A epilepsia atinge cerca de 1% da população mundial, sendo que aproximadamente 30% desses pacientes não respondem ao tratamento medicamentoso. Por sua vez, as células-tronco representam uma esperança de tratamento da epilepsia, visto que têm grande capacidade de proliferação, diferenciação e regeneração de tecidos, podendo restaurar circuitos neurais e restabelecer a excitabilidade neuronal fisiológica. O objetivo deste estudo é verificar se as células mononucleares da medula óssea (CMMO) apresentam potencial terapêutico no controle das crises epilépticas e do dano neuronal progressivo induzido pela epilepsia experimental. Os animais foram injetados com lítio-pilocarpina (127 mg/kg e 60 Mg/kg i.p., respectivamente) para indução de status epilepticus (SE). As crises comportamentais foram classificadas de acordo com a escala de Racine e a duração do SE foi controlada com diazepam (10 mg/kg, i.p., 90 minutos). Os animais controle receberam solução salina. Após 22 dias, o total dos animais foi dividido em quatro grupos: Pilocarpina; Pilocarpina + CMMO, Salina e Salina + CMMO. Os grupos CMMO receberam transplante de células da camada mononuclear da medula óssea, obtidas de camundongos EGFP C57BL/6, via veia caudal (107 células, 200L), e os demais salina. Os animais tratados com pilocarpina foram monitorados por vídeo durante sete dias pré-transplante e outros catorze dias após o procedimento, para observação e computação de crises espontâneas recorrentes (CERs). Ainda, 45 dias depois da injeção das células os animais foram avaliados na tarefa do labirinto aquático de Morris (LAM) e a seguir na tarefa de reconhecimento de objetos, e logo após utilizou-se o teste do eletrochoque máximo para avaliação do limiar convulsivo. Decorridos sete meses do transplante os animais foram sacrificados e foram coletados os hipocampos direito e esquerdo, e amostras de cerebelo, bulbo olfatório, coração, pulmão e fígado para análise da presença de EGFP por PCR. Nossos resultados demonstram que os animais tratados com pilocarpina que receberam injeção de CMMO têm melhor desempenho no LAM quando comparados com o grupo pilocarpina. Esta melhora foi significativa durante o primeiro e último dias de treino, e também durante o teste em todos os parâmetros avaliados: latência, número de cruzamentos e permanência no quadrante alvo. Ainda, as CMMO reduziram o número de crises. Entretanto, na tarefa de reconhecimento de objetos e no teste do eletrochoque máximo não há diferença entre os animais epilépticos tratados ou não com CMMO. Finalmente, não foram detectadas bandas correspondentes à EGFP em nenhuma das amostras estudadas. Nos últimos anos, estudos que buscam tratamentos baseados em células-tronco para as mais diversas doenças neurodegenerativas foram vistos com muito interesse. Este tipo de tratamento pode ser útil também no tratamento da epilepsia crônica, dado o potencial que estas células têm de, independentemente do mecanismo, restaurar o micro ambiente neuronal e re-estabelecer a excitabilidade neuronal fisiológica. Palavras-chave: Epilepsia, células-tronco, testes comportamentais. / Epilepsy affects 1% of the world population and 30% of these patients are refractory to medication now available. Stem cells host hope in the treatment of epilepsy. Given their ability to proliferate, differentiate and regenerate tissues they could fix neural circuits and reestablish the physiological excitability of neurons. This study aimed to verify the therapeutic potential of bone marrow mononuclear cells (BMMC) on seizure control and on progressive neuronal loss induced by experimental epilepsy. Experimental status epilepticus (SE) was induced by lithium-pilocarpine injection (127 mg/kg; ip and 60 mg/kg; ip respectively). Seizures were scored by Racine’s scale. The duration of SE was controlled with diazepan (10mg/kg; ip; 90 minutes after SE onset). Control animals received saline other than pilocarpine. Twenty-two days after SE, rats were randomly assigned into four groups: Pilocarpina; Pilocarpine+BMMC; Control and Control+BMMC. BMMC groups received cell transplantation (obtained from EGFP C57BL/6 mice) via tail vein (107 cells, 200L). The other groups received saline in the same volume. Pilocarpine-treated animals were monitored for the presence of spontaneous seizures for 21 days (7 prior to cell transplant and 14 afterwards).Forty-five days after transplant rats underwent cognitive evaluation in the object recognition task and the Morris water maze (MWM), followed by the maximal electroshock test to evaluate seizure threshold. Rats were sacrificed seven months after transplantation. The hippocampi, cerebellum, olfactory bulb, and samples of the heart, lung and liver were collected in order to verify the presence of EGFP using PCR. Our results demonstrate that pilocarpine-treated rats injected with BMMC perform better in the MWM when compared to pilocarpine only. This difference was significant in the first and last training days and during the probe trial, when we evaluated the escape latency, time in target quadrant and number of crossings. In addition, seizure frequency was reduced by BMMC. Despite that, in the object recognition task and in the maximal electroshock test no difference was found between epileptic rats treated with BMMC or saline. Finally, we didn’t detect the presence of EGFP in any of the analyzed samples. During the last years much has been done to study the application of stem cells in several neurodegenerative diseases. This kind of approach can also be valid in the treatment of chronic epilepsy, given these cells have the potential of, whichever the mechanism might be, restore the neuronal micro environment and reestablish neuronal physiological excitability.

