Avaliou-se a eventual atividade quimiopreventiva por parte da vitamina A (VA) quando administrada a ratas Sprague-Dawley durante a etapa de pós-iniciação da carcinogênese mamária induzida pelo 7-12 dimetilbenz(a)antraceno (DMBA). Com exceção de 10 animais que constituíram um grupo controle à parte de ratas consideradas normais [grupo normal (N)], e que não foram submetidas a qualquer procedimento experimental durante todo o estudo, 40 ratas com 50 dias de idade receberam o agente carcinogênico DMBA, por meio de entubação gástrica na dose de 60 mg/kg/peso corpóreo. Após 2 semanas, as ratas iniciadas receberam durante 12 semanas consecutivas, por entubação gástrica, 0,25 mL/100 g de peso corpóreo de óleo de milho (grupo OM; controle, n=20) e 2,5 mg/100 g de peso corpóreo de vitamina A (grupo VA, n=20), sendo, então, eutanasiadas. Não houve diferenças (p>0,05) entre os grupos OM e VA quanto à latência de aparecimento da primeira neoplasia mamária, incidência, multiplicidade e peso médio das neoplasias mamárias, todas classificadas como malignas. Em comparação ao grupo OM, o grupo VA apresentou maior concentração (p<0,05) de retinol no tecido mamário neoplásico e hepático, além de maiores concentrações hepáticas (p<0,05) de palmitato de retinila. Não se detectou palmitato de retinila em neoplasias mamárias de ambos os grupos. Não houve diferença (p>0,05) entre neoplasias mamárias do grupo OM e o tecido mamário do grupo N quanto à metilação global do DNA. Em comparação a neoplasias mamárias do grupo OM, neoplasias do grupo VA apresentaram menor (p<0,05) metilação global do DNA. Conclui-se que a VA não apresentou atividades quimiopreventivas e seu metabolismo encontra-se alterado em neoplasias mamárias. / The potential chemopreventive activity of vitamin A (VA) was evaluated when administered to Sprague-Dawley rats during the stage of post-initiation of mammary carcinogenesis induced by 7-12 dimethylbenz(a)anthracene (DMBA). Except for 10 animals that constituted a separate control group of normal rats [normal group (N)], that were not subjected to any experimental procedure throughout the study, 40 rats with 50 days of age received the carcinogen DMBA by gavage at the dose of 60 mg/kg/body weight. After 2 weeks, the rats received for 12 consecutive weeks, by gavage, 0.25 mL/100 g body weight of corn oil (OM group, control, n = 20) or 2.5 mg/100 g body weight of vitamin A (VA group, n = 20), being then euthanized. There were no differences (p> 0.05) between the OM and VA groups regarding the latency of onset of first breast neoplasm, incidence, multiplicity and average weight of breast tumors, all classified as malignant. Compared to the OM group, the VA group had a higher concentration (p <0.05) of retinol in neoplastic breast tissue and liver as well as higher concentrations (p <0.05) of retinyl palmitate in the liver. Retinyl palmitate was not detected in breast tumors of both groups. There was no difference (p> 0.05) between breast tumours of OM group and mammary tissue of N group regarding global DNA methylation. Compared to breast tumors of OM group, breast tumors of VA group had lower (p <0.05) global DNA methylation. VA did not show chemopreventive activity when administered to rats during the stage of post-initiation of mammary carcinogenesis. Furthermore, the metabolism of VA is altered in breast tumors.

