O ciclo de vida de Dictyostelium discoideum é composto de duas fases independentes. Durante o crescimento vegetativo, as amebas crescem isoladas até que a fonte de nutrientes seja esgotada. A carência nutricional induz sua entrada num processo de desenvolvimento, que inclui a parada do crescimento, a agregação das células e a formação de um organismo multicelular onde as células se diferenciam em esporos que sobrevivem as condições desfavoráveis. A proteína quinase YakA é requerida para a transição entre o crescimento e o desenvolvimento. YakA regula os níveis da PKA. Mutantes yakA- apresentam o crescimento acelerado, são deficientes no processo de agregação e são hiper-sensíveis a estresse oxidativo e nitrosoativo. Uma mutação em um segundo sítio em keaA, suprime a morte induzida por SNP (um gerador de óxido nítrico) no mutante yakA-. O papel de keaA foi determinado em resposta a estresse oxidativo, nitrosoativo e carênica nutricional. O gene keaA é necessário para o crescimento e desenvolvimento. Uma mutação em keaA confere resistência a estresse nitrosoativoloxidativo confirmando que uma mutação em keaA confere resistência a estresse. Um segundo supressor da morte induzida por SNP no mutante yakA- foi isolado pela mesma técnica de REMI e identificado como pkaC um regulador da resposta a estresse. YakA e PKA integradam a resposta a vários estresse em Dictyostelium. Os resultados indicam que a yakA regula a parada do ciclo celular em resposta a estresses através da modulação de keaA. keaA regula, por sua vez, a expressão da pkaC, um regulador chave da produção de cAMP e do processo de desenvolvimento. A interação gênica entre estes elementos é complexa e deve ser ajustada para permitir que as células sobrevivam a mudanças ambientais encontradas durante o seu ciclo de vida. / Dictyostelium discoideum\'s life cycle is composed of two phases. During the vegetative phase, amoebae grow as single cells until the nutrients are depleted. Starvation induces a developmental program where isolated amoebae adopt a multicellular mode of living and differentiate into spores to survive the harsh conditions. The protein Kinase YakA is required for the growth to development transition. YakA regulates the leveis of PKA. yakA null cells have a faster cell cycle, are aggregation deficient and are hypersensitive to nitrosoative/oxidative stress. A second-site mutation in keaA, supresses the death induced by SNP, a generator of nitric oxide. The role for keaA has been determined in response to oxidative, nitrosoative and nutrient starvation stresses. keaA is required for proper growth and development. The keaA- cells are more resistant to nitrosoative and oxidative stress confirming that a mutation in keaA confers stress resistance. A second supressor of the death induced by SNP in the mutant yakA- was isolated with REMI and identified pkaC as a regulator of the nitrosoative stress response. YakA and PKA may integrate the responses to several stresses in Dictyostelium. The results indicate that yakA regulates the cell cycle arrest in response to stress through the modulation of keaA. KeaA regulates the expression of pkaC, a key regulator of cAMP prodution and development. Genetic interactions among these elements is complex and must be finely tuned in the many environmental changes cells endure during the life cycle.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-13Bitstream added on 2014-06-13T20:21:29Z : No. of bitstreams: 1 pereira_vbr_dr_botib.pdf: 2768539 bytes, checksum: e0eceb3d0040712e43091635190b217c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica e a de maior ocorrência na América Latina, causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis. Apesar dos esforços contínuos de diversos grupos de pesquisa principalmente do Brasil, Colômbia Venezuela e Argentina, a fase ambiental produtora de propágulos infectantes, seu nicho ecológico e outros aspectos fundamentais da biologia deste patógeno ainda representa um enigma. Sabe-se, no entanto, que há alguns indicadores biológicos onde se constata a infecção natural do P. brasiliensis em espécies de tatu Dasypus novemcinctus em áreas endêmicas. Assim, o isolamento sistemático deste patógeno nesta espécie animal tem despertado o interesse em avaliar outras espécies animais cuja distribuição geográfica seja coincidente com a da PCM. O conhecimento de reservatórios naturais de fungos patogênicos e o mapeamento de regiões habitadas pelos fungos são dados fundamentais para elucidar a eco-epidemiologia da PCM. O presente projeto