Pythium insidiosum, classificado no Reino Stramenipila e Classe Oomycetes, é o agente etiológico da pitiose, uma doença diagnosticada principalmente em equinos, caninos e humanos. A secreção de enzimas por micro-organismos é considerada um fator importante na invasão tecidual. O presente estudo teve como objetivo analisar a atividade enzimática de isolados de P. insidiosum obtidos de lesões equinas (n=13), coelhos infectados experimentalmente (n=2) e uma amostra padrão (ATCC). Para isso, utilizou-se o kit comercial API ZYM. Zoósporos foram cultivados em caldo RPMI 1640 por 24h a 37 oC. Após esse período, a presença de hifas foi observada, as quais foram separadas e 65μl do líquido restante foram inoculados em cada um dos 20 poços (um controle e 19 com substratos específicos para cada enzima) do kit. As galerias foram então incubadas por 4 h a 37 oC. Os resultados foram obtidos através da leitura visual das reações. As análises foram feitas em triplicata e submetidas à análise de variância utilizando um nível de significância de 5%. Houve uma variação intraespecífica na atividade enzimática entre os isolados, sendo que enzimas dos grupos fosfohidrolases e éster hidrolases foram as mais prevalentes. Esses dados demonstram a capacidade de P. insidiosum em secretar enzimas que degradam substratos presentes em animais e em plantas, bem como a variabilidade enzimática entre os isolados. / Pythium insidiosum is classified in the kingdom Stramenipila, class Oomycetes. It causes pythiosis, a disease mainly diagnosed in horses, dogs, and humans. This study aimed at analyzing the enzymatic activity of P. insidiosum isolates obtained from equine lesions (n=13), experimentally infected rabbits (n=2) and a standard strain (ATCC 58637). To address this issue, the API ZYM commercial kit was used. Zoospores were cultivated in RPMI 1640 broth for 24 h at 37oC. After this period, the presence of hyphae was observed and they were carefully separated from the liquid phase. Then, 65 μl of this liquid were inoculated in each of the 20 microwells (one control, 19 containing specific substrates for each enzyme) of the API ZYM kit. The strips were incubated for 4h at 37oC. Results were obtained by visual observation of the reactions. The tests were carried out in triplicate and submitted to an analysis of variance using a significance level of 5%. An intraspecific variation among the enzymatic activities was observed among the isolates, where the group of phosphohydrolases and ester hydrolases were conspicuous among most of the isolates. Data here obtained highlighted the capacity of P. insidiosum in secreting enzymes capable of degrading substrates present in animals and plants, besides the enzymatic variability among the isolates.

Malassezia spp. são fungos lipofílicos, reconhecidos há mais de cem anos como membros da microbiota cutânea normal humana, bem como agentes de doenças dermatológicas. Desde 1980, são relatados como causadores de infecções sistêmicas oportunistas. Estas leveduras são frequentemente encontradas em uma grande variedade de animais homeotérmicos, e sua ampla distribuição no meio ambiente agora está sendo explorada através de técnicas moleculares e bioquímicas. O enfoque deste estudo foi a espécie não lipido-dependente Malassezia pachydermatis, e a sua caracterização através do perfil enzimático pelo sistema Api-Zym®. Deste modo, utilizaram-se 30 amostras de M. pachydermatis isoladas de cães, com e sem sinais clínicos, identificadas pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). As amostras foram cultivadas em meio de Dixon modificado, incubadas a 37°C durante 48 horas, para posterior quantificação através de espectrofotometria. Um inóculo de 65 μl foi colocado em cada orifício do kit comercial de verificação enzimática e, após, incubado a 37ºC por 4 horas. Os resultados foram obtidos através da leitura visual e interpretação das titulações por escalas pré-determinadas, também foram avaliadas as reações através de “escaneamento” eletrônico. Todos os testes foram realizados em triplicata. Os resultados demonstraram a atividade de enzimas específicas pertencentes ao grupo das peptídeo hidrolases (100%), fosfohidrolases (98,3%) e éster hidrolases (91,6%), enquanto que as enzimas α-galactosidase, β-galactosidase, β-glicuronidase, α-manosidase e α-fucosidase caracterizaram 10% de todos os isolados. Além disso, não se comprovou a viabilidade do sistema utilizado no estudo para a caracterização enzimática da levedura. / Malassezia spp. are lipophilic fungi, which have been recognised for over a century as members of the normal human cutaneous flora, and also as agents of certain skin diseases. In addition, since the 1980s, they have been reported as causing opportunistic systemic infections. These yeasts have frequently been found on a diverse range of other warm-blooded animals, and their wider distribution in nature is now being explored using molecular techniques. The focus of the present study was the species no lipid-dependent Malassezia pachydermatis, and its characterization through the enzymatic profile by the Api-Zym® system. Then 30 isolated samples of dogs had been used, with and without clinical signals, identified by the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). The samples were cultivated into Dixon’s modified medium, incubated at 37°C during 48 hours, for posterior quantification through spectrophotometry. An inocula of 65 μl was placed in each microwell of the commercial kit of enzymatic verification and, after, it was incubated at 37ºC for 4h. The results were obtained through the visual reading and interpretation of the titulations by predetermined scales, it were also evaluated the reactions through electronic scanning. All the tests were performed in triplicate. The results demonstrated the activity of specific enzymes pertaining to the group of the peptide hydrolases (100%), phosphohydrolases (98,3%) and ester hydrolases (91,6%), while the enzymes α-galactosidase, β-galactosidase, β-glucuronidase, α-mannosidase and α-fucosidase characterized 10% off all the isolates. Moreover, it was not proven the viability of the system used in the study for the enzymatic characterization of the yeast.

