Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Thiago Demarchi Munhoz / Banca: Daniela Gomes da Silva / Banca: Geórgia Modé Magalhães / Resumo: Este estudo teve como objetivo a quantificação sérica de hormônios e citocinas indutores (eritropoietina e IL-3) e supressores (paratormônio, IL-1β, TNFα e IFNγ) da eritropoiese, correlacionando-os com as variáveis eritrocitárias periféricas e centrais. Amostras de sangue periférico, urina e medula óssea foram obtidas de 10 cães com doença renal crônica estádio 2 (DRC2), 10 cães com DRC estádio 3 (DRC3), 10 cães com DRC estádio 4 (DRC4) e 10 cães adultos saudáveis (grupo controle) com vistas à realização de hemograma, análise bioquímica sérica e urinária, urinálise, ensaios imunoenzimáticos e análise citológica da medula óssea. As concentrações dos fatores indutores e supressores da eritropoiese, assim como os resultados do mielograma dos cães do DRC2 assemelharam-se aos do grupo controle, e apesar de não terem manifestado anemia, a presença de reticulocitose alerta para o fato de fatores externos a medula óssea estarem precocemente causando perda ou destruição dos eritrócitos. A anemia em cães com DRC está relacionada ao aumento nas concentrações de paratormônio e TNFα, e a exacerbação dos referidos fatores supressores, bem como à hipoplasia da série eritróide, representada principalmente pela redução da população de eritroblastos policromatofílicos e ortocromáticos, constituem, parcialmente, a base da gênese e do agravamento do estado anêmico nas fases mais avançadas da DRC em cães / Abstract: The aim of this study was to evaluate bone marrow precursor cells, circulating concentrations of cytokines and hormones that can stimulate (erythropoietin and IL-3) and suppress (parathyroid hormone, IL-1β, TNF and IFN) erythropoiesis, and make their correlation with the peripheral and central erythrocyte variables. Peripheral blood samples, urine and bone marrow were obtained from 10 dogs with chronic kidney disease stage 2 (CKD2), 10 dogs with CKD stage 3 (CKD3), 10 dogs with CKD stage 4 (CKD4), and 10 healthy adult dogs (control group) for complete blood count (CBC), serum and urinary biochemical analysis, urinalysis, immunoassays and cytological analysis of bone marrow. The concentrations of erythropoiesis stimulator and suppressor factors, and cytological bone marrow results from CKD2 dogs were similar to those of the control group. This group also exhibited reticulocytosis even though not have expressed anemia, which means that extrinsic factors are early cause of blood loss or destruction of red blood cells. The anemia in dogs with CKD is related to increased parathyroid hormone and TNFα serum concentrations. The increases of such suppressor factors in association with erythroid hypoplasia are considered as part of the genesis and the aggravation of the anemic state in the end stages of CKD in dogs / Doutor

Orientador: Maria Cecilia Rui Luvizotto / Banca: Fabio dos Santos Nogueira / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Resumo: O objetivo dessa pesquisa foi analisar a resposta imune celular de cães negativos (GI), vacinados (GII) e positivos (GIII) para a LVC por meio da imunocitoquímica para os anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 na capa leucocitária e medula óssea. Na capa leucocitária, quando comparados os grupos entre si, não houve diferença estatística para as células T CD4. Os grupos I e III apresentaram maior imunomarcação para anti-CD8. Embora não tenha sido observada diferença estatística (p>0,05), a imunomarcação para FOXP3 mostrou os menores valores percentuais nos três grupos estudados. Os grupos I e II apresentaram maior imunomarcação para anti-CD4, seguida do anti-CD8, quando comparados os anticorpos em cada grupo separadamente. Nos animais do grupo III, foi observada maior expressão de células imunorreativas ao anti-CD8 seguida do anti-CD4, e valores reduzidos para FOXP3. Nas células da medula óssea não foi verificada diferença estatística na expressão dos anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 quando comparados os grupos entre si. Na análise comparativa entre os anticorpos testados, entretanto, foi observada maior marcação para o anticorpo anti-CD4 em GI, ausência de diferença estatística em GII e maior percentual de células positivas para anti-CD8 em GIII. Os valores de FOXP3 também se mantiveram reduzidos em todos os grupos. A técnica de cito inclusão foi padronizada com sucesso, obtendo 68% de viabilidade para amostras da capa leucocitária e medula óssea. Os resultados obtidos neste estudo indicam que a presença de células T CD4+ e CD8+ em animais vacinados, em associação à expressão reduzida do marcador de células T regulatórias FOXP3, sugerem que a vacina Leishmune® exerce um efeito estimulatório na resposta imune celular de cães, promovendo um incremento da resposta protetora Th1 / Abstract: The aim of this research was to analyze the cellular immune response of negative (GI), vaccinated (GII) and positive (GIII) dogs for VCL by immunocytochemistry for CD4, CD8 and FOXP3 antibodies on the buffy coat and bone marrow. In the buffy coat, when compared the three groups together, there was no statistical difference in CD4+ T cells. Groups I and III showed higher immunostainning for anti-CD8. Although no statistical difference was observed, immunostainning for FOXP3 showed the lowest