Neste trabalho verificamos o efeito da administração de células mononucleares de medula óssea murinas em ratos submetidos a modelos de lesão hepática aguda (por CCl4) e crônica (por ligadura de ducto biliar comum). No modelo de lesão hepática aguda as células foram injetadas através da veia porta 24 horas após a administração de 1,25 mL/kg de CCl4. Nos ratos submetidos à LDB a injeção foi realizada 14 dias após a lesão, através da veia mesentérica. Em ambos casos, foram injetadas 1 x 106 células mononucleraes de medula óssea diluídas em 0,2 mL de PBS. A sobrevida, níveis de ALT e avaliação histológica foram analisados no modelo agudo, 72 horas após lesão. A quantificação da fibrose hepática, ALT, AST, FA, peroxidação lipídica e avaliação histológica foram realizadas no modelo crônico 14 e 28 dias após a lesão. Pode-se observar um aumento na sobrevida de ratos tratados pós IHA, com aumento do número de mitoses no tecido hepático e diminuição nos níveis de ALT 72 horas após a lesão. No modelo de LDB houve uma redução na deposição de colágeno após o tratamento e uma diminuição nos níveis de fosfatase alcalina. Os outros parâmetros não apresentaram alterações. Em ambos estudos pode-se observar a presença das células transplantadas no fígado dos animais. Nossos dados sugerem um efeito benéfico do transplante celular para as duas situações, no entanto, os resultados encontrados indicam mecanismos de ação diferentes destas células em resposta aos danos induzidos. Os resultados deste trabalho juntamente com estudo destes mecanismos podem ajudar no desenvolvimento de futuros protocolos clínicos envolvendo esta abordagem terapêutica. / In this work we verified the effects of bone marrow mononuclear cell transplantation in animal models of acute and chronic liver disease induced by carbon tetrachloride and common bile duct ligation, respectively. In the acute liver damage model, cells were injected through the portal vein of rats 24 hours after damage, induced by 1.25 mL/kg of CCl4. Rats with common bile duct ligation were transplanted with bone marrow cells 14 days after surgery through the mesenteric vein. In both protocols 1 x 106 cells were injected in 0.2 mL of PBS. Survival, ALT levels and histological evaluation were the main endpoints of the CCl4 protocol, while liver fibrosis, ALT, AST, ALP, lipid peroxidation and histologic evaluation were studied in the chronic disease model. In the CCl4 model, we were able to verify an increase in the survival rate of treated animals with a two fold raise in liver mitotic activity and reduced ALT levels 72 hours after damage. In the common bile duct ligation model there was a significant reduction in fibrotic area in cell treated animals. Besides, a significant reduction in alkaline phophatase levels was also observed. Other parameters did not show any differences among the groups. In both protocols it was possible to detect the presence of donor-derived cells in livers from treated rats. Our data suggest a benefit from cell therapy in both situations. Moreover, our findings indicate that these cells may act through different mechanisms in response to different liver insults. The results obtained in this work, combined to further studies may help in developing adequate and safe clinical protocols using cell therapies in liver disease.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, 2001 / Inclui bibliografias / O transplante de medula óssea (TMO) é a terapêutica indicada para muitas doenças malignas hematológicas, genéticas e imunológicas [BEUTLER, 1983 e RAPPEPORT, 1991]. O gerenciamento das informações dos pacientes que estão na fila do transplante é complexo / Bone Marrow Transplantation (BMT) is a complex therapeutic procedure that offers potential cure for many haematological and non-haematological diseases, including various kinds of cancer genetic abnormalities and immunologic disease [BEUTLER, 1983 e RAPPE

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2011 / Bibliografia: f. 59-65 / Introdução: A endometriose é uma doença ginecológica benigna que afeta cerca de 10% das mulheres em idade reprodutiva. A fisiopatologia da endometriose não é completamente compreendida, mas parece haver uma imunoreatividade aberrante induzida pela doença, / Introduction: Endometriosis is a common benign gynecologic disease that affects reproductive-aged women. The physiopathology of endometriosis is not completely understood, but there seems to be an aberrant immunoreactivity induced by the disease, resultin

