Os fungos endofíticos têm sido reconhecidos pela sua grande importância para as plantas hospedeiras, pois podem conferir proteção contra insetos herbívoros e patógenos, promover o crescimento vegetal, além de produzir metabólitos secundários com atividades biológicas diversas, entre outros. A cana-de-açúcar é uma cultura de grande importância social e econômica no Brasil, especialmente para o estado de São Paulo. Ultimamente esta cultura vem recebendo especial atenção devido ao crescente aumento da demanda de matéria prima, principalmente em função do acréscimo no consumo de etanol como biocombustível. Fungos do gênero Penicillium habitam os tecidos e a rizosfera de cana-de-açúcar, onde podem estabelecer associações mutualísticas com a planta e conferir diversos benefícios. Dentro deste contexto, estudos que avaliem a interação de Penicillium spp. com cana-de-açúcar são bastante promissores para geração de conhecimentos que auxiliem na otimização da agricultura. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivos a avaliação do potencial biotecnológico dos endofíticos de raiz e da rizosfera, do gênero Penicillium, pertencentes à comunidade fúngica de cana-de-açúcar, por meio de ensaios de antagonismo, produção de enzimas, solubilização de fosfato inorgânico e produção de ácido indol acético; assim como o estudo da interação de um isolado de P. pinophilum com cana-de-açúcar a partir do desenvolvimento de um sistema de transformação genética mediada pela bactéria Agrobacterium tumefaciens. Tanto a análise da atividade antimicrobiana como a produção de metabólitos apresentaram extensa variação fisiológica entre os isolados avaliados. Um isolado da espécie P. pinophilum (linhagem 44) foi escolhido para ser usado na transformação genética por mostrar-se superior estatisticamente em relação aos demais isolados nos ensaios anteriores. Para aumento da eficiência deste sistema de transformação foram avaliados diferentes parâmetros, dentre eles: tempo de co-cultivo (24 e 48 horas), concentração do indutor acetoseringona (200 M e 400 M) e tipos de membrana (papel filtro e náilon). O sistema de agrotransformação apresentou alta eficiência (482 transformantes por 107 conídios), gerando uma elevada quantidade de transformantes resistentes à higromicina B e expressando GFP. Dentre os parâmetros avaliados, a combinação que deu origem aos melhores resultados de transformação envolveu o co-cultivo por 48 horas sobre membrana de náilon, em meio de cultura contendo 200 M de acetoseringona. A interação fungo-planta foi avaliada a partir da inoculação de P. pinophilum linhagem selvagem e transformantes, em plântulas de cana-de-açúcar, seguida da análise por microscopia óptica de epifluorescência e reisolamento. Os resultados revelaram a natureza não patogênica desse fungo, uma vez que ele foi capaz de colonizar endofiticamente cana-de-açúcar e persistir nas raízes desta planta, sem levar ao desenvolvimento de qualquer sintoma de doença. Além disso, os ensaios de agrotransformação deram origem a uma biblioteca com mil e cem transformantes insercionais, o que constitui uma ferramenta importante para o estudo molecular do metabolismo secundário desse fungo endofítico e poderá contribuir para o entendimento da interação do complexo fungo-cana-de-açúcar, possibilitando no futuro a sua aplicação no melhoramento vegetal e exploração do seu potencial biotecnológico. / Endophytic fungi have been recognized for its great importance for the host plants, they may provide protection against herbivores and pathogens, promote plant growth, and produce secondary metabolites with biological activity, among other benefits. Sugarcane is a socially and economically important crop in Brazil, especially for the state of São Paulo. Lately, this culture has received special attention due to the growing demand for raw materials, mainly due to the increase in consumption of ethanol as a biofuel. Fungi Penicillium inhabit the tissues and rhizosphere of sugarcane, where they can establish mutualistic associations with the plant and provide several benefits. Within this context, studies evaluating the interaction of Penicillium spp. with sugar cane are very promising to generate knowledge in order to assist in the agriculture optimization. Thus, this study aimed to evaluate the biotechnological potential of endophytic Penicillium from root and rhizosphere, belonging to the fungal community of sugarcane, through tests of antagonism, enzyme production, solubilization of inorganic phosphate and indole acetic acid production, as well as studying the interaction of an isolate of P. pinophilum with sugarcane using the development of a system for genetic transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens. Both the analysis of antimicrobial activity and the production of metabolites showed extensive physiological variation among isolates. An isolate of the species P. pinophilum (strain 44) was chosen to be used in genetic transformation for being statistically superior than the other strains in previous trials. Different parameters were evaluated to increase the efficiency of this transformation system, among them: co-culture time (24 and 48 hours), concentration of the inducer acetosyringone (200 µM and 400 µM) and types of membrane (filter paper and nylon). Agrotransformation system showed high efficiency, generating a high amount of hygromycin B resistant transformants that expressed GFP. Among the factors evaluated, the combination that showed the best results involved the transformation with a co-cultivation for 48 hours on a nylon membrane, in culture medium containing 200 µM of acetosyringone. The plant-fungus interaction was assessed from the inoculation of wild type and transformants P. pinophilum in seedlings of sugarcane followed by analysis by epifluorescence microscopy and reisolation. Results revealed the non-pathogenic nature of this fungus, since it was capable of endophytically colonize sugarcane and persisted in the roots of this plant, without developing any symptoms of illness. In addition, agrotransformation tests gave rise to a library with a thousand and one hundred insertional transformants, which is an important tool for molecular study of secondary metabolism of endophytic fungus, and may contribute to the comprehension of the complex interaction of fungus-sugarcane, allowing its future application in plant breeding and exploitation of their biotechnological potential.