percentages in all three groups. Groups I and II showed higher immunoreactivity to anti-CD4 followed by anti-CD8 antibodies when compared each group separately. In group III, we observed increased expression of immunoreactive cells to anti- CD8 followed by anti-CD4, and reduced values for FOXP3. In bone marrow cells there was no statistical difference in the expression of anti-CD4, anti-CD8 and FOXP3 antibodies in the three groups. The comparative analysis between the antibodies tested, however, revealed greater cellularity expressing anti-CD4 in GII, and higher percentage of anti-CD8 positive cells in GIII. The group II showed no statistical difference between the antibodies analyzed. FOXP3 values also remained low in all groups. The results of this study indicate that the presence of CD4 + and CD8 + T lymphocytes in the vaccinated animals, combined with reduced expression of the marker of regulatory T cells FOXP3 suggest that Leishmune ® vaccine exerts a stimulatory effect on immune response of dogs, promoting an increase in the protective Th1 response / Mestre

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000388585-0.pdf: 2402252 bytes, checksum: 61c5f710d7d456a08638eac157bdc111 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The bone marrow besides having a high number of heterogenic cells, like connective, hematopoietics, and neuronal cells, also presents a great number of stem cells. These cells are pluripotent, so can differentiate in any connective cell when a stimulus is given. The aim of this study was to evaluate bone marrow stem cells adhesion, proliferation, and differentiation to osteoblast in vitro, over a collagen membrane and a poli-lactic (glycolic) acid scaffold (PLGA), using either recombinant human bone morphogenetic protein (rhBMP-4) and platelet rich plasma (PRP). Bone marrow cells were aspirated from iliac crest and purify using specifics techniques. These cells were separated in main big groups cultured over collagen membrane and PLGA scaffold. Each culture had 4 distinct treatments: (1) with rhBMP-4; (2) with rhBMP-4 and PRP; (3) with PRP; and (4) control (only standard medium). The groups were evaluated after 6, 9 14 and 21 days. Microscopic analysis of collagen membrane and PLGA scaffold were performed using either Propidium Iodide, and Eosin and Hematoxilin. Real time PCR was performed to identify the expression level of osteopontin and osteocalcin, and standard PCR to osteopontin. The results showed cellular adhesion in both biomaterials, and suggest a higher cell proliferation and differentiation in rhBMP-4 and PRP, and PRP groups. The groups with rhBMP-4 had more differentiate cells that control group. The data obtained here indicate that PRP and/ or rhBMP-4 induce adhesion, proliferation and differentiation of bone marrow stem cells into osteogenic lineage. / O estroma da medula óssea, além de conter uma população heterogênea de células conjuntivas, nervosas e hematopoiéticas, mantém uma quantidade de células com características de células tronco (células mesenquimais indiferenciadas). Estas possuem capacidade de se diferenciarem em qualquer célula de natureza conjuntiva quando estimuladas pelo organismo. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar a adesão, a proliferação e a diferenciação de células mesenquimais da medula óssea cultivadas sobre membrana de colágeno bovino e sobre arcabouço de ácido poliglicólico polilático (PLGA) com a adição do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) e/ ou da proteína morfogenética óssea recombinante humana (rhBMP-4). As células foram coletadas da medula óssea da crista do osso ilíaco humana e separadas por técnica específica. As células foram cultivadas em dois suportes: membrana de colágeno e arcabouço de PLGA, e receberam 4 tratamentos distintos: (1) com rhBMP-4, (2) com rhBMP-4 e PRP, (3) com PRP e (4) controle (somente meio de cultura). Os subgrupos foram avaliados em 6, 9, 14 e 21 dias. Foram realizadas análises microscópicas das membranas e arcabouços com as colorações de Iodeto de Propídio e de Hematoxilina e Eosina. Foi feito PCR em tempo real a fim de se avaliar a expressão de osteopontina e osteocalcina e PCR convencional para osteopontina. Os resultados mostraram adesão celular tanto na membrana de colágeno como no arcabouço de PLGA. Sugere-se haver uma maior proliferação e diferenciação celular nos grupos que foram adicionados PRP, e rhBMP-4 e PRP juntos. Nos grupos com rhBMP-4 parece haver uma maior diferenciação celular que o grupo controle. Os dados obtidos indicam que o PRP e/ ou a presença de rhBMP-4 induzem adesão, proliferação e diferenciação de células da medula óssea em células de linhagem osteogênica.