Estudos anteriores demonstraram que a crotoxina (CTX), o principal componente do veneno de Crotalus durissus terrifucus, apresenta ação anti-inflamatória, inibindo a migração celular e a atividade fagocítica de neutrófilos peritoneais. Esses efeitos inibitórios são prolongados, uma vez que podem ser observados até 14 dias após a administração de uma única dose dessa toxina. Considerando-se a vida média curta dos neutrófilos, é difícil explicar como a ação inibitória da CTX sobre os neutrófilos circulantes e peritoneais persiste por períodos prolongados após a administração de uma única dose da toxina. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito in vitro e in vivo da CTX sobre a atividade funcional dos neutrófilos da medula óssea de camundongos e alguns dos mecanismos moleculares envolvidos na ação inibitória da CTX sobre as funções avaliadas. Para os ensaios in vitro, os neutrófilos foram incubados com a CTX (0,08 μg/mL), por 1 ou 24 horas. Para os ensaios in vivo, os animais foram pré-tratados com uma única administração de CTX (44 mg/kg), 1 dia antes do isolamento das células. Uma vez obtidos os neutrófilos, os seguintes parâmetros funcionais foram avaliados: quimiotaxia, adesão à fibronectina, fagocitose, produção de espécies reativas do oxigênio e desgranulação. Os resultados obtidos demonstraram que a CTX, in vitro e in vivo, inibiu os processos de quimiotaxia, adesão à fibronectina e fagocitose de partículas opsonizadas, entretanto não alterou a produção de espécies reativas do oxigênio ou a desgranulação em neutrófilos da medula óssea. Esses resultados demonstram que a CTX induz efeito inibitório sobre a funcionalidade dos neutrófilos da medula óssea, particularmente sobre funções associadas à polimerização de actina e consequente reorganização do citoesqueleto. Ainda, com o objetivo de elucidar os possíveis mecanismos envolvidos neste efeito inibitório, foram realizados ensaios para a análise da expressão do receptor CR3, bem como para a avaliação da expressão total e da atividade de proteínas de sinalização intracelular envolvidas na polimerização de actina nos neutrófilos. Os resultados obtidos mostraram que a CTX inibiu a expressão de ambas as subunidades (CD11b e CD18) do receptor CR3, bem como inibiu a atividade de Syk, Vav1, Cdc42, Rac1 e RhoA e a expressão da subunidade 1B do complexo Arp2/3. Em conjunto, os resultados desse estudo mostraram que a CTX inibe a funcionalidade dos neutrófilos da medula óssea e que essa ação está associada à inibição do receptor CR3, bem como à inibição da atividade de Syk e de suas proteínas downstream, o que resulta na redução da formação de filamentos de F-actina. Os resultados desse estudo comprovam a hipótese de que ação inibitória prolongada da CTX sobre a atividade dos neutrófilos circulantes e peritoneais está associada a alterações funcionais dos neutrófilos da medula óssea. Ainda, considerando-se a participação central dessas células na resposta inflamatória aguda, esse estudo contribui para a elucidação do efeito anti-inflamatório prolongado da CTX / Previous studies demonstrated that crotoxin (CTX), the main component of Crotalus durissus terrificus venom, presents anti-inflammatory properties, inhibiting cell migration and the phagocytic activity of peritoneal neutrophils. These inhibitory effects are long-lasting, since it can be observed up to 14 days after a single administration of this toxin. Considering the short half-life of neutrophils, it is difficult to explain how the inhibitory effect of CTX on circulating and peritoneal neutrophils persists for long periods after a single injection of this toxin. Thus, the aim of this study was to evaluate the in vitro and in vivo effect of CTX on the functionality of bone marrow neutrophils from mice and some of the molecular mechanisms involved on the inhibitory effect of CTX on these functions. For in vitro assays, neutrophils were incubated with CTX (0,08 μg/mL), for 1 or 24 hours. For in vivo assays, the animals were pretreated with a single administration of CTX (44 mg/kg), 1 day before the isolation of cells. Once obtained the neutrophils, the following functional parameters were evaluated: chemotaxis, adhesion to fibronectin, phagocytosis, reactive oxygen species production and degranulation. The results demonstrated that CTX, in vitro and in vivo, inhibited the processes of chemotaxis, adhesion to fibronection and phagocytosis of opsonized particles, however, it did not alter the reactive oxygen species production and degranulation. These results showed that CTX induces an inhibitory effect on the functionality of bone marrow neutrophils, particularly on functions that depend on actin polymerization and cytoskeleton rearrangement. Furthermore, to elucidate some possible mechanisms involved on this inhibitory effect, assays to analyze the expression of the receptor CR3, as well as, assays to analyze the total expression and activity of signaling proteins involved on actin polymerization were done. The results showed that CTX inhibited both subunits of CR3 (CD11b and CD18) and the activity of Syk, Vav1, Cdc42, Rac1 and RhoA and the expression of the subunit 1B from Arp2/3. Together, the results presented herein demonstrate that CTX inhibits the functionally of bone marrow neutrophils and that this effect is associated to the inhibition of CR3 receptor and inhibition of the activity of Syk and its downstream signaling proteins, which results in the decrease of F-actin. The results prove the hypothesis that the long-lasting inhibitory effect of CTX on the activity of circulating and peritoneal neutrophils is associated to functional modifications of bone marrow neutrophils. Besides, considering the central role of these cells on the inflammatory response, this study contributes to the better understanding of the long-lasting anti-inflammatory effect of CTX

