Resumo não disponível

A homocistinúria clássica é um erro inato do metabolismo, bioquimicamente caracterizado pela deficiência da enzima cistationina β-sintase, o que promove um bloqueio na via de transulfuração da homocisteína e, consequente acúmulo tecidual desse aminoácido. Clinicamente, os pacientes apresentam retardo mental, déficit cognitivo, crises convulsivas, alterações vasculares, esqueléticas, oculares, hepáticas, e pulmonares, cuja fisiopatologia não está totalmente elucidada. O objetivo geral da presente tese foi avaliar o efeito da hiper-homocisteinemia severa sobre parâmetros inflamatórios (citocinas, quimiocinas, óxido nítrico, proteínas de fase aguda e contagem diferencial de leucócitos) e outros parâmetros relacionados, tais como o sistema da coagulação, o estresse oxidativo e, as vias de sinalização da Akt e GSK-3β no cérebro e/ou sangue de ratos. Além disso, investigamos o efeito do estresse oxidativo em pulmão de ratos submetidos à hiper-homocisteinemia severa. A hiperhomocisteinemia aguda aumentou as citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1β e IL-6), a quimiocina CCL2 (MCP-1) e os níveis de nitritos no hipocampo e no córtex cerebral de ratos. Os níveis de TNF-α e IL-6 também aumentaram no soro de ratos submetidos à administração aguda de homocísteina. A percentagem de neutrófilos e monócitos aumentou no sangue após a administração aguda de homocisteína; entretanto, não observamos alterações nos níveis das proteínas de fase aguda (PCR e α1- glicoproteína ácida). A hiper-homocisteinemia crônica severa também aumentou as citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1β e IL-6), a quimiocina CCL2 (MCP-1) e os níveis de prostaglandina E2 no hipocampo e/ou soro de ratos. Os níveis de nitritos aumentaram no hipocampo, mas verificamos uma diminuição em seus níveis no soro após a hiper-homocisteinemia crônica. O imunoconteúdo citoplasmático e nuclear da subunidade p65 do NF-κB e a atividade da acetilcolinesterase aumentaram no hipocampo de ratos submetidos à hiper-homocisteinemia crônica. Demonstramos também que a hiper-homocisteinemia aguda severa aumentou a contagem de plaquetas no sangue e os níveis de fibrinogênio no plasma. O tempo de protrombina, tempo de tromboplastina parcial ativada e os níveis de nitritos no plasma diminuíram após a administração aguda de homocisteína. Mostramos que a hiperhomocisteinemia aguda severa aumentou as espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico, um índice de peroxidação lipídica e, diminuiu a atividade das enzimas antioxidantes, superóxido dismutase e glutationa peroxidase e aumentou a atividade da enzima catalase em eritrócitos de ratos. Em relação ao envolvimento das vias de sinalização, demonstramos que a hiper-homocisteinemia aguda severa aumentou a fosforilação da Akt, o imunoconteúdo citoplasmático e nuclear da subunidade p65 do NF-κB e a fosforilação da proteína Tau, mas reduziu a fosforilação da GSK-3β após a administração aguda de homocisteína. Por outro lado, a hiper-homocisteinemia crônica severa não alterou a fosforilação da Akt e GSK-3β após a administração crônica desse aminoácido. Além disso, demonstramos que a hiper-homocisteinemia crônica severa aumentou a peroxidação lipídica e, reduziu as defesas antioxidantes enzimáticas e não-enzimáticas em pulmão de ratos. Em resumo, nossos resultados demonstram que a inflamação, a hipercoagulabilidade e o estresse oxidativo podem ocorrer após a hiper-homocisteinemia severa, o que pode estar associado, pelo menos em parte, com as alterações cerebrais e cardiovasculares, bem como no tromboembolismo pulmonar que estão presentes em alguns pacientes homocistinúricos. / Classical homocystinuria, an inborn error of metabolism, is biochemically characterized by cystathionine -synthase deficiency and homocysteine tissue accumulation. Mental retardation, cognitive deficiency, seizures, vascular, skeletal, ocular, hepatic and pulmonary complications are common symptoms in homocystinuric patients. However, the mechanisms underlying these alterations are not fully understood. The main objective of this doctoral thesis was to investigate the effect of severe hyperhomocysteinemia on inflammatory parameters (cytokines, chemokines, nitric oxide, acute phase-proteins and a differential count of leukocytes) and other related parameters, such as the coagulation system, oxidative stress as well as the involvement of the Akt and GSK-3β pathway in the brain and/or blood of rats. In addition, we investigated the effect of oxidative stress in the lungs of rats submitted to severe hyperhomocysteinemia. Acute hyperhomocysteinemia increased proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β and IL-6), chemokine CCL2 (MCP-1) and nitrite levels in hippocampus and cerebral cortex of rats. TNF-α and IL-6 levels also increased in serum of rats subjected to acute homocysteine administration. The percentage of neutrophils and monocytes increased in blood after acute homocysteine administration, but acute phase-proteins (CRP and α1-acid glycoprotein) were not altered by homocysteine administration. In addition, we showed that chronic hyperhomocysteinemia increased pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β and IL-6), chemokine CCL2 (MCP-1) and prostaglandin E2 levels in the hippocampus and/or serum of rats. Nitrite levels increased in the hippocampus, but decreased in the serum after chronic homocysteine administration. The immunocontent of cytosolic and nuclear NF-κB/p65 subunit and the acetylcholinesterase activity were increased in the hippocampus of rats subjected to chronic hyperhomocysteinemia. Next, we demonstrated that acute hyperhomocysteinemia increased the platelet counts in the blood and plasma fibrinogen levels of rats. Prothrombin time, activated partial thromboplastin time, and nitrite levels decreased in plasma after acute hyperhomocysteinemia. Additionally, we showed that acute hyperhomocysteinemia increased thiobarbituric acid-reactive, an index of lipid peroxidation, and decreased the superoxide dismutase and gluthatione peroxidase activity and also increased the catalase activity in erythrocytes of rats. Moreover, acute hyperhomocysteinemia increases Akt phosphorylation, cytosolic and nuclear immunocontent of NF-κβ/p65 subunit and Tau protein phosphorylation, but reduces GSK-3β phosphorylation after acute homocysteine administration. On the other hand, chronic hyperhomocysteinemia did not alter Akt and GSK-3β phosphorylation after the chronic administration of this amino acid. We also showed that chronic hyperhomocysteinemia increased lipid peroxidation, and disrupted antioxidant defenses (enzymatic and non-enzymatic) in the lungs of rats. In summary, our findings showed that inflammation, hypercoagulability and oxidative stress can occur after severe hyperhomocysteinemia, possibly in association, at least in part, with cerebral and cardiovascular dysfunction, as well as pulmonary thromboembolism complications observed in some homocystinuric patients.