A osteocondrite dissecante (OCD) é uma das principais doenças que afetam os equinos jovens e uma das condições incluídas nas Doenças Ortopédicas do Desenvolvimento. Por se tratar de importante afecção articular, a OCD pode ser responsabilizada por perdas econômicas substanciais em decorrência da diminuição do desempenho atlético e reprodutivo dos animais acometidos. Sua etiologia é considerada multifatorial sendo associada a fatores nutricionais, endócrinos, genéticos e biomecânicos. A análise dos biomarcadores do líquido sinovial fornece dados fundamentais acerca das alterações representativas de inflamação e danos à cartilagem articular, por isso o monitoramento do ambiente articular caracteriza-se como uma importante ferramenta para o diagnóstico e acompanhamento da progressão da doença. A análise metabolômica por Ressonância Magnética Nuclear de prótons de hidrogênio (1H RMN) é um método de avaliação holístico, simultâneo e em tempo real, dos metabólitos de pequenas moléculas presente no líquido sinovial, capaz de fornecer dados a respeito da progressão da doença, da resposta a tratamentos e de determinar biomarcadores. No presente estudo objetivou-se estabelecer o perfil metabólico global do líquido sinovial de equinos acometidos por OCD, estudar a aplicabilidade da 1H RMN no diagnóstico da OCD e avaliar a possibilidade de distinção entre os líquidos sinoviais de articulações com OCD sintomática e assintomática. A determinação do perfil metabólico do líquido sinovial de equinos hígidos e acometidos por OCD assintomática e sintomática resultou em 32 metabólitos comuns às três condições articulares. Além destes, 2 compostos foram identificados somente nas articulações doentes, sendo eles o propilenoglicol e o composto aromático, porém, não foi possível diferenciar as articulações com OCD assintomática das articulações sintomáticas, pois ambos os grupos apresentavam metabólitos semelhantes e com intensidades similares.. Na comparação entre a intensidade dos espectros, observaram-se aumentos dos metabólitos glicose, glutamina, etanol, leucina, isoleucina, dimetilsulfona, creatina, creatinina, Nacetilglucosamina e N-acetilglutamina e -metil histidina e dos compostos propilenoglicol e composto aromático nas articulações com OCD com relação às hígidas. Dos metabólitos que apresentaram redução na intensidade dos espectros das articulações doentes têm-se o 3- hidroxibutirato e o acetato. Outros metabólitos demonstraram a mesma intensidade de sinal para os três tipos de articulação, sendo eles: piruvato, citrato, metionina, histidina, tirosina, valina, lactato, alanina, glicina, glicerol e fenilalanina. A análise estatística por PCA foi capaz de realizar o agrupamento dos espectros e atribuir a importância do composto aromático na diferenciação entre os animais hígidos e doentes. A análise metabolômica por 1H NMR mostrou-se técnica com alta reprodutibilidade entre as amostras e sensibilidade de detecção dos componentes do líquido sinovial, revelando claras diferenças entre os perfis bioquímicos de articulações hígidas e acometidas por OCD, indicativo das alterações metabólicas que ocorrem com a progressão desta doença, relacionadas principalmente com o processo de degradação cartilagínea. Este estudo salienta o potencial da análise metabolômica em fornecer uma nova perspectiva dos processos bioquímicos envolvidos na progressão da OCD. / Osteochondritis dissecans (OCD) is one of the most common diseases affecting young horses and one of the conditions classified as Developmental Orthopedic Diseases. As an important joint disorder, OCD is held responsible for substantial economic losses in consequence of the decrease in athletic and reproductive performance in affected horses. The condition presents a multifactorial ethiology, related to nutritional, endocrine, genetic and biomechanical factors, although its pathogeny is well established, associated with a disturbance of the process of endochondral ossification. Synovial fluid biomarkers analysis provide data regarding changes representative of inflammation and articular cartilage damage, which is why monitoring the joint cavity is an important tool for diagnosis and assessing disease progression. Proton Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy is a holistic, simultaneous and real time approach, of the metabolites present in the synovial fluid, offering the potential to provide data regarding disease progression, response to treatment and to determine disease biomarkers. The aim of the present study was to establish the global metabolic profiling of normal and osteochondritic synovial fluid, to evaluate the applicability of the 1H RMN in the diagnosis of OCD, and to asses possible distinctions between symptomatic and asymptomatic horses. The metabolic profile determination resulted in 32 common metabolites to the three joint conditions. Moreover, 2 compounds were identified exclusively in the diseased joints, namely propylene glycol and aromatic compound, but we were unable to discern between asymptomatic and symptomatic individuals for both groups presented similarities in metabolites as well as their concentrations. When comparing spectral intensities, we observed marked increases in the metabolites glucose, glutamine, ethanol, leucine, isoleucine, dimethyl sulphone, creatine, creatinine, N-acetylglucosamine, N-acetylglutamine and -methyhistidine, besides the compounds propylene glycol and aromatic compound, in the affected joints compared to the healthy ones. Decrease in spectral intensities were related to the metabolites 3-hydroxybutirate and acetate in affected joints. Other metabolites showed no difference in intensities in all joint conditions, those being pyruvato, citrate, methionine, histidine, tyrosine, valine, lactate, alanine, glycine, glycerol and phenylalanine. PCA based statistical analysis was able to group spectra and to ascribe the importance of the aromatic compound in differentiating healthy from diseased joints. 1H RMN spectroscopy showed high reproductability between samples and sensitive in detecting synovial fluid compounds, unveiling clear diferences between the biochemical profiles of healthy and OCD affected joints, thus indicating metabolic alterations occuring with disease progression, related mainly with the cartilage degradation process. This study projects the potential of metabolomics analysis in providing a new perspective of the biochemical processes involved in OCD progression.