A carcinogênese do córtex da supra-renal é um processo complexo que envolve alterações genéticas múltiplas e seqüenciais. Embora algumas dessas alterações já tenham sido caracterizadas, de modo geral estes mecanismos permanecem pouco compreendidos. Um conhecimento mais aprofundado dos mesmos não só levaria à descoberta de novos marcadores de prognóstico como também a alvos terapêuticos em potencial. A fim de melhor caracterizarmos os mecanismos envolvidos na progressão maligna do tumor e selecionarmos genes candidatos a serem marcadores de malignidade e alvos terapêuticos, nós estudamos os RNAs de uma linhagem celular derivada de um tumor adrenocortical maligno (NCI-H295A) e um espécime de tumor do córtex da supra-renal por \"Differential Display\" (DDRT-PCR). Foi selecionado um total de 317 transcritos únicos diferencialmente expressos, com base na análise densitométrica digital dos géis de DDRTPCR. A anotação funcional dos genes hiper-expressos mostrou relação com motilidade celular e proliferação. Entre os hipo-expressos foram identificados genes envolvidos na regulação de transcrição, síntese e processamento de RNA e remodelamento da cromatina. A expressão de dois genes entre os transcritos selecionados foi verificada por RT-PCR semi-quantitativa em 19 tumores adrenocorticais adultos e pediátricos, metastáticos e não metastáticos. Os genes da fucosiltransferase-11 e do supressor tumoral BCSC-1 (hiper- e hipo-regulado, respectivamente) encontraram-se diferencialmente expressos nos subgrupos específicos das 19 amostras tumorais. Em suma, o DDRT-PCR revelou-se uma ferramenta valiosa para uma análise global dos transcritomas do córtex da supra-renal e para selecionar genes com possível envolvimento na tumorigênese adrenocortical. Novos aspectos da biologia, progressão e possíveis alvos terapêuticos moleculares puderam ser vislumbrados. / There are important gaps in the present knowledge about adrenocortical tumorigenesis. For this reason we compared by Differential Display RNAs from a carcinoma-derived cell line (NCI-H295A) and a metastatic adrenocortical tumor and characterized 317 differentially expressed transcripts. The up-regulated genes are mainly related to cell motility and proliferation. Among the down-regulated genes, those involved in regulation of transcription, RNA synthesis and processing and chromatin remodeling were identified. Differential expression of FUTT11 and BCSC-1 tumor suppressor gene were confirmed in specific subsets of 19 adult and pediatric adrenocortical tumors and might serve as marker for malignancy. Our data revealed previously unknown aspects of adrenal tumorigenesis.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-06-27T14:12:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-31T12:53:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-31T12:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os tumores bem diferenciados da tireóide representam mais de 95% das neoplasias malignas da glândula. A identificação pré-operatória dos carcinomas papilíferos está bem estabelecida através dos métodos de Punção aspirativa por Agulha fina e Ultrassonografia, com quase 100% de acurácia, enquanto os tumores foliculares significam um dilema para o cirurgião, visto que os métodos existentes não conseguem determinar com eficiência o diagnóstico sendo que 60-80% dos casos operados são benignos. Dessa forma, com o intuito de se analisar alterações genômicas do tipo variações no número de cópias (CNVs) que possam diferenciar esse tumor de outros tipos de doenças da tireóide, foram analisados 13 pacientes com doença tireoidiana (3 bócios, 2 hiperplasias, 4 adenomas foliculares e 4 carcinomas foliculares ) mais 1 individuo sadio através do método de aCGH, para identificação de CNVs que pudessem determinar com eficiência a presença de carcinoma folicular. Os achados foram confrontados com dados de carcinomas papilífero clássico (4 pacientes) e variante folicular (2 pacientes). Foram encontradas 725 CNVs na amostra, 703 dos pacientes com patologia. Dentre estas foram selecionadas 18 regiões mais frequentes. Houve um padrão de amplificação maior em pacientes jovens com adenomas e deleção em pacientes mais velhos. Os pacientes com carcinoma apresentaram taxas de CNVs muito próximas. Os carcinomas foliculares apresentaram padrões exclusivos de alteração nos cromossomos 8 e 12. Concluímos, assim, que os carcinomas foliculares da tireoide são uma patologia com um padrão exclusivo de alterações, não havendo correlação de progressão tumoral a partir de adenomas foliculares, sendo que duas regiões -8p22 e 12p13.32-p13.33, estão presentes em 100% e 75% das amostras respectivamente, podendo ser fortes candidatos a marcadores desse tipo tumoral. / More than 95% of thyroid gland malignancies are well-differentiated tumors. Preoperative diagnosis accuracy for papillary carcinomas, based on FNAC (Fine Needle Aspiration Cytology) and ultrasound screenings, has become nearly 100%. Nevertheless, when follicular neoplasm diagnosis is concerned, this reality is quite different. Using current preoperative screening tools, 60 – 80% of patients suspected to present follicular thyroid cancer, when operated turn out to suffer