Orientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Banca: Pedro Canísio Binsfeld / Banca: Marco Vinícius Chaud / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Beatriz Stringhetti Ferreira Cury / Resumo: A nanotecnologia tem evoluído rapidamente em diversas áreas, incluindo na área farmacêutica. Para produtos sujeitos à regulação sanitária, em especial medicamentos, esta evolução é um desafio regulatório. Embora já existam medicamentos base nanotecnológica disponíveis no mercado, existem importantes lacunas regulatórias que precisam ser preenchidas. Assim, frente à importância e ao impacto deste tema, foi realizada uma pesquisa científica-regulatória de modo a propor bases para a construção de um arcabouço regulatório, em especial para a regulação de medicamentos de base nanotecnológica. Ficou evidente que não existe, a nível mundial, diretrizes únicas para este tipo de regulação, iniciando pela ausência de consenso no conceito de "nanomaterial". Percebe-se como consenso internacional que a complexidade e diversidade que cerca os nanomateriais exigem abordagens diferenciadas daquelas empregadas em produtos tradicionais, requerendo avaliações caso a caso e abordagens para avaliar os novos riscos introduzidos. Dessa forma, este trabalho avaliou as metodologias Quality by Design (QbD) e Gerenciamento de Riscos como alternativas para a construção do modelo regulatório. QbD e Gerenciamento de Riscos facilitam, compilam, direcionam e sistematizam o conhecimento e assim, por meio do desenvolvimento de produtos robustos, seguindo as etapas previstas no QbD, inclusive com a construção e sedimentação do Perfil de Qualidade Alvo do Produto e de Atributos Críticos a Qualidade, constituem... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nanotechnology has evolved rapidly in diverse areas, which include the pharmaceutical field. For products subject to sanitary regulation, especially drugs, this evolution is a regulatory challenge. Although there are nanotechnological drugs available in the market, there are important regulatory gaps that must be completed. Thus, in view of the importance and impact of the object, a scientific-regulatory research was carried out in order to propose bases for a regulatory framework, particularly for a regulation of nanotechnological drugs. It became clear that there is no a worldwide guidance for this type of regulation, starting with the lack of consensus for the concept of "nanomaterial". It has been noticed as an international consensus that the complexity and diversity surrounding nanomaterials require different approaches from those used in traditional products, demanding case-by-case evaluation and approaches to assess new introduced risks. Thus, this work evaluated Quality by Design (QbD) and Risk Management methodologies as alternatives for the construction of the regulatory model. QbD and Risk Management facilitate, compile, direct and systematize knowledge and thus, through a robust product development, following as expected by QbD steps - including a construction and sedimentation of the Product Target Quality Profile and Critical Quality Attributes - become important tools for building quality in nanotechnology-based drugs. Risk Management, especially the risk anal... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador : Hérida Regina Nunes Salgado / Coorientador: Cristina Helena dos Reis Serra / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Marcello Garcia Trevisan / Banca: Fernanda Nervo Raffin / Banca: Ana Dóris de Castro / Resumo: O darunavir, antirretroviral inibidor de protease, compõe a terapia considerada altamente eficaz no tratamento da síndrome da imunodeficiência humana adquirida, e é um dos fármacos disponibilizados gratuitamente pelo Sistema Único de Saúde (SUS). Os produtos genéricos têm contribuído para a manutenção e abrangência desta política de distribuição gratuita de medicamentos, ao reduzir os custos desses produtos. Neste propósito, este estudo busca fornecer informações sobre o comportamento físicoquímico e estabilidade do fármaco e da formulação, diante de diferentes condições climáticas, bem como, sobre sua solubilidade e liberação a partir da