O Exame de Medula Óssea (EMO) permite avaliação citológica da medula, sendo útil no diagnóstico e monitoramento de desordens hematológicas, quando exames mais simples não são suficientes para esclarecer o quadro clínico. Investigação clínica e laboratorial completa deve ser realizada para garantir que a indicação apropriada exista. São requeridas pelo menos duas colorações (Romanowsky e Azul da Prússia), onde devem ser avaliadas a qualidade da amostra, celularidade global da mesma, contagem diferencial de células nucleadas, relação Mielóide/Eritróide bem como cuidadosa avaliação quantitativa e qualitativa das três linhagens hematopoéticas (Granulocítica, Eritróide e Megacariocítica). O EMO fornece informações relevantes no diagnóstico e monitoramento de Leucemias/Linfomas, Mieloma Múltiplo (MM), Síndrome Mielodisplásica (SMD), Aplasia medular, doença metastática na Medula Óssea (MO), infecções em HIV positivos, febre de origem desconhecida e investigação de citopenias. Tendo em vista a classificação da OMS de 2008 para neoplasias mielóides e leucemias agudas cabe ressaltar a importância de unir achados citogenéticos, dentre os quais se destacam atualmente as mutações gênicas FLT3, KIT, NPM1 e CEBPA, aos achados morfológicos, imunofenotípicos, citoquímicos e clínicos, alcançando desta forma marcadores diagnósticos e prognósticos precisos que servem como guia para um tratamento eficaz. Este estudo tem por objetivo identificar as principais indicações para o EMO no HCPA bem como verificar a acurácia das mesmas. Foram analisados 400 pacientes submetidos ao EMO na Unidade de Hematologia do HCPA no período de Janeiro a Dezembro de 2009, tendo sido resgatados todos os resultados do Aspirado de Medula Óssea bem como dados clínicos e laboratoriais relevantes obtidos do prontuário médico. Verificou-se que cerca de metade dos pacientes submetidos ao EMO em nosso centro são para controle de tratamento, o que está de acordo com as características do mesmo, o qual é referência regional para tratamento de doenças malignas. Nos pacientes que realizam o exame com propósito diagnóstico as indicações principais são suspeita de Leucemia e MM. Nos 260 pacientes com suspeita de doença hematológica primária observou-se confirmação da mesma em 61% dos casos, nos 39% restantes foram encontradas alterações qualitativas e/ou quantitativas (29%), MO normal (7%) e amostra insuficiente/diluída (3%). Dos pacientes que fizeram o exame com propósito diagnóstico 20.5% não fizeram biópsia. Com relação à acurácia da indicação, encontrou-se que 7 pacientes (2%) provavelmente não deveriam ter sido submetidos a este procedimento. Ressaltamos a importância de realizar em todos os casos Aspirado e Biópsia de MO simultaneamente uma vez que seus achados devem ser correlacionados e se a Biópsia for omitida o patologista pode não obter a informação máxima requerida. / The Bone Marrow Examination (BME) permits cytological assessment of Marrow, being useful in the diagnosis and monitoring of hematological disorders, when simpler tests are not sufficient to clarify the clinical picture. Are required at least two colors (Romanowsky and Prussian blue), it should be evaluated the quality of the sample, the same overall cellularity, differential count of nucleated cells, myeloid:erythroid (M:E) ratio and carefull evaluation quantitative / qualitative from the three lineages of hematopoietic (granulocytic, erythrocytic and megakaryocytic). The BME provides information relevant to diagnosis and follow-up of leukemia/lymphoma, multiple myeloma (MM), myelodysplastic syndrome (MDS), marrow aplasia, bone marrow (BM) metastatic disease , infections in HIV positive, pyrexia of unknown origin and investigation of cytopenias. The 2008 classification of the World Health Organization (WHO) to the myeloid neoplasms and acute leukemia highlight the importance of join cytogenetic findings - bring out currently FLT3, KIT, NPM1 and CEBPA gene mutations - to the morphologic, immunophenotypic, cytochemical and clinical findings reaching this way accurate diagnostic and prognostic markers that serve as a guide to effective treatment. This study aims to identify the main indications for the BME at HCPA and to verify their accuracy. It were analyzed 400 patients submitted to BME in the Hematology Unit of HCPA in the period January to December 2009, having been rescued the bone marrow aspirate results as well as all relevant clinical and laboratory data obtained from the medical records. It was found that about half of patients submit BME in our center are to control treatment, which agrees with the characteristics of it, it is a regional referral center for treatment of malignancies. In patients who perform the test with diagnostic purpose the main indications were suspected leukemia and MM. In 260 patients with suspected primary hematological disease 61.2% turned out to be the case, the remaining 38.8% had quantitative and/or qualitative BM alterations (29.6%), normal MO (6.5%) and insufficient sample or diluted (2.7%). Of the patients who took the exam with diagnostic purpose 20.5% had no biopsy. With respect to accuracy of indication, it was found that 7 patients (2%) probably should not have undergone this procedure. We emphasize the importance of performing in all cases aspirate and biopsy since their findings must be correlated and furthermore if the biopsy is omitted the pathologist can not get the maximum information required.