from benign disease. Therefore, in an effort to improve these results, genomic analysis of Copy Number Variations (CNV) that may more precisely differentiate follicular tumor from other thyroid conditions were carried out in 13 patients (3 bearing goiters, 2 hyperplasias, 4 follicular adenomas, 4 follicular carcinomas, 1 healthy individual). CNVs were tracked through aCGH method in order to detect follicular carcinoma most accurately. Results were compared with classic papillary carcinoma (4 subjects) and follicular variant (2 subjects). Samples demonstrated 725 CNVs, 703 of which belonging to patients with disease. Among these, 18 most frequent regions were selected. Patterns of amplification were more frequent in younger patients, while deletions were more frequent in the elder ones. Carcinoma patients presented very close CNV rates. Also, exclusive patterns of chromosomes 8 and 12 alterations were noticed in follicular carcinoma. Thus, it is possible to conclude that thyroid follicular carcinoma is a condition comprehending exclusive patterns of alterations, and progression of this disease is not related to follicular adenomas. Finally, regions -8p22 and 12p13.32-p12.33 were detected in 100% and 75% of samples respectively, therefore, may be deemed as possible tumoral markers.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-07-03T13:32:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseProteinasRelacionadas.pdf: 1329774 bytes, checksum: 6d2f5cb5398656b8164140d35fba2f75 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-08-03T01:00:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseProteinasRelacionadas.pdf: 1329774 bytes, checksum: 6d2f5cb5398656b8164140d35fba2f75 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-03T01:00:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseProteinasRelacionadas.pdf: 1329774 bytes, checksum: 6d2f5cb5398656b8164140d35fba2f75 (MD5) Previous issue date: 2014 / O câncer gástrico representa um grave problema de saúde pública mundial. A alta incidência de tumores avançados com baixa sobrevida pelas metástases, sobretudo no norte do país, nos fez realizar o estudo comparativo das linhagens de adenocarcinomas gástricos metastáticos (AGP01) com adenocarcinomas gástricos sem metástases (ACP02) através da avaliação proteômica da via de mobilidade celular, que possam ter relação com a formação dessas metástases. Foi realizado estudo proteômico das linhagens AGP01 e ACP02 através da técnica da cromatografia líquida de alta performance 2D Nanoultra (UPLC) em conjunto com nanoESI-MSE (MudPIT) e análise funcional das proteínas diferencialmente expressas no programa Ingenuity Pathways Analysis (IPA). Observamos 19 proteínas com aumento da expressão na linhagem AGP01 em relação a ACP02, as quais apresentam relação com movimento, organização e morfologia celular, onde podemos sugerir que as proteínas ACTB, ANXA1, LGALS1, IQGAP1, EZR, MSN, MYH9 e S100A11, de acordo com nossos achados e corroborados pela literatura pesquisada, tem associação com a metástase de adenocarcinomas gástricos. Outras proteínas se mostraram em forte expressão em nosso estudo, mas na literatura pesquisada sua expressão tem relação com as vias de disseminação apenas de outros tumores, como: mama (RAB5C), pulmão (PLS1 e CAP1), reto (ACTN1) e GIST (SYNE2). Conflitantes com nosso estudo, as expressões das proteínas CAPZA1, FLNA e FLNC, foram observadas na literatura como um inibidor de avanço tumoral, enquanto que as expressão das proteínas MYL6, MYL6B, e ACTN2, aparecem pela primeira vez como tendo relação com a mobilidade celular, invasão e metástase em câncer. / Gastric cancer is a serious public health problem worldwide. The high incidence of advanced tumors with poor survival by metastasis, especially in the north, made us realize the comparative study of strains of metastatic gastric adenocarcinoma (AGP01) with gastric adenocarcinoma without metastasis (ACP02) by proteomic evaluation of cell motility that may be related to the formation of these metastasis. Proteomic study was conducted strains AGP01 and ACP02 through the technique of high performance liquid chromatography 2D Nanoultra (UPLC) together with nanoESI - (MSE mudpit) and functional analysis of differentially expressed proteins in the Ingenuity Pathways Analysis (IPA) software. We observed 19 proteins with increased expression in AGP01 lineage regarding ACP02, which are related to movement, organization and cell morphology, where we suggest that ACTB, ANXA1, LGALS1, IQGAP1, EZR, MSN, MYH9 and S100A11 proteins, according to our findings and supported by the research literature is associated with metastasis of gastric adenocarcinomas. Other proteins showed strong expression in our study, but its expression in the research literature is related to the dissemination routes only other tumors, such as breast (RAB5C), lung (PLS1 and CAP1), rectum (ACTN1) and GIST (SYNE2). Conflicting with our study, the expressions of CAPZA1, FLNA and FLNC protein, were observed in the literature as an inhibitor of tumor advancement, where the expression of MYL6, MYL6B and ACTN2 proteins first appear as being related to cell motility, invasion and metastasis in cancer.