Orientador: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Márcia Maria Costa Nunes Soares / Banca: Lúcia Buchalla Bagarelli / Resumo: A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma inflamação da mucosa genital decorrente de infecção por leveduras. Os principais sintomas são disúria, hiperemia, ardência, corrimento, prurido, dispareunia, fissuras. Aproximadamente 75% das mulheres sofrem ao menos um episódio de candidíase vulvovaginal, 40% apresentam mais de um episódio e menos de 5% tornam-se recorrentes (CVVR). A CVV tem como principal etiologia, Candida albicans, no entanto, episódios devido às espécies "não albicans" estão aumentando. O manejo das vaginites vem sendo realizado de modo empírico, levando a problemas quanto à terapêutica. Assim, este projeto teve como objetivos caracterizar fenotipicamente leveduras isoladas do conteúdo vaginal de 223 mulheres adultas, sintomáticas (S) e assintomáticas (A), atendidas pelo Serviço de Ginecologia do Hospital de Base de São José do Rio Preto e determinar os indicadores clínicos. Para tal, foi realizada análise micológica dos 223 isolados clínicos, sendo que, 87 amostras apresentaram cultura positiva. C. albicans foi a espécie mais prevalente nos dois grupos (A/S), seguida de Candida glabrata. A maior parte das mulheres era casada com média de idade de 30 a 40 anos, referiu uso de anticoncepcionais e ciclo menstrual regular. Em relação a práticas sexuais houve, para parte das pacientes, concomitância entre os hábitos, anal, oral e vaginal. Quando avaliado o tratamento prévio, não houve evidência de associação com sintomas particulares. A suscetibilidade a antifúngicos, realizada pelos dois métodos de referência disco-difusão e microdiluição, mostrou concordância, estatisticamente comprovada, apenas para o itraconazol. Em relação à produção de fator de virulência, apenas C. albicans produziu fosfolipase. Diferentemente, proteinase foi detectada em C. albicans, C. glabrata e Candida parapsilosis. Esse último fator de virulência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Vulvovaginal candidiasis (CVV) is an inflammation of genital mucosa caused by infection by yeasts. The main symptoms are dysuria, hyperemia, burning, corrimento, pruritus, dyspareunia, cracks. Approximately 75% of women suffer at least one episode of vulvovaginal candidiasis, 40% have more than one episode and less than 5% become recurrent (CVVR). The main cause is to candidiasis is Candida albicans, however, episodes due to the species non albicans are increasing. The management of vaginitis has been done so empirically, leading to problems with therapy. Thus, this project aimed to phenotypically characterize yeasts isolated from vaginal content of 223 adult women, symptomatic (S) and asymptomatic (A), attended by the Service of Gynecology, Hospital de Base de São José do Rio Preto and determine the clinical indicators. This has mycological analysis of 223 clinical isolates, of which 87 samples showed positive culture. C. albicans was the species most prevalent in both groups (A / S), followed by Candida glabrata. Most women were married with an average age of 30 to 40 years, said use of contraceptives and menstrual cycle regularly. In relation to sexual practices was for the part of patients, concomitance between habits, anal, oral and vaginal. When assessing the previous treatment, there was no evidence of association with particular symptoms. The susceptibility to antifungal held by the two methods of reference disc-diffusion and microdilution, showed agreement, statistically proven, only to itraconazole. For the production of virulence factor, only C. albicans produced phospholipase. Conversely, proteinase was detected in C. albicans, C. glabrata and Candida parapsilosis. The latter factor was associated with virulence, mainly in isolates from symptomatic patients. Data from this study helped reveal association between virulence factors with clinical signs... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-01Bitstream added on 2014-06-13T20:35:40Z : No. of bitstreams: 1 voltan_ar_me_arafcf.pdf: 3523715 bytes, checksum: a45dbb04885b30d3dab365502064fdcf (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico, agente de doença granulomatosa crônica denominada de paracoccidioidomicose (PCM), com grande variedade de manifestações clínicas, desde formas localizadas até disseminadas evoluindo para letalidade. O fungo tem capacidade de aderir, extravasar e invadir barreiras impostas pelos tecidos do hospedeiro. Em ensaios in vitro verificou-se que P. brasiliensis pode aderir e invadir células epiteliais, aparecendo algumas vezes internalizado dentro de um vacúolo. A identificação do mecanismo pelo qual este fungo adere, invade e sobrevive no