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BATISTA, A. B. Potenciais fungicida e inseticida de proteínas presentes em sementes de Dioclea megacarpa Rolfe. 2009. 125 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-09-30T20:59:28Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_abbatista.pdf: 1701467 bytes, checksum: abfe96b694704dbc9dc0aed6b729f9f6 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-10-01T18:50:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_abbatista.pdf: 1701467 bytes, checksum: abfe96b694704dbc9dc0aed6b729f9f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-01T18:50:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_abbatista.pdf: 1701467 bytes, checksum: abfe96b694704dbc9dc0aed6b729f9f6 (MD5) Previous issue date: 2009 / Dioclea megacarpa Rolfe é usada como sinonímia de D. relexa var. grandiflora, uma espécie pertencente à família Fabaceae (Leguminosae). Estudos prévios, realizados por nosso grupo de pesquisa, demonstraram a presença em suas sementes de proteínas ativas contra fungos fitopatogênicos, dentre esses Aspergillus niger. Assim, o presente trabalho foi proposto no intuito de avaliar a bioatividade de proteínas de sementes de D. megacarpa contra fungos, conduzindo à sua purificação e caracterização parcial, bem como à investigação de seu mecanismo de ação. Outro objetivo deste trabalho foi examinar o potencial inseticida da lectina com especificidade por glucose-manose, isolada de sementes de D. megacarpa (Moreira et al., 1983), contra o bruquídeo do feijão-caupi Callosobruchus maculatus. Para tanto, farinha de sementes foi posta em contato com NaCl 0,15 M (1:5, p/v), seguida de agitação contínua por 3 h, filtração em pano de trama fina, re-extração por 1 h e centrifugação a 11.500 x g, 30 min, 4 oC. O sobrenadante obtido, denominado de extrato total, se mostrou ativo contra A. niger e apresentou várias proteínas bioativas, compreendendo lectina (129,27 UH/mgP, com eritrócitos tripsinizados de coelho), inibidor de tripsina (18,91 mg de tripsina inibida/gF), urease (47,50 U/gF), toxina (DL50 119,60 mgP/Kg de peso corpóreo de camundongo), quitinase (1,66 nKat/mgP) e β-1,3-glucanase (0,55 nKat/mgP). Por outro lado, atividades peroxidásica e proteolítica não foram detectadas. Para purificação da proteína antifúngica, foram realizadas cromatografias em matrizes de Sephadex G-50, Quitina e Resource-Q, essa última acoplada ao sistema de FPLC. A proteína antifúngica purificada de sementes de D. megacarpa, denominada de Dm-PAF, com massa molecular aparente de 67-68 kDa (PAGE-SDS), não mostrou atividades hemaglutinante e quitinásica e apresentou sua seqüência NH2-terminal bloqueada. Dm-PAF, em concentração baixíssima (0,015 µgP/µL), se mostrou capaz de inibir o crescimento das leveduras Saccharomyces cerevisiae e Candida tropicalis, cuja investigação do mecanismo de ação não revelou envolvimento dessa proteína com bombas de H+-ATPase. Em adição, a lectina ligante a glucose-manose, obtida na cromatografia em Sephadex G-50, mostrou potente atividade inseticida contra C. maculatus, interferindo em parâmetros importantes relacionados ao ciclo de vida do inseto. Os dados apresentados mostram as sementes de D. megacarpa como uma rica fonte de proteínas interessantes, possivelmente envolvidas no mecanismo de defesa das plantas. / Dioclea megacarpa Rolfe is the correct synonym for D. relexa var. grandiflora. This species belongs to Fabaceae, the legume family. Previous studies, realized in our research group, showed the presence of active proteins for several phytopathogenic fungi in the seeds of this species, among of them Aspergillus niger. Thus, the present work was proposed with