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The sudden death syndrome (SDS), caused by species of Fusarium, is a disease difficult to control and there are no management techniques and resistant cultivars that give long-term positive results. This study aimed to assess populations of Fusarium spp. and Trichoderma spp. associated to eight soybean genotypes, cultivated under no tillage; to determine if the control of Fusarium varies among isolates of Trichoderma; to identify isolates of Fusarium spp. obtained from different genotypes, and to determine their toxicity and pathogenicity to two genotypes of soybean. Soil and roots were collected from experimental plots located at the Fundação Centro de Experimentação e Pesquisa (FUNDACEP), obtaining isolates of Fusarium spp. and Trichoderma spp. There were no differences in the population of Fusarium spp. in plants with symptoms of SDS among the different genotypes. For Trichoderma spp. there was a significant difference among genotypes from plants with and without symptoms of SDS and the genotype CEPS 06006 RR had the biggest population of the antagonist. In the direct confrontation test, eight isolates of Trichoderma spp. obtained the highest score (1) in relation to the control of Fusarium spp. and isolates of Trichoderma spp. from soil of areas with the SDS symptom were more aggressive. Nine species of Fusarium: F. avenaceum, F. solani, F. equiseti, F. Acuminatum, F. kyushuense, F. graminum, F. subglutinans, F. verticillioides and F. lateritium were identified. All isolates promoted internerval chlorosis, necrosis and death of seedlings in the toxicity test. In the pathogenicity test in plants inoculated with the pathogen there was an increase in leaves and roots dry weight and in the number of pods, indicating that there may be species specificity of the species studied in relation to genotype. / A Podridão Vermelha da Raiz da soja (PVR), causada por espécies de Fusarium, é uma doença de difícil controle, não existindo técnicas de manejo e cultivares resistentes que tenham resultados positivos a longo prazo. Assim, este trabalho objetivou quantificar populações de Fusarium spp. e Trichoderma spp. associadas à oito genótipos de soja, cultivados em sistema plantio direto, observar se o biocontrole de Fusarium spp. difere entre isolados de Trichoderma spp., identificar isolados de Fusarium spp. obtidos de diferentes genótipos e verificar sua toxicidade e patogenicidade a dois genótipos de soja. Amostras de solo e raízes foram coletadas em parcelas experimentais na Fundação Centro de Experimentação e Pesquisa (FUNDACEP), obtendo-se isolados de Fusarium spp. e Trichoderma spp. Não houve diferença na população de Fusarium spp. em plantas com sintomas de PVR entre os diferentes genótipos. Para Trichoderma spp., houve diferença entre as populações nos genótipos de plantas com e sem sintomas de PVR, tendo o genótipo CEPS 06006 RR apresentado maior população do antagonista. No teste de confronto direto, oito isolados de Trichoderma spp. obtiveram a melhor nota (um), em relação a Fusarium spp. e isolados de Trichoderma spp. oriundos de solo em áreas com o sintoma de PVR foram mais eficientes. Foram identificadas nove espécies de Fusarium: F. avenaceum, F. solani, F. equiseti, F. acuminatum, F. kyushuense, F. graminum, F. subglutinans, F. verticillioides e F. lateritium. Todos os isolados de Fusarium spp. provocaram clorose internerval, necrose e morte de plântulas no teste de toxicidade. No teste de patogenicidade, em plantas inoculadas com o patógeno houve aumento na massa seca de parte aérea e de raízes, no número de vagens, indicando que pode haver especificidade das espécies estudadas em relação ao genótipo.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:56:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf: 656931 bytes, checksum: 9e652ea425d8ee514d730485376a75bc (MD5) Previous issue date: 2011-11-16 / The Chamomilla recutita (L.) Rauschert is a plant from to the Asteraceae family. It is grown in temperate climates having adequate growing conditions in southern and southeastern Brazil. Its cultivation has increased due to its of their medical use for the extraction of essential oil and fractions of flavonoids for the production of pharmaceuticals and cosmetics. The use of organic fertilizer such as cattle manure and poultry manure, provides higher yields of essential oil and the production of flavonoids. There are few studies related to the agronomic management of medicinal plants, with the need to study the appropriate depths of irrigation and nutrition to obtain a high production and quality. This work aimed to evaluate the effect of irrigation water depths and organic fertilization with cattle and poultry manure on the production and quality of Chamomilla recutita plants. This study was conducted at Unoeste - Campus II in an experimental area. The experimental design was randomized complete block design. The treatments consisted of the irrigation: T0) 0, T1) 150, T2) 100, T3) 75, T4) 50, T5) 25%Etc were calculated using the Class A tank (ECA), associating organic fertilizers used the tanned cattle manure and poultry manure at rates of 0 kg m-2, 3 kg m-2 and 5 kg m-2. Were 36 treatments with four replicates resulting in 144 plots. The measured variables used as parameters on this experiment were: plant height, (two week after seedling transplant and the flowering beginning), fresh and dry weight of plants after harvest, number of capitula, nutrients extraction on the fresh leaves, proline acumlation, content and yield of flavonoids and essecial oil. The statistical analysis was performed using the Scott-Knott test at a probability of 5%. The irrigation water dephts 150% ETc associated with fertilization with chicken manure at a dose 5 kg m-2 promoted the greatest plant growth, production, fresh and dry weight of capitula. The water stress promoted less fresh and dry weight of plant. The water stress caused by the irrigation water dephts of 150% and 0% ETc resulted in a higher concentration of proline in the leaves. The content and yield of flavonoids and essential oil and leaf N content were higher for the irrigation of 150% ETc associated with a dose of 5 kg m-2 of poultry manure. The non-irrigated plants had higher leaf content of macronutrients. / A Chamomilla recutita (L.) Rauschert é uma planta pertencente à família Asteraceae. É cultivada em climas temperados possuindo condições de cultivo adequadas em regiões do sul e sudeste do Brasil. Seu cultivo tem aumentado por ocasião de seu uso medicinal, para extração das frações de óleo essencial e flavonóides para produção de produtos farmacêuticos e cosméticos. A utilização de adubo orgânico, como esterco bovino curtido e esterco de aves, aumenta o rendimento do óleo essencial bem como a produção de flavonóides. Existem poucos estudos relacionados ao manejo agronômico de plantas medicinais, havendo a necessidade do estudo dos níveis adequados de reposição hídrica e nutricional para obtenção de uma produção elevada e de qualidade. O objetivo foi avaliar o efeito da irrigação e da adubação