Orientador: Marcelo Fabio Gouveia Nogueira / Resumo: Além de permitir a produção em larga escala de embriões, a maturação in vitro (MIV) não utiliza hormônios superestimulatórios, evitando prejuízos econômicos e efeitos iatrogênicos da superestimulação. Entretanto, a MIV ainda está aquém das expectativas devido à incapacidade em simular eventos fisiológicos que ocorrem in vivo. Um artefato da MIV consiste na retomada espontânea da meiose após a remoção do oócito do ambiente folicular. Sem o aparato molecular que retém a meiose, a maturação nuclear ocorre sem o estímulo hormonal fisiológico, impedindo a reorganização adequada das organelas durante a maturação citoplasmática, o que pode comprometer a competência oocitária in vitro. A temática primordial desta tese foi testar um sistema de pré-maturação oocitária (Pré-MIV), no qual dois fármacos (forskolin e 3-isobutil- metilxantina) são utilizados antes da MIV para retardar a meiose. O desempenho da Pré-MIV foi comparado à MIV convencional, em contexto comercial e de pesquisa. Em um primeiro momento, comparamos os sistemas convencional e Pré-MIV de forma holística, ou seja, testamos os sistemas comerciais completos. Aqui, o critério avaliativo foi a análise ultraestrutural de oócitos e blastocistos, e a análise da expressão de 96 genes relacionados à qualidade embrionária. Na segunda abordagem, adaptamos os fármacos da Pré- MIV em nossa MIV rotineira. Por estes fármacos afetarem o metabolismo lipídico, e, frente a importância deste no metabolismo energético celular, a segunda inv... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-17T16:08:48Z No. of bitstreams: 1 Reginaldo Florencio da Silva Junior.pdf: 366124 bytes, checksum: 0a803ae19d4e8d3d33b6cc0b22adccec (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T16:08:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reginaldo Florencio da Silva Junior.pdf: 366124 bytes, checksum: 0a803ae19d4e8d3d33b6cc0b22adccec (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Among the various marine fish native to the Brazilian coast, cobia, Rachycentron canadum, is considered to have a great potential for intensive culture. Feeding is a main concern in the production of cobia, especially due to the reliance on fish oil from wild caught fisheries as a source of essential fatty acids. In this study, we assessed the possibility of replacing fish oil by soybean oil in practical diets for cobia juveniles. Groups of 10 fish (mean weight of 12 g) were randomly distributed in 20 fiberglass tanks each containing 480L.Fish were fed to apparent satiety twice daily. Dietary lipid levels were 12%. Experimental diets contained different proportions of fish and soybean oils and were therefore named Op0, Op25, Op50, Op75 and Op100 according to the level of fish oil inclusion (0, 25, 50, 75 and 100%, respectively). Water quality variables (temperature, salinity, pH, dissolved oxygen, total ammonia, nitrite and nitrate) were not significantly different between treatments. Specific growth rates were somehow lower in comparison to previous studies. Increasing dietary fish oil levels resulted in higher survival. Fish fed diets Op75 and Op100 presented higher weight gain than those fed diets Op0 and Op25, whereas fish fed diet Op50 had intermediate weight gain. Feed intake also increased as dietary fish oil levels increased - from 216.67g in fish fed diet Op0 to 314.25g for those fed diet Op100. Overall, performance parameters were enhanced at higher levels of dietary fish oil. At the end of the experiment, no significant differences (P<0.05) in terms of protein and lipid contents of fish carcass were observed between treatments. On the other hand, water and ash content differed significantly between treatments. The use of relatively high levels of plant ingredients probably affected feed intake, which resulted in lower fish growth. The present results suggest the possibility of replacing at least 50% of fish oil by soybean oil in diets for cobia juveniles. / Dentre os vários peixes marinhos nativos do Brasil, o beijupirá, Rachycentron canadum, é considerado uma espécie de grande potencial para o cultivo intensivo, principalmente por apresentar um rápido crescimento. No entanto, a alimentação destaca-se na cadeia produtiva deste peixe como um dos fatores mais relevantes, principalmente quanto à utilização do óleo de peixe. O objetivo deste estudo foi determinar os efeitos da substituição do óleo de peixe por óleo de soja em dietas práticas para juvenis do beijupirá. Grupos de dez juvenis com peso de 12 g foram distribuídos aleatoriamente em 20 tanques de fibra de vidro com volume útil de 480L. Os peixes foram alimentados duas vezes ao dia até a saciedade aparente com dietas contendo 12% de lipídios totais, mas com diferentes proporções de óleo de peixe e soja. As dietas foram denominadas Op0, Op25, Op50, Op75 e Op100 de acordo com o nível inclusão de óleo de peixe (0, 25, 50, 75 e 100%, respectivamente). As variáveis de qualidade de água (temperatura, salinidade, pH, oxigênio dissolvido, amônia total, nitrito e nitrato) não foram significativamente diferentes entre os tratamentos. A taxa de crescimento específico foi inferior à observada em outros estudos com a mesma espécie. O aumento do nível de óleo de peixe na dieta resultou em uma maior sobrevivência. Os juvenis alimentados com as dietas Op75 e Op100 apresentaram ganhos de peso superiores as dietas Op0 e Op25, enquanto os alimentados com a dieta Op50 apresentaram um crescimento intermediário. Os valores da taxa de crescimento específico comportaram-se de forma similar ao ganho de peso. O consumo alimentar aumentou gradativamente com a maior inclusão de óleo de peixe nas dietas, tendo passado de 216,67g nos peixes alimentados com a dieta Op0 para 314,25g naqueles que receberam a dieta Op100. De modo geral, os parâmetros de desempenho aumentaram à medida que se elevou o nível de óleo de peixe nas dietas. Não foram observadas diferenças significativas (P<0,05) nas concentrações de proteína bruta e lipídio bruto nas carcaças dos peixes dos diferentes tratamentos. Por outro lado, os teores de umidade e cinzas diferiram significativamente entre os tratamentos. A utilização de níveis de inclusão relativamente altos de ingredientes de origem vegetal diminuiu o consumo alimentar, o que aparentemente afetou negativamente o crescimento destes animais. O presente estudo demonstra que é possível utilizar um nível de inclusão de até 50% de óleo de soja em substituição ao óleo de peixe nas dietas para o beijupirá durante a fase juvenil.

