes de apresentar pelo menos alguns alvos derivados de um determinado vírus. Por outro lado, a resposta imunológica celular e a geração de memória contra este alvo apresentado pelo MHC, depende do reconhecimento específico deste complexo peptídeo:MHC (pMHC) por uma dada população de linfócitos. Neste trabalho empregamos ferramentas de bioinformática para realizar a análise estrutural de complexos pMHC, identificando propriedades envolvidas na estimulação da resposta imunológica celular. Nossos resultados in silico, corroborados por experimentos in vitro e ex vivo, sugerem que a similaridade estrutural de complexos pMHC (em termos de topografia e potencial eletrostático) desempenha um papel central na reatividade cruzada de linfócitos T, com implicações sobre imunidade heteróloga, imunopatologia e desenvolvimento de vacinas. / Host-pathogen coevolution can be implicated as one of the main features driving the great diversity of genes involved with immunological response. The so-called “MHC region” (Major Histocompatibility Complex), located at the short arm of human chromosome 6, is the most polymorphic and dense region of our genome. The three most polymorphic genes in this locus encode the heavy chain of a complex referred as MHC class I, which is responsible for presentation (at cell surface) of peptides derived from the digestion of cytosolic proteins. This mechanism plays a key role in antiviral immune response, allowing infected cells to be identified and eliminated by Cytotoxic T Lymphocytes. Although structurally similar, each MHC molecule presents higher affinity for peptides with certain biochemical properties. Therefore, the greater the variability of MHCs in a given population, the smaller the risk that all individuals are unable to present at least some targets derived from a given virus. On the other hand, cellular immune response and memory generation against the target presented by the MHC, depends on specific recognition of this peptide:MHC (pMHC) complex by a given T cell population. In this work, we use bioinformatics tools to perform structural analysis of pMHC complexes, identifying features involved in triggering cellular immune responses. Our in silico results, corroborated by in vitro and ex vivo experiments suggest that structural similarity among pMHC complexes (topography and electrostatic potential) plays a central role in cross-reactivity of cytotoxic T cells, with implications over heterologous immunity, immunopathology and vaccine development.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Nutrição, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 320570.pdf: 1538504 bytes, checksum: 1d54f99c06723e0dcaa9b31d39b3187d (MD5) Previous issue date: 2013 / Neoplasias hematológicas compreendem um grupo heterogêneo de doenças, entre elas, destacam-se as leucemias, os linfomas e o mieloma múltiplo. Reconhecidamente, o componente inflamatório é um fator inerente às neoplasias. Deste processo participam células imunitárias e mediadores inflamatórios que podem repercutir sobre o estado nutricional dos indivíduos acometidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar as proporções de linfócitos T CD4+, T CD4+IL-17+ e T CD8+, concentrações de citocinas plasmáticas (interleucina(IL)-6, IL-10, IL-17 e fator de necrose tumoral (TNF)), e suas relações com o estado nutricional de indivíduos com neoplasias hematológicas malignas. Este é um estudo descritivo, envolvendo dezesseis indivíduos de ambos os sexos com diagnóstico de neoplasias hematológicas malignas foram incluídos no estudo. Para avaliar as proporções das populações linfocitárias, amostras de sangue foram incubadas por 4h em meio de cultura na presença ou não de estimuladores. Posteriormente, as células foram fixadas, permeabilizadas e marcadas com anticorpos (anti-CD4, anti-IL-17A e anti-CD8) ligados a fluoróforos específicos, e adquiridas por citometria de fluxo. As concentrações de citocinas foram determinadas por citometria de fluxo. O estado