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000417773-0.pdf: 1138982 bytes, checksum: 03423e2cddaa5a43349be69c0853e615 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Given that the majority of osseointegrated implants undergo some type of surface conditioning in order to improve osseoitegration and that in vitro differentiation of mesenchymal cells into osteoblasts is a mastered process that has been used for evaluating a given biomaterial with regard to its osteinductive and osteoconductive capabilities, the present work aims to evaluate the adhesion, proliferation and differentiation of human bone marrow cells on titanium implant surfaces that have or have not been treated by discrete calcium phosphate deposition. Human bone marrow cells obtained from a single donor were cultured in media containing 12 titanium discs of one of the following: the Bonelike® (Biomet 3I, Brazil) with a surface treated by double acid etching; the Osseotite™ (Biomet 3I, USA) with similar surface treatment and the Nanotite™(Biomet 3I, USA). After 14 and 21 days of culture, real time PCR and SEM examinations were performed. From the results we concluded that implant surface roughness allows cell adhesion, differentiation and proliferation, the ALP synthesis is higher in Bonelike® and the presence of calcium phosphate nanoparticles on an implant surface leads to enhanced BGLAP synthesis and cell proliferation. / Os implantes osseointegrados, em sua maioria, possuem algum tipo de condicionamento da sua superfície que visa melhorar a osseointegração. O mecanismo de diferenciação celular in vitro de células mesenquimais em osteoblastos já é bastante conhecido e serve para avaliação das propriedades de osteoindução e osteocondução de biomateriais. O presente estudo tem por objetivo avaliar a adesão, proliferação e diferenciação das células da medula óssea humana em superfícies de implantes de titânio com e sem deposição discreta de fosfato de cálcio. As células foram obtidas a partir da medula óssea de um doador humano. Foram selecionados 12 discos de titânio do tipo Bonelike® (Biomet 3I, Brasil) com superfície tratada por duplo ataque ácido; Osseotite™ (Biomet 3I, USA) com superfície tratada por duplo ataque ácido e Nanotite™ (Biomet 3I, USA). Após 14 e 21 dias de cultura foi realizado PCR em tempo real para avaliação da diferenciação celular e microscopia eletrônica de varredura para avaliação da proliferação e adesão celular aos discos de titânio. Os resultados indicaram que a rugosidade da superfície dos discos de titânio possibilita a adesão, diferenciação e proliferação celular, que a síntese de ALP é maior na superfície Bonelike e que as partículas de fosfato de cálcio demonstraram maior grau de síntese de BGLAP e proliferação celular.

Os genes HLA são os mais polimórficos do genoma humano e suas frequências alélicas variam entre populações de diferentes regiões e etnias pelo mundo. Assim, os genes HLA têm sido usados como marcadores genéticos em estudos de genética de populações e história do povoamento humano. Este trabalho teve como objetivo realizar a caracterização HLA da população gaúcha, visando contribuir no melhor entendimento da ancestralidade e miscigenação da população do Rio Grande do Sul, bem como na efetividade na gestão de programas de transplante de medula óssea. Foi realizado um estudo com dados genéticos HLA de doadores de medula óssea do Rio Grande do Sul (RS), onde foi avaliada a correspondência do perfil HLA dentro e entre grupos étnicos com a autodeclaração de cor de pele – sistema oficial adotado pelo IBGE para caracterização étnica da população. Os resultados indicam que o sistema HLA é um melhor indicador de ancestralidade que a auto avaliação baseada em cor de pele, sendo esta uma ferramenta ineficiente para a caracterização da população. Para a caracterização da variação molecular HLA em diferentes regiões do RS, foram realizadas análises em dados genéticos HLA de mais de 90 mil doadores de medula óssea. Os resultados não indicaram correlação entre a variação HLA e a divisão geográfica oficial definida pelo IBGE no RS. Por outro lado, foram observadas diferenças a respeito da etnia. Além disso, quando comparada com as populações parentais e com dados históricos, a população rio-grandense apresenta maior similaridade genética com suas populações parentais correspondentes. Este estudo apresenta uma caracterização completa da variação genética HLA no RS. Análise espacial e georeferenciamento de dados genéticos HLA e de doenças autoimunes no estado também foram realizadas. Os resultados indicam uma estrutura genética HLA compatível com a história de colonização do RS, onde é possível observar diferenciação entre as regiões que sofreram processo de colonização distintos, como as regiões sudoeste e metropolitana em relação à região central e noroeste. Análises espaciais sobre dados de internação de doenças autoimunes foram realizadas, revelando agrupamentos para artrite reumatoide e doença de Crohn na região centro-oriental do estado e para esclerose múltipla agrupamento na região centro-ocidental. A avaliação da correlação entre a frequência alélica e a ocorrência de doenças autoimunes indicou uma correlação significativa entre o alelo HLA-B*08 e artrite reumatoide. O mapeamento genético de populações tem grande relevância econômica na formulação de campanhas e políticas de saúde pública, contribuindo no planejamento e ajuste de ações clínicas, bem como informar e educar profissionais e público. Nesta pesquisa são apresentados extensivos dados referentes à caracterização HLA da população rio-grandense levando em consideração dados históricos e geográficos. Os resultados aqui apresentados podem ter utilidade na otimização de campanhas de recrutamento de medula óssea bem como contribui com o entendimento do contexto histórico e demográfico do estado do Rio Grande do Sul. As estratégias e ferramentas utilizadas nesta pesquisa poderão servir como base para futuros estudos em outras populações. / HLA genes are the most polymorphic of the human genome and