A carcinogênese do córtex da supra-renal é um processo complexo que envolve alterações genéticas múltiplas e seqüenciais. Embora algumas dessas alterações já tenham sido caracterizadas, de modo geral estes mecanismos permanecem pouco compreendidos. Um conhecimento mais aprofundado dos mesmos não só levaria à descoberta de novos marcadores de prognóstico como também a alvos terapêuticos em potencial. A fim de melhor caracterizarmos os mecanismos envolvidos na progressão maligna do tumor e selecionarmos genes candidatos a serem marcadores de malignidade e alvos terapêuticos, nós estudamos os RNAs de uma linhagem celular derivada de um tumor adrenocortical maligno (NCI-H295A) e um espécime de tumor do córtex da supra-renal por \"Differential Display\" (DDRT-PCR). Foi selecionado um total de 317 transcritos únicos diferencialmente expressos, com base na análise densitométrica digital dos géis de DDRTPCR. A anotação funcional dos genes hiper-expressos mostrou relação com motilidade celular e proliferação. Entre os hipo-expressos foram identificados genes envolvidos na regulação de transcrição, síntese e processamento de RNA e remodelamento da cromatina. A expressão de dois genes entre os transcritos selecionados foi verificada por RT-PCR semi-quantitativa em 19 tumores adrenocorticais adultos e pediátricos, metastáticos e não metastáticos. Os genes da fucosiltransferase-11 e do supressor tumoral BCSC-1 (hiper- e hipo-regulado, respectivamente) encontraram-se diferencialmente expressos nos subgrupos específicos das 19 amostras tumorais. Em suma, o DDRT-PCR revelou-se uma ferramenta valiosa para uma análise global dos transcritomas do córtex da supra-renal e para selecionar genes com possível envolvimento na tumorigênese adrenocortical. Novos aspectos da biologia, progressão e possíveis alvos terapêuticos moleculares puderam ser vislumbrados. / There are important gaps in the present knowledge about adrenocortical tumorigenesis. For this reason we compared by Differential Display RNAs from a carcinoma-derived cell line (NCI-H295A) and a metastatic adrenocortical tumor and characterized 317 differentially expressed transcripts. The up-regulated genes are mainly related to cell motility and proliferation. Among the down-regulated genes, those involved in regulation of transcription, RNA synthesis and processing and chromatin remodeling were identified. Differential expression of FUTT11 and BCSC-1 tumor suppressor gene were confirmed in specific subsets of 19 adult and pediatric adrenocortical tumors and might serve as marker for malignancy. Our data revealed previously unknown aspects of adrenal tumorigenesis.

