Este trabalho aborda o uso da realidade virtual aplicada à simulação de procedimentos invasivos em oncologia pediátrica. Para tanto, apresenta uma revisão dos conceitos relacionados à concepção de simuladores baseados em realidade virtual, descrevendo requisitos específicos como estereoscopia e interação háptica. Particularmente, é apresentado um estudo de caso em coleta de medula óssea para transplante, para o qual um simulador foi desenvolvido. Este é o primeiro trabalho em simulação cirúrgica para oncologia pediátrica baseado em realidade virtual e apresenta detalhes relacionados à implementação do simulador e aspectos relacionados à calibragem de propriedades físicas em modelos tridimensionais. O trabalho também analisa e demonstra vantagens no uso de sistemas dessa natureza voltados para o treinamento médico, apontando necessidades e novos problemas a serem tratados por simuladores futuros. / This work approaches the use of the Virtual Reality applied to the simulation of invasive procedures in pediatric oncology. It presents a revision of the concepts related to the conception of simulators based on virtual reality, describing requirements as stereoscopy and haptic interaction. As specific problem, it was made a case study in bone marrow harvest for transplant, for which a simulator was developed. This is the first work in surgical simulation for pediatrics based on Virtual Reality and it presents details related to the implementation of the simulator and aspects related to physical properties in three-dimensional models. The work also analyzes and demonstrates advantages in the use of this kind of system for medical training besides to point needs and new problems to be addressed in future work.

A pessoa com distúrbios hematológicos demonstra desarranjos físicos, emocionais e sociais. Assim, atuar nesta área é estar disposta a cuidar do indivíduo, percebendo e intervindo precocemente nas alterações manifestadas. Os tratamentos para as patologias hematológicas podem ser feitos pela radioterapia, quimioterapia e o transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH). Na maioria dos casos, a combinação destas modalidades terapêuticas faz-se necessária para o alcance do controle da doença. Após ser submetido à quimioterapia e/ou radioterapia o paciente é encaminhado para o TCTH almejando-se a cura. Estes tratamentos são altamente agressivos, acarretando prejuízos em todas as dimensões da vida do doente. A compreensão da trajetória da pessoa acometida por uma doença, desde o início dos sinais e sintomas até as perspectivas para o futuro, identificando suas idéias e condutas na luta pela sobrevivência, parte do entendimento do contexto sociocultural em que está inserida. Nessa perspectiva, o objetivo deste estudo foi identificar os modelos explicativos (MEs) para o TCTH alogênico aparentado, na visão de um grupo de pacientes. Para o seu alcance, estabelecemos como base teórica a antropologia médica, o método do estudo de caso qualitativo e a técnica de análise de conteúdo indutivo. Participaram deste estudo 11 pacientes, sendo três com leucemia mielóide aguda, quatro com leucemia mielóide crônica, dois com leucemia linfóide aguda e dois com anemia aplástica grave. As seis mulheres e os cinco homens formam um grupo de adultos em idade produtiva e suas características sociais mostram que são pessoas oriundas da classe social popular. Realizamos entrevistas semi-estruturadas, norteada por questões que integram a construção dos modelos explicativos. Posteriormente compilamos cada uma das entrevistas e seguimos para a análise de dados que se realizou em duas etapas. Reunimos as entrevistas e após várias leituras elencamos as categorias temáticas: da trajetória da doença ao tratamento especializado, os sentidos dados à doença e aos tratamentos, o lidar com a doença e os tratamentos e a vida após os tratamentos. Por estas categorias apreendemos os diversos elementos constitutivos dos modelos explicativos do adoecer e do submeter-se ao TCTH alogênico, onde evidenciamos a influência da cultura em que estão inseridos os participantes. Os entrevistados retrataram os sinais e sintomas da doença, a percepção do estar doente e suas causas, a difícil busca pela assistência à saúde, os tratamentos caseiros, a necessidade das terapêuticas, a existência de um doador compatível, as complicações e suas consequências, as dificuldades financeiras, os cuidados e as mudanças no modo de vida após os tratamentos e as perspectivas de futuro. Concluímos que a cultura é um sistema de referência para as pessoas de um grupo social, que fornece formas de pensar e agir sobre uma determinada situação ou evento. Evidenciamos exemplos da trajetória percorrida pelos participantes em busca da cura, almejando instigar os profissionais da saúde, em especial à equipe de enfermagem, que cuidam destes pacientes a olhá-los em todas as suas dimensões da vida, desejando um cuidado integral e diferenciado, integrando conhecimentos culturais ao modelo biomédico. / People with hematologic disorders face physical, emotional and social alterations. Thus, acting in this area means to be willing to care for the individual, precociously perceiving and intervening in the revealed changes. Hematologic pathologies can be treated by radiotherapy, chemotherapy and hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). In most cases, the combination of these types of therapy is needed