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 flavioaugustonaoum_tese.pdf: 375547 bytes, checksum: a77630a0cfb1dd1d987a557c2f5c1961 (MD5) Previous issue date: 2006-08-25 / High-dose chemotherapy with hematopoietic stem-cell transplantation (HCT) is a modality of treatment that has been used for an increasing number of diseases. However, the outcome and applicability of HCT are limited by the toxicity and mortality associated with this procedure. It is presumed that iron overload and oxidative stress with free radicals production may be associated with the complications observed after HCT. Objective: Evaluate the onset and evolution of iron overload and oxidative stress at early and late phases of HCT, and correlate this events with clinical characteristics pre and post-transplant. Patients and methods: Laboratorial markers of iron overload (serum iron, transferrin saturation and ferritin) and oxidative stress (uric acid, albumin, superoxide dismutase (SOD) and metaemoglobin) were analyzed in 21 patients undergoing allogeneic or autologous HCT. The parameters were determined before HCT, on day 0, day +14 and at 6 months post-transplant, and the results were correlated with clinical antecedents, engraftment and complications observed after HCT. Results: After high-dose chemotherapy there was a marked increase in all iron overload parameters and a reduction of uric acid and albumin levels, indicating the presence of oxidative stress. Except for ferritin levels, all the parameters that were altered after conditioning regained baseline levels at 6 moths post-HCT. Previous red blood cell transfusions correlated mainly with ferritin levels. Citotoxic treatment before HCT was associated with increased basal levels of all iron parameters and reduced acid uric concentration on day +14. Suppression of hematopoiesis, accessed by engraftment markers, was associated with iron overload (increased levels of serum iron and transferrin saturation) and oxidative stress exacerbation (reduced uric acid and SOD concentrations). Within the group transplanted in remission, patients who developed grades III-IV toxicity had higher baseline levels of iron parameters. Transplant-related mortality was increased in patients with high levels of transferrin saturation on day 0. Conclusion: Iron overload and oxidative stress are acute complications observed after high-dose chemotherapy for HCT that are probably related to delayed hematological recovery and increased morbi-mortality post-transplant. It is suggested that this parameters may be used as markers of engraftment and toxicity after HCT. / A quimioterapia de altas doses com transplante de células precursoras hematopoiéticas (TCPH) é uma modalidade terapêutica utilizada para um número cada vez maior de doenças. Entretanto o sucesso e a aplicabilidade desse tratamento são limitados pela toxicidade e mortalidade inerentes à quimioterapia de altas doses. Especula-se que a sobrecarga de ferro e o estresse oxidativo com geração de radicais livres possam estar relacionados às complicações observadas no TCPH. Objetivo: Analisar a presença e a evolução da sobrecarga de ferro e do estresse oxidativo nas fases precoce e tardia do TCPH, e correlacioná-los aos dados clínicos pré e pós-transplante. Casuística e método: Parâmetros laboratoriais de sobrecarga de ferro (ferro sérico, saturação da transferrina e ferritina) e estresse oxidativo (ácido úrico, albumina, superóxido dismutase (SOD) e metaemoglobina) foram analisados em 21 pacientes submetidos a TCPH alogênicos e autogênicos. As determinações laboratoriais foram realizadas antes do TCPH, no D0, no D+14 e após 6 meses de transplante, e correlacionadas com as características clínicas dos pacientes, enxertia e complicações observadas após o TCPH. Resultados: Após a quimioterapia de altas doses houve elevação acentuada de todos os parâmetros de sobrecarga de ferro e redução dos valores dos valores de ácido úrico e albumina, indicando presença de estresse oxidativo. Com exceção da ferritina, os parâmetros que se alteraram após o condicionamento retornaram aos valores basais após 6 meses de TCPH. O número de transfusões prévias de concentrados de hemácias se correlacionou principalmente com os valores de ferritina. A realização de quimioterapia prévia ao TCPH foi associada à valores basais elevados do perfil de ferro e redução da concentração de ácido úrico no D+14. A supressão da atividade hematopoiética, analisada por meio dos parâmetros de enxertia, esteve associada à sobrecarga de ferro (elevação do ferro sérico e da saturação da transferrina) e à exacerbação do estresse oxidativo (redução dos valores de ácido úrico e de SOD). Dentre os pacientes transplantados em remissão completa, o perfil de ferro basal fora mais elevado naqueles que desenvolveram toxicidade graus III-IV. A mortalidade precoce relacionada ao transplante foi maior nos pacientes que apresentaram valores elevados de saturação da transferrina no D0. Conclusão: A sobrecarga de ferro e o estresse oxidativo são eventos que ocorrem de forma aguda após a quimioterapia de altas doses para TCPH e estão, aparentemente, relacionados à recuperação hematológica mais demorada e ao aumento da morbi-mortalidade no pós-transplante. Sugere-se que os parâmetros estudados sejam adotados como marcadores de enxertia e de toxicidade pós-TCPH.