A dose na paciente é uma consideração importante em mamografia e sua medida possibilita avaliar o risco para a paciente, associado à realização desse exame. Para o cálculo da Dose Glandular Média (DGM) que é definida como sendo a dose média absorvida no tecido glandular no interior de uma mama comprimida no exame de mamografia, esta é a grandeza que melhor caracteriza o risco carcinogênico induzido pela radiação ionizante.Valores da DGM podem ser obtidos por métodos que se baseiam na medida do kerma incidente (Ki), associado a fatores de conversão tabelados que dependem da camada semiredutoras, da composição glandular da mama e da espessura da mama comprimida.Visando estes aspectos foi desenvolvido um objeto teste com bolinhas de chumbo ou seja radiopacas inseridos no mesmo, que colocado no momento da irradiação acima da bandeja de compressão, juntamente com espessuras conhecidas de simuladores de mama, após a exposição e processamento da imagem possibilitou a medida da distância entre os pontos na imagem radiológica. Foram desenvolvidos retas de calibrações para que através destas retas possamos chegar ao valor real da espessura do simulador, que representa uma mama comprimida. A metodologia desenvolvida mostrou que através das retas de calibrações podemos chegar aos valores de espessuras conhecidas, portanto chegarmos ao valor de espessura da mama comprimida. / The dose in the patient is an important consideration in mammography and its measure enables evaluating the risk to patients, associated with this examination. For calculating the Average Glandular Dose (AGD) which is defined as the average absorbed dose in the glandular tissue within a compressed breast in a mammogram, this is the greatness that best characterizes the carcinogenic risk of radiation-induced ionizante.The DGM can be obtained by methods based on the measurement of the incident kerma (Ki) associated with the tabulated conversion factors that depend on the half-value layer of the composition of the glandular breast and breast thickness compressed. Aiming these aspects has baen developed a test object with radiopaque objects included in this test object placed upon irradiation above the tray compression, along with known thicknesses of simulators breast after exposure and image processing allowed the measurement of the distance between points in the radiological image. Calibration curve was developed that through these lines can reach the actual value of the thickness of the simulator, which represents a compressed breast. The methodology has shown that through the straight calibration can reach values of thicknesses known, so we get the amount of compressed breast thickness.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Segundo dados do Cadastro Nacional de Estabelecimentos de Saúde (CNES), o Estado de Minas Gerais possui aproximadamente 477 mamógrafos em uso. Destes, estima-se que em torno de 200 são digitais utilizando, principalmente, sistemas de radiografia computadorizada (CR) ou radiografia direta (DR). A mamografia é insubstituível no diagnóstico e detecção precoce do câncer de mama, principal causa de morte entre mulheres no mundo. Um alto padrão de qualidade da imagem, aliada com uma dose tão baixa quanto razoavelmente exequível, são essenciais para esta detecção precoce de forma segura, levando a necessidade de controle de qualidade através do processo de otimização dos procedimentos. Dentro deste contexto este estudo teve como objetivo determinar a dosimetria e a qualidade da imagem em 72 combinações mamógrafo/CR e DRs em 68 serviços de mamografia do Estado de Minas Gerais, o que corresponde aproximadamente 14% do total de mamógrafos atualmente em uso no Estado de Minas Gerais e a cerca de 34% dos mamógrafos digitais em uso (CRs e DRs). O teste que avalia a linearidade da resposta do detector mamógrafico atendeu aos critérios de desempenho especificados pela Sociedade Espanhola de Física médica em 85% dos equipamentos avaliados. Porém dos serviços que apresentaram não conformidade nesse quesito apenas dois apresentaram menos de quatro anos de uso do mamógrafo. Possivelmente o tempo de utilização dos mamógrafos esteja relacionado a não conformidade apresentada por esses serviços. A relação contraste ruído mostrou-se ser um ponto crítico na cadeia de produção da imagem em sistemas digitais, principalmente para maiores espessuras de acrílico. Mais da metade dos serviços avaliados nessa pesquisa obtiveram um bom desempenho na relação sinal ruído (SNR), e na avaliação da imagem através do simulador de contraste e detalhe CDMAM. Em relação ao ruído da imagem a maioria dos serviços ficaram não conformes. Na avaliação da dose glandular média realizada com simuladores de mama, a média geral dos valores de doses obtidos ficaram dentro dos limites considerados aceitáveis na literatura, para a maioria das espessuras simuladas de mama. Porém os resultados obtidos nesse teste são preocupantes, pois a maioria dos sistemas digitais avaliados ficaram não conformes nesse quesito em pelo menos uma espessura de acrílico avaliada, e além disso houve um aumento considerável da dose glandular média