nutricional foi avaliado pelos parâmetros: índice de massa corporal (IMC), cincunferência muscular do braço (CMB) e percentual de perda de peso. A proporção de linfócitos T CD4+, T CD4+IL-17+ e T CD8+ encontradas foram, respectivamente, 30,2% (16,8; 39,6), 2,5% (2,1; 10,8) e 19,5% (8,2; 25,5) e a razão CD4+:CD8+ foi 1,5 (1,0; 3,5). Em análise por diagnóstico observou-se que os indivíduos com linfoma apresentaram maior proporção de linfócitos T CD8+ (p=0,024) e uma menor razão CD4+:CD8+ (p=0,006) em relação às leucemias. A proporção de células T CD4+IL-17+ foram correlacionadas negativamente com a razão CD4:CD8 e positivamente com a CMB. A concentração de IL-6 encontrada foi aproximadamente 4 vezes superior aos valores descritos na literatura para indivíduos normais. Os indivíduos participantes não apresentaram comprometimento nutricional, com base nos parâmetros antropométricos. A partir dos resultados foi possível constatar que os indivíduos com neoplasias hematológicas em fase inicial não apresentam comprometimento nutricional, considerando a avaliação antropométrica, embora apresentem um quadro inflamatório pronunciado pela elevação de marcadores inflamatórios. Os indivíduos com linfomas mantiveram melhor a proporção de linfócitos T CD8 em relação às leucemias, e a possível relação positiva entre as células Th17, T CD8 e CMB, soma evidências de que essas células podem desempenhar um papel importante na imunidade antineoplásica e prognóstico.<br> / Abstract : Hematological neoplasms comprise a heterogeneous group of diseases, among them are the leukemias, lymphomas and multiple myeloma. Admittedly, the inflammatory component is a factor inherent to neoplasms. In this process, there is the participation of immune cells and the inflammatory mediators produced by them, which can, among other functions, modify the nutritional status of the affected individuals. The aim of this study was to evaluate the proportions of CD4+, CD4+IL-17+ and CD8+ T cells, plasma cytokine concentrations (interleukin (IL)-6, IL-10, IL-17 and tumor necrosis factor (TNF)), and their relationship to the nutritional status of patients with hematological neoplasms. This is a descriptive study involving sixteen individuals of both sexes diagnosed with hematological neoplasms were included in the study. To assess the proportions of lymphocyte populations, blood samples were incubated for 4h in culture medium in the presence or not of stimulators. Subsequently, the cells were fixed, permeabilized and stained with antibodies specific fluorophores linked to (anti-CD4, anti-IL-17A and anti-CD8) and acquired by flow cytometry. Concentrations of cytokines were determined by flow cytometry. Nutritional status was assessed by parameters: body mass index (BMI), arm muscle circumference (AMC) and percentage of weight loss. The proportion of CD4+ T cells, CD4+IL-17+ and CD8+ T cells were, respectively, 30.2% (16.8, 39.6), 2.5% (2.1, 10.8), and 19.5% (8.2, 25.5) and the CD4+:CD8+ was 1.5 (1.0, 3.5). In diagnostic analysis showed that individuals with lymphoma had a higher proportion of CD8+ T lymphocytes (p = 0.024) and reduced the CD4+:CD8+ ratio (p = 0.006) compared to leukemias. The proportion of CD4+IL-17+ was negatively correlated with the CD4:CD8 ratio and positively with the AMC. The concentration of IL-6 found was approximately 4 times higher than the values reported in the literature for normal subjects. The individuals involved had no nutritional impairment. Based on the results, it was established that individuals with hematologic neoplasms, in early stage, have no nutritional impairment, based in antropometric evaluation, although showed a pronounced elevation in inflammatory markers. Individuals with lymphomas presented a higher proportion of CD8+ T lymphocytes compared to leukemias and a potential positive relationship between Th17 cells, CD8 and AMC. Such data increase evidences that these cells may play an important role in antineoplastic immunity and prognosis.