interior da célula hospedeira é campo fértil para a descoberta de sua patogênese. Para tanto, a análise de proteínas presentes no microrganismo e nas células do hospedeiro e também os marcadores da via endocítica para co-localizar os microrganismos no interior das mesmas é o objetivo deste estudo. Assim, foi realizada a infecção de células epiteliais A549 e macrófagos AMJ2-C11com P. brasiliensis (Pb18) nos períodos de 3, 5, 8, 24 e 3, 5, 10 e 24h, respectivamente e feitas análises por técnicas de imunofluorescência para as proteínas de junções compactas, junções aderentes, junções tipo fenda e proteínas de ancoramento intracelular, bem como as proteínas da via endocítica. Entres estas, foram ensaiadas a expressão de clatrina, Rab7 e LAMP-1 por imunofluorescência e EEA1, Rab7 e LAMP-1 por imunoblot. As proteínas de junções foram expressas nas células, bem como na parede do fungo. A clatrina foi evidente na célula e aparentemente mais expressa na parede do fungo. Nas células A549 não houve alteração na expressão de Rab7 e LAMP-1, tanto na imunofluorescência quanto no imunoblot, sendo que para EEA1 e Rab5 não foi evidenciada alteração na expressão pela técnica de imunoblot. Rab7 foi expressa nos macrófagos, localizada na periferia das células e também no... / Paracoccidioides brasiliensis is a thermally dimorphic fungus, the etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM). PCM is a polymorphic disease manifested by an array of diverse clinical manifestations and varying organ involvement. P. brasiliensis may actively penetrate the mucocutaneous surface and parasitize epithelial cells, thus evading the host defenses and reaching deeper tissues. The ability of this fungus to adhere to and invade non-professional phagocyte cells has been observed. In vitro assays verify that P. brasiliensis can adhere and could appear internalized within vacuole. The identification of the mechanism by which this fungus adheres, invades and survivor inside the host cell is a fertile area for discover their pathogenesis. The aim of this study was analyzed the junctions proteins in the fungus and the host cells, as well as the endocytic markers to colocate the microorganisms inside the cells. Thus, the infection was performed in A549 epithelial cells and macrophages AMJ2-C11 with P. brasiliensis (PB18) for periods of 3, 5, 8, 24 and 3, 5, 10 and 24 h, respectively, and the immunofluorescence analysis was developed for the proteins claudin-1, claudin-4, E-cadherin, conexin 43, talin e vinculin, and the endocytic proteins. The macrophages and the cells A549 have been blemish along anti-clatrin, anti-Rab7 and anti-LAMP-1. The junctions’ proteins have been expressed at the cells, as well as on the wall from the fungus. The clathrin was present at the cells and apparently more expressed on the fungus wall. Rab7 and LAMP-1 were not expressed in the cells A549 as demonstrated by the imunofluorescence and the imunoblot. On the contrary Rab7 was expressed in macrophages located at the periphery of the cells and also in the own fungus. The expression of LAMP-1 apparently not presented alteration both at the imunofluorescence and at the imunoblot. The expression of EEA1 was... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-10Bitstream added on 2014-06-13T18:56:01Z : No. of bitstreams: 1 correa_pr_me_sjrp.pdf: 763319 bytes, checksum: 1d1304fe60a8bc1f5f7c29d67c166679 (MD5) / A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma inflamação da mucosa genital decorrente de infecção por leveduras. Os principais sintomas são disúria, hiperemia, ardência, corrimento, prurido, dispareunia, fissuras. Aproximadamente 75% das mulheres sofrem ao menos um episódio de candidíase vulvovaginal, 40% apresentam mais de um episódio e menos de 5% tornam-se recorrentes (CVVR). A CVV tem como principal etiologia, Candida albicans, no entanto, episódios devido às espécies “não albicans” estão aumentando. O manejo das vaginites vem sendo realizado de modo empírico, levando a problemas quanto à terapêutica. Assim, este projeto teve como objetivos caracterizar fenotipicamente leveduras isoladas do conteúdo vaginal de 223 mulheres adultas, sintomáticas (S) e assintomáticas (A), atendidas pelo Serviço de Ginecologia do Hospital de Base de São José do Rio Preto e determinar os indicadores clínicos. Para tal, foi realizada análise micológica dos 223 isolados clínicos, sendo que, 87 amostras apresentaram cultura positiva. C. albicans foi a espécie mais prevalente nos dois grupos (A/S), seguida de Candida glabrata. A maior parte das mulheres era casada com média de idade de 30 a 40 anos, referiu uso de anticoncepcionais e ciclo menstrual regular. Em relação a práticas sexuais houve, para parte das pacientes, concomitância entre os