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A homocistinúria clássica é um erro inato do metabolismo, bioquimicamente caracterizado pela deficiência da enzima cistationina β-sintase, o que promove um bloqueio na via de transulfuração da homocisteína e, consequente acúmulo tecidual desse aminoácido. Clinicamente, os pacientes apresentam retardo mental, déficit cognitivo, crises convulsivas, alterações vasculares, esqueléticas, oculares, hepáticas, e pulmonares, cuja fisiopatologia não está totalmente elucidada. O objetivo geral da presente tese foi avaliar o efeito da hiper-homocisteinemia severa sobre parâmetros inflamatórios (citocinas, quimiocinas, óxido nítrico, proteínas de fase aguda e contagem diferencial de leucócitos) e outros parâmetros relacionados, tais como o sistema da coagulação, o estresse oxidativo e, as vias de sinalização da Akt e GSK-3β no cérebro e/ou sangue de ratos. Além disso, investigamos o efeito do estresse oxidativo em pulmão de ratos submetidos à hiper-homocisteinemia severa. A hiperhomocisteinemia aguda aumentou as citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1β e IL-6), a quimiocina CCL2 (MCP-1) e os níveis de nitritos no hipocampo e no córtex cerebral de ratos. Os níveis de TNF-α e IL-6 também aumentaram no soro de ratos submetidos à administração aguda de homocísteina. A percentagem de neutrófilos e monócitos aumentou no sangue após a administração aguda de homocisteína; entretanto, não observamos alterações nos níveis das proteínas de fase aguda (PCR e α1- glicoproteína ácida). A hiper-homocisteinemia crônica severa também aumentou as citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1β e IL-6), a quimiocina CCL2 (MCP-1) e os níveis de prostaglandina E2 no hipocampo e/ou soro de ratos. Os níveis de nitritos aumentaram no hipocampo, mas verificamos uma diminuição em seus níveis no soro após a hiper-homocisteinemia crônica. O imunoconteúdo citoplasmático e nuclear da subunidade p65 do NF-κB e a atividade da acetilcolinesterase aumentaram no hipocampo de ratos submetidos à hiper-homocisteinemia crônica. Demonstramos também que a hiper-homocisteinemia aguda severa aumentou a contagem de plaquetas no sangue e os níveis de fibrinogênio no plasma. O tempo de protrombina, tempo de tromboplastina parcial ativada e os níveis de nitritos no plasma diminuíram após a administração aguda de homocisteína. Mostramos que a hiperhomocisteinemia aguda severa aumentou as espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico, um índice de peroxidação lipídica e, diminuiu a atividade das enzimas antioxidantes, superóxido dismutase e glutationa peroxidase e aumentou a atividade da enzima catalase em eritrócitos de ratos. Em relação ao envolvimento das vias de sinalização, demonstramos que a hiper-homocisteinemia aguda severa aumentou a fosforilação da Akt, o imunoconteúdo citoplasmático e nuclear da subunidade p65 do NF-κB e a fosforilação da proteína Tau, mas reduziu a fosforilação da GSK-3β após a administração aguda de homocisteína. Por outro lado, a hiper-homocisteinemia crônica severa não alterou a fosforilação da Akt e GSK-3β após a administração crônica desse aminoácido. Além disso, demonstramos que a hiper-homocisteinemia crônica severa aumentou a peroxidação lipídica e, reduziu as defesas antioxidantes enzimáticas e não-enzimáticas em pulmão de ratos. Em resumo, nossos resultados demonstram que a inflamação, a hipercoagulabilidade e o estresse oxidativo podem ocorrer após a hiper-homocisteinemia severa, o que pode estar associado, pelo menos em parte, com as alterações cerebrais e cardiovasculares, bem como no tromboembolismo pulmonar que estão presentes em alguns pacientes homocistinúricos. / Classical homocystinuria, an inborn error of metabolism, is biochemically characterized by cystathionine -synthase deficiency and homocysteine tissue accumulation. Mental retardation, cognitive deficiency, seizures, vascular, skeletal, ocular, hepatic and pulmonary complications are common symptoms in homocystinuric patients. However, the mechanisms underlying these alterations are not fully understood. The main objective of this doctoral thesis was to investigate the effect of severe hyperhomocysteinemia on inflammatory parameters (cytokines, chemokines, nitric oxide, acute phase-proteins and a differential count of leukocytes) and other related parameters, such as the coagulation system, oxidative stress as well as the involvement of the Akt and GSK-3β pathway in the brain and/or blood of rats. In addition, we investigated the effect of oxidative stress in the