Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-06-27T04:08:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 346602.pdf: 6050100 bytes, checksum: 2fcdd95fe82dd7e1cb5253f48d30332f (MD5) Previous issue date: 2016 / Esta tese relata o desenvolvimento de um sistema de liberação de fármaco (DDS), a doxorrubicina (Dox), composto de micropartículas híbridas de carbonato de cálcio e carragenina (CaCO3/?-Car), sintetizadas em matriz de nanocelulose bacteriana (BNC), aqui denominado CarDS. A caracterização do CarDS revelou uma distribuição uniforme das micropartículas híbridas de CaCO3/?-Car entre as fibras de BNC, proporcionando alta incorporação de Dox (80%) e perfis de liberação modulados pela concentração de Dox incorporada, assim como pela variação do pH local. A razão entre as micropartículas e as fibras de BNC permanece a mesma, quando aumentadas as dimensões do sistema. A presença das micropartículas diminuiu a área superficial, a capacidade de absorção de água, a taxa de reidratação e altera as propriedades mecânicas. O CarDS é atóxico a células de fibroblastos da linhagem L929. As células de fibroblastos são capazes de aderir, proliferar e interagir com biomaterial (CarDS). Os índices hemolíticos permanecem dentro da normalidade, evidenciando a não citotoxicidade e hemocompatibilidade do CarDS. A bioequivalência da Dox liberada pelo sistema (DoxDS) em comparação com Dox em solução (DoxSol) na toxicidade de células de câncer de mama evidenciaram a atividade do fármaco pela diminuição da atividade metabólica e índices proliferativos, causando alterações características na morfologia, ciclo celular e morte celular por apoptose/necrose durante o tratamento com DoxDS quando cultivadas in vitro. Por fim, os resultados aqui relatados comprovam que o CarDS desenvolvido poderia ser uma alternativa para auxiliar na terapia adjuvante da recidiva do câncer de mama e, como consequência, na redução dos efeitos colaterais ocasionados pelo fármaco em nível sistêmico.<br> / Abstract : This thesis reports the development of a drug (doxorubicin) delivery system (DDS) with hybrid microparticles of calcium carbonate and carrageenin (CaCO3/?-Car), synthesized in bacterial nanocellulose matrix (BNC), here called CarDS. Characterization of CarDS revealed a uniform distribution of the CaCO3/?-Car hybrid microparticles between the BNC fibers, providing a high Dox incorporation (80%) and release profiles modulated by the incorporated Dox concentration, as well as by the variation of the local pH. The ratio of the microparticles to the BNC fibers remains the same when the system dimensions are increased. Presence of the microparticles decreased the surface area, its water absorption capacity and rehydration rate, that the presence of the microparticles altered its mechanical properties, making the biomaterial more malleable and easy to apply. CarDS is non-toxic to fibroblast cells of the L929 lineage. Fibloblast cells are able to adhere, proliferate and interact with the biomaterial (CarDS). Hemolytic indices remained within the normal values, showing its non cytotoxicity and hemocompatibility of CarDS. The bioequivalence of Dox released by the system (DoxDS) compared to Dox in solution (DoxSol) in the toxicity of breast cancer cells showed the activity of the drug by the decrease of the metabolic activity and proliferative indices, causing characteristic alterations in the morphology, cell cycle, and cell death by apoptosis/necrosis during the treatment with DoxDS when cultured in vitro. Finally, the results reported suggest that the developed CarDS could be used as an aid in the adjuvant therapy of recurrent breast cancer and consequently reduce the side effects caused by the drug at systemic level, and therefore be suitable for breast cancer therapies.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:34:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 243259.pdf: 1104856 bytes, checksum: 381be1c05237e0ceb6e5605d12b33c65 (MD5) / Introdução: O estudo apresenta informação a respeito de 199 pacientes com 65 anos ou mais e de 101 pacientes com menos de 35 anos, submetidas ao tratamento cirúrgico do câncer de mama na Maternidade Carmela Dutra (MCD) de Florianópolis-SC. Objetivo: Comparar a ocorrência de fatores prognósticos anátomo-patológicos e biológicos relacionados com o câncer de mama, em mulheres com até 35 anos e 65 ou mais anos de idade. Métodos: Estudo com delineamento do tipo descritivo, a partir de levantamento de dados de prontuários de mulheres com câncer de mama, atendidas pelo Serviço de Mastologia da MCD de Florianópolis/SC, no período de janeiro/1992 a dezembro/2004. Resultados: Das mulheres com até 35 anos, o comprometimento linfonodal, o tipo histológico medular, o estadio pós-operatório III, os graus histológico e nuclear 3 apresentaram incidências maiores, comparadas ao grupo de maior idade. Entre as mulheres do grupo de 65 ou mais anos de idade, apenas positividade para receptor hormonal e Índice Prognóstico de Nottingham (IPN) mais favorável apresentaram uma maior incidência. Ainda que o grau nuclear 3 e o tipo histológico medular tenham mantido um efeito importante nas jovens, perderam a significância estatística após o ajuste para confundimento. Apenas a negatividade para receptor