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:54:50Z : No. of bitstreams: 1 000864249.pdf: 7320039 bytes, checksum: 72267d35491b03d5cd6737c361481e7c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Oncolytic virotherapy is a novel strategy for treatment of cancer in humans and companion animals as well. Canine distemper virus (CDV), a paramyxovirus, has proven to be oncolytic through induction of apoptosis in canine-derived tumour cells, yet the mechanism behind this inhibitory action is poorly understood. In this study, three human mammary tumour cell lines and one canine-derived adenofibrossarcoma cell line were tested regarding to their susceptibility to CDV infection, apoptosis, mitochondrial membrane potential (MMP) and expression of tumour necrosis factor-alpha-induced protein 8 (TNFAIP8). CDV replication induced cytopathic effect and > 45% of infected cells were considered death and/or under late apoptosis/necrosis. TNFAIP8 and CDV M gene expression were positively correlated in all cell lines. In addition, MMP was highly associated with increase in virus titres (p<0.005). Thus, these results strongly suggest that both human and canine mammary tumour cells are potential candidates for studies concerning CDV-induced cancer therapy

Resumo:A Viroterapia oncolítica é uma nova estratégia para o tratamento de câncer em seres humanos e também em animais de companhia. O vírus da cinomose canina (CDV), um paramixovírus, tem se mostrado ser oncolítico através da indução de apoptose em células tumorais derivadas de cães, ainda que o mecanismo subjacente a esta acção inibidora seja pouco compreendida. Neste estudo, três linhagens de células tumorais mamarias humanas e uma linhagem celular derivada de adenofibrossarcoma canino foram testados quanto à sua suscetibilidade à infecção por CDV, a apoptose, o potencial de membrana mitocondrial (MMP) e a expressão de necrose tumoral-alfa induzida pela proteína de fator 8 (TNFAIP8 ). A replicação CDV induziu o efeito citopático e > 45% das células infectadas foram consideradas no âmbito de morte e/ou apoptose tardia sob necrose. TNFAIP8 e expressão gênica CDV foram positivamente correlacionadas em todas as linhagens celulares. Além disso, a MMP foi altamente associada com o aumento nos títulos de vírus (p <0,005). Assim, estes resultados sugerem fortemente que ambas as células tumorais mamárias humanas e caninas são potenciais candidatos para estudos sobre a terapia do câncer induzido por CDV / Abstract:Oncolytic virotherapy is a novel strategy for treatment of cancer in humans and companion animals as well. Canine distemper virus (CDV), a paramyxovirus, has proven to be oncolytic through induction of apoptosis in canine-derived tumour cells, yet the mechanism behind this inhibitory action is poorly understood. In this study, three human mammary tumour cell lines and one canine-derived adenofibrossarcoma cell line were tested regarding to their susceptibility to CDV infection, apoptosis, mitochondrial membrane potential (MMP) and expression of tumour necrosis factor-alpha-induced protein 8 (TNFAIP8). CDV replication induced cytopathic effect and > 45% of infected cells were considered death and/or under late apoptosis/necrosis. TNFAIP8 and CDV M gene expression were positively correlated in all cell lines. In addition, MMP was highly associated with increase in virus titres (p<0.005). Thus, these results strongly suggest that both human and canine mammary tumour cells are potential candidates for studies concerning CDV-induced cancer therapy / Orientador:Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca:Andréa Fontes Garcia / Banca:Roberto Gameiro de Carvalho / Mestre

Pacientes com linfoma difuso de grande célula B (LDGCB) do mesmo grupo de risco pelos critérios do Índice de Prognóstico Internacional (IPI), tratados com quimioterapia convencional à base de antraciclina, podem ter resposta terapêutica não esperada para seu grupo de risco. Isso pode ser explicado pelo fato do prognóstico dos LDGCB, que têm origem no centro germinativo (CG), ser superior aos originados após o CG (NCG). No intuito de aprimorar a avaliação de prognóstico e a abordagem terapêutica em LDGCB de IPI ajustado para a idade (IPIa) de risco intermediário alto e alto, elaboramos projeto de pesquisa, para verificar o papel dos marcadores imuno-histoquímicos (IH) e do transplante de medula óssea autólogo (ATMO), em primeira remissão completa (RC), neste grupo de pacientes. Avaliamos o impacto da expressão dos marcadores CD10, Bcl-6, MUM-1, Bcl-2 e p63 na obtenção de RC, sobrevida livre de doença (SLD) e sobrevida global (SG), isoladamente e de acordo com a origem em CG e NCG. Avaliamos 82 pacientes abaixo dos 60 anos, dos quais 16 (19,5%) receberam ATMO em primeira RC, além de serem comparados com os pacientes tratados com quimioterapia convencional e mantidos em observação após RC. A IH foi avaliável em 73 casos, 24 (32,9%) tiveram origem no CG e 49 (67,1%) NCG, sem diferença de sobrevida entre os grupos. A proteína Bcl-2 foi positiva em 27 (37%) pacientes e foi o único