the objective of determining the bioactivity of protein(s) from D.megacarpa seeds against fungi, leading to its/their purification and partial characterization and further investigation of its/their action mechanism. Another approach of this work it was analyze the insecticidal potential of glucose/mannose-specific lectin, isolated from D.megacarpa seeds (Moreira et al., 1983), against the cowpea bruchid Callosobruchus maculatus. For this, seed flour was placed in contact with 0.15 M NaCl (1:5, w/w), followed by stirring for 3 h, filtration through a nylon cloth, re-extraction for 1 h, centrifugation at 11,500 x g, for 30 min, at 4 oC. The supernatant obtained, named total extract, showed antifungal activity against A. niger and presented several bioactive proteins, including lectin (129.27 UH/mgP, using trypsinized rabbit erythrocytes), trypsin inhibitor (18.91 mg de tripsina inibida/gF), urease (47.50 U/gF), toxin (LD50 119.60 mgP/Kg mice body weight ), chitinase (1.66 nKat/mgP) e β-1,3-glucanase (0.55 nKat/mgP). On the other hand, peroxidasic and proteolytic activities were not detected. For purification of antifungal principle, several chromatographies were performed on Sephadex G-50, Chitin and Resource Q, this last connected to an FPLC system. The purified antifungal protein, named Dm-PAF, with apparent molecular mass of 67-68 kDa (SDS-PAGE), did not show any haemagglutinating or chitinolytic activity and presented its NH2-terminal sequence blocked. Dm-PAF, at a very low concentration (0.015 µgP/µL), it was able to inhibit the growth of Saccharomyces cerevisiae and Candida tropicalis yeasts. The investigation of the antifungal action mechanism excluded the possibility of interaction between Dm-PAF and H+-ATPase pumps. In addition, the glucose/mannose-specific lectin, obtained from Sephadex G-50 column, exhibited a potent insecticidal activity against C. maculatus, interfering in important parameters related to life cycle of this insect. These data show to be the D. megacarpa seeds a rich source of biologically interesting proteins, possibly involved in the defense mechanism of plants.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. / Made available in DSpace on 2012-10-17T10:47:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O mandi-amarelo, Pimelodus maculatus, é uma espécie que vem despertando interesse na piscicultura, já que, exemplares selvagens estão apresentando boa adaptação às condições de cativeiro. Os trabalhos foram realizados na Estação de Piscicultura de São Carlos, SC, com o objetivo de acompanhar o desenvolvimento embrionário, estágios larvais iniciais e a utilização de diferentes dietas alimentares nos primeiros dias de vida do mandi-amarelo. Para o estudo do desenvolvimento inicial, utilizou-se um sistema de incubação com temperatura média de 23,1±0,5°C. A eclosão das larvas ocorreu 21,3 horas após a fertilização. As larvas recém eclodidas apresentaram comprimento total de 2,56±0,13mm. Decorridas 41,1 horas da eclosão, as larvas apresentaram natação horizontal e boca aberta, observando-se a ocorrência de canibalismo. Para avaliar diferentes dietas, utilizou-se uma densidade de 15 pós-larvas/L, estocadas em cubas de três litros. A alimentação foi composta de zooplâncton silvestre nas proporções de 300 organismos/pós-larva/dia (T1); 600 organismos/pós-larva/dia (T2); 900 organismos/pós-larva/dia (T3), ou 9 náuplios de artemia/pós-larva/dia (T4) ou ainda, ração granulada entre 150 e 250µm (>50% PB) (T5). Ao final de cinco dias, observou-se que a utilização de artemia proporcionou os maiores valores de sobrevivência (39,3%) (P<0,05), mostrando ser o melhor manejo para alimentação do mandi-amarelo.