hormonal, nas pacientes jovens, manteve uma diferença estatisticamente significante, após ajuste, utilizando Regressão Logística. Conclusão: Os fatores prognósticos avaliados, tamanho do tumor, comprometimento linfonodal axilar, estadiamento pós-operatório, graus histológico e nuclear e IPN não diferiram, de maneira estatisticamente significativa, ao comparar sua incidência nos dois grupos estudados. A negatividade na expressão do receptor hormonal apresentou significância estatística, sendo maior nas pacientes jovens comparadas às idosas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2017-03-14T04:08:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340463.pdf: 17954705 bytes, checksum: 2aeb4c6773d4a940b4128e3f8f2d8da8 (MD5) Previous issue date: 2016 / O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais diagnosticado no mundo e representa a principal causa de morte entre as mulheres. Cerca de 20% dos casos apresentam a superexpressão da proteína HER-2 o que garante pior prognóstico devido à agressividade do tumor, alto poder metastático e recidiva. Devido aos diversos mecanismos de resistência às terapias convencionais evidencia-se a necessidade de tratamentos mais efetivos. Neste contexto, a utilização do efeito de RNA de interferência (RNAi) apresenta-se como alternativa, por possibilitar o controle da produção de proteínas através da interferência sequência-específica. Devido às características da molécula de siRNA e barreiras biológicas, a utilização de sistemas nanocarreadores apresenta-se como estratégia para proteção e transporte à célula alvo. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo desenvolver, caracterizar e aplicar um novo sistema nanocarreador de siRNA para a terapia anticâncer. As IO-caf@CaP/siHER2/PEG-PAsp correspondem a um sistema formado por um núcleo magnético recoberto com ácido cafeico, sais inorgânicos, siRNA e bloco de copolímero. As imagens de microscopia eletrônica de transmissão (TEM) revelaram nanopartículas esféricas e as medidas por espalhamento de luz dinâmico (DLS) apresentaram diâmetro médio por intensidade de 134,70 nm e índice de polidispersão de 0,163. A formulação apresentou carga superficial igual a -3,06 e concentração de 6,49 × 1012 partículas/mL na análise de rastreamento de nanopartículas (NTA). As partículas mostraram-se estáveis após 42 dias de armazena-mento e liofilização. A taxa de incorporação de siRNA variou de 87 a 99%. De acordo com estudos de citotoxicidade as nanopartículas não apresentaram toxicidade às células HCC1954 além disto aumentaram a captação celular após aplicação de campo magnético externo. Tanto a análise por microscopia confocal quanto por qRT-PCR demonstraram que as nanopartículas foram eficientes carreadores de siRNA além de serem capazes de promover o escape endossomal. Diante dos dados obtidos, as IO-caf@CaP/siHER2/PEG-PAsp apresentaram-se como sistemas promissores para a entrega de siRNA na terapia de RNAi possuindo tamanho, forma e carga superficial adequados para aplicação biomédica. Além do mais, as nanopartículas mostraram-se eficientes em carrear o siRNA à célula alvo e promover o silenciamento do gene HER-2 em linhagem celular de câncer de mama HER-2 positivo. <br> / Abstract : Breast cancer is the second most diagnosed cancer in the world and is the leading cause of death among women. Approximately 20% of cases presents overexpression of HER-2 protein, which has been associated with highly aggressive disease, increased metastatic potential, recurrence and poor survival. However, several mechanisms of resistance to conventional therapies are being described, and then new and more effective therapies are urgently needed. In this context, the interference effect by RNAi pathway presents itself as an attractive strategy to block proteins expression by sequence-specific RNA interference. Thus, this study aimed to develop, characterize and apply a new nanocarrier system for siRNA anticancer therapy. After addition of caffeic acid coating on iron oxide nanoparticles the system formed by a magnetic core coated with inorganic salts, siRNA and block copolymer, IO-caf@CaP/siHER2/PEG-PAsp, was synthesized and characterized. The transmission electron microscopy (TEM) images revealed spherical nanoparticles and the dynamic light scattering (DLS) measurements showed averaged hydrodynamic diameter in the intensity histogram of 134.70 nm and polydispersity index of 0.163. The formulation has the surface charge equal to -3.06 and concentration of 6,49 × 1012 particles/mL determined by nanoparticle tracking analysis (NTA). The particles seemed to be stable even after 42 days of storage, and after lyophilization. The siRNA incorporation rate ranged from 87 to 99%. According to the cytotoxicity by MTT studies, the IO-caf@CaP/siHER2/PEG-PAsp are not toxic to the cell line HCC1954 and the magnetic field increased their cellular uptake. Both the analysis, confocal microscopy and the qRT-PCR assay demonstrated that the nanoparticles were effective nanocarriers of siHER2 and were able to promote endosomal escape. In this context, the nanoparticles IO-caf@CaP/HER2/PEG-PAsp presented themselves as promising carrier systems for siRNA delivery, for RNA interference therapy, having size, shape and surface charge suitable for biomedical applications. Furthermore, the nanoparticles were shown to be efficient in carrying the siRNA to the target cell and promote silencing of the HER-2 gene in HER-2 positive breast cancer cell line.