Submitted by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-06-22T18:00:41Z No. of bitstreams: 1 Publico-novo-01.pdf: 1012668 bytes, checksum: e3115efd76da55d6f5c2b7ab64ba97cc (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-06-22T18:02:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-novo-01.pdf: 1012668 bytes, checksum: e3115efd76da55d6f5c2b7ab64ba97cc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-22T18:02:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-novo-01.pdf: 1012668 bytes, checksum: e3115efd76da55d6f5c2b7ab64ba97cc (MD5) Previous issue date: 2014 / Introdução: A reconstrução óssea de áreas consideradas críticas pode ser realizada com o uso de biomateriais substitutos do tecido ósseo como, por exemplo, os materiais xenógenos, porém sabe-se que uma das limitações destes materiais é a sua incapacidade de ser osteogênico. De outra forma, frequentemente nestes procedimentos são utilizadas membranas ou barreiras teciduais, caracterizando uma regeneração óssea guiada, com o intuito de se obter resultados com maior previsibilidade. Objetivo: Avaliar a associação do aspirado de medula óssea a um enxerto ósseo xenógeno na técnica de regeneração óssea guiada em calvária de coelhos. Métodos: Dez coelhos foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos com cinco animais cada. Vinte defeitos ósseos críticos bilaterais, com diâmetro de 12 milímetros, foram criados nos ossos parietais. Foram preenchidos com xenoenxerto ósseo, associado ou não à medula óssea, e sempre um dos defeitos em cada animal realizado de forma aleatória, recoberto por uma membrana de colágeno, formando assim os seguintes grupos: grupo controle com membrana (GC CM), grupo controle sem membrana (GC SM), grupo experimental com membrana (GE CM) e grupo experimental sem membrana (GE SM). Os coelhos foram eutanasiados oito semanas após a cirurgia e, em seguida, as suas calvárias foram removidas e analisadas por tomografia computadorizada. Na sequência, os ossos parietais foram removidos e as áreas de enxertia foram selecionadas e analisadas histologicamente por histomorfometria. Resultados: A tomografia mostrou uma menor área de defeito ósseo remanescente (p<0,05) no grupo experimental coberto com membrana de colágeno (56,46 ± 9,05 mm2 ), quando comparado com o grupo controle, com e sem membrana (68,01 ± 2,86 mm2 e 72,64 ± 5,59 mm2 , respectivamente). A histomorfometria não mostrou diferença entre os grupos (p> 0,05) em relação à área de tecido mineralizado não vital. Para a área de tecido mineralizado vital, o grupo experimental coberto com membrana obteve uma área maior (21,16 ± 3,76% ), quando comparado com o grupo controle, com e sem membrana (12,78 ± 5,9% e 6,31 ± 1,29%, respectivamente) (p <0,05 ). Para a área de tecido não mineralizado, o grupo experimental coberto com membrana obteve uma área menor (20,29 ± 4,17%), quando comparado com o grupo controle, com e sem membrana ( 67,95 ± 7,03% e 81,41 ± 3,25% , respectivamente) (p <0,05). Conclusão: A associação do aspirado de medula óssea a um enxerto xenógeno na regeneração óssea guiada em calvária de coelhos, aumentou significativamente a quantidade de tecido mineralizado vital, bem como diminuiu significativamente a quantidade de tecido não mineralizado. / Objective: The aim of this study was to evaluate the bone healing after the usage of a scaffold enriched with bone marrow. Methods: Ten rabbits were randomly divided into 2 groups of 5 animals. Bilateral 12 mm diameter defects were created in the parietal bones. In control group Bio-Oss® were inserted in both defects and, in experimental group, xenograft enriched with autologous bone marrow were inserted in both defects. In these two groups, one of the calvarial defects was randomly covered with collagen membrane. The rabbits were sacrified 8 weeks after surgery, their heads were removed and analysed by CT. Then, their parietal bones were harvested and analysed by histomorphometrics. Results: The CT showed a lower remaining defect area (p<0.05) in the experimental group covered with collagen membrane (56.46 + 9.05 mm2) when compared with control group, with and without xenograft (68.01 + 2.86 mm2 and 72.64 + 5.59 mm2, respectively). The histomorphometrics showed no difference between groups (p>0.05) regarding the non-vital mineralized tissue area. For vital mineralized tissue area, the experimental group covered with membrane obtained a higher percentage area (21.16 + 3.76%) when compared with control group, with and without membrane (12.78 + 5.9 % and 6.31 + 1.29 %, respectively) (p<0.05). For non-mineralized tissue area, the experimental group covered with membrane obtained a lower percentage area (20.29 + 4.17%) when compared with control group, with and without membrane (67.95 + 7.03 % and 81.41 + 3.25 %, respectively) (p<0.05). Conclusion: The combination of aspirate a xenogeneic bone graft for guided bone regeneration in rabbit calvaria, bone marrow significantly increased the amount of living mineralized tissue, as well as significantly reduced the amount of non-mineralized tissue.