formulação. Além disso, pretende apresentar ferramentas in vitro e in silico que contribuam, no futuro próximo, para a produção de novos produtos contendo darunavir que apresentem alta qualidade, especialmente, genéricos do medicamento referência. Para tanto, a solubilidade do fármaco foi investigada em diferentes meios. A baixa solubilidade aquosa do fármaco foi verificada, e os meios adequados aos testes de dissolução foram escolhidos. O perfil de dissolução in vitro do darunavir e de absorção in vivo a partir papel dos comprimidos de Prezista® contendo 300 mg de fármaco foram investigados. Obtevese um perfil de dissolução discriminativo para o produto e um método de quantificação por espectrofotometria derivada foi desenvolvido e validade. Uma correlação entre os dados de fração dissolvida in vitro e fração absorvida in vivo do darunavir foi alcançada (r2= 0,95). Este é um método preditivo para avaliar o desempenho in vivo do darunavir a partir de comprimidos de liberação imediata, com base em dados in vitro, e é importante para minimizar o uso de animais e seres humanos em experimentos durante o desenvolvimento novos produtos farmacêuticos contendo darunavir. Além disso, uma ferramenta in silico foi desenvolvida e validada para a previsão da ... / Abstract: Darunavir, a protease inhibitor, constitute the highly active antiretroviral therapy against the acquired immunodeficiency syndrome. It is one of agents given free by the Brazilian Health System (SUS). Generic products have contributed to the maintenance and the policy of free distribution of medicines by the decreasing of costs of these products. In this way, this study seeks to provide information on the physical and chemical behavior and stability of the drug and formulation, facing different weather conditions, as well as provide information on their solubility and release from the formulation. It also aims to provide in vitro and in silico tools to contribute in the near future, for the production of new products containing darunavir, especially generic medicines. Therefore, the solubility of the drug was investigated in different media. The low aqueous solubility of the drug was observed, and suitable media for dissolution testing were chosen. The in vitro dissolution profile of darunavir and the in vivo absorption from Prezista® (tablets containing 300 mg of drug) were investigated. It was obtained a discriminating dissolution profile of the product and a method of quantification by spectrophotometry derivative was developed and validated. A correlation between the data of in vitro dissolved fraction and in vivo absorbed fraction of darunavir was achieved (r2 = 0.95). This is a predictive method to evaluate the in vivo performance of darunavir from immediate-release tablets, based on in vitro data, and it is important to minimize the use of animals and humans in experiments during the development of new medicines containing darunavir. In addition, an in silico tool was developed and validated for predicting the oral bioavailability of darunavir formulations, from their dissolution profile. For this, physiologically based pharmacokinetic modeling was applied through Simcyp® software. These, in vitro and in silico tools, assist in ... / Doutor

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Leticia Scherer Koester / Banca: Ian Castro Gamboa / Banca: Luis Vitor Silva do Sacramento / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: Objetivou-se, neste trabalho, realizar um estudo químico-farmacológico, bem como o desenvolvimento de uma formulação galênica das folhas de Spondias dulcis Forst., conhecida popularmente como cajarana. Está planta apresenta uso popular como antiinflamatório e antisséptico. Inicialmente, foi feita uma avaliação farmacognóstica e microbiológica da droga. Em seguida, foram produzidos extratos hidroalcoólicos utilizando delineamento experimental e desenvolvido e validado um método para quantificação de polifenóis totais. O extrato hidroalcoólico foi avaliado em ensaios in vitro (atividade antimicrobiana e antioxidante) e in vivo (atividade laxante e toxicidade aguda). O componente majoritário foi identificado e isolado, utilizando técnicas de cromatografia