their allelic frequencies vary among populations from different regions and ethnicities throughout the world. Thus, HLA genes has been used as genetic markers in population genetics studies and in the history of human settlement. This work aimed to perform the HLA characterization of Rio Grande do Sul (RS) population, looking forward to contribute in the understanding of the ancestry and miscegenation of the Rio Grande do Sul population, as well as in the effectiveness in the management of bone marrow transplantation programs. A study with HLA genetic data of bone marrow donors from Rio Grande do Sul was performed, evaluating the correspondence of the HLA profile within and between ethnic groups with the self-declaration of skin color – official system adopted by the IBGE for population ethnic characterization. The results indicate that the HLA system is a better indicator of ancestry than the self-evaluation based on skin color, this being an inefficient tool for the characterization of the population. For the characterization of HLA molecular variation in different RS regions, analyzes were performed on HLA genetic data of more than 90,000 bone marrow donors. The results did not indicate correlation between the HLA variation and the official geographic division defined by IBGE in RS. On the other hand, major differences were observed regarding. In addition, when compared to the parental populations and with historical data, local populations from Rio Grande do Sul were found to be genetically similar to their corresponding parental European populations. This study provides a thorough characterization of the HLA genetic variation in RS. Spatial and georeferencing analysis of HLA genetic data and autoimmune diseases in the state were also performed. The results indicate a HLA genetic structure compatible with the RS history of colonization, where it is possible to observe differentiation among regions that underwent different colonization processes, such as the southwest and metropolitan regions in relation to the central and northwestern regions. Spatial analyzes with data from hospitalization of autoimmune diseases were performed, revealing clusters for rheumatoid arthritis and Crohn's disease in the central-oriental region of the state and for multiple sclerosis clustering in the central-occidental region. The correlation analysis between allelic frequency and the occurrence of autoimmune diseases indicated a significant correlation between the HLA-B*08 allele and rheumatoid arthritis. Genetic mapping of populations has great economic relevance in the formulation of public health campaigns and policies, contributing to the planning and adjustment of clinical actions, as well as informing and educating professionals and the public. In this research, extensive data referring to the HLA characterization of the Rio Grande population taking into account historical and geographic data are presented. The results presented here may be useful in the optimization of bone marrow recruitment campaigns as well as contribute to the understanding of the historical and demographic context of Rio Grande do Sul state. The strategies and tools used in this research may be useful as a basis for future studies in other populations.

O uso de células da medula óssea no tratamento da insuficiência hepática aguda é uma alternativa promissora, visto que o único tratamento disponível atualmente é o transplante hepático o qual, devido à falta de órgãos para transplante e complicações pós-cirúrgicas, está associado a uma alta mortalidade. O interesse na identificação de populações celulares capazes de se diferenciar em células tipo-hepatócitos tem ganhado grande atenção, não somente como uma promissora fonte de células para terapia celular de doenças hepáticas, mas também como potencial fonte celular para modelos in vitro de testes pré-clínicos de medicamentos, modelos para estudo da hepatogênese, e desenvolvimento de fígados bioartificiais. O presente estudo teve como objetivo identificar a capacidade de diferentes populações de células da fração mononuclear da medula óssea (FMMO) de se diferenciar em células tipo-hepatócitos. Para isso, utilizamos um sistema de co-cultivo, onde as células da fração aderente e nãoaderente da FMMO eram mantidas em contato com o meio de hepatócitos derivados de animais com ou sem lesão por Tetracloreto de Carbono (CCl4). Nossos resultados mostram que células da fração não-aderente são capazes de adquirir características típicas de hepatócitos após 24 horas de exposição às células do tecido lesionado, tais como expressão gênica de Albumina e Citokeratina-18, e produção e secreção de uréia. Foi identificada a presença de microvesículas carregando material genético específico de hepatócitos no sobrenadante das células diferenciadas, indicando um possível mecanismo molecular na indução da diferenciação. Este trabalho permitiu o estudo da diferenciação celular in vitro e análise do papel do microambiente de lesão neste processo. / Cell therapy using bone marrow-derived cells is a promising approach for the treatment of acute liver failure, as liver transplant is associated to high mortality due to lack of organs and post-surgical complications. The identification of cell populations capable of generating hepatocyte-like cells has gained immense interest, not only as a promising cell source for