to control the disease. After undergoing chemotherapy and/or radiotherapy the patient is subject to HSCT, aiming the cure. These treatments are highly aggressive, causing damages in all dimensions of patients lives. Understanding patients sociocultural context is necessary to comprehend the trajectory of someone affected by a disease, since the beginning of the signs and symptoms up to the perspectives for the future, identifying their ideas and behaviors in the fight for survival. In this way, this study aimed to identify the explanatory models (EMs) for allogeneic HSCT of related donors, in the view of a group of patients. In order to achieve this, the medical anthropology, the qualitative case study method and the inductive content analysis technique were established as theoretical bases. Eleven patients participated in the study, three with acute myeloid leukemia, four with chronic myeloid leukemia, two with acute lymphoid leukemia and two with severe aplastic anemia. The six women and five men are adults at reproductive age and their social characteristics show they are from the lower social class. Semi-structured interviews guided by questions that are part of the construction of the explanatory models were carried. Afterwards the interviews were compiled and analyzed in a two-phase data analysis. Interviews were gathered and after several readings, the following thematic categories were listed: from the trajectory of the disease to specialized treatment, the meanings given to the disease and treatments, dealing with the disease and treatments, and life after treatments. Different elements of the explanatory models of becoming ill and undergoing allogeneic HSCT emerged from these categories. The influence of participants cultural context was evidenced. Interviewed subjects reported the signs and symptoms of the disease, the perception of being ill and its causes, the difficult search for health care, home treatments, the need of medications, the existence of a compatible donor, complications and their consequences, the financial difficulties, care and changes in the lifestyle after treatments and the perspectives of future. It is concluded culture is a reference system to people from a social group, which provides ways of thinking and acting about a certain situation or event. Examples of the trajectory followed by the participants in the search for care is evidenced, aiming to motivate health professionals, specially from the nursing team, who delivery care to these patients, to look them in all dimensions of their lives, to provide a comprehensive and differentiated care, integrating cultural knowledge to the biomedical model.

Orientador: Maria Aparecida Custódio Domingues / Resumo: Introdução: A medula óssea é o órgão responsável pela hematopoise, fenômeno que se relaciona com a diferenciação da célula tronco hemopoética (CTH) em eritrócitos, granulócitos, monócitos, linfócitos e plaquetas. É constituída pelo tecido hematopoiético, tecido gorduroso, matriz proteica e sinusoidais e está contida no interior dos ossos esponjosos, em contato com o tecido ósseo cortical e trabecular. Em 1978, Ray Schofield conceituou nicho como local especifico, dentro da medula óssea, onde a CTH se origina, assenta e prolifera. Atualmente sabe-se que o nicho é mais do que um simples compartimento morfológico, mas um sítio funcional e dinâmico, que se remodela e influencia a função da CTH e suas progenitoras, exercendo papel definitivo na CTH normal e neoplásica. Estudos demonstram que os nichos e seus componentes celulares e proteicos, influenciam e determinam a manutenção de CTH ativas e quiescentes, sendo determinante na manutenção, progressão e recaída de doenças da medula óssea. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar na medula óssea humana, acometida por doenças primárias, secundárias e reacionais, o comportamento da CTH, descrevendo localização e quantificação destas. Material e métodos: Para realização deste estudo, foram selecionados quatro grupos de doenças hematológicas, divididas em mieloma múltiplo (n= 10), leucemia linfóide crônica (n= 10), síndrome mielodisplásica (n= 10) e reacional (n= 10). Foi realiado um estudo imuno-histoquímico para avaliação da ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Bone marrow is the organ responsible for hematopoiesis, a phenomenon that is related to the differentiation of hemopoietic stem cell (HSC) into erythrocytes, granulocytes, monocytes, lymphocytes and platelets. It consists of hematopoietic tissue, fatty tissue, protein and sinusoidal matrix and is contained within the spongy bones, in contact with the cortical and trabecular bone tissue. In 1978, Ray Schofield conceptualized a niche as a specific site within the bone marrow, where the HSC originated, settled, and proliferated. It is now known that the niche is more than a simple morphological compartment, but a functional and dynamic site, which remodels and influences the function of HSC and its progenitors, playing a definitive role in normal and neoplastic HSC. Studies demonstrate that niches and their cellular and protein components influence and determine the maintenance of active and quiescent HSC, being determinant in the maintenance, progression and relapse of diseases of the bone marrow. Objective: The aim of this study was to evaluate the behavior of HSC in the human bone marrow, affected by primary, secondary and reactional diseases, describing their location and quantification. Materials and methods: Four groups of hematological diseases were selected, divided into multiple myeloma (n = 10), chronic lymphocytic leukemia (n = 10), myelodysplastic syndrome (n = 10) and reactional (n = 10). An immunohistochemical study was performed to evaluate the marki... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2016-04-25T20:21:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria de Fatima Patu da Silva.pdf: 2895041 bytes, checksum: a2389e9eedb7123cb1f8a76e5d10ad18 (MD5) Previous issue date: 2013-11-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work is a doctoral research in Social Sciences and whose object of study has been the bone marrow donor/transplantation. This can be analyzed at least by two areas of knowledge: Anthropology and Medicine. We take the notion of gift as a founding concept of our reflection. Thus, we should remember the bone marrow as an object donated for transplantation that carries beyond the genetic and physiological capacity, power and strength to revive the receiver. In recent decade, organ transplantation has attracted reviews from various sectors of the Brazilian society, the media, on the other hand, has been playing an important role in the broad disclosure information by democratizing the discussions, sometimes heated and contradictory, and clarifies or raises doubts and fear in people. It is therefore a matter of great social relevance and as such has been treated well by society; it has been receptive to the calls of solidarity in organ donation as public health, because it is a procedure of high complexity and high cost, requiring measures of public policy planning and resource allocation, democratic and ethical criteria. This study aims to describe the profile of recipients of bone marrow in Recife and Lisbon. We performed a retrospective analysis from 2002 to 2010. Over this period, 134 patients underwent transplantation with unrelated donors of these, 107 in Lisbon and 26 in Recife. Patients transplanted in Lisbon (51.4 %) are female; while in Recife (69.2 %) are male. Are in the age group 0-17 years in Portugal (54.2 %) and Recife (50 %) diagnosed with Aplastic Anemia prevalent. However, in Lisbon prevailed diagnosis of Acute Myeloid Leukemia. The study draws attention to the fact that Lisbon performed more transplants in the age group of 30-39 years old (18.7%), different from Recife (11.5%) in the same age group. In terms of age group 18-29 years old showed a percentage of (15.9 %). Research has shown acute myeloid leukemia as the most prevalent disease in Lisbon. It is a fact that confirms the literature, to affect individuals of all ages, especially those in adulthood. This study is in the age group above 50 years old in Lisbon (6.5%) and Recife (3.8 %). We emphasize that in the period of data collection, Recife had a population of 1,537,704 and 2,821,699 people Lisbon. Although Recife has other units, only the center where the research was conducted was doing this type of transplant / Este trabalho é uma pesquisa de doutorado em Ciências Sociais e tem como objeto de estudo o doador de medula óssea/transplante. Este pode ser analisado, pelo menos, por duas áreas do conhecimento: antropologia e medicina. Tomamos a noção de dádiva como conceito fundante da nossa reflexão. Para isso, convém lembrar que a medula óssea enquanto objeto doado para o transplante carrega além da constituição genética e sua capacidade fisiológica, o poder e a força de reviver o receptor. Nas últimas décadas, o transplante de órgãos tem atraído opiniões de setores diversificados da sociedade brasileira, a mídia, por sua vez, vem cumprindo importante papel na ampla divulgação ao democratizar as informações a discussões, algumas vezes acaloradas e contraditórias, assim como esclarece ou suscita dúvidas e receio nas pessoas. É, portanto, um tema de muita relevância social e como tal, tem sido tratado tanto pela sociedade, receptiva aos apelos da solidariedade na doação de órgãos, como pela saúde pública, por se tratar de um procedimento de alta complexidade e elevado custo, exigindo medidas de planejamento de políticas públicas e alocação de recursos, critérios éticos e democráticos. Este estudo objetiva descrever o perfil dos receptores de medula óssea em Recife e Lisboa. Foi realizada uma análise retrospectiva no período de 2002 a 2010. No período analisado, 134 pacientes realizaram transplante com doadores não aparentados destes, 107 em Lisboa e 26 em Recife. Os pacientes transplantados em Lisboa (51,4%) são do sexo feminino, enquanto em Recife (69,2%) pertence ao sexo masculino. Estão na faixa etária de 0 a 17 anos em Portugal (54,2%) e Recife (50 %) com diagnóstico prevalente de Anemia Aplástica. No entanto, em Lisboa prevaleceu o diagnóstico de Leucemia Mieloide Aguda. O estudo chama a atenção para o fato de que Lisboa realizou mais transplantes na faixa etária de 30 a 39 anos (18,7%), diferente de Recife (11,5%) na mesma faixa etária. Em relação à faixa etária de 18 a 29 anos, apresentou um percentual de (15,9%). A pesquisa mostrou a leucemia mieloide aguda como a doença mais prevalente em Lisboa. É um dado que corrobora com a literatura, por afetar indivíduos de todas as idades, principalmente os que estão na fase adulta. Nesse estudo está na faixa etária acima de 50 anos em Lisboa (6,5%) e Recife (3,8%). Ressaltamos que, no período da coleta de dados, Recife tinha uma população de 1.537.704 e Lisboa 2.821.699 pessoas. Apesar de Recife possuir outras unidades, apenas o centro onde foi realizada a pTesquisa estava fazendo este tipo de transplante

