The mammary gland cell growth and differentiation are under the control of both systemic hormones and locally produced growth factors. Among all these important hormones and growth factors, estrogen plays a central role in mammary gland development. The biological function of estrogen is mediated by estrogen receptor α (ERα) and estrogen receptor β (ERβ). Both ERα and ERβ are expressed in the mammary gland, but with distinct expression patterns. In the mammary gland, ERα has been proved to be the estrogen receptor that mediates the mitogenic function of estrogen. However the function of ERβ in mammary cell proliferation is less understood and there remains some controversy. Accumulating evidence indicates that ERβ, unlike ERα, is a negative regulator of mammary epithelial cell proliferation. In this dissertation, ERα and ERβ were evaluated for their expression patterns in the mammary gland. In the proestrus phase, ERα was detected in about 20% of mammary epithelial cells; in the diestrus phase, no ERα staining was detected in the mammary gland. ERβ was expressed in more than 50% of mammary epithelial cells and ERβ staining was detected in some stromal cells in the proestrus phase. In the diestrus phase, ERβ staining cells were very limited and the staining intensity was very weak. These data suggest that the expression levels of both ERα and ERβ undergo dynamic changes during the estrous cycle. In the ovariectomised (OVX) rats, both ERα and ERβ were detected in more than 50% of mammary epithelial cells. Compared with the ovary-intact rats, the mammary gland of the OVX rats showed more cells with ERα expression, but the staining intensity was weaker. Taken together, the expression of ERα and ERβ is regulated by estrogen in normal mammary gland, while without estrogen stimulation in the OVX rats, more mammary cells showed ERα expression, but at a lower level in these cells. The effects of ERα and ERβ on mammary cell proliferation were studied by two different approaches, activation of endogenous ERα and ERβ via selective agonists, and overexpression of ERα and ERβ via lentiviral infection. In the first approach, we used ERα and ERβ selective agonists, propylpyrazole-triol (PPT) and diarylpropionitrile (DPN) respectively, to activate endogenous ERα and ERβ in the OVX rats. We found that ERβ selective agonist DPN counteracts the proliferative effect of ERα selective agonist PPT in the mammary gland. In the second approach, ERα and ERβ were ectopically overexpressed in the mammary gland of mature virgin rats by lentivirus infection. We found that ERβ overexpression significantly decreased mammary cell proliferation rate in both the proestrus and diestrus phases, indicating that ERβ, unlike ERα, is a negative regulator for mammary cell proliferation. Collectively, these data supports that in contrast to ERα, ERβ activation or overexpression is able to inhibit mammary cell proliferation.

The goal of my thesis was to evaluate origin of mastisis diseases and specify the best way to cure this disease with antibiotics. Secondary goal was to examin origin of things that cause these diseases, efficiency of the cure and how it is influenced by the stage of the illness. This research was made in cowshed, fron april to december 2018 with 136 specimen. During this period I took samples of milk, that had more than 800 000 somatic cells in 1ml of milk. Based of possitve NK test, samples of mammary gland were taken and cultivated on one used only Petri dish. Depending of the origin of the infection, the proper atibitics were chosen for the cure. After 7 to 14 days after antibiotics treatment, milk sample was taken from the cured part od mammary gland and It was tested to see, if the treatment was successful. 77% of the specimen were sick because of microorganisms and most of the specimen were afflicted the most during 1st lactation (36.8% to 47.1%). Following microorganisms caused mastisis - Staphylococcus spp. (KNS), Streptococcus uberis, Klebsiella oxytoca, Escherichia coli, Candida rugosa a Enterococcus faecalis. 36% of mastisis was caused by Staphylococcus spp. (KNS), followed by coliform bacteria (22%). 17% of mastisis was caused by Streptococcus uberis. 10.5% of specimen was infected by Enterococcus faecalis. Candida rugosa was found in 7.4% of the samples and in 9.5% of samples the diseasehad no specific microorganism responsible. From 105 infected cows, 68% of them fully recovered. At the end, based on the stage of the mastisis, efectivness of the treatmend was statistically evaluated. The evaluation showed, that stage of infection massively influence the result of the treatment.