focalizou a detecção ambiental do P. brasiliensis, bem como de outros fungos patogênicos geneticamente relacionados, em animais silvestres pelo emprego de métodos moleculares em amostras de tecido de animais atropelados em beiras de estradas. Sabe-se que esse material é muitas vezes negligenciado, sendo utilizado em estudos de conservação biológica e de parasitologia. Esta abordagem é inédita e útil no estudo da eco-epidemiologia da PCM. Foram avaliados também tatus (D. novemcintus) capturados em regiões geograficamente definidas, visando o isolamento fúngico do P. brasiliensis, bem como de outros fungos patogênicos, por cultura de órgãos, histopatologia e técnicas moleculares. A integração dos dados micológicos, moleculares e a aplicação de técnicas de geoprocessamento permitiu a caracterização da área geográfica dos animais avaliados e contribuiu para um melhor conhecimento sobre a ocorrência do patógeno no hospedeiro animal / Paracoccidioidomycosis (PCM) is the most prevalent systemic mycosis of Latin America, caused by fungus Paracoccidioides brasiliensis. Despite the continuous efforts by several research groups mainly from Brazil, Colombia, Venezuela and Argentina, the saprobic form producing infective propagula, its exact niche in nature and other fundamental aspects of the biology of this pathogen still remains enigmatic. It is known however that some biological indicators where there is a natural infection of P. brasiliensis from the nine-banded armadillo Dasypus novemcinctus in an endemic area. Thus, the systematic isolation of this pathogen in this species has increased the necessity in evaluating several wild mammals whose geographical distribution is coincident of PCM. The knowledge about natural reservoirs of pathogenic fungi and mapping landscape of areas inhabited by fungi may be clarified the ecoepidemiology of PCM. This work focused on the environmental detection of P. brasiliensis, as well as other related pathogenic fungi in wild animals, the use of molecular tools in tissue samples from road-killed wild animals. While road-killed animals proved to be usefull both form parasitological and conservative studies, these materials have been negleted in the area of infections disease. This approach is new and has been useful to elucidate PCM ecoepidemiology. It was evaluated armadillos (D. novemcinctus) captured is some restricted areas, such as from Savanna and a County considered to be hyperendemic for PCM, by culture, histopathology and molecular techniques, in order to confirm if P. brasiliensis also occurs in such defined ecological conditions. The use the Geographical Information Systems (GIS), thus contributing to a better understanding about the occurrence of the pathogen in the host animal and the associated biotic and abiotic factors

Orientador : Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Fernando Rogério Pavan / Banca: Patricia Albuquerque de Andrade Nicola / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Resumo: O aumento de micoses invasivas e o desenvolvimento de mecanismos de resistência de algumas espécies de fungos, frente aos fármacos utilizados na terapia, têm sido preocupante. O tratamento antifúngico, geralmente é agressivo e o surgimento da resistência antifúngica acrescenta dificuldades adicionais no tratamento dessas infecções. Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são os principais agentes etiológicos da criptococose, e afetam principalmente pacientes imunodeprimidos. Nesse trabalho foi realizada a caracterização morfológica e da virulência de três isolados clínicos de C. neoformans e dois isolados ambientais de C. gattii em Galleria mellonella, além da análise do nível de expressão dos genes MDR1 e AFR1 envolvidos no funcionamento de bomba de efluxo, através da quantificação relativa por PCR (polimerase chain reaction) em tempo real. Uma vez esses genes quantificados, esses isolados foram usados na prospecção de moléculas sintéticas para verificação da atividade inibitória dos genes selecionados, após o contato com as mesmas. Os isolados foram classificados como sensível (26S), sensibilidade intermediária (27I) e resistente (30R) da espécie neoformans e da espécie C. gattii, um foi resistente (118R) e outro sensível (CL), in vitro, a fluconazol. As moléculas selecionadas para os testes foram o ácido gálico e seus derivados sintéticos, e os melhores resultados observados foram obtidos a partir dos galatos de alquila G11, G12, G14, G15, G16 e G17, apresentando ótima atividade antifúngica contra os isolados testados, em especial os galatos G14, G16 e G17, obtendo ótima atividade antifúngica. O galato de n-dodecila (G16), foi selecionado para os demais testes apresentando atividade aditiva no teste de sinergismo, quando utilizado em associação com fluconazol, reduzindo os valores de CIM para o mesmo, o que mostra a possível... / Abstract: The increase of invasive mycoses and the development of antifungal resistance by some fungi species have been worrying. The antifungal treatment is usually aggressive and inefficient, and the emergence of antifungal resistance increases the difficulties in treating these fungi infections.Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii are the main etiologic agents of cryptococcosis andespecially affect immunocompromised patients. In this work the Galleria mellonella, was used to perform the morphologic characterization as well as determine the virulence of three sequential clinical isolates of C. neoformansand twoisolates environmental of C. gattii. In addition, was held the analysis of genes expressions (MDR1, ERG11 and AFR1), that are involved in efflux pumps and ergosterol synthesis, by real time PCR (polimerase chain reaction) assay. After these characterizations the isolates were used in the prospecting of synthetic molecules to verify the inhibitory activity of selected genes. After incubation in vitro with fluconazole the C.neoformans isolates were classified as sensitive (26S), intermediate sensitivity (27I) and resistant (30R), and the C. gattiiisolates were resistant (118R) and the other sensitive (LC). The galic acid molecules and their synthetic derivatives were tests against C.neoformans and C. gattii isolates.The best results were obtained from alkyl gallates G11, G12, G14, G15, G16 and G17 which shows a great antifungal activity, especially G14, G16 e G17. The gallate n-dodecyl (G16), was select to others tests once presented additive activity in synergism test with fluconazole, decreasing the MIC values. The gene expression assay shows that both isolates expressed MDR1 and AFR1 (encoding efflux pumps), and the G16 was capable to inhibit these genes which makes this molecule promising for inhibiting efflux. With virulence assays using the G. mellonella was possible ... / Doutor

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Felipe Lopes Campos.pdf: 553352 bytes, checksum: e4d71e5d911a1305af8111fa2c150966 (MD5) Previous issue date: 2006-03-16 / The aim of this survey was the isolation of the Cryptococcus neoformans yeast from cats and dogs central nervous system in Rio de Janeiro City. Periodic collections were made from brain samples from April 2004 to July 2005 at the rabies diagnosis laboratory in the Jorge Vaitsman Veterinary Medicine Municipal Institute in Mangueira, RJ. According to the results, of the 201 clinical samples, we found four positives samples; one of these was positive for C. laurentii, three were positive for Cryptococcus neoformans; of which two were neoformans variety and one was gattii variety. Secondarily we compared with strains from the ICB-USP, previously isolated and identified as for urease and fenol-oxidase production in qualitative character, in the same way that the potential of virulence demonstrated to fosfolipase and protease production. Killer biotyping used in all isolates showed a predominance of biotype II to neoformans variety and biotype VIII to gattii variety. All isolates showed protease and fosfolipase production in varied degrees. lipase / Objetivando o isolamento da levedura Cryptococcus neoformans do sistema nervoso central de c?es e gatos no Munic?pio do Rio de Janeiro, procedeu-se ?s coletas peri?dicas, no per?odo de abril de 2004 a julho de 2005, de amostras de c?rebro, no Laborat?rio de Diagn?stico de Raiva do Instituto Municipal de Medicina Veterin?ria Jorge Vaitsman no bairro da Mangueira, Rio de Janeiro. Das 201 amostras obteve-se um total de quatro positivas para o g?nero; sendo uma de Cryptococcus laurentii e tr?s de C. neoformans, das quais duas revelaram-se pertencentes ? variedade neoformans e uma ? variedade gattii. Secundariamente, confrontamos estas com amostras obtidas junto ao ICB-USP, previamente isoladas e identificadas, quanto ao potencial de virul?ncia espelhado pela produ??o de fosfolipase e de protease. A biotipagem Killer empregada em todos os isolados demonstrou uma predomin?ncia do biotipo II para a variedade neoformans e biotipo VIII para a variedade gattii. Todos os isolados apresentaram-se produtores de protease e de fosfolipase, em diferentes graus.