Submitted by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-06-23T14:07:32Z No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-06.pdf: 3014625 bytes, checksum: 7a5c61cc40f9cd02772425bc1b416a0d (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-06-23T14:14:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-06.pdf: 3014625 bytes, checksum: 7a5c61cc40f9cd02772425bc1b416a0d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T14:14:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-06.pdf: 3014625 bytes, checksum: 7a5c61cc40f9cd02772425bc1b416a0d (MD5) Previous issue date: 2014 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: A manutenção das características estruturais do tecido ósseo é almejada quando substitutos ósseos são utilizados em procedimentos de enxertia aposicional. Dentro deste escopo, a utilização da fração de células mononucleares da medula óssea visa incrementar os resultados da enxertia óssea com o aumento do contato entre osso e titânio. Objetivo: Avaliar a associação da fração de células mononucleares da medula óssea com enxerto ósseo xenógeno em reconstrução aposicional na calvária de coelhos. Métodos: Doze coelhos da raça Nova Zelândia foram distribuídos, randomicamente, em dois grupos, Grupo Controle (n=6 - substituto ósseo xenógeno) e Grupo Experimental (n=6 - substituto ósseo xenógeno enriquecido com a fração de células mononucleares da medula óssea). Foi criado um modelo de regeneração óssea guiada por meio de dois cilindros instalados na calvária de cada um dos animais. A eutanásia ocorreu após oito semanas sendo analisado: (1) mensuração do volume tecidual formado no interior dos cilindros e (2) Histomorfometria dos parâmetros: Tecido Mineralizado Não Vital (TMNV); Tecido Mineralizado Vital (TMV); Tecido Não Mineralizado (TNM) e Contato Tecido Mineralizado Vital - Titânio (CTMVT). Resultados: As mensurações do volume tecidual formado no interior dos cilindros dos grupos Controle e Experimental demostraram manutenção do volume não havendo diferença entre os grupos. A histomorfometria não demonstrou diferença para os parâmetros TMNV, TMV havendo diferença para o parâmetro CTMVT. Conclusão: A associação do enxerto xenógeno com a fração de células mononucleares da medula óssea, em modelo de regeneração óssea guiada, aumenta a área de contato do tecido mineralizado vital com o titânio. / Purpose: This study investigated the combination of a bone marrow mononuclear fraction with a bone xenograft material in an appositional bone regeneration technique. Methods: Twelve New Zealand rabbits were randomly divided into two groups of six animals. Bone reconstruction situations were created using titanium cylinders filled with xenograft in Control group and xenograft enriched with the bone marrow mononuclear fraction in Experimental group. Two cylinders were adapted onto the calvaria of each animal. The bone marrow aspirate was obtained from the tibia of every animal. After 8 weeks, the animals were sacrificed and their parietal bone fixed in 10% formalin for analysis: (1) clinical measurement of the bone volume formed inside the cylinders and (2) histomorphometric evaluation of parameters such as vital mineralized tissue (VMT), non-vital mineralized tissue (NVMT), non-mineralized tissue (NMT) and vital mineralized tissue in contact with titanium (VMTCT). Results: The clinical measurements of groups 1 and 2 demonstrated a bone volume gain of 88.36+25.97% and 98.96+0.00%, respectively. Histomorphometry demonstrated a VMT of 18.96+9.00% and 28.02+8.76%; NVMT of 28.43+2.44% and 25.57+2.33%; NMT of 52.61+10.80% and 46.42+10.06%; VMTCT of 4.98+4.30% and 27.29+9.58%, respectively. Conclusion: The results from this study suggest that the use of the bone marrow mononuclear fraction can improve bone healing and the level of osseointegration.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:54Z : No. of bitstreams: 1 Publico-113%20arquivo%20Dulce.pdf: 1322221 bytes, checksum: 16eb879c6a92f69315090709beff3068 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Transplante de Medula Óssea Autólogo (TMOA) é uma terapia consolidada para tratamento de doenças hematológicas como linfomas, mielomas e leucemias. As células-tronco hematopoéticas (CTHs) podem ser obtidas diretamente da medula óssea (MO) ou do sangue periférico por meio de estímulo com quimioterapia e fatores de crescimento. Frequentemente pacientes submetidos a este procedimento mobilizam as CTHs de forma insatisfatória. O microambiente medular e a hematopoese estão intimamente relacionados com o sucesso deste tipo de tratamento, uma vez que a ontogênese da hematopoese depende de estímulos produzidos pelas células do microambiente medular. Os processos relacionados à adesão celular, as alterações do estroma e da matriz extracelular podem estar danificados em pacientes com MO inicialmente comprometida por células clonais, submetidos a esquemas de quimioterapia e radioterapia convencionais. Estudos relacionados à estrutura e funcionalidade do estroma medular e das CTHs foram realizados para elucidar os possíveis danos causados ao microambiente hematopoético e sua correlação com a recuperação hematológica de curto e longo prazo após os transplantes de medula óssea. Neste estudo, avaliou-se o potencial proliferativo, a capacidade de sustentação da hematopoese e os