A síndrome mielodisplásica primária (SMD) compreende um grupo de doenças hematopoéticas clonal de célula tronco pluripotente cacacterizada por vários graus de pancitopenia e alterações morfológica das células hematopoeticas e risco aumentado de transformação para leucemia mielóide aguda. A citogenética e a morfologia da medula óssea desempenham um papel fundamental para o diagnóstico e o prognóstico desses pacientes. Alterações cromossômicas são encontradas em aproximadamente 30-50% dos casos. Devido à importância da análise desses fatores para escolha terapêutica, torna-se necessário definir as alterações morfológicas e citogenéticas que possam contribuir para o prognóstico. Esse trabalho visa correlacionar as características morfológicas e citogenéticas da medula óssea em pacientes com SMD primária com as classificações OMS e FAB e com o IPSS. Foram estudados 32 pacientes com SMD primária diagnosticados entre 2000 e 2009 no HUPE-UERJ. As características clínicas foram analisadas através do levantamento de prontuários. A análise citogenética foi feita pela técnica de bandeamento GTG em células da medula ossea. A análise morfológica da biópsia de medula óssea e do mielograma foram realizadas através da revisão de lâminas. Vinte e três pacientes foram classificados em estágios iniciais da doença (22 AR, 1 ARSA) e 9 em estágio avançado AREB de acordo com a FAB. Alterações cromossômicas foram detectadas em 16 pacientes (50%). As mais frequentes foram: del(11)(q23) e del(17p). Dos pacientes com doença avançada, seis (66%) apresentaram aumento significativo da relação M:E (p=0,003) e sete (77%) possuíam alterações arquiteturais acentuadas (p<0,001) em comparação ao grupo de doença inicial. Pacientes classificados como intermediário 2 e alto risco pelo IPSS tiveram importante perda arquitetural (p<0,001), número significativamente maior de micromegacariócitos (p=0,017) e seis (85%) sofreram transformação leucêmica (p=0,006). ALIP foi significantemente aumentada nos pacientes de pior prognóstico (p=0,0 1) e naqueles com doença avançada (p=0,001). Nossos resultados apresentaram implicações potenciais para o diagnóstico e o prognóstico da SMD primária. As alterações morfológicas foram associadas com as classificações FAB, OMS e com os grupos de risco segundo o IPSS. / The primary myelodysplastic syndrome (MDS) comprises a heterogeneous group of clonal bone marrow disorders characterized by varying degrees of pancytopenia and morphological abnormalities of hematopoietic cells, and an increased risk of transformation into acute myeloid leukemia. The morphology and the cytogenetic of bone marrow play a key role in the diagnosis and the prognosis. Chromosomal abnormalities are found in 30-50% of cases. Due to the importance of analyzing these factors for therapeutic choice, it becomes necessary to define the morphological and the cytogenetic changes which could contribute to the prognosis.The aim of this study was to analyze the morphological and cytogenetic features of bone marrow and their correlations with FAB and WHO clasification and IPSS. We studied 32 patients with primary MDS between 2000 - 2009. The clinical data was recovered from medical records. Morphological characteristics were analyzed through a review of bone marrow biopsies and mielogram slides. Cytogenetic analysis was performed by GTG banding from bone marrow cells. The patients were classified according to FAB in initial stages: RA (22 patients) and RARS (1 patient) and nine in advanced stages - RAEB. Chromosomal abnormalities were detected in 16 patients (50%). The most frequent abnormalities were: del(11)(q23) and del(17p). Patients with advanced disease, six (66%) had significant increased M:E ratio (p=0.003) and seven patients (77%) had increased architectural changes (p<0.001). Patients classified as intermediary 2 and high risk according IPSS had important architectural loss (p<0.001), presence of micromegakaryocyte was considered significant higher (p=0.017) and six patients (85%) underwent leukemia transformation (p=0.006). ALIP was significant higher in the patients with a worse prognosis (p=0.021) and advanced stage of disease (p=0.001). Our results showed potential implications for diagnosis and prognosis of MDS. The morphological findings in this study were associated with FAB and WHO groups and prognostic risk (IPSS).

Introdução: A diarréia por Clostridium difficile é uma das principais causas de diarréia infecciosa associada à assistência à saúde. Objetivo: Descrever os casos e a incidência de diarréia por C. difficile em pacientes hematológicos e TCTH internados na enfermaria da Hematologia e do Transplante de Medula óssea do Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP). Métodos: Foi utilizada uma ficha para coleta de dados de todos os pacientes na unidade de hematologia e TCTH do HC-FMUSP que tinham resultado positivo para toxina A/B do C. difficile durante o período de janeiro 2007 a junho de 2011 e criado um banco de dados no programa Epiinfo. Os desfechos avaliados foram forma grave de doença e óbito até 14 dias da diarréia. Qui-quadrado para tendência foi usado para avaliar a incidência de diarréia por C. difficile durante o período do estudo. Resultados: Um total de 69 episódios foi identificado em 64 pacientes em 439 pacientes suspeitos. Na distribuição temporal o qui-quadrado para tendência evidenciou que o número de casos suspeitos de diarréia por C. difficile permaneceu estável (p=0,418), em contraste com o aumento do número de casos confirmados (p=0,0006). A incidência de diarréia por C. difficile por 1.000 pacientes variou de 0,65 a 5,45 durante o período do estudo. O qui-quadrado para tendência evidenciou aumento do número de casos confirmados de C. difficile nas unidades de TMO (p=0,00004) e Hematologia (p=0,006). Já, a incidência de diarréia por C. difficile por 1.000 neutropênicos dia variou de 0,78 a 5,45 durante o período do estudo. A maioria 68% dos pacientes era do gênero masculino, a média de idade foi 38 anos. A doença de base mais comum foi Leucemia mielóide aguda (44%), destes 46% estavam neutopênicos, 45% TCTH alogênicos, 88% dos pacientes usaram antibióticos prévios. A maioria dos pacientes 88% recebeu tratamento com metronidazol via oral, 37% tiveram resposta parcial nos primeiros sete dias de tratamento, 57% terminaram o tratamento e três pacientes tiveram recidiva, 24% evoluíram para óbito. A