lungs of rats submitted to severe hyperhomocysteinemia. Acute hyperhomocysteinemia increased proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β and IL-6), chemokine CCL2 (MCP-1) and nitrite levels in hippocampus and cerebral cortex of rats. TNF-α and IL-6 levels also increased in serum of rats subjected to acute homocysteine administration. The percentage of neutrophils and monocytes increased in blood after acute homocysteine administration, but acute phase-proteins (CRP and α1-acid glycoprotein) were not altered by homocysteine administration. In addition, we showed that chronic hyperhomocysteinemia increased pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β and IL-6), chemokine CCL2 (MCP-1) and prostaglandin E2 levels in the hippocampus and/or serum of rats. Nitrite levels increased in the hippocampus, but decreased in the serum after chronic homocysteine administration. The immunocontent of cytosolic and nuclear NF-κB/p65 subunit and the acetylcholinesterase activity were increased in the hippocampus of rats subjected to chronic hyperhomocysteinemia. Next, we demonstrated that acute hyperhomocysteinemia increased the platelet counts in the blood and plasma fibrinogen levels of rats. Prothrombin time, activated partial thromboplastin time, and nitrite levels decreased in plasma after acute hyperhomocysteinemia. Additionally, we showed that acute hyperhomocysteinemia increased thiobarbituric acid-reactive, an index of lipid peroxidation, and decreased the superoxide dismutase and gluthatione peroxidase activity and also increased the catalase activity in erythrocytes of rats. Moreover, acute hyperhomocysteinemia increases Akt phosphorylation, cytosolic and nuclear immunocontent of NF-κβ/p65 subunit and Tau protein phosphorylation, but reduces GSK-3β phosphorylation after acute homocysteine administration. On the other hand, chronic hyperhomocysteinemia did not alter Akt and GSK-3β phosphorylation after the chronic administration of this amino acid. We also showed that chronic hyperhomocysteinemia increased lipid peroxidation, and disrupted antioxidant defenses (enzymatic and non-enzymatic) in the lungs of rats. In summary, our findings showed that inflammation, hypercoagulability and oxidative stress can occur after severe hyperhomocysteinemia, possibly in association, at least in part, with cerebral and cardiovascular dysfunction, as well as pulmonary thromboembolism complications observed in some homocystinuric patients.

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Introdução: Nas últimas décadas, a reestenose tem sido o \"calcanhar de Aquiles\" da intervenção coronária percutânea (ICP), limitando seus resultados no médio e longo prazo. Estudos preliminares demonstraram que após a injúria inicial com catéter balão e/ou com stents coronarianos, há desnudação endotelial, dissecção, deposição plaquetária e atração de leucócitos como resposta imediata, podendo levar à reestenose no seguimento mais tardio. A injúria local na parede arterial após implante de stent pode promover a expressão genética e liberação de mediadores inflamatórios, interleucinas, proteínas de fase aguda e fatores de coagulação, deposição de plaquetas e formação de trombos. Estes processos podem estar diretamente relacionados ao prognóstico da doença cardiovascular, porém são escassos os estudos que caracterizem a resposta inflamatória aguda pós-implante de stent coronariano e à ocorrência de eventos adversos. Objetivos: Neste estudo, pretendeu-se avaliar os efeitos de dose de ataque de Rosuvastatina (40mg) sobre a resposta inflamatória aguda após implante de stent coronariano, bem como correlacionar as variações das concentrações de citocinas e a respectiva expressão gênica. Métodos: Pacientes portadores de doença coronária estável sem uso de estatina (há mais de 7 dias), submetidos à intervenção coronária percutânea eletiva em artéria coronária nativa foram randomizados para receberem dose única de ataque de rosuvastatina (40 mg via oral, 3 horas prévias ao procedimento; Grupo Tratado (GT); n=63) versus Grupo Controle (GC) (Ausência da administração de rosuvastatina); n=61. Foram obtidas amostras do sangue periférico antes da administração via oral da medicação (A), 3 horas após medicação (B) e 3 horas após implante do stent coronariano (C). Avaliou-se hemograma completo, dosagem de proteína C reativa (PCR), óxido nítrico (NO) e análise da expressão dos genes e das proteínas, por meio de RT-qPCR e multiplex luminex, dos mediadores IL-1 ?, IL-6, IL-8, PAI-1, MCP- 1, TNF-? e TGF-?. Os pacientes foram acompanhados clinicamente por doze meses após o procedimento. Resultados: Os grupos não apresentaram diferenças significantes em relação às características clínicas, angiográficas e técnicas, com exceção da ICP para lesões em bifurcação, mais comum no GC (19,7% versus 6,2%; p=0,032). Para a expressão gênica, observou-se redução para IL-6 (p<0,001), da IL-1 ? (p=0,016) e PAI-1 (p=0,002) no Grupo Tratado. Para as interleucinas analisadas, observou-se uma diminuição progressiva nas concentrações de IL-6 0,209 pg/ml (IC 0,156;0,28 p<0,001), IL-1? 