A sinalização da matriz extracelular (MEC) é essencial para a determinação do destino e comportamento de células epiteliais da glândula mamária. Entretanto, pouco é conhecido sobre os mecanismos moleculares envolvidos nesse processo. A via Hippo, uma cascata de sinalização que participa da regulação de diversos comportamentos celulares, incluindo o tamanho de órgãos, parece ser uma importante candidata a mediadora sinalização da MEC. Resultados preliminares do laboratório indicam que a arquitetura tecidual e a membrana basal, componente da MEC de epitélios e outros tecidos, influenciam a localização, concentração e atividade de YAP, uma proteína efetora da via Hippo, em células epiteliais mamárias. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi identificar as proteínas que interagem com Yap (ortólogo de YAP em camundongo) nas células epiteliais da glândula mamária em resposta à membrana basal. Foram utilizadas células EpH4, uma linhagem mamária não-tumoral murina, como modelo de diferenciação funcional e formação de ácinos em um ensaio de cultura tridimensional (3D). O tratamento de estruturas multicelulares 3D pré-formadas em placas nãoadesiva com uma matriz rica em laminina (lrECM) alterou a localização e o padrão subcelular de Yap, assim como a expressão gênica de membros da via Hippo e dos alvos de Yap, mas não alterou a expressão das proteínas da via em nível de proteína. O ensaio de co-imunoprecipitação (CoIP) seguida de análise por espectrometria de massas identificou um conjunto diferencial de proteínas que interagem com Yap na fração citoplasmática de células EpH4 cultivadas na ausência ou na presença de lrECM em um modelo de ECM-overlay. Uma análise realizada junto à database KEGG Pathways revelou que os possíveis interagentes Yap nas células cultivadas não-tratadas com lrECM participam de processos relacionados à proteólise mediada por ubiquitina, enquanto nas células expostas à lrECM os possíveis interagentes estão associados a processos metabólicos e são especialmente proteínas-chave do metabolismo de lipídios. A busca na plataforma de redes de interação STRING não identificou trabalhos que destaquem a interação de Yap com estas proteínas. A plataforma Vizit indica a participação de Yap em processos relacionados à síntese e atividade de lipídios e hormônios, o que reforça as evidências de que está pode ser uma nova função de Yap ainda não explorada em detalhes. A fim de se obter resultados complementares à CoIP, padronizamos o ensaio de identificação por biotinilação dependente de proximidade (BioID) em células embrionárias de rim humano da linhagem 293FT. As proteínas isoladas por pulldown foram identificadas por espectrometria de massas e uma análise junto à database Gene Ontology indicou que os possíveis interagentes de Yap nestas células são em sua maioria proteínas relacionadas à via Hippo, o que reforça a robustez do ensaio. Nós pretendemos transpor este sistema para as células EpH4. A expectativa é que, em conjunto, estes resultados nos orientem em projetos futuros para compreender os mecanismos de sinalização da MEC na morfogênese e diferenciação da glândula mamária. / Extracellular matrix (ECM)-signaling is crucial for determination of epithelial cell fate and behavior in the mammary gland. However, little is known about the molecular mechanisms involved in these processes. The Hippo pathway, a signaling cascade involved in the regulation of several cellular processes, including organ size, seems to be an important candidate as a mediator of this signaling. Our preliminary results indicate that the tissue architecture and the basement membrane, an ECM component of epithelia and other tissues, influence the location, level and activity of YAP, an effector of the Hippo pathway. In this context, the goal of this work was to identify the proteins that interact with Yap (ortholog of YAP in mouse) in mammary epithelial cells in response to the basement membrane. We used EpH4 cells, a nontumoral murine mammary cell, in a functional differentiation and acini-forming in tridimensional (3D) culture assay. Treatment of 3D multicellular structures pre-formed on nonadhesive plates with a laminin-rich extracellular matrix (lrECM) altered the subcellular localization and pattern of Yap, as well as gene expression of Hippo pathway proteins and Yap targets, but did not altered the expression of the pathway members at the protein level. Coimmunoprecipitation (CoIP) followed by mass spectrometry analysis identified a differential set of proteins interacting with Yap in cytoplasmic fractions of EpH4 cells in the absence