em comparação a medidas anteriores realizadas no Estado de Minas Gerais. Já na comparação da dose glandular média entre sistemas CR e DR os sistemas DR apresentaram doses consideravelmente menores para maiores espessuras, em comparação com os sistemas CR. Em relação à comparação entre avaliações subsequentes a amostra seguiu o comportamento geral dos serviços avaliados nesta pesquisa, com exceção da SNR que apresentou um pior desempenho entre as avaliações subsequentes e o ruído, que apesar do baixo índice de conformidade obteve uma melhora entre uma avaliação e outra. Apesar dos potenciais benefícios que podem ser alcançados com o uso do sistema CR e DR, o emprego dessa tecnologia precisa ser revisto e otimizado para que possa oferecer imagens de qualidade utilizando a menor dose possível de radiação. / According to the National Registration of Health Establishments (CNES), there are approximately 477 mammographs operating in the state of Minas Gerais, of which, roughly estimating, 200 are digital apparatus using mainly computerized systems of radiography (CR) or direct radiography (DR). Mammography is irreplaceable in the diagnosis and early detection of breast cancer, the main cause of death in women worldwide. A high standard of image quality coupled with a dose as low as reasonably practicable, are essential for early detection of this disease with safely, leading to the need for quality control through optimization of process procedures. Within this context, this study aimed to determine dosimetry and image quality on 72 mammography combinations / CR and DR in 68 mammography services in the State of Minas Gerais, which represents approximately 14% of mammography units currently in use in the State of Minas Gerais and about 34% in use of digital mammography (CRs and DRs). The test evaluates the linearity of response of the detector mammographic met the performance criteria specified by the Spanish Society of Medical Physics in 85% of evaluated equipment. However, the services they showed non-compliance in this regard, only two were less than four years of use of mammography. Possibly the time of use of mammography is related to noncompliance by these services. The contrast noise ratio proved to be a critical point in the production chain image in digital systems, especially for thicker acrylic. More than half of the services evaluated in this study showed good performance in signal noise, and image evaluation by the phantom contrast and detail CDMAM. Regarding the image noise, most services were non-compliance. In evaluating the average glandular dose with breast phantom, the overall average dose values obtained were within acceptable limits in the literature for most of the simulated breast thicknesses. However the results of that test are troubling, since most digital systems evaluated were non-compliant in this regard at least one thick acrylic evaluated, and in addition there was a considerable increase in the average glandular dose compared to previous measurements performed in the State of Minas Gerais. In comparison between the average glandular dose in CR and DR systems, the DR systems showed significantly lower doses for greater thickness as compared with the CR systems. Regarding the comparison between subsequent reviews, the sample followed the general behavior of the services evaluated in this study, except the SNR had a worse performance between subsequent evaluations and noise, which despite the low level of compliance achieved an improvement between evaluation and other. Therefore, despite the potential benefits that can be attained with the use of the CR and DR systems, the employment of this technology has to be revised and optimised so that a better quality image can be achieved and the radiation dose reduced as much as possible.

INTRODUÇÃO: O duplex-Doppler e a ultrassonografia com contraste são métodos pouco estudados em lesões mamárias. No entanto, em outros órgãos, têm se mostrado úteis na distinção entre lesões benignas e malignas. O objetivo deste trabalho é caracterizar os achados ao Doppler colorido pré e pós-contraste nos nódulos sólidos de mama, correlacionando-os com os resultados anatomopatológicos. MATERIAL E MÉTODOS: Setenta nódulos sólidos da mama foram avaliados por meio de ultrassonografia convencional e duplex-Doppler colorido antes e após a injeção do meio de contraste (ultrassonografia contrastada), no período compreendido entre março de 2007 e janeiro de 2008, e seus resultados foram comparados à análise histológica (padrão-ouro). Todas as pacientes assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, aprovado pelo Comitê de Ética da FMUSP. O estudo ultrassonográfico modo B avaliou a morfologia do nódulo e o classificou conforme o léxico BI-RADS. Ao duplex-Doppler colorido observou-se a vascularização nodular, descrevendo-se o número de vasos presentes (0 = avascularizado; 1 ou 2 = hipovascularizado, 3 = hipervascularizado), sua morfologia (regular ou tortuoso) e sua distribuição (periférica ou central). Os índices de resistividade e a presença de vaso penetrante também foram avaliados. A partir de dados da literatura