orgânica com esterco bovino curtido e de aves sobre a produção e qualidade da camomila. O presente trabalho foi realizado na Unoeste Campus II,em uma área experimental. O delineamento experimental foi em blocos inteiramente casualizados. Os tratamentos abrangeram as lâminas de irrigação: T0) 0, T1) 150, T2) 100, T3) 75, T4) 50, T5) 25% ETc que foram calculadas utilizando o tanque Classe A (ECA); associando a adubação orgânica utilizado os esterco de curral curtido e esterco de aves nas doses de 0 kg m-2, 3 kg m-2 e 5 kg m-2. Totalizaram 36 tratamentos com quatro repetições resultando em 144 parcelas. As variáveis medidas e utilizadas como parâmetros do experimento foram: altura das plantas (15 dias após o transplante e no início do florescimento), massa fresca e seca de plantas após a colheita, número de capítulos florais, extração de nutrientes pelas folhas, acúmulo de prolina nas folhas frescas, teor e rendimento de flavonóides e de óleo essencial. Após foi realizada análise estatística utilizando o teste de Scott-Knott ao nível de probabilidade de 0,05. A lâmina de irrigação de 150% ETc associada adubação com esterco de aves na dose 5 kg m-2 promoveu maior crescimento das plantas; produção, massa fresca e seca de capítulos florais. O estresse hídrico promoveu menor massa fresca e seca de planta. O estresse hídrico provocado pelas lâminas de 150% e 0%ETc resultaram em maior concentração de prolina nas folhas. O teor e rendimento de flavonóides e óleo essencial, e o teor de nitrogênio foliar foram superior para a lâmina de irrigação de 150% ETc associado a dose de 5 kg m-2 de esterco de ave. As plantas não irrigadas apresentaram maiores teores de macronutrientes foliares.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:51:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf: 656931 bytes, checksum: 9e652ea425d8ee514d730485376a75bc (MD5) Previous issue date: 2011-11-16 / The Chamomilla recutita (L.) Rauschert is a plant from to the Asteraceae family. It is grown in temperate climates having adequate growing conditions in southern and southeastern Brazil. Its cultivation has increased due to its of their medical use for the extraction of essential oil and fractions of flavonoids for the production of pharmaceuticals and cosmetics. The use of organic fertilizer such as cattle manure and poultry manure, provides higher yields of essential oil and the production of flavonoids. There are few studies related to the agronomic management of medicinal plants, with the need to study the appropriate depths of irrigation and nutrition to obtain a high production and quality. This work aimed to evaluate the effect of irrigation water depths and organic fertilization with cattle and poultry manure on the production and quality of Chamomilla recutita plants. This study was conducted at Unoeste - Campus II in an experimental area. The experimental design was randomized complete block design. The treatments consisted of the irrigation: T0) 0, T1) 150, T2) 100, T3) 75, T4) 50, T5) 25%Etc were calculated using the Class A tank (ECA), associating organic fertilizers used the tanned cattle manure and poultry manure at rates of 0 kg m-2, 3 kg m-2 and 5 kg m-2. Were 36 treatments with four replicates resulting in 144 plots. The measured variables used as parameters on this experiment were: plant height, (two week after seedling transplant and the flowering beginning), fresh and dry weight of plants after harvest, number of capitula, nutrients extraction on the fresh leaves, proline acumlation, content and yield of flavonoids and essecial oil. The statistical analysis was performed using the Scott-Knott test at a probability of 5%. The irrigation water dephts 150% ETc associated with fertilization with chicken manure at a dose 5 kg m-2 promoted the greatest plant growth, production, fresh and dry weight of capitula. The water stress promoted less fresh and dry weight of plant. The water stress caused by the irrigation water dephts of 150% and 0% ETc resulted in a higher concentration of proline in the leaves. The content and yield of flavonoids and essential oil and leaf N content were higher for the irrigation of 150% ETc associated with a dose of 5 kg m-2 of poultry manure. The non-irrigated plants had higher leaf content of macronutrients. / A Chamomilla recutita (L.) Rauschert é uma planta pertencente à família Asteraceae. É cultivada em climas temperados possuindo condições de cultivo adequadas em regiões do sul e sudeste do Brasil. Seu cultivo tem aumentado por ocasião de seu uso medicinal, para extração das frações de óleo essencial e flavonóides para produção de produtos farmacêuticos e cosméticos. A utilização de adubo orgânico, como esterco bovino curtido e esterco de aves, aumenta o rendimento do óleo essencial bem como a produção de flavonóides. Existem poucos estudos relacionados ao manejo agronômico de plantas medicinais, havendo a necessidade do estudo dos níveis adequados de reposição hídrica e nutricional para obtenção de uma produção elevada e de qualidade. O objetivo foi avaliar o efeito da irrigação e da adubação orgânica com esterco bovino curtido e de aves sobre a produção e qualidade da camomila. O presente trabalho foi realizado na Unoeste Campus II,em uma área experimental. O delineamento experimental foi em blocos inteiramente casualizados. Os tratamentos abrangeram as lâminas de irrigação: T0) 0, T1) 150, T2) 100, T3) 75, T4) 50, T5) 25% ETc que foram calculadas utilizando o tanque Classe A (ECA); associando a adubação orgânica utilizado os esterco de curral curtido e esterco de aves nas doses de 0 kg m-2, 3 kg m-2 e 5 kg m-2. Totalizaram 36 tratamentos com quatro repetições resultando em 144 parcelas. As variáveis medidas e utilizadas como parâmetros do experimento foram: altura das plantas (15 dias após o transplante e no início do florescimento), massa fresca e seca de plantas após a colheita, número de capítulos florais, extração de nutrientes pelas folhas, acúmulo de prolina nas folhas frescas, teor e rendimento de flavonóides e de óleo essencial. Após foi realizada análise estatística utilizando o teste de Scott-Knott ao nível de probabilidade de 0,05. A lâmina de irrigação de 150% ETc associada adubação com esterco de aves na dose 5 kg m-2 promoveu maior crescimento das plantas; produção, massa fresca e seca de capítulos florais. O estresse hídrico promoveu menor massa fresca e seca de planta. O estresse hídrico provocado pelas lâminas de 150% e 0%ETc resultaram em maior concentração de prolina nas folhas. O teor e rendimento de flavonóides e óleo essencial, e o teor de nitrogênio foliar foram superior para a lâmina de irrigação de 150% ETc associado a dose de 5 kg m-2 de esterco de ave. As plantas não irrigadas apresentaram maiores teores de macronutrientes foliares.