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Alvaro Francisco Bosco / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Luciana Saraiva / Resumo: Este estudo avaliou a influência do plasma rico em plaquetas derivado do aspirado de medula óssea (PRP-bma) na cicatrização de defeitos de fenestração periodontal (PFD) em ratos. PFD foram criados cirurgicamente na mandíbula de 40 ratos. Os animais foram divididos randomicamente em 2 grupos: C e PRP-bma - os defeitos foram preenchidos com coágulo sanguíneo ou PRP-bma, respectivamente. Os animais foram submetidos à eutanásia aos 10 ou 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas análises histológica, histométrica e imunoistoquímica. A porcentagem de novo osso (NB), densidade do novo osso formado (DNB), novo cemento (NC) e extensão do defeito remanescente (ERD) foram avaliados histometricamente. Foram realizadas reações imunoistoquímicas para detecção de antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), sialoproteína óssea (BSP), osteocalcina (OCN) e fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP). Células imunomarcadas foram quantificadas. Os dados foram analisados estatisticamente (ANOVA; Tukey, P < 0,05). Aos 10 dias, os grupos C e PRP-bma apresentaram quantidades similares de NB e DNB, e não foi observada formação de NC. Aos 30 dias, os grupos C e PRP-bma apresentaram quantidades similares de NB e DNB; o Grupo PRP-bma mostrou significativa formação de NC, com fibras colágenas inseridas obliquamente ou perpendicularmente à superfície radicular, sendo que nenhum espécime do Grupo C apresentou formação de NC. O Grupo PRP-bma apresentou um número significativamente maior de células PCNA-postivas (aos 10 dias) e BSP-positivas (aos 10 e 30 dias) que o Grupo C. Não foram observadas diferenças significativas no número de células OCN-positivas ou TRAP-positivas entre os grupos aos 10 ou 30 dias. Pode-se concluir que o PRP-bma promoveu formação de NC com ligamento periodontal funcional / Abstract: This study evaluated the influence of platelet-rich plasma derived from bone marrow aspirate (PRP-bma) on the healing of periodontal fenestration defects (PFD) in rats. PFD were surgically created in the mandible of 40 rats. The animals were randomly divided into 2 groups: C and PRP-bma - defects were filled with blood clot or PRP-bma, respectively. Animals were euthanized at either 10 or 30 days post-operative. Histologic, histometric and immunohistochemical analyses were performed. Percentage of new bone (NB), density of newly formed bone (DNB), new cementum (NC) and extension of remaining defect (ERD) were histometrically evaluated. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA), bone sialoprotein (BSP), osteocalcin (OCN), and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) immunohistochemical staining were performed. Immunolabeled cells were quantified. Data were statistically analyzed (ANOVA; Tukey, P < 0.05). At 10 days, groups C and PRP-bma presented similar amounts of NB and DNB, NC formation was not observed. At 30 days, groups C and PRP-bma presented similar amounts of NB and DNB; Group PRP-bma showed significant NC formation, with collagen fibers inserted obliquely or perpendicularly to the root surface, while NC formation was not observed in any Group C specimen. Group PRP-bma presented a significantly higher number of PCNA-positive (at 10 days) and BSP-positive cells (at 10 and 30 days) than Group C. No significant differences in the number of either OCN-positive or TRAP-positive cells were observed between groups at 10 or 30 days. It can be concluded that PRP-bma promoted NC formation with a functional periodontal ligament / Doutor

Orientador: Célio Percinoto / Coorientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Robson Frederico Cunha / Banca: Celso Koogi Sonoda / Banca: Elenice Deffune / Banca: Saul Martins de Paiva / Resumo: A avulsão dentária é um tipo de trauma que resulta na perda da continuidade de um complexo e múltiplo compartimento de tecidos. Componentes derivados do sangue, incluindo o plasma pobre em plaquetas (PPP) e o plasma rico em plaquetas (PRP) constituem uma opção terapêutica para o reparo tecidual. O gel de PRP tem sido usado como arcabouço para células-tronco da medula óssea em Engenharia Tecidual. O propósito da presente investigação foi avaliar o efeito do PPP, PRP ativado ou não por trombina e células-tronco (CT) originárias da medula óssea associadas ao PRP no reparo de reimplantes dentários. Quatro cães foram utilizados neste estudo. PRP e PPP foram obtidos pelo método de dupla centrifugação a partir do sangue coletado da veia jugular dos animais. CT foram obtidas por aspiração da medula óssea (AMO) e isoladas pelo método de centrifugação por densidade de gradiente. A citometria de fluxo (CF) foi realizada após AMO utilizando marcadores celulares CD34 e CD90. Após 30 minutos da extração, os dentes foram reimplantados e, de acordo com a proposta metodológica, divididos em 5 grupos: Grupo I - dentes reimplantados sem material (Controle); Grupo II - dentes reimplantados com o Plasma Pobre em Plaquetas (PPP); Grupo III - dentes reimplantados com o Plasma Rico em Plaquetas ativado por cloreto