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-03-14T04:08:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339588.pdf: 2300927 bytes, checksum: dd97ff2d496091b10a5e870e79db18da (MD5) Previous issue date: 2016 / Desde a elucidação do mecanismo molecular do efeito RNA de interferência (RNAi), sequências de short interfering RNA (siRNA) emergiram como potenciais agentes terapêuticos para modular a produção de proteínas relacionadas à doenças envolvidas na desregulação genética. Entretanto, a aplicação clínica do siRNA depende do desenvolvimento de sistemas de entrega seguros e eficientes para as células alvo, uma vez que o siRNA é facilmente degradado por nucleases endógenas, a absorção celular é ineficiente, além de ocorrer aprisionamento e degradação das moléculas nos endossomos celulares. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi o desenvolvimento de um sistema de entrega eficiente para proteger e entregar o siRNA às células de câncer de mama, visando o uso na terapia anti-câncer. Para tanto, nanopartículas híbridas compostas de fosfato de cálcio e copolímero foram preparadas, caracterizadas e testadas em células. As nanopartículas foram formadas por auto-associação, através de mistura simples e estequiométrica de soluções iônicas aquosas contendo siRNA e copolímero. As medidas de espalhamento dinâmico de luz (DLS) indicaram uma distribuição de tamanho estreita com diâmetro médio em 53 ± 4 nm e índice de polidisperção (PdI) de 0,09 ± 0,02. A carga superficial das nanopartículas foi de 0,25 ± 0,22 mV. As imagens de TEM revelaram nanopartículas com forma arredondada relativamente homogênea, com tamanho médio de 47 ± 18 nm. A concentração de partículas foi de 1,72x1012/mL. A porcentagem de siRNA complexado nas nanopartículas foi de 45%, conforme quantificado por pelo kit Quanti-iT microRNA Assay e visualizado por gel de agarose. O sistema desenvolvido permaneceu estável durante a incubação prolongada a 4ºC e por 7 dias quando submetido ao congelamento/descongelamento. Observou-se que os processos de liofilização, purificação e adição ao meio de cultura de células não alteraram o tamanho e o PdI das nanopartículas. Os ensaios de Espectroscopia de Emissão de Fotoelétrons Excitados por raios X (XPS) e Espectroscopia de raios X por dispersão em energia (EDS) sugeriram a presença dos elementos oxigênio, cálcio, fósforo, nitrogênio e carbono na composição das nanopartículas indicando associação conforme a hipótese levantada. As nanopartículas contendo o siRNA para AKT3 e SETD4 reduziram a viabilidade celular de maneira dependente de concentração e do tempo quando comparadas com os respectivos controles. As nanopartículas não foram citotóxicas para a linhagem celular não tumoral NIH-3T3. As nanopartículas híbridas mostraram-se eficientes no carreamento e entrega do siRNA, uma vez que foi possível observar silenciamento de 46 ± 13% para o gene AKT3 e 42 ± 34% para SETD4. Por microscopia confocal confirmou-se a capacidade do sistema nanoparticulado em carrear siRNA e promover o escape endossomal. Os resultados obtidos demonstram a nanopartícula híbrida como uma candidata promissora na entrega de siRNA para genes importantes na sobrevivência de células de câncer de mama.<br> / Abstract : Since elucidation of the molecular pathway of ribonucleic acid interference (RNAi), short interfering ribonucleic acid (siRNA) has emerged as a potential therapeutic agent for modulating the production of proteins associated with diseases involved in gene disruption. However, the clinical application of siRNA requires safe and effective methods for their delivery to the target cell, due to the siRNA degradation by nucleases, inefficient cellular uptake and endosomal entrapment. Thus, the aim of the present study was the development of an efficient carrier system to protect and deliver siRNA to breast cancer cells for anti-cancer therapy. Therefore, hybrid nanoparticles composed of calcium phosphate and block copolymer were prepared, characterized and tested biologically. The nanoparticles were formed through self-assembly by simple mixing of aqueous ionic solutions of the components in stoichometric condition, in the presence of siRNA and block copolymer. Dynamic Light Scattering (DLS) measurements showed a narrow distribution with an average value of 53 ± 4 nm and Polydispersity Index (PdI) of 0.09 ± 0.02. The surface charge of nanoparticles was 0.25 mV ± 0.22 mV. The TEM observations revealed nanoparticles with relatively homogenous rounded shape with an average size of 47 ± 18 nm. The concentration of particles per mL was 1.72x1012. The siRNA-loading efficiency was 45%, as quantified by the Quant-iT microRNA Assay kit and visualized by agarose gel electrophoresis. The developed system remained stable during prolonged incubation at 4 °C, and for 7 days when subjected to freeze/thaw. It was noted that the freeze-drying processes, purification as well as the presence of cell culture medium did not change the size and PdI of the nanoparticles. Photoelectron spectroscopy Emission Excited by X-ray (XPS) and X-ray