criou-se um critério de classificação que permitiu estratificá-los entre provavelmente benigno (nódulos avasculares ou hipovasculares, com vasos regulares e distribuição periférica), provavelmente maligno (nódulos hipervasculares, com vasos tortuosos e distribuição central) ou suspeitos (qualquer outra associação desses fatores). No estudo contrastado foram realizadas análises cinética (avaliando-se os tempos de início da contrastação e do clareamento do nódulo, além da análise da intensidade da contrastação, de maneira subjetiva) e morfológica (utilizando-se os mesmos critérios da análise com Doppler). RESULTADOS: A análise histológica resultou em 25 lesões malignas e 45 lesões benignas. A classificação BI-RADS teve sensibilidade de 100%, especificidade de 66,6%, valor preditivo positivo (VPP) de 62,5% e valor preditivo negativo (VPN) de 100%. A análise com Doppler mostrou sensibilidade de 88%, especificidade de 57,7%, VPP de 53,6% e VPN de 89,9%. Após a injeção do meio de contraste, esses valores passaram para: 92%, 46,6%, 48% e 91%, respectivamente. Os índices de resistividade foram significativamente mais altos em lesões malignas na análise com Doppler colorido ( < 0,001). Houve relação estatística significante entre a presença de vaso penetrante e malignidade ( < 0,001). A associação entre os critérios de classificação BI-RADS e Doppler colorido mostrou sensibilidade de 100%, especificidade de 86,6%, VPP de 80,7% e VPN de 100%. A associação entre BI-RADS e ultrassonografia contrastada resultou em sensibilidade de 100%, especificidade de 80%, VPP de 73,5% e VPN de 100%. A análise cinética subjetiva não conseguiu diferenciar entre nódulo benigno e maligno (tempo do início da contrastação = 0,816, tempo de clareamento da lesão = 0,622 e realce da lesão = 0,020). CONCLUSÃO: Os critérios adotados para o duplex-Doppler colorido associados ao BI-RADS fornecem os melhores resultados na distinção entre lesões benignas e malignas da mama. O estudo contrastado não acrescentou informações adicionais às análises prévias. / OBJECTIVE: The duplex-Doppler ultrasound and contrast enhanced ultrasound (CEUS) are poorly studied in breast lesions. However, in the other organs they have been proved to be useful in mass differentiation. Our objective is to characterize the Doppler findings before and after contrast agent injection in solid breast lesions then correlate them with pathological findings in order to evaluate the applicability of these methods in the differentiation of benign and malignant lesions. MATERIALS AND METHODS: Seventy solid breast masses were evaluated by conventional ultrasonography and duplex-color Doppler before and after injection of contrast medium (ultrasound contrast) in the period between March 2007 and January 2008 and their results were compared to histology (gold standard). All patients signed a consent form approved by the Ethics Committee of FMUSP. At gray-scale US the lesions were described and classified according to the BI-RADS lexicon. At duplex-Doppler we observed the lesion vascularity: avascular, hypovascular (one or two arteries) or hypervascular (three or more arteries); distribution (central or peripheral) and shape (regular or tortuous). If there was a penetrating artery, it was reported. We also observed resistive index. Based on literature data criterion was set up for classification which allowed to stratify breast lesions among probably benign (avascular or hypovascular masses, with regular vessels and peripheral distribution); probably malignant (hypervascular masses with tortuous and central vessels) or suspicious (any other combination of those factors). Kinetic analysis (wash in and wash out times, besides mass enhancement, in a subjective manner) and morphological analysis (using the same criteria of analysis with Doppler) were described in contrast study. RESULTS: Percutaneous biopsy revealed 25 malignant and 45 benign lesions. Morphologic analysis using gray-scale sonography and classified according the BI-RADS lexico showed sensitivity of 100% and specificity of 66.6%, positive and negative predictive values of 62.5% and 100% respectively. Doppler sonography, sensitivity, specificity, positive and negative predictive values were 88%; 57.7%; 53.6% and 89.9%. After contrast agent injection sensitivity, specificity, positive and negative predictive values changed to 92%; 46.6%; 48% and 91% respectively. The association among morphological and CDUS analysis findings resulted in a sensitivity of 100%, specificity of 86.6%, PPV 80.7% and NPV 100%. When morphological findings and CEUS analysis were associated values became 100% sensitivity, 80% specificity, 73.5% PPV, and 100% NPV. Resistive index was significantly higher ( < 0,001) in malignant lesions before and after contrast injection. Wash in and wash out times were similar for benign and malignant lesions (wash-in = 0,816, wash-out = 0,622 and intensity = 0,020). CONCLUSION: Duplex-Doppler criteria associated to BI-RADS classification proved to be the best combination to distinguish malignant lesions of the breast. CEUS evaluation did not provide additional information.