Os ovinos domésticos (Ovis aries) estão entre os primeiros animais domesticados para lã, leite, carne e pele. Novas biotecnologias de avaliação e manipulação do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que as membranas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é uma das principais causadoras de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é conseqüente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio que são fisiologicamente produzidas pelo metabolismo celular. Esse quadro pode ser diminuído pela presença de antioxidantes no sêmen, como a vitamina E. O sêmen foi coletado através da técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi centrifugado para a obtenção de duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozóide. Ambas tiveram seus lipídios extraídos por dois métodos diferentes e foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e assim pudemos escolher qual o melhor processo de extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozóide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oléico. Dentre os métodos Folch (1957) modificados estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a extração 1. / The domestic sheep (Ovis Aries) is one of the first domesticated animals for wool, milk and meat production. The study of technologies for assessment and handling of semen are in course for the elucidation of male infertility causes. It is well known that damage to the sperm membrane decreases semen quality. Considering that the membranes are composed by a phospholipid bilayer, lipid peroxidation is a major cause of cell damage and explains the importance of studies on lipid components of semen. Lipid peroxidation is a consequence of the reaction between lipids and reactive oxygen species that are physiologically produced by cellular metabolism. This event may be reduced in the presence of antioxidants in semen, such as tocopherol. Semen was collected by artificial vagina and, after sperm evaluation, samples were centrifuged resulting in two fractions: seminal plasma and spermatozoa pellet. Both had their lipids extracted by two different methods and were qualified and quantified for the sensitivity and specificity to the high performance liquid chromatography in order to determine the most efficient extraction technique. Statistical analysis was performed using SAS software for Windows. The predominant saturated fatty acid in sperm is the myristic and the most abundant insaturated fatty acid in both extractions was DHA. In seminal plasma, in both methods, the prevailing fatty acid is the saturated palmitic and the unsaturated oleic. Among the methods evaluated, we obtained the best results of identification and quantification of fatty acids in extraction 1.

Esta tese apresenta resultados do estudo de interações entre biomoléculas e membranas compostas de lipídio. Duas classes de biomoléculas foram utilizadas, em primeiro lugar fragmentos de DNA que se inserem na camada aquosa entre as membranas, e peptídeos, que se inserem na parte hidrofóbica da membrana. As membranas de lipídio são constituídas basicamente por lecitina de soja, organizada em vesículas ou fases lamelares. Foram preparados complexos de lipídios e DNA com fragmentos de 150 pares de base, onde variou-se a composição das membranas na fase lamelar, com a adição de um co-surfactante comercial composto de uma mistura de ácidos graxos. Com essa abordagem foi possível alterar as propriedades elásticas da fase lamelar onde os fragmentos de DNA se inserem. Técnicas de espalhamento de raios-X foram aplicadas para a caracterização estrutural de duas composições distintas da fase lamelar hospedeira, revelando uma variedade de polimorfismos, como já havia sido observado para outras composições. Foi demonstrado que a transição entre os diferentes arranjos dos fragmentos de DNA está correlacionada a mudanças nas propriedades elásticas da fase lamelar hospedeira. No estudo da interação entre peptídeos e membranas, foram utilizadas vesículas e fases lamelares compostas apenas de lecitina. Os peptídeos utilizados foram duas sequências curtas de aminoácidos: L,L-difenilalanina (FF) e a cisteína-difenilalanina (CFF). A propriedade de auto-organização da FF tem sido reconhecida como elemento chave para a formação de fibras amilóides envolvidas em doenças neurodegenerativas como Alzheimer e Parkinson. Experimentos de FTIR demonstraram que os peptídeos se situam na interface da bicamada interagem mais fortemente com os grupos fosfato do lipídio. A incorporação do peptídeo FF promove alterações nas propriedades elásticas das membranas e, no caso das vesículas, observa-se uma transição multilamelar-unilamelar induzida pelo aumento da concentração de peptídeo. Com a presença do peptídeo CFF essa transição ocorre para concentrações baixas, provavelmente devido a ligações de hidrogênio entre o peptídeo e a membrana, alterando assim a entropia local da membrana. Observou-se ainda, com técnicas de dicroísmo circular e espalhamento de raios-X (WAXS) que, mesmo para essas sequências curtas, os peptídeos se agregam formando estruturas cristalinas que contribuem para a alteração das interações entre membranas e desestabilização da estrutura lamelar. / This thesis presents results of the study of interactions between biomolecules and membranes composed of lipid. Two classes of biomolecules were studied, first fragments of DNA inserted into the aqueous layer between membranes and second, peptides that are inserted into the hydrophobic part of the membrane. Lipid membranes are basically constituted by soy lecithin, which is a biocompatible lipid, organized into vesicles or lamellar phases. Lipid and DNA complexes were prepared with 150 bp DNA fragments, varying the composition of the membranes in the lamellar phase, with the addition of a commercial commercial co-surfactant composed of a mixture of fatty acids. With this approach, it was possible to change the elastic properties of the lamellar phase where the DNA fragments are inserted. X-ray scattering techniques were applied for the structural characterization of two distinct compositions of the host lamellar phase, revealing a variety of polymorphisms, as had already been observed for other compositions. It has been shown that transitions between the different arrangements of the DNA fragments are correlated to changes in the elastic properties of the host lamellar phase. In the study of the interaction between peptides and membranes, vesicles and lamellar phases composed only of lecithin were used. The peptides used were two short amino acid sequences; L, L-diphenylalanine (FF) and cysteine diphenylalanine (CFF). The self-association property of FF has been recognized as a key element for the formation of amyloid fibers involved in neurodegenerative pathologies such as Alzheimer\'s and Parkinson\'s disease. FTIR experiments have shown that the peptides are at the interface of the bilayer and interact more strongly with the phosphate groups of the lipid. The incorporation of FF peptide promotes changes in the elastic properties of the membranes and in the case of the vesicles, a multilamellar-unilamellar transition is observed induced by the increase of the peptide concentration. With the presence of CFF peptide this transition occurs at low concentration, probably due to hydrogen bonds between peptide and membrane which change the local entropy of the membrane. It is also observed with circular dichroism and X-ray scattering (WAXS) techniques that, even for these short sequences, the peptides aggregate forming crystalline structures that contribute to the modification of membrane interactions and destabilization of the lamellar structure.