de cálcio (PRP); Grupo IV - dentes reimplantados com o Plasma Rico em Plaquetas ativado por trombina de origem bovina e cloreto de cálcio (PRP + TR) e Grupo V - dentes reimplantados com células-tronco da medula óssea associadas ao PRP ativado por cloreto de cálcio (CT + PRP). Análises histológica, histomorfométrica e imuno histoquímica foram realizadas 120 dias após o reimplante. Análise de variância (ANOVA) e o teste post-hoc de Tukey foram utilizados para a análise estatística, com nível de significância de 5%. CF mostrou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental avulsion constitutes a traumatism which results in the loss of a complex and multiple tissue compartments. Blood-components products, including platelet-poor plasma (PPP) and platelet-rich plasma (PRP), constitute a therapeutic option for tissue healing. PRP gel has also been used as a scaffold for bone marrow stem cells in Tissue Engineering. This study aimed to evaluate the effect of PPP, PRP activated or not with thrombin and bone marrow stem cells (BMSC) associated with PRP on the healing of replanted teeth. Four adult hybrid dogs were used in this study. PRP and PPP were obtained trough double centrifugation technique of blood collected from the jugular vein of the animals. CTM were obtained from bone marrow aspiration (BMA) and isolated by density gradient centrifugation method. Flow Cytometry Analysis (FCA) was performed after BMA using CD34 and CD90 cells markers. After 30 minutes of extraction, teeth were replanted and, according to the methodological proposal, divided into 5 Groups: Group I - teeth replanted without any material (Control); Group II - teeth replanted with Platelet-poor Plasma (PPP); Group III - teeth replanted with Platelet-rich plasma activated by sodium chloride (PRP); Group IV - teeth replanted with Platelet-rich plasma activated by bovine thrombin and sodium chloride (PRP + TR) and Group V - teeth replanted with bone marrow stem cells associated with PRP activated by sodium chloride (BMSC + PRP). Histological, histomorphometric and immunohistochemical analysis were assessed 120 days after reimplantation. Analysis of variance (ANOVA) and Tukey post-hoc test were used for the statistical analysis, with the level of significance set at 5%. FCA showed 55.98% of CD34+ and 33.28% of CD90+ after BMA. Group V (BMSC + PRP) presented the largest areas of replacement resorption, confirmed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Custódio Domingues / Resumo: Introdução: A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) consiste em uma neoplasia hematopoiética maligna de células-tronco, caracterizada pela aquisição do gene de fusão BCR-ABL1 associado à translocação [t(9;22) (q34;q11)]. O início é insidioso com progressão lenta seguida por uma fase acelerada, que culmina na crise blástica. Os nichos da medula óssea estão relacionados com o microambiente tumoral, afetando a sobrevivência e a proliferação das células-tronco leucêmicas. Objetivos: Análise da quantidade e distribuição de células-tronco hematopoiéticas nos diferentes nichos na LMC em diferentes fases e correlação destes achados com a distribuição de galectina-3 nas fases acelerada e blástica. Material e métodos: Revisão clínico-morfológica de 20 pacientes na fase crônica da LMC, 1 paciente na fase acelerada e 1 paciente na crise blástica. Análise imunofenotípica (CD34, CD31, CD44, CD117 e galectina-3) em Tissue Microarrays para avaliação dos diferentes nichos e sua correlação com a matriz proteica. Resultados: Observou-se aumento na expressão de todos os marcadores na fase crônica quando comparados ao controle. Na fase acelerada há aumento na expressão de CD44 e galectina-3 quando comparado ao controle enquanto que na crise blástica há aumento na expressão de CD44 e CD117. Conclusão: A LMC constitui uma neoplasia mieloproliferativa em que o remodelamento dos nichos malignos favorece a manutenção das células-tronco leucêmicas. O presente estudo demonstrou elevação em todos os marcadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Chronic Myeloid Leukemia (CML) is a malignant hematopoietic stem cell neoplasm, characterized by the acquisition of the translocation-associated BCR-ABL1 gene [t(9;22)(q34;q11)]. The onset is insidious with the slow progression followed by an accelerated phase, culminating in the blast crisis. The bone marrow niches are related to the tumor microenvironment, the survival and proliferation of the leukemic stem cells. Objectives: To analyze the amount and distribution of hematopoietic stem cells in different niches in CML in different phases and correlate these findings with the galectin-3 distribution in the accelerated and blastic phases. Material and methods: Clinical-morphological review of 20 patients in CML chronic phase, 1 patient in the accelerated phase and 1 patient in the blast crisis. Immunophenotypic analysis (CD34, CD31, CD44 and galectin-3) in Tissue Microarrays to evaluate the different niches and correlation with the protein matrix. Results: We observed the presence of all markers in the chronic phase when compared to the control. In the accelerated phase there is an increase in expression of CD44 and galectin-3, when compared to control while in blast crisis there is an increase in expression of CD44 and CD117. Conclusion: CML is a myeloproliferative neoplasm in which remodeling of malignant niches favors the maintenance of leukemic stem cells. The present study demonstrated an increase in expression of all immunohistochemical markers at differen... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