A incidência da obesidade e do diabetes do tipo 2 tomou proporções epidêmicas nos últimos anos, atingindo bilhões de indivíduos em todo o mundo. A descoberta de formas inovadoras capazes de reduzir as alterações metabólicas associadas a estas doenças é fundamental para minimizar o seu impacto na qualidade de vida da população e na economia dos países. Muitos estudos têm demonstrado que os compostos bioativos de alimentos possuem efeitos benéficos à saúde. O camu-camu e o cupuaçu são frutas nativas da região amazônica com potencial agroeconômico ainda inexplorado, que contêm um grande número de compostos fitoquímicos que podem atuar sobre o metabolismo corporal. Desta forma, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos dos compostos fenólicos de extratos do camu-camu e do cupuaçu no desenvolvimento da obesidade e do diabetes tipo 2 em ensaios in vivo e in vitro, e identificar os possíveis metabólitos envolvidos nestes efeitos. Os extratos ricos em compostos fenólicos da polpa comercial destes frutos foram extraídos em fase sólida, caracterizados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE/DAD) e avaliados quanto à inibição da atividade de enzimas digestivas in vitro. Os extratos obtidos foram então testados em duas diferentes concentrações (2,25 e 4,5 mg de equivalentes de catequina/Kg de peso corporal para o cupuaçu; 7 e 14 mg de equivalentes de ácido gálico/Kg de peso corporal para o camu camu) em um modelo animal de obesidade e resistência insulínica induzida por dieta com alto teor de lipídios e sacarose em camundongos C57BL/6J. Foram investigados os efeitos destes compostos sobre as homeostases glicídica e lipídica através de análises séricas, testes de tolerância à insulina e à glicose e conteúdo de lipídios hepáticos e fecais. O extrato do camu camu apresentou flavonóis, ácido elágico e elagitaninos em sua composição. A suplementação com o extrato de compostos fenólicos do camu camu reduziu o ganho de peso corporal e diminuiu a intolerância à glicose e à insulina, independente da dose administrada. No entanto, a administração destes extratos não apresentou efeitos sobre o metabolismo lipídico. Estes resultados foram associados a um possível efeito de saciedade, com consequente redução da ingestão da dieta e da glicolipotoxicidade, e com um efeito anti-inflamatório devido à diminuição dos níveis de proteína C reativa. Já o extrato de cupuaçu apresentou flavanóis, flavonas e proantocianidinas em sua composição. A suplementação com o extrato de cupuaçu na maior dose testada melhorou a homeostase da glicose e principalmente dos lipídios, protegendo o tecido hepático dos danos causados pela dieta com alto teor de lipídios e sacarose. Estes efeitos foram associados à inibição de enzimas digestivas, com consequente menor absorção de lipídios provenientes da dieta, reduzindo assim a resistência à insulina no fígado, a hiperglicemia e a dislipidemia. Ainda, foi avaliada a distribuição de metabólitos no trato gastrointestinal de camundongos após a administração aguda do extrato de cupuaçu. Foi possível identificar a complexa mistura de polifenóis presentes no extrato de cupuaçu ao longo do trato gastrointestinal, que posteriormente foi metabolizada pela microbiota. Entre os metabólitos encontrados estão as agliconas hipolaetina e isoscutelareína, e os metabolitos microbianos da epicatequina como o 3,4-diHPP-2-ol e a 5-(3,4-dihidroxiphenil)-γ-valerolactona. De acordo com estes resultados, as diferenças na composição de compostos fenólicos encontradas entre os extratos das duas frutas foram responsáveis pelos diferentes resultados nos protocolos in vivo e a identificação dos metabólitos microbianos possibilita o conhecimento dos compostos possivelmente implicados nos efeitos benéficos. Novos estudos podem contribuir para um melhor entendimento dos mecanismos, bem como quais metabólitos estão associados aos efeitos benéficos que os compostos presentes nestas duas frutas apresentaram neste estudo. / The incidence of obesity and type 2 diabetes reached epidemic proportions in recent years, arriving to billions of people around the world. The discovery of innovative ways that can reduce the metabolic abnormalities associated with these diseases is essential to minimize its impact on the population\'s quality of life and the economy of the countries. Many studies have demonstrated that food bioactive compounds have beneficial health effects. Camu-camu and cupuassu are native fruits of the Amazon region with unexplored agroeconomic potential, which contain a large number of phytochemical compounds that can act on body metabolism. Thus, the objective of this study was verify the effects of phenolic compounds of camu-camu and cupuassu extracts on the development of obesity and type 2 diabetes in vivo and in vitro, and identfy the possible metabolites involved in these effects. The phenolic compound-rich extracts were obtained from commercial frozen fruit pulps by solid phase extraction, characterized by high-performance liquid chromatography (HPLC/DAD) and evaluated for inhibition of digestive enzymes activities in vitro. Then, the extracts were tested at two different doses (2.25 and 4.5 mg catechin equivalents/kg body weight for cupuassu; 7 and 14 mg of gallic acid equivalents/kg body weight for camu camu) in an animal model (C57BL/6J mice) of obesity and insulin resistance induced by high fat high sucrose diet. The effects of extract supplementation on glucose and lipid homeostasis were assessed by serum analysis, insulin and glucose tolerance tests in mice, and contents of fat in liver and fecal samples. Camu camu extract presented flavonols, ellagic acid and ellagitannins in its composition. Supplementation with camu camu phenolic extract reduced weight gain and decreased glucose and insulin intolerance independent of the dose administered. However, no effects on lipid metabolism were found. These findings were associated with a possible effect of satiety with a consequent reduction in energy intake and glicolipotoxicity, and anti-inflammatory properties. Cupuassu extract presented