Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000434485-Texto+Completo-0.pdf: 1998434 bytes, checksum: 1014acc111807827078acdfb43af808b (MD5) Previous issue date: 2011 / The human tuberculosis (TB), caused mainly by the Mycobacterium tuberculosis represents a global threat leading to death in adults caused by a single infectious agent, accounting for about two million deaths per year worldwide. It is estimated that approximately one third of the word population is latently infected with the bacillus. Chemotherapeutic agents that are more effective and less toxic are required to reduce the duration of current treatment, as well as to improve the cure rates for MDR-TB strains, TDR-TB and XDR-TB. In addition, there is a need for effective treatment for latent TB, preventing the disease to develop into the active form. In 1998 with the complete genome sequencing of the strain of M. tuberculosis H37Rv there was the possibility of the study and validation of specific molecular targets for the rational design of anti-TB drugs. The enzymes that participate in essential metabolic pathways are promising targets for the development of new chemotherapeutic agents for the treatment of TB. The protein phosphoribosylpyrophosphate synthase from M. tuberculosis (PRS, EC 2. 7. 6. 1) is an enzyme of central importance in several metabolic pathways in all cells. PRS catalyzes the formation of AMP and PRPP from R5P and ATP, where ATP donates its diphosphoril group to R5P. The amplification, cloning, expression and purification MtPRS allowed the identification of its substrates diphosphoril donors GTP, CTP and UTP, in addition to previously described ATP and the absence inorganic phosphate (Pi) requirement for enzyme’s activity. Both these features indicate that MtPRS can be classified as a Class II PRS, so far only identified in plants. Fluorescence spectrophotometer binding assays indicate that the R5P, ATP and GTP (substrates) and AMP (product) are able to bind to the enzyme in its free form, indicating a possible sequential random mechanism for purine nucleotides, with sequential ordered release of products, and sequential ordered mechanism for binding of substrates and release of products for pyrimidine nucleotides. Features that distinguish the enzymes PRS Class II Class I, keeping in mind that the Class I includes all three H. sapiens PRS isoforms, can be exploited to develop specific inhibitors for MtPRS for both active and latent TB. / A tuberculose humana (TB), causada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis, representa uma ameaça global liderando a causa de morte em adultos em decorrência de um único agente infeccioso; sendo responsável por cerca de dois milhões de óbitos por ano no mundo. Estima-se que aproximadamente um terço da população está infectada com o bacilo na sua forma latente. Agentes quimioterápicos mais eficazes e menos tóxicos são necessários para reduzir a duração do tratamento atual, assim como melhorar as possibilidades de tratamento para as cepas MDR-TB, XDR-TB e TDR-TB. Além disso, há necessidade de um tratamento eficaz para a TB latente, impedindo ainda que a doença se desenvolva para a forma ativa. Em 1998 com o sequenciamento completo do genoma da cepa de M. tuberculosis H37Rv houve a possibilidade do estudo e validação de alvos moleculares para o desenho racional de drogas anti-TB. As enzimas que participam de vias metabólicas essenciais são alvos promissores para o desenvolvimento de novos quimioterápicos para o tratamento da TB. A proteína fosforribosilpirofosfato sintase de M. tuberculosis (PRS, EC 2. 7. 6. 1) é uma enzima de central importância em muitas vias metabólicas em todas as células. A PRS catalisa a formação do PRPP e AMP a partir da R5P e ATP, onde o ATP irá doar um grupamento difosforil para a R5P. A amplificação, clonagem, expressão e purificação de MtPRS permitiu a identificação de seu substrato doador difosforil GTP, CTP e UTP, além de ATP já descrito anteriormente, além da ausência da dependência de fosfato inorgânico (Pi) para a atividade enzimática. Ambas características nos indicam que MtPRS pode ser classificada como uma PRS classe II, até agora somente identificada em plantas. Através do ensaio de ligação através de espectrometria de fluorescência, vimos que os substratos R5P, ATP e GTP e o produto AMP são capazes de se ligarem à enzima na sua forma livre, indicando um provável mecanismo sequencial aleatório para nucleotídeos de purina, com liberação sequencial ordenada dos produtos; e mecanismo sequencial ordenado para a ligação dos substratos e liberação dos produtos para nucleotídeos de pirimidina. As características que distinguem as enzimas PRS Classe II da Classe I, sendo que a classe I inclui todas as três isoformas H. sapiens, podem ser exploradas para desenvolver inibidores específicos para MtPRS, tanto para a tuberculose ativa quanto para a latente.