or presence of lrECM in an ECM-overlay culture model. An analysis performed with the KEGG Pathways database revealed that putative Yap interactors in non-treated cells participate in processes related to ubiquitin-mediated proteolysis, whereas in cells exposed to lrECM Yap interactors are associated to metabolic processes and are mainly key-proteins of metabolism of lipids and carbohydrates. A search in interaction networks platform STRING did not identify previous works that showing the interaction of Yap with these proteins. Vizit platform indicated the participation of Yap in processes related to the synthesis and activity of lipids and hormones, which reinforces the evidences that Yap can play a novel poorly explored role. To obtain complementary results to CoIP, we devised the proximity-dependent biotinylation identification (BioID) assay on embryonic renal cells of 293FT cell line. Pulldown-isolated proteins were identified by mass spectrometry and an analysis performed with Gene Ontology database revealed that putative Yap interactors are Hippo pathway-related proteins, which reinforces the robustness of the assay. We intend to transpose this system to the EpH4 cells. We expect that, together, these results will guide us in future projects to understand the signaling mechanisms of ECM in mammary gland morphogenesis and differentiation.

Orientador: Helio Langoni / Resumo: A mastite bovina é responsável por grandes perdas econômicas na bovinocultura de leite, além de aspectos de saúde pública que devem também ser considerados. Animais com mastite clínica ou subclínica apresentam diversas alterações reprodutivas. No primeiro artigo da tese, os resultados obtidos demonstraram que a mastite causada por patógenos maiores (20,1%) ou por gram-negativos (15,4%) levaram a queda na taxa de prenhez na primeira inseminação comparado com o grupo controle (32,6%). Foi observado maior taxa de perda gestacional para os grupos de patógenos maiores (22,2%) e gram-negativos (30,1%) comparados com o controle (12,8%). Foi observado diferença entre todos os grupos para o número de dias em aberto. O grupo controle apresentou o menor intervalo (126,5 dias) seguido pelo grupo patógenos menores (162,0 dias) e pelo grupo de patógenos maiores (175,1 dias). Comportamento similar observado para patógenos gram-positivo (172,7 dias) e patógenos gram-negativos (191,1 dias). Portanto, é importante controlar a mastite em rebanhos leiteiros e, para tanto, o diagnóstico é uma etapa importante. Diferentes proteínas de fase aguda foram descritas como bons biomarcadores para o diagnóstico da mastite. No segundo artigo da tese, foi observado que diferentes patógenos podem alterar a liberação de proteínas de fase aguda no leite. Bactérias que causam inflamações mais graves (E. coli e Klebsiella pneumoniae) levaram maior concentração das APP. Patógenos que causam infecções crônica (Str... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bovine mastitis is responsible for major economic losses in dairy cattle farming, as well as public health aspects that should also be considered. Animals with clinical or subclinical mastitis present several reproductive alterations. In the first article of this thesis, the results showed that mastitis caused by major pathogens (20.1%) or gram-negative (15.4%) led to a decrease in pregnancy rate in the first insemination compared to the control group (32.6%). Higher gestational loss rates were observed for the major (22.2%) and gram-negative (30.1%) pathogen groups compared with the control (12.8%). The difference was observed between all groups for the number of days open. The control group had the shortest interval (126.5 days) followed by the minor pathogens group (162.0 days) and the major pathogens group (175.1 days). Similar behavior observed for gram-positive pathogens (172.7 days) and gram-negative pathogens (191.1 days). Therefore, it is important to control mastitis in dairy herds and, so, diagnosis is a critical step. Different acute phase proteins have been described as good biomarkers for the diagnosis of mastitis. In the second article of this thesis, it was observed that different pathogens may alter the release of acute phase proteins in milk. Bacteria that cause more severe inflammation (E. coli and K. pneumoniae) led to a higher concentration of APP. Pathogens causing chronic infections (Environmental Streptococcus, S. aureus, Mycoplasma spp.) led to interm... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Resumo: O estudo dos tumores mamários em cadelas revela-se um excelente modelo para a investigação clínico-patológica, diagnóstica e prognóstica de neoplasias mamárias. As interleucinas desempenham um papel fundamental no câncer, em especial a interleucina-8 (IL-8), que possui propriedades tumorigênicas e pró-angiogênicas e a interleucina-12 (IL-12), com propriedades anti-metastáticas e anti-angiogênicas. O marcador tumoral antígeno-carboidrato (CA 15-3) tem importante significado clínico no seguimento de pacientes com neoplasia mamária. Além disso, o DNA livre circulante de células tem sido considerado um candidato a biomarcador para tumores. Assim, foram objetivos deste estudo mensurar os níveis séricos das proteínas IL-8, IL-12, CA 15-3, bem como estimar o número de cópias das sequências CAN SINEs relacionando-os aos parâmetros clínico-patológicos e a sobrevida do grupo a fim de inferir o possível valor prognóstico desses marcadores para o câncer de mama. Através do ensaio imunoenzimático e da técnica de PCR em tempo real foram avaliadas 33 cadelas com neoplasia mamária e 50 cadelas controle e suas concentrações foram estatisticamente relacionadas aos parâmetros estabelecidos. Foi encontrada diferença significante entre os níveis séricos de IL-8 nas cadelas com neoplasia mamária quando comparadas ao grupo controle e além disso, verificou-se aumento de IL-8 em relação à evolução tumoral, ao envolvimento linfonodal, recidiva e óbito. Baixos níveis de IL-12 foram observados em cadelas com tumores com maior tempo de evolução, cadelas com idade superior a 10 anos e, além disso, a alta taxa de sobrevida teve correlação com níveis elevados de IL-12. Assim, o aumento da IL-8 e a diminuição da IL-12 podem ser considerados marcadores prognósticos independentes confirmando seu papel como citocina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:The study of mammary tumors in dogs appears to be an excellent model to investigate the clinical and pathological diagnosis and prognosis of breast cancer. Interleukins play a key role in cancer, particularly interleukin-8 (IL-8), which have tumorigenic and pro-angiogenic properties and interleukin-12 (IL-12), with anti-metastatic and anti-angiogenic properties. The tumor marker carbohydrate antigen (CA 15-3) also has important clinical significance in monitoring patients with breast cancer. In addition, free circulating DNA has been considered a candidate biomarker for cancer. The objectives of this study were to measure serum levels of protein IL-8, IL-12, CA 15-3 and to estimate the number of copies of CAN SINEs sequences relating them with clinicopathological parameters and survival of the group, in order to infer a likely value as prognostic markers in breast cancer. Through enzyme immunoassay and real-time PCR were evaluated 33 dogs with mammary cancer and 50 control dogs and their concentrations were statistically related with these parameters. Significant difference was found between IL-8 serum levels in bitches with mammary neoplasia in relation to the control group and in relation to disease progression, the lymph node involvement and in relation to death. Low levels of IL-12 were observed in female dogs with tumors with a longer evolution, aged 10 years and in addition, the high survival rate was correlated with high levels of IL-12. Thus, increased IL- 8 and decreased IL-12 can be considered independent prognostic markers which confirm their role as tumorigenic and anti-tumorigenic cytokines, respectively. For the CA 15-3 were found higher levels in dogs with lymph node involvement and poor survival of the group. In estimating the number of copies of CANSINEs, significant difference was found regarding the parameters indicators of poor prognosis and low survival. Our results... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Resumo: Os tumores mamários da espécie canina prestam-se como modelos apropriados, e válidos, ao estudo da biologia do câncer. O estudo de marcadores prognósticos e preditivos no câncer tem se mostrado efetivo na pesquisa e rotina diagnóstica. Dentre esses marcadores, destacam-se os envolvidos no estresse oxidativo e alterações na capacidade antioxidante celular, que desempenham papel fundamental na patogênese do câncer. A glutationa (GSH) é um dos agentes mais importantes do sistema de defesa antioxidante da célula, pois em conjugação com as enzimas glutationa peroxidase (GSH-Px) e glutationa S transferase pi (GSTpi) desempenha um papel central na biotransformação e detoxificação de drogas quimioterápicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da proteína GSH e das enzimas GSTpi e GSH-Px por imunohistoquímica em tumores de mama em cadelas, a fim