análise bivariada dos fatores de risco associados com a forma grave de diarréia por C. difficile, identificou o tipo de transplante alogênico como o único fator de risco significantivo, já a análise multivariada não identificou nenhum fator de risco independente. A análise bivariada de fatores de risco associados com óbito até 14 dias do diagnóstico de diarréia por C. difficile, identificou o tipo de transplante alogênico, forma grave de doença, internação em UTI e uso de linezolida como fatores de risco para óbito e Linfoma como protetor. Os fatores de risco independentes associados com óbito foram forma grave de doença, internação em UTi e uso de linezolida. Conclusão: A incidência de infecção por C. difficile durante o período do estudo aumentou, entretanto, a manifestação da forma grave da doença se manteve estável. Os fatores de risco independentes associados com óbito foram forma grave de doença, internação em UTI e uso de linezolida / Introduction: Diarrhea caused by Clostridium difficile is one of the main causes of infectious diarrhea associated with healthcare. Objective: To describe cases and the incidence of diarrhea by C.difficile in hematological and HSCT inpatients of the infirmary of Hematology and Bone Marrow Transplant of the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP). Methods: A form was used to collect data from all patients in the hematology and HSCT unit of the HCFMUSP who showed positive results for toxin A/B of the C. difficile during the period from January 2007 to June 2011, and to create a databank in the Epiinfo program. The outcomes evaluated were the severe form of the disease and death within 14 days of the [onset of] diarrhea. The Chi-squared test for tendency was used to evaluate the incidence of diarrhea by C. difficile during the study period. Results: A total of 69 episodes were identified in 64 patients in 439 suspect patients. In the temporal distribution, the chi-squared test for tendency evidenced that the number of cases of suspected diarrhea due to C. difficile remained stable (p=0.418), in contrast with the increase in number of confirmed cases (p=0.0006). The incidence of diarrhea by C. difficile per 1,000 patients varied from 0.65 to 5.45 during the study period. The chi-squared test for tendency demonstrated an increase in number of cases confirmed of C. difficile in the BMT TMO (p=0.00004) and Hematology (p=0.006) units. On the other hand, the incidence of diarrhea by C. difficile per 1,000 neutropenic individualsday varied from 0.78 to 5.45 during the study period. Most of the 68% of patients were of the male gender; the average age was 38 years. The most common underlying disease was acute myeloid leukemia (44%); of these, 46% were neutropenic, 45% HSCT allogeneic, and 88% of the patients had previously used antibiotics. Most of the patients (88%) received treatment with oral metronidazole, 37% had a response in the first seven days of treatment, 57% finished the treatment, three patients experienced relapse, and 24% died. The bivariate analysis of the risk factors associated with the severe form of diarrhea by C. difficile, identified the type of allogeneic transplant as the only significant risk factor, whereas the multivariate analysis did not identify any independent risk factor. Bivariate analysis of risk factors associated with death within 14 days of the diagnosis of diarrhea due to C. difficile, identified the type of allogeneic transplant, severe form of the disease, stay in the ICU, and use of linezolide as risk factors for death, and Lymphoma as a protector. Independent risk factors associated with death were the severe form of the disease, stay in the ICU, and use of linezolide. Conclusion: The incidence of infection by C. difficile during the study period increased; nevertheless, the manifestation of the severe form of the disease remained stable. The independent risk factors associated with death were the severe form of the disease, stay in the ICU, and use of linezolide

Nesta pesquisa foi avaliada a incidência e a severidade da mucosite oral em pacientes que foram submetidos à adequação bucal previamente ao Transplante de Medula Óssea. Foi realizado exame clínico e radiográfico dos pacientes portadores de Leucemia Mielóide Crônica que estavam se preparando para o transplante. Após a avaliação inicial dos pacientes foram realizados os tratamentos odontológicos necessários para a remoção de quaisquer focos de infecção bucal. Todos os pacientes receberam o mesmo tipo de condicionamento quimioterápico e de profilaxia para Doença do Enxerto-Contra-Hospedeiro. Todos os pacientes receberam adequação bucal e foram avaliados durante o período de internação hospitalar para o transplante pelo mesmo Cirurgião Dentista. Os resultados mostraram que a mucosite grau 0 foi encontrada em 5 pacientes (14,29%), grau 1 em 8 pacientes (22,85%), grau 2 em 17 pacientes (48,57%), grau 3 em 3 pacientes (8,57%) e grau 4 em 2 pacientes (5,71%). Estes dados sugerem que a adequação bucal realizada previamente ao Transplante de Medula Óssea reduziu a severidade da mucosite oral, salientando a importância da presença do Cirurgião Dentista na equipe multidisciplinar em um serviço de Transplante de Medula Óssea. / The aim of this research was to evaluate the incidence and the severity of the oral mucositis in patients submitted to dental treatment before the Bone Marrow Transplantation. Clinical and radiographical examination was performed in patients with Chronic Myeloid Leukemia who would be submitted to transplantation. After patient’s initial evaluation, dental treatment was performed in order to remove any site of oral infection. All patients received the same chemotherapy conditioning regimen and the Graft-versus-host-disease prophylaxis. All patients received oral care during the hospital intern period and were evaluated by the same dentist. The results showed that 5 patients (14,29%) presented level 0 of oral mucositis, 8 patients (22,85%) presented level 1 of oral mucositis were, 17 patients (48,57%) presented level 3 of oral mucositis and 2 patients (5,71%) presented level 4 of oral mucositis. These data suggest that oral care and dental treatment previous to the Bone Marrow Transplantation reduced the severity of oral mucositis and emphasizes the importance of the Dentist as a member of a multidisciplinary team in a Bone Marrow Transplantation unit.