spectroscopy for energy dispersion (EDS) suggest the presence of oxygen, calcium, phosphorus, nitrogen and carbon in the composition of nanoparticles, indicating association as the hypothesis of nanoparticles formation. Nanoparticles containing siRNA to AKT3 and SETD4 significantly reduced cell viability in a concentration- and time-dependent manner, when compared to the control. Nanoparticles are not cytotoxic to NIH-3T3 cell line (non-tumoral). The hybrid nanoparticle was efficient in loading and delivering siRNA, since it was observed a AKT3 and SETD4 gene silencing of 46 ± 13% and 42 ± 34%, respectively. By confocal microscopy the abilities of the nanoparticulate system to deliver siRNA and to promote endosomal escape were confirmed. The results obtained demonstrate the hybrid nanoparticles as a promising candidate for the delivery of siRNA to silence key genes in the survival of breast cancer cells.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-21Bitstream added on 2014-06-13T19:03:28Z : No. of bitstreams: 1 oliveirafilho_v_dr_botfm.pdf: 69220 bytes, checksum: 4eced5e1b3ebf685762730b97a9c2cd8 (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / Foi preocupante o número de biópsias indicadas nas microcalcificações (BIRADS 3 e 4) encontradas em mamografias e o baixo número de casos positivos encontrados. Partindo de pacientes com este diagnóstico radiológico, foi realizada dosagem sé rica de zinco através do método de absorção atômica. Após a realização das biópsias, foi feita a análise estatística dos casos com exame patológico benigno ou neoplasias intra-ductais. Não foram encontradas diferenças entre os grupos quanto a idade, a idade da menarca, a idade da primeira gestação, o número de gestações, nem com o tempo de amamentação. Não foram encontradas diferenças significativas entre os dois grupos, quando relacionados com a classificação BI-RADS. Embora as pacientes com neoplasia intra-ciucta I tenham apresentados níveis séricos de zinco abaixo do grupo controle, este valor não foi significativo (p>O,05), não podendo ser considerado como fator preditivo de risco. / The indication of biopsy in the cases of microcalcification (BI-RADS 3 and 4) detected by mammography and the small number of positive results found at these biopsies causes concern among the authors. Thus, serum zinc concentrations were measured by the atomic absorption method in patients with this radiologic diagnosis. Following biopsy performance, the cases of benign pathologic findings or intraductal neoplasia were statistically analyzed. No differences between groups were found in age, age at menarche, age at first pregnancy, number of pregnancies and breastfeeding duration. No significant differences between groups were found regarding BI-RADS c1assification. Although serum zinc concentrations were lower in the patients with intraductal neoplasia than in controls, statistical difference was not significant (p>O,05). Thus, this parameter could not be considered as a predictive risk facto...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006Bitstream added on 2014-06-13T19:43:36Z : No. of bitstreams: 1 arantesjr_jc_dr_botfm.pdf: 447982 bytes, checksum: f2d80a448fdaad2a52ea33a40154ad2e (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / O câncer de mama acomete muitas mulheres em todo o mundo e as metástases são a principal causa de morte. Conhecimentos acerca do comportamento biológico são úteis para aprimorar a abordagem, principalmente terapêutica. Os perfis histológico e imuno-histoquímico podem nos permitir melhor compreensão dos fenômenos que determinam a evolução da doença. Objetivo: Comparar lesões palpáveis e não palpáveis para determinar agressividade biológica, baseado nos parâmetros histopatológicos e imuno-histoquímicos. Metodologia: Foram estudados 296 (duzentos e noventa e seis) casos de câncer de mama, confirmados pela histopatologia, separados em dois grupos: Grupo 1: Lesões não palpáveis, detectadas exclusivamente por mamografia (microcalcificações, nódulo ou distorção arquitetural) ou por achado incidental e Grupo 2: Lesões palpáveis (nódulo, massa ou condensação), em estudo retrospectivo, analítico e horizontal. Foram avaliados critérios histopatológicos (Grau Nuclear, Formação Tubular e Índice Mitótico) e imuno-histoquímicos (Receptores de Estrogênio, Receptores de Progesterona, Ki67, p53 e c-erbB-2) de agressividade, comparando-se os dois grupos, com tratamento estatístico (índice de significância p<0,05). Resultados: Avaliados os dois grupos indistintamente, observou-se que a maior expressão dos Receptores Hormonais (RE e RP) esteve relacionada com Grau Nuclear, Formação Tubular e Índice Mitótico baixos. Super-expressão de Ki67 foi prevalente nos graus histopatológicos mais elevados. c-erbB-2 e p53, embora não estatisticamente significativo, apresentaram a mesma tendência do Ki67 em relação às variáveis histopatológicas. O Grupo 1 apresentou menor incidência de Grau Nuclear, Formação Tubular e Índice Mitótico elevados que o Grupo 2. O Grupo 1 apresentou maior expressão dos Receptores Hormonais (p<0,05), enquanto o Grupo 2 apresentou maior expressão de Ki67(p<0,05) / The breast cancer commits many women throughout the world, and the metastases are the main cause of deaths. The knowledge about