Submitted by ANELISE RIBEIRO PERES (ane.medvet@hotmail.com) on 2018-09-18T23:21:32Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO definitivo_ANELISE.pdf: 1833795 bytes, checksum: 8953d732ef286f330a73fc84245f9111 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-09-19T16:44:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 peres_ar_dr_jabo.pdf: 1833795 bytes, checksum: 8953d732ef286f330a73fc84245f9111 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-19T16:44:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 peres_ar_dr_jabo.pdf: 1833795 bytes, checksum: 8953d732ef286f330a73fc84245f9111 (MD5) Previous issue date: 2018-07-27 / Na bovinocultura de corte, a alimentação corresponde ao maior custo associado à produção de carne. A avaliação do consumo alimentar residual (CAR) tem sido uma ferramenta importante para direcionar a seleção de bovinos de corte e otimizar economicamente esta atividade. No entanto, alguns estudos mostram uma diminuição da motilidade, do perímetro escrotal, uma menor taxa de prenhez e parto em animais eficientes para CAR. Uma estratégia para solucionar tais problemas é a suplementação ácidos graxos poliinsaturados (AGPs) que não apenas aumentam a densidade energética da dieta, mas também atuam na melhoria do desempenho reprodutivo. No entanto, o ideal é que tais características de seleção para CAR e efeito da suplementação com AGPs sejam passadas à prole, assim o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito paterno da seleção para consumo alimentar residual (CAR) e da suplementação dos touros com AGs para a PIVE, o acúmulo de lipídio embrionário e a expressão de genes. Animais classificados em baixo CAR e alto CAR foram utilizados no experimento. O delineamento experimental obedeceu a um esquema fatorial 2 x 2 (CAR x Suplementação), a análise estatística foi realizada pelo programa JPM (versão 5.0.1, SAS Institute). Após a amostragem, os animais foram separados aleatoriamente em dois grupos: com suplementação de AGs protegido e com suplementação controle (sem AGs protegido). O experimento foi composto por quatro tratamentos, o sêmen dos touros foi congelado (4 tratamentos), sendo 6 animais suplementados com AGs protegido (3 baixo CAR e 3 alto CAR) e 6 animais com suplementação controle, sem AGs (3 baixo CAR e 3 alto CAR). O sêmen foi utilizado para produção in vitro de embriões; os blastocistos foram reservados para análise da quantificação de lipídios e os blastocistos expandidos para análise da expressão gênica. A quantificação de lipídios foi avaliada utilizando o corante Sudan Black B 1% e as imagens foram analisadas pelo programa Image J (National Institutes of Health, USA). A análise de expressão gênica dos embriões foi feita pela técnica de qPCR utilizando o sistema de micro-fluídica Biomark HD (Fluidigm®, South San Francisco, CA, USA). Não houve diferença na produção in vitro de embriões oriundos de animais CAR- ou CAR+, nem entre os tratamentos suplementados com AGs. Embriões de touros CAR+ apresentaram maior conteúdo lipídico quando comparado com o grupo CAR-. Os genes que apresentaram diferença associados à dieta foram o HMOX1, SREBF1 e o GPX4. Os referentes ao perfil CAR que diferiram foram o PLAC8, PPARGC1A e o NFE2L2. Os relacionados com a interação entre dieta e CAR que apresentaram diferença foram o RPLP0, ATF4, H3F3A, HSF1, HMGCS1, SLC2A5, NANOG, REST e o GPX4. Conclui-se que a dieta e a seleção para CAR dos touros afetou a expressão gênica dos embriões produzidos in vitro utilizando o sêmen desses animais. / In beef cattle, feed corresponds to the highest cost associated with meat production. The evaluation of the selection for residual feed intake (RFI) has been an important tool to direct the selection of beef cattle and economically optimize this activity. However, some studies show a decrease in motility, scrotal perimeter, a lower pregnancy and calving rate in efficient animals for RFI. One strategy to solve such problems is polyunsaturated fatty acid (PUFA) supplementation that not only increases the energy density of the diet, but also improves reproductive performance. However, the ideal is that these characteristics of selection for RFI and effect of the supplementation with PUFA are passed to offspring, so the aim of this work was to evaluate the paternal effect of selection for residual feed intake and supplementation of bulls with fatty acids for in vitro produced embryos (IVPE), accumulation of embryonic lipid and gene expression. Animals classified under low RFI and high RFI were used in the experiment. The experimental design was based on a 2 x 2 factorial scheme (RFI x Supplementation), the statistical analysis was performed by the JPM program (version 5.0.1, SAS Institute). The animals were randomly divided into two groups: with protected fatty acids supplementation and with control supplementation (without protected fatty acids). The experiment was composed of four treatments, the semen of the bulls was frozen (4 treatments), 6 animals were supplemented with protected fatty acids (3 low RFI and 3 high RFI) and 6 animals with control supplementation, without protected fatty acids (3 low RFI and 3 high RFI). The semen was used for IVPE; blastocysts were reserved for analysis of lipid quantification and expanded blastocysts for analysis of gene expression. The quantification of lipids was evaluated using the Sudan Black B 1% dye and the images were analyzed by program Image J (National Institutes of Health, USA). The gene expression analysis of the embryos was done by the qPCR technique using the Biomark HD microfluidic system (Fluidigm®, South San Francisco, CA, USA). There was no difference in the in vitro production of embryos from RFI- or RFI+ animals, there was also no difference between treatments (supplementation). Embryos from RFI+ bulls presented higher intracytoplasmic lipid content than embryos from RFI- bulls. The genes that showed differences associated with the diet were HMOX1, SREBF1 and GPX4. The RFI associated genes that differed were PLAC8, PPARGC1A and NFE2L2. Those related to the interaction between diet and RFI that presented difference were RPLP0, ATF4, H3F3A, HSF1, HMGCS1, SLC2A5, NANOG, REST and GPX4. In conclusion, the diet and the selection for RFI of the bulls affected the gene expression of the embryos produced in vitro using the semen of these animals.