0,491 pg/ml (IC 0,349;0,692; p<0,001) e PAI-1 0,986 pg/ml com pinteração<0,001) no Grupo Tratado. Houve redução da concentração de PCR no tempo C no GT (p=0,04). Para o NO, ocorreu elevação dos valores do tempo A para C no Grupo Tratado (p=0,004). Na fase intra-hospitalar, ocorreu mais infarto periprocedimento entre os pacientes do Grupo Controle (23% vs 4,7%; p=0,004). No acompanhamento clínico de 12 meses ocorreram mais eventos combinados no Grupo Controle GC (9,8% vs 1,6%; p=0,058). Conclusão: Os resultados deste estudo demonstraram que a rosuvastatina em sua dose de ataque máxima preconizada (40mg), reduz os níveis séricos de marcadores inflamatórios agudos (IL-1 ?, IL-6, PAI-1 e PCR), com incremento dos valores de NO após ICP. / Restenosis remains as the \"Achilles\' heal\" of interventional cardiology, limiting the mid to long term efficacy of percutaneouos coronary interventions (PCI). Preliminary studies have shown that after initial injury with balloon catheter and/or metallic stents, there is endothelial denudation, dissection, platelet deposition and leukocyte attraction as an immediate response, which might limit the late benefits of PCI. Local injury to the arterial wall after stent implantation may promote the gene expression and release of inflammatory mediators, interleukins, acute phase proteins and coagulation factors, platelet deposition and thrombus formation, which are directly related to the prognosis of cardiovascular disease. Despite their importance, there are few studies that characterize the acute inflammatory response after coronary stent implantation and correlate it to the occurrence of adverse events.Objectives: We sougth to evaluate the effects of the loading dose of Rosuvastatin (40mg) on the acute inflammatory response after PCI with mettalic stents, as well as to correlate the variations in cytokine levels and their respective gene expression. Methods: Patients with stable coronary disease without statin (>=7 days) undergoing elective PCI to de novo lesions in the native coronary arterywere randomized to receive a loading dose of 40 mg of rosuvastatin [N = 63] versus a control group (CG) (absence of loading dose); [N = 61]. Blood samples were obtained prior to oral administration of the statin (A), 3 hours after medication (B) and 3 hours after PCI (C). The following laboratory tests were conducted: complete blood count, C-reactive protein (CRP), nitric oxide (NO) and analysis of gene and protein expression by means of RT-qPCR and multiplex luminex, IL-1 mediators, IL-6, IL-8, PAI-1, MCP-1, TNF-? and TGF-?. Clinical follow up was achieved up to 12 months after the procedure. Results: The groups did not significantly differ regarding clinical, angiographic and procedure characteristics, except for the higher amount of bifurcation lesions in the CG (19.7% versus 6.2%, p = 0.032). Among patients pre treated wit the statin, there was a reduction in gene expression for IL-6 (p <0.001), IL-1? (p = 0.016) and PAI-1 (p = 0.002). For the IL analyses, a progressive decrease in the concentrations of IL-6 0.209 pg / ml (IC 0.156; 0.28 p <0.001), IL-1? 0.491 pg / ml (IC 0.349; 0.692, p <0.001) and PAI-1 0.986 pg / ml with paving <0.001) were observed among patients treated with the statin. Furthermore, a progressive reduction in the concentration of CRP was observed in the three timepoints among patients of the rosuvastatin cohort (p = 0.04). An increase in NO concentration was observed from timepoint A to C in the statin group (p = 0.004). During the in hospital period, more periprocedural MI occurred among patients in the control group (23% vs 4.7%, p = 0.004). Also, 12-month MACE rate was higher in the control group (9.8% vs 1.6%, p = 0.058). Conclusion: Pre loading with high dose of rosuvastatin resulted in a marked reduction in the expression of the main inflammatory markers (IL-1 ?, IL-6, PAI-1 and CRP) associated with restenosis after PCI with stents. Additionally, an increase in the NO blood concentration and expression was noticed among these patients.