As diferentes formas da desnutrição acometem milhões de pessoas em todo mundo, afetando geralmente crianças, recém-nascidos abaixo do peso para sua idade gestacional, idosos e pacientes sob nutrição parenteral. A desnutrição protéica (DP) induz atrofia em órgãos hemopoéticos, induzindo pancitopenia de sangue periférico, modifica a resposta imune específica e inespecífica, e desta forma, a associação entre doença e DP é freqüente. Alguns estudos indicam que a desnutrição produz vários efeitos celulares como redução da capacidade de proliferação, em vários órgãos. Como conseqüência da constante e elevada demanda de proteína pelo tecido hemopoético, este pode apresentar alterações qualitativas e quantitativas em condições de desnutrição protéica. Neste trabalho avaliamos os efeitos da DP sobre o ciclo celular de células de medula óssea (MO) de camundongos. Camundongos Swiss machos, adultos, foram alimentados ou com ração contendo 2% de proteína (grupo desnutrido, D) ou com ração com 20% de proteína (grupo controle, C). A fonte protéica utilizada foi caseína. Após perda de 25% de peso corpóreo do grupo D, colheu-se sangue e células da MO e do baço. As células do sangue foram quantificadas bem como as do baço e da MO. As células da medula óssea foram posteriormente coradas com laranja de acridina (AO) e Iodeto de propídeo (PI), avaliando-se, por citometria de fluxo, respectivamente DNA/RNA e DNA. Estes mesmos procedimentos foram executados após 10 e 15 dias da administração, em ambos os grupos, do quimioterápico 5-Fluoracil (que leva as células a estado de repouso -G0). Os animais do grupo desnutrido, assim como aqueles após 10 e 15 dias da administração do 5-Fluoracil, apresentaram anemia, além de redução significativa de número de hemácias, hematócrito e reticulócitos, e alterações quantitativas nas linhagens medulares e do baço. Os dados da citometria de fluxo (expressos em % de células da população analisada) mostram que em DP, uma maior quantidade de células da MO encontra-se fora do ciclo celular (G0), e uma menor população de células nas fases proliferativas do ciclo celular, S/G2/M, em populações de todas linhagens medulares, exceto eritróide e linfóide B, e todo os estágios maturativos, assim como células Sca-1, células tronco murina. Esta maior população celular em G0 também é observada após o efeito do 5-Fluoracil, o que corrobora a suposição de incapacidade de retorno ao ciclo celular por parte das células de medula dos animais desnutridos. Estes resultados podem explicar, em parte, a hipoplasia medular e pancitopenia sanguínea. / The different forms of the malnutrition attacks millions of people in everybody generally, affecting children, just-born below of the weight for its gestacional age, aged and patient under parenteral nutrition. The protein malnutrition induces atrophy in haematopoietic organs, inducing pancitopenia of peripheral blood, modifies the specific and inespecífica immune reply, and of this form, the association between illness and DPE are frequent. Some studies indicate that the malnutrition produces some effect cellular as reduction of the proliferation capacity, in some organs. As consequence of the constant and raised protein demand for the bone marrow, that can present qualitative and quantitative alterations in conditions of protein malnutrition. In this work we evaluate the effect of the DP on the cellular cycle of cells of bone marrow of mice. Mice Swiss males, adults, had been fed or with ration I contend 2% of protein (unfed group, D) or with ration with 20% of protein (group has controlled, C). The used protein source was casein. After loss of 25% of corporeal weight of group D, harvested blood and cells of bone marrow and spleen. The cells of the blood had been quantified as well as the ones of spleen and bone marrow. The cells of the bone marrow later had been coradas with orange of acridine (AO) and propidium iodide of (PI), evaluating, for citometria of flow, respectively DNA/RNA and DNA. These same procedures had been executed after 10 and 15 days of the administration, in both the groups, of the 5-Fluoracil (that it takes the cells the state of rest - G0). The animals of the malnutrition group, as well as those after 10 and 15 days of the administration of the 5-Fluoracil, had presented anemia, beyond significant reduction of number of erythrocytis, hematocrit and reticulocytes, and quantitative alterations in the progenitors by bone marrow and of spleen. The data of the flow cytometric (express in % of cells of the analyzed population) show that in DP, a bigger amount of cells of outside meets bone marrow of the cellular cycle (G0), and a lesser population of cells in the proliferative phases of the cellular cycle, S/G2/M, in populations of all progenitors by bone marrow, except erythroids and lymphoids B, and all the maturative periods of training, as well as cells Sca-1, stem cells murina. This bigger cellular population in G0 also is observed after the effect of the 5-Fluoracil, what it corroborates the assumption of incapacity of return to the cellular cycle on the part of the cells of marrow of the malnutrition animals. These results can explain, in part, the hipoplasia to medular and sanguineous pancitopenia.