cell-based therapy of liver diseases, but also as a potential cell source for in vitro models of drug safety testing, models for studying hepatogenesis, and development of bioartificial livers. In the present study, we investigated the capability of different populations from the bone marrow mononuclear cells (BMMC) to differentiate into hepatocyte-like cells. For that, adherent and non-adherent cells from the BMMC were co-cultured with hepatocytes obtained from animals with or without Carbon Tetrachloride (CCl4)-induced liver injury. Our results showed that non-adherent BMMC presented signs of differentiation, such as Albumin and Cytokeratin-18 expression and urea production, after 24 hours of co-culture with damaged hepatocytes. Microvesicles carrying hepatocyte-specific genetic material were detected in the supernatant from differentiated cells, thus suggesting a mechanism of differentiation. In summary, this study assessed in vitro differentiation of BMMC and analyzed the role of injury micro-environment in cell plasticity.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Ciências Médicas, 2012. / Submitted by Liliane Simões (miix007@gmail.com) on 2013-04-08T12:03:48Z No. of bitstreams: 1 2012_RozeneideMagalhaesAlves.pdf: 3353342 bytes, checksum: c912abe9692a9ba2ec498d82124c6c94 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-04-08T14:20:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RozeneideMagalhaesAlves.pdf: 3353342 bytes, checksum: c912abe9692a9ba2ec498d82124c6c94 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-08T14:20:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RozeneideMagalhaesAlves.pdf: 3353342 bytes, checksum: c912abe9692a9ba2ec498d82124c6c94 (MD5) / Este estudo foi conduzido em linhagens B12/B12 e B4/B4 de aves congênicas de Praga geneticamente idênticas em todos os loci exceto no MHC relacionado às respostas imunes que conferem resistência ou susceptibilidade à oncogênese induzida pelo vírus (RSV). As linhagens de aves de Praga foram doadas ao LMPDC/UnB pelo Instituto de Genética Molecular da Academia de Ciências de Praga. Ovos férteis de galinha foram inoculados com 100 tripomastigotas de Trypanosoma cruzi e os pintos nasceram sem a infecção, mas eles retiveram sequências de minicírculos de kDNA mitocondrial do parasito em vários cromossomos. As aves com as mutações (kDNA+) desenvolveram cardiomiopatia com os aspectos similares aqueles vistos na doença de Chagas humana. Tendo estabelecido o modelo transfilo refratário ao T. cruzi foi possível investigar a autoimunidade e determinar a patogêneses da rejeição do coração. A transferência passiva das lesões mediante injeções de células mononucleares do sangue de aves mutadas (kDNA+) para aves receptoras controles sadias mostrou pequenos focos inflamatórios no miocárdio. A ausência de tais achados em aves controles (kDNA-) mostrou que apenas linfócitos de aves mutadas (kDNA+) aderiam ao miocárdio. Mas não foi obtida cardiomiopatia mediante transferência de células mononucleares do sangue de aves mutadas para aves sadias. Entretanto, a destruição de células da medula óssea de aves mutadas (kDNA+) com drogas, e sua substituição pelo enxerto de medula óssea sadia de aves controle (kDNA-) inibiu a cardiomiopatia na ave kDNA+. Este experimento foi monitorado pelo enxerto de coração repórter no subcutâneo da ave receptora, cujo estudo histopatológico aos onze dias pós-enxerto revelou ausência de lesão inflamatória. Em experimento reverso, foi feita transferência da patologia de aves mutadas (kDNA+) para aves controle (kDNA-), sadia que tiveram a medula óssea destruída com drogas. Nesse experimento, o enxerto de medula óssea de aves kDNA+ em aves receptoras kDNA- revelou infiltrado inflamatório e lesão no coração repórter enxertado no subcutâneo. O estudo imunocitoquimico revelou no coração repórter patologia similar a lesão no coração da ave adulta, onde a destruição do miocárdio era feita pelos infiltrados de linfócitos T citotóxicos CD8-α, CD8-β, CD8-γδ, CD8-vβ1, e CD8-vβ2 que lisa as células alvo. As aves kDNA+ que sucumbiram a cardiomiopatia e aquelas que foram sacrificadas aos 12 meses de idade revelaram lesões inflamatórias autoimunes no coração adulto e no coração repórter. Os resultados que mostraram inibição da patologia autoimmune no coração das aves kDNA+ pela substituição da medula óssea doente pela medula óssea de ave sadia sugerem a possibilidade de tratamento da cardiomiopatia chagásica pela transferência de medula óssea. / The study was conducted in lineages B12/B12 and B4/B4 of congenic birds of Prague, showing complete genetic identity in all loci but different MHC carrying on the immune responses that afford resistance and/or susceptibility to RSV induced oncogenesis. The congenic birds were donated by the Czech Republic Academy of Sciences Institute of Molecular Genetics our Laboratory at the University of Brasilia. Fertile chicken eggs were inoculated with 100 tripomastigotes of Trypanosoma cruzi and the chicks hatched were parasite-free, but they retained the parasite mitochondrial kDNA minicircle sequences in various chromosomes. The chicken with mutations (kDNA+) developed Chagas-like heart disease with features similar to those seen in the human disease. Having established the transkingdom model system to study the pathogenesis, it was possible to investigate the autoimmune rejection