hábitos, anal, oral e vaginal. Quando avaliado o tratamento prévio, não houve evidência de associação com sintomas particulares. A suscetibilidade a antifúngicos, realizada pelos dois métodos de referência disco-difusão e microdiluição, mostrou concordância, estatisticamente comprovada, apenas para o itraconazol. Em relação à produção de fator de virulência, apenas C. albicans produziu fosfolipase. Diferentemente, proteinase foi detectada em C. albicans, C. glabrata e Candida parapsilosis. Esse último fator de virulência... / Vulvovaginal candidiasis (CVV) is an inflammation of genital mucosa caused by infection by yeasts. The main symptoms are dysuria, hyperemia, burning, corrimento, pruritus, dyspareunia, cracks. Approximately 75% of women suffer at least one episode of vulvovaginal candidiasis, 40% have more than one episode and less than 5% become recurrent (CVVR). The main cause is to candidiasis is Candida albicans, however, episodes due to the species non albicans are increasing. The management of vaginitis has been done so empirically, leading to problems with therapy. Thus, this project aimed to phenotypically characterize yeasts isolated from vaginal content of 223 adult women, symptomatic (S) and asymptomatic (A), attended by the Service of Gynecology, Hospital de Base de São José do Rio Preto and determine the clinical indicators. This has mycological analysis of 223 clinical isolates, of which 87 samples showed positive culture. C. albicans was the species most prevalent in both groups (A / S), followed by Candida glabrata. Most women were married with an average age of 30 to 40 years, said use of contraceptives and menstrual cycle regularly. In relation to sexual practices was for the part of patients, concomitance between habits, anal, oral and vaginal. When assessing the previous treatment, there was no evidence of association with particular symptoms. The susceptibility to antifungal held by the two methods of reference disc-diffusion and microdilution, showed agreement, statistically proven, only to itraconazole. For the production of virulence factor, only C. albicans produced phospholipase. Conversely, proteinase was detected in C. albicans, C. glabrata and Candida parapsilosis. The latter factor was associated with virulence, mainly in isolates from symptomatic patients. Data from this study helped reveal association between virulence factors with clinical signs... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-11Bitstream added on 2014-06-13T18:31:22Z : No. of bitstreams: 1 barboza_ls_me_sjrp_parcial.pdf: 54066 bytes, checksum: 3901016bbfd3977caa34c67746541ca7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-28T16:08:50Z: barboza_ls_me_sjrp_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-28T16:09:56Z : No. of bitstreams: 1 000642588.pdf: 349486 bytes, checksum: eea3a5247c5cd27a996061bb9441acaa (MD5) / A criptococose é uma micose sistêmica que afeta principalmente o sistema nervoso central, causando meningite. Causada pela inalação de propágulos de fungos do gênero Cryptococcus sp, C neoformans acomete hospedeiros com imunodepressão celular, cujo maior contingente é representado por indivíduos com AIDS. A fonte principal de aquisição desta levedura são fezes de aves, principalmente pombos (Columba livia). C. gattii infecta indivíduos aparentemente imunocompetentes, sendo isolado principalmente em espécies de eucaliptos. C. albidus e C. laurentii aparece em casos de meningites, fungemias, pneumonias, abscessos pulmonares e infecções cutâneas. C.uniguttulatus é encontrado no trato gastrointestinal, fezes de pássaros e contaminante de leitos de animais e habitats de roedores. Termo-tolerância, parede celular, cápsula, adesão, e produção de enzimas são fatores importantes de virulência do gênero. São José do Rio Preto é a 5ª cidade entre os 100 municípios do estado de São Paulo em de casos de AIDS. Analisou-se morfologicamente e bioquimicamente 48 amostras clínicas e 155 ambientais. Amostras de líquor resultaram em 30 isolados da espécie C. neoformans, 17 de C. gattii e um de C. luteolus. Foram identificados 26 isolados de C.albidus, 22 de C. laurentii, 9 de C. neoformans, 5 de C. gattii e um de C.uniguttulatus nas amostras ambientais. A concentração inibitória mínima para antifúngicos foi determinada para todos os isolados por meio do teste de microdiluição em caldo padronizado pelo NCCLS. Os resultados obtidos mostraram resistência à anfotericina B e itraconazol nas cepas clínicas de C. neoformans e C. gattii, e as cepas de C.albidus e C. laurentii apresentaram resistência a 5-fluorcitosina, itraconazol e anfotericina B / Cryptococcosis is a systemic mycosis that mainly affects the central nervous system, causing meningitis. Caused by inhalation of seedlings