flavanols, flavones and proanthocyanidins in its composition. Supplementation with cupuacu extract at the highest dose improved glucose homeostasis and plasmatic lipid levels, protecting the liver tissue from damage caused by diet rich in lipids and sucrose. These effects were associated with inhibition of digestive enzymes, with consequent lower absorption of lipids from the diet, thereby reducing the insulin resistance in the liver, the hyperglycemia and dyslipidemia. Furthermore, the distribution of metabolites in the gastrointestinal tract of mice was evaluated after acute administration of cupussu extract by HPLC-ESI-QTOF. We identified the complex mixture of polyphenols present in cupuassu extract along the gastrointestinal tract, which was subsequently metabolized by the intestinal microbiota. Among detected metabolites are hypolaetin and isoscutellarein aglycones and microbial metabolites of epicatechin as 3,4-diHPP-2-ol and 5-(3,4-dihydroxyphenyl)-γvalerolactone. According to these results, the differences in the composition of phenolic compounds found between the two fruit extracts were responsible for the different effects in vivo and identification of microbial metabolites enables the knowledge of the compounds potentially implicated in the beneficial effects. New studies can contribute to a better understanding of the metabolism and mechanisms of action.

Orientador: Marcia Ortiz Mayo Marques / Resumo: Lychnophora pinaster Mart. (Asteraceae) é uma espécie de ocorrência restrita ao Estado de Minas Gerais e utilizada pela população local por suas propriedades anti-inflamatória e analgésica. O uso indiscriminado pela população e destruição de seu habitat contribuíram para que a espécie entrasse em risco de extinção. Estudos de populações de L.pinaster oriundas do sul e do norte do estado de Minas Gerais reportam diferentes composições de seus óleos essenciais e níveis de diversidade genética, sendo necessários estudos de maior abrangência geográfica que permitam sua caracterização em diversas regiões do estado. Diante disso, este estudo objetivou avaliar a composição química dos óleos essenciais e diversidade genética de populações de Lychnophora pinaster Mart. coletadas em diferentes regiões de Minas Gerais. As populações avaliadas nos estudos químicos são oriundas de duas regiões: Diamantina (DIMa), Olhos D’Àgua (OD) e Grão Mogol (GM), da região Norte de Minas Gerais; e três da Região Metropolitana de Belo Horizonte, Caeté/Rio Acima (CTRA), Nova Lima/Serra da Calçada (NLSC) e Serra da Moeda (SM). Os óleos essenciais foram extraídos por hidrodestilação, a composição química analisada por CG-EM e CGxCG-EM e os resultados avaliados por métodos quimiométricos. Análises de solos revelaram diferenças entre os solos das populações. DIMa e SM apresentaram os maiores rendimentos dos óleos essenciais (ambas 0,12%), enquanto o menor foi o de NLSC (0,04%). Não foi detectada diferença de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lychnophora pinaster Mart. (Asteraceae) is a species restricted to the State of Minas Gerais and used by the local population for its anti-inflammatory and analgesic properties. The indiscriminate use by the population and the destruction of its habitat contributed to the species becoming at risk of extinction. Studies of L. pinaster populations from the south and north of the state report different compositions of their essential oils and levels of genetic diversity, requiring studies of greater geographic scope that allow their characterization in several regions of the state. Given this scenario, this study aimed to evaluate the chemical composition of essential oils and genetic diversity of populations of Lychnophora pinaster Mart. collected in different regions of Minas Gerais. The populations evaluated in the chemical studies come from two regions: Diamantina (DIMa), Olhos D’Àgua (OD) and Grão Mogol (GM), from the northern region of Minas Gerais; and three from the Metropolitan Region of Belo Horizonte, Caeté/Rio Acima (CTRA), Nova Lima/Serra da Calçada (NLSC) and Serra da Moeda (SM). The essential oils were extracted by hydrodistillation, the chemical composition analyzed by CG-EM and CGxCG-EM and the results evaluated by chemometric methods. Soil analyzes revealed differences between the populations' soils. DIMa and SM showed the highest yields of essential oils (both 0.12%), while the lowest was that of NLSC (0.04%). No difference in yield was detected depending on t... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A possibilidade de obtenção de informações relevantes através domonitoramento hormonal não-invasivo foram fatores determinantes para o delineamento deste projeto, que possibilitou um estudo detalhado dos aspectos comportamentais, reprodutivos e endócrinos do sagüi-detufo-preto (Callithrix penicillata), mantido em cativeiro. Utilizamos6 casais desagüi-de-tufopreto (Callithrix penicillata) mantidos cativos e em pares no Centro de Reabilitação de Animais Silvestres - CRAS, São Paulo. Todos os animais tiveram seus comportamentos sócio-sexuais registrados pelo método de amostragem focal por intervalo de tempo com registros a cada 30 segundos em sessões de 30 minutos, totalizando 60 horas para cada animal. Foram coletadas amostras fecais matinais, seis vezes por semana durante 6 meses, a fim de serem extraídos e dosados os metabólitos fecais de estradiol, progesterona e testosterona pelo método de enzimaimunoensaio (EIE). O objetivo deste trabalho foi descrever e analisar os comportamentos sócio-sexuais e suas respectivas associações com as concentrações de metabólitos fecais de esteróides sexuais em machos e fêmeas de sagui-detufo- preto (Callithrix penicillata), nas diferentes fases do ciclo ovariano.Os resultados mostraram a duração do ciclo ovariano de 24,3 ± 4,1 dias e as maiores concentrações de metabólitos fecais de estradiol e testosterona das fêmeas na fase lútea. A ocorrência dos comportamentos sócio-sexuais se mostrou mais frequente na fase peri-ovulatória do que nas fases folicular e lútea. Não houve diferença significativa