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000446130-Texto+Completo-0.pdf: 1910036 bytes, checksum: 59d877dc63ef59118f780b6e08cf8f9f (MD5) Previous issue date: 2012 / Tuberculosis remains the most common cause of death due to an infectious agent. Among targets identified in Mycobaterium tuberculosis genome, enzymes of the shikimate pathway deserve special attention. Shikimate kinase is the fifth enzyme of the shikimate pathway, which has been identified in fungi, apicomplexans, plants and prokaryotes. This metabolic route is composed of seven steps, which converts erythrose-4-phosphate and phosphoenol pyruvate to chorismic acid and is responsible for the biosynthesis of aromatic amino acids. Shikimate kinase has been shown to be essential to the survival of Mycobacterium tuberculosis, and since it is absent in human, this enzyme is considered to be a target for chemotherapeutic for development of antitubercular drugs. The aim here is to identify possible inhibitors, focusing on simulations of molecular docking in the ATP-binding site of the enzyme. The program used in the simulations was the Molegro Virtual Docker and protein-ligand interactions were tested in 12 crystallographic structures and then, it was choosen a protocol which generated docking RMSD values below 2 Å. Application of this docking protocol to a decoy dataset generated a enrichment factor of 24. 57, which is considered adequate for molecular docking simulations focused on kinases. The present docking protocol was then applied to a small-molecule database with over 80,000 entries. Analysis of the results identified 5 potencial shikimate kinase inhibitors. Examination of the intermolecular interaction between enzyme and the ligands identified the main structural features responsible for ligand-binding affinity. This is the first molecular docking study focused on the ATP-binding pocket of shikimate kinase. / A Tuberculose continua sendo a causa mais comum de morte em decorrência de um agente infeccioso. Entre os alvos identificados no genoma do Mycobaterium tuberculosis, enzimas da via do chiquimato merecem atenção especial. A chiquimato quinase é a quinta enzima da via do chiquimato, e tem sido identificada em fungos, organismos do filo apicomplexa, plantas e procariontes. Esta via metabólica é composta por sete passos, que catalisam sequencialmente a conversão de eritrose-4-fosfato e fosfoenolpiruvato em corismato; e é responsável pela biossíntese de aminoácidos aromáticos. Chiquimato quinase parece ser essencial para a sobrevivência do Mycobacterium tuberculosis, uma vez que é ausente no homem, esta enzima é considerada como um alvo para o desenvolvimento de quimioterápicos e medicamentos contra a tuberculose. O objetivo é identificar possíveis inibidores, focando as simulações de docking molecular no sítio de ligação do ATP da enzima. O programa usado nas simulações foi o Molegro Virtual Docker e a interação proteína-ligante foi testada em 12 estruturas cristalográficas e logo após, escolhido um protocolo de docking a partir de valores de RMSD abaixo de 2Å. O método foi validado usando o melhor protocolo de re-docking no Virtual Screening através do Fator de Enriquecimento que obteve resultado de 24,57%, que é considerado adequado para as simulações de docking molecular focados em quinases. O presente protocolo de docking foi aplicado em um banco de dados com mais de 80. 000 moléculas. A análise dos resultados identificaram 5 potenciais inibidores da chiquimato quinase. Na análise das interações intermoleculares entre a enzima e os ligantes foram identificadas características estruturais responsáveis pela afinidade da ligação pelo ligante. Este é o primeiro estudo de docking molecular focado no bolsão de ligação do ATP da chiquimato quinase.