of fungi of the genus Cryptococcus sp, C. neoformans affects hosts with immunosuppression cellular, whose largest contingent is represented by individuals with AIDS. The main source of acquiring this yeast is feces of birds, especially pigeons (Columba livia). C. gattii infects individuals apparently immunocompetent, being isolated mainly in species of eucalyptus. C. albidus and C. laurentii appear in cases of meningitis, nosocomial fungemia, pneumonia, lung abscesses and skin infections. C. uniguttulatus is found in the gastrointestinal tract and feces of birds and contaminant of beds of animals and habitats of rodents. Thermo-tolerance, cell wall, capsule, accession, and production of enzymes are important factors in the virulence of the genus. São José do Rio Preto is the 5th city among the 100 cities in the state of São Paulo in cases of AIDS. We analyzed morphologically and biochemically 48 clinical samples and 155 environmental. Liquor samples resulted in 30 isolates of the species C. neoformans, 17 of C. gattii and one of C. luteolus. We identified 26 isolates of C. albidus, 22 of C. laurentii, 9 of C. neoformans, 5 of C. gattii and one of C. uniguttulatus in environmental samples. The minimal inhibitory concentration for antifungal agents was determined for all isolates by means of the test of broth microdilution standardized by the NCCLS. The results obtained showed resistance to amphotericin B and itraconazole in clinical strains of C. neoformans and C. gattii, C. albidus and C. laurentii exhibited resistance to 5-fluorocytosine, itraconazole and amphotericin B

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-03T09:09:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3903455 bytes, checksum: f6a7dc4c49b0d731d6890a0540ffbef3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-03T09:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3903455 bytes, checksum: f6a7dc4c49b0d731d6890a0540ffbef3 (MD5) Previous issue date: 2010-04-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A invasão de plantas exóticas representa uma das maiores ameaças para a biodiversidade do planeta. Muitos países enfrentam situações graves com invasões biológicas promovidas por plantas nativas do Brasil que, depois de introduzidas a partir de seu centro de origem, livres de seus inimigos naturais, passaram a invadir ecossistemas naturais ameaçando a sua integridade e processos ecológicos fundamentais. A utilização das medidas de controle convencionais, utilizadas na agricultura é, nesses casos, contra- indicada ou inviável. O controle biológico clássico pela introdução de inimigos naturais específicos provenientes do centro de origem da planta é a única opção que apresenta exemplos de sucesso duradouro e é reconhecidamente sustentável. Fungos associados a três espécies de plantas invasoras (Rottboellia cochinchinensis capim-camalote, Tradescantia fluminensis trapoeraba branca e Schinus terebinthifolius aroeira) foram estudados no contexto do controle biológico clássico com o propósito de contribuir para a mitigação de invasões nos EUA e Nova Zelândia e os resultados são aqui apresentados. Um hifomiceto foi descoberto atacando R. cochinchinensis no Brasil e sua identidade foi esclarecida como sendo Bipolaris chloridis. Este fungo nunca havia sido antes relatado no Brasil e nem sobre este hospedeiro. Ele se mostrou capaz de atacar outras gramíneas além de R. cochinchinensis, milho e capim de Rhodes (seu hospedeiro originalmente conhecido). As implicações desta descoberta para o controle biológico foram discutidas. Sobre T. fluminensis foram encontrados nove espécies de fungos durante o levantamento: Cercospora apii, Ceratobasidium tradescantiae sp. nov., Colletotrichum falcatum, Kordyana brasiliensis sp.nov., Mycosphaerella tradescantiae sp. nov., Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Septoria paranaensis sp. nov. e Uromyces commelinae. A taxonomia da nova espécie Kordyana brasiliensis foi esclarecida por exames morfológicos e estudos moleculares (com a utilização dos primers NL1 e NL4) e o fungo se mostrou promissor como agente de biocontrole, sendo específico para T. fluminensis (entre 69 espécies testadas de 32 famílias botânicas) e capaz de causar uma doença severa sobre este hospedeiro. Sob condições de infecção natural o fungo apresentou uma incidência de doença na ordem de 70% e causou severidade média de 42% em 200 folhas avaliadas. Os levantamentos da micobiota de S. terebinthifolius, revelaram uma grande diversidade de fungos potencialmente fitopatogênicos. Dentre estes, no presente trabalho, examinou- se com atenção os fungos coletados reconhecidos como pertencentes à família Meliolaceae e também, considerando-se o seu aparente potencialpara o controle biológico,um