A indoleamina - 2,3 dioxigenase (IDO) é uma enzima expressa por diversas células do organismo e, dentre suas muitas funções, atua principalmente na regulação do sistema imune. Esta se baseia no catabolismo do triptofano, cuja depleção induz uma interrupção do ciclo celular em linfócitos T, tornando-os mais sensíveis a apoptose aliado à ação de metabólitos provenientes desta reação os derivados da quinurenina que potencializariam a atividade da IDO. A presença e ativação de IDO em alguns tipos tumorais representam um dos mecanismos pelo qual as células tumorais podem se evadir do sistema imune, facilitando a indução, crescimento e progressão tumoral. O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil epidemiológico e anatomopatológico de 21 animais portadores de neoplasias mamárias, além de verificar, pelas técnicas de imuno-histoquímica e citometria de fluxo, o número de células neoplásicas e inflamatórias que expressam IDO em cultivo celular na presença de fatores como seu substrato L- triptofano e seu inibidor competitivo 1-metil-DL-triptofano (1MT). As neoplasias malignas corresponderam a 86% dos casos e o principal diagnóstico histopatológico encontrado foi o carcinoma simples. No que concerne à idade, todos os animais apresentaram idade média igual a 10,3 ± 3,3 anos. Na análise imuno-histoquímica os resultados mostraram que todas as amostras apresentaram imunomarcação citoplasmática para IDO confinado principalmente nas células localizadas nos ductos mamários. Os resultados in vitro indicam que, após 24 horas, o grupo suplementado com L - triptofano apresentou aumento significativo da expressão de IDO nas células de carcinoma simples (49,5 ± 2,5 ) ( p &le; 0,01 ), enquanto o grupo tratado 1 metil DL- triptofano exibiu uma diminuição significativa na expressão de IDO ( 33,8 ± 4,0) ( p &le; 0,01). Os macrófagos e células dendríticas na área tumoral também expressaram IDO e foram susceptíveis ao efeito de 1MT. Atualmente, na medicina veterinária procura de novas estratégias e compostos para a modulação da resposta antitumoral em pequenos animais e o 1 - metil - DL - triptofano representaria um candidato potencial para uma abordagem complementar no tratamento de neoplasias mamárias / The indoleamine - 2, 3 - dioxygenase (IDO) is an enzyme expressed on many cells and among its functions acts mainly in regulation of the immune system. It relies on the tryptophan catabolism, whose depletion induces cell cycle arrest of T lymphocytes turning these cells more sensitive to apoptosis, in addition to some down-stream tryptophan-derived metabolites that would increase IDO activity. The presence and activation of IDO in some tumor types represents a mechanism by which tumor cells can evade the immune system, thus facilitating the induction and progression of tumor growth. Our aim was to evaluate 21 animals with mammary tumors and to verify, by immunohistochemistry and flow cytometry, whether these cells express IDO, and to quantify its in vitro expression on neoplastic cells under influence of IDO substrate tryptophan and IDO competitive inhibitor 1-methyl-DL-tryptophan. Malignant neoplasms accounted for 86% of the cases and the most common diagnosis was carcinoma simple. All animals were adult females, with mean age of 10.3 ±.3 years. Immunohistochemistry results showed that all samples presented cytoplasmic immunostaining for IDO confined mainly in cells located in the mammary ducts. In vitro results indicate that, after 24 hours, the group supplemented with L - tryptophan showed significant increased expression of IDO in carcinoma cells (49.5 ± 2.5) (p &le; 0.05), while the 1MT treated group displayed an significant decreased on IDO expression (33.8 ± 4.0) (p &le; 0.05). Macrophages and dendritic cells at the tumour site also expressed IDO and were susceptible to the effect of 1MT. Currently, veterinary medicine seeks new strategies and compounds for modulating the antitumor response in small animals and 1-methyl DLtryptophan would represent a potential candidate as a complementary approach for the treatment of mammary neoplasms