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000439097-Texto+Completo-0.pdf: 7980733 bytes, checksum: af8f6a7fa6a599651957ad5f12054783 (MD5) Previous issue date: 2012 / Tuberculosis continues to be one of the deadliest diseases in the world. The emergence of drug-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis, the unbearable side effects of the available drugs and the frequent patient non-compliance in completing the therapy have increased the need for development of new effective agents. We have previously demonstrated a potent in vitro inhibitory activity for two pentacyano(isoniazid)ferrate(II) compounds, namely IQG-607 and IQG-639 against the M. tuberculosis enoyl-ACP reductase enzyme. Importantly, IQG- 607 and IQG-639 were active against cultures of M. tuberculosis H37Rv and two isoniazid-resistant clinical isolates in vitro. In the present study, the activity of these compounds was evaluated by using an in vivo murine model of tuberculosis. Swiss mice were infected with M. tuberculosis H37Rv strain, and IQG-607 and IQG-639 (250 mg/kg) were administered during 28 or 56 days. As well, a dose-response study was performed with IQG-607 (at 5, 10, 25, 50, 100, 200 and 250 mg/kg). The activity of test compounds was compared with that of the positive control drug isoniazid at 25 mg/kg. After 28 or 56 days of treatment, either IQG-607 or isoniazid significantly reduced M. tuberculosis-induced splenomegaly, and also significantly diminished the colony-forming units in both spleens and lungs. IQG-607 or isoniazid ameliorated the lung macroscopic aspect, reducing the lung lesions to a similar extent. However, IQG-639 was not capable of significantly modifying any evaluated parameter. IQG-607 did not display a classical dose-dependent profile in our murine model of tuberculosis, and 10 mg/kg was the lowest dose able to show significant activity, which was similar to the inhibition observed for higher doses. In addition, experiments using early and late controls of infection revealed a bactericidal activity for IQG-607 in our model. The promising activity of IQG-607 in M. tuberculosis-infected mice suggests that this compound might represent a good candidate for clinical development as a new antimycobacterial agent. / A tuberculose é uma das principais causas de morte no mundo. O surgimento e disseminação de cepas de Mycobacterium tuberculosis resistentes a fármacos, os efeitos indesejáveis dos fármacos atualmente disponíveis e a falta de adesão dos pacientes ao tratamento têm aumentado a necessidade do desenvolvimento de novos agentes anti-tuberculose. Estudos prévios revelaram uma potente atividade inibitória in vitro de dois compostos pentaciano(isoniazida)ferrato(II), denominados IQG-607 e IQG- 639, frente a enzima enoil-ACP redutase de M. tuberculosis. Ainda, o IQG- 607 e o IQG-639 foram ativos quando testados em culturas de M. tuberculosis H37Rv e sobre dois isolados clínicos resistentes à isoniazida in vitro. Neste trabalho, a atividade destes dois compostos foi avaliada in vivo, utilizando um modelo murino de infecção por M. tuberculosis. Camundongos suíços foram infectados com a cepa de M. tuberculosis H37Rv e o IQG-607 ou o IQG-639 (250 mg/kg) foram administrados aos animais durante 28 ou 56 dias. Adicionalmente, um estudo de dose-resposta foi realizado com o composto IQG-607, empregando as doses de 5, 10, 25, 50, 100, 200 e 250 mg/kg. As atividades dos compostos-teste foram comparadas à atividade da isoniazida (25 mg/kg), o controle positivo do tratamento. Após 28 ou 56 dias de tratamento, tanto o IQG-607 quanto a isoniazida reduziram significativamente a esplenomegalia induzida pela infecção e, também, diminuíram as unidades formadoras de colônia, tanto nos pulmões quanto nos baços dos animais tratados. O IQG-607 e a isoniazida melhoraram o aspecto macroscópico dos pulmões, reduzindo as lesões pulmonares de maneira semelhante. Por sua vez, o IQG-639 não foi capaz de modificar significativamente nenhum parâmetro avaliado neste estudo. O IQG-607 não apresentou um perfil clássico de dose dependência, sendo observada atividade inibitória significativa similar, entre as doses de 10 mg/kg e 250 mg/kg. Além disto, um experimento utilizando um “controle pré-tratamento” demonstrou que o IQG-607 possui atividade bactericida no nosso modelo. A atividade satisfatória do IQG-607 em camundongos infectados com M. tuberculosis sugere que este composto pode ser um candidato promissor no desenvolvimento clínico de um novo agente antimicobacteriano.