isolado de Corynespora cassiicola causador de doença severa sobre S. terebinthifolius. Três espécies de fungos causadores de míldio negro (uma doença de pequeno impacto sobre S. terebinthifolius) foram encontradas colonizando S. terebinthifolius em várias regiões do Brasil: Irenopsis schini-terebenthifolii sp. nov, Meliola chilensis e Meliola rhois var. africana. A primeira espécie foi reconhecida como nova e descrita enquanto que as duas demais foram reconhecidas como representando novas associações patógeno-hospedeiro, pois os fungos não eram conhecidos ainda sobre S. terebinthifolius. A morfologia de um hifomiceto associado a manchas e queimas foliares de S. terebinthifolius foi reconhecida como equivalente à dos fungos da espécie C. cassiicola e confirmada por métodos moleculares envolvendo a utilização dos primers ITS1 e ITS4. Além disso, foi realizado um teste de especificidade envolvendo 23 espécies de plantas de diferentes famílias botânicas, inclusive Anacardiaceae, e o patotipo se mostrou especifico a S. terebinthifolius, sendo proposto o seu reconhecimento como C. cassiicola f. sp. schinii e também o seu potencial para utilização como agente de controle biológico para infestações de S. terebinthifolius na Flórida e Havaí (EUA). / Invansions of natural ecosystems by exotic plants represent one of the greatest threats to biodiversity. Many countries face serious problems with such biological invasions involving plants that are native from Brazil. After its having been introduced from their center of origin and free from their natural enemies they invade natural ecosystems and threaten the integrity of ecological processes. The conventional control measures used in agriculture, in ssuch cases, are not viable nor recommended. The classical biological control involving the introduction of specific natural enemies from the center of origin of the plant is the only option that provides examples of success and is widely recognized as the sole sustainable alternative. Fungi associated with three weed species (Rottboellia cochinchinensis - Itchgrass, Tradescantia fluminensis - wandering jew and Schinus terebinthifolius - brazilian pepper tree) were studied in the context of biological control with the aim of contributing to the mitigation of invasions in the U.S., New Zealand and Brazil and the results are presented herein. A hyphomycete was discovered attacking R. cochinchinensis and identified as Bipolaris chloridis. This fungus has never been reported before from Brazil nor on this host. This fungus was able to attack other grasses besides R. cochinchinensis, namely corn and rhodes grass (its original host ). The implications of these finding for biological control were discussed. In T. fluminensis, nine species of fungi were collected during the survey: Cercospora apii, Ceratobasidium tradescantiae sp. nov., Colletotrichum falcatum, Kordyana brasiliensis sp. nov., Mycosphaerella tradescantiae sp. nov., Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Septoria paranaensis sp. nov. and Uromyces commelinae. The taxonomy of the new species Kordyana brasiliensis was clarified by examinations of morphological characters and molecular studies (using the primers NL1 and NL4). This fungus was regarded as showing a high potential for use in biocontrol agent. It was specific to T. fluminensis (among 69 species tested from 32 botanical families) and capable of causing severe disease on this host. Under conditions of natural infection bu this fungus an incidence of 70% and a level of 42% of disease severity was reached. Surveys of the mycoflora S. terebinthifolius showed a great diversity of potentially pathogenic fungi among which are fungi belonging to a poorly known group of ascomycetes causing black mildews, the Meliolaceae. Three species were found on this host: Irenopsis schini- terebenthifolii sp. nov., Meliola chilensis and Meliola rhois var. africana. The first species was described as new whereas the other two were new host-pathogen associations. The potential for practical application in biological control of an isolate of Corynespora cassiicola found causing a severe disease on S. terebinthifolius. was investigated. Its identity was confirmed as C. cassiicola by a combination of morphology studies and molecular methods involving the use of primers ITS1 and ITS4. In addition, we performed a specificity test involving 23 species of plants of different botanical families, including several Anacardiaceae. The isolate from S. terebinthifolius was shown to be host- specific and the new forma specialis C. cassiicola f. sp. schinii was proposed. Its potential for use as biological control agent for infestations of S. terebinthifolius in Florida and Hawaii (USA) was regarded as high.