fator preditivo independente para SG à análise multivariada, com tendência de significância para RC. As SG e SLD em cinco anos para os 16 pacientes que receberam ATMO foi de 75% e 85,2%, respectivamente, a taxa de recidiva de 6,5% e diferença estatisticamente significativa para SLD (p = 0,015) em comparação aos pacientes apenas observados. Concluímos que o ATMO foi seguro e capaz de melhorar a sobrevida em LDGCB de risco intermediário alto e alto, e que a expressão de Bcl-2 pode ser utilizada na programação terapêutica inicial desses pacientes. / Diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) patients from the same risk group according to the International Prognostic Index (IPI) treated with conventional anthracycline-based chemotherapy may show an unexpected therapeutic response. This can be explained by the fact that the prognosis of DLBCL originating in germinal center (GC) cells is superior than that originating out of germinal center (NGC). In order to improve the prognostic evaluation and the therapeutic approach to DLBCL patients with high intermediate to high age-adjusted IPI (aIPI), a research project was designed for the analysis of immunohistochemical markers and the role of autologous stem cell transplantation (ASCT) in first complete remission (CR) for this group of patients. The impact of the expression of CD10, Bcl-6, MUM-1, Bcl-2 and p63 markers on complete remission (CR), disease-free survival (DFS) and overall survival (OS), either individually and according to cell origin was evaluated by means of immunohistochemistry. Eighty-two patients aged under 60 years old were assessed, of which 16 (19.5%) underwent ASCT in first CR and were compared to patients receiving conventional chemotherapy and being monitored after CR. Immunohistochemistry was assessable in 73 cases, 24 (32.9%) being classified as GC-type and 49 (67.1%) as NGC-type, with no survival difference between the two groups. Bcl-2 expression was found in 37% (27) of the patients and was the single independent predicting factor of OS prognosis according to multivariate analysis. A significant tendency of expression of this protein was also observed for achieving CR, which was essential for longer survival, as shown by multivariate analysis. OS and DFS within 5 years were of 75% and 85.2% respectively for the group of 16 patients treated with ASCT, which resulted in lower relapse rates (6.5%) with statistically significant difference for DFS (p=0.015) when compared to the group of patients who achieved CR and was kept under monitoring. In this study ASCT was found to be a safe procedure for improving survival rates of DLBCL patients with high intermediate to high aIPI risk. Also, the expression of Bcl-2 protein was found to be useful as one of the variables to be analysed in the therapeutic approach to these patients

Introdução: Os tumores de mama apresentam uma grande heterogeneidade molecular e clínica. Uma das classificações mais utilizadas no carcinoma de mama, baseia-se em seus aspectos moleculares e subdivide o câncer de mama em cinco grandes grupos baseados na expressão de alguns genes: luminais (A e B), super-expressor de HER-2, tipo basal e aqueles semelhantes à mama normal. Para melhor definirmos estes subgrupos de carcinomas mamários, analisamos diferentes marcadores imunoistoquímicos em dois estádios de pacientes: IIA e IIIB. Objetivo: O objetivo de nosso estudo foi avaliar quais fatores seriam importantes na determinação do prognóstico, tanto nas pacientes estadiadas como IIA quanto nas IIIB, com um período de seguimento de 120 meses, levando em conta dados clínicos e demográficos, características tumorais, tipos de tratamento, diferentes marcadores moleculares da transição epitélio-mesênquima (e-caderina, pcaderina, n-caderina, vimentina, twist, snai l, slug), o EGFR, a NOS-2 e os diferentes fenótipos (Luminal A, Luminal B, super-expressor de HER-2, basal e triplo-negativo) em câncer de mama. Pacientes e Métodos: A casuística deste estudo é constituída por 268 pacientes portadoras de tumor de mama operadas no Hospital A C Camargo, no período de 1980 a 1999. Foi realizado estudo imunoistoquímico para análise de nove marcadores moleculares e cada tumor foi classificado de acordo com a expressão do receptor de estrogênio, progesterona e expressão do HER-2 em uma das categorias luminais, basal, triplo-negativo e super-expressor de HER-2. Resultados: Observamos que a maioria dos tumores media de 2,1 a 5,0 cm (57,8%), pertenciam ao grau histológico 2 (57,1%), eram grau nuclear 3 (61,6%), possuíam de 0 a 9 mitoses por campo de grande aumento (CGA) e 59% apresentavam metástase linfonodal. As pacientes analisadas pertenciam a dois subgrupos de estadiamento, sendo que 86 casos pertenciam ao EC IIA (32,1%) e 182 ao EC IIIB (67,9%). Na análise multivariada, observamos em nosso estudo que a presença de diversos fatores clínicos e demográficos, de variáveis histopatológicas, formas de tratamento, os diversos marcadores moleculares não parecem conferir um pior prognóstico às pacientes do grupo IIA. Neste grupo, os