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-02-09T12:54:16Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1438788 bytes, checksum: 9590b3fb5151d31119e2920baea83d58 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T12:54:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1438788 bytes, checksum: 9590b3fb5151d31119e2920baea83d58 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Goat's milk is rich in short-chain fatty acids (caproic, caprylic and capric) and average-chain fatty acids (myristic and lauric acid), besides having Conjugated Linoleic Acid (CLA), which has demonstrated neuroprotective effects. Thus, this study aimed to investigate the anticonvulsant effects of the lipids from goat milk enriched with CLA in Swiss mice. Animals received by gavage 1 ml/100g of fat goat milk (LIP group) or water (CONT group) for 30 days. After supplementation, it was performed maximal electroshock test (MES), the test of induced convulsions by pentilenotrazol (PTZ) and the kindling model. It was also carried out evaluation tests of locomotor (rota-rod and open-field) and anxiolytic (elevated plus maze - EPM) activity and biochemical evaluation of the animals. LIP group demonstrated a significantly lower consumption of feed when compared to the control (CONT 7.4 ± 0.9g, LIP 5.6 ± 0.9g LIP; p <0.01) and had significantly lower weight (CONT 36.3 ± 3.4g; LIP 33.2 ± 3.7g; p = 0.04). There was no statistical difference in water consumption (CONT 8 ± 0.7 mL, LIP 8 ± 1.1mL; p = 0.54). For the PTZ test, LIP group presented latency to onset of convulsions and death significantly higher (233.5 ± 103.4s and 75.4 ± 754s, respectively) when compared to CONT (67.1 ± 24.5s and 459.2 ± 75.5s, respectively), with p = 0.02 and p = 0.03, respectively. For the MES test, LIP group showed a significant reduction in the duration of the seizure (5.1 ± 2.4s) compared to CONT (13.3 ± 3.5s). Both tests have also demonstrated significant effects on the severity of seizures. For kindling mice, despite the LIP group present a latency to onset of convulsions greater (571.6 ± 86.3s) than the CONT (543.7 ± 171.3s), this result was not statistically significant (p = 0.57), as well as the score convulsions (p = 0.12). Fat presented anxiolytic effect in the EPM, because LIP almost doubled the number of entries into the open arms (p = 0.04), in addiction to increase time spent in these arms (CONT 25.1 ± 18.9s, LIP 48 ± 23.62s, p = 0.04) and enhanced the number of dips (p < 0.05). There was no statistical difference between the groups in terms of locomotor activity. In biochemical assessment LIP provided a significant increase in AST (CONT 105.8 ± 26.64; LIP 131 ± 20.31; p < 0.05); amylase (CONT 1061 ± 219.7; LIP 1726 ± 405.3; p < 0.01) and FA (CONT 369.1 ± 94.66; LIP 580.3 ± 154.5; p < 0.01) and a reduction of calcium levels (CONT 7.78 ± 3.27; LIP 4.56 ± 1.58; p < 0.01). We conclude that goat's milk lipids had effect on the central nervous system, with anticonvulsant and anxiolytic activity, without affecting the motor control of the animals. / O leite de cabra é rico em ácidos graxos de cadeia curta (capróico, caprílico e cáprico) e média (ácido mirístico e láurico), além de possuir Ácido Linoleico Conjugado (CLA), o qual tem demonstrado efeitos neuroprotetores. Dessa forma, esse estudo teve como objetivo principal investigar os efeitos anticonvulsivantes do lipídio do leite caprino enriquecido com CLA em camundongos Swiss. Os animais receberam por gavagem 1mL/100g de gordura do leite caprino (grupo LIP) ou água (grupo CONT) por 30 dias. Após a suplementação, foram realizados o teste do eletrochoque auricular (ELQ), o teste das convulsões induzidas pelo pentilenotrazol (PTZ) e o modelo crônico kindling. Também foram realizados testes de avaliação da atividade locomotora (rota-rod e open-field) e ansiolítica (labirinto em cruz elevado - LCE) e avaliação bioquímica dos animais. O grupo LIP demonstrou um consumo menor da ração quando comparado ao controle (CONT 7.4 ± 0.9g; LIP 5.6 ± 0.9g; p < 0.01) e também apresentou peso inferior (CONT 36.3 ± 3.4g; LIP 33.2 ± 3.7g; p = 0.04), não havendo diferença estatística quanto ao consumo hídrico (CONT 8 ± 0.7 mL; LIP 8 ± 1.1mL; p = 0.54). Para o teste do PTZ, o grupo LIP apresentou um período de latência para início das convulsões e para morte maior (233.5 ± 103.4s e 754 ± 75,4s, respectivamente) quando comparado ao CONT (67.1 ± 5.24s e 459.2 ± 75.5s, respectivamente), sendo p = 0.02 e p = 0.03, respectivamente. O tratamento também provocou uma redução significativa na duração da convulsão no teste do ELQ (CONT 13.3 ± 3.5s; LIP 5.1 ± 2.4s; p = 0.03). Para os camundongos kindelizados, apesar do grupo LIP apresentar um período de latência para início das convulsões maior (571.6 ± 86.3s) que o CONT (543.7 ± 171.3s), esse resultado não foi estatisticamente significativo (p = 0.57), bem como o escore de convulsão (p = 0.12). A gordura apresentou efeito ansiolítico no teste do labirinto, pois o LIP aumentou o número de entradas nos braços abertos (p = 0.04), além de propiciar um maior tempo de permanência nesses braços (CONT 25.1 ± 18.9s, LIP 48 ± 23.62s, p = 0.04) e aumentar o número de mergulhos (p < 0.05). Não houve diferença estatística entre os grupos quanto à atividade locomotora e na avaliação bioquímica o LIP propiciou um aumento significativo das enzimas AST (CONT 105.8 ± 26.64; LIP 131 ± 20,31; p < 0.05); amilase (CONT 1061 ± 219,7; LIP 1726 ± 405,3; p < 0.01) e FA (CONT 369.1 ± 94.66; LIP 580,3 ± 154,5; p < 0.01) e uma redução dos níveis de cálcio (CONT 7,78 ± 3,27; LIP 4,56 ± 1,58; p < 0.01). Conclui-se que os lipídios do leite de cabra possuíram efeito sobre o sistema nervoso central, apresentando atividade anticonvulsivante e ansiolítica, sem afetar a coordenação motora dos animais.