O leite é considerado um bom substrato para o desenvolvimento de diversos microrganismos, dentre os quais, uma variada gama de leveduras com distintas características biológicas. Em geral, as leveduras são consideradas saprotróficas, fazendo parte da microbiota residente, entretanto, em alguns casos, elas podem provocar infecções na glândula mamária. A contaminação do leite por microrganismos patogênicos, pode representar um risco para o consumidor, quando o produto é ingerido na forma in natura ou até mesmo beneficiada. Deve-se considerar, também, os reflexos negativos na produção de subprodutos, pois alterações nas características físicas e organolépticas podem afetar a qualidade e a vida-de-prateleira dos derivados lácteos. O objetivo desse estudo foi avaliar a ocorrência de fungos e bactérias presentes no leite de ovelhas normais e daquelas com mastite clínica. Foram obtidas 588 amostras de leite de ovelha sendo 106 oriundas de animais com mastite clínica e 482 de animais normais. Alíquotas de 0,1 mL de leite foram semeadas pela técnica de espelhamento em superfície em ágar acidificado Yeast Medium. A identificação das leveduras foi realizada através de testes rotineiramente utilizados na metodologia padrão, além da utilização do meio Hicrome Candida Differential Agar Base (HIMEDIA®) e do sistema API 20 C (Biomérieux®). Foram realizados exames bacteriológicos, a fim de obter uma correta avaliação do possível agente etiológico envolvido. Do total das amostras analisadas, 53 (27,04%) foram positivas no exame micológico, 134 (68,36%) positivas no exame bacteriológico e 9 (4,59%) apresentaram crescimento de Candida spp. e Staphylococcus coagulase-negativa. No cultivo micológico foram obtidos 60 isolados pertencentes aos seguintes gêneros: Candida spp. (70,00%), Rhodotorula spp (11,70%), Trichosporon spp. (6,70%), Geotrichum spp. (5,00%), Pichia spp. (5,00%) e Cryptococcus sp. (1,70%). Dentre o total de bactérias, foram isoladas: 110 (82,00%) Staphylococci coagulase-negativa, 14 (10,44%) bactérias Gram-negativas, 6 (4,48%) Staphylococcus aureus e 4 (3,00%) Streptococcus spp. Algumas bactérias Gram-negativas foram identificadas como Pasteurella spp., Rhodococcus spp. e Acinetobacter spp. O resultado microbiológico ressalta a importância da realização concomitante de exames micológicos e bacteriológicos para o correto diagnóstico e monitoramento dos casos de mastite em ovinos. Em relação à saúde pública, o consumo de leite de ovelhas e derivados lácteos contaminados com microrganismos potencialmente patogênicos, constitui um risco para indivíduos imunossuprimidos. No que concerne à produção de derivados lácteos feitos com leite de ovelha, principalmente queijos, a contaminação microbiológica pode afetar a qualidade e a vida-de-prateleira do produto final, causando considerável prejuízo econômico. / The milk is considered a good substrate for the development of various microorganisms, among them, a wide range of yeast strains with different biological characteristics. In general, yeasts are considered to be saprotrophic, part of the normal microflora, however, in some cases, they can cause infections in the mammary gland. Milk contamination by yeasts and yeast-like fungi may represent a risk to the consumer when the product is either consumed in natura or its derivatives. The negative impact on the production of milk derivatives should also be considered as the changes in physical and organoleptic characteristics can affect the quality and shelf-life of dairy products. The aim of this study was to evaluate the diversity of yeasts and bacteria in milk from healthy sheep and those with clinical mastitis. A total of 588 samples were obtained: 106 from animals with clinical mastitis and 482 from healthy animals. Aliquots of 0,1 mL from milk samples were spread in triplicate on acidified Yeast Medium agar. The identification of yeasts was carried out through tests routinely used in the standard methodology along with means Hicrome Candida Differential Agar Base (HIMEDIA®) and API 20 system (Biomerieux ®). Bacteriological studies were performed in order to obtain a correct evaluation of the possible etiological agent. Out of the samples analyzed, 53 (27,04%) showed a positive result in the mycological examination, 134 (68,36%) were positive in the bacteriological examination and 9 (4,59%) presented Candida spp. and coagulase-negative Staphylococcus growing. The mycological analysis showed the presence of 60 isolates belonging to the following genera were cultivated: Candida spp. (70%), Rhodotorula spp. (11.7%), Trichosporon spp. (6.7%), Geotrichum spp. (5%), Pichia spp. (5%) and Cryptococcus spp. (1.7%). The bacteriological analysis showed the presence of 110 (82.00%) coagulase-negative Staphylococci, 14 (10.44%) Gram-negative bacteria, 6 (4.48%) Staphylococcus aureus and 4 (3.00%) Streptococcus spp. Some Gram-negative bacteria were identified as Pasteurella spp., Rhodococcus spp. and Acinetobacter spp. The microbiological results emphasize the importance of the concomitant use of bacteriological and mycological examination for the diagnosis and monitoring of cases of mastitis in sheep. In relation to public health, the consumption of sheep milk and dairy products contaminated with potentially pathogenic microorganisms, constitutes a risk to immunosuppressed individuals. Regarding the production of dairy products made from ewe’s milk, especially cheese, microbiological contamination can affect the life quality and shelf-life of product, causing considerable economic loss.