fatores que mostraram estar associados a um pior prognóstico foram o fato destas pacientes pertencerem ao padrão fenotípico triplo negativo ou ao padrão basal. Quando realizamos a análise multivariada para avaliação do risco de óbito em 120 meses, observamos que no estádio IIIB, o padrão fenotípico luminal A, luminal B, super-expressor de HER-2 e triplo-negativo, não esteve relacionado com óbito. O risco de óbito esteve associado com a presença de metástase linfonodal e a não realização de quimioterapia adjuvante. Conclusão: Com estes achados podemos concluir que os padrões fenotípicos basal e triplo-negativo estão relacionados com uma pior sobrevida nas pacientes IIA. Entretanto, os subtipos de câncer de mama não estão relacionados com o prognóstico no grupo de mulheres do estádio IIIB. A presença de metástase nos linfonodos e a não realização de quimioterapia adjuvante são fatores de risco para estas mulheres. / Introduction: The breast cancer is a great molecular and clinical heterogeneous disease. One of the most used breast cancer classification involves molecular events and classify breast cancer into distinct groups based on gene expression patterns: luminal (A and B), overexpression of HER-2, basal and and normal breast like. Once the breast subgroups have been identified, we used a large panel of different tumour markers, to differenciated to groups of patients: IIA and IIIB. Objectives: The aim of our study was to identify which factors could be necessary to determine the prognosis, in both patients group (IIA and IIIB), until 10 years of follow-up, when we consider clinical and demographics aspects, histopathologic characteristics of the tumour, treatment, molecular markers of the epithelial-mesenchymal transition (e-cadherin, p-cadherin, n-cadherin, vimentin, twist, snai l, slug), EGFR and NOS 2 and molecular subgroups (luminal A, luminal B, basal, triplenegative and overexpressor of HER-2), in breast cancer. Patients and Methods: Cases for this study were selected from Hospital A C Camargo, and included 268 patients with diagnosis of breast cancer submitted to surgery between 1980 and 1999. We applied immunohistochemical to analyse nine different molecular markers and each tumour was classified according to estrogen receptor, progesterone receptor and HER-2 expression in one of the molecular cathegories. Results: We observed that the size of most tumours varied 2.1 to 5.0 cm (57.8%), that they had histologic grade 2 (57.1%), nuclear grade 3 (61.6%), they showed 0 to 9 m mitoses and 59% had dissemination to lymph nodes. Eighty six patients were staged as IIA (32.1%) and 182 were staged as IIIB (67.9%). The multivarieted analysis showed that different clinical and demographics factors, histopathologic characteristics of the tumour, different treatment and some molecular markers didnt confer a worse prognostic to patients staged as IIA. The factors that showed an association with a worse prognosis were: tumor belongs to triple-negative or basal phenotype. When we realize the multivarieted analysis in stage IIIB, to look for the death risk in ten years, we observed that luminal A or B, over expression of HER-2 and triplenegative phenotype, didnt had any relation with death. The death risk was associated with dissemination to lymph nodes and with no adjuvant chemotherapy. Conclusion: We concluded that in stage IIA, the factors that showed an association with a worse prognosis were triple-negative or basal phenotype. And that the phenotype subgroups were not related to prognoses in stage IIIB and that the presence of lymph node dissemination and no adjuvant chemotherapy were risk factors for these patients.

INTRODUÇÃO: Meduloblastoma é o tumor cerebral embrionário maligno mais comum da infância. O esquema de tratamento atual inclui ressecção cirúrgica, radioterapia e quimioterapia. Embora a taxa de sobrevida global tenha aumentado nos últimos anos, em decorrência do tratamento os sobreviventes frequentemente sofrem com sequelas de ordem neurológica, endocrinológica e social. O esquema de classificação de risco atual não considera a heterogeneidade existente entre os pacientes e entre os tumores. No entanto, estudos recentes reconheceram quatro subgrupos moleculares distintos de meduloblastomas (WNT, SHH, Grupo 3 e Grupo 4), que confirmam essa heterogeneidade e formam, em conjunto, o melhor fator definidor de prognóstico para essa neoplasia. Esses subgrupos poderiam ser identificados através de marcadores imuno-histoquímicos representativos para cada um deles. O presente estudo teve como objetivo definir a frequência dos subgrupos de meduloblastomas na população brasileira através da positividade imuno-histoquímica para esses marcadores e analisar a frequência de positividade de outros marcadores também descritos como tendo importância prognóstica. MÉTODOS: 61 casos de meduloblastoma foram submetidos a estudo imuno-histoquímico para 5 marcadores descritos como tendo importância prognóstica (p53, ciclinaD1, p16, bcl2 e HER2) e para 5 marcadores descritos como representativos dos subgrupos moleculares de meduloblastoma (DKK1 e ?