Submitted by Eduardo Montanari Razza null (32896431829) on 2017-04-24T13:06:14Z No. of bitstreams: 1 Tese_E_M_Razza.compressed.pdf: 2567237 bytes, checksum: 79286963f030ebbfef3c6033007b2f31 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-25T20:37:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 razza_em_dr_bot.pdf: 2567237 bytes, checksum: 79286963f030ebbfef3c6033007b2f31 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T20:37:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 razza_em_dr_bot.pdf: 2567237 bytes, checksum: 79286963f030ebbfef3c6033007b2f31 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Além de permitir a produção em larga escala de embriões, a maturação in vitro (MIV) não utiliza hormônios superestimulatórios, evitando prejuízos econômicos e efeitos iatrogênicos da superestimulação. Entretanto, a MIV ainda está aquém das expectativas devido à incapacidade em simular eventos fisiológicos que ocorrem in vivo. Um artefato da MIV consiste na retomada espontânea da meiose após a remoção do oócito do ambiente folicular. Sem o aparato molecular que retém a meiose, a maturação nuclear ocorre sem o estímulo hormonal fisiológico, impedindo a reorganização adequada das organelas durante a maturação citoplasmática, o que pode comprometer a competência oocitária in vitro. A temática primordial desta tese foi testar um sistema de pré-maturação oocitária (Pré-MIV), no qual dois fármacos (forskolin e 3-isobutil- metilxantina) são utilizados antes da MIV para retardar a meiose. O desempenho da Pré-MIV foi comparado à MIV convencional, em contexto comercial e de pesquisa. Em um primeiro momento, comparamos os sistemas convencional e Pré-MIV de forma holística, ou seja, testamos os sistemas comerciais completos. Aqui, o critério avaliativo foi a análise ultraestrutural de oócitos e blastocistos, e a análise da expressão de 96 genes relacionados à qualidade embrionária. Na segunda abordagem, adaptamos os fármacos da Pré- MIV em nossa MIV rotineira. Por estes fármacos afetarem o metabolismo lipídico, e, frente a importância deste no metabolismo energético celular, a segunda investigação focou na quantificação lipídica de oócitos e blastocistos, além de avaliar o perfil lipídico de membrana dos blastocistos produzidos, dada sua relação com seu potencial de criopreservação. Coletamos amostras de células do cumulus e blastocistos e, respectivamente, verificamos a expressão de 96 genes associados à competência oocitária e 96 genes relacionados à qualidade embrionária. Resultados indicaram que a Pré-MIV afetou a ultraestrutura de oócitos e que o perfil de expressão gênica de blastocistos foi afetado pelo tratamento, mas com variações quanto ao sistema de produção utilizado. Além disso, a Pré-MIV aumentou o conteúdo lipídico de oócitos, mas diminuiu nos blastocistos, afetando positivamente o perfil lipídico de membranas do embrião. Finalmente, a Pré-MIV também afetou a expressão gênica de células do cumulus (positivamente) e de blastocistos (diferencialmente). / Besides allowing for the large-scale in vitro production of embryos, the in vitro maturation (IVM) dismiss the use of superstimulation hormones, preventing excessive financial expenses and avoiding iatrogenic effects of ovarian overstimulation. However, the outcome of IVM is still below expectations due to the inability in simulating the physiological events occurring in vivo. An artifact of IVM consists on the spontaneous resumption of meiosis after oocyte removal from the follicular environment. In this regard, without the molecular apparatus for arresting meiosis, the nuclear maturation is triggered irrespective of the physiological hormonal stimulation. As a result, the cytoplasmic maturation, i.e., the adequate reorganization of organelles in the oocyte is bypassed, compromising the oocyte competence. The general idea in this thesis was to test the pre-maturation system (Pre-IVM), in which two drugs (forskolin and 3- isobutyl-methylxanthine) are used prior to IVM to sustain meiotic arrest. The Pre-IVM performance was compared to the conventional IVM in the context of either commercial routines or research laboratories. At first, we aimed to compare the conventional IVM and the Pre-IVM in a holistic way, i.e., challenging each other using commercial systems. In this approach, we evaluated the ultrastructural aspects of oocytes and blastocysts, and associated with the expression of 96 genes related to embryo quality. In the second approach, we adapted the Pre-IVM drugs in our own IVM. Those drugs are known to affect the lipid metabolism, which is extremely relevant for the cellular energy metabolism in oocytes and embryo. Hence, we focus on the lipid quantification in oocytes and blastocysts, and, in addition, we assessed the membrane lipid profile of the blastocysts, since it is directly related to embryo cryopreservation potential. We collected cumulus cells and blastocysts and assessed the expression of 96 genes of oocyte competence and 96 genes of embryo quality. Results indicated that the Pre-IVM affected oocyte ultrastructure, the gene expression of blastocysts was differentially affected, but there was variation according to the systems used. Also the Pre- IVM increased the lipid content in oocytes and reduced in blastocysts. The membrane lipid profile of blastocysts was positively modulated by the Pre-IVM. Finally, the Pre-IVM affected the gene expression of cumulus (positively) and blastocysts (differentially). / FAPESP: 2012/23409-9 / FAPESP: 2015/02557-8