em contracorrente e de espectroscopia. Por fim, foi desenvolvida e caracterizada uma dispersão sólida obtida com extrato e o polímero PVP K30 e avaliada sua estabilidade, utilizando cinética não isótermica. A droga vegetal foi caraterizada pela densidade aparente, tamanho de partícula, perda por dessecação, pH e teor de extrativos e controle microbiológico. A espectroscopia na região do infravermelho permitiu a identificação de grupamentos específicos provenientes de diversos metabólitos e a análise térmica identificou seis etapas de degradação. O extrato escolhido foi obtid por turboextração, utilizando a solução de 50% de etanol com 20% de droga vegetal. O método desenvolvido e validado para polifenóis totais apresentoi-se de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this work was to conduct a chemical-pharmacological study, as well as the development of a galenic formulation of the leaves of Spondias dulcis Forst., known as cajarana. This plant presents popular use as antiinflammatory and antiseptic. Initially, a pharmacological and microbiological evaluation of the herbal drug. Hydroalcoholic extracts were produced using experimental design and developed and validated a method for quantification of total polyphenols. The hydroalcoholic extract was evaluated in vitro tests (antimicrobial and antioxidant activity) and in vivo (laxative activity and acute toxicity). The main component, identified and isolated, countercurrent chromatography and spectroscopy techniques. Finally, a solid dispersion obtained with extract and the polymer PVP K30 was developed and characterized and its stability evaluated using non-isothermal kinetics. The herbal drug was characterized by apparent density, part size, desiccation loss, pH and extractive content and microbiological control. The infrared spectroscopy identified of specific data of several metabolites and a thermal analysis identified six stages of degradation. The extract were produced by turboextraction, use a solution of 50% ethanol with 20% plant drug. The method developed and validated for total polyphenols presented within the conformities in the figures of merit (selectivity, linearity, precision, accuracy and robustness). The pharmacological activity verified in the case of ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 434485.pdf: 1998434 bytes, checksum: 1014acc111807827078acdfb43af808b (MD5) Previous issue date: 2011-09-23 / A tuberculose humana (TB), causada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis, representa uma amea?a global liderando a causa de morte em adultos em decorr?ncia de um ?nico agente infeccioso; sendo respons?vel por cerca de dois milh?es de ?bitos por ano no mundo. Estima-se que aproximadamente um ter?o da popula??o est? infectada com o bacilo na sua forma latente. Agentes quimioter?picos mais eficazes e menos t?xicos s?o necess?rios para reduzir a dura??o do tratamento atual, assim como melhorar as possibilidades de tratamento para as cepas MDR-TB, XDR-TB e TDR-TB. Al?m disso, h? necessidade de um tratamento eficaz para a TB latente, impedindo ainda que a doen?a se desenvolva para a forma ativa. Em 1998 com o sequenciamento completo do genoma da cepa de M. tuberculosis H37Rv houve a possibilidade do estudo e valida??o de alvos moleculares para o desenho racional de drogas anti-TB. As enzimas que participam de vias metab?licas essenciais s?o alvos promissores para o desenvolvimento de novos quimioter?picos para o tratamento da TB. A prote?na fosforribosilpirofosfato sintase de M. tuberculosis (PRS, EC 2.7.6.1) ? uma enzima de central import?ncia em muitas vias metab?licas em todas as c?lulas. A PRS catalisa a forma??o do PRPP e AMP a partir da R5P e ATP, onde o ATP ir? doar um grupamento difosforil para a R5P. A amplifica??o, clonagem, express?o e purifica??o de MtPRS permitiu a identifica??o de seu substrato doador difosforil GTP, CTP e UTP, al?m de ATP j? descrito anteriormente, al?m da aus?ncia da depend?ncia de fosfato inorg?nico (Pi) para a atividade enzim?tica. Ambas caracter?sticas nos indicam que MtPRS pode ser classificada como uma PRS classe II, at? agora somente identificada em plantas.Atrav?s do ensaio de liga??o atrav?s