A doença enxerto contra hospedeiro é uma complicação comum nos pacientes submetidos ao transplante de medula óssea alogênico. Com o objetivo de contribuir para o esclarecimento da participação das células de Langerhans na doença enxerto contra hospedeiro crônica (GVHDc) quando de sua ocorrência na mucosa bucal, foram analisados 40 pacientes oncohematológicos e hematológicos submetidos ao transplante de medula óssea alogênico no Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP. Cortes microscópicos de 3µm de espessura da mucosa jugal com padrão de normalidade (controle - 20 pacientes) e de pacientes transplantados com e sem GVHDc, foram avaliados em hematoxilina e eosina e pela técnica imuno-histoquímica padrão da estreptavidina-biotina-peroxidase utilizando-se o anticorpo monoclonal anti- CD1a. As células de Langerhans imunomarcadas foram quantificadas no epitélio da mucosa jugal, sendo o número médio destas células estatisticamente comparado entre os pacientes controle e os pacientes transplantados com e sem GVHDc. Os resultados demonstraram um maior número de células de Langerhans na mucosa jugal dos pacientes com GVHDc quando comparado aqueles sem GVHDc e ao grupo controle (p=0,001). Foi observado também, a presença de intenso infiltrado inflamatório crônico, justaepitelial, com desorganização das células da camada basal do epitélio, com vacuolização celular, satelitose, corpúsculos acidofílicos e ocorrência de clivagem entre e o epitélio e o tecido conjuntivo nos pacientes que desenvolveram GVHDc. Estes resultados sugerem que a células de Langerhans participa da doença enxerto contra hospedeiro crônica na mucosa jugal dos pacientes submetidos ao transplante de medula óssea alogênico, sendo provavelmente recrutadas pelo processo inflamatório e imunopatológico que caracteriza esta doença. / The graft versus host disease (GVHD) is a common complication in patients submited to alogeneic bone marrow transplantation. To understand the role of Langerhans cells in chronic GVHD (cGVHD) in oral mucosa, we analyzed 40 oncohematological or hematological patients who received alogeneic bone marrow transplantation at Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP. Slices of 3µm from normal oral mucosa (control - 20 patients) and transplanted patients with and without cGVHD were analyzed by hematoxylin-eosin technique and conventional immunohistochemistry of streptavidin-biotin peroxidase technique for monoclonal antibody anti-CD1a. The immunomarked Langerhans cells were quantified in the epithelium of oral mucosa; the average number of these cells was statistically significant when compared to the control group and patients with and without cGVHD. The results showed higher number of Langerhans cells in oral mucosa of cGVHD when we compared the control group and the group of patients with and without cGVHD (p=0,001). We also observed the presence of chronic juxtaepithelial inflammatory infiltrate, with basal layer epithelium desorganization, vacuolization, satellitosis, acidophilic bodies and presence of gap between epithelium and connective tissue of patients with cGVHD. These results suggest that Langerhans cells may have a role in cGVHD of oral mucosa in patients submited to alogeneic bone marrow transplantation, and they may be recruited by inflammatory and immunopathologic process that are characteristic in this disease.

A Doença do Enxerto Contra Hospedeiro (GVHD) é a maior causa de morbidade e mortalidade em pacientes submetidos ao Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas (TCTH). As manifestações bucais podem ser debilitantes, levar a complicações sistêmicas e comprometer o prognóstico do paciente. O diagnóstico final deve ser estabelecido histologicamente. Recentemente o consenso estabelecido pelo NIH (National Institutes of Health) recomendou o uso de uma nova classificação histopatológica para o GVHD. No entanto a possível associação entre os quadros clínico e histopatológico de GVHD crônico (GVHDc), bem como a validação desta nova classificação ainda não estão claros na literatura. Desta forma, este estudo teve por objetivo validar a nova classificação, compará-la com outra já existente, correlacioná-la com o estágio clínico do GVHD e com a sobrevida dos pacientes transplantados. Para este estudo foram analisados biopsias de mucosa oral de 41 pacientes com diagnóstico clínico e histopatológico de GVHDc. Os aspectos histopatológicos foram observados pelo autor deste trabalho e pelo seu orientador, de forma cega, aplicando os critérios de Horn e do Consenso. A classificação do Consenso mostrou se válida, fácil de ser aplicada e apresentou correlação com a classificação de Horn. Não houve correlação da classificação histológica com o estágio clínico da doença e casos classificados histologicamente como mais graves estavam relacionados com menor sobrevida. / The graft-versus Host Disease (GVHD) is the major cause of morbidity and mortality in patients undergoing Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). The oral manifestations can be debilitating, leading to systemic complications and compromise the patient\'s prognosis. The final diagnosis must be established histologically. Recently the consensus established by the NIH (National Institutes of Health) recommended the use of a new classification for histopathological chronic GVHD (cGVHD). However, the possible association between clinical and histopathology of cGVHD, as well as validation of this new classification is not yet clear in the literature. Thus, this study aimed to validate the new classification, compare it with the existing, correlating it with the clinical stage of GVHD and the survival of transplanted patients. For this study we analyzed biopsies from oral mucosa of 41 patients with clinical and histopathological diagnosis of cGVHD. The histopathological features were observed by the author of this work and his supervisor, in a blinded fashion, using the criteria of consensus and Horn. A classification of consensus shown is valid, easy to apply and also correlated with the classification of Horn. There was no correlation with histological classification of the clinical stage of disease and cases histologically classified as more severe were associated with lower survival.