Pythium insidiosum, classificado no Reino Stramenipila e Classe Oomycetes, é o agente etiológico da pitiose, uma doença diagnosticada principalmente em equinos, caninos e humanos. A secreção de enzimas por micro-organismos é considerada um fator importante na invasão tecidual. O presente estudo teve como objetivo analisar a atividade enzimática de isolados de P. insidiosum obtidos de lesões equinas (n=13), coelhos infectados experimentalmente (n=2) e uma amostra padrão (ATCC). Para isso, utilizou-se o kit comercial API ZYM. Zoósporos foram cultivados em caldo RPMI 1640 por 24h a 37 oC. Após esse período, a presença de hifas foi observada, as quais foram separadas e 65μl do líquido restante foram inoculados em cada um dos 20 poços (um controle e 19 com substratos específicos para cada enzima) do kit. As galerias foram então incubadas por 4 h a 37 oC. Os resultados foram obtidos através da leitura visual das reações. As análises foram feitas em triplicata e submetidas à análise de variância utilizando um nível de significância de 5%. Houve uma variação intraespecífica na atividade enzimática entre os isolados, sendo que enzimas dos grupos fosfohidrolases e éster hidrolases foram as mais prevalentes. Esses dados demonstram a capacidade de P. insidiosum em secretar enzimas que degradam substratos presentes em animais e em plantas, bem como a variabilidade enzimática entre os isolados. / Pythium insidiosum is classified in the kingdom Stramenipila, class Oomycetes. It causes pythiosis, a disease mainly diagnosed in horses, dogs, and humans. This study aimed at analyzing the enzymatic activity of P. insidiosum isolates obtained from equine lesions (n=13), experimentally infected rabbits (n=2) and a standard strain (ATCC 58637). To address this issue, the API ZYM commercial kit was used. Zoospores were cultivated in RPMI 1640 broth for 24 h at 37oC. After this period, the presence of hyphae was observed and they were carefully separated from the liquid phase. Then, 65 μl of this liquid were inoculated in each of the 20 microwells (one control, 19 containing specific substrates for each enzyme) of the API ZYM kit. The strips were incubated for 4h at 37oC. Results were obtained by visual observation of the reactions. The tests were carried out in triplicate and submitted to an analysis of variance using a significance level of 5%. An intraspecific variation among the enzymatic activities was observed among the isolates, where the group of phosphohydrolases and ester hydrolases were conspicuous among most of the isolates. Data here obtained highlighted the capacity of P. insidiosum in secreting enzymes capable of degrading substrates present in animals and plants, besides the enzymatic variability among the isolates.