Esta tese apresenta resultados do estudo de interações entre biomoléculas e membranas compostas de lipídio. Duas classes de biomoléculas foram utilizadas, em primeiro lugar fragmentos de DNA que se inserem na camada aquosa entre as membranas, e peptídeos, que se inserem na parte hidrofóbica da membrana. As membranas de lipídio são constituídas basicamente por lecitina de soja, organizada em vesículas ou fases lamelares. Foram preparados complexos de lipídios e DNA com fragmentos de 150 pares de base, onde variou-se a composição das membranas na fase lamelar, com a adição de um co-surfactante comercial composto de uma mistura de ácidos graxos. Com essa abordagem foi possível alterar as propriedades elásticas da fase lamelar onde os fragmentos de DNA se inserem. Técnicas de espalhamento de raios-X foram aplicadas para a caracterização estrutural de duas composições distintas da fase lamelar hospedeira, revelando uma variedade de polimorfismos, como já havia sido observado para outras composições. Foi demonstrado que a transição entre os diferentes arranjos dos fragmentos de DNA está correlacionada a mudanças nas propriedades elásticas da fase lamelar hospedeira. No estudo da interação entre peptídeos e membranas, foram utilizadas vesículas e fases lamelares compostas apenas de lecitina. Os peptídeos utilizados foram duas sequências curtas de aminoácidos: L,L-difenilalanina (FF) e a cisteína-difenilalanina (CFF). A propriedade de auto-organização da FF tem sido reconhecida como elemento chave para a formação de fibras amilóides envolvidas em doenças neurodegenerativas como Alzheimer e Parkinson. Experimentos de FTIR demonstraram que os peptídeos se situam na interface da bicamada interagem mais fortemente com os grupos fosfato do lipídio. A incorporação do peptídeo FF promove alterações nas propriedades elásticas das membranas e, no caso das vesículas, observa-se uma transição multilamelar-unilamelar induzida pelo aumento da concentração de peptídeo. Com a presença do peptídeo CFF essa transição ocorre para concentrações baixas, provavelmente devido a ligações de hidrogênio entre o peptídeo e a membrana, alterando assim a entropia local da membrana. Observou-se ainda, com técnicas de dicroísmo circular e espalhamento de raios-X (WAXS) que, mesmo para essas sequências curtas, os peptídeos se agregam formando estruturas cristalinas que contribuem para a alteração das interações entre membranas e desestabilização da estrutura lamelar. / This thesis presents results of the study of interactions between biomolecules and membranes composed of lipid. Two classes of biomolecules were studied, first fragments of DNA inserted into the aqueous layer between membranes and second, peptides that are inserted into the hydrophobic part of the membrane. Lipid membranes are basically constituted by soy lecithin, which is a biocompatible lipid, organized into vesicles or lamellar phases. Lipid and DNA complexes were prepared with 150 bp DNA fragments, varying the composition of the membranes in the lamellar phase, with the addition of a commercial commercial co-surfactant composed of a mixture of fatty acids. With this approach, it was possible to change the elastic properties of the lamellar phase where the DNA fragments are inserted. X-ray scattering techniques were applied for the structural characterization of two distinct compositions of the host lamellar phase, revealing a variety of polymorphisms, as had already been observed for other compositions. It has been shown that transitions between the different arrangements of the DNA fragments are correlated to changes in the elastic properties of the host lamellar phase. In the study of the interaction between peptides and membranes, vesicles and lamellar phases composed only of lecithin were used. The peptides used were two short amino acid sequences; L, L-diphenylalanine (FF) and cysteine diphenylalanine (CFF). The self-association property of FF has been recognized as a key element for the formation of amyloid fibers involved in neurodegenerative pathologies such as Alzheimer\'s and Parkinson\'s disease. FTIR experiments have shown that the peptides are at the interface of the bilayer and interact more strongly with the phosphate groups of the lipid. The incorporation of FF peptide promotes changes in the elastic properties of the membranes and in the case of the vesicles, a multilamellar-unilamellar transition is observed induced by the increase of the peptide concentration. With the presence of CFF peptide this transition occurs at low concentration, probably due to hydrogen bonds between peptide and membrane which change the local entropy of the membrane. It is also observed with circular dichroism and X-ray scattering (WAXS) techniques that, even for these short sequences, the peptides aggregate forming crystalline structures that contribute to the modification of membrane interactions and destabilization of the lamellar structure.