Maspina é uma proteína supressora de tumor e metástase e sua localização subcelular está relacionada ao prognóstico do câncer de mama. Nosso grupo mostrou em MCF-10A que quando fosforilada maspina se acumula no citoplasma. Porém, esta correlação ainda não foi relatada in vivo. Aqui investigamos a expressão, fosforilação e localização subcelular de maspina ao longo do desenvolvimento da glândula mamária murina. Maspina foi detectada no estágio mais tardio da gestação, na lactação e na involução. Os níveis de fosforilação de maspina são maiores no período de lactação do que na involução. Interessantemente, a porcentagem de células que apresenta maspina no núcleo é maior na fase de involução do que na fase de lactação Estes dados mostram que a correlação entre níveis de fosforilação de maspina e localização subcelular também é observada in vivo e que esses processos são reguladas ao longo do desenvolvimento na glândula mamária murina. / Maspin is a protein with tumor and metastasis suppressing activity and its subcellular localization is related to breast cancer prognosis. Using MCF-10A cells as a model system, our group demonstrated a correlation between maspin phosphorylation and cytoplasmic accumulation. Here we investigated maspin expression, phosphorylation levels and subcellular localization in vivo during the murine mammary gland development. Maspin was detected in late pregnancy, during lactation and involution. Maspin phosphorylation levels is higher during lactation than during involution. Interestingly, the percentage of cells which present nuclear maspin is higher in the involution than in lactation. These data show that the correlation between maspin phosphorylation and subcellular localization is also observed in vivo and these processes are regulated during murine mammary gland development.

p16INK4a (p16) traps the cell at the restriction point of the cell cycle by binding to cyclin-dependent kinase 4/6 thus preventing the phosphorylation of the retinoblastoma protein (pRB). As p16 accumulates the cell stops dividing and becomes senescent. This study investigates the modulation of p16 function by the putative membrane protein ABCB5 and a group of five putative oncogenic microRNAs (oncomiRs). ABCB5 is a poorly characterised member of the B-subfamily of human ATP Binding Cassette transporters. ABCB5 is reportedly transcribed into four transcripts, one of which could potentially encode a full-length transporter (ABCB5fl) whilst a second could encode a half-transporter (ABCB5β). The other two transcripts (ABCB5α and ABCB5γ) could only encode short polypeptides. Exogenous expression of ABCB5fl and ABCB5β was achieved in HEK293T cells, but the recombinant protein expressed poorly and localised to the endoplasmic reticulum. Point mutations introduced into the ATP catalytic domain failed to improve expression levels suggesting that protein function was not deleterious to the cell. Exogenous expression in HEK293T cells also allowed commercial antibodies purportedly raised against ABCB5 isoforms to be tested. Several were found not to recognise ABCB5 necessitating re-interpretation of published data. However, one antibody recognised both ABCB5fl and ABCB5β, and was subsequently used to evaluate protein expression levels in other cell types.siRNA knockdown of ABCB5 in human mammary epithelial cells (HMECs) caused a concomitant reduction in p16 expression and an increase in cellular proliferation. Differential siRNAs and RT-qPCR analyses demonstrated ABCB5β to be the relevant transcript with respect to the reduction in p16 expression; however, no native ABCB5β protein was detected in HMECs. Together these data lead to the hypothesis that the ABCB5β transcript may act as a long noncoding RNA to regulate p16. Exogenous expression of each of five distinct putative oncomiRs in HMECs was found to increase cellular proliferation and, surprisingly, increase p16 expression. These results mirror a phenotype commonly observed in p16-positive basal-like breast cancer (BLBC), an aggressive form of breast cancer with poor prognosis and few treatment options. Bioinformatic analysis of the predicted target genes for these oncomiRs identified multiple transcriptional regulators of pRB. These predictions, together with the work performed in a cellular model of p16-positive BLBC, suggest that the oncomiRs may cause unrestricted cell proliferation by indirectly reducing transcription of the pRB gene, RB1. In the absence of pRB, p16 expression is induced via a previously reported oncogeneinduced senescence-like positive feedback loop. These data, and previously published observations, suggest that a similar mechanism may explain the basis of p16-positive BLBC.