Approved for entry into archive by Érica Barros(ericabarros@ufc.br) on 2012-11-12T22:46:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_adbatista.pdf: 1701467 bytes, checksum: abfe96b694704dbc9dc0aed6b729f9f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-12T22:46:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_adbatista.pdf: 1701467 bytes, checksum: abfe96b694704dbc9dc0aed6b729f9f6 (MD5) / Dioclea megacarpa Rolfe is the correct synonym for D. relexa var. grandiflora. This species belongs to Fabaceae, the legume family. Previous studies, realized in our research group, showed the presence of active proteins for several phytopathogenic fungi in the seeds of this species, among of them Aspergillus niger. Thus, the present work was proposed with the objective of determining the bioactivity of protein(s) from D.megacarpa seeds against fungi, leading to its/their purification and partial characterization and further investigation of its/their action mechanism. Another approach of this work it was analyze the insecticidal potential of glucose/mannose-specific lectin, isolated from D.megacarpa seeds (Moreira et al., 1983), against the cowpea bruchid Callosobruchus maculatus. For this, seed flour was placed in contact with 0.15 M NaCl (1:5, w/w), followed by stirring for 3 h, filtration through a nylon cloth, re-extraction for 1 h, centrifugation at 11,500 x g, for 30 min, at 4 oC. The supernatant obtained, named total extract, showed antifungal activity against A. niger and presented several bioactive proteins, including lectin (129.27 UH/mgP, using trypsinized rabbit erythrocytes), trypsin inhibitor (18.91 mg de tripsina inibida/gF), urease (47.50 U/gF), toxin (LD50 119.60 mgP/Kg mice body weight ), chitinase (1.66 nKat/mgP) e β-1,3-glucanase (0.55 nKat/mgP). On the other hand, peroxidasic and proteolytic activities were not detected. For purification of antifungal principle, several chromatographies were performed on Sephadex G-50, Chitin and Resource Q, this last connected to an FPLC system. The purified antifungal protein, named Dm-PAF, with apparent molecular mass of 67-68 kDa (SDS-PAGE), did not show any haemagglutinating or chitinolytic activity and presented its NH2-terminal sequence blocked. Dm-PAF, at a very low concentration (0.015 µgP/µL), it was able to inhibit the growth of Saccharomyces cerevisiae and Candida tropicalis yeasts. The investigation of the antifungal action mechanism excluded the possibility of interaction between Dm-PAF and H+-ATPase pumps. In addition, the glucose/mannose-specific lectin, obtained from Sephadex G-50 column, exhibited a potent insecticidal activity against C. maculatus, interfering in important parameters related to life cycle of this insect. These data show to be the D. megacarpa seeds a rich source of biologically interesting proteins, possibly involved in the defense mechanism of plants / Dioclea megacarpa Rolfe é usada como sinonímia de D. relexa var. grandiflora, uma espécie pertencente à família Fabaceae (Leguminosae). Estudos prévios, realizados por nosso grupo de pesquisa, demonstraram a presença em suas sementes de proteínas ativas contra fungos fitopatogênicos, dentre esses Aspergillus niger. Assim, o presente trabalho foi proposto no intuito de avaliar a bioatividade de proteínas de sementes de D. megacarpa contra fungos, conduzindo à sua purificação e caracterização parcial, bem como à investigação de seu mecanismo de ação. Outro objetivo deste trabalho foi examinar o potencial inseticida da lectina com especificidade por glucose-manose, isolada de sementes de D. megacarpa (Moreira et al., 1983), contra o bruquídeo do feijão-caupi Callosobruchus maculatus. Para tanto, farinha de sementes foi posta em contato com NaCl 0,15 M (1:5, p/v), seguida de agitação contínua por 3 h, filtração em pano de trama fina, re-extração por 1 h e centrifugação a 11.500 x g, 30 min, 4 oC. O sobrenadante obtido, denominado de extrato total, se mostrou ativo contra A. niger e apresentou várias proteínas bioativas, compreendendo lectina (129,27 UH/mgP, com eritrócitos tripsinizados de coelho), inibidor de tripsina (18,91 mg de tripsina inibida/gF), urease (47,50 U/gF), toxina (DL50 119,60 mgP/Kg de peso corpóreo de camundongo), quitinase (1,66 nKat/mgP) e β-1,3-glucanase (0,55 nKat/mgP). Por outro lado, atividades peroxidásica e proteolítica não foram detectadas. Para purificação da proteína antifúngica, foram realizadas cromatografias em matrizes de Sephadex G-50, Quitina e Resource-Q, essa última acoplada ao sistema de FPLC. A proteína antifúngica purificada de sementes de D. megacarpa, denominada de Dm-PAF, com massa molecular aparente de 67-68 kDa (PAGE-SDS), não mostrou atividades hemaglutinante e quitinásica e apresentou sua seqüência NH2-terminal bloqueada. Dm-PAF, em concentração baixíssima (0,015 µgP/µL), se mostrou capaz de inibir o crescimento das leveduras Saccharomyces cerevisiae e Candida tropicalis, cuja investigação do mecanismo de ação não revelou envolvimento dessa proteína com bombas de H+-ATPase. Em adição, a lectina ligante a glucose-manose, obtida na cromatografia em Sephadex G-50, mostrou potente atividade inseticida contra C. maculatus, interferindo em parâmetros importantes relacionados ao ciclo de vida do inseto. Os dados apresentados mostram as sementes de D. megacarpa como uma rica fonte de proteínas interessantes, possivelmente envolvidas no mecanismo de defesa das plantas

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FabianoMT.pdf: 637738 bytes, checksum: 985b4ebc65a8511464495683b08649e2 (MD5) Previous issue date: 2006-06-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Globulins fractions of legume seeds of Crotalaria pallida, Erytrina veluntina and Enterolobium contortisiliquum were isolated and submitted to assays against serine, cysteine and aspartic proteinases, as also amylase present in midgut of C. maculatus and Z. subfasciatus. Hemagglutination assays indicated presence of a lectin in E. veluntina globulin fractions. This lectin had affinity to human erythrocytes type A, B and O. Vicilins were purified by chromatography on Sephacryl S-300 followed of a chromatography on Sephacryl S-200, which was calibrated using protein markers. Vicilins from C. pallida (CpV) and E. veluntina (EvV) seeds had a molecular mass of 124.6 kDa and E. contortisiliquum a molecular mass of 151kDa. Eletrophoresis in presence of SDS showed that CpV was constituted by four subunities with apparent molecular mass of 66, 63, 57 and 45 kDa, EvV with three subunities with apparent molecular mass of 45kDa and EcV four subunities, two with 37.1 kDa and two with 25.8 kDa. Non denaturantig eletrophoresis displayed single bands with high homogeneity, where CpV had lower acidic behavior. All vicilins are glycoproteins with carbohydrate contents at 1 to1.5%. Bioassays were done to detect deleterious effects of vicilins against C. maculatus and Z. subfasciatus larvae. CpV, EvV and EcV exhibited a WD50 of 0.28, 0.19 and 1.03%; LD50 0.2, 0.26, and 1.11% respectively to C. maculatus. The dose responses of CpV, EvV and EcV to Z. subfasciatus were: WD50 of 0.12, 0.14, 0.65% and LD50 of 0.09, 0.1, and 0.43% respectively. The mechanism of action of these proteins to bruchids should be based on their properties of bind to chitin present in mid gut of larvae associated with the low digestibility of vicilin. In assays against phytopatogenous fungus, only EcV was capable of inhibit F. solani growth at concentrations of 10 and 20 ?g and its action mechanism should be also based in the affinity of EcV to chitin present in the fungi wall / Sementes de leguminosas das esp?cies Crotalaria pallida, Erythrina veluntina e Enterolobium contortisiliquum tiveram suas fra??es globul?nicas isoladas. As globulinas n?o apresentaram atividade de inibidores para as enzimas tipo ser?nicas, ciste?nicas, asp?rticas e para as amilases de homogenatos intestinais de larvas de Callosobruchus maculatus e Zabrotes subfasciatus. Os testes de atividades hemaglutinantes indicaram que apenas a globulina de Erytrina veluntina apresentou contamina??o com lectinas com afinidade para eritr?citos humanos do tipo A, B e O. As vicilinas foram ent?o purificadas usando-se duas cromatografias de filtra??o em gel, Sephacryl S-300 seguido de uma Sephacryl S-200 calibrada com marcadores de massa molecular conhecidos. Vicilinas de C. pallida (CpV) e E. veluntina (EvV) apresentaram massa molecular de 124,6 kDa e a de E. contortisiliquum (EcV) com massa molecular de 151 kDa..Eletroforese desnaturante mostrou que CpV possui 4 subunidades de massas moleculares aparentes de 66, 63, 57, 45 kDa; a de EvV com duas subunidades de massa molecular aparente de 66,2 e 63,8 kDa e EcV tr?s subunidades de massa molecular aparente de 54,9 kDa. Essas prote?nas mostraram ser homog?neas por eletroforese nativa com bandas ?nicas, onde CpV revelou ser a prote?na menos ?cida. Todas as vicilinas s?o glicoprote?nas,com conte?do de carboidrato variando de 1 a 1,5%. Bioensaios foram feitos para determinar o efeito delet?rio das vicilinas para C. maculatus e Z. subfasciatus. Cpv, EvV e EcV apresentaram WD50 de 0,28, 0,19 e 1,03%; LD50 de 0,2, 0,26 e 1,11% para C. maculatus, respectivamente . As curvas dose resposta para Cpv, EvV e EcV para Z. subfasciatus apresentou WD50 de 0,12, 0,14 e 0,65%; e LD50 de 0,09, 0,10 e 0,43%, respectivamente. Ensaios digest?rios utilizando se enzimas dos intestinos m?dio de bruqu?deos mostraram que as vicilinas s?o resistentes ? prote?lise, dentre elas destaca-se EcV, que mesmo depois de incubadas por 24 horas n?o foram hidrolisados pelas enzimas de de C. maculatus. Nos ensaios para fungos fitopat?genos apenas EcV foi capaz de inibir a germina??o de esporos de Fusarium solani ? concentra??o de 10 e 20 ?g. O mecanismo de a??o proposto para as vicilinas foi baseado na propriedade que essas prote?nas tiveram de se ligarem a quitina ou estruturas quitinosas presentes nos intestinos m?dios das larvas associado ? baixa digestibilidade destas prote?nas para enzimas dos insetos

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Dioclea megacarpa Rolfe is the correct synonym for D. relexa var. grandiflora. This species belongs to Fabaceae, the legume family. Previous studies, realized in our research group, showed the presence of active proteins for several phytopathogenic fungi in the seeds of this species, among of them Aspergillus niger. Thus, the present work was proposed with the objective of determining the bioactivity of protein(s) from D.megacarpa seeds against fungi, leading to its/their purification and partial characterization and further investigation of its/their action mechanism. Another approach of this work it was analyze the insecticidal potential of glucose/mannose-specific lectin, isolated from D.megacarpa seeds (Moreira et al., 1983), against the cowpea bruchid Callosobruchus maculatus. For this, seed flour was placed in contact with 0.15 M NaCl (1:5, w/w), followed by stirring for 3 h, filtration through a nylon cloth, re-extraction for 1 h, centrifugation at 11,500 x g, for 30 min, at 4 oC. The supernatant obtained, named total extract, showed antifungal activity against A. niger and presented several bioactive proteins, including lectin (129.27 UH/mgP, using trypsinized rabbit erythrocytes), trypsin inhibitor (18.91 mg de tripsina inibida/gF), urease (47.50 U/gF), toxin (LD50 119.60 mgP/Kg mice body weight ), chitinase (1.66 nKat/mgP) e &#946;-1,3-glucanase (0.55 nKat/mgP). On the other hand, peroxidasic and proteolytic activities were not detected. For purification of antifungal principle, several chromatographies were performed on Sephadex G-50, Chitin and Resource Q, this last connected to an FPLC system. The purified antifungal protein, named