Orientadores: : Maria de Fátima Sonati, Maria Heloisa de Souza Lima Blotta / Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T13:55:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_MagnunNueldoNunesdos_D.pdf: 2763250 bytes, checksum: 97b42022bbd7d2138c530222b5f5f959 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Estudos recentes sobre o papel da inflamação na fisiopatologia da anemia falciforme (AF) sugerem que o equilíbrio da resposta imune Th1/Th2, relacionado ao perfil de citocinas produzidas, pode influenciar a morbidade nos portadores dessa doença. A haptoglobina (Hp) é uma glicoproteína plasmática cuja função primordial é ligar-se à hemoglobina (Hb) livre no plasma para prevenir a excreção renal de ferro e os efeitos oxidativos resultantes de sua presença no vaso. Além disso, é uma proteína de fase aguda positiva, com propriedades imunomodulatórias. Dois alelos codominantes, HP1 e HP2, resultam em três genótipos/fenótipos principais, Hp1-1, Hp2-1 e Hp2-2, que correspondem a proteínas com características físico-químicas e eficiências distintas. O objetivo do presente estudo foi avaliar se os genótipos da Hp poderiam influenciar o estado inflamatório na AF por meio da comparação dos níveis de determinados parâmetros a ele relacionados. Para isso, foram comparados os níveis plasmáticos ou séricos e/ou as taxas de expressão gênica (em células mononucleares) dos mediadores imunológicos IL-1?, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-?, das moléculas de adesão sVCAM-1, sICAM-1 e sL-selectina, do antígeno do Fator de Von Willebrand (FvW:Ag), dos Dímeros-D, da proteína C reativa (CRP), do microRNA-155 (miRNA-155) e do gene HP (ambos em células mononucleares e polimorfonucleares) em 92 pacientes adultos com AF acompanhados no Hemocentro de Pernambuco, subdivididos em Hp1-1 (n=27), Hp2-1 (n=37) e Hp2-2 (n=28). Os valores obtidos e os genótipos de Hp foram ainda comparados com dados clínicos e laboratoriais (hematológicos e bioquímicos) oriundos dos prontuários dos pacientes. Além disso, a presença do polimorfismo CCR5?32, relacionado à resposta inflamatória, foi investigada nesses pacientes. As taxas de expressão gênica e os níveis plasmáticos/séricos foram quantificados por PCR em tempo real (qPCR) e ELISA, respectivamente, enquanto os genótipos de Hp e o polimorfismo CCR5?32 foram investigados por reações de PCR. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre os genótipos da Hp quando comparados os níveis plasmáticos/séricos dos mediadores imunológicos, das moléculas de adesão, da CRP e dos Dímeros-D, e tampouco da expressão gênica de IL-1?, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-?, HP e do miRNA-155. Em contrapartida, foi observada uma diminuição significativa do FvW:Ag (p=0,018) no grupo de pacientes com o genótipo Hp2-2, o que pode sugerir maior disfunção endotelial; diminuição significativa da concentração plasmática de creatinina e tendência ao aumento da estimativa da Taxa de Filtração Glomerular (eTFG) (p=0,08) em um subgrupo de pacientes com idade ? 27 anos (mediana da idade) com genótipo Hp2-2. Com relação ao histórico de úlceras de perna, observamos que esse evento clínico estava relacionado a níveis significativamente aumentados de IL-8, CRP e contagem de reticulócitos, mas não aos genótipos de Hp. De nosso conhecimento, este é o primeiro estudo no Brasil a investigar se o polimorfismo da Hp pode influenciar a resposta inflamatória na AF. Com base nos resultados obtidos, é possível sugerir que ele, em associação a muitos outros fatores genéticos e ambientais, também contribua para a diversidade clínica dessa doença. No entanto, estudos experimentais serão necessários para essa investigação / Abstract: Recent studies on the role of inflammation in the pathophysiology of sickle cell anemia (SCA) suggest the Th1/Th2 balance of the immune response, relating to the profile of cytokines produced, may influence the morbidity in patients with SCA. Haptoglobin (Hp) is a plasma glycoprotein whose primary function is to bind to free hemoglobin (Hb) in the plasma, preventing excretion of iron by the kidneys and protecting blood vessels from its oxidative effects. Moreover, it is also an acute phase positive protein with immunomodulatory properties. Two codominant alleles, HP1 and HP2, result in three main genotypes/phenotypes, Hp1-1, Hp2-1 and Hp2-2, which correspond to proteins with different functional characteristics. The aim of this study was to evaluate whether the Hp genotypes may influence the inflammatory state in SCA by comparing the levels of certain parameters related to it. For this purpose, we compared the plasma or serum and/or rates of gene expression (in mononuclear cells) of immune mediators IL-1 ?, IL-6, IL-8, IL-10 and TNF-?, adhesion molecules sVCAM-1, sICAM-1 and sL-selectin, antigen von Willebrand Factor (vWF: Ag), D-dimers, C-reactive protein (CRP), microRNA-155 (miRNA-155) and Hp gene (both in mononuclear and polymorphonuclear cells) in 92 adult patients with SCA followed up at the Blood Center of Pernambuco, subdivided in Hp1-1 (n = 27), Hp2-1 (n = 37) and Hp2-2 (n = 28). The values obtained and the Hp genotypes were also compared to clinical and laboratory (hematology and biochemistry) data from patients' records. Furthermore, the presence of polymorphism CCR5?32, related to inflammatory