Aspergilose é uma das principais causas de mortalidade em aves imunocompetentes e imunodeprimidas. A manifestação clínica aguda da doença é geralmente observada em aves jovens, com episódios de surtos em aviários, enquanto a forma crônica é mais frequentemente observada em aves adultas. A inspeção das carcaças é fundamental para a detecção e monitoramento da prevalência de doenças. Os objetivos do trabalho foram avaliar a ocorrência de aspergilose causada por Aspergillus fumigatus em aves comerciais através do diagnóstico micológico e histopatológico e verificar a possibilidade de associação causal entre os critérios de diagnóstico de aspergilose e condenação por aerossaculite em frangos de corte através de um estudo de casocontrole. O estudo foi realizado com 380 amostras pulmonares. Foram coletados pulmões de frangos condenados (95) por aerossaculite e não condenados (285), diretamente na linha de abate de um frigorífico. Quarenta e seis (12%) amostras de pulmão foram positivas na cultura micológica. Do total de amostras, 177 (46,6%) apresentaram alterações histopatológicas, sendo as mais frequentes pneumonia fibrinoheterofílica necrótica, pneumonia heterofílica e hiperplasia linfóide. Do total de 380 pulmões analisados, 30 (65,2%) apresentaram concomitantemente alterações histopatológicas e isolamento fúngico. A relação entre a presença de lesões histopatológicas e isolamento de A. fumigatus testada por McNemar indicou que houve associação significativa entre a presença de alterações histopatológicas e o isolamento de A. fumigatus. A identificação molecular foi realizada em 44 isolados, sendo todos confirmados como sendo A. fumigatus através dos genes b-tub e rodA. O cultivo micológico e o exame histopatológico aumentam as chances de se detectar alterações pulmonares em aves condenadas pelo Sistema de Inspeção Final do que nas aves normais, sugerindo que tais critérios de diagnóstico são eficazes para aprimorar a avaliação e condenação de aves por aerossaculite. O perfil genético entre os isolados foi variado, mostrando que isolados de aves normais podem ser potencialmente causadores de aspergilose em aves suceptíveis. / Aspergillosis is one of the main causes of mortality in both immunocompetent and immunodepressed birds. The clinical manifestation of acute aspergillosis is usually observed in young birds, often with episodes of outbreaks in poultry farms, whereas chronic aspergillosis is more frequently observed in adult birds. The inspection of carcasses is fundamental for the detection of diseases and for monitoring their prevalence. The objectives of this study were to evaluate the occurrence of aspergillosis caused by Aspergillus fumigatus in poultry through mycological and histopathological diagnosis and to verify the possibility of a causal association between the criteria for aspergillosis diagnosis and carcass condemnation due to airsacculitis in broilers through a case-control study. The study was made with 380 lung samples. Lungs were collected from condemned (95) and not condemned (285) broilers due to airsacculitis, directly from the slaughter line of a slaughterhouse. Forty-six (12%) lung samples were positives in mycological culture. From the total samples, 177 (46.6%) showed histopathological alterations, the most frequent being necrotic, fibrinous, heterophilic pneumonia, heterophilic pneumonia and lymphoid hyperplasia. Of the 380 lungs analyzed, 30 (65.2%) showed histopathological alterations and isolation of fungi. The relation between the presence of histopathological lesions and the isolation of A. fumigatus, as observed with the McNemar test, indicated the significant association between the presence of histopathological alterations and the isolation of A. fumigatus.The molecular identification was made in 44 isolates, and all of them were confirmed to be A. fumigatus through analysis of the b-tub and rodA. The mycological cultivation and the histopathological test increase the chances of detecting pulmonary alterations in birds condemned by the Final Inspection System than in normal birds, suggesting that such diagnostic criteria are efficient to improve the assessment and condemnation of birds affected by airsacculitis. There were different genetic profiles among the isolates, which shows that isolates obtained from normal birds can potentially cause aspergillosis in those susceptible.