de inferir o seu valor prognóstico, e validar por análise molecular, verificando a resistência das células neoplásicas ao quimioterápico, bem como o nível de estresse oxidativo avaliado bioquimicamente pelo malondialdeído (MDA), e a avaliação da atividade antioxidante total em equivalência ao Trolox (TEAC) . As proteínas foram detectadas no tecido tumoral de 30 cadelas por imunohistoquímica e quantificadas pela técnica de densitometria óptica. As médias relacionadas à expressão das proteínas foram estatisticamente comparadas com as características clínico-patológicas das cadelas. A expressão dos genes glutamato cisteina ligase (GCLC) e glutationa sintetase (GSS) que sintetizam a GSH e do gene GSH-Px foi verificada por qPCR em células neoplásicas de mama cultivadas e submetidas ao tratamento com doxorrubicina. A dosagem sérica do MDA e TEAC foi realizada em cadelas no momento da cirurgia, um, seis e 18 meses após... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The mammary tumors of canine species lend themselves as models appropriate, and valid, to study of cancer biology. The study of prognostic and predictive markers in cancer have been proven effective in research and diagnostic routine. Among these markers include those involved in oxidative stress and changes in antioxidant capacity, which play a fundamental role in the pathogenesis of cancer. Glutathione (GSH) is one of the most important agents of the antioxidant defense system of the cell because in conjunction with glutathione peroxidase (GSH-Px) and glutathione S transferase pi (GSTpi) plays a central role in the biotransformation and detoxification of drugs chemotherapy. The objective of this study was to evaluate the protein expression of GSH and the enzymes GSH-Px and GSTpi by immunohistochemistry in breast tumors of dogs in order to infer its prognostic value, and prospective study to evaluate them by molecular analysis, verifying the resistance of cancer cells to chemotherapy, as well as the level of oxidative stress assessed biochemically by malondealdehyde (MDA), and the evaluating the total antioxidant activity equivalent to Trolox (TEAC). The proteins were detected in tumor tissue of 30 female dogs by immunohistochemistry and quantified by optical densitometry technique. The mean expression of related proteins were statistically compared with the clinical- pathologic of the bitches. The expression of genes glutamate cysteine ligase (GCLC) and glutathione synthetase (GSS) that synthesize GSH and of GSH-Px gene was verified by qPCR in breast cancer cells grown and subjected to treatment with doxorubicin. The serum dosage of MDA and TEAC was performed in betches at the time of surgery, one, 6 and 18 months after surgery and compared with dogs in the control group. The results showed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A avaliação de linfonodos é parte importante do estadiamento das neoplasias mamárias, muito comum em cadelas, podendo auxiliar no estabelecimento do prognóstico e na escolha da melhor conduta terapêutica. Neste trabalho, dentre as várias técnicas de exame que permitem a avaliação de linfonodos, foi utilizada a ultra-sonografia. A avaliação ultra-sonográfica em modo B possibilitou avaliar tamanho, contorno, borda, forma, arquitetura, ecotextura e ecogenicidade do parênquima dos linfonodos e, em modo Doppler, a quantidade e distribuição dos seus vasos internos. Os objetivos deste trabalho foram identificar as características ultra-sonográficas mais importantes utilizadas para classificar os linfonodos em metastáticos e não-metastáticos, estabelecer elementos de confiabilidade do ultra-som como ferramenta para diferenciar linfonodos metastáticos de não-metastáticos e estabelecer procedimentos que permitam ao exame ultra-sonográfico de linfonodos, para essa classificação, ser reprodutível. Foram examinados 63 linfonodos inguinais superficiais de 30 cadelas com tumor em pelo menos uma das mamas inguinais ou abdominais caudais. Após o exame, cada linfonodo foi classificado como metastático ou não-metastático. A impressão diagnóstica do exame ultra-sonográfico foi associada aos resultados do exame histopatológico dos linfonodos obtendo-se uma taxa de concordância de 92,5%, índice de sensibilidade de 94,1%, índice de especificidade de 92%, valor preditivo positivo de 0,8 e valor preditivo negativo de 0,9787. As principais características ultra-sonográficas que classificaram um linfonodo inguinal superficial como metastático foram o contorno irregular, forma arredondada com razão C/E menor que dois, arquitetura desorganizada, ecotextura