response, was investigated in these patients. The rates of gene expression and serum/plasma were quantified by real time PCR (qPCR) and ELISA, respectively, while the Hp genotypes of polymorphism and CCR5?32 were investigated by PCR reactions. There were no statistically significant differences between Hp genotypes compared to plasma/serum levels of immune mediators, adhesion molecules, CRP and D-dimers, and neither the gene expression of IL-1?, IL-6, IL -8, IL-10, TNF-?, HP and miRNA-155. On the other hand, we observed a significant decrease of vWF:Ag (p=0.018) in patients with genotype Hp2-2, which may suggest greater endothelial dysfunction; significant decrease in plasma creatinine and a tendency to increasing the estimate of the Glomerular Filtration Rate (eGFR) (p = 0.08) in a subgroup of patients aged ? 27 years (median age) with Hp2-2 genotype. In regard to the history of leg ulcers, this clinical event was related to significantly increased levels of IL-8, CRP and reticulocyte count, but not to Hp genotypes. To our knowledge, this is the first study in Brazil that investigated whether the Hp polymorphism may influence the inflammatory response in SCA. Based on the data obtained, it is possible to suggest that, in combination with many other genetic and environmental factors, the Hp genotype also contribute to the clinical diversity of this disease. However, experimental studies will be needed for this investigation / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Acrocomia é do gênero pertencente à família Arecacea, nativa de florestas tropicais. A polpa do fruto macaúba tem usos alimentícios, como sucos, geleias, sorvetes que possuem substâncias bioativas, “ditas funcionais”, como antioxidantes, fibras e minerais imunomodularodes como o Zinco. Sabe-se que fibras e compostos antioxidantes têm ação estimulante para o tratamento de inflamações. O presente trabalho teve como objetivo investigar a atividade antibacteriana e anti-inflamatória dos extratos e das frações do óleo do mesocarpo da Acrocomia aculeataobtidas por extração a frio e as frações por cromatografia de coluna. Ascepas bacterianas foram tratadas com os extratos à uma concentração de 5mg/ml para a avaliação da atividade bacteriana e para controle positivo foi utilizado o antimicrobiano convencional Imipenen. Na avaliação da atividade antibacteriana foi observado que nenhum dos extratos testados mostraram atividade frente às bactérias Grampositivas e Gram-negativas. Quanto a avaliação da atividade de mediadores da inflamação, as células foram tratadas com os bioativos oleoso do mesocarpo da macaúba e estimuladas com LPS. Após 24 horas o sobrenadante celular foi coletado para avaliação da produção de óxido nítrico (NO•) pela reação de Griess. Analisandoos efeitos sobre a produção de mediadores inflamatórios, foi observado no primeiro ensaio que as frações hexânica (FHex) e metanólica (FMeOH)na concentração de 25 e 50 μg/ml inibiram a produção de NO•, em células macrófagos murino J774 estimulados por LPS. Em ensaios posteriores nas mesmas condições não demonstrou nenhum tipo de atividade, sugerindo a realização de estudos futuros na obtenção do extrato, ou no fracionamento em cromatografia de coluna e até mesmo adaptações nos métodos usados neste trabalho. Este estudo pode fornecer uma base para investigações futuras sobre o papel terapêutico do óleo do mesocarpo no tratamento da inflamação. / Acromonia is a gender belonging to the Arecaceae family and native from the tropical forests. Food is one of the many subjects related to the fruit pulp from macauba, for example: juices, jellies, ice-creams which possess bio actives substances, called as antioxidant, fibers and immune modulators minerals like the Zinc; it is known that fibers and antioxidant compounds have stimulating action to inflammations treatments. This study had the purpose to investigate the antibacterial activity and anti-inflammatory from the extracts and fractions of the Acrocomia aculeata mesocarp oil achieved by extraction of fractions from the spine chromatography. The bacterial vines were treated with the extracts concentration of 5mg/ml to evaluate the bacterial activity e to the positive control was used the conventional antimicrobial Imipenen. In the evaluation of the antibacterial activity was observed that none of the tested extractions showed activity upon the Gram-positives and Gram-negatives bacteria’s. As for the activity evaluation of inflammation mediators, the cells were treated with oil bio actives from macauba’s mesocarp and stimulated with LPS. After 24 hours the cellular supernatant was collected to evaluation of nitric oxide production (NO°) for reaction of Griess. Analyzing the effects under the production of inflammatory mediators, was observed that in the first test that the hexanica fractions (FHex) and metalonica (FmeOH) in concertation of 25 and 50 mg/ml inhibited the NO° production, on macrophages murine J774 cells stimulated by LPS. On further tests in the same conditions doesn’t showed any kind of activity, suggesting for future studies futures observations on obtain the extract or on fractioning on spine chromatography or even for the same adaptations on methods used in this study. This work can provide a base to future investigation about the therapeutic paper of mesocarp oil on inflammation treatment.