de espectrometria de fluoresc?ncia, vimos que os substratos R5P, ATP e GTP e o produto AMP s?o capazes de se ligarem ? enzima na sua forma livre, indicando um prov?vel mecanismo sequencial aleat?rio para nucleot?deos de purina, com libera??o sequencial ordenada dos produtos; e mecanismo sequencial ordenado para a liga??o dos substratos e libera??o dos produtos para nucleot?deos de pirimidina. As caracter?sticas que distinguem as enzimas PRS Classe II da Classe I, sendo que a classe I inclui todas as tr?s isoformas H. sapiens, podem ser exploradas para desenvolver inibidores espec?ficos para MtPRS, tanto para a tuberculose ativa quanto para a latente.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-17T12:07:46Z No. of bitstreams: 1 DIS_ROGERIO_VALIM_DA_TRINDADE_COMPLETO.pdf: 1934289 bytes, checksum: ad294c842ebebac268c4523f0b1f9420 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T12:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_ROGERIO_VALIM_DA_TRINDADE_COMPLETO.pdf: 1934289 bytes, checksum: ad294c842ebebac268c4523f0b1f9420 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / Tuberculosis is the infectious disease that causes more deaths worldwide, along with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). Great efforts have been exerted in recent years to the search for new anti-tuberculosis drugs without success. Drug development platforms fail at different stages of the research and development process and one aspect that contributes to this is the lack of knowledge of the potential molecular drug targets. Both the elucidation of the bioactive compounds mechanism of action and the identification of their cellular targets are important for the development of new drugs. As an experimental alternative to the identification of molecular targets is pulse proteolysis technique, which determines the fraction of proteins differentially degraded after a brief incubation with proteases when comparing samples treated and untreated with a ligand. In this work, we developed the PePTID method: a new method for identification of molecular targets using pulse proteolysis and mass spectrometry analysis. The application of PePTID resulted in a reproducible procedure that minimizes the required amount of sample and provides a more robust analysis method compared to other approaches that use pulse proteolysis. / A tuberculose ?, junto com a S?ndrome da Imunodefici?ncia Adquirida (SIDA), a doen?a infecciosa que mais causa mortes no mundo. Grandes esfor?os foram exercidos nos ?ltimos anos para a busca de novos f?rmacos antituberculose, por?m sem muito sucesso. As plataformas de desenvolvimento de f?rmacos falham em diferentes etapas do processo de pesquisa e desenvolvimento e um dos aspectos que contribui para isso ? a falta de conhecimento dos alvos moleculares de potenciais f?rmacos. Tanto a elucida??o do mecanismo de a??o de compostos bioativos quanto a identifica??o de seus alvos celulares s?o importantes para o desenvolvimento de novos f?rmacos. Como alternativa experimental para a identifica??o de alvos moleculares est? a t?cnica de prote?lise pulsada, a qual determina a fra??o de prote?nas diferencialmente degradadas ap?s breve incuba??o com proteases quando comparadas as amostras tratadas e n?o tratadas com um ligante. Nesse trabalho, desenvolvemos o m?todo PePTID: um novo m?todo para identifica??o de alvos moleculares usando a prote?lise pulsada e an?lise por espectrometria de massa. A aplica??o do m?todo PePTID resultou em um procedimento reprodut?vel que minimiza a quantidade necess?ria de amostra e que apresenta uma metodologia de an?lise mais robusta em rela??o a outras abordagens que utilizam a prote?lise pulsada.