homogênea ou heterogênea, ecogenicidade alterada, vascularização elevada e de localização periférica. Quanto aos linfonodos não-metastáticos, as principais características ultra-sonográficas identificadas foram contorno regular, forma ovalada com razão C/E maior que dois, arquitetura preservada, ecotextura preservada, ecogenicidade normal, vascularização discreta a pequena e de localização hilar. O exame ultra-sonográfico dos linfonodos regionais constitui importante ferramenta na detecção de metástase e sugere-se incluí-lo como rotina do estadiamento de neoplasias mamárias em cadelas. / The evaluation of lymph nodes is an important part of the staging in case of mammary tumors, which are very common in female dogs. It can help in establishing a prognosis and chosing the best therapeutic procedures. In this study we used ultrasonography to assess lymph nodes within a variety of imaging techniques. B mode ultrasonography was used to provide information on size, edge, nodal borders, shape, architecture, echotexture and echogenivity of lymph nodes and Doppler ultrasonography to evaluate the quantity and distribution of the intranodal vessels. The objectives of this work were to identify which features in an ultrasound image can be associated to the metastatic or non-metastatic character of a lymph node; to establish the accuracy of the ultrasound as a tool to differentiate between metastatic and non-metastatic behavior and to establish procedures that permit the reproducibility of the results. Sixty three lymph nodes in thirty female dogs with mammary tumors were examined. We chose female dogs that had involvement of at least one of the inguinal or caudal abdominal mammary glands. Ultrasound imaging and histopathological exams were performed for each lymph node. Based on its ultrasound imaging, each lymph node was classified as metastatic or non-metastatic. When the ultrasound diagnostic was matched to the results of the histopathologic exam it was found that the classification of the lymph nodes using ultrasound imaging was correct in 92.5% of the cases, with sensibility of 94.1%, specificity of 92%, positive predictive value of 0.8 and negative predictive value of 0.9787. The main features in an ultrasound image associated with a metastatic superficial inguinal lymph node were irregular edge, round shape with long to short axis ratio lower than 2, loss of internal structure, homogeneous or heterogeneous echotexture, alteration of the echogenicity and high and peripheral vascularity. Relating to non metastatic lymph nodes, the main ultrasonographic characteristics were regular edge, oval shape with long to short axis ratio higher than 2, maintenance of internal structure, normal echo genetics and low hilar vascularity. The ultrasound imaging of regional lymph nodes is an important tool to detect metastasis and it is suggested that it becomes a regular procedure in the staging of canine mammary tumors.

A neoplasia mamária é a doença mais entre as neoplasias em cadelas. As características clínicas dos tumores mamários caninos e sua relação com prognóstico foram discutidos, incluindo idade, raça, estagiamento clínico, diagnóstico histopatológico, hormônios e proliferação celular. Fatores clínicos prognósticos incluindo diâmetro do tumor e comprometimento linfonodal são discutidos em relação a graduação histopatológica e expressão de OCT4 (marcador para célula tronco tumoral). Avaliação imunohistoquímica dos marcadores (RE, RP, Ki-67 e OCT4) de neoplasias mamárias foi descritas. Foi observada marcação positiva para o OCT4, porém não se observou associação com fatores prognósticos clínicos. Assim como a marcação de RE, PR e Ki-67 foram observados. Houve uma forte associação entre graduação histopatológica de malignidade e tipo histológico. / Mammary neoplasms are the most common neoplasm in female dogs. The clinical features of canine mammary gland tumors and their relation to prognosis were discussed, including age, breed, staging, histopathological diagnosis, hormones, cell proliferation. Additional clinical prognostic factors including tumor size, and lymph node status are discussed in relation to graduation histopathological and OCT4 expression (cancer stem cell marker). Immunohistochemical evaluation of the markers (ER, PR, KI-67, OCT4) of the neoplastic canine mammary gland is described. We observed positive staining for OCT4, but was not associated with clinical prognostic factors. And the marking of ER, PR and Ki-67 was observed. There was a strong association between histopathological grade and histological type of malignancy.