of the kDNA+ chicken heart. The passive transfer of blood mononuclear cells from mutated (kDNA+) birds to naive recipients revealed small inflammatory infiltrates in the myocardium, but the cardiomyopathy was not observed. The absence of lymphocyte infiltrates in the control chicken (kDNA-) heart showed that only kDNA+ lymphocytes adhere to the myocardium. Moreover, the Chagas-like cardiomyopathy was not obtained by injections of blood mononuclear cells from kDNA+ chickens, and, therefore, other experiments of transfer of bone marrow cells were conducted, aiming at production of the heart disease in the recipient chicken. In this regard, kDNA- mutated chicken bone marrow cells, which were destroyed with drugs, were replaced by healthy bone marrow cells from sick (kDNA+) chicken. This experiment was monitored by a reporter heart grafted in the subcutaneous pouch of a recipientbird. Eleven days after grafting, the histopathology study revealed inflammatory cell infiltrates and destruction of the myocardium by cytotoxic T- lymphocytes T CD8-α, CD8-β, CD8-γδ, CD8-vβ1, e CD8-vβ2 that lyse the target cells . The kDNA+ birds that succumbed to natural death and those that did not succumb to heart disease were sacrificed at 12 months of age. The kDNA+ (mutated) birds‟ revealed autoimmune inflammatory lesion similar to that in the reporter heart. The results of these experiments suggested a reverse experiment, aiming at the inhibition of the pathology. The replacement of the sick (kDNA+) bone marrow by healthy bone marrow from a naive (kDNA-) donor inhibited the inflammatory autoimmune lesions in the heart of the kDNA- mutated, sick chicken.The inhibition of the heart pathology in the kDNA+ chicken experiments deciphered a treatment possible for the human Chagas heart disease.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o reparo ósseo em defeitos de tamanho não crítico tratados com enxerto de matriz orgânica de osso bovino medular em bloco ou de osso cortical em microgrânulos de 0,25-1,0mm (ambos materiais Gen-Ox®- Baumer-SA Brasil). Foram confeccionados defeitos ósseos de 6mm de diâmetro por 8mm de profundidade usando trefina cirúrgica, em ambas epífises distais dos fêmures de coelhos machos Nova Zelândia, sendo 15 defeitos preenchidos com matriz óssea em bloco (grupo experimental I), 15 com matriz óssea em microgrânulos (grupo experimental II) e 15 com coágulo sanguíneo (controle). Os animais de cada grupo foram mortos 30, 90 e 180 dias após a cirurgia. As epífises foram coletadas, fixadas e radiografadas usando o sistema de radiografia digital Digora e filmes periapicais convencionais. As imagens digitais (modos positivo e negativo) e as radiografias convencionais foram avaliadas por dois examinadores através de escores. Após isso, as epífises foram desmineralizadas com EDTA e incluídas em parafina. Foram obtidos cortes com 6µm de espessura que foram corados com hematoxilina e eosina e com o Tricrômico de Masson e observados em microscópio óptico. Na análise microscópica, pós 30 dias, o grupo experimental II apresentou algumas partículas de material em reabsorção por células mononucleares e também uma ligeira maior quantidade de osso trabeculado que os outros grupos. Neste período, enquanto os grupos experimentais apresentaram o defeito preenchido completa ou parcialmente com osso trabeculado, o grupo controle apresentou invaginação do tecido conjuntivo para o interior de defeito, apresentando apenas uma estreita faixa de tecido ósseo de arranjo trabecular. Após 90 dias todos os grupos mostraram intensa remodelação do osso trabeculado que foi substituído por osso lamelar. Após 180 dias, em geral, ambos os grupos experimentais e o grupo controle apresentaram um reparo semelhante. Na análise radiográfica não houve diferenças estatisticamente significantes nem intra nem interexaminadores. Também não foram observadas diferenças significantes entre os grupos em todos os períodos avaliados (p>0,05). Dessa forma, pela análise radiográfica o reparo ósseo foi similar em ambos os grupos experimentais e o controle nos períodos de 30, 90 e 180 dias após a cirurgia. Apesar do reparo ser similar em ambos os grupos experimentais e o controle no período de 180 dias pela análise microscópica e em todos os períodos pela análise radiográfica, o uso da matriz óssea desmineralizada em bloco ou microgrânulos evitou a invaginação do tecido conjuntivo para o interior do defeito ósseo nas fases iniciais do reparo. / The aim of this work was to verify the osseous repair in non through-andthrough defects treated with blocks of lyophilized bovine bone organic matrix of cancellous origin or micro granules (0.25-1.0 mm) of lyophilized bovine bone organic matrix of cortical origin (both materials Gen-Ox®- Baumer SA- Brazil). An osseous defect, 6mm in diameter by 8mm in depth, was created in both distal femoral epiphyses of male New Zealand White rabbits using a trephine bur. Fifteen defects were grafted with cancellous blocks (experimental group I), fifteen with cortical micro granules (experimental group II) and fifteen were filled with blood clot (control). The rabbits of each group were sacrificed 30, 90 and 180 days after surgeries. Thereafter, the epiphyses were collected and fixed. Radiographs were taken using the Digora digital radiographic system and conventional periapical films. The radiographic digital images (positive