-catenina (subgrupo WNT), SFRP1 (subgrupo SHH), NPR3 (Grupo 3) e KCNA1 (Grupo 4). Os resultados foram correlacionados com os dados demográficos, histológicos e clínicos. RESULTADOS: Nenhum dos 10 marcadores imuno-histoquímicos revelou-se fator prognóstico em meduloblastoma. Os 5 marcadores representativos dos subgrupos moleculares apresentaram positividade para mais de 1 marcador ou negatividade para todos os marcadores na maioria dos casos. Apesar disso, foi possível classificar 22 casos nos quatro subgrupos de meduloblastomas por meio da positividade exclusiva para esses marcadores. Os resultados das análises entre os subgrupos e as respectivas frequências quanto às variáveis demográficas, histológicas, clínicas e prognósticas foram semelhantes aos descritos na literatura. CONCLUSÕES: Os marcadores imuno-histoquímicos analisados não apresentaram valor prognóstico nesta casuística, e os marcadores descritos como representativos dos quatro subgrupos moleculares mostraram-se pouco sensíveis e específicos para classificar os meduloblastomas / INTRODUCTION: Medulloblastoma, a malignant embryonal brain tumor, is the most frequently occurring brain tumor in children. Treatment strategy involves surgery, radiotherapy and chemotherapy. Overall survival rate has increased in recent years, but survivors often present neurological sequelae, as well as endocrine and social disorders, as a result of the treatment. Medulloblastoma is no longer consider a single disease: standard risk stratification disregards heterogeneity related to both patients and tumors, and recent work has generated a molecular stratification of the medulloblastomas into 4 distinct subgroups (WNT, SHH, Group 3 and Group 4), currently considered the best prognostic factor. Representative immunohistochemical markers could help identify each one of those subgroups. Our study aimed to establish the frequency of subgroups of medulloblastomas, in brazilian population, by immunohistochemical positivity for its specific markers, and also analyze the frequency of positivity for other markers that are equally implicated in prognosis. METHODS: We evaluated immunohistochemistry expression of 5 markers - DKK1 and ?-catenin (subgroup WNT), SFRP1 (subgroup SHH), NPR3 (Group 3) and KCNA1 (Group 4) - to determine molecular subgroup affiliation of 61 cases of medulloblastomas, along with 5 other markers widely used in daily practice that may have prognostic value in medulloblastomas (p53, cyclinD1, p16, bcl2 and HER2). Results were correlated to demographic, histological and clinical data. RESULTS: None of the 10 immunohistochemical markers investigated proved to be significant prognostic factor in our series. Five representative immunohistochemical markers of the molecular subgroups exhibited positivity for more than one marker or negativity for all markers in most cases. Nevertheless, we manage to determine molecular affiliation in one of the 4 subgroups in 22 cases, due to their exclusive positivity related to the representative markers. Regarding frequencies of occurrence, demographics, histological characteristics, clinical aspects and prognosis, our results related to the 22 cases were similar to those reported in the literature. CONCLUSIONS: Immunohistochemical markers considered representative for each of the 4 molecular subgroups were poorly sensitive and specific, and others markers evaluated did not reveal prognostic value in our series

O reparo de lesões genômicas tem papel critico na supressão da transformação maligna. Para melanomas, tipo de câncer de pele, lesões causadas por UV são responsáveis pela aquisição do fenótipo maligno. A via de reparo por excisão de nucleotídeos (NER) exerce função importante na correção destas lesões, sendo na proteína XPC um dos seus principais agentes atuantes no reconhecimento das lesões. Enquanto mutações em XPC predispõem à Xeroderma Pigmentosum, modulações na função de XPC podem exercer papel critico na aquisição de mutações UV em melanomas esporádicos. A modulação pode ocorrer por ação transcricional, interação proteica ou também por fatores genéticos que possam interferir com sua expressão e/ou atividade. Para entender o papel da transcrição na modulação do reparo exercido por XPC, verificou-se o papel de p53 neste contexto. Comparando-se linhagens com diferentes status funcionais de p53 frente a lesões UVB, os resultados indicaram seu papel quanto a diferenças na sensibilidade à exposição, expressão de proteínas de reparo e cinética de reparo de lesões CPD. Além disso, caracterizou-se a expressão de proteínas envolvidas com apoptose e a ativação de caspase 3/7, além da expressão de espécies reativas de oxigênio produzidas após UVB, as quais sugeriram um efeito pró-sobrevivência após neutralização destas moléculas. Com relação à modulação de XPC quanto a seu principal partner, hHR23B, procurou-se verificar seu papel na biologia de melanomas. Análise da expressão de hHR23B em amostras de tecido de séries névicas, melanomas primários e metástases, demonstrou grande