A identificação e biópsia do primeiro linfonodo a receber a linfa de uma formação neoplásica, ou seja, do linfonodo sentinela, fornecem informações essenciais para o tratamento e prognóstico de pacientes humanos acometidos por neoplasia. Entretanto, em Medicina Veterinária existem poucos estudos sobre a drenagem linfática dos órgãos e o conceito de linfonodo sentinela ainda não é amplamente aplicado ao tratamento oncológico dos animais. Desta forma, nosso objetivo no presente estudo foi estabelecer um protocolo de aquisição cintilográfica linfática, ou linfocintilográfica, capaz de fornecer informações funcionais e topológicas da drenagem linfática mamária, pois, em cadelas, as glândulas mamárias ainda são uns dos principais órgãos acometidos por neoplasias. Neste estudo, a linfocintilografia foi utilizada para caracterização topológica e funcional in vivo da drenagem linfática de glândulas mamárias sadias de 30 fêmeas da espécie canina (Canis familiares), sem raça definida e peso aproximado de 10 Kg. O radiofármaco [99mTc]-dextran70 foi administrado por via intraparenquimatosa mamária em quatro pontos ao redor da papila (0,1 ml cada), na dose de 18,5 MBq. As imagens foram obtidas em duas seqüências de projeções laterais e ventrais, sendo uma logo após a administração do [99m</SUP Tc]-dextran70 e a outra após uma hora. O radiofármaco administrado nas glândulas mamárias torácicas craniais foi drenado pelos linfocentros torácico ventral e axilar, sendo que em duas destas 5 glândulas (40%) o radiofármaco também foi para o linfocentro cervical superficial. Este resultado foi semelhante para as glândulas torácicas caudais, entretanto, em nenhuma das linfocintilografias destas glândulas o linfocentro cervical superficial foi identificado. A drenagem das glândulas abdominais craniais foi realizada exclusivamente pelo linfocentro axilar. Os linfocentros inguinais superficial e profundo drenaram as glândulas abdominais caudais e inguinais, porém, uma das glândulas abdominais caudais foi drenada também pelo linfocentro cervical superficial e outra pelo linfocentro mediastínico. A técnica linfocintilográfica utilizada possibilitou a identificação de comunicações linfáticas entre os linfonodos axilares próprio e acessório, entre o axilar próprio e o cervical superficial e entre os linfonodos inguinais superficial e profundo. O número de linfocentros e linfonodos, a taxa de drenagem dos linfocentros e seu funcionamento variaram entre as glândulas mamárias e entre os animais. Em conclusão, o protocolo de aquisição linfocintilográfica adotado foi simples, rápido e eficaz para a caracterização da drenagem linfática mamária. As informações topológicas e funcionais obtidas neste estudo poderão ser aplicadas nos procedimentos investigativos como a ultra-sonografia e a biópsia dos linfonodos mamários em pacientes acometidos por neoplasias mamárias, uma vez que os vasos linfáticos representam vias de disseminação para células neoplásicas. / The knowledge of lymphatic drainage has prognostic and surgical value for oncological treatment. Once you know the lymph nodes that drain the organ, you can predict the possible neoplasic cell route and avoid or predict metastasis. The lymphoscintigraphy is not common in Veterinary Nuclear Centers, however this technique has high applicability in oncological studies. During this study, the lymphoscintigraphie was used to characterize topological and functional aspects of lymphatic health mammary drainage in 30 adult mongrel female dogs, 10Kg in weigh. Lymphoscintigraphies were performed immediately after 4 intramammary peripapilare injections (0, 1 ml each) of 18,5 MBq of [99mTc]-dextran70 and one hour later. Animals were imaged by lateral and ventral projections. Cranial thoracic glands were drained by ventral thoracic and axillary lymph centers, but we observed the simultaneous participation of superficial cervical lymph center in 40% of these (2 animals). This result was similar for caudal thoracic mammary glands, but not for cervical lymph center drainage, that was not observed in caudal thoracic glands