Objetivo: Comparar as características inflamatórias da superfície ocular de pacientes com ceratocone (CE) às de pacientes com alergia ocular (AO). Métodos: Realizou-se um estudo transversal, envolvendo 134 participantes, divididos em três grupos: alergia ocular (AO)(n=55), ceratocone com ou sem alergia ocular associada (CE) (n=61) e controle (CO) (n=18). Os participantes do estudo foram recrutados e avaliados em clínica privada na cidade de Chapecó-SC, no período de polinização, em dezembro de 2013 e de outubro de 2014 a janeiro de 2015. Para análise dos grupos, todos os pacientes foram avaliados clinicamente por especialistas em alergia e oftalmologia e submetidos a exame de tomografia de córnea com tecnologia de Scheimpflug (Pentacam HRR), medida da osmolaridade da lágrima por impedanciometria (TearLabR) em ambos os olhos e preenchimento de questionários padronizados para alergia ocular (QA) e para doença de superfície ocular (OSDI). Em 107 de 134 pacientes (CE=50, AO=42, CO=15) foram dosadas as citocinas IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-31, IL-33, IL-17 A, IL-23, TNF-alfa, TNF-beta e INF-gama na lágrima, por meio de tecnologia multiplex com beads magnéticas. A coleta das amostras de lágrimas (5 microlitros no mínimo) foi realizada por meio de aspiração no menisco lacrimal temporal inferior, com capilares de vidro em um único olho. As amostras foram congeladas imediatamente após coleta e mantidas a -80 oC, até o momento da dosagem e análise em agosto de 2016. Resultados: Constatou-se alta prevalência de alergia no grupo com ceratocone 68,85% (42/61), sendo que 42,62% (26/61) dos pacientes desse grupo apresentaram alergia ocular. A intensidade do prurido ocular foi maior nos pacientes AO e no grupo CE, do que no grupo controle (p < 0,001 e p=0,047) e maior no grupo AO do que no CE (p < 0,001). As citocinas INF-gama, IL-13, IL-15, IL-17A, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-31, TNF-beta foram estatisticamente mais elevadas no grupo AO, quando comparadas ao grupo CE. No grupo controle, houve correlação direta da diferença absoluta da osmolaridade (delta osmol) com o nível encontrado para todas as citocinas dosadas. Observou-se, ainda, correlação direta entre níveis de IL-1beta, IL-6 e TNF-alfa com OSDI (p=0,044, p=0,010 e p=0,047) no grupo CE. A osmolaridade foi maior no grupo CE, quando comparado ao AO (p=0,043). Conclusões: Pacientes com ceratocone apresentaram alterações inflamatórias na superfície ocular, tais como: correlação direta do índice OSDI com IL-1beta, IL-6 e TNF-alfa na lágrima; intensidade de prurido mais elevada que no grupo controle e osmolaridade maior que no grupo com AO. No grupo AO, observou-se índices OSDI maiores que no grupo controle e aumento de várias citocinas dosadas, quando comparadas ao grupo CE. Nos pacientes controle, a instabilidade no filme lacrimal (delta osmol), correlacionou-se diretamente com a inflamação ocular (citocinas dosadas). Observou-se alta prevalência de formas leves de alergia ocular no grupo CE (40,98%) e apenas um caso de alergia ocular grave (ceratoconjuntivite atópica [1,3%]), esses dados estão em desacordo com a maior parte da literatura disponível sobre o assunto. Em conjunto, os achados do presente estudo podem estar relacionados a características específicas da região estudada / Purpose: To compare the inflammatory profile of the ocular surface of patients with keratoconus with that of patients with ocular allergy. Methods: A cross sectional study was carried out and involved 134 participants, divided into three groups: ocular allergy group (OA) (N=55), keratoconus with or without ocular allergy (KC) (N=61) and a control group (CO) (N=18). The study participants were recruited and evaluated in a private clinic in the city of Chapecó-SC, during the pollination period in 2013 (December) and from 2014 to 2015 (October to January). In order to analyze the three groups, all patients were evaluated clinically by allergy and ophthalmology specialists, submitted to a corneal tomography exam with Scheimpflug technology (Pentacam HRR), to impedanciociometry to assess tear osmolarity (Tear LabR) of both eyes and to standardized questionnaire rates for ocular allergy (AQ) and for ocular surface disease index (OSDI). Cytokines (IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-31, IL-33, IL-17 A, IL-23, TNF-alfa, TNF-beta and INF-gama) levels were assessed in 107 out of 134 patients using multiplex technology with magnetic beads. Tear collection of at least 5 microliters was carried out on a single eye by suction in the inferior temporal lacrimal meniscus with glass capillaries. The samples were frozen at -800C, immediately after collection to the time of dosing and analysis in August 2016. Results: The prevalence of allergy in the keratoconus group was 68.85% (42/61), within the same group 42.62% (26/61) of the patients had ocular allergy. Ocular pruritus intensity was higher in the OA group and in the KC group than in the control group (p < 0,001 e p=0,047), and higher in the OA group than in the KC group (p < 0,001). Cytokines INF-gama, IL-13, IL-15, IL-17A, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-31, TNF-beta were statiscally higher in the OA group in comparision to the KC group. In the control group, there was a positive correlation of the difference measurement of osmolarity (osmol delta) between the eyes with all cytokines dosed. In the KC group, IL-1beta, IL-6 e TNF-alfa correlated positively with OSDI (p=0,044, p=0,010 e p=0,047). Tear osmolarity was higher in the KC group than in the OA group (p=0,043). Conclusions: Patients with keratoconus had inflammatory changes in the ocular surface, such as: direct correlation between OSDI and tear IL-1beta, IL-6 and TNF-alpha levels; higher pruritus intensity than the control group and higher osmolarity than the OA group. In the OA group, OSDI levels were higher than in the control group and some cytokines had higher levels than the KC group. In the control patients, tear film instability (delta osmol) was direct correlated to ocular inflammation (dosed cytokines). In the KC group, there was a high prevalence of mild forms of ocular allergy (40.98%) and only one case of severe ocular allergy (atopic keratoconjunctivitis [1.3%]). However, most studies avaiable have associated keratoconus with severe forms of ocular allergy. Together, these findings may be related to specific characteristics of the region of study