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Henrique Leonel Lenzi / Banca: Christiane Pienna Soares / Banca: Maria José Soares Mendes Giannini / Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico, agente de doença granulomatosa crônica denominada de paracoccidioidomicose (PCM), com grande variedade de manifestações clínicas, desde formas localizadas até disseminadas evoluindo para letalidade. O fungo tem capacidade de aderir, extravasar e invadir barreiras impostas pelos tecidos do hospedeiro. Em ensaios in vitro verificou-se que P. brasiliensis pode aderir e invadir células epiteliais, aparecendo algumas vezes internalizado dentro de um vacúolo. A identificação do mecanismo pelo qual este fungo adere, invade e sobrevive no interior da célula hospedeira é campo fértil para a descoberta de sua patogênese. Para tanto, a análise de proteínas presentes no microrganismo e nas células do hospedeiro e também os marcadores da via endocítica para co-localizar os microrganismos no interior das mesmas é o objetivo deste estudo. Assim, foi realizada a infecção de células epiteliais A549 e macrófagos AMJ2-C11com P. brasiliensis (Pb18) nos períodos de 3, 5, 8, 24 e 3, 5, 10 e 24h, respectivamente e feitas análises por técnicas de imunofluorescência para as proteínas de junções compactas, junções aderentes, junções tipo fenda e proteínas de ancoramento intracelular, bem como as proteínas da via endocítica. Entres estas, foram ensaiadas a expressão de clatrina, Rab7 e LAMP-1 por imunofluorescência e EEA1, Rab7 e LAMP-1 por imunoblot. As proteínas de junções foram expressas nas células, bem como na parede do fungo. A clatrina foi evidente na célula e aparentemente mais expressa na parede do fungo. Nas células A549 não houve alteração na expressão de Rab7 e LAMP-1, tanto na imunofluorescência quanto no imunoblot, sendo que para EEA1 e Rab5 não foi evidenciada alteração na expressão pela técnica de imunoblot. Rab7 foi expressa nos macrófagos, localizada na periferia das células e também no... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is a thermally dimorphic fungus, the etiologic agent of paracoccidioidomycosis (PCM). PCM is a polymorphic disease manifested by an array of diverse clinical manifestations and varying organ involvement. P. brasiliensis may actively penetrate the mucocutaneous surface and parasitize epithelial cells, thus evading the host defenses and reaching deeper tissues. The ability of this fungus to adhere to and invade non-professional phagocyte cells has been observed. In vitro assays verify that P. brasiliensis can adhere and could appear internalized within vacuole. The identification of the mechanism by which this fungus adheres, invades and survivor inside the host cell is a fertile area for discover their pathogenesis. The aim of this study was analyzed the junctions proteins in the fungus and the host cells, as well as the endocytic markers to colocate the microorganisms inside the cells. Thus, the infection was performed in A549 epithelial cells and macrophages AMJ2-C11 with P. brasiliensis (PB18) for periods of 3, 5, 8, 24 and 3, 5, 10 and 24 h, respectively, and the immunofluorescence analysis was developed for the proteins claudin-1, claudin-4, E-cadherin, conexin 43, talin e vinculin, and the endocytic proteins. The macrophages and the cells A549 have been blemish along anti-clatrin, anti-Rab7 and anti-LAMP-1. The junctions' proteins have been expressed at the cells, as well as on the wall from the fungus. The clathrin was present at the cells and apparently more expressed on the fungus wall. Rab7 and LAMP-1 were not expressed in the cells A549 as demonstrated by the imunofluorescence and the imunoblot. On the contrary Rab7 was expressed in macrophages located at the periphery of the cells and also in the own fungus. The expression of LAMP-1 apparently not presented alteration both at the imunofluorescence and at the imunoblot. The expression of EEA1 was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica e a de maior ocorrência na América Latina, causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis. Apesar dos esforços contínuos de diversos grupos de pesquisa principalmente do Brasil, Colômbia Venezuela e Argentina, a fase ambiental produtora de propágulos infectantes, seu nicho ecológico e outros aspectos fundamentais da biologia deste patógeno ainda representa um enigma. Sabe-se, no entanto, que há alguns indicadores biológicos onde se constata a infecção natural do P. brasiliensis em espécies de tatu Dasypus novemcinctus em áreas endêmicas. Assim, o isolamento sistemático deste patógeno nesta espécie animal tem despertado o interesse em avaliar outras espécies animais cuja distribuição geográfica seja coincidente com a da PCM. O conhecimento de reservatórios naturais de fungos patogênicos e o mapeamento de regiões habitadas pelos fungos são dados fundamentais para elucidar a eco-epidemiologia da PCM. O presente projeto focalizou a detecção ambiental do P. brasiliensis, bem como de outros fungos patogênicos geneticamente relacionados, em animais silvestres pelo emprego de métodos moleculares em amostras de tecido de animais atropelados em beiras de estradas. Sabe-se que esse material é muitas vezes negligenciado, sendo utilizado em estudos de conservação biológica e de parasitologia. Esta abordagem é inédita e útil no estudo da eco-epidemiologia da PCM. Foram avaliados também tatus (D. novemcintus) capturados em regiões geograficamente definidas, visando o isolamento fúngico do P. brasiliensis, bem como de outros fungos patogênicos, por cultura de órgãos, histopatologia e técnicas moleculares. A integração dos dados micológicos, moleculares e a aplicação de técnicas de geoprocessamento permitiu a caracterização da área geográfica dos animais avaliados e contribuiu para um melhor conhecimento sobre a ocorrência do patógeno no hospedeiro animal / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is the most prevalent systemic mycosis of Latin America, caused by fungus