Foi estudado experimentalmente o desempenho biológico de um tipo de enxerto ósseo homógeno, processado quimicamente, esterilizado em óxido de etileno e embebido em medula óssea autógena. De cães doadores adulto-jovens foram obtidos blocos cilíndricos de 1,0 x 1,0 cm da epífise distal do fêmur, com auxílio de uma trefina. Os ossos assim obtidos foram clareados, desengordurados, esterilizados em óxido de etileno e mantidos em estoque. Trinta cães adultos jovens foram usados como receptores do enxerto e foram alocados em dois grupos. No grupo I (experimental) os animais foram operados e, criado, transversalmente, com trefina de 1,0 cm de diâmetro externo, um espaço cilíndrico de 1,0 cm de diâmetro por 1,0 cm de altura na epífise distal do fêmur direito, onde foi encaixado o enxerto preparado e que foi previamente embebido em medula óssea do próprio animal retirada por punção óssea na crista ilíaca. Três semanas depois, o mesmo animal foi submetido ao mesmo procedimento cirúrgico no fêmur esquerdo. Os cães deste grupo foram sacrificados seis semanas após a primeira cirurgia. O grupo II constituiu o controle e foi formado por vinte cães adulto-jovens em que, primeiro, foi retirado um cilindro de osso da epífise distal do fêmur esquerdo e, em seguida, no mesmo tempo cirúrgico, foi criado o mesmo espaço no fêmur direito, com uma trefina de um centímetro de diâmetro interno e, então, encaixado o bloco de osso retirado do fêmur do outro lado do mesmo animal. Estes animais foram subdivididos em dois subgrupos de dez cães cada, em relação ao tempo de sacrifício. Em um subgrupo os cães foram sacrificados três semanas após, enquanto que, no outro subgrupo, foram sacrificados seis semanas após a cirurgia de implantação do enxerto. O processo de incorporação do enxerto foi avaliado pela histologia convencional e histologia de fluorescência óssea, pela injeção prévia de tetraciclina. A comparação foi entre os grupos I e II, nos períodos de três e seis semanas pós-implante. As áreas dos enxertos homógenos com 21 dias pós-implante, geralmente mostraram-se visíveis, na maioria das vezes, formadas por trabéculas finas irregulares, sem osteócitos, porém com áreas de neoformação óssea. Já os enxertos autógenos, a área do osso implantado era bem visível, com trabéculas de osso antigo, mais adelgaçadas, em menor número que o osso receptor, porém com intensa deposição de osso neoformado. Para os enxertos homógenos com 42 dias pós-implante, a área do enxerto estava bem definida e integrada ao osso adjacente, composta por trabéculas antigas com predomínio de osso neoformado sobre a superfície. Nos enxertos autógenos com 42 dias pós-implante, as trabéculas tinham orientação comum, com espaço intertrabecular preenchido por tecido conjuntivo denso, em algumas áreas, e por medula óssea madura em outras. O enxerto homógeno processado e esterilizado em óxido de etileno e embebido em medula óssea apresentou boa atividade biológica, embora, com integração mais lenta e menor desempenho em relação ao enxerto autógeno, o que o torna um bom substituto para este último. / In the present investigation the biological performance of the homogenous bone graft chemically processed, sterilized with ethylene oxide and soaked in autogenous bone marrow was investigated. Thirty dogs were assigned into two groups. In group I, ten young adult dogs received a cylindrical block of the above mentioned graft. Previously, the bone graft was immersed in autogenous bone marrow and then inserted in a cylindrical hole, with the same dimensions, created at the distal femoral epiphysis of the right femur. After three weeks the same animal was submitted to the same surgical procedure, but on the left femur. The animal was killed six weeks later. The group II was made up of twenty dogs that received an autogenous graft obtained from the left distal femur and implanted into the right distal femur (same shape, dimensions and technique). From this group, 10 dogs were killed three weeks later and 10 dogs were killed six weeks later. The graft incorporation was evaluated by light microscopy and fluorescence microscopy. Results showed that for 21 day implant in the homogenous group, there was osteogenesis at the periphery of the bone graft, but most of its trabeculae were still inviable. Conversely, for the autogenous grafts newly-formed bone was found on the trabecular surface, even in the inner parts of the implanted bone. At 42 days there was active osteogenesis in homogenous grafts with new bone deposition on the trabeculae but, in two cases, the graft was not incorporated (reabsorbed in one case and sequestred in the other one). The autogenous graft showed newly formed bone arranged in a well mature fashion with new bone marrow filling the intertrabecular gaps. It was concluded that the homogenous graft as prepared herein is a good alternative for autogenous grafts, although with a slower osteogenesis rate an less biological performance.