A Ipomoea carnea é uma planta tóxica de distribuição nacional e encontrada também em outros países de clima tropical. Possui entre seus princípios ativos um alcalóide indolizidínico chamado suainsonina que, devido à sua ação sobre enzimas intracelulares (a &alpha;-manosidase ácida e a manosidase II do Complexo de Golgi), altera receptores de membrana e moléculas de adesão. Acredita-se que a suainsonina possa ter atividades imunomodulatória, mieloprotetora, antineoplásica e antimetastática. Devido ao potencial terapêutico sugerido pela literatura, nesse estudo avaliou-se os possíveis efeitos antineoplásico e mieloprotetor da suainsonina empregada isoladamente ou em associação com um antineoplásico clássico, a cisplatina. Além disso, procurou-se avaliar se a administração do resíduo aquoso final da Ipomoea carnea (RAF), isoladamente ou também associado à cisplatina, possui atividade anitineoplásica. Foram utilizados camundongos C57Bl/6, que foram inoculados por via intraperitoneal (ip.) com 2x107 células do tumor ascítico de Ehrlich. Os animais foram divididos nos grupos: BRANCO, CONTROLE e tratados com: cisplatina (CIS); cisplatina e suainsonina (CISSW); suainsonina (SW); cisplatina e RAF (CISRAF); e RAF (RAF). A suainsonina foi administrada por via ip. 2x ao dia (1mg/kg de peso vivo). A cisplatina foi administrada por via ip. em dias alternados (0,25mg/kg). A administração do RAF foi realizada por gavage, na dose de 3g de folhas secas/kg de I. carnea. Foi avaliada a sobrevida, o crescimento tumoral e a celularidade da medula óssea e do baço. Os resultados mostraram que apenas o grupo CISSW apresentou aumento significativo na sobrevida em relação ao grupo CONTROLE (Logrank test, p<0,05). Em relação ao crescimento tumoral, os grupos CIS e CISSW apresentaram diminuições significantes quanto comparados ao grupo CONTROLE; porém, o grupo CISSW apresentou melhores resultados (ANOVA com pós teste de Dunns, p<0,001) quando comparado ao grupo CONTROLE,enquanto os animais tratados com o RAF não apresentaram diferenças significantes. Dados sobre o ciclo celular (citometria de fluxo) revelaram que todos os animais tratados com a cisplatina (CIS, CISSW e CISRAF) apresentaram aumento significante no número de células tumorais em apoptose, porém o grupo CISSW apresentou melhores resultados, prejudicando de maneira mais eficiente o ciclo celular das células tumorais. As análises referentes à atividade mieloprotetora da suainsonina não apresentou dados relevantes. Estes dados em conjunto indicam efeito antineoplásico sinérgico da suainsonina quando administrada concomitantemente com a cisplatina. / Ipomoea carnea is a toxic plant widely distributed in Brazil and other tropical countries. Among its active principles I. carnea has the indolizidine alkaloid swainsonine, which inhibits intracellular enzymes (the lysosomal &alpha;-mannosidase and the Golgi mannosidase II) and alters membrane receptors and adhesion molecules. It is known that swainsonine presents the following activities: imunommodulatory, bone marrow protective, antineoplastic e antimetastatic. Due to the therapeutical potencial suggested by other authors, the present study was performed to evaluate the antineoplastic and bone marrow protective effects of swainsonine when used alone or in association with a classic chemotherapy agent like cisplatin. Moreover, the antineoplastic effect of the I. carnea aqueous fraction (AF), when administered alone or in association with cisplatin, was evaluated. For this, male C57Bl/6 mice were randomly assigned to seven groups: UNTREATED; CONTROL; CIS (treated with cisplatin); CIS-SW (treated with cisplatin and swainsonine); SW (treated with swainsonine); CIS-AF (treated with cisplatin and I. carnea aqueous fraction); and AF (treated only with I. carnea aqueous fraction). All animals except for those from the untreated group received an intraperitoneal (ip.) inoculation of 2x107 viable Ehrlich Ascites Carcinoma cells on day zero. Swainsonine was administered by the ip. route twice a day (1mg/kg of body weight), cisplatin was administered by the ip. route in alternate days (0.25mg/kg) and AF (3g of I. carnea dry leaves/kg) was administered by the oral route (gavage). Survival rate, tumor growth, bone marrow and spleen cellularity were evaluated. The only group that showed a significant increase on the survival rate when compared to CONTROL was CISSW (Logrank test, p<0.05). Considering tumor growth, both CIS e CISSW groups showed significant decreases in this parameter when compared to CONTROL. However, this decrease was better observed in the CISSW group (ANOVA followed by Dunns test, p<0,001), when compared to the CONTROL. Treatment with AF did not cause significant differences. The cell cycle results (flow citometry) revealed a significant increase in the number of apoptotic tumor cells in all animals treated with cisplatin (CIS, CISSW e CISRAF), although CISSW showed better results, altering the cycle of the tumor cells more efficiently. Swainsonine did not present any relevant protective activity on the bone marrow. These results suggest the existence of a synergism when swainsonine is administered in association with cisplatin.