efeitos da criopreservação em amostras de MO de portadores de doenças onco-hematológicas submetidos ao TMOA. Foram avaliados 22 pacientes, com idade variando entre 16 e 60 anos (média de 37,2 anos). Destes, 5 eram portadores de Linfoma Não-Hodgkin (LNH), 6 de Linfoma de Hodgkin (LH), 4 de Mieloma múltiplo (MM) e 7 de leucemias. Os controles foram provenientes de 10 doadores normais de transplante de medula óssea alogênico com idade variando entre 26 e 45 anos. Foram empregadas culturas de medula óssea de longa-permanência, ensaios clonogênicos e análise histopatológica da MO em dois momentos distintos, pré e pós-mobilização com o intuito de observar se a quimioterapia associada ao fator de crescimento causaria algum dano nas CTHs ou no estroma medular. Observou-se diminuição da formação da camada estromal após a mobilização nas amostras dos controles (p =0,03), sugerindo que a medula óssea normal seja mais afetada pelo efeito imediato do G-CSF, ou que ocorra migração mais expressiva das células progenitoras hematopoéticas da MO para o sangue periférico. As amostras de pacientes apresentaram menor capacidade de formação da camada estromal em relação aos controles, indicando danos ao microambiente medular causados pelo tratamento quimioterápico prévio. Não foram detectadas diferenças funcionais nas amostras de pacientes durante o período de mobilização, não se relacionando a capacidade de formação do estroma com a terapêutica citotóxica empregada na mobilização. A presença de fibrose, infiltração e celularidade diminuída na MO contribuíram em parte para a diminuição da capacidade de formação da camada estromal sugerindo fortemente que os danos maiores estão relacionados ao estroma medular possivelmente causados pelo tratamento quimioterápico prévio. Nos ensaios clonogênicos apenas os estromas obtidos de amostras de pacientes pós-mobilização e co-cultivados com células CD34+ apresentaram atividade proliferativa nestes ensaios, com exceção do controle normal co-cultivado com célula CD34+ autóloga. Em relação ao processo de criopreservação não foi observada diferença entre as fases pré e pós-mobilização nas amostras de pacientes e controles, o que pode sugerir que este procedimento não afete a funcionalidade do estroma. Entretanto, as amostras de controles apresentaram diminuição significativa na formação da camada estromal na fase pós-mobilização em relação às amostras de pacientes, principalmente nas amostras a fresco, podendo-se sugerir que a situação do estroma medular de pacientes com doenças onco-hematológicas anteriores à mobilização possa apresentar um efeito protetor aos agentes criopreservadores. Estes achados sugerem que a existência de um estroma doente torna-o menos suscetível ao processo de mobilização e criopreservação. / Autologous hematopoietic stem cell transplantation (auto-HSCT) has proved efficient to treat hematopoietic malignancies such as lymphomas, leukemia and multiple myeloma. Stem cells can be obtained directly from bone marrow or be recruited to enter in the blood stream in response to chemotherapy and hematopoietic growth factors. However, some patients fail to show adequate yield of mobilized HSCs lowering the chances for a successful auto-HSCT. For definitive hematopoiesis to occur, HSCs must interact with a suitable microenvironment, including stromal cells, extracellular matrix and soluble factors. A large number of groups have been trying to elucidate the mechanisms related to mobilization, structural and functionality of marrow stroma and HSC were done to elucidate possible damage caused on marrow microenvironment and their correlation with the short and long time hematological recovery. In this study, it was evaluated proliferate potential, capacity of hematopoiesis support and the cryopreservation effects in bone marrow samples from patients with hematological malignancies submitted to auto-HSC. Were evaluated 22 patients diagnosed with hematological malignancies, aged 16 to 60 (37,2 average) years, including 5 non-Hodgkin’s lymphoma (NHL) , 6 Hodgkin’s disease (HD), 4 multiple myeloma (MM), 5 acute myeloid leukemia (AML), 1 acute lymphoblastic leukemia (ALL) and 1 chronic lymphocytic leukemia (CLL). Ten allogeneic bone marrow donors were the control group with 26 to 45 years old. Were used long-term bone marrow cultures, clonogenical assays and bone marrow histopathology analysis at pre and post mobilization, with the purpose to observe if chemotherapy with growth factor will cause some damage to the hematopoietic stem cells or marrow stroma. It was observed stromal layer formation decreased at control samples after mobilization (p =0, 03), suggesting that normal bone marrow was more affected by G-CSF effect , or hematopoietic progenitor cells from bone marrow migrate expressively for the whole blood. Patients’ samples showed lower stromal layer formation in the control group, showing marrow microenvironment damage caused by previous chemotherapy or disease. It was not detected functional differences in patients’ samples during mobilization, no relation with capacity of stroma formation during the citotoxic therapy used in mobilization. Fibrosis, infiltration and cell decrease in bone marrow contribute to reduce the stromal layer formation capacity, suggesting that the main damages are related to marrow stroma. About the