Made available in DSpace on 2015-09-26T02:05:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475172-Texto+Completo-0.pdf: 1033533 bytes, checksum: 3695eeb1d157f2c6ed87073d37aa8b1e (MD5) Previous issue date: 2015 / Tuberculosis (TB) caused predominantly by Mycobacterium tuberculosis is an infectious disease responsible for a significantly number of deaths worldwide. The first line TB drugs that are currently used, and others available, present several problems, such as duration and complexity of treatment, and adverse effects, factors that decrease the patient adherence to treatment regimen. These problems increase the number of cases of drug resistant TB. The pentacyano(isoniazid)ferrate(II) (IQG-607) compound is an inorganic complex designed to treat INH-resistant strains of M. tuberculosis containing mutations in catalase-peroxidase gene, katG. The compound appears to be a promising anti-TB drug candidate according to previous studies that demonstrated its effectiveness both in vitro and in vivo. However, the difficulties encountered in the development of an analytical method for detection and quantification of the compound, due to its chemical properties, were impeding further studies, such as the pharmacokinetic studies. In this context, the present study describes two analytical methods for the detection of IQG-607 for the first time. The voltammetric method was shown to be a powerful analytical tool for quantification of IQG-607 and may be used to monitoring the stability and quality control. The proposed method, together with enzymatic inhibition assay, shown that the IQG-607 is stable for at least 1week at 4 ºC. The detection of IQG-607 by high performance liquid chromatography (HPLC) was also described, and we were able to observe the retention of the compound on the stationary phase of a chromatography column for the first time in this work. In addition, the analysis of IQG-607 in mouse plasma by HPLC was also demonstrated. Therefore, this conventional method will be optimized and validated to conduct pharmacokinetics studies. / A tuberculose (TB) causada predominantemente por Mycobacterium tuberculosis é uma doença infecciosa responsável por um número considerável de mortes em todo o mundo. Os medicamentos utilizados no tratamento de primeira linha atual, e os demais disponíveis, apresentam diversos problemas, como a duração, complexidade, e efeitos adversos, dificultando a adesão dos pacientes ao regime terapêutico. Isto favorece o aumento do número de casos de TB resistente a medicamentos. O pentaciano(isoniazida)ferrato(II) (IQG-607) é um composto proposto para agir contra casos de TB resistentes à INH devido a infecção com cepas que possuem mutações no gene katG. O composto demonstrou ser um promissor agente anti-TB em estudos prévios, e a sua eficácia in vitro e in vivo foi comprovada. No entanto, as dificuldades encontradas no desenvolvimento de um método analítico para a detecção e quantificação do composto devido as suas características químicas estavam impedindo a realização de outros estudos, e dentre eles, a determinação de parâmetros farmacocinéticos. Tendo isto em vista, o presente trabalho descreve, pela primeira vez, dois métodos analíticos para detecção de IQG-607. O método voltamétrico mostrou potencialidade na quantificação do composto, podendo ser utilizado para monitorar a estabilidade e em controle de qualidade. Observamos, por meio deste método, juntamente com ensaios de inibição enzimática, que o IQG-607 é estável em solução por até 1 semana se for mantido a 4ºC. A detecção do IQG-607 por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) também foi demonstrada, e, pela primeira vez, observamos a interação do composto em coluna cromatográfica. Ainda, por CLAE, demonstramos a detecção do IQG-607 no plasma de camundongos, e por ser um método convencional, será otimizado e validado para a realização de futuros estudos de farmacocinética.