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste estudo foi investigar na saliva de crianças pré-púberes obesas, em comparação com crianças eutróficas, a presença de possíveis diferenças na expressão de mediadores proteicos relacionados à metainflamação através de um estudo observacional transversal. Foram selecionadas 105 crianças pré-púberes com idade entre 5 e 9 anos, sem quaisquer outros comprometimentos sistêmicos ou bucais sendo realizada a mensuração do comprimento da circunferência da cintura (CC), além do peso e estatura para cálculo do IMC e seu escore Z (zscore IMC), de forma a compor 3 grupos: EU - eutrofia (-2SD&#8804; zscore IMC&#8804;1SD), SP - sobrepeso (1SD < zscore IMC < 2SD) e OB obesidade (zscore IMC &#8805; 2SD). Após o exame médico e odontológico foi feita a coleta de sangue e de saliva total não estimulada, de forma protocolada. Amostras séricas e salivares foram analisadas, individualmente, para a dosagem de IL1&#946;, IL6, IL8. IL10, IL12p70, TNF&#945;, MCP1, leptina, grelina e insulina, por Multiplex e adiponectina total e de alto peso molecular (adipoHMW), por ELISA. Além disso, as amostras séricas foram utilizadas para o delineamento hemodinâmico dos pacientes. As amostras salivares de EU e OB foram também analisadas em pools por espectrometria de massa (MS) e a presença de algumas proteínas foi validada por imunoblotting, para a comparação do perfil salivar proteico. As concentrações dos analitos foram comparadas tanto entre os grupos (teste de Kruswall-Wallis), como em relação ao zscore IMC e ao CC (Correlação de Spearman ou Pearson). Dos 12 analitos, somente a adipoHMW não foi detectada em nenhuma das amostras salivares. Na comparação OBxEU houve aumento na concentração total de proteínas salivares, da insulina e leptina sérica e salivar e do MCP1, além de diminuição da adiponectina sérica total e de adipoHMW e uma menor relação adiponectina/leptina (A/L) no grupo OB. As principais correlações obtidas com o zscore IMC foram com as concentrações séricas e salivares de insulina e leptina (positivas) e com a relação A/L (negativa), observando-se também a correlação negativa com a adiponectina total e adipoHMW séricas. Na comparação entre as concentrações séricas e salivares, foi possível detectar correlação positiva entre as dosagens de insulina e leptina, assim como com os valores da relação A/L. Na análise proteômica por MS foram identificadas 670 proteínas, sendo 163 delas com expressão diferenciada na saliva de OB em relação a EU. Dentre estas, encontram-se alteradas proteínas relacionadas à resposta inflamatória humoral, em especial com a via alternativa do sistema complemento e do metabolismo redox. Foram selecionadas três destas proteínas para validação por imunoblotting, que confirmou o aumento do Fator H e a diminuição do Fator B e da tioredoxina na saliva de OB em relação a EU. Considerando os resultados, podemos verificar que embora com menores concentrações absolutas dos mediadores, a saliva mostrou praticamente as mesmas associações observadas no sangue, em especial para a insulina, leptina e relação A/L, sendo possível admitir que a análise salivar venha a ser um bom método diagnóstico não invasivo para a obesidade infantil. / The aim of this study was to investigate possible different expressions of protein mediators related to metaflammation, in normal and obese prepubertal children`s saliva. For this cross-sectional observational study, 105 prepubertal children, between 5 and 9 years old, without oral or systemic disorders were selected. Weight, height and waist circumference (CC) were measured and body mass index (BMI) and BMI zscore were calculated in order to classify the children into the following groups: EU - lean (-2SD &#8804; BMI zscore &#8804; 1SD), SP - overweight (1SD < BMI zscore <2SD) and OB - obese (BMI zscore &#8805; 2SD). Following medical and dental examination, blood and unstimulated whole saliva were sampled. The samples were individually analyzed by immunoassay for IL1&#946;, IL6, IL8, IL10, IL12p70, TNF, MCP1, leptin, insulin and ghrelin, using Multiplex. Total and high molecular weight (adipoHMW) adiponectin were analyzed using ELISA. Additionally, serum samples were used to assess the patients lipid profile. Pools of EU and OB saliva samples were also analyzed by mass spectrometry (MS). The presence of some proteins was validated for by immunoblotting. The concentrations of analytes were compared between the groups EU, SP and OB (Kruswall-Wallis test), and in relation to BMI zscore and CC (Pearson or Spearman correlation). Only adipoHMW was not detected in any saliva sample. In comparison with EU, OB showed an increase in total concentration of salivary proteins, salivary and serum insulin, serum and salivary leptin and serum MCP1. Also, a decreased serum total adiponectin and adipoHMW and a lower A/L ratio were observed in the OB group. BMI zscore was positively correlated with insulin and leptin salivary and serum concentrations. A negative correlation with A/L ratio, serum total adiponectin and adipoHMW was also observed. These correlations were also found with CC. Comparing blood and saliva concentrations, significant associations between the dosages of insulin and leptin, as well as the values of A/L ratio were found. In proteomic analysis, by MS, 670 proteins were identified, and 163 of them with differential expression in saliva of OB in comparison to EU. Proteins related to the inflammatory response, in particular with the alternative pathway of the complement system and of redox metabolism were differently expressed between EU and OB. Three of these proteins were selected for validation by immunoblotting, which confirmed the increase of complement H Factor and reduced thioredoxin and complement B Factor expression in the saliva of OB compared to EU. Considering the results, it can be concluded that, although at lower absolute concentrations, the inflammatory mediators in saliva showed the same associations observed in blood, especially insulin, leptin, and A/L ratio. It is possible to assume that salivary analysis may become a useful noninvasive diagnosis method for childhood obesity.