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-24Bitstream added on 2014-06-13T20:00:40Z : No. of bitstreams: 1 baeza_lc_dr_arafcf.pdf: 2250737 bytes, checksum: 666c7d374ebfa4ff8507fbfbe951a4b8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As dermatofitoses são processos infecciosos de pele, pêlo e unhas muito comuns no mundo inteiro. Trichophyton rubrum é o dermatófito mais freqüentemente isolado em lesões superficiais de pele e unha. Estudos envolvendo este patógeno são cada vez mais importantes devido ao aparecimento de linhagens resistentes aos medicamentos antifúngicos disponíveis no mercado e ao comportamento invasivo deste agente em pacientes com o sistema imune comprometido. Estes fatos e poucos estudos levam à necessidade de se ampliar o conhecimento sobre a biologia deste agente. Visando colaborar nesse sentido, o presente trabalho teve dois objetivos centrais: 1) Realizar a tipagem molecular de isolados clínicos de T. rubrum com e sem relação epidemiológica por RAPD (Amplificação Randômica de DNA Polimórfico) com duas seqüências randômicas diferentes (denominadas de 1 e 6), bem como a análise dos elementos repetitivos (TRS-1 e TRS-2) do espaço não transcrito (NTS) do DNA ribossomal (DNAr) e 2) Identificar transcritos envolvidos na interação deste patógeno com fonte humana de queratina, através do RDA (Análise de Diferença Representacional). A aplicação do RDA permitiu pela primeira vez a identificação de alguns transcritos expressos, provavelmente relacionados à patogênese deste microrganismo. / Dermatophytosis is common infection process which occurs in skin, hair and nails and Trichophyton rubrum is the most frequently isolated dermatophyte. Studies on this pathogen are becoming increasingly important because of frequent reports on resistant strains to antifungal drugs commercially available and the invasive behavior of these agents in immunocompromised patients. These facts, associated with few studies with this agent, indicate the need to expand the information about the fungal biology. As a contribution to this goal, the present study had two central objectives: 1) To compare different methodologies for molecular typing of clinical isolates of T. rubrum epidemiologically related and unrelated for RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA) with two different random primers (denominated of 1 and 6); as well as the analysis of the repetitive elements (TRS-1 and TRS-2) of the space non-transcribed (NTS) of the ribosomal DNA (DNAr) and 2) To identify transcripts involved in the interaction of this pathogen with human keratin by RDA (Representational Difference Analysis). The application of the RDA allowed for the first time the identification of expressed transcripts during the microorganism proliferation that could be related to the T. rubrum virulence.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-27Bitstream added on 2014-06-13T20:24:16Z : No. of bitstreams: 1 diniz_jnm_dr_arafcf.pdf: 718250 bytes, checksum: ad07abef21dc44356500905c93cbf5e5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cryptococcus neoformans é levedura capsulada saprobiota que acomete principalmente indivíduos com o sistema imunológico comprometido. Seu habitat está relacionado com algumas espécies de árvores, madeira em decomposição e fezes de pássaros, em especial de pombos do gênero Columba livia. Nas grandes cidades estas aves vêm causando diversos problemas devido a sua multiplicação intensa. Desta maneira, medidas saneantes serão de grande auxílio para controlar a população desta levedura. Assim, este estudo teve como objetivo reidentificar 67 isolados de C. neoformans de fontes ambientais e caracterizá-los quanto ao seu genótipo e perfil de sensibilidade aos antifúngicos anfotericina B, cetoconazol, itraconazol e fluconazol, utilizando o método da difusão em ágar seguindo o documento M44A e determinando a concentação inibitória mínima frente a fluconazol pelo método M27-A2, ambos preconizados pelo CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute). Por outro lado, verificar o efeito antifúngico de extratos de plantas e sua atividade saneante em fezes de pombos comprovadamente contaminadas com isolado ATCC 90012 de C. neoformans. Todos isolados foram Mating Type α e tipo VNI. Pelo método de microdiluição, 21% (14/67) dos isolados ambientais apresentaram sensibilidade diminuída ao fluconazol com CIM de 16 μg/mL e mais de 50% (34/67) apresentaram CIM de 8 μg/mL.O extrato de Alibertia macrophylla apresentou efeito saneante com índice de eficiência de mais de 80% após 24 horas, na grande maioria dos isolados de C. neoformans. Este extrato foi estável... / Cryptococcus neoformans is a saprobiote capsuled yeast that proliferates mainly in individuals who have the immunologic system compromised. It natural habitat is related to some species of trees, decaying wood and bird excrement, in special Columba livia doves. In big cities, these birds have caused many problems due to its intense