Made available in DSpace on 2016-06-02T12:30:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000478692-Texto+Completo-0.pdf: 1934289 bytes, checksum: ad294c842ebebac268c4523f0b1f9420 (MD5) Previous issue date: 2016 / Tuberculosis is the infectious disease that causes more deaths worldwide, along with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). Great efforts have been exerted in recent years to the search for new anti-tuberculosis drugs without success. Drug development platforms fail at different stages of the research and development process and one aspect that contributes to this is the lack of knowledge of the potential molecular drug targets. Both the elucidation of the bioactive compounds mechanism of action and the identification of their cellular targets are important for the development of new drugs. As an experimental alternative to the identification of molecular targets is pulse proteolysis technique, which determines the fraction of proteins differentially degraded after a brief incubation with proteases when comparing samples treated and untreated with a ligand. In this work, we developed the PePTID method: a new method for identification of molecular targets using pulse proteolysis and mass spectrometry analysis. The application of PePTID resulted in a reproducible procedure that minimizes the required amount of sample and provides a more robust analysis method compared to other approaches that use pulse proteolysis. / A tuberculose é, junto com a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA), a doença infecciosa que mais causa mortes no mundo. Grandes esforços foram exercidos nos últimos anos para a busca de novos fármacos antituberculose, porém sem muito sucesso. As plataformas de desenvolvimento de fármacos falham em diferentes etapas do processo de pesquisa e desenvolvimento e um dos aspectos que contribui para isso é a falta de conhecimento dos alvos moleculares de potenciais fármacos. Tanto a elucidação do mecanismo de ação de compostos bioativos quanto a identificação de seus alvos celulares são importantes para o desenvolvimento de novos fármacos. Como alternativa experimental para a identificação de alvos moleculares está a técnica de proteólise pulsada, a qual determina a fração de proteínas diferencialmente degradadas após breve incubação com proteases quando comparadas as amostras tratadas e não tratadas com um ligante. Nesse trabalho, desenvolvemos o método PePTID: um novo método para identificação de alvos moleculares usando a proteólise pulsada e análise por espectrometria de massa. A aplicação do método PePTID resultou em um procedimento reprodutível que minimiza a quantidade necessária de amostra e que apresenta uma metodologia de análise mais robusta em relação a outras abordagens que utilizam a proteólise pulsada.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-29T21:32:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Roberta da Silva.pdf: 1682858 bytes, checksum: 3ec9c6d9a8909de1be009f19663b2a08 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-10T22:58:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Roberta da Silva.pdf: 1682858 bytes, checksum: 3ec9c6d9a8909de1be009f19663b2a08 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-10T22:58:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Paula Roberta da Silva.pdf: 1682858 bytes, checksum: 3ec9c6d9a8909de1be009f19663b2a08 (MD5) Previous issue date: 2017-02-13 / FACEPE / A Leishmanioses é uma doença considerada negligenciada, atingindo bilhões de pessoas por ano, causada pelo protozoário do gênero Leishmania ,é uma doença grave e sistêmica podendo ser letal na falta de um tratamento adequado. Os fármacos utilizados atualmente no tratamentosão antimoniato de meglumina e estibogluconato de sódio, anfotericina B, pentamidina e miltefosina. Porém o uso desses medicamentos é limitado devido ao grande números de efeitos adversos, alto custo e o aparecimento de resistência dos protozoários aos fármacos. Devido a esses fatores, surge a necessidade da busca de novos compostos leishmanicidas que sejam mais eficazes e específicos para o parasito, com redução dos efeitos colaterais, de baixo custo e que não induza a resistência. Nesse contexto, as tiossemicarbazonas são importantes compostos devido às suas propriedades químicas e biológicas, como a atividade antiprotozoária. Diante disso foram desenvolvidas novas tiossemicarbazonas substituídas com núcleo indol, obtidas através de uma rota sintética constituída por duas etapas utilizando reações clássicas de adição de Michael e condensação e avaliados quanto a seu potencial citotóxico e atividade leishmanicida in vitro frente as formas promastigotas de Leishmania infamtum. Os compostos foram caracterizados através de técnicas espectroscópicas convencionais e obtiveram rendimentos satisfatórios. A