Made available in DSpace on 2015-07-02T02:14:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000471496-Texto+Completo-0.pdf: 3473251 bytes, checksum: 4c713013d9c0095e2989171bafa30fb2 (MD5) Previous issue date: 2015 / The elderly population is now the fastest growing in the world. The immune system becomes compromised with age, being less effective in fighting malignancies. An amended fee of CD8 T cells, increased compared to CD4 cells (usually more frequent in the blood) defines the concept of immune risk profile in the elderly (less than 1 ratio). In this research, we studied the immunological profile of 58 women with breast cancer, determining the ratio of CD4+/CD8+ in peripheral blood. We compare this link into groups according to age of the patient (less or more than 60 years), lymph node involvement, tumor size, the immunohistochemical profile, and the occurrence of adverse events (local recurrence, axillary recurrence and metastasis). The ratio of CD4+ /CD8+ lymphocytes average was 1. 87 (1. 1 to 3. 32), therefore, no patient had a concept immune risk profile. Comparing the groups according to age, the presence of lymph node metastases, tumors smaller or higher than 2 cm, were no statistically significant differences. However, the CD4 / CD8 ratio in patients positive for human epidermal growth factor (HER-2 / neu) was higher than in samples of patients with hormone receptor positive carcinoma and Her-2 / neu negative (p = 0. 036 ). As far as was possible to search, these are the first data on CD4+ and CD8 T+ cells specifically in a population with breast cancer. The increase in the number of CD4+/CD8+ current evidenced in these women with Her-2 carcinoma / neu positive, seems to signal an activation of the immune system in women with poor prognosis of tumors. / A população de idosos é hoje a que mais cresce no mundo. O sistema imune torna-se comprometido com a idade, sendo menos eficaz no combate a neoplasias malignas. Uma taxa alterada de células T CD8 positivo (CD8+), aumentada em relação às células CD4 positivo (CD4+) (normalmente mais freqüentes no sangue) define o conceito de perfil de risco imunológico no idoso (relação menor que 1). Nesta pesquisa, estudamos o perfil imunológico de 58 mulheres com câncer de mama, determinando a relação das células T CD4+/CD8+ no sangue periférico. Comparamos esta relação em grupos conforme a idade da paciente (menos ou mais que 60 anos), o comprometimento linfonodal, o tamanho do tumor, o perfil imunohistoquímico, e a ocorrência de eventos adversos (recidiva local, axilar e metástases). A proporção de linfócitos T CD4+/CD8+ média foi 1,87 (1,1 a 3,32), portanto, nenhuma paciente apresentou por conceito perfil imunológico de risco. Comparando os grupos conforme a idade, a presença de metástases linfonodal, tumores menores verso maiores que 2cm não houveram diferenças estatisticamente significativas. No entanto, a relação CD4+/CD8+ em pacientes positivos para o fator de crescimento epidérmico humano (Her-2/neu) foi mais elevada do que em amostras de pacientes com carcinomas receptor hormonal positivos e Her-2/neu negativo (p=0,036). Tanto quanto foi possível pesquisar, estes são os primeiros dados sobre células T CD4+ e CD8+ especificamente em uma população com câncer de mama. O aumento do número de linfócitos T CD4+/CD8+ circulante evidenciado nestas mulheres com carcinoma Her-2/neu positivo, parece sinalizar uma ativação do sistema imunológico em mulheres com tumores de pior prognóstico.

Made available in DSpace on 2015-10-29T01:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475919-Texto+Parcial-0.pdf: 381957 bytes, checksum: c63b236b74973994f585b6bd7db08855 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction : Respiratory Syncytial Virus (RSV) is a major cause of viral lower respiratory tract infection in children under two years of age. Memory CD8 T cell response to VSR does not provide an efficient and long-lasting immune response, so there are recurrent infections throughout life. The role of mTOR (mammalian target of rapamycin) and the purinergic receptor P2X7 in the memory CD8 T cell response during RSV infection has not been investigated. Objectives : To analize the effect of rapamycin on dendritic cells (DCs) during RSV infection, as well as to evaluate the role of P2X7 purinergic receptor in CD8 memory T cells response during RSV infection. Methodology : Bone marrow derived dendritic cells (BMDCs) differentiated from C57BL/6 P2X7-/- and C57BL/6 mice were infected with VSR virus and used to activate T cells purified from C57BL/6 P2X7-/- and C57BL/6 mice in vitro for 96 hours. In addition, BMDCs differentiated from C57BL/6 mice received 20ng/ml rapamycin during 1h prior infection. The following parameters were evaluated: BMDC cell death by apoptosis, memory cells markers by flow cytometry and RNA viral quantitation was performed by real time PCR. Results : Rapamycin treatment in RSV infected BMDCs decreases the frequency of CD8+CD44high cells and increases the level of viral RNA in DCs, but the rapamycin does not affect the viability of the infected dendritic cells. Furthermore, when BMDCs were treated with rapamycin, an increase of BMDC survival occurred, depending on the contact with the T cells. The absence of purinergic receptor P2X7 in T cells leads to a decrease in the frequency of CD8+CD122+KLRG1-, however the absence of purinergic receptor in infected BMDCs increases the frequency of CD8+CD122+ KLRG1- T cells. Conclusion : Our study suggests that P2X7 receptor is involved in memory CD8 T cell response. In addition our data indicated that mTOR inhibition increases the survival of BMDCs in a mechanism dependent on T-cell contact and also suggests that rapamycin treatment on dendritic cells during VSR infection affect CD8 T cell differentiation. / Introdução : O Vírus Sincicial Respiratório (VSR) é um dos principais causadores de infecção viral do trato respiratório inferior em crianças menores de dois anos de idade. A resposta de células T CD8 de memória para VSR não apresenta uma resposta imune eficiente e duradoura, por isso são recorrentes as infecções durante a vida. Até o momento não se tem o conhecimento sobre o envolvimento do mTOR (mammalian target of rapamycin) e do receptor purinérgico P2X7 na resposta de células T CD8 de memória durante a infecção de VSR. Objetivos : Investigar o efeito da rapamicina nas células dendríticas (DCs) durante a infecção viral, bem como, avaliar o efeito do receptor purinérgico P2X7 nas células dendríticas (DCs) infectadas com o vírus VSR na resposta de células T CD8 de memória. Metodologia : Células dendríticas diferenciadas de medula óssea (BMDCs) de camundongos C57BL/6 P2X7-/- e C57BL/6 infectadas com VSR foram utilizadas para ativar células T purificadas de camundongos C57BL/6 P2X7-/- e C57BL/6 durante 96 horas. Além disso, um grupo de BMDCs de camundongos C57BL/6 recebeu 20ng/mL de rapamicina durante 1h antes da infecção. As DCs foram marcadas para investigação de morte celular por apoptose, as células T marcadas para análise células de memória e a quantificação do RNA viral foi realizada através de PCR em tempo real. Resultados : O tratamento com o inibidor de mTOR nas BMDCs infectadas pelo VSR diminuiu a geração de células T CD8+ CD44high e aumentou os níveis de RNA viral nas DCs, porém a rapamicina não influenciou a viabilidade das células dendríticas infectadas. Quando as BMDCs foram tratadas com rapamicina, houve um aumento de sobrevivência das células, dependente do contato com as células T. Na ausência do receptor purinérgico P2X7 nas células T, ocorreu uma diminuição na frequência das células T CD8+CD122+KLRG1-, entretanto a ausência do receptor purinérgico nas BMDCs infectadas aumentou a frequência destas células T CD8+CD122+KLRG1-.Conclusão : Nosso estudo sugere que o receptor P2X7 está envolvido na resposta de células T CD8 de memória durante a infecção pelo VSR. Além disso, sugere-se que as células dendríticas tratadas com rapamicina durante a infecção com VSR prejudica a diferenciação de células T CD8.

Made available in DSpace on 2015-11-06T01:05:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000476006-Texto+Completo-0.pdf: 2870247 bytes, checksum: 76076f40e5be705d3be21ff4d7ceb1f3 (MD5) Previous issue date: 2015 / Aging has been associated with increased generation of free radicals as well as immunosenescence. Previous studies have identified older individuals with inverted T CD4:CD8 cell ratio and increased immunity to cytomegalovirus (CMV). Here, we investigated markers of oxidative stress and antioxidant defences in older individuals with inverted CD4:CD8 T-cell ratio. From 421 healthy community-dwelling older adults recruited, 61 subjects were identified with inverted CD4:CD8 T-cell ratio. Older individuals with a CD4:CD8 ratio < 1 had increased levels of plasma advanced oxidation protein products (AOPP) and Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP), but reduced levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) as compared to subjects with normal CD4:CD8 T-cell ratio. The CMV IgG serology was negatively correlated with CD4:CD8 ratio. These markers were more evident among elderly men than women. Our data suggest a close relationship between chronic CMV infection and oxidative profile in older individuals in the midst of its influence on the peripheral T-cell subsets. / O envelhecimento tem sido associado com o aumento da geração de radicais livres, bem como com a imunossenescência. Estudos anteriores já haviam identificado os idosos que apresentavam a inversão da razão CD4:CD8 e a sorologia mais acentuada para citomegalovírus (CMV). Aqui, investigamos marcadores de estresse oxidativo e as defesas antioxidantes em idosos com a relação invertida entre as células T CD4 e CD8. De um total de 421 idosos recrutados na comunidade, 61 sujeitos foram identificados com a inversão da razão CD4:CD8. Os idosos com CD4:CD8<1 tinham níveis aumentados de produtos proteicos de oxidação avançada (AOPP) e atividade antioxidante total pelo método de redução do ferro (FRAP) no plasma, mas níveis reduzidos de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), em comparação com indivíduos com razão CD4:CD8 normais. A sorologia para CMV (IgG) foi negativamente correlacionada com a razão CD4:CD8. Estes marcadores foram mais evidentes entre os homens do que as mulheres idosas. Nossos dados sugerem uma estreita relação entre a infecção por CMV crônica e perfil oxidativo em indivíduos mais velhos no meio de sua influência sobre os subtipos de células T periféricas.

A coevolução parasita-hospedeiro pode ser apontada como uma das principais responsáveis pela grande diversificação de genes envolvidos na resposta imunológica. A chamada “região do MHC” (na sigla em inglês para Major Histocompatibility Complex), localizada no braço curto do cromossomo 6 humano, é a região mais polimórfica e densa do nosso genoma. Os três genes mais polimórficos deste locus codificam a cadeia pesada de um complexo referido como MHC de classe I, responsável pela apresentação (na superfície celular) de peptídeos provenientes da degradação de proteínas intracelulares. Este mecanismo é central na resposta antiviral, permitindo que células infectadas sejam identificadas e eliminadas pelos Linfócitos T Citotóxicos. Apesar de estruturalmente similares, cada molécula de MHC apresenta maior afinidade por peptídeos com determinadas características bioquímicas. Assim, quanto maior a variabilidade de MHCs em uma dada população, menor o risco de que todos os indivíduos sejam incapazes de apresentar pelo menos alguns alvos derivados de um determinado vírus. Por outro lado, a resposta imunológica celular e a geração de memória contra este alvo apresentado pelo MHC, depende do reconhecimento específico deste complexo peptídeo:MHC (pMHC) por uma dada população de linfócitos. Neste trabalho empregamos ferramentas de bioinformática para realizar a análise estrutural de complexos pMHC, identificando propriedades envolvidas na estimulação da resposta imunológica celular. Nossos resultados in silico, corroborados por experimentos in vitro e ex vivo, sugerem que a similaridade estrutural de complexos pMHC (em termos de topografia e potencial eletrostático) desempenha um papel central na reatividade cruzada de linfócitos T, com implicações sobre imunidade heteróloga, imunopatologia e desenvolvimento de vacinas. / Host-pathogen coevolution can be implicated as one of the main features driving the great diversity of genes involved with immunological response. The so-called “MHC region” (Major Histocompatibility Complex), located at the short arm of human chromosome 6, is the most polymorphic and dense region of our genome. The three most polymorphic genes in this locus encode the heavy chain of a complex referred as MHC class I, which is responsible for presentation (at cell surface) of peptides derived from the digestion of cytosolic proteins. This mechanism plays a key role in antiviral immune response, allowing infected cells to be identified and eliminated by Cytotoxic T Lymphocytes. Although structurally similar, each MHC molecule presents higher affinity for peptides with certain biochemical properties. Therefore, the greater the variability of MHCs in a given population, the smaller the risk that all individuals are unable to present at least some targets derived from a given virus. On the other hand, cellular immune response and memory generation against the target presented by the MHC, depends on specific recognition of this peptide:MHC (pMHC) complex by a given T cell population. In this work, we use bioinformatics tools to perform structural analysis of pMHC complexes, identifying features involved in triggering cellular immune responses. Our in silico results, corroborated by in vitro and ex vivo experiments suggest that structural similarity among pMHC complexes (topography and electrostatic potential) plays a central role in cross-reactivity of cytotoxic T cells, with implications over heterologous immunity, immunopathology and vaccine development.