Paracoccidioides brasiliensis. Despite the continuous efforts by several research groups mainly from Brazil, Colombia, Venezuela and Argentina, the saprobic form producing infective propagula, its exact niche in nature and other fundamental aspects of the biology of this pathogen still remains enigmatic. It is known however that some biological indicators where there is a natural infection of P. brasiliensis from the nine-banded armadillo Dasypus novemcinctus in an endemic area. Thus, the systematic isolation of this pathogen in this species has increased the necessity in evaluating several wild mammals whose geographical distribution is coincident of PCM. The knowledge about natural reservoirs of pathogenic fungi and mapping landscape of areas inhabited by fungi may be clarified the ecoepidemiology of PCM. This work focused on the environmental detection of P. brasiliensis, as well as other related pathogenic fungi in wild animals, the use of molecular tools in tissue samples from road-killed wild animals. While road-killed animals proved to be usefull both form parasitological and conservative studies, these materials have been negleted in the area of infections disease. This approach is new and has been useful to elucidate PCM ecoepidemiology. It was evaluated armadillos (D. novemcinctus) captured is some restricted areas, such as from Savanna and a County considered to be hyperendemic for PCM, by culture, histopathology and molecular techniques, in order to confirm if P. brasiliensis also occurs in such defined ecological conditions. The use the Geographical Information Systems (GIS), thus contributing to a better understanding about the occurrence of the pathogen in the host animal and the associated biotic and abiotic factors / Orientador: Eduardo Bagagli / Coorientador: Sandra de Moraes Gimenes Bosco / Banca: Hélio Langoni / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Andréa de Faria Fernandes Belone / Banca: Silvio Alencar Marques / Acompanhado de 1 CD-ROM / Doutor

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Orientador no exterior: Joshua Daniel Nosanchuk / Coorientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Carlos Pelleschi Taborda / Banca: Mauro Cintra Giudice / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Maria Aparecida de Resende Stoianoff / Resumo: Dermatófitos são fungos que apresentam a capacidade de invadir os tecidos queratinizados do homem e dos animais, produzindo a dermatofitose. Biofilmes são comunidades estruturadas de microrganismos que se agrupam de maneira organizada a uma superfície ou que se aderem uns aos outros, dentro de uma matriz extracelular que eles mesmos produzem. Pela primeira vez, neste trabalho, foi descrita a formação de biofilmes por isolados clínicos e cepas ATCC de dermatófitos. Também se avaliou a sensibilidade das cepas frente aos antifúngicos convencionais e derivados sintéticos do ácido protocatecuico, determinando sua toxicidade e eficiência, tanto nas formas planctônicas como de biofilme. A identificação molecular dos isolados clínicos mostrou concordância com a identificação convencional. Todas as cepas e isolados foram capazes de formar biofilmes nos quatro meios testados. Trichophyton. rubrum ATCC 28189, ATCC MYA-4438, T. rubrum 143 e Trichophyton. mentagrophytes 66 produziram mais biomassa e matriz extracelular que T. mentagrophytes ATCC 11481 (p<0.05). RPMI 1640, BHI e DMEM estimularam maior produção de biomassa e matriz extracelular que o meio de queratinócitos. Todas as espécies foram capazes de formar biofilmes maduros em 72 h e uma rede de hifas circundadas em vários pontos por uma matriz extracelular foi mostrada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Na microscopia confocal, aparentemente os meios RPMI e DMEM produziram biofilmes mais espessos e o meio BHI, biofilmes mais densos e compactos. As melhores atividades anti-dermatófitos foram expressas pelos protocatecuatos de butila, pentila, hexila, nonila e decila, que exibiram baixa toxicidade para as células HaCat, NHOK e HepG2 nas regiões da concentração inibitória mínima (CIM). Nonila foi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dermatophytes are fungi that have the ability to invade keratinized tissues of human and animals, producing a condition called dermatophytosis. Biofilms are structured microbial communities that are organized by adhering to a surface, as well as to each other via an extracellular polymeric matrix. For the first time, in this work, the biofilm formation by ATCC strains and clinical isolates of dermatophytes was described. Also, the susceptibilities of the strains to conventional antifungal drugs and to the synthetic derivatives of protocatechuic acid were evaluated, determining its toxicity and efficacy. The molecular identification corroborated with the conventional one. All strains were able to form biofilms in the four media tested. Trichophyton. rubrum ATCC 28189, Trichophyton. mentagrophytes 66, and T. rubrum 143 produced more biomass, polysaccharide structures and extracellular matrix than T. mentagrophytes ATCC 11481 (p <0.05). RPMI 1640, BHI and DMEM stimulated increased production of biomass and extracellular matrix when compared to the medium for keratinocytes. All species were able to form mature biofilms in 72 hours. The SEM results showed a coordinated network of hyphae in all directions, surrounded by an extracellular matrix. In confocal microscopy, apparently RPMI and DMEM media produced thicker biofilms, while the BHI produced denser and compact biofilms. The greatest antidermatophytes activities were expressed by butyl, pentyl, hexyl, nonyl and decyl, protocatechuates, which exhibit low toxicity to HaCat, HepG2 and NHOK cells in the regions of minimal inhibitory concentrations (MIC). Nonyl was the compound with improved selectivity index for HaCat and HepG2 cells; for NHOK cells, the most selective compounds were nonyl and hexyl. Fluconazole, griseofulvin... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor