Orientadora : Profa. Dra. Enilze Maria de Souza Fonseca Ribeiro / Co-Orientador: Prof. Dr. Iglenir João Cavalli / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/02/2011 / Bibliografia: fls.72-87 / Resumo: Em todo o mundo mais de um milhão de mulheres são diagnosticadas com câncer de mama por ano, e 410.000 vão a óbito em decorrência desta doença, representando 14% dos óbitos de mulheres por câncer. Análises de perda de heterozigose (LOH) em tumores mamários esporádicos têm indicado perdas alélicas frequentes nos locos 17q21 e 3p14, onde estão localizados os genes BRCA1 e FHIT, respectivamente. A redução nos níveis de expressão destes genes também tem sido descrita, e está associada a parâmetros de pior prognóstico no câncer de mama. Embora algumas interações dos produtos destes genes sejam conhecidas, são necessários mais estudos que avaliem a relação entre essas interações nos níveis genômico e de expressão. Com o objetivo de caracterizar a expressão dos genes BRCA1 e FHIT e sua relação com a presença ou ausência de LOH, parâmetros histopatológicos e de evolução clínica, foram avaliadas 47 pacientes portadoras de tumores mamários esporádicos com perfil de LOH estabelecido. As médias da expressão gênica relativa foram determinadas através de qRT-PCR utilizando o método do Cq comparativo. O gene FHIT apresentou média de expressão (0,0299+0,0377, n = 44) aproximadamente três vezes maior do que a do gene BRCA1 (0,0099+0,0054, n=35) ( t’= 3,428 > tc = 2,027). As médias de expressão dos genes apresentaram correlação significativa (r=0,65; p<0,0001). As comparações entre as médias de expressão de BRCA1 e FHIT e os grupos de presença ou ausência de LOH não apresentaram diferenças estatisticamente significativas. De maneira geral, as comparações entre as médias de expressão dos genes e os parâmetros histopatológicos e de evolução clinica não apresentaram diferenças significativas, exceto para o grupo de presença de linfonodos metastáticos, que apresentou média de expressão do BRCA1 menor em relação ao grupo de ausência (t'=2,33 > tc=2,13). Estes dados sugerem uma relação entre os genes que, conforme descrito na literatura, desempenham uma função importante nos processos de gênese e progressão tumoral. Devido as suas conhecidas atuações na regulação do reparo de danos no DNA e no controle da apoptose, alterações na expressão destes genes têm implicações nos parâmetros de pior prognóstico nos cânceres mamários. A regulação dos promotores através de metilação e/ou da ligação de fatores de transcrição e a possível contaminação das amostras com células não tumorais adjacentes podem explicar a ausência de correspondência entre LOH e a expressão gênica. / Abstract: Worldwide over one million of women are diagnosed with breast cancer each year and 410,000 will die due to this disease. This represents 14% of female deaths from cancer. Analysis of loss of heterozygosity (LOH) in sporadic breast tumors have shown frequent allelic losses at loci 17q21 and 3p14, where the BRCA1 and FHIT genes are located, respectively. Lower levels of protein expression of these genes have also been described, in association with poor prognosis parameters in these tumors. Although some interactions of the products of these genes are known, further studies are necessary to assess the correlation among these interactions at the genomic, mRNA and protein levels. To characterize the mRNA expression of BRCA1 and FHIT and their correlation with the presence or absence of LOH, histopathological parameters and clinical outcome, we evaluated 47 sporadic breast cancer patients with an established LOH profile. The relative gene expression was determined by qRT-PCR using the Cq comparative method. The gene expression levels of both genes were significantly correlated (r=0.65, p<0.0001; FHIT - 0,0299+0,0377, n = 44; BRCA1 - 0,0099+0,0054, n=35). However, the comparisons of their expression with the presence or absence of LOH was not statistically significant. The comparisons of gene expression with the histopathopatological parameters and clinical outcome were also not significantly different, except for the group of patients with lymph node metastasis, which presented lower expression levels of BRCA1 in comparison to the patients from the lymph node negative group (t'=2.33 > tc=2.13). These data suggest a correlation among the genes and support the important role that they play in the processes of genesis and tumor progression. Due to their function in the regulation of DNA damage repair and cell death, changes in their expression directly affect breast cancer prognosis. The regulation of the promoter of the genes by methylation and/or binding of transcription factors, and the possible contamination of samples with adjacent non-tumor cells, may explain the absence of correlation between LOH and gene expression.

Orientador: Gilberto Uemura / Banca: José Ricardo Paciência Rodrigues / Banca: Helena Cristina da Silva / Resumo: O câncer de mama é um problema de saúde pública, com 49.470 casos em 2005 no Brasil. A mamografia é o método de escolha para rastreamento e diagnóstico precoce do câncer de mama. O sistema BI RADS veio tentar organizar e padronizar os laudos mamográficos. O VPP do Bl-RADS IV varia de 2 a 90% e da categoria V > 90%. Objetivos: avaliar as principais características das lesões mamográficas suspeitas e calcular o VPP da categoria IV e V. Sujeitos e métodos: foram estudados 309 laudos mamográficos de Bl-RADS IV e V e correlacionados com seus resultados de histopatológicos. A análise estatística foi o teste diagnóstico do VPP. Resultados: idade média 54 anos, mama esquerda acometida em 165 (53,4%) pacientes e mama direita em 144 (46,6%) pacientes, BI RADS IV 265 (85,8%), Bl-RADS V 44 (14,2%), lesões benignas 163 (52,8%), lesões proliferativas de risco 48 (15,5%), lesões malignas 98 (31,7%). Os principais achados mamográficos na categoria IV foram as microcalcificações 163 (61,5%) e na categoria V foram os nódulos em 22 (50,0%). A modalidade de biopsia mais usada na categoria IV foi o agulhamento mamário em 188 (70,9%) e na categoria V foi à biopsia per cutânea em 16 (36,4%). O carcinoma ductal infiltrante foi o tipo histológico mais freqüente na categoria IV em 45 (78,9%) e na categoria V em 35 (85,4%) pacientes. O VPP para a categoria IV foi de 39,2% e da categoria V de 95,5%. Conclusão: Concluímos que os principais achados mamográficos na categoria IV foram as microcalcificações, com VPP desta categoria de 39,2%; na categoria V foram os nódulos os principais achados mamográficos, com VPP de 95,5%, valor este que confirma esta categoria como alta probabilidade de malignidade. / Abstract: Breast cancer is a serious world health problem. The mammography is the better method for the screening of earlier breast cancer. The Bl-RADS system was introduced to standardize the report results. Bl-RADS IV has a Positive Predictive Value (PPV) ranged from 2 to 90% and over 90% to category V. Objectives: to evaluate the principal characteristics of the suspicious mammographic lesions and calculate PPV of the Bl-RADS category IV and V. Subjects and methods: it was evaluated 309 reports of mammographic abnormalities classified as Bl-RADS IV and V; and their correlations with biopsies results. Resulted: medium age was 54 years, the lesions occurred in 165 left-sided breast (53.4%) and in 144 right-sided breast (46.6%). Bl-RADS IV pattern was identified in 265 (85.8%) reports and BI-RADS V in 44 (14.2%). Benign lesions were found in 163 reports (52.8%), proliferative risk lesions were found in 48 (15.5%), malign lesions were found in 98 (31.7%). The principal mammographic lesion was the microcalcification in category IV and nodules were in category V. The most used procedure for diagnosis was core biopsy in 204 patients (66%). The invasive ductal carcinoma was the predominant histological type in malignant breast tumors. PPV of 39.2% was observed for BI-RADS IV and for BI-RÃDS V was 95.5%. Conclusion: the principal mammographic pattern lesion in the Bl-RADS IV was the microcalcification, with PPV of 39.2% and the nodules were the principal mammographic pattern lesions in the BI-RADS V with PPV of 95.5%. It confirms the high probability of malignancy in BI-RADS V category. / Mestre

Resumo: O câncer de mama acomete muitas mulheres em todo o mundo e as metástases são a principal causa de morte. Conhecimentos acerca do comportamento biológico são úteis para aprimorar a abordagem, principalmente terapêutica. Os perfis histológico e imuno-histoquímico podem nos permitir melhor compreensão dos fenômenos que determinam a evolução da doença. Objetivo: Comparar lesões palpáveis e não palpáveis para determinar agressividade biológica, baseado nos parâmetros histopatológicos e imuno-histoquímicos. Metodologia: Foram estudados 296 (duzentos e noventa e seis) casos de câncer de mama, confirmados pela histopatologia, separados em dois grupos: Grupo 1: Lesões não palpáveis, detectadas exclusivamente por mamografia (microcalcificações, nódulo ou distorção arquitetural) ou por achado incidental e Grupo 2: Lesões palpáveis (nódulo, massa ou condensação), em estudo retrospectivo, analítico e horizontal. Foram avaliados critérios histopatológicos (Grau Nuclear, Formação Tubular e Índice Mitótico) e imuno-histoquímicos (Receptores de Estrogênio, Receptores de Progesterona, Ki67, p53 e c-erbB-2) de agressividade, comparando-se os dois grupos, com tratamento estatístico (índice de significância p<0,05). Resultados: Avaliados os dois grupos indistintamente, observou-se que a maior expressão dos Receptores Hormonais (RE e RP) esteve relacionada com Grau Nuclear, Formação Tubular e Índice Mitótico baixos. Super-expressão de Ki67 foi prevalente nos graus histopatológicos mais elevados. c-erbB-2 e p53, embora não estatisticamente significativo, apresentaram a mesma tendência do Ki67 em relação às variáveis histopatológicas. O Grupo 1 apresentou menor incidência de Grau Nuclear, Formação Tubular e Índice Mitótico elevados que o Grupo 2. O Grupo 1 apresentou maior expressão dos Receptores Hormonais (p<0,05), enquanto o Grupo 2 apresentou maior expressão de Ki67(p<0,05) / Abstract: The breast cancer commits many women throughout the world, and the metastases are the main cause of deaths. The knowledge about the biologic aggressiveness is useful to improve the treatment and the histopathological and immunohistochemical profiles can help to understand the events that determine the outcome. Objective: To compare two groups of patients with breast cancer (Group 1: non-palpable lesions; Group 2: palpable lesions), based in histopathological and immunohistochemical parameters to determine the biologic aggressiveness. Methods: We have studied 296 (two hundred ninety six) cases of breast cancer, diagnosed by histopathology, divided in two groups: Group 1- non-palpable lesions, exclusively detected by mammography (microcalcifications, nodule or architectural distortion) or with incidental finding and Group 2- palpable lesions (Nodule or mass), in retrospective, analytical and horizontal analysis. We evaluated histopathological parameters (nuclear grade, tubularity and mitotic counts) and immunohistochemical markers(Estrogen Receptors, Progesterone Receptors, p53, Ki67 and c-erbB-2), comparing the two groups, with statistic analysis (p<0.05). Results: The bigger the expression of estrogen and progesterone receptors the smaller the nuclear grade, tubularity and mitotic counts. On the contrary, the bigger the expression of Ki67 the higher the nuclear grade, tubularity and mitotic counts. We observed that c-erbB-2 and p53 expression showed the same tendency of the Ki67 in relation to the histopathologic parameters. Group 1 showed less incidence of elevated nuclear grade, tubularity and mitotic counts, bigger expression of Estrogen and Progesterone Receptors(p<0.05). Group 2 showed higher expression of Ki67 (p<0.05). The c-erbB-2 expression was a little bit higher in Group 2 than in Group 1(p=0.055). The p53 expression didnot show differences between the groups. / Orientador: Gilberto Uemura / Coorientador: Rogério Estevam Farias / Doutor

Orientador: Laurival Antonio De Luca / Resumo: O objetivo deste trabalho foi estudar através do exame Imunoistoquimico, a correlação entre alguns fatores Anatomopatológicos (tipo histológico e grau nuclear) e alguns fatores biológicos (receptores hormonais de estrógeno e de progesterona, proteína c-erbB-2 e proteína p53, no carcinoma de Paget da mama, doença rara e especial. No período entre Janeiro de 1980 a Dezembro de 1998 foram tratados no Instituto Brasileiro de Controle do Câncer, 6.303 casos de câncer de mama, deste total 98 casos foram diagnosticados como carcinoma de Paget, cuja incidência foi de 1,55%. Estudamos retrospectivamente 60 casos, sendo que 38 deles foram excluídos da análise, devido a limitação e escassez da amostra no material disponível, a idade das pacientes variou entre 26 e 84 anos, com média de 55,4 anos, as informações clínicas e terapêuticas foram obtidas dos prontuários das pacientes considerando, idade na época do diagnóstico, tamanho do tumor quando palpável, estadiamento clínico, e o tipo de cirurgia realizada. As amostras de tecido mamário foram recuperadas dos arquivos do Departamento de Anatomia Patológica do I.B.C.C. / MATTOSINHO. Após a revisão histológica, realizada por dois patologistas os casos foram classificados em quatro grupos: Grupo A- Doença de Paget (forma pura) n = 09 Grupo B- Doença de Paget + neoplasia ductal "in situ", n = 12 Grupo C- Doença de Paget, neoplasia ductal invasora, n = 30 Grupo D- Doença de Paget + neoplasia ductal "in situ"+ neoplasia ductal invasora, n = 09. Entre as variáveis anatomopatológicas, o grupo C prevaleceu com 30 casos (50%). O grau nuclear (GN-II) predominou com 45 casos (75%). Em relação as variáveis biológicas o receptor de estrógeno negativo predominou com 41 casos (68,3%), seguido pelo receptor de progesterona negativo com 40 casos (66,7%), podemos dizer que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this paper was to study the immunohistochemical efects of Paget's disease, a rare and special carcinoma of the breast, by correlating anatomopathological (histological and nuclear grade) and biological (estrogen and progesterone hormonal receptors, c-erbB-2 protein and p53 protein) factors. Between January 1980 and December 1998, 6303 cases of breast cancer were treated at the Brazilian Institute of Cancer Control; 98 of these were diagnosed with Paget's carcinoma, an incidence of 1.55%. We retrospectively studied 60 of these cases; 38 were excluded due to lack of available sample material. Patient age varied between 26 and 84 years (mean 55.4), clinical and therapeutic information were obtained from patient's medical records considering age at time of diagnosis, tumor size when palpable, clinical stage, and type of surgery performed. Samples of breast tissue were retrieved the Anatomical Pathology Department, I.B.C.C. / MATTOSINHO. After histological review, by two different pathologists, they were classified into four groups: Group A- Paget's disease (pure form) n = 09 Group B- Paget's disease + "in situ" duct neoplasia n = 12 Group C- Paget's disease, invasive duct neoplasia n = 30 Group D- Paget's disease + "in situ" duct neoplasia + invasive duct neoplasia n = 09.Invasive duct neoplasia was the most prevalent anatomopathological variable (Group C, n = 30, 50%). Nuclear grade (GNII) was found in 45 cases (75%). In relation to the biological variables, the negative estrogen receptor was predominant with 41 cases (68.3%), followed by the negative progesterone receptor with 40 cases (66.7%); this correlation had good concordance by the Kappa test. The c-erbB-2 protein was positive in 53 cases (88.3%) and p53 was negative in 47 cases (78.3%). From these results, we concluded that there was no statistical... (Complete abstract click electronic address below) / Doutor

Orientador: Laurival Antonio De Luca / Banca: Anete Kinumi Ueda / Banca: Odair Carlito Michelin / Banca: José Costa Andrade / Banca: Angela Marx / Resumo: Foi preocupante o número de biópsias indicadas nas microcalcificações (BIRADS 3 e 4) encontradas em mamografias e o baixo número de casos positivos encontrados. Partindo de pacientes com este diagnóstico radiológico, foi realizada dosagem sé rica de zinco através do método de absorção atômica. Após a realização das biópsias, foi feita a análise estatística dos casos com exame patológico benigno ou neoplasias intra-ductais. Não foram encontradas diferenças entre os grupos quanto a idade, a idade da menarca, a idade da primeira gestação, o número de gestações, nem com o tempo de amamentação. Não foram encontradas diferenças significativas entre os dois grupos, quando relacionados com a classificação BI-RADS. Embora as pacientes com neoplasia intra-ciucta I tenham apresentados níveis séricos de zinco abaixo do grupo controle, este valor não foi significativo (p>O,05), não podendo ser considerado como fator preditivo de risco. / Abstract: The indication of biopsy in the cases of microcalcification (BI-RADS 3 and 4) detected by mammography and the small number of positive results found at these biopsies causes concern among the authors. Thus, serum zinc concentrations were measured by the atomic absorption method in patients with this radiologic diagnosis. Following biopsy performance, the cases of benign pathologic findings or intraductal neoplasia were statistically analyzed. No differences between groups were found in age, age at menarche, age at first pregnancy, number of pregnancies and breastfeeding duration. No significant differences between groups were found regarding BI-RADS c1assification. Although serum zinc concentrations were lower in the patients with intraductal neoplasia than in controls, statistical difference was not significant (p>O,05). Thus, this parameter could not be considered as a predictive risk facto... / Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2014-11-17T15:02:59Z No. of bitstreams: 1 2014_BrunaCandidoGuido_Parcial.pdf: 30888972 bytes, checksum: 3e26fd31843f64612d4e7cf4ff0b12a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-17T15:16:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_BrunaCandidoGuido_Parcial.pdf: 30888972 bytes, checksum: 3e26fd31843f64612d4e7cf4ff0b12a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-17T15:16:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_BrunaCandidoGuido_Parcial.pdf: 30888972 bytes, checksum: 3e26fd31843f64612d4e7cf4ff0b12a2 (MD5) / O câncer é uma doença caracterizada pelo crescimento celular desordenado e por alterações na fisiologia das células. É considerado uma das principais causas de morte em todo o mundo representando uma ameaça de saúde global com consequências econômicas consideráveis. O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais comum no mundo e o mais comum entre as mulheres também sendo o tipo que mais gera óbitos neste gênero. Este fato gera uma grande demanda por novos tratamentos e novas metodologias para enfrentamento da doença que permitam não só uma melhora na qualidade, mas também, um aumento do tempo de vida dos pacientes portadores desse tipo de câncer. Neste cenário, os derivados da dihidropirimidinona (DHPMs) foram identificados como potenciais agentes antitumorais uma vez que eles se ligam de forma específica e reversível à cinesina Eg5 tendo como consequência a disrupção do fuso mitótico e a prevenção da progressão do ciclo celular durante a mitose apresentando notável atividade antitumoral contra diversas linhagens tumorais. Por meio de um screening, in vitro, nós identificamos 5 DHPMs com potente atividade antitumoral contras as linhagens MCF-7 e MDA-MB-231. Dados de dinâmica Molecular e ensaios de inibição in vitro da cinesina Eg5 mostraram que alguns compostos são realmente potentes inibidores desta proteína motora, causando uma importante diminuição em suas funções dependentes da motilidade. Os DPHMs interferem com a correta formação do fuso mitótico durante a divisão celular prejudicando a conclusão do ciclo celular nas células tumorais de mama e mostraram ser seletivos para células tumorais. Além disso, alguns destes compostos possuem uma interessante propriedade de modulação do fenótipo CD44+/CD44-, levando a uma diminuição na população de células-tronco tumorais (CTT) nas células MDA-MB-231, um efeito importante já que as CTTs são resistentes à muitas terapias antitumorais convencionais e desempenham um papel central na iniciação e manutenção do tumor. Estas observações corroboram com os resultados de que as células tratadas com os DHPMs têm capacidade proliferativa e angiogênica prejudicadas e são finalmente conduzidas à morte por apoptose, um dos mais almejados objetivos no desenvolvimento de fármacos. Juntos, estes resultados fornecem a compreensão de como os derivados de DHPM podem eliminar as células tumorais de mama e ainda abrem um horizonte para estudos adicionais destas arquiteturas moleculares como promissores compostos para uso no tratamento do câncer de mama. / Cancer is a disease characterized by uncontrolled cell growth and severe alterations in cells physiology. It is considered a major cause of death throughout the world representing a threat to global health with considerable economic consequences. The breast cancer is the second most common cancer worldwide and the most common among women also being the type that generates more deaths in this gender. In addressing the need of treatments for this life-threatening illness allowing not only an improvement in quality, but also an increase in the patient’s life expectancy with this cancer, we study 3,4-dihydropryrimidinone derivatives (DHPMs), a class of inhibitor molecules of motor spindle protein Eg5 that shows pronounced antitumor activity against several cancer cell lines. Using an in vitro screening, we identified five DHPMs with potent antitumor effects on MCF-7 and MDA-MB-231 cells. Molecular dynamics and in vitro Eg5 inhibition assays by DHPMs show that some compounds are really effective inhibitors of this motor protein causing an important decreasing in its major mobility-depended functions. DHPM activity interferes with the proper mitotic spindle formation during cell division impairing the correct conclusion of cell cycle of the breast cancer cells and showed to be selective for tumor cells. Moreover, they modulate the CD44+/CD24- phenotype leading to a decrease in the cancer stem cell (CSC) population in MDA-MB-231 cells, an important effect since CSCs are resistant to many conventional cancer therapies and play a pivotal role on initiation and maintenance of a tumor. This observation corroborates with the results that DHPM treated cells showed impaired able of proliferation and angiogenesis and are finally conducted to death by apoptosis, one of the most pursued goal in drug development. Together, our results provide insights into how DHPMs derivatives can eliminate breast tumor cells and also open a possible window for further studies of theses molecular architectures as promising compounds to cancer treatment.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-06-24T13:46:04Z No. of bitstreams: 1 2013_NataliaLemosChaves.pdf: 1364299 bytes, checksum: efcf646591435abc204b5dcaad6d4495 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-06-24T14:00:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_NataliaLemosChaves.pdf: 1364299 bytes, checksum: efcf646591435abc204b5dcaad6d4495 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-24T14:00:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_NataliaLemosChaves.pdf: 1364299 bytes, checksum: efcf646591435abc204b5dcaad6d4495 (MD5) / O câncer de mama é um dos mais frequente entre as mulheres em todo o mundo. Em busca de drogas mais eficientes para o tratamento de câncer, complexos metálicos estão sendo amplamente estudados. A intercalação destes complexos em bases de DNA pode inibir eventos como transcrição e replicação, causando morte celular. No entanto, a utilização destes compostos é limitada devido à sua toxicidade sistêmica. Nesse contexto, o uso de citrato de ródio [Rh2 (H2cit)4] associado com nanopartículas magnéticas (NPs) pode reduzir a toxicidade sistêmica no tratamento do câncer. Neste estudo, foram comparados os efeitos do citrato de ródio livre [Rh2 (H2cit)4], [Rh2(H2cit)4] carreado por nanopartículas (NPs) [Magh-Rh2(H2cit)4] e NPs de maguemita funcionalizadas com ácido-cítrico (Magh-cit) em células MCF-7 de câncer de mama e células epiteliais de mama não tumorais (MCF-10A). Foram também realizados estudos para verificar a indução de apoptose por esses fármacos, em células MCF-7. As concentrações estudadas de citrato de ródio livre foram menos citotóxicas do que as outras formulações do fármaco avaliadas em ambas as linhagens celular. Além disso, os resultados obtidos por citometria de fluxo, mostraram aumento estatisticamente significativo de fragmentação de DNA em 36 horas de tratamento com Magh-Rh2(H2cit)4 NPs (300 µM) e com a mesma concentração de ferro de Magh-cit NPs. Os mesmos tratamentos analisados por imagens confocais mostraram a fragmentação nuclear, em células MCF-7 depois de (48 horas). Após 24 horas, os tratamentos induziram translocação de citocromo C das mitocôndrias. Após pelo menos 12 horas de tratamento com as nanopartículas, foi possível identificar caspases efetoras ativas. Portanto, foi demonstrado que o citrato de ródio associado com nanopartículas de maguemita e nanopartículas de maghemita ligada ao citrato induziram citotoxicidade em células tumorais e podem representar uma alternativa para o tratamento do câncer de mama. Também foi demonstrado que as nanopartículas podem induzir, em células MCF-7, alterações celulares características de morte celular por apoptose, mesmo na ausência de caspases 3. ______________________________________________________________________________ SUMMARY / Breast cancer is a of the most frequent cancer among women worldwide. In search of more efficient drugs against cancer, metal complexes are being widely studied. The intercalation of these compounds in DNA bases impairs transcription and replication events causing cell death. Nevertheless, the use of these compounds is limited because of their systemic toxicity. In this regard, the use of dirhodium citrate [Rh2(H2cit)4] associated with magnetic nanoparticles (NPs), should work reducing systemic toxicity in cancer treatment. In this study, we compared the effects of Rh2(H2cit)4, Rh2(H2cit)4-loaded maghemite NPs [Magh-Rh2(H2cit)4] and citrate-loaded maghemite NPs (Magh-cit) on MCF-7 breast cancer cells and MCF-10A non-tumor and nontumorigenic epithelial breast cells. Events of apoptosis stimulated by nanoparticles were also checked. The concentrations rhodium citrate was less cytotoxic than other forms of drugs evaluated. Moreover, the results obtained by flow cytometry showed statistically significant increase in DNA fragmentation 36 hours of treatment with Magh-Rh2(H2cit)4 NPs (300 µM) and with the same iron concentration of Magh-cit NPs. The same treatments analyzed by confocal images showed nuclear fragmentation in MCF-7 cells after (48 hours). Treatment with 300 µM rhodium citrate Magh-Rh2(H2cit)4 NPs and Magh-cit NPs after 24 hours, caused release of cytochrome c from mitochondria, indicading alteration of mitochondrial membrane permeability. After at least 12 hours of treatment with nanoparticles, it was possible to identify active effector caspases. We showed that dirhodium citrate associated with maghemite nanoparticles and citrate-loaded maghemite NPs induced cytotoxicity in tumor cells and should represent a great alternative for breast cancer treatment. It has been shown that nanoparticles can induce changes that characterize apoptotic cell death in MCF-7 cells, even in the absence of caspase 3.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-09-17T15:48:44Z No. of bitstreams: 1 2013_NathaliaMoraesVasconcelos.pdf: 2898585 bytes, checksum: 64ad702001f98b5d13e5eafab2c73121 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-09-23T13:05:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_NathaliaMoraesVasconcelos.pdf: 2898585 bytes, checksum: 64ad702001f98b5d13e5eafab2c73121 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-23T13:05:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_NathaliaMoraesVasconcelos.pdf: 2898585 bytes, checksum: 64ad702001f98b5d13e5eafab2c73121 (MD5) / O câncer de mama é o tipo de câncer mais prevalente entre as mulheres em todo o mundo e o responsável pelo maior índice de morte feminina por câncer. Em modelos experimentais, a inflamação crônica foi descrita como indutora, porém alguns dados não são reproduzidos na clínica. Os inflamassomas, complexos multiprotéicos de sinalização intracelular atuantes na imunidade inata e adaptativa, vem sendo associados a funções celulares contrastantes dependendo do tipo de célula cancerígena analisada, o que também é verdade para os receptores do tipo Toll. Porém, a relação do inflamassoma NLRP3 e o câncer de mama é pouco conhecida. Considerando ainda a presença dos receptores NLRs e TLRs nas células não hematopoiéticas e, logo, a possibilidade de modulação do microambiente inflamatório pela própria célula tumoral, propôs-se analisar a presença e função do receptor NLRP3 e seu inflamassoma em células tumorais da mama in vitro. Foi observado que os componentes NLRP3 e ASC estão presentes em MCF7, porém há baixa expressão de ASC em MDA-MB-231. Ainda, houve ativação de caspase-1, indicando ativação do complexo, e diminuição das quantidades de proteínas NLRP3 e ASC na presença de Nigericina. A utilização de LPS e Nigericina induziu elevada morte celular em ambas as linhagens, com características como fragmentação nuclear, rompimento da membrana plasmática e PARP1 não clivado, eventos típicos da piroptose, a morte celular induzida pela ativação dos inflamassomas. Apenas a MDA-MB-231 secretou TNFα após as estimulações, e nenhuma das células secretou IL1β e IL6. Além disso, a utilização dos estímulos alterou os padrões de ciclo celular e diminuiu a taxa de proliferação em ambas as linhagens, mas não alterou o fenótipo CD24/CD44 de forma geral. O uso de sobrenadantes de monócitos estimulados para o inflamassoma NLRP3 na cultura das células de câncer de mama demonstrou efeitos fenotípicos semelhantes ao uso dos agonistas, indicando um direcionamento tumoricida dos monócitos ativados, atuando por meio de seus fatores secretados. Estes resultados sugerem que o inflamassoma NLRP3 não só está presente em células tumorais da mama, mas que sua ativação possui um efeito tumoricida, quando ocorre na própria célula tumoral ou por fatores secretados de monócitos. Essa via pode representar um novo aspecto de modulação, o qual pode ser explorado para o desenvolvimento de novas terapias contra o câncer de mama. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Breast cancer is the most prevalent type of cancer among women worldwide and the one responsible for their major cause of cancer death. In experimental models for this cancer, chronic inflammation is particularly described as an inducer; however there is some inconsistency in the clinic. The inflammasomes, intracellular multiprotein signaling complexes related to adaptative and innate immunity, are associated with contrasting roles regarding cancer immunity, depending on the cancer analyzed, which is also true for Toll-like Receptors. However, the relationship between the NLRP3 inflammasome and breast cancer is not completely understood. Considering the non-hematopoietic presence of TLRs and NLRs and, therefore, the possible generation of an inflammatory microenvironment by the tumor cells itself, we proposed to study the presence and function of the NLRP3 receptor and its inflammasome in breast tumor cells in vitro. We observed that the components NRLP3 and ASC are present in MCF7 cell line, but ASC is in low amounts in MDA-MB-231. Our data suggest caspase-1 activation, indicating activation of the complex, and diminished protein amounts of NLRP3 and ASC in the presence of Nigericin. When we used LPS and Nigericin, there was cell death induction in both cell lines, with nuclear fragmentation, plasma membrane rupture and non-cleaved PARP1, typical features of pyroptosis, the inflammasome mediated cell death. Only the MDA-MB-231 cell line secreted TNFα after stimulation, and neither of cells secreted IL1β nor IL6. Also, in the presence of the stimulus, there was alteration in the cell cycle pattern and decrease in the proliferation index of both cell lines, but not in the phenotype CD24/CD44 globally. The use of supernatants from NLRP3 stimulated monocytes in the culture of breast cancer cells induced similar phenotypic events to the presence of the agonists, which indicate an antitumoral activity of the activated monocytes, functioning through its secreted factors. Ours results suggest that the NLRP3 inflammasome is not only present in breast cancer cells, but its activation has a tumoricidal effect when occurring in the cancer cell or through secreted factors from monocytes. This pathway may represent a new modulation aspect, which may be further studied for the development of therapies against breast cancer.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade UnB Planaltina, Programa de Pós-Graduação em Ciências de Materiais, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-12-10T14:44:16Z No. of bitstreams: 1 2013_AnaGabrielladeOliveiraSardinha.pdf: 24003415 bytes, checksum: 39edef836e484ef3d38fe4ceeb28c8a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-12-13T10:29:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AnaGabrielladeOliveiraSardinha.pdf: 24003415 bytes, checksum: 39edef836e484ef3d38fe4ceeb28c8a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-13T10:29:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AnaGabrielladeOliveiraSardinha.pdf: 24003415 bytes, checksum: 39edef836e484ef3d38fe4ceeb28c8a2 (MD5) / A produção de modelos virtuais da anatomia externa real de órgãos humanos é um passo essencial no desenvolvimento de técnicas de instrumentação para a modelagem e simulação de Biomateriais, utilizadas em estudos relativos a cirurgias guiadas por imagem, treinamento de intervenções cirúrgicas em consultórios médicos virtuais e produção de equipamentos em realidade virtual, entre outros. Nesse trabalho foram reconstituídos modelos tridimensionais da anatomia externa da mama de pacientes a partir de imagens 3D adquiridas no ambulatório ginecológico do Hospital Universitário de Brasília (HUB), através de um escâner 3D. A modelagem e simulação da mama é tema presente na literatura na última década com trabalhos que avalia desde a deformação real da mama, utilizando o método dos elementos finitos, até um novo método para a deformação e simulação rápida de tecidos biológicos formados por fibras e fluidos, incluindo a mama. A dissertação também foi importante para consolidação do grupo de Biomaterias do programa de pós-graduação em Ciências de Materiais da Faculdade UnB Planaltina, pois produziu protocolo de utilização do escâner 3D e software Polygon Editing Tool em clínicas médicas bem como testou a plataforma de simulação FFM (Fiber Fluid Method) produzida por pesquisador do grupo de pesquisa. O teste além de demonstrar a validade do método fibra fluído para deformação de tecidos biológicos, permitiu também o aperfeiçoamento do mesmo método através do feedback dado ao pesquisador responsável. O processo de aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Seres Humanos da Faculdade de Ciências da Saúde da UnB, permitiu o estabelecimento de parcerias entre o grupo de pesquisa e médicos do HUB. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The production of virtual models of external anatomy real of human organs is an essential step in the development of instrumentation techniques for the modeling and simulation of Biomaterials used in studies of image-guided surgery, surgical training interventions in medical offices and equipment production of virtual reality, among others. In this work we reconstituted three-dimensional models of the external anatomy of the patients breast from 3D of images acquired in the outpatient gynecological Hospital Universitário de Brasília (HUB), via a 3D scanner. The modeling and simulation of the breast is subject in the literature over the last decade from studies evaluating the actual deformation of the breast using the finite element method to a novel method for fast simulation and the deformation of fibers formed by biological tissues and fluids, including the breast. The dissertation was also important for the consolidation of the group of the biomaterials graduate program in Materials Science from Faculdade UnB Planaltina because of the protocol produced using the 3D Scanner and the software Polygon Editing Tool in medical clinics and tested the simulation platform FFM (Fiber Fluid Method) produced by a researcher at the research group. The test and demonstration of the validity of the method for fiber fluid deformation of biological tissues also allowed the improvement of itselfs through the feedback given to the principal investigator. The process of approval by the Comitê de Ética em Pesquisa com Seres Humanos of the Faculdade de Ciências da Saúde at UnB, allowed the establishment of partnerships between the research group and medical at the HUB. _______________________________________________________________________________________ RESUMEN / La producción de los modelos virtuales de bienes anatomía externa de los órganos humanos es un paso esencial en el desarrollo de técnicas de instrumentación para el modelado y simulación de biomateriales utilizados en los estudios de la cirugía guiada por imágenes, intervenciones de entrenamiento quirúrgico en consultorios médicos, y virtuales producción de equipos de realidad virtual, entre otros. En este trabajo se reconstituyeron los modelos tridimensionales de la anatomía externa de los pacientes de mama de imágenes en 3D adquiridos en el ambulatorio ginecológico de la Hospital Universitário de Brasília (HUB), através de un escáner 3D. El modelado y simulación de la mama está sujeto en la literatura en la última década con la de los estudios que evalúan la deformación real de la mama utilizando el método del elemento finito a un nuevo método para la simulación rápida y la deformación de fibras formada por los tejidos y fluidos biológicos, incluyendo la mama. La disertación fue también importante para la consolidación del grupo de biomateriales programa de postgrado en Ciencia de los Materiales de la Faculdade UnB Planaltina porque protocolo produce utilizando el escáner y el software de la herramienta de edición de polígonos 3D en los consultorios médicos y probado la plataforma de simulación FFM (Fiber Fluid Method) producido por un investigador del grupo. La prueba y demuestra la validez del método para la fibra de fluido de la deformación de los tejidos biológicos, también permite la mejora de la misma a través de la retroalimentación dada al investigador principal. El proceso de aprobación por el Comitê de Ética em Pesquisa com Seres Humanos de la Faculdade de Ciências da Saúde en el UnB, permitió el establecimiento de asociaciones entre el grupo de investigación y los médicos del HUB.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-05T17:52:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Steffany - versão final_24.02.16.pdf: 6650488 bytes, checksum: 4d03cf83269933b529c7d914d9016026 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T17:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Steffany - versão final_24.02.16.pdf: 6650488 bytes, checksum: 4d03cf83269933b529c7d914d9016026 (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 / FACEPE / O câncer de mama (CID10 - C50) é uma doença complexa que pode adquirir um caráter mais invasivo e resistente por inúmeras mudanças moleculares que levam a uma exacerbação da proliferação celular e uma instabilidade genética. A pesquisa envolvendo linfonodos axilares comprometidos é de grande importância para o reconhecimento e compreensão dos mecanismos iniciais relacionados ao processo de metastatização. Evidências histoquímicas demonstram que a sialilação de superfícies de células tumorais bem como a expressão de glicanos truncados está associada a um fenótipo de tumor metastático, porém, o estudo deste perfil na metástase linfonodal é pouco explorada. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil de sialilação e a expressão dos antígenos carboidratos não sialilados associados ao tumor mamário e nos linfonodos correlacionando com as características clínico-patológicas e biomarcadores clássicos para câncer de mama. O padrão de sialilação e a expressão de glicanos truncados foi detectada por histoquímica com lectinas. Utilizou-se imunohistoquímica para detecção das sialiltransferases e dos marcadores de rotina para câncer de mama. Houve expressão de ácido siálico, especialmente na posição α2,6 no tumor primário e no linfonodo axilar o que nos permite pensar na possibilidade de que clones do tumor primário mantiveram suas características fenotípicas, influenciadas pela sialilação, durante a invasão e metástase linfonodal. Não foi verificada diferença significativa entre a expressão de ácido siálico e os biomarcadores clássicos quer seja no carcinoma mamário quer seja no linfonodo axilar correspondente. As análises da expressão de β-galactosideo α2,3 e α2,6 sialiltransferases reforçam esta hipótese. Além disso, houve expressão dos antígenos truncados em ambos os sítios, o antígeno Tn foi mais expresso na metástase linfonodal podendo ser resultante de um resgate deste antígeno para facilitar a sua fixação no novo microambiente. A monitorização do perfil de sialilação bem como dos glicanos truncados não sialilados pode ser importante para o diagnóstico de metástases de tumores. / Breast cancer (ICD10 - C50) is a complex disease that can acquire a more invasive and resistant nature of many molecular changes that lead to the exacerbation of cell proliferation and genetic instability. Research involving compromised axillary lymph nodes is of great importance to the recognition and understanding of the mechanisms related to early metastasizing process. Histochemical evidence demonstrates that sialylation of tumor cell surfaces and the truncated glycan expression is associated with a metastatic tumor phenotype, however, the study of lymph node metastasis in profile is little explored. The aim of this study was to compare the sialylation profile and the expression of non sialylated carbohydrate antigens associated with breast tumor and lymph nodes correlated with clinicopathological features and classic biomarkers for breast cancer. The pattern of sialylation and expression of truncated glycans was detected by lectin histochemistry. Immunohistochemistry was used to detect the sialyltransferases and routine markers for breast cancer. There was sialic acid expression, especially in the α2,6 position in the primary tumor and axillary lymph node which allows us to think about the possibility that the primary tumor clones maintained their phenotypic characteristics, influenced by sialylation during the invasion and lymph node metastasis. There was no significant difference between sialic acid expression and classic biomarkers either in breast carcinoma either in the corresponding axillary lymph node. The analyzes of β-galactoside expression α2,3 and α2,6 sialyltransferases reinforce this hypothesis. Furthermore, there was expression of antigens truncated at both sites, Tn antigen was expressed on most lymph node metastasis can be due to a rescue of the antigen to facilitate their attachment to the new microenvironment. Monitoring of sialylation profile as well as truncated sialylated glycans may not be important for the diagnosis of tumor metastasis