Dm-PAF, with apparent molecular mass of 67-68 kDa (SDS-PAGE), did not show any haemagglutinating or chitinolytic activity and presented its NH2-terminal sequence blocked. Dm-PAF, at a very low concentration (0.015 ÂgP/ÂL), it was able to inhibit the growth of Saccharomyces cerevisiae and Candida tropicalis yeasts. The investigation of the antifungal action mechanism excluded the possibility of interaction between Dm-PAF and H+-ATPase pumps. In addition, the glucose/mannose-specific lectin, obtained from Sephadex G-50 column, exhibited a potent insecticidal activity against C. maculatus, interfering in important parameters related to life cycle of this insect. These data show to be the D. megacarpa seeds a rich source of biologically interesting proteins, possibly involved in the defense mechanism of plants / Dioclea megacarpa Rolfe à usada como sinonÃmia de D. relexa var. grandiflora, uma espÃcie pertencente à famÃlia Fabaceae (Leguminosae). Estudos prÃvios, realizados por nosso grupo de pesquisa, demonstraram a presenÃa em suas sementes de proteÃnas ativas contra fungos fitopatogÃnicos, dentre esses Aspergillus niger. Assim, o presente trabalho foi proposto no intuito de avaliar a bioatividade de proteÃnas de sementes de D. megacarpa contra fungos, conduzindo à sua purificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial, bem como à investigaÃÃo de seu mecanismo de aÃÃo. Outro objetivo deste trabalho foi examinar o potencial inseticida da lectina com especificidade por glucose-manose, isolada de sementes de D. megacarpa (Moreira et al., 1983), contra o bruquÃdeo do feijÃo-caupi Callosobruchus maculatus. Para tanto, farinha de sementes foi posta em contato com NaCl 0,15 M (1:5, p/v), seguida de agitaÃÃo contÃnua por 3 h, filtraÃÃo em pano de trama fina, re-extraÃÃo por 1 h e centrifugaÃÃo a 11.500 x g, 30 min, 4 oC. O sobrenadante obtido, denominado de extrato total, se mostrou ativo contra A. niger e apresentou vÃrias proteÃnas bioativas, compreendendo lectina (129,27 UH/mgP, com eritrÃcitos tripsinizados de coelho), inibidor de tripsina (18,91 mg de tripsina inibida/gF), urease (47,50 U/gF), toxina (DL50 119,60 mgP/Kg de peso corpÃreo de camundongo), quitinase (1,66 nKat/mgP) e &#946;-1,3-glucanase (0,55 nKat/mgP). Por outro lado, atividades peroxidÃsica e proteolÃtica nÃo foram detectadas. Para purificaÃÃo da proteÃna antifÃngica, foram realizadas cromatografias em matrizes de Sephadex G-50, Quitina e Resource-Q, essa Ãltima acoplada ao sistema de FPLC. A proteÃna antifÃngica purificada de sementes de D. megacarpa, denominada de Dm-PAF, com massa molecular aparente de 67-68 kDa (PAGE-SDS), nÃo mostrou atividades hemaglutinante e quitinÃsica e apresentou sua seqÃÃncia NH2-terminal bloqueada. Dm-PAF, em concentraÃÃo baixÃssima (0,015 ÂgP/ÂL), se mostrou capaz de inibir o crescimento das leveduras Saccharomyces cerevisiae e Candida tropicalis, cuja investigaÃÃo do mecanismo de aÃÃo nÃo revelou envolvimento dessa proteÃna com bombas de H+-ATPase. Em adiÃÃo, a lectina ligante a glucose-manose, obtida na cromatografia em Sephadex G-50, mostrou potente atividade inseticida contra C. maculatus, interferindo em parÃmetros importantes relacionados ao ciclo de vida do inseto. Os dados apresentados mostram as sementes de D. megacarpa como uma rica fonte de proteÃnas interessantes, possivelmente envolvidas no mecanismo de defesa das plantas