Orientador: Gisele Fabrino Machado / Banca:Daniela Bernadete Rozza / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: As neoplasias mamárias em gatas representam o terceiro tipo neoplásico mais frequente nesta espécie. A maioria destas neoplasias são malignas, e exibem alto potencial metastático. Devido a isto, e a escassez de trabalhos referentes ao prognóstico de gatas com câncer de mama, foram avaliados em 32 amostras de neoplasia mamária de gatas, a expressão imuno- histoquímica de alguns marcadores de prognóstico. As amostras foram segregadas em grupos seguindo os parâmetros de classificação da organização mundial de saúde em carcinomas tubulopapilares, cribriformes e sólidos e de acordo com o método de Nottighan modificado em graus I, II e III. Os cortes histológicos foram submetidos a processamento imuno-histoquímico para avaliação da expressão da metaloproteinase 9 (MMP-9), do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), da proteína de proliferação celular Ki- 67 e de linfócitos TCD3+, CD79+ e macrófagos, afim de se avaliar os diferentes padrões de classificação. Os resultados da marcação imuno- histoquímica foram avaliados com auxílio de um sistema de análise de imagem computadorizada para determinar a porcentagem da área imunomarcada. Em relação à classificação morfológica observou-se diferença significativa entre a densidade de linfócitos TCD3+ entre os grupos. Durante a análise nas amostras segregadas de acordo com a gradação histológica verificou-se diferença significativa entre a imunomarcação da MMP-9, entre a intensidade de infiltração de células TCD3+ e uma tendência de variação na proteína Ki-67. Observamos também correlação positiva entre os níveis de expressão da MMP-9 e da Ki-67, da MMP-9 e células TCD3, e da proteína Ki-67 com as células TCD3. Desta forma concluímos que classificação histológica dos carcinomas de mama em gatas não é um bom parâmetro para determinação do prognóstico da doença... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The mammary tumors in cats represent the third most common tumor type in the species. Most of these are malignant neoplasms exhibit a high metastatic potential. Because of this and the lack of studies regarding the prognosis for cats with breast cancer were evaluated 32 samples of breast cancer in cats. These samples were grouped according to morphological and histological classification, and the sections were submitted to immunohistochemical processing to evaluate the expression of metalloproteinase 9 (MMP-9), the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein of cell proliferation Ki-67 and CD3 + T lymphocytes, and CD79 + macrophages in order to evaluate differences in the different grading standards. The results of immunohistochemical marking were evaluated by using a system of computerized image analysis to assess the percentage of area immunomarked. Regarding the morphological classification showed a significant difference between the amount of T lymphocytes CD3 + between the groups. During analysis the samples segregated according to histologic grading there was significant difference between the immunostaining of MMP-9, between the intensity of infiltration of T cells CD3 + and a tendency of variation in the Ki-67 protein. We also observed a positive correlation between the expression levels of MMP-9 and Ki-67, MMP-9 and TCD3 cells, and Ki-67 protein in cells T CD3+. Thus we conclude that histologic classification of breast carcinomas in cats is not a good parameter for determining the prognosis of the disease when evaluated together with the levels of immunohistochemical expression of MMP- 9, VEGF and Ki67. The best best parameters for determining the prognosis was observed when the histological grade was considered . The higher was the proliferative index determined by the positivity of Ki-67 protein from neoplastic cells, the greater... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria cecilia Rui Luvizotto / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Resumo: Os tumores mamários são as mais freqüentes neoplasias em cadelas, representando cerca de 50% dos tumores diagnosticadas nesta espécie e tem maior incidência em fêmeas de meia idade a idosas. Têm sido utilizadas como modelo de estudo para neoplasias mamárias de mulher devido às várias características comuns como as similaridades histológicas e imuno- histoquímicas. Na última década, estudos baseados nos perfis moleculares das neoplasias mamárias, tornaram possível a identificação de algumas células neoplásicas com características de células tronco - as células tronco tumorais (CTT). Uma das moléculas putativas para marcação das CTTs é o CD44. A telomerase, que vem sendo relatada como marcador tumoral, é potencialmente expressa também em CTTs. Estudos recentes estabeleceram um elo crucial entre a transição epitelial-mesenquimal (EMT) e a aquisição de propriedades moleculares e