clonogenical assays only the obtained stromal layers by post-mobilization patients and CD 34+ co-cultivate cells, showing proliferative activity in these assays, with exception of the autologous CD 34+ co-cultivate control group cells. Related to cryopreservation process, it was not observed difference between pre and post phases at control and patients’ samples, which suggest that this procedure not affect marrow stroma functionality. However, the control samples showed significant decrease in stromal layer formation at the post-mobilization phase in relation to the patients’ sample, mainly in fresh samples, can suggest that the situation of marrow stroma patient with hematological malignancies before the mobilization can show one effective protection to cryopreserved agents. This finding suggests that have sick stromas that make it less susceptible to mobilization and cryopreservation process. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:46Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10863a.pdf: 1923988 bytes, checksum: 4f7b45b3546bdf834e4cd082a5689a34 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:46Z : No. of bitstreams: 2 Publico-10863a.pdf: 1923988 bytes, checksum: 4f7b45b3546bdf834e4cd082a5689a34 (MD5) Publico-10863b.pdf: 1434661 bytes, checksum: 68162acde4409e923013d2abac2d609b (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:47Z : No. of bitstreams: 3 Publico-10863a.pdf: 1923988 bytes, checksum: 4f7b45b3546bdf834e4cd082a5689a34 (MD5) Publico-10863b.pdf: 1434661 bytes, checksum: 68162acde4409e923013d2abac2d609b (MD5) Publico-10863c.pdf: 1797144 bytes, checksum: e8f6b3ba83b276f150a7521a7b7a53fa (MD5). 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Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:47Z : No. of bitstreams: 10 Publico-10863a.pdf: 1923988 bytes, checksum: 4f7b45b3546bdf834e4cd082a5689a34 (MD5) Publico-10863b.pdf: 1434661 bytes, checksum: 68162acde4409e923013d2abac2d609b (MD5) Publico-10863c.pdf: 1797144 bytes, checksum: e8f6b3ba83b276f150a7521a7b7a53fa (MD5) Publico-10863d.pdf: 1587439 bytes, checksum: c1bd59a2c65466acab648df2ebc4cf7e (MD5) Publico-10863e.pdf: 1954804 bytes, checksum: 082c823be9a89e828ef58bf37e65aa9c (MD5) Publico-10863f.pdf: 2007315 bytes, checksum: 24252bd94f7741d29397da785d4cf21b (MD5) Publico-10863g.pdf: 1254485 bytes, checksum: 6da276ff2f6d3723675ae638b00e15a8 (MD5) Publico-10863h.pdf: 1782234 bytes, checksum: 80c9b027304c32bfd75649eb81409ec5 (MD5) Publico-10863i.pdf: 1354502 bytes, checksum: c4709376c7c0a36e666b36b206aacbcf (MD5) Publico-10863j.pdf: 1884932 bytes, checksum: 1832a7b934f5a3f70b7e8b891371e69c (MD5) / Lesões no SNC resultam na formação de uma cicatriz glial e produção de moléculas inibitórias, incluindo proteoglicanos de condroitim sulfato. Vários estudos sugerem que o componente açúcar do proteoglicano seja a região responsável pelo papel inibitório da regeneração axonal desses compostos. A degradação das cadeias de condroitim sulfato por enzimas específicas, denominadas condroitinases, reduz a capacidade inibitória da regeneração neuronal destes proteoglicanos. Os meios de administração da condroitinase ABC utilizados na literatura até a presente data são invasivos e envolvem injeções freqüentes da enzima ou a inserção de uma cânula nos animais para infusão da enzima. Uma injeção única, na lesão, de células transfectadas com o gene da condroitinase AC, para que esta enzima seja continuamente expressa e secretada, seria uma forma prolongada relativamente menos invasiva de administração. Construímos um vetor contendo o gene da condroitinase AC de Flavobacterium heparinum para a expressão em células derivadas da medula óssea transplantadas em uma lesão no SNC murino. A expressão e secreção de uma forma ativa da condroitinase AC foram observadas in vitro usando as células ovarianas de hamster chinês CHO e células de gliosarcoma 9L, e in vivo através de análise por imunofluorescência que mostrou condroitim sulfato degradado coincidindo com a localização de células derivadas da medula óssea transfectadas. Imunomarcação para GAP- 43, proteína associada ao crescimento axonal, foi observada in vivo e coincidiu com a localização de condroitim sulfato degradado. Sinaptofisina, um marcador de terminais sinápticos, foi observada em todos os animais que receberam transplante de células derivadas da medula óssea, transfectadas ou não com o gene da condroitinase AC. Recuperação funcional espontânea foi observada em animais não-tratados. Recuperação parcial foi observada em animais que receberam injeção de veículo ou células nãotransfectadas ou transfectadas com o plasmídeo vazio, mas nenhuma recuperação foi observada em animais que foram tratados com células expressando condroitinase AC. Embora recuperação funcional não tenha sido observada, o transplante de células derivadas da medula óssea transfectadas com o vetor plasmidial pcDNA3.1(+)-condroitinase AC, em lesões no SNC, ainda poderia ser uma ferramenta útil para estudar uma forma alternativa de administração da condroitinase. / Injury to the CNS of vertebrates leads to the formation of a glial scar and production of inhibitory molecules, including chondroitin sulphate proteoglycans. Various studies suggest that the sugar component of the proteoglycan is responsible for the inhibitory role of these compounds in axonal