Orientador: Elizabeth Romagosa / Coorientador: George Shigueki Yasui / Banca: José Augusto Senhorini / Banca: Gisele Cristiane de Melo Dias / Banca: Paulo Sergio Monzani / Banca: Sergio Ricardo Batlouni / Resumo: Nos últimos anos, Pimelodus maculatus vem sendo utilizado como espécie modelo para o desenvolvimento de técnicas de biotecnologia em Siluriformes. Neste estudo foram abordados aspectos da micromanipulação de embriões e obtenção de espermatozoides de P. maculatus. Assim, o objetivo do artigo 1 foi identificar e rastrear a rota migratória das Células Germinativa Primordiais (PGCs) em P. maculatus. Inicialmente, foram testadas soluções para incubação de embriões decorionados, e a solução de Characin apresentou resultados satisfatórios. Para identificar as PGCs, os embriões decorionados foram microinjetados com mRNA 3'UTR GFP-nos1, e o desenvolvimento foi monitorado em estereomicroscópio de fluorescência. Inicialmente, as PGCs foram visualizadas no estágio 6-10 somitos na região medial do embrião. Posteriormente, as PGCs migraram gradativamente na direção anteroposterior e, no estágio 20-24 somitos, localizaram-se próximo à extremidade posterior da região de extensão do vitelo. Nas larvas recém-eclodidas, as PGCs foram encontradas nas cristas genitais. No artigo 2, foi estabelecida uma metodologia não letal para obtenção de espermatozoides de P. maculatus, e também descritos aspectos da morfologia dos espermatozoides e da histologia dos testículos. No experimento 1, avaliamos os parâmetros espermáticos de amostras obtidas de peixes submetidos a diferentes protocolos de indução: 1) Solução Fisiológica Salina (controle), 2) Extrato Bruto de Hipófise de Carpa (CCPE) 10 mg kg-1 e 3) ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

The critical swimming speed (Ucrit) of rainbow trout parr (Oncorhynchus mykiss) and three life stages of Galaxias maculatus, larval (whitebait), postlarval inanga and adult inanga, were tested at temperatures from 5oC to 25oC. All fish were swum at their acclimation temperature under normoxic conditions to determine the optimal aerobic exercise temperature. To determine whether acclimation affected swimming ability, trout parr acclimated to either 10oC or 20oC were swum at 20oC and 10oC, respectively. The potential effect of mild hypoxia (75% saturation) on trout parr and whitebait was also examined at 10oC, 15oC and 20oC, and also tested separately and in combination were the effects of mild hypoxia and severe anaemia on the prolonged swimming ability of trout smolts at temperatures from 10oC to 20oC. For all trout experiments, blood samples were taken from non-exercised and exercised fish by acute caudal venepuncture to determine haematological responses to both acclimation and exercise. Under normoxic conditions, Ucrit max for trout parr (7.0 0.5 cm fork length) was calculated to be 5.8 body lengths per second (BL s-1) at 15.1oC, but declined at lower and higher temperatures. This result implies that swimming performance was limited by temperature below 15oC, whereas performance at higher temperatures was limited by oxygen availability. In support of this hypothesis, mild hypoxia (75% saturation) had no effect at 10oC or 15oC but caused a significant reduction in Ucrit at 20oC. However, fish acclimated at 20oC showed an adaptive elevation in oxygen carrying capacity due to an increase in mean erythrocyte volume and haemoglobin content. Furthermore, acclimation to 20oC improved warm water swimming performance. Trout parr acclimated to 10oC performed significantly worse than fish acclimated to 20oC when swum at 20oC. However, trout parr acclimated to 20oC performed as well as fish acclimated to 10oC when swum at 10oC. Following exercise, haematocrit was elevated under both normoxic and hypoxic conditions. However, the primary cause of this apparent increase in oxygen carrying capacity was splenic release of erythrocytes under normoxic conditions, whereas stress-induced erythrocytic swelling contributed to the observed increase in hypoxia. This contrasting response was most pronounced at 10oC. Larval whitebait (4.7 - 5.0 cm total length (TL)) also showed a temperature dependence of prolonged swimming ability with Ucrit max calculated to be 5.1 BL s-1 at 17.7oC. Hypoxia significantly reduced Ucrit at 15oC and 20oC, lowering the optimal aerobic temperature to 13.9oC and reducing Ucrit to 4.2 BL s-1. Mild hypoxia therefore had a more pronounced