O objetivo do presente estudo foi o de investigar, pela primeira vez: os efeitos da administração prolongada de sementes Senna occidentalis (S. occidentalis) em órgãos hematopoiéticos de ratos, utilizando metodologias que poderão ser sugeridas para estudo pré-clínico de medicamentos. Avaliou-se nestes animais: consumo de ração e água; peso médio semanal; parâmetros hematológicos e bioquímicos; padrões histopatológicos; estoque de ferro e ensaios clonogênicos. O estudo foi realizado em ratos Wistar machos de 90 dias de idade, os quais foram expostos a diferentes concentrações de S. occidentalis na ração, a saber: 0% (controle), 0,5% (So0,5%), 1% (So1%) e 2% (So2%) durante 90 dias. Foi importante incluir um grupo pair-fed (PF), o qual recebeu a mesma quantidade de ração consumida pelo grupo So2%, porém, isenta da planta, uma vez que a S. occidentalis é sabidamente anorexígena. O presente estudo demonstrou que os ratos do grupo So2% apresentaram diminuição no número de leucócitos totais bem como alterações nos parâmetros referentes a série vermelha, tais como diminuição do VCM e HCM, caracterizando uma anemia microcítica hipocrômica. Os dados do hemograma corroboram as alterações observadas no mielograma destes animais, uma vez que foi constatada a redução significante da relação Mielóide/Eritróide (M/E) e, portanto, um possível efeito tóxico da S. occidentalis sobre a medula óssea durante o tratamento de 90 dias. A redução significante da relação M/E nos animais pertencentes aos diferentes grupos experimentais ocorreu devido ao aumento progressivo de eritroblastos jovens e policromáticos na medula óssea destes animais. Índices baixos da relação M/E podem estar associados a uma anemia regenerativa em função de hemólise extravascular ou, ainda, à eritropoiese ineficaz. A partir do mielograma observou-se, também, redução significante de células blásticas e de todos os tipos celulares, especialmente, da linhagem granulocítica, com predomínio da linhagem linfocitária. No entanto, uma vez que os linfócitos estão, continuadamente, recirculando, o aumento ou a diminuição destas células não reflete, necessariamente, alteração na linfopoiese. A análise anatomopatológica da medula óssea de animais dos grupos experimentais apontou um aumento progressivo da celularidade, caracterizando hiperplasia medular. Estes resultados se correlacionam aos dados do mielograma. Na anemia regenerativa ocorre diminuição da sobrevida das hemácias na circulação, resultante de hemólise extravascular realizada por macrófagos, especialmente, do tecido esplênico. Assim, o tratamento prolongado com S. occidentalis poderia estar associado ao um processo hemolítico, haja vista a observação de aumento do peso relativo deste órgão; acúmulo de hemossiderina no baço e ainda, reticulocitose em animais tratados com esta planta. O tratamento de 90 dias com S. occidentalis promoveu, também, redução significante na celularidade do baço bem como alterações anatomopatológicas, incluindo espessamento de cápsula e rarefação celular. Os ensaios clonogênicos padronizados neste estudo apontaram redução da porcentagem de colônias BFU-E e CFU-E em animais do grupo So2%, indicando uma provável ação tóxica da S.occidentalis sobre os progenitores medulares. A partir dos dados apresentados no presente estudo, pode-se concluir que o tratamento por 90 dias com S. occidentalis na ração é hematotóxico. Além disto, os resultados aqui obtidos bem como as metodologias empregadas poderão contribuir para o estabelecimento de um protocolo de hematotoxicidade, haja vista que informações relacionadas aso mecanismos de hematopoiese; metabolismo de ferro; características histológicas e citológicas de órgãos hematopoiéticos (baço e medula óssea) de ratos foram levadas em consideração para a realização deste estudo. / The purpose of this study was to investigate, for the first time: the effects of long term administration of Senna occidentalis (S. occidentalis) seeds in hematopoietic organs of rats, using methodology that can be suggested for pre-clinical studies. We evaluated some parameters in these animals: feed intake and water; weight body; hematological and biochemical parameters; histopathology; iron stores and clonogenic assays. The study was conducted in 90-day-old male Wistar rats, which were exposed to different concentrations of S. occidentalis in feed, ie: 0% (control), 0.5% (So0.5%), 1% (So1%) and 2 % (So2%) for 90 days. It was important to include a pair-fed group (PF), which received the same amount of feed consumed by So2% group, however, without the plant, once S. occidentalis is known anorectic. This study showed that rats from So2% group presented a decrease in the number of total leukocytes as well as changes in the parameters for the red series, such as decrease in MCV and MCH values, featuring a hypochromic anemia. The blood count results corroborate the findings from bone marrow smears of these animals, since it was found the significant reduction ratio Myeloid / Erythroid (M / L) and, therefore, a possible toxic effect of the S. occidentalis on the bone marrow during the treatment of 90 days. The significant reduction in the ratio M / E in animals belonging to different experimental groups occurred due to the progressive increase of young and polychromatic erythrocytes in the bone marrow of these animals. Low levels of M / E ratio may be associated with a regenerative anemia in extravascular hemolysis function or even the ineffective erythropoiesis. From the myelogram there was also a significant reduction of blast cells and all cell types, especially of granulocytic lineage, with a predominance of lymphoid lineage. However, since lymphocytes are, continuously by recirculating the increase or decrease in these cells do not necessarily reflect changes in lymphopoiesis. The pathological examination of the bone marrow of the experimental group animals showed a progressive increase in cellularity, featuring medullary hyperplasia. These results correlate to myelogram. In the regenerative anemia occurs a decreased survival of red blood cells in the circulation, resulting from extravascular hemolysis performed by macrophages, especially in the splenic tissue. Thus, the long term administration of S. occidentalis seeds could be associated with hemolytic process, due to the observation of an increase in the relative weight of this body; hemosiderin accumulation in the spleen and also increased reticulocytes in animals treated with this plant. The treatment with S. occidentalis promoted also significant reduction in cellularity of the spleen and pathological changes, including capsule and cell thinning thickening. Clonogenic assays showed decreased percentage of BFU-E and CFU-E colonies in animals from So2% group, indicating a probable toxic action of S.occidentalis on medullary progenitors. Therefore, the treatment for 90 days with S. occidentalis in feed is promotes blood toxicity.