atividade leishmanicida mostrou-se promissora, todos os compostos foram capazes de inibir as formas promastigotas do parasito com IC50 que variaram entre 1,81 a 9,37 μM, onde os índices de seletividade das melhores moléculas foram de LQIT/PR-09 de 3,98 e LQIT/PR-09 de 4,91. A microscopia eletrônica de varredura mostraram que os compostos foram capazes de alterar a forma do corpo e o flagelo dos parasitos, mostrando que os compostos são potenciais candidatos a fármacos leishmanicidas. / Leishmaniasis is a disease considered neglected, reaching billions of people per year, caused by the protozoan of the genus Leishmania, is a serious and systemic disease and can be lethal in the absence of an adequate treatment. The drugs currently used in the antimoniate treatment of meglumine and sodium stibogluconate, amphotericin B, pentamidine and miltefosine. However, the use of these drugs is limited due to the large numbers of adverse effects, high cost and the appearance of resistance of the protozoa to the drugs. Due to these factors, the need arises for the search for new leishmanicidal compounds that are more effective and specific for the parasite, with a reduction of side effects, low cost and that does not induce resistance. In this context, thiosemicarbazones are important compounds due to their chemical and biological properties, such as antiprotozoal activity. In view of this, new thiosemicarbazones substituted with indole nuclei were obtained through a synthetic route consisting of two steps using classical Michael addition and condensation reactions and evaluated for their cytotoxic potential and leishmanicidal activity in vitro against the promastigote forms of Leishmania infamtum. The compounds were characterized by conventional spectroscopic techniques and yielded satisfactory yields. The leishmanicidal activity was promising, all compounds were able to inhibit promastigote forms of the parasite with IC50 ranging from 1.81 to 9.37 μM, where the selectivity indices of the best molecules were from LQIT / PR-09 3.98 and LQIT / PR-09 of 4.91. Scanning electron microscopy showed that the compounds were able to change the body shape and flagellum of the parasites, showing that the compounds are potential candidates for leishmanicidal drugs.

Orientador: Beatriz Stringhetti Ferreira Cury / Banca: Maria Palmira Daflon Gremião / Banca: Silvia Stanisçuaski Guterres / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Hernane da Silva Barud / Resumo: O desenvolvimento de um sistema que possibilite a administração oral da insulina (INS) constitui um grande desafio, já que esta pode ser degradada nas porções superiores do trato gastrintestinal (TGI). Seu encapsulamento no interior de matrizes poliméricas baseadas em goma gelana (GG) deve oferecer significante proteção contra as condições adversas do TGI, além do estabelecimento de interações mucoadesivas. O revestimento de formas farmacêuticas sólidas com amido resistente tipo 3 é uma estratégia tecnológica racional para se alcançar a liberação cólon específica de fármacos. A pectina também agrega propriedades importantes nesse sentido, já que é resistente à proteases e amilases. O objetivo deste trabalho foi a obtenção e caracterização de micropartículas (MP) de GG (1,5, 2,0 ou 2,5%), reticuladas com Al3+ (3 ou 5%) e revestidas com filmes de amido resistente/pectina para a administração oral de INS. O método de obtenção empregado foi eficiente com rendimento máximo de 99,10%, além de ter possibilitado a obtenção de MP com elevada eficiência de encapsulação (máximo de 89,11%). As MP apresentaram diâmetro médio de 1012 a 1197 μm e circularidade variando de 0,68-0,81. A análise de microscopia eletrônica de varredura indicou que o aumento da concentração de GG foi responsável pela obtenção de MP mais esféricas e que a INS alterou o rearranjo das estruturas. A seção transversal mostrou um revestimento contínuo e intacto. De acordo com os dados de difração de raios-X, as MP apre... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The development of a system that enables the oral administration of insulin (INS) is a major challenge, since the INS can be degraded in the upper portions of gastrintestinal tract (GIT). Its encapsulation within polymer matrices based on gellan gum (GG) should offer significant protection against the adverse conditions of the GIT, in addition to establishing mucoadhesive interactions. The coating of solid dosage forms with type 3 resistant starch is a rational strategy to achieve the colon specific drug delivery. Pectin also adds important properties in this sense, since it is resistant to proteases and amylases. The aim of this work was to obtain and to characterize GG MP (1.5, 2.0 or 2.5%), crosslinked with Al3+ (3 or 5%) and coated with films resistant starch/pectin for the oral administration of INS. The method employed was effective with a maximum yield of 99.10%, besides having allowed the obtaining of MP with a high encapsulation efficiency (up to 89.11%). The MP showed a mean diameter from 1012 to 1197 μm and circularity ranging from 0.68 to 0.81. The scanning electron microscopy indicated that the increase of the concentration of GG is responsible for obtaining more spherical MP and that INS is responsible for changing the rearrangement structures. The cross section showed a continuous and intact coating. According to the data of X-ray diffractograms, the MP have semi-crystalline structures. The liquid uptake was lower in acid media (218-615%) than in phosphate buff... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-09-25T11:33:13Z No. of bitstreams: 1 475172 - Texto Completo.pdf: 1033533 bytes, checksum: 3695eeb1d157f2c6ed87073d37aa8b1e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-25T11:33:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 475172 - Texto Completo.pdf: 1033533 bytes, checksum: 3695eeb1d157f2c6ed87073d37aa8b1e (MD5) Previous issue date: 2015-07-10 / Tuberculosis (TB) caused predominantly by Mycobacterium tuberculosis is an infectious disease responsible for a significantly number of deaths worldwide. The first line TB drugs that are currently used, and others available, present several problems, such as duration and complexity of treatment, and adverse effects, factors that decrease the patient adherence to treatment regimen. These problems increase the number of cases of drug resistant TB. The pentacyano(isoniazid)ferrate(II) (IQG-607) compound is an inorganic complex designed to treat INH-resistant strains of M. tuberculosis containing mutations in catalase-peroxidase gene, katG. The compound appears to be a promising anti-TB drug candidate according to previous studies that demonstrated its effectiveness both in vitro and in vivo. However, the difficulties encountered in the development of an analytical method for detection and quantification of the compound, due to its chemical properties, were impeding further studies, such as the pharmacokinetic studies. In this context, the present study describes two analytical methods for the detection of IQG-607 for the first time. The voltammetric method was shown to be a powerful analytical tool for quantification of IQG-607 and may be used to monitoring the stability and quality control. The proposed method, together with enzymatic inhibition assay, shown that the IQG-607 is stable for at least 1week at 4 ?C. The detection of IQG-607 by high performance liquid chromatography (HPLC) was also described, and we were able to observe the retention of the compound on the stationary phase of a chromatography column for the first time in this work. In addition, the analysis of IQG-607 in mouse plasma by HPLC was also demonstrated. Therefore, this conventional method will be optimized and validated to conduct pharmacokinetics studies. / A tuberculose (TB) causada predominantemente por Mycobacterium tuberculosis ? uma doen?a infecciosa respons?vel por um n?mero consider?vel de mortes em todo o mundo. Os medicamentos utilizados no tratamento de primeira linha atual, e os demais dispon?veis, apresentam diversos problemas, como a dura??o, complexidade, e efeitos adversos, dificultando a ades?o dos pacientes ao regime terap?utico. Isto favorece o aumento do n?mero de casos de TB resistente a medicamentos. O pentaciano(isoniazida)ferrato(II) (IQG-607) ? um composto proposto para agir contra casos de TB resistentes ? INH devido a infec??o com cepas que possuem muta??es no gene katG. O composto demonstrou ser um promissor agente anti-TB em estudos pr?vios, e a sua efic?cia in vitro e in vivo foi comprovada. No entanto, as dificuldades encontradas no desenvolvimento de um m?todo anal?tico para a detec??o e quantifica??o do composto devido as suas caracter?sticas qu?micas estavam impedindo a realiza??o de outros estudos, e dentre eles, a determina??o de par?metros farmacocin?ticos. Tendo isto em vista, o presente trabalho descreve, pela primeira vez, dois m?todos anal?ticos para detec??o de IQG-607. O m?todo voltam?trico mostrou potencialidade na quantifica??o do composto, podendo ser utilizado para monitorar a estabilidade e em controle de qualidade. Observamos, por meio deste m?todo, juntamente com ensaios de inibi??o enzim?tica, que o IQG-607 ? est?vel em solu??o por at? 1 semana se for mantido a 4?C. A detec??o do IQG-607 por cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE) tamb?m foi demonstrada, e, pela primeira vez, observamos a intera??o do composto em coluna cromatogr?fica. Ainda, por CLAE, demonstramos a detec??o do IQG-607 no plasma de camundongos, e por ser um m?todo convencional, ser? otimizado e validado para a realiza??o de futuros estudos de farmacocin?tica.