impact on inanga whitebait than trout. Postlarval inanga (3.9 - 4.0 cm TL) performed poorly at higher temperatures with Ucrit max of 5.6 BL s-1 at 9.4oC indicating an ontogenetic change in swimming ability, possibly resulting from a developmental shift in red muscle kinetics or a greater dependence on anaerobic muscle. Adult inanga (5.5 - 6.8 cm TL) prolonged swimming ability showed similar temperature dependence to that of inanga whitebait but lower relative swimming speeds due to their larger size. The dramatic decline in performance exhibited by juveniles at warmer temperatures was not apparent in adults. Ucrit max for adults was 4.0 BL s-1 at 18.3oC. The critical swimming speed of trout smolts, subjected to mild hypoxia (6.8 mg

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aquicultura. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:28:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 225333.pdf: 775126 bytes, checksum: a58cda22be52e988ed7bfe91cef2e614 (MD5) / O transporte de alevinos de dourado, Salminus brasiliensis, e de mandi, Pimelodus maculatus, em três tempos de transporte (4, 8 e 12 horas) e três densidades de carga (5, 10 e 15 g L-1 e 6, 12 e 18 g L-1 para S. brasiliensis e P. maculatus, respectivamente),foi avaliado, através do estresse, representado pelos níveis de cortisol tecidual, quantificado através do método ELISA no início e ao final de cada tratamento. As variáveis de qualidade de água, analisadas no início e no final do experimento, permaneceram dentro das faixas recomendadas para a manutenção de peixes tropicais, destacando-se a elevação da condutividade elétrica da água à medida que o tempo e a densidade aumentaram. Ao final do experimento constatou-se que o transporte estressou os peixes, porém, a influência do aumento da densidade e do maior tempo de transporte não foi suficiente para resultar em mortalidade nos alevinos. Os resultados obtidos demonstraram que a resposta primária ao estresse dessas espécies, quando submetidas a tempos de transporte relativamente curtos, tende a seguir o padrão comum a qualquer outro estressor agudo. A ausência de mortalidade e as boas condições de qualidade de água ao final do experimento, sugerem que os tempos de transporte e densidades de carga, que podem comprometer a sobrevivência dos alevinos dessas espécies estão acima dos níveis testados.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4875_1.pdf: 358311 bytes, checksum: cfada42988282675ba62ef4d948688d0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Uma enzima do tipo tripsina foi parcialmente purificada do intestino e cecos pilóricos do saramunete (Pseudupeneus maculatus). Para isto foi utilizado um método simples de quatro etapas (tratamento térmico, precipitação por sulfato de amônio, diálise e cromatografia em gel de filtração Sephadex G-75). As enzimas do intestino e cecos pilóricos tiveram os coeficientes de purificação de 96 vezes e 57.7 vezes purificadas, respectivamente, de acordo com esses procedimentos, e os rendimentos foram de 68.1% e 26.1%, respectivamente. As proteínas coletadas da cromatografia em gel de filtração Sephadex G-75 apresentaram uma única banda em SDS-PAGE, com um peso molecular de 24.5 kDa e foram hábeis para hidrolisar caseína. Ambas as enzimas apresentaram um pH ótimo idêntico de 9.0 e temperatura ótima de 55oC. Perderam metade de sua atividade quando incubadas nesta temperatura por 30 min. O Km para as enzimas do intestino e dos cecos pilóricos foram 3.23 ± 0.04 mM (n =7) e 1.86 ± 0.26 mM (n = 8), respectivamente. Esta diferença estatisticamente significativa no Km foi a única discrepância entre as enzimas em estudo. Finalmente, essas atividades enzimáticas foram inibidas pelos seguintes íons em ordem decrescente: Al3+>Zn2+>Hg2+=Cu2+> Cd2+. Os efeitos do Ca2+, Mg2+ , Mn2+, Ba2+, K+1, Li+1 e Co2+ foram estatisticamente significantes entre as enzimas do intestino e cecos pilóricos