O objetivo geral desta pesquisa foi avaliar o metabolismo e a resposta imune celular no sangue de vacas leiteiras no período de transição. Foram utilizadas 13 vacas Holandesas, de 2ª a 4ª parição, avaliadas nas semanas M-2, M-1 (pré-parto), M0 (dia da parição), M1, M2 e M3 (pós-parto). Foram realizadas análises das seguintes variáveis: produção leiteira, escore de condição corporal (ECC), mensuração sérica do beta-hidroxibutirato (BHB), ácidos graxos não esterificados (NEFA), IGF-1 (Fator de Crescimento Semelhante à Insulina Tipo 1), glicose (GLIC), colesterol (COL), triglicerídeos, proteína total (PT), albumina (ALB), globulina (GLOB), AST (Aspartato transaminase), GGT (Gamaglutamiltransferase) e cálcio total e cálcio ionizável. Além disso, a resposta imune celular das vacas forma avaliadas pelas interpretações do leucograma e imunofenotipagem dos linfócitos. Foram encontradas medianas do ECC equivalentes a 4,0; 3,8; 3,5; 3,0; 3,5 e 3,5 dos momentos M-2 ao M3. Em relação aos indicadores energéticos, observou-se aumento da concentração de NEFA e BHB no parto e pós-parto, ao contrário, os teores de triglicerídeos, colesterol e IGF- 1 diminuíram. Além disso, foi possível observar concentração máxima de glicose no momento da parição. Em relação ao metabolismo proteico e hepático, observam-se menores concentrações de proteína total e globulina no momento do parto; os teores de albumina diminuíram no pós-parto. A atividade sérica da AST aumentou a partir da parição, porém não foi possível detectar variações para a GGT. As concentrações de cálcio sério total e ionizado foram menores a partir da parição. A análise do leucograma das vacas no período de transição revelou leucocitose por linfocitose no momento do parto, apesar de não ter sido observada variações no número absoluto e relativo dos linfócitos durante o período de transição, foi possível observar que os linfócitos sanguíneos apresentaram-se elevados durante todo o período de estudo. O aumento no número de linfócitos decorreu da elevação dos linfócitos B (CD21+). A partir desse resultado realizou-se exame sorológico para o vírus da Leucose Enzootica Bovina, detectando 12/13 (92,30%) vacas soropositivas. O linfócito T (CD3+) e suas subpopulções auxiliar (CD3+CD4+) e citotóxica (CD3+CD8+) apresentaram ligeiras oscilações durante o período de estudo. Com base nos resultados obtidos pode-se concluir que: a) As vacas Holandesas apresentaram variações nos parâmetros do perfil energético indicadoras de balanço energético negativo e mobilização lipídica, caracterizados especialmente pela diminuição do ECC e elevações nos teores séricos de NEFA e BHB; b) os teores de PT e GLOB apresentaram variações em decorrência da colostrogênese e infecções uterinas pós-parto. A albumina apresentou diminuição no pós-parto, decorrente do aumento da demanda nutricional para a produção de leite e uso de aminoácidos como precursor energético no processo de gliconeogênese; c) os valores de IGF-I apresentaram acentuada redução no momento do parto, sinalizando para mobilização lipídica e desacoplamento do eixo somatotrópico a partir da parição; d) as vacas apresentaram hipocalcemia, especialmente na parição e primeira semana pós-parto; e) a infecção pelo Vírus da Leucose Enzoótica Bovina influenciou na resposta imune observada no período de transição, caracterizada por linfocitose e aumento da população de linfócitos B (CD21+). / The general aim of this research was to evaluate the metabolism and cellular immune response in blood of dairy cows in transition period. Was evaluated 13 Holstein cows, from 2nd to 4th parturitions in the weeks M-2, M-1 (pre-partum), M0 (parturition day), M1, M2 and M3 (post-partum). Paremeter analysis were performed: milk production, body condition score (BCS), beta-hydroxybutyrate (BHB), nonesterified fatty acids (NEFA), IGF-1 (growth factor Insulin-like similar to insulin type 1), glucose (GLUC), cholesterol (CHOL), triglycerides, total protein (TP), albumin, globulin (GLOB), AST (aspartate transaminase), GGT (gamma-glutamyl transferase), total calcium and ionized calcium. Furthermore, cows cellular immune response was evaluated by WBC and lymphocyte immunophenotyping. Was find for BCS median 4.0; 3.8; 3.5; 3.0; 3.5 and 3.5 between the moments M-2 to M3. Regarding to energy indicators, an increase of NEFA and BHB in parturition and postpartum was observed, in contrast, the values of triglycerides, cholesterol and IGF-1 decreased. Moreover, it was possible to obtain maximum glucose concentration at parturition time. Regarding to protein and hepatic metabolic was find lower values of total protein and globulin was observed in pre-partum and parturition in relation to postpartum; values of albumin decreased in post-partum. The Aspartate aminotransferase activity increased from calving, but it was not possible to detect GGT variations. The concentration of total and ionized calcium serum were lower from calving. The analysis of cows leukogram in the transition period revealed leukocytosis by lymphocytosis at delivery, although no variation in the absolute and relative number of lymphocytes was observed during the transition period. The increase of lymphocytes number occurred due to the increase of B lymphocytes (CD21 +). From this result, serological test for the Enzootic Bovine Leukosis Virus was developed, detecting 12/13 (92,30%) of seropositive cows. T lymphocytes (CD3 +) and subpopulations T helper (CD3+ CD4+) and T cytotoxic (CD3+ CD8+) showed slight fluctuations during period. Based on the results, we can conclude the following: a) Holstein cows showed variations in the parameters of the energy profile indicator of negative energy balance and lipid mobilization, characterized especially by the decreasing of BCS and elevations in serum NEFA and BHB; b) the levels of TP and GLOB showed variations due to colostrogenesis and postpartum uterine infections. The albumin decreased in postpartum, due to increased nutrient requeriment for milk production and use of amino acids as energy precursor in the gluconeogenesis; c) the amounts of IGF-I showed significant reduction at delivery, signaling lipid mobilization and uncoupling of the somatotropic axis after calving; d) cows showed hypocalcemia, especially in calving and first week post-partum; e) Infection with Enzootic Bovine Leukosis Virus influenced the immune response observed in the transition period, characterized by lymphocytosis and the increase of B lymphocytes (CD21 +) population.