Memorial apresentado à Faculdade de Ciencias Farmacêuticas, Campus de Araraquara - UNESP, como parte das exigências do Concurso para obtenção do título de Livre-Docente no conjunto de disciplinas 'Atenção Farmacêuticas', 'Introdução ao Planejamento de Fármacos', e de 'Desenvolvimernto de Fármacos' do Departamento de Fármacos e Medicamentos. / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000434470-Texto+Completo-0.pdf: 6587349 bytes, checksum: 405b1e4ec3fc9ec1beb9e4856acacdf7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Approximately one-third of the world’s population is infected with Mycobacterium tuberculosis, the aetiological agent of human tuberculosis (TB). As global incidence of drug-resistance constantly increases, the urgent need for developing new anti-TB drugs and vaccines becomes more evident. Component enzymes of fundamental metabolic pathways seem to be attractive as define molecular targets. Guanosine monophosphate synthase (GMPS), a G-type amidotransferase, catalyzes the amination of xanthosine monophosphate (XMP) to guanosine monophosphate (GMP) in a reaction that occurs in two domains, the glutamine amidotransferase and the ATP pyrophosphatase, where it attacks a highly reactive adenyl-XMP intermediate, leading to GMP formation. The guaA (Rv3396c) gene, which codes for GMPS, was identified by sequence homology in the M. tuberculosis H37Rv genome. We evidenced that adenyl-XMP formation causes enzyme inhibition by increase of ATP and XMP levels. In addition, M. tuberculosis GMPS (MtGMPS) displays an allosteric behavior to XMP variation, demonstrating positive cooperativity and different kinetic aspects from that reported for human and Escherichia coli enzymes. The proposed ordered mechanism of substrates binding, which results in the release of pyrophosphate before binding ammonia showed to be the same to other GMPSs. Our results on MtGMPS might be useful to reveal its role in M. tuberculosis purine metabolism, providing knowledge for the development of new drugs and vaccines to treat and prevent TB, respectively. / Aproximadamente 1/3 da população mundial está infectada com o Mycobacterium tuberculosis, agente etiológico da tuberculose humana (TB). A incidência global e o constante aumento da resistência às drogas tornam evidente a urgente necessidade do desenvolvimento de novas drogas, para o tratamento, e vacinas, para a prevenção desta doença. As enzimas das vias metabólicas fundamentais são vistas como atrativos alvos moleculares definidos. A enzima guanosina monofosfato sintase (GMPS), uma amidotransferase do tipo G, catalisa a aminação da xantosina monofosfato (XMP) à guanosina monofosfato (GMP), em uma reação que ocorre em dois domínios, o glutamina amidotrasferase e o adenosina trifosfato (ATP) pirofosfatase, onde ocorre o ataque do intermediário altamente reativo adenil-XMP, levando a formação de GMP. O gene guaA (Rv3396c), o qual codifica a enzima GMPS, foi identificado por homologia de sequência no genoma de M. tuberculosis H37Rv. Nós evidenciamos que a formação do adenil-XMP causa uma inibição da enzima pelo aumento dos níveis de ATP e XMP. Além disso, a GMPS de M. tuberculosis (MtGMPS), apresentou um comportamento alostérico na variação dos níveis de XMP, demonstrando cooperatividade positiva e diferentes aspectos cinéticos dos já reportados para as enzimas de humanos e Escherichia coli. O mecanismo ping-pong foi proposto com base nos resultados evidenciados pela liberação de pirofosfato (PPi) depois da ligação da amônia, corroborando com os dados previamente publicados para outras GMPSs. Nossos resultados podem ser úteis por revelar o papel desta enzima no metabolismo de purinas do M. tuberculosis, fornecendo conhecimento para o desenvolvimento de novas drogas e vacinas para o tratamento e prevenção, respectivamente.