regeneration. By degrading chondroitin sulphate chains with specific enzymes, denominated chondroitinases, the inhibitory capacity of these proteoglycans is decreased. Chondroitinase administration involves frequent injections of the enzyme into the injury site or the insertion of a cannula in the animal for enzyme infusion, which constitute rather invasive methods. A single injection, into the injury site, of cells transfected with the gene for chondroitinase AC, so that this enzyme is continuously expressed and secreted, would be a prolonged and relatively less invasive form of administration. We have produced a vector containing the gene for Flavobacterium heparinum chondroitinase AC for expression in adult bone marrowderived cells which were then transplanted into an injury site in the murine CNS. The expression and secretion of active chondroitinase AC was observed in vitro using transfected Chinese hamster ovarian CHO and gliosarcoma 9L cells and in vivo by immunofluorescence analysis which showed degraded chondroitin sulphate coinciding with the location of transfected bone marrow-derived cells. Immunolabelling of the axonal outgrowth-associated protein GAP-43 was observed in vivo and coincided with the location of degraded chondroitin sulphate. Synaptophysin, a marker of active synaptic terminals, was observed in all animals that received bone marrow-derived cell transplants, whether transfected with the gene for chondroitinase AC or not. Spontaneous functional recovery was observed in non-treated animals; partial functional recovery was observed in animals that received a vehicle injection, non-transfected cells or cells transfected with the empty plasmid, but no recovery at all was observed in animals treated with chondroitinase-AC expressing cells. Although functional recovery was not observed, bone marrow-derived mononuclear cells, transfected with the plasmidial vector pcDNA3.1(+)-chondroitinase AC and transplanted into a CNS injury site, could still be a potential tool for studying an alternative chondroitinase delivery method. / TEDE

Made available in DSpace on 2016-03-15T14:14:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 195.pdf: 1054766 bytes, checksum: 75fcd88c5f5acb965876b14c3b9091b0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Este trabalho investiga a questão da distribuição dos transplantes de medula óssea abordada a partir do princípio da justiça, entendido como equidade no acesso a esse benefício terapêutico no contexto brasileiro. O trabalho se inicia contextualizando os problemas éticos levantados pelo desenvolvimento das pesquisas com células tronco e as perspectivas terapêuticas promissoras associadas a tais pesquisas. A questão da justiça enquanto oportunidade de acesso a todos aos benefícios terapêuticos resultantes dessas pesquisas é considerada, nesse contexto, uma questão moral crucial. O transplante de medula óssea é um caso concreto de aplicação terapêutica bem-sucedida resultante das pesquisas com células-tronco. Esta é uma terapia eficaz para o tratamento de dezenas de doenças do sangue, bem estabelecida em âmbito global, inclusive no Brasil. No entanto, garantir o acesso de todos a ela não é tarefa fácil de realizar em contextos como o latinoamericano, incluindo o brasileiro, nos quais os recursos escassos conflitam com as imensas demandas na área da Saúde. O objetivo geral da investigação foi examinara prática do transplante de medula óssea no contexto brasileiro, a fim de saber se esta preenche os requerimentos do princípio da justiça como equidade, garantindo oportunidade de acesso a esse benefício a todos os que dele necessitarem, segundo a medida deste princípio. Metodologicamente trata-se de uma discussão teórica e crítica secundada por elementos qualitativos de um estudo de caso sobre os transplantes de medula óssea no Brasil. Discutimos inicialmente o conceito de justiça como equidade, investigando os fundamentos teóricos da ética dos direitos humanos e os fundamentos da concepção de justiça de Amartya Sen. Completamos esse referencial teórico com o exame da contribuição proposta pela bioética da proteção. / Com isso, pretendemos ter alcançado um adequado conceito de justiça como equidade. Passamos então à análise do contexto brasileiro, visando a saber das condições de possibilidade que tal contexto oferece para a prática da justiça no campo sanitário. Nesse sentido, analisamos o direito formal à saúde inscrito no Sistema Único de Saúde, em contraste com as imensas desigualdades que predominam no país e as iniquidades em saúde. Exploramos as diversas incongruências do sistema público de saúde, o papel do Estado e a importância da participação social. Examinamos, por fim, o sistema de transplantes de medula óssea no Brasil e as diversas espécies de dificuldades que o desafiam na tentativa de agir com justiça. A conclusão é que, embora o sistema seja sensível aos problemas bioéticos que cercam essa atividade e considere os requerimentos da justiça na distribuição dos transplantes, a equidade no acesso a esse benefício terapêutico ainda é uma exigência difícil de ser realizada em razão das características do contexto brasileiro. / The present study uses the justice theory principles to investigate how bone marrowtransplant is allocated in the Brazilian health context and how equitable is