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-20T18:26:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE _DFBC_.pdf: 1525509 bytes, checksum: 91079bb98aed005cbb284a2ec816c4c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T18:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE _DFBC_.pdf: 1525509 bytes, checksum: 91079bb98aed005cbb284a2ec816c4c1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-02 / Capes / Este trabalho teve o objetivo de avaliar a influência entre macronutrientes energéticos, com o desempenho, metabolismo e fisiologia digestiva de diferentes surubim híbridos (Pseudoplatystoma corruscans x Pseudoplatystoma fasciatum e Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus). Esses surubim híbridos são amplamente cultivados no Brasil, para abate sendo a carne destinada ao mercado interno e externo. No entanto, são poucos os dados na literatura em relação às exigências nutricionais para esses peixes, bem como o efeito da relação entre os macronutrientes com a fisiologia digestiva e metabolismo. Deste modo, o capítulo um avaliou o efeito da manga de uma fonte de carboidrato não amiláceo. Para tal foram fornecidas dietas contendo farinha de manga em substituição ao milho em quatro níveis diferentes (0; 33%; 66% e 100%) para alevinos de Pseudoplatystoma sp. Após o período de 60 dias para a análise de desempenho, foram realizadas as atividades das enzimas digestivas: protease total alcalina, tripsina e amilase. Como indicativos de mudança no metabolismo foram avaliados no plasma: triglicérides, glicose, proteínas totais, colesterol, amino ácidos livres; no fígado: glicogênio e alanina aminotransferase. Foi observado que não houve diferença significativa nos parâmetros de desempenho analisados. Entretanto foram observadas alterações nas atividades das enzimas digestivas e intermediários metabólicos, provavelmente devido à quantidade de fatores antinutricionais encontrados na casca da manga. Estes resultados demonstram que em longo prazo a inclusão de farinha de manga acarretará decréscimo no desempenho dos animais. No capítulo dois foi avaliado o efeito de diferentes valores da relação proteína(P):lipídio(L). Quatro dietas (45P 5L; 42P 9L; 39P 11L; 34P 19L%) foram fornecidas por 60 dias para observar o efeito sobre o desempenho, enzimas digestivas, intermediários metabólicos e parâmetros hematimétricos de alevinos do surubim híbrido Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus. O excesso de lipídio na dieta diminuiu o desempenho o que consequentemente afetou os demais parâmetros avaliados. Valores de proteínas totais e aminoácidos livres no plasma demostraram danos causados pela deficiência de proteína na dieta. Os valores de colesterol, triglicérides e glicose mostraram resposta consequente da baixa ingestão de nutrientes. A lipase foi a enzima digestiva mais influenciada pelos nutrientes dietéticos. Os parâmetros hematimétricos foram afetados pelas dietas e demonstraram que animais que ingeriram maior quantidade de lipídio tiveram adaptação metabólica e fisiológica para suprir a deficiência nutricional. No capítulo três foi avaliado o efeito de diferentes valores da relação proteína(P):carboidrato(C). Quatro dietas (28P 53C; 36P 44C; 40P 39C; 45P 37C%) foram fornecidas por 60 dias para observar o efeito sobre o desempenho, composição corporal, enzimas digestivas e intermediários metabólicos de alevinos do surubim híbrido Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus. O excesso de carboidrato na dieta diminuiu o desempenho, sem afetar demasiadamente os parâmetros fisiológicos e metabólicos avaliados, mostrando grande adaptação do híbrido avaliado. A eficiência energética das dietas avaliadas foi maior no tratamento com menor inclusão de carboidrato e maior inclusão proteica. Valores de atividades enzimáticas específicas foram maiores no tratamento com maior inclusão de proteína. A maior reserva de glicogênio hepático também foi observado no mesmo tratamento citado acima. Como conclusão geral pode-se afirmar que diferentes relações proteína:energia, independente de ser fonte lipídica ou de carboidrato, afeta o desempenho, fisiologia digestiva e metabolismo do surubim híbrido. / This study aimed to evaluate the influence of macronutrients energetic, growth, metabolism and digestive physiology of different surubim hybrids (Pseuduplatystoma corruscans x Pseudoplatystoma fasciatum and Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus). These hybrids are highly raised in Brazil with its main products being sold to domestic and international market. However there is few information on literature published about data on nutrient requirements to this fish, as well as the effects among macronutrients and digestive physiology and metabolism. Thus, chapter one evaluated the effect of mango meal as a non-starch carbohydrate source. In order to accomplish it, diets containing mango meal replacing corn meal in four different levels (0; 33%; 66%; 100%) were given to Pseudoplatystoma sp. juvenile. After 60 days growth analysis were done as well as the digestive enzymes activities: total alkaline protease, trypsin and amylase. As indicative of metabolism changes were evaluated in the blood plasma: triglycerides, glucose, total proteins, cholesterol, free amino acids; in the liver: glycogen and alanine aminotransferase. It was observed no significant difference among growth parameters evaluated. However digestive enzymes activities and intermediary metabolic changes were observed, probably due to anti-nutritional factors found in mango skin. These results shows that, in long term feeding mango meal inclusion can lead to animal growth decrease. In chapter two it was evaluated the effect of different protein(P):lipid(L) ratios. Four diets (45P 5L; 42P 9L; 39P 11L; 34P 19L) were offered for 60 days to observe the effect on growth performance, digestive enzymes activities, intermediary metabolism and hematimetric parameters of hybrid surubim Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus juvenile. Dietary lipid excess decreased growth which consequently affected the others parameters evaluated. Plasma total protein and free amino acids values demonstrated injuries caused by protein deficiency in the diet. Cholesterol, triglycerides and glucose values showed consequent response to low nutrient ingestion. Lipase was the enzyme more influenced by dietary nutrients. Hematimetric parameters were affected by diets and showed that animals that ingested higher lipid amount had metabolic and physiologic adaptation to make up nutritional deficiency. In chapter three it was evaluated the effect of different protein(P):carbohydrate (C)values. Four diets (28C 53C; 36P 44C; 40P 39C; 45P 37C) were offered for 60 days in order to observe the effect on growth, whole body composition, digestive enzymes and intermediary metabolism of hybrid surubim Pseudoplatysma fasciatum x Leiarius marmoratus juvenile. Dietary carbohydrate in excess decreased growth without affecting all of others physiological and metabolic parameters evaluated, which shows high adaptation. Feed energetic efficiency evaluated was higher in the treatment with lower carbohydrate inclusion and higher protein inclusion. Specific digestive enzymes activities were higher in the treatment with higher protein inclusion. Higher hepatic glycogen reserve was also observed in the same treatment cited above. As a general conclusion it can be affirmed that different protein:energy ratio, no matter if it is lipidic or carbohydrate source, affects growth, digestive physiology and metabolism of hybrid surubim.