the biologic aggressiveness is useful to improve the treatment and the histopathological and immunohistochemical profiles can help to understand the events that determine the outcome. Objective: To compare two groups of patients with breast cancer (Group 1: non-palpable lesions; Group 2: palpable lesions), based in histopathological and immunohistochemical parameters to determine the biologic aggressiveness. Methods: We have studied 296 (two hundred ninety six) cases of breast cancer, diagnosed by histopathology, divided in two groups: Group 1- non-palpable lesions, exclusively detected by mammography (microcalcifications, nodule or architectural distortion) or with incidental finding and Group 2- palpable lesions (Nodule or mass), in retrospective, analytical and horizontal analysis. We evaluated histopathological parameters (nuclear grade, tubularity and mitotic counts) and immunohistochemical markers(Estrogen Receptors, Progesterone Receptors, p53, Ki67 and c-erbB-2), comparing the two groups, with statistic analysis (p<0.05). Results: The bigger the expression of estrogen and progesterone receptors the smaller the nuclear grade, tubularity and mitotic counts. On the contrary, the bigger the expression of Ki67 the higher the nuclear grade, tubularity and mitotic counts. We observed that c-erbB-2 and p53 expression showed the same tendency of the Ki67 in relation to the histopathologic parameters. Group 1 showed less incidence of elevated nuclear grade, tubularity and mitotic counts, bigger expression of Estrogen and Progesterone Receptors(p<0.05). Group 2 showed higher expression of Ki67 (p<0.05). The c-erbB-2 expression was a little bit higher in Group 2 than in Group 1(p=0.055). The p53 expression didnot show differences between the groups.

Orientador : Prof. Dr. Iglenir João Cavalli / Coorientadora : Profª. Drª. Enilze M. S. F. Ribeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 22/11/2016 / Inclui referências : f. 63-80 / Resumo: O câncer de mama é o tipo mais comum dos casos de câncer diagnosticados em adultos com mutações germinativas no gene TP53, representando 27% de todos os tipos de câncer que apresentam mutação nesse gene. O estudo do gene supressor de tumor TP53 possibilitou a identificação da mutação R337H TP53 que se caracteriza por codificar uma histidina no lugar de arginina (R337H), no exon 10 do gene TP53, no domínio de tetramerização da proteína p53. Esta mutação ocorre em 95% dos pacientes pediátricos do Sul do Brasil portadores de Tumor de Córtex Adrenal (TCA), sendo de 0,27% a sua frequência populacional. Em uma análise de 171.649 recém-nascidos do Estado do Paraná, as famílias de indivíduos com a mutação R337H TP53 foram analisadas, sendo observado que o câncer de mama foi o tipo mais frequente de neoplasia encontrada nos adultos, correspondendo a 14,55% dos casos. O objetivo principal deste trabalho foi verificar, através da técnica de discriminação alélica pelo sistema TaqMan e Sequenciamento de Sanger, a frequência da mutação R337H TP53 em uma amostra de DNA tumoral de 700 pacientes portadoras de carcinomas mamários atendidas nos Hospitais Nossa Senhora das Graças e de Clínicas de Curitiba, PR, e analisar a instabilidade genômica, por array-CGH, nas pacientes com (n=5) e sem (n=9) a mutação R337H TP53. Das 700 pacientes, onze eram heterozigotas para a mutação estudada, com frequência genotípica de 0,0157 e alélica de 0,0079. A frequência genotípica observada na amostra analisada foi demonstrada ser 5,93 vezes maior do que a descrita previamente (0,27%), em uma amostra de 171.649 recém-nascidos do Estado do Paraná, indicando a relevância desta mutação na carcinogênese mamária. Após a comparação dos dados clínicos histopatológicos das pacientes com e sem a mutação, foi observada diferença estatisticamente significativa entre as médias de idade dos dois grupos de pacientes (t=1,97; P<0,05), tendo as pacientes com a mutação uma média de idade ao diagnóstico inferior (46,54 ± 14,53 anos) quando comparado com o grupo sem a mutação (55,47 ± 14,96 anos). Os resultados de análise de a-CGH no DNA das pacientes estudadas demonstrou nenhuma diferença estatisticamente significativa entre as médias das alterações cromossômicas (ganhos, perdas e total) observadas nos dois grupos de pacientes, indicando que a mutação R337H TP53 não contribui significativamente para a instabilidade genômica nas pacientes com câncer de mama portadoras dessa mutação. Palavras-chave: Câncer de mama. TP53. R337H. Genotipagem. Instabilidade genômica / Abstract: Breast cancer is the most common cancer type diagnosed in adults with germline mutations in the TP53 gene, accounting for 27% of all of those cancers. The study of TP53 tumor supressor gene allowed the identification of R337H TP53 mutation in exon 10, resulting in an arginine-to-histidine amino acid substitution in the dimerization domain of the p53 protein. This mutation occurs in 95% of pediatric patients with adrenocortical tumors (ACT) in South of Brazil, reaching a frequency of 0.27% in this population. In a populational study involving 171.649 newborns of Paraná state, families of individuals carrying the R337H TP53 mutation were analyzed, and breast cancer was the most common type of malignancy found in this cohort (14.55%)The aim of this