funcionais de células-tronco. Por este motivo analisamos a expressão das proteínas CD44, Citoqueratinas AE1/AE3 e Vimentina, e da enzima telomerase, em tumores mamários de cadelas a fim de investigar o potencial de marcação de CTTs e sua relação com a EMT. Para tal foram utilizados métodos de imuno-histoquímica em tecidos parafinizados tanto in vivo quanto in vitro, fazendo-se uso de técnicas como Tissue MicroArrays (TMA), citoinclusão de tecidos tumorais e cultivos celulares. A expressão da telomerase nas células de tumores mamários cultivadas foi analizada por PCR em tempo real. Nas amostras de tecido parafinizado in vivo, a imunomarcação da citoqueratina demonstrou diferença significativa entre tumores benignos e malignos (p˂0,05), mostrando-se mais intensa em tumores malignos. Já a vimentina apresentou maior intensidade de marcação em tumores benignos, porém não apresentando diferença significativa (p˂0,05)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:Mammary tumors are the most frequent cancers in dogs, representing about 50% of tumors, and have a higher incidence in females of middle aged and elderly. These tumors have been used as a model for breast cancer in women due to several common characteristics such as histological and immunohistochemical similarities. In the last decade, studies based on molecular profiles of breast cancer, made possible the identification of some neoplastic cells with characteristics of stem cells - cancer stem cells (CSC). One of the putative molecules of CSCs is CD44. Telomerase, which has been reported as a tumor marker, is potentially also expressed in CSCs. Recent studies have established a crucial link between the epithelial- mesenchymal transition (EMT) and the acquisition of molecular and functional properties of stem cells. For that reason we analyzed the expression of proteins CD44, Cytokeratins AE1/AE3 and Vimentin, and the telomerase enzyme, in dogs mammary tumors, to investigate the potencial for CSC markers, and its relation with the EMT using immunohistochemistry in paraffin embedded tissues in both in vivo and in vitro, making use of techniques such as Tissue MicroArrays (TMA), cell blocks from tumors and cell cultures. Besides that, we analyzed the telomerase expression in mammary tumor cultivated cells by quantitative real time PCR. Immunostaining of cytokeratin had no significant difference between benign and malignant tumors (p ˂ 0,05), being more intense in malignant tumors. However vimentina showed higher staining intensity in benign tumors, but with no significant difference (p ˂ 0,05). The expression of CD44 was higher in malignant tumors that have greater proliferative and metastatic potencial, however its relation with EMT was not detected in the analyzed tumors. Telomerase expression was positive in the neoplastic cultivated cells, however without significant difference... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

L’alimentation peut influencer le développement mammaire des femmes et compromettre la santé de la descendance. La leptine pourrait jouer un rôle majeur dans ces processus. Nous avons montré que chez la lapine, la synthèse mammaire de leptine était peu élevée en gestation puis augmentait en lactation, et que l’allaitement par une mère hyperadipeuse potentialisait les effets d’un régime obésogène ultérieur et induisait un développement mammaire anormal de la descendance. Nous avons également caractérisé la synthèse et la sécrétion mammaire de leptine, dans un modèle cellulaire hétérologue. Enfin, nous avons évalué la variation intra espèce ainsi que la croissance selon deux fenêtres nutritionnelles : alimentation obésogène administré dès la puberté ou dès la naissance, dans deux lignées murines, FVB/N et C57BL/6.Ce travail montre que la composition du lait maternel est altérée par l’alimentation et influe sur la croissance et le développement mammaire de la descendance, chez le lapin / Women’s nutrition can have long-term effects on mammary development and on the development and the health of the offspring. Leptin may play a major role during these processes. In the present work we show that leptin synthesis in the mammary gland slightly increases during pregnancy, but largely increases during lactation. We also show that, in the rabbit, milk consumption from obesogenic-fed dams promote the later effects of an obesogenic diet and leads to an abnormal mammary development observed in the offspring. We also highlight the synthesis and the mammary secretion of leptin in a heterologous cellular model. We also evaluate the intra-species variability as well as the growth considering two nutritional windows: obesogenic feeding from the puberty or from the birth, in two lineages of mice, FVB/N and C57BL /6.This work shows that the consumption of altered maternal milk has long-term effects by influencing the growth and the mammary development of the offspring, in rabbit