theBrazilian population access to this therapy. The first part of the study is dedicated toidentify the ethical issues brought up by the development of stem-cell researches andits outcomes. Justice theory brings a compelling moral issue to this scenario. Bonemarrow transplant is a successful application of stem cell researches and has beenstablished as an efficient therapy for several blood diseases. However, it has beendifficult to guarantee universal access to this therapy in Latin America, where limitedresources are constantly challenged by huge health care needs. The objective of thisstudy is to evaluate if equity parameters are taken into consideration in thedistribution of bone marrow transplant procedures in Brazil, according to justicetheory principles. Amartya Sen s ideas of human rights ethics and justice are thebasis for our discussion of justice as equity. Theoretical approach is complementedby the conceptual framework of the protection bioethics so as to achieve a broaderconcept of justice as equity that could be applied to the Brazilian health context. Howuniversal access to health care in Brazil is actually operationalized in view of themassive inequalities of the country. Health care system characteristics andcontradictions, the rule of the state and the importance of social control are alsoanalysed in the study. The difficulties faced in access of bone marrow transplants arealso examined in view of the bioethic challenges to regulate state actions and rightswith justice principles. Conclusions show that the health care system considersjustice and bioethics arguments in the managing of bone marrow transplants,however equity in access of such therapy is hardly achieved. (AU)^ien

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 pricilla_oliveira_ioc_dout_2007.pdf: 1378604 bytes, checksum: f0dbf6910f9fd7228967184a959a3bd6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / expansão e a urbanização da leishmaniose visceral (LV) em Mato Grosso do Sul tornaram a doença um problema de saúde pública no Estado. Para conhecer o comportamento clínico e epidemiológico da LV em indivíduos infectados pelo HIV, foi estudada uma série de 23 casos atendidos em dois hospitais da capital, Campo Grande, região Centro-Oeste do Brasil, de janeiro de 2000 a dezembro de 2006. Foram incluídos os pacientes com resultado sorológico positivo para o HIV documentado no prontuário e cultura positiva para Leishmania sp. em aspirado de medula óssea. Oitenta e sete por cento dos pacientes eram do sexo masculino, com mediana de idade de 37 anos (variando de 21 a 56 anos) Todos os pacientes foram procedentes de Mato Grosso do Sul. 34,8% dos pacientes apresentavam o uso de drogas injetáveis como categoria de exposição para o HIV. A maioria dos pacientes apresentava imunodeficiência avançada, com 80% dos pacientes com contagem de linfócitos T CD4+ inferior a 200 células/mm3 (mediana - 44,5 células/mm3) durante o primeiro episódio de LV. Apesar deste fato, ambas as doenças foram diagnosticadas simultaneamente em 43% dos pacientes. Todos os pacientes infectados pelo HIV com LV apresentaram febre e 78% hepatoesplenomegalia. Os pacientes apresentaram graus variados de diminuição das células sangüíneas e de anormalidades bioquímicas A pesquisa direta de Leishmania sp. em aspirado de medula óssea demonstrou alta positividade (87%) nos pacientes estudados. Cinco pacientes foram tratados exclusivamente com antimoniato de meglumina, cinco pacientes exclusivamente com desoxicolato de Anfotericina B e doze pacientes foram tratados com ambas as terapias, por reação adversa ou falha ao antimoniato de meglumina. Uma a duas recidivas por paciente foram observadas em 56,7% dos casos. Somente um paciente foi a óbito em conseqüência da LV / The outspread and urbanization of visceral leishma niasis in Mato Grosso do Sul becoming the disease a public health problem in the state. To know the clinical and epidemiological characteristics of visceral leishmaniasis in HIV patients, a series of 23 patients attended in Campo Grande, center west region of Brazil, from 2000 to 2006, was studied. We selected the patients with HIV and bone marrow culture positive for leishmaniasis The medi an age of patients was 37 years (range 21*56), 87% were male, All the patients live d in Mato Grosso do Sul, 34.8 percent of patients had intravenous drug use as the ir HIV transmission category. The majority of patients had advanced HIV disease, 80 p ercent had CD4+T cells count less than 200 cells/mm 3 and a median of 44.5 cells/mm3 during the first ep isode of visceral leishmaniasis. Despite of this fact, both diseases were diagnosed at the same time in 43 percent of the patients. All HIV in fected patients with visceral leishmaniasis presented fever, 78 percent presented enlargement of the liver and spleen. The patients presented varying degrees of b lood cytopenias and biochemical abnormalities. Diagnosis was also achieved in 87% o f the patients with the detection of Leishmania amastigotes in Giemsa*stained smears from aspirate s of bone marrow Five patients were treated only with meglumine anti moniate, four patients were treated with only amphotericin B and twelve patient s were treated with both therapies. One or two relapses were seen in 56.7 pe rcent of patients. Only one patient died due to leishmaniosis