study was to verify, through genotyping techniques as TaqMan assay and Sanger Sequencing, the frequency of the R337H TP53 mutation in a cohort of 700 patients with breast carcinoma collected in two Institutions (Hospital Nossa Senhora das Graças and Hospital de Clínicas) from Curitiba, Paraná, and to analyze genomic instability, using array-CGH, in patients with (n=5) or without the R337H TP53 mutation (n=9). In this cohort, eleven patients were identified as heterozygous for the R337H TP53 mutation giving a genotypic frequency of 0.0157 and an allelic frequency of 0.0079. The genotypic frequency observed in this study was 5.93 times higher than the one described previously in a sample of 171.649 newborns of Paraná, implying the relevance of this mutation in breast carcinogenesis. After comparing the histopathological and clinical data of patients with and without the mutation, it was observed a statistically significant difference between the mean age of both groups (t = 1.97, P <0.05), where patients with the mutation exhibit a lower average age (46.54 ± 14.53 years) at diagnosis when compared with the group without the mutation (55.47 ± 14.96 years). CGH analysis reveal no statistically significant difference between the mean changes (chromosome gains, losses and total) observed in both groups of patients, indicating that the mutation R337H TP53 does not significantly contribute to chromosomal instability in patients with breast cancer. Keywords: Breast cancer; R337H, TP53, Genotyping, Genomic Instability

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-04-05T18:13:15Z No. of bitstreams: 1 2017_ElisaCançadoPortoMascarenhas.pdf: 3785190 bytes, checksum: dacd35ecdbfd2e11c871abca02b55626 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-04-24T22:23:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ElisaCançadoPortoMascarenhas.pdf: 3785190 bytes, checksum: dacd35ecdbfd2e11c871abca02b55626 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-24T22:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_ElisaCançadoPortoMascarenhas.pdf: 3785190 bytes, checksum: dacd35ecdbfd2e11c871abca02b55626 (MD5) Previous issue date: 2018-04-24 / O câncer de mama é a segunda neoplasia mais diagnosticada no mundo, sendo a principal causa de morte relacionada ao câncer entre as mulheres. Sua detecção precoce oferece a promessa de um tratamento menos agressivo e aumento na sobrevida. Nesse cenário, surgem os estudos com biomarcadores, sendo a saliva cada vez mais reconhecida como um excelente veículo diagnóstico, uma vez que pode ser coletada de forma simples e não invasiva. Nesse contexto, esse trabalho propõe-se a avaliar a expressão proteica do CA 15.3 na saliva e no sangue de pacientes com câncer de mama e de controles saudáveis. Assim, avaliou-se as concentrações séricas de CA 15.3 pelo ensaio de eletroquimioluminescência, quanto as concentrações salivares de CA 15.3 por ensaios de quimioluminescência e ELISA. O trabalho também correlacionou os níveis de CA 15.3 séricos e salivares com o estadiamento e com o perfil molecular do câncer de mama. A validação diagnóstica foi realizada, determinando sua sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e acurácia. Os resultados mostraram que as concentrações séricas e salivares de CA 15.3 não foram capazes de discriminar pacientes saudáveis de pacientes portadoras de câncer de mama. A associação entre os níveis séricos e salivares do CA 15.3 com o perfil molecular e com estadiamento foi negativa. Ainda, o desempenho do método de ELISA para quantificação do CA 15.3 salivar foi superior quanto à sensibilidade, VPP, VPN e acurácia comparativamente ao método de quimioluminescência. Porém, a quimioluminescência das amostras de saliva mostrou melhor desempenho quanto à especificidade em comparação ao método ELISA. Não foi observada correlação entre os níveis séricos e salivares de CA 15.3. Esse estudo confirmou a presença do CA 15.3 na saliva, podendo a mesma ser usada em estudos futuros com esse propósito. No entanto, não foi possível comprovar a utilização do biomarcador CA 15.3 na saliva para finalidade diagnóstica. Futuras investigações devem incluir maior número de pacientes e ampliação dos ensaios e biomarcadores para responder a essa pergunta, bem como, sua utilização para fins prognósticos e monitoramento de tratamento deve ser avaliada em estudos longitudinais. / Breast cancer is the second most diagnosed neoplasia in the world and the leading cause of cancer-related death in women. Its early detection offers the promise of a less aggressive treatment and increases survival’s chance. In this scenario, the research with biomarkers appear and saliva is increasingly being recognized as an excellent mean of diagnosis, once it can be collected in a simple and non-invasive way. In this context, this work proposes to evaluate the protein expression of CA 15.3 in saliva and blood of patients with breast cancer and healthy controls. Therefore, CA 15.3 serum concentrations were evaluated through electrochemiluminescence assay and CA 15.3 salivary concentrations per chemiluminescence and ELISA assay. The work also correlated the serum and salivary levels of CA 15.3 with the staging and the molecular profile of the breast cancer. The diagnosis validation was made in order to determine its sensitivity, specificity, PPV, NPV, and accuracy. The results showed that the serum and salivary concentrations of CA 15.3 were not able to distinguish healthy patients from the ones with breast cancer. The association of the serum and salivary levels of CA 15.3 with the molecular profile and the staging was negative. Still, the performance of ELISA assay for quantification of salivary CA 15.3 was higher for sensitivity, PPV, NPV, and accuracy when comparing to chemiluminescence assay. However, the chemiluminescence of the saliva samples showed a better performance in terms of specificity when comparing to ELISA assay. No correlation between serum and salivary levels of CA 15.3 was observed. This study confirmed the presence of CA 15.3 in saliva and it can be used in future researches with this purpose. However, it was not possible to prove the use of the biomarker CA 15.3 in saliva for diagnosis purposes. Future investigations must include a bigger number of patients and an expansion of the tests and biomarkers in order to answer this question. As well as, their use for prognostic purposes and treatment monitoring must be evaluated in longitudinal studies.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-04-07T17:08:39Z No. of bitstreams: 1 2017_MarinaCarvalhoSampaio.pdf: 2776388 bytes, checksum: 6a5e2f3ef65035e4f81b2d767ddede73 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-04-13T12:25:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_MarinaCarvalhoSampaio.pdf: 2776388 bytes, checksum: 6a5e2f3ef65035e4f81b2d767ddede73 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-13T12:25:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_MarinaCarvalhoSampaio.pdf: 2776388 bytes, checksum: 6a5e2f3ef65035e4f81b2d767ddede73 (MD5) / O câncer de mama representa a principal causa de mortalidade no Brasil e é a enfermidade com maior taxa de diagnósticos entre as mulheres no mundo. É uma doença que apresenta várias peculiaridades como a resistência às terapias. Há cerca de 20 subtipos e os tratamentos mais comuns são cirurgia, radioterapia e quimioterapia. Entretanto, ou são mutiladores ou levam a severos efeitos adversos e não são específicos, já que também atingem células saudáveis. Para contornar estes fatores, os nanomedicamentos estão em ampla fase de pesquisa e estudo. São medicamentos na escala nanométrica e, devido a características ópticas, físico-químicas, eletrônicas e à capacidade de se ligarem a anticorpos, são medicamentos inovadores para conduzir o princípio ativo até o sítio de ação. Nanoemulsões são um dos tipos de nanomedicamentos e podem ser empregadas como adjuvantes na terapia contra o câncer de mama, pois conseguem aumentar a biodistribuição e manter o nível estável da concentração de medicamentos no organismo. Como a flora brasileira é ainda pouco estudada para o desenvolvimento de medicamentos e por apresentar uma elevada taxa de antioxidantes, o óleo do fruto da palmeira de buriti (Mauritia flexuosa) foi avaliado no presente trabalho. Foram desenvolvidos quatro tipos de nanoemulsões à base deste óleo com sucesso e boa estabilidade a 4ᵒC. Ensaios de viabilidade celular em células de câncer de mama apresentaram uma citotoxicidade bastante significativa da nanoemulsão de óleo de buriti sem adição de polímeros ou fosfolipídio em sua superfície (BuNE-) e da nanoemulsão de óleo de buriti com fosfolipídio 1,2- dioleoyl-sn-glycero-3-trimethylammonium propane (BuNE+DOTAP), enquanto que em células saudáveis de fibroblasto apresentaram um aumento da viabilidade celular. Portanto, demonstram um potencial para um novo medicamento cicatrizante. Corroborando com o ensaio de viabilidade celular em células de câncer de mama, o teste de exposição à fosfatidilserina demonstrou que estas nanoemulsões levam à morte celular por meio de apoptose ou apoptose tardia. Estas nanoemulsões não levaram à fragmentação do ADN, a alteração do potencial de membrana mitocondrial e lesão de membrana plasmática em células de câncer de mama. A BuNE- alterou o padrão do ciclo celular: houve um aumento de células na fase S enquanto que houve uma diminuição na quantidade de células na fase G2/M. Pode-se concluir do presente trabalho que nanoemulsões à base de buriti foram desenvolvidas com sucesso, são estáveis e apresentam um potencial para um novo tratamento adjuvante contra o câncer de mama. / Breast cancer is the major cause of diagnosis among women worldwide and the major cause of mortality of Brazilian women. It is a disease that presents diverse peculiarities as the resistance to the therapies. The most common treatments are surgery, radiotherapy and chemotherapy. However, they lead to severe adverse effects and are not specific to the cancer cells. To avoid these pecualities, nanomedicine is the key. They are drugs at the nanometer scale and due to their physical, physicochemical, electronic and characteristics, they are innovative and can drive the drug directly to the cancer. Nanoemulsions, which are one of the tools of nanomedicine, can be used as adjuvants in breast cancer therapy because they can increase drug biodistribution. There are few studies about Brazilian flora for the development of new drugs. Buriti (Mauritia flexuosa), which is the most abundant palm in Brazil, was