proliferation and the cleaning measures will be of great help in controlling this yeast. The aim of this study was to re-identify 67 C. neoformans isolates and characterize them according to their genotype and susceptibility to antifungal amphotericin B, cetoconazole, itraconazole e fluconazole, using the method of agar diffusion following the M44A document and determining the minimum inhibitory concentration to fluconazole by method M27-A2, both recommended by the CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute). On the other hand, the verification of the effect of plant extracts e and their cleaning activity on dove excrement previously contaminated with isolate ATCC 90012 of C. neoformans. All the isolates were Mating Type α and VNI. For the microdilution method, 21% (14/67) of the environmental isolates showed decreased susceptibility to fluconazole with MIC of 16 mg/mL and more than 50% (34/67) had MICs of 8 mg/mL. The extract of Alibertia macrophylla presented clean effect with index of efficiency of 80% after 24 hours, in the great majority of C. neoformans isolates. This extract was stable to the light incidence, to the heat and variation of pH. Our results are of great use for the development and utilization of active natural compounds in the fight against C. neoformans from environmental and the study of other variables are necessary for the viability of its use as a domestic cleaner.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-08-29T19:51:17Z No. of bitstreams: 1 KhadijaJobim_DISSERT.pdf: 2841729 bytes, checksum: bdbab7dbe11d92e41c68647c4e99d3db (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-09-03T00:30:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KhadijaJobim_DISSERT.pdf: 2841729 bytes, checksum: bdbab7dbe11d92e41c68647c4e99d3db (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-03T00:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KhadijaJobim_DISSERT.pdf: 2841729 bytes, checksum: bdbab7dbe11d92e41c68647c4e99d3db (MD5) Previous issue date: 2015-11-11 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Fungos Micorr?zicos Arbusculares (FMA) s?o importantes componentes do sistema solo-planta por desempenharem simbiose mutualista com ra?zes de plantas, promovendo o aumento no crescimento do simbionte vegetal e toler?ncia a estresses ambientais. Estudos ecol?gicos sobre a estrutura de comunidades de FMA t?m se concentrado geralmente em ?reas restritas a zonas superficiais do solo (0 - 20 cm), contudo, alguns estudos t?m sugerido que a abund?ncia e diversidade de FMA podemdiferir consideravelmente de acordo com a profundidade do solo. Essa constata??o ? relevante para estudos dedicados ? avalia??o da diversidade de FMA, sobretudo em ?reas impactadas, visto que as pr?ticas prejudiciais do uso do solo tendem ao empobrecimento das esp?cies. Esse trabalho objetivou avaliar a ocorr?ncia de FMA em diferentes profundidades do solo em fragmentos florestais da Fazenda Experimental Embrapa Milho e Sorgo, uma ?rea de transi??o entre os biomas Cerrado e Mata Atl?ntica, situada em Sete Lagoas, MG, a fim de caracterizar a composi??o e distribui??o de esp?cies de FMA em fun??o da distribui??o vertical no solo. Para isso, em janeiro de 2014, foram realizadas coletas de solo em oito fragmentos florestais, com alcance m?ximo de 230 cm, considerando-se os seguintes intervalos: I: 0 - 20 cm; II: 20 - 40 cm; III: 40 - 60 cm; IV: 60 - 80 cm; V: 80 - 120 cm; VI: 120 - 160 cm e VII: 160 - 230 cm. Parte do solo foi destinada para a implanta??o de culturas armadilhas para posterior extra??o e recolhimento de glomerosporos de FMA e parte foi destinada para avalia??o f?sico-qu?mica. Foi registrado o total de 62 esp?cies, distribu?das em nove fam?lias: Acaulosporaceae (29), Ambisporaceae (1), Archaeosporaceae (2), Dentiscutataceae (2), Diversisporaceae (1), Entrophosporaceae (2), Glomeraceae (19), Paraglomeraceae (3) e Scutellosporaceae (3). Foi detectada tend?ncia ao decr?scimo do n?mero de esp?cies e da diversidade em rela??o ao aumento da profundidade, tendo apresentado varia??es significativas entre as diferentes zonas. Algumas esp?cies apresentaram ocorr?ncia somente em zonas superficiais ou de maior profundidade, bem como outras esp?cies apresentaram ampla distribui??o ao longo do gradiente total. O Ca, P, Mn, mat?ria org?nica e pH consistiram nos atributos f?sico-qu?micos do solo que afetaram a distribui??o da maior parte das esp?cies encontradas. Os resultados obtidos demonstram que a amostragem de zonas mais profundas do solo nos estudos dediversidade de FMA permite acessar uma diversidade at? ent?o negligenciada, incluindo a detec??o de esp?cies de ocorr?ncia restrita nessas zonas.