and negative) and the conventional radiographs were evaluated using scores by two examiners. After this, the epiphyses were demineralized with EDTA and embedded in paraffin. Semi-serial 6-µm thick sections were obtained, stained with hematoxylin and eosin and Masson Trichromic and examined under a light microscope. After 30 days the experimental group II presented some particles of bone matrix in resorption by mononuclear cells and a larger amount of primary woven bone than did the other groups. Both experimental groups showed total or partial closure by woven bone while the control group exhibited migration of the connective tissue into the defect area. After 90 days the experimental and control groups showed intense remodelation of neoformed woven bone that was replaced by lamellar bone. Generally, after 180 days both experimental and control groups exhibited a similar pattern of repair. In the radiographic analysis, neither intra-examiners significant differences nor interexaminers significant differences were observed. Also no significant differences among the groups in all evaluated periods were observed (p>0.05). The osseous repair evaluated by digital and conventional radiographs was similar in both experimental groups and control groups in the periods of 30, 90 and 180 days post-surgery. Although the bone formation appeared similar in the experimental and control groups after 180 days by the histological analysis and in all periods by radiographic analysis, the use of lyophilized bovine bone organic matrix in blocks or micro granules avoided the migration of connective tissue into the defect area in the initial phases of the repair.

Trata-se de uma pesquisa que utilizou a revisão integrativa da literatura que objetivou as possíveis intervenções de enfermagem para os familiares de clientes transplantados de medula óssea. Realizou-se a busca de artigos e teses nas bases de dados eletrônicas Lilacs e Medline (período de 01/01/1990 a 05/05/2005), utilizando-se as palavras: “bmt” e “family” e “bone marrow transplantation” e “family” respectivamente. Foram identificadas duas publicações no Lilacs, sendo que apenas uma foi pertinente ao tema proposto e 807 publicações no Medline, das quais apenas 24 abordavam o tema proposto, a amostra foi constituída por 25 publicações. Para análise dos artigos utilizou-se um instrumento para identificação das características dos artigos, níveis de evidências, delineamento da pesquisa, características da crise familiar, fatores que influenciam a habilidade das famílias para enfrentar e se adaptar a uma crise e, por fim, intervenções de enfermagem propostas. Foi utilizado o modelo de crise proposto por Hill e Hansen que classifica a crise em quatro categorias: características do evento, ameaças percebidas, avaliação dos recursos da família e experiência passada em crises. Os resultados mostraram que 96% dos artigos foram obtidos do Medline, sendo que 12 (48%) artigos foram desenvolvidos por enfermeiros e os demais por outros profissionais. Em relação ao tipo de revista, 36% dos artigos foram publicados em periódicos específicos de enfermagem, sendo que 72% provém dos EUA, 16% da Grécia, Canadá, Polônia e Brasil (distribuídos igualmente) e 12% não foi possível identificar a procedência. As evidências clínicas variaram entre os níveis 4(64%), 5 (4%) e 6 (28%), e mostraram a importância da comunicação efetiva e clara entre os membros familiares, equipe e paciente para minimizar a ansiedade e depressão; que os tipos específicos de família, suas características, coesão, poucos conflitos, orientações culturais e intelectuais e ênfase religiosa promovem maior suporte emocional aos mesmos e que os grupos de apoio e redes de apoio minimizam a ansiedade, angústia e a depressão vivenciada pelo paciente e sua família. Quanto às intervenções percebe-se que a maioria está voltada para os aspectos psicológicos e sociais, sendo relevantes a ação do enfermeiro nas propostas de estratégias de enfrentamento para o familiar e o paciente frente às diversas fases do TMO. As intervenções propostas na literatura vão ao encontro das sugeridas pela NIC para os diagnósticos de enfermagem “processos familiares interrompidos e enfrentamento familiar comprometido”; em especial o suporte emocional (64%), suporte familiar (36%), redução da ansiedade (28%), grupo de apoio (32%), melhora do enfrentamento (40%) e assistência quanto aos recursos financeiros (24%). Apreende-se que outras intervenções sugeridas pela NIC poderão ser desenvolvidas pelos enfermeiros. / This study presents an integrative literature review of possible nursing interventions for family members of bone marrow transplant (BMT) patients. We looked for articles and theses in the electronic databases Lilacs and Medline (from 01/01/1990 to 05/05/2005), using the following keywords: “bmt” and “family” and “bone marrow transplantation” and “family” respectively. Two publications were identified in Lilacs, one of which was relevant for the proposed subject, against 807 publications in Medline, 24 of which dealt with the proposed theme. Thus, the sample consisted of 25 publications. In the analysis, we used an instrument to identify the articles’ characteristics, levels of evidence, research design, family crisis characteristics, factors influencing the families’ ability to deal with and adapt to a crisis and, finally, proposed