lymphoscintigraphies. Cranial abdominal glands were drained exclusively by the axillary lymph center. Superficial and deep inguinal lymph centers drained caudal abdominal and inguinal mammary glands, but we observed one superficial cervical lymph center participation in a caudal abdominal mammary gland drainage. Our lymphoscintigraphic technique provided image of lymphatic communication between axillary lymph nodes and between superficial and deep inguinal lymph nodes. The number of lymph centers and lymph nodes, the lymph center drainage rate and functional behavior of each lymph nodes were variable. In conclusion, the lymphoscintigraphic protocol performed was simple, quickly and provided the lymphatic drainage characterization. Technique, topologic and functional information provided by the present study can be applied to understand neoplasic mammary cells dissemination routes, which has prognostic and treatment value for patients. Veterinary centers that have no Nuclear Medicine facilities can use these topologic and functional information of the present study in other diagnostic procedures such as the abdominal ultra-sound and lymph node biopsy of patients with mammary neoplasia.

Em animais, a prevalência do câncer tem aumentado de forma significativa com o passar dos anos. As neoplasias mamárias representam o tipo mais frequente de câncer em cadelas, chegando a 52% da população de fêmeas, e entre os animais afetados, 50% das neoplasias se apresentam sob a forma maligna. O desenvolvimento e caracterização de modelos animais para o estudo de neoplasias humanas é de extrema relevância para a melhoria no diagnóstico e tratamento do câncer. Os tumores sólidos apresentam uma hierarquia entre as células que determina o desenvolvimento e o comportamento da neoplasia. Recentemente, tem-se estudado um pequeno grupo de células que apresentam diversas características das células-tronco normais encontradas nos tecidos. Estas células, denominadas Células Iniciadoras de Tumor (CITs), são descritas como sendo as principais responsáveis pelas falhas na quimioterapia e no aparecimento de recidivas tumorais, devido ao grande potencial de renovação e diferenciação que elas possuem. Desta maneira, nosso objetivo foi caracterizar linhagens celulares provenientes de neoplasia de glândula mamária de cadelas que pudessem ser utilizadas futuramente na pesquisa básica e aplicada em oncologia comparada. Além das alterações citogenéticas e imunocitoquímicas, verificamos que os cultivos celulares apresentaram quantidades distintas de populações positivas e negativas quanto à expressão de CD24 e CD44 bem como da atividade de aldeído-desidrogenase, porém, todos exibiram potencial tumorigênico in vitro através do ensaio de formação de tumoresferas / The prevalence of cancer in animals has increased significantly over the years. Mammary tumors are the most common cancer in dogs, reaching 52% of female population, and among affected animals, 50% of tumors are presented in the malignant form. The development and characterization of animal models for the study of human cancers is extremely important for improving the diagnosis and treatment of cancer. Solid tumors have a hierarchy of cells that determines the development and behavior of cancer. Recently, there has been studied a small group of cells with different characteristics from those normal stem cells found in tissues. These cells, known as tumor initiating cells (TICs), are described as being primarily responsible for the failures in chemotherapy and the appearance of recurrences, because of their potential for renewal and differentiation. Thus, our objective was to characterize cell lines derived from mammary gland neoplasia of dogs that could be further used for basic and applied research in comparative oncology. In addition to the cytogenetic and immunocytochemical changes, we found that cell cultures had different amounts of positive and negative populations of CD24 and CD44 expression and aldehyde dehydrogenase activity, however, all exhibited tumorigenic potential in vitro through tumorspheres formation