heterogeneidade de marcação principalmente em nevus e melanomas primários. Dados apresentados demonstraram que hHR23B esta relacionado à estabilidade e acúmulo de XPC, consequentemente alterando a eficiência de reparo de DNA para lesões UVB. O silenciamento de hHR23B modulou a morte celular após UVB de maneira a diminuir sua taxa, porém a longo prazo, tal sobrevivência não foi evidenciada. O silenciamento de hHR23B também afetou a sensibilidade à alguns agentes quimioterápicos. Para os possíveis efeitos genéticos na modulação de XPC, verificou-se o papel de polimorfismos genéticos existentes no gene. Análise de expressão alelo-específica do polimorfismo K939Q não sugeriu diferenças na expressão relacionadas a estas variantes polimórficas. Por fim, verificou-se o papel que p53 e NER poderiam exercer sobre a resposta à cisplatina. Usando as mesmas linhagens utilizadas para a resposta à UVB, verificou-se que, ao contrário, células possuindo atividade funcional de p53 apresentavam maior sensibilidade ao quimioterápico. Esta sensibilidade não se mostrou relacionada diretamente a expressão de proteínas de reparo como XPC e ERCC1, embora XPC tenha demonstrado estar relacionado à sensibilidade quando do uso de siRNA. Além disso, a restauração da atividade de p53 seja por uso de vetores virais ou através de inibidores de HDM-2 como Nutlin-3, demonstraram-se eficazes no intuito de aumentar a sensibilidade ao quimioterápico. Em conjunto, os resultados apresentados evidenciam o papel de diferentes fatores que possam modular a atividade de reparo de DNA frente à UVB e quimioterápicos, principalmente no que se refere ao eixo p53-hHR23B-XPC, pontuando-os como peças importantes na compreensão da biologia de melanomas em processos de carcinogênese, progressão e quimiorresistência / The repair of genomic lesions plays a critical role in the suppression of malignant transformation. For melanoma, a type of skin cancer, lesions caused by UV are responsible for the acquisition of the malignant phenotype. The nucleotide excision repair (NER) pathway has an important role in the repair of these lesions and XPC protein in one of its main active agents in lesion recognition. While mutations in XPC predispose to Xeroderma Pigmentosum, modulations in XPC function may play critical role in the acquisition of UV mutations in sporadic melanomas. The modulation may occur either by transcriptional activity, protein interaction or also by genetic factors that may interfere with their expression and / or activity. To understand the role of the transcription in modulating the DNA repair exerted by XPC, we verified the role of p53 in this context. Comparing cells lines with different p53 functional status after UVB injury, the results indicated its role regarding the differences in sensitivity, expression of repair proteins and DNA repair kinetics of CPD lesions. Moreover, we characterized the expression of proteins involved in apoptosis and the activation of caspase 3/7, besides the analysis of the expression of reactive oxygen species produced after UVB exposure. Such molecules suggested a pró-survival effect after UVB exposure due to results observed after neutralization. Regarding the modulation of XPC by its main partner, hHR23B, we verified its role in the biology of melanoma. HHR23B expression analysis in tissue samples series of nevus, primary melanoma and metastases showed critical heterogeneity stainning, especially in nevi and primary melanomas samples. Results indicated that hHR23B play a role in XPC stability and accumulation, altering the efficiency of DNA repair to UVB injury. Knocking-down of hHR23B by siRNA modulated cell death after UVB by decreasing its rate, but the long-term survival has not been demonstrated so. The knocking-down of hHR23B also affected sensitivity to some chemotherapeutic agents. Regarding the possible genetic effects in the XPC modulation, we verified the role of existing genetic polymorphisms inside the gene. Analysis of allele-specific expression of K939Q polymorphism did not suggest differences in expression related to these polymorphic variants. Finally, it was tested that the role p53 and NER may have on the response to cisplatin. Using the same cell lines used for the response to UVB, it was found that, in contrast, cells having functional activity of p53 showed greater sensitivity to chemotherapy. This sensitivity was not directly related to expression of DNA repair proteins such as XPC and ERCC1, although XPC has shown to be related to the sensitivity when using siRNA. In addition, the restoration of p53 activity by use of viral vectors or by HDM-2 inhibitors, such as nutlin-3, proved to be effective in order to increase the sensitivity to chemotherapy. Overall, the results demonstrate the role of different factors that may modulate the activity of DNA repair against UVB and chemotherapy, especially with regard to p53-hHR23B-XPC axis, selecting them as major players in the understanding of the melanoma biology regarding the processes of carcinogenesis, progression and chemoresistance