Em vista das limitações éticas em torno da obtenção de células-tronco de fetos humanos, o cão é uma alternativa para estes estudos. Além disso, a terapia celular proporciona novas expectativas para o tratamento na espécie. Realizamos o estudo comparativo das células isoladas de saco vitelino, fígado e medula óssea de fetos caninos. As células foram analisadas microscopicamente e ultra estruturalmente. O imunofenótipo das células foi avaliado através de marcadores. Caracterizamos a plasticidade, o cariótipo e o potencial teratogênico destas células. Após expansão as células progenitoras formaram colônias com morfologia fibroblastóide. As células progenitoras do saco vitelino e medula óssea são compostas por: células com alta proporção núcleo-citoplasma e células com citoplasma rico em organelas, enquanto que as células progenitoras do fígado eram semelhantes à célula epitelial e células ricas em organelas. As células-progenitoras dos três tecidos fetais foram positivas para os anticorpos nestina e vimentina, mas negativas para CD45 e CD13. Células progenitoras de medula óssea foram positivas para o marcador CD44. Células progenitoras do fígado e medula óssea expressaram a proteína citoqueratina-18, enquanto as do saco vitelino expressaram ve-caderina. Células positivas para Oct3/4 foram detectadas em todas as células progenitoras. As células-progenitoras do saco vitelino e medula óssea diferenciaram-se em tecidos ósseo, cartilaginoso e muscular; já as do fígado para tecido ósseo e muscular. Nenhum tipo celular diferenciou-se em adipócitos. As células progenitoras da medula óssea diferenciaram em células semelhantes a neurônios. Sugere-se a presença de progenitores semelhantes a células mesenquimais e epiteliais. Todas as células mantiveram o cariótipo estável e não formaram tumores. Células progenitoras de medula óssea apresentaram maior capacidade de proliferação e diversidade de diferenciação. Sugere-se que estas células são possíveis candidatas para a terapia celular. / The use the human fetuses for stem cells isolation have ethical limitations. In this context the dog is an excellent candidate to fetal stem cells. Furthermore, these cells can be used in cell therapy of canine diseases We aimed at isolation and comparative characterization of progenitor cells from yolk sac, liver and bone marrow of canine fetuses. Cells were characterized using stem cells antibodies. Differentiation assays as well as karyotype analysis were performed. Teratogenic properties this cells were evaluated. After establishment of primary culture, best proliferation potential was observed in bone marrow progenitor cells. Bone marrow and liver progenitor cells were more efficient in CFU-F assay, then yolk sac progenitor cells. Evidenced by TEM cells with a high nuclear-to-cytoplasmic ratio and cells with cytoplasm rich in organelles. Cells isolated from liver showed epithelial-like morphology and cytoplasm rich in organelles. The yolk sac, liver bone marrow cells reacted positively with nestin and vimentin, being negative to CD45 and CD13 antibodies. Additionally bone marrow progenitor cells were positive to CD44. Bone marrow and liver progenitor cells reacted positively with cytokeratin 18. Yolk sac progenitor cells were positive to ve-cadherin. A few Oct3/4 positive cells were found in yolk sac, liver and bone marrow. Yolk sac and bone marrow progenitor cells showed successful osteogenic, chondrogenic, myogenic differentiation. Differentiation liver progenitor cells were able to bone and muscle cells. The bone marrow progenitor cells were able to produce neuron-like cells. None of progenitor cells showed adipogenic differentiation. The study suggests the presence of mesenchymal-like and epithelial-like progenitor cells. All the karyotype remained and failed to induce the formation of tumors. Stem cells from bone marrow showed high diversity of differentiation than other cell types. It is suggested that these cells are possible candidates for cell therapy.