nursing interventions. The crisis model by Hill and Hansen was used, which classifies a crisis into 4 categories: event characteristics, perceived threats, family resources and past crisis experience. The results evidenced that 96% of the articles came from Medline, 12 (48%) of which were developed by nurses and the remainder by other professionals. What the type of journal is concerned, 36% of the articles were published in specific nursing periodicals, 72% of which were from the USA, 16% from Greece, Canada, Poland and Brazil (equal distribution) and, for 12%, the origin could not be identified. Clinical evidence varied between levels 4 (64%), 5 (4%) and 6 (28%) and demonstrated the importance of effective and clear communication between family members, team and patient with a view to minimizing anxiety and depression; that specific family types, their characteristics, cohesion, few conflicts, cultural and intellectual orientations and religious emphasis provide greater emotional support and that support groups and networks minimize the anxiety, anguish and depression patients and relatives experience. Most interventions are aimed at psychological and social aspects. Nursing actions are relevant in strategies proposed for family members and patients to cope with the different phases of BMT. The interventions proposed in literature are in accordance with suggested NIC interventions for the nursing diagnoses “interrupted family processes and compromised family coping”; especially emotional support (64%), family support (36%), anxiety reduction (28%), support group (32%), improved coping (40%) and financial aid (24%). We believe that nurses can develop other NIC interventions.

A falência hepática fulminante é caracterizada pela rápida perda da função hepática com alta mortalidade. Neste trabalho verificamos o efeito da administração da fração mononuclear de células da medula óssea em ratos submetidos à lesão hepática aguda provocada por paracetamol, que atende aos critérios de um bom modelo de lesão hepática auxiliando na investigação dos mecanismos fisiopatológicos. Foram utilizados 173 ratos Wistar fêmeas para a realização deste estudo. Os animais foram pré-induzidos por fenobarbital 350mg/L, diluídos na água ingerida, durante quatro dias e após receberam uma dose de 1g/Kg de paracetamol via intraperitonial. A fração mononuclear de medula óssea de ratos machos foi purificada por gradiente de Ficoll e administrada nos animais 24 horas após a lesão. Uma concentração de 1x106 células marcadas por DAPI, diluídas em 0,2mL de PBS, foi injetada através da veia porta. O grupo sham recebeu o mesmo volume de solução salina através da veia porta e um subgrupo para estudo do dano oxidativo recebeu N-Acetilcisteína 150mg/kg intraperitonialmente. Experimentos prévios foram realizados para o estudo da melhor via de injeção celular, comparando a veia porta com a veia da cauda, através da avaliação da mortalidade cirúrgica. Pode-se observar um aumento da sobrevida nos ratos tratados com células de medula pela veia porta e com presença de células DAPI positivas no fígado. Além disso, os animais tratados apresentavam pouca necrose e diminuição nos níveis da ALT, 72h após a lesão, porém sem diferenças estatisticamente significativas em relação aos grupos não tratados. Não foram observadas diferenças no subgrupo analisado para dano oxidativo. Neste trabalho foi possível demonstrar que a fração mononuclear de medula óssea é capaz de aumentar significativamente a taxa de sobrevida de ratos Wistar submetidos à falência hepática fulminante por paracetamol. Estes resultados podem representar uma perspectiva de tratamento para casos de falência hepática fulminante. / Acute liver failure (ALF) is characterized by a rapid loss of liver function associated to high mortality. In the present work we investigated the effect of mononuclear bone marrow cells in rats with acetaminophen-induced ALF. This model fulfills the criteria for a good model of liver lesion, helping to elucidate the physiological mechanisms involved. We used 173 female Wistar rats that were pre-induced with phenobarbital 350mg/L diluted in the drinking water for four days and received 1g/Kg of acetaminophen (APAP) via intraperitoneal injection. one marrow mononuclear fraction of male rats was purified by Ficoll density gradient and administered to animals 24 hours after the APAP injection. DAPI-stained cells were injected through the portal vein in a concentration of 1x106 in 0.2mL of PBS. Sham group received the same volume of PBS and a subgroup for studying oxidative stress received N-Acetilcisteine 150mg/kg via intraperitoneal. Additional experiments were performed to confirm the best delivery method comparing portal and tail vein injections evaluating the surgical mortality. An increase in survival was observed in rats treated with bone marrow cells, as well as the presence of DAPI-positive cells in the livers. In addition, animals showed few necrotic areas and decreased ALT levels, although not statistically different from non treated animals. No differences were found in the subgroup analyzed for oxidative stress. In this study we have shown that bone marrow derived cells are capable of significantly increasing the survival rate of APAP-induced ALF in Wistar rats. This result may represent a perspective for the treatment of cases of acute liver failure.