destes comportamentos entre as fases folicular e lútea. Os metabólitos fecais de testosterona dos machos não apresentou diferença significativa entre as fases do ciclo ovariano das fêmeas. / The possibility of attaining relevant information through a non-invasive hormonal monitoring allow the detailed study of behavioral, reproductive and endocrine profile of captive black tufted marmoset (Callithrix penicillata). Six couples of captive black tufted marmoset (Callithrix penicillata) were housed at the Centro de Reabilitação de Animais Silvestres - CRAS, São Paulo. Socio-sexual behaviors of all animals were registered using the method of focal interval sampling with observations performed each 30 seconds in 30 minutes sessions, in a total of 60 hours per animal. Fecal samples were collected during the morning, six times a week, for 6 months, in order to extract and measure fecal metabolites of estradiol, progesterone and testosterone by enzyme immunoassay (EIE). The objective of the present study was to describe and analyze the socio-sexual behaviors and correlate them with the fecal concentrations of sexual steroids metabolites in paired male and female black tufted marmoset (Callithrix penicillata) in different moments of the ovarian cycle. Results demonstrated that helengthofovariancycleis24. ± 4.1 days. Also, higher concentrations of fecal metabolites of estradiol and testosterone in females are observed during the luteal phase.The occurrence of socio-sexual behaviors were more frequent during the periovulatory phase when compared to the follicular and luteal phases. No differences were found when comparing the follicular and luteal phases. In the males, fecal metabolites of testosterone were similar throughout the ovarian cycles of the respective females.

O endotélio vascular é responsável por várias funções, dentre elas, o controle do tônus vascular realizado por meio da produção e liberação de substâncias constritoras (EDCFs) e relaxantes (EDRFs) derivadas das células endoteliais. Essas substâncias então envolvidas em várias ações como relaxamento ou contração do músculo liso vascular. Em algumas doenças como na hipertensão arterial, ocorre um desequilíbrio entre esses mecanismos. Essas alterações podem ocorrer devido ao aumento nas concentrações de espécies reativas de oxigênio (EROs) que reduzem a biodisponibilidade do óxido nítrico (NO), principal EDRF, assim como aumentar os níveis de prostanóides como prostaglandinas (PGs) e tromboxano A2 (TXA2), principais EDCFs produzidos pela COX. Dessa forma, a liberação de NO e inibição da COX podem ser efetivas nesses casos. Os anti-inflamatórios não esteroidais associados a doadores de NO (CINODs) tem importantes ações no sistema vascular. O leito vascular coronariano pode sofrer com o desequilíbrio na produção de fatores endoteliais e apresentar disfunção endotelial. Porém, apesar da sua relevância, a microcirculação coronariana não tem sido explorada como alvo para os CINODs. O presente trabalho teve como objetivo avaliar as alterações vasculares do leito coronariano no modelo de hipertensão renal (2R-1C) e determinar a ação do composto NCX 2121 em artéria coronária de ratos normotensos (2R) e hipertensos 2R-1C. Observamos alterações cardíacas com hipertrofia do coração e menor aumento da pressão de perfusão coronariana (PPC) sob aumentos de fluxo, pela técnica de Langendorff em corações de 2R-1C. Na artéria coronária isolada houve aumento da expressão da enzima cicloxigenase (COX-2), redução na expressão de Cav-1 e em canais para potássio, ausência de disfunção endotelial e redução na resposta contrátil ao agonista do receptor TP (U46619) mediada pela atividade de COX, bem como resposta relaxante dependente do endotélio também dependente de COX em 2R-1C. Ainda o U46619 induziu uma grande produção de PGI2 somente em artérias coronárias de 2R-1C. O composto NCX2121 promoveu relaxamento de baixa magnitude em artérias coronárias, sem diferenças entre a resposta entre artérias de ratos 2R e 2R-1C e sem a participação de EROs. Verificamos que o L-NAME induziu um ganho de contração nas artérias dependente de atividade de COX. . Nossos resultados sugerem que durante a hipertensão a via da COX com produção de PGI2 pode estar aumentada justificando a baixa magnitude de relaxamento ao composto NCX2121, um inibidor de COX / as prostaglandins (PGs) and thromboxane A2 (TXA2) the main EDCFs produced by COX. Thus, NO release and COX inhibition may be effective in these cases. Non-steroidal anti-inflammatory drugs associated with NO donors (CINODs) have important actions in the vascular system. The imbalance between the production of endothelial factors is recognized as endothelial dysfunction. However, despite its relevance the coronary microcirculation has not been explored as a target for CINODs. The objective of this study was to evaluate the vascular alterations of the coronary vascular bed in renovascular hypertension model (2K-1C) and determine the action of the compound NCX 2121. We observed cardiac changes with hypertrophy of the heart and lower increase of coronary perfusion pressure (CPP) under increases of flow, by the Langendorff technique in 2K-1C hearts. In the isolated coronary artery there was an increase in the expression of the cyclooxygenase 2 (COX-2) enzyme, reduction in Cav-1 expression and in potassium channels, absence of endothelial dysfunction and reduction in the contractile response to TP-receptor agonist (U46619) mediated by COX activity, as well as endothelium-dependent relaxing response dependent of COX in 2K-1C. Furthermore, U46619 induced a large production of PGI2 only in 2R-1C coronary arteries. The compound NCX2121 promoted low magnitude relaxation in coronary arteries with no differences between the arteries from 2K and 2K-1C rats also without participation of EROs. We found L-NAME induced contraction dependent on COX activity in 2K-1C. Our results suggest that during hypertension the COX pathway with PGI2 production may be increased justifying the low magnitude of relaxation to the compound NCX2121, a COX inhibitor.