evaluated in the presente study. Four types of nanoemulsions based on buriti oil were successfully developed and presented stability at 4 ° C. Cell viability assays in breast cancer cells showed a high cytotoxicity of buriti oil nanoemulsions (BuNE- and BuNE+DOTAP), whereas in fibroblasts, cell viability was higher. As a result, these nanoemulsions demonstrate a potential for a new cicatrization medicine. Corroborating with cell viability assay in breast cancer cells, Anexin VFITC assay demonstrated that these nanoemulsions lead to cell death through apoptosis or late apoptosis. There were no DNA fragmentation, alteration of mitochondrial transmembrane potencial nor lesion of plasma membrane in breast cancer cells. BuNE- altered the cell cycle pattern: there was an increasement of cells in S phase whereas there was a reduction in the amount of cells in the G2 / M phase. It can be concluded that buriti oil nanoemulsions were developed successfully and are stable. In addition, they have the potential for a new adjuvant treatment against breast cancer.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-05-11T18:07:41Z No. of bitstreams: 1 2017_KatherinedeSouzaRodrigues.pdf: 1435247 bytes, checksum: 20a2e26006858194d3ebf9aa5289e1d8 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-05-16T18:10:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_KatherinedeSouzaRodrigues.pdf: 1435247 bytes, checksum: 20a2e26006858194d3ebf9aa5289e1d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T18:10:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_KatherinedeSouzaRodrigues.pdf: 1435247 bytes, checksum: 20a2e26006858194d3ebf9aa5289e1d8 (MD5) Previous issue date: 2017-05-16 / O câncer de mama é o mais comum em mulheres e é responsável por 23% dos novos casos de câncer. O seu diagnóstico precoce assume papel decisivo para um melhor prognóstico devido à sua etiopatogenia complexa e multifatorial, já que não pode ser prevenido. Desta forma, os esforços para melhoria dos indicadores do câncer de mama são direcionados na busca por medidas que antecipem seu diagnóstico. A telomerase, uma enzima importante no processo de carcinogênese, está presente na maioria dos tumores e apresenta indícios de ser um bom marcador molecular, por isso deve ser estudada para avaliar sua relação com o câncer de mama. Este estudo analisou o polimorfismo rs2736100 da telomerase em pacientes com câncer de mama e testou a correlação de tais dados com o prognóstico e variáveis clínicas diversas. Para isso, o DNA de pacientes com câncer de mama foi extraído, submetido a PCR com os primers da região do polimorfismo e sequenciado. Ao todo, 119 pacientes com câncer de mama aceitaram participar do estudo. Foi encontrada associação em diversas características gerais do paciente (altura, idade e IMC) e características do tumor (RE, RP e Ki67), reafirmando a importância deles na clínica para a definição do melhor e mais fidedigno prognóstico. Através do sequenciamento foi identificada a região do polimorfismo rs2736100 da telomerase em 63 amostras, divididos entre aqueles com detecção do genótipo GG e AG. Foi encontrada uma deleção em 11,11% da população estudada que ainda não foi relatada na literatura. Nosso estudo demonstrou que este polimorfismo tem algumas associações com variáveis clínicas e de prognóstico do câncer de mama. Entretanto, para o polimorfismo rs2736100 da telomerase ser utilizado como marcador prognóstico no câncer de mama estudos mais detalhados devem ser realizados para confirmar seu valor clínico. / Breast cancer is the most common in women and accounts for 23% of new cases of cancer. Its early diagnosis plays a decisive role for a better prognosis because of its complex and multifactorial etiopathogenesis, which can not be prevented. Thus, efforts to improve indicators of breast cancer are targeted seeking measures that anticipate their diagnosis. Telomerase, an important enzyme in the carcinogenesis process, is present in most tumors and shows signs of being a good molecular marker, so it should be studied to evaluate its relationship with breast cancer. This study analyzed the rs2736100 polymorphism of telomerase in breast cancer patients and tested the correlation of such data with the prognosis and various clinical variables. For this, the DNA of patients with breast cancer was extracted, subjected to PCR with primers and sequenced region of the polymorphism. In all, 119 breast cancer patients agreed to participate in the study. An association was found in several general patient characteristics (height, age and BMI) and tumor characteristics (ER, PR and Ki67), reaffirming their importance in clinical settings for the definition of the best and most reliable prognosis. Through sequencing the telomerase rs2736100 polymorphism region was identified in 63 samples, divided among those with GG and AG genotype detection. A deletion was found in 11.11% of the studied population that has not yet been reported in the literature. Our study demonstrated that this polymorphism has some associations with clinical and prognostic variables of breast cancer. However, for the rs2736100 polymorphism of telomerase to be used as a prognostic marker in breast cancer more detailed studies should be performed to confirm its clinical value.