Momordica charantia é uma espécie de planta pertencente à família Cucurbitaceae. No Brasil, é conhecida pelo nome popular de Melão de São Caetano. É encontrada em grande parte do globo terrestre, sendo que no Brasil é observada nas regiões litorâneas e principalmente nas regiões do interior do país. Escolhemos o estudo com Momordica charantia devido suas propriedades terapêuticas conhecidas serem de grande interesse. Ela vem ganhando cada vez mais reconhecimento através de pesquisas científicas realizadas, visto que, já é utilizada a milhares de anos através da cultura popular. Tais pesquisas têm confirmado e entendido cada vez mais as propriedades medicamentosas desta planta e os mecanismos responsáveis por tais funções nesta espécie, sendo as propriedades antidiabéticas, antivirais e anticancerígenas as de maior destaque. Os experimentos realizados em torno da Momordica charantia, na busca destes compostos foram todos realizados utilizando extratos retirados dos próprios tecidos já diferenciados na planta adulta (sementes, folhas, raízes e frutos). Neste trabalho, foi realizado a pesquisa de metabólitos secundários produzidos pela cultura de células em suspensão de Momordica charantia durante a fase de crescimento desta e após a realização de ensaios de elicitação com Ácido Salicílico (AS). Nosso laboratório vem se dedicando aos estudos da composição da parede celular vegetal e suas alterações, bem como dos mecanismos de defesa empregados pelas células em suspensão em condições de estresse biótico e abiótico. O ácido salicílico é um dos hormônios vegetais envolvido em vários mecanismos de respostas que envolve o estresse vegetal e de desenvolvimento da planta tais como o de garantir resistência a patógenos por exemplo. Quando ocorre algum processo de infecção ou lesivo para a planta, ocorre um aumento na concentração de AS no interior da planta. Esse aumento leva a ativação de certas vias metabólicas que culminam na produção de metabólitos secundários e na degradação, fragmentação ou espessamento da parede celular. Como reposta dos ensaios de elicitação realizados podemos comprovar os efeitos do AS mediados na produção de metabólitos secundários que foram aumentados conforme a concentração de AS. Foi utilizado para os ensaios de elicitação AS nas concentrações de 0,5 , 1,0 e 5 mmol/L. Para o monitoramento da cultura e averiguação da efetividade dos ensaios de elicitação foi utilizado a monitoria através da dosagem de proteínas totais, compostos fenólicos totais e açúcares redutores totais tanto liberados para o meio extracelular quanto produzidos no meio intracelular. Foi determinado as variações dos componentes da parede celular durante a fase de crescimento e após os ensaios de elicitação onde foi comprovado que quanto maior a concentração de AS, maiores são os fragmentos de açúcares fragmentados da parede celular. Foi evidenciado também a presença de triterpenos na cultura celular (em comparação com os padrões isolados da planta), tanto na fase de crescimento e também após a indução com os ensaios de elicitação com AS. / Momordica charantia is a plant from the Cucurbitaceae family. In Brazil, it is known by the popular name of Melão de São Caetano. It is found across the whole world, and in Brazil it can be found in coastal and interior regions of the country. The aim to study Momordica charantia is due to its known therapeutic properties that are already used for thousands of years through popular culture. The studies have confirmed and understood various drug-like properties of this plant and the mechanisms responsible for such functions in this species, such as antidiabetic, antiviral and anticancer properties. The researches with Momordica charantia were all performed using extracts obtained from seeds, leaves, roots and fruit. In this work, the isolation and characterization of metabolites as standards from leaves and stems of Momordica charantia was performed. The research of secondary metabolites produced in cell culture suspension of Momordica charantia without elicitor or after elicitation with salicylic acid (SA) was conducted. Salicylic acid is a plant hormone involved in various mechanisms of responses. When the plant suffers an infection or injury, it is followed by an increase in AS concentration. This increase leads to activation of certain metabolic pathways that culminate in the production of secondary metabolites and degradation, fragmentation or cell wall thickening. AS was utilized for the elicitation experiments at 0.5, 1.0 and 5 mmol/L. For the monitoring of plant cell culture, it was determinate the total protein, phenolic compounds and reducing sugars content, into the extra and intra cellular medium. Where it was verified that AS modulates the production of these molecules in culture. After this, we determined the variation in the oligosaccharides in the extracellular medium obtained in the presence or absence of AS. It was observed the degree of polymerization of oligosaccharides higher when increase AS concentration in the medium. In conclusion, this study can demonstrate the effects of SA on the production of secondary metabolites in plant cell culture, which were increased as the concentration of AS increased. The presence of triterpenes in cell culture was confirmed to compare the molecules obtained from culture with that isolated from plant standards.