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 434470.pdf: 6587349 bytes, checksum: 405b1e4ec3fc9ec1beb9e4856acacdf7 (MD5) Previous issue date: 2011-08-24 / Aproximadamente 1/3 da popula??o mundial est? infectada com o Mycobacterium tuberculosis, agente etiol?gico da tuberculose humana (TB). A incid?ncia global e o constante aumento da resist?ncia ?s drogas tornam evidente a urgente necessidade do desenvolvimento de novas drogas, para o tratamento, e vacinas, para a preven??o desta doen?a. As enzimas das vias metab?licas fundamentais s?o vistas como atrativos alvos moleculares definidos. A enzima guanosina monofosfato sintase (GMPS), uma amidotransferase do tipo G, catalisa a amina??o da xantosina monofosfato (XMP) ? guanosina monofosfato (GMP), em uma rea??o que ocorre em dois dom?nios, o glutamina amidotrasferase e o adenosina trifosfato (ATP) pirofosfatase, onde ocorre o ataque do intermedi?rio altamente reativo adenil-XMP, levando a forma??o de GMP. O gene guaA (Rv3396c), o qual codifica a enzima GMPS, foi identificado por homologia de sequ?ncia no genoma de M. tuberculosis H37Rv. N?s evidenciamos que a forma??o do adenil-XMP causa uma inibi??o da enzima pelo aumento dos n?veis de ATP e XMP. Al?m disso, a GMPS de M. tuberculosis (MtGMPS), apresentou um comportamento alost?rico na varia??o dos n?veis de XMP, demonstrando cooperatividade positiva e diferentes aspectos cin?ticos dos j? reportados para as enzimas de humanos e Escherichia coli. O mecanismo ping-pong foi proposto com base nos resultados evidenciados pela libera??o de pirofosfato (PPi) depois da liga??o da am?nia, corroborando com os dados previamente publicados para outras GMPSs. Nossos resultados podem ser ?teis por revelar o papel desta enzima no metabolismo de purinas do M. tuberculosis, fornecendo conhecimento para o desenvolvimento de novas drogas e vacinas para o tratamento e preven??o, respectivamente

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 439097.pdf: 7980733 bytes, checksum: af8f6a7fa6a599651957ad5f12054783 (MD5) Previous issue date: 2012-05-16 / Tuberculosis continues to be one of the deadliest diseases in the world. The emergence of drug-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis, the unbearable side effects of the available drugs and the frequent patient non-compliance in completing the therapy have increased the need for development of new effective agents. We have previously demonstrated a potent in vitro inhibitory activity for two pentacyano(isoniazid)ferrate(II) compounds, namely IQG-607 and IQG-639 against the M. tuberculosis enoyl-ACP reductase enzyme. Importantly, IQG-607 and IQG-639 were active against cultures of M. tuberculosis H37Rv and two isoniazid-resistant clinical isolates in vitro. In the present study, the activity of these compounds was evaluated by using an in vivo murine model of tuberculosis. Swiss mice were infected with M. tuberculosis H37Rv strain, and IQG-607 and IQG-639 (250 mg/kg) were administered during 28 or 56 days. As well, a dose-response study was performed with IQG-607 (at 5, 10, 25, 50, 100, 200 and 250 mg/kg). The activity of test compounds was compared with that of the positive control drug isoniazid at 25 mg/kg. After 28 or 56 days of treatment, either IQG-607 or isoniazid significantly reduced M. tuberculosis-induced splenomegaly, and also significantly diminished the colony-forming units in both spleens and lungs. IQG-607 or isoniazid ameliorated the lung macroscopic aspect, reducing the lung lesions to a similar extent. However, IQG-639 was not capable of significantly modifying any evaluated parameter. IQG-607 did not display a classical dose-dependent profile in our murine model of tuberculosis, and 10 mg/kg was the lowest dose able to show significant activity, which was similar to the inhibition observed for higher doses. In addition, experiments using early and late controls of infection revealed a bactericidal activity for IQG-607 in our model. The promising activity of IQG-607 in M. tuberculosis-infected mice suggests that this compound might represent a good candidate for clinical development as a new antimycobacterial agent. / A tuberculose ? uma das principais causas de morte no mundo. O surgimento e dissemina??o de cepas de Mycobacterium tuberculosis resistentes a f?rmacos, os efeitos indesej?veis dos f?rmacos atualmente dispon?veis e a falta de ades?o dos pacientes ao tratamento t?m aumentado a necessidade do desenvolvimento de novos agentes anti-tuberculose. Estudos pr?vios revelaram uma potente atividade inibit?ria in vitro de dois compostos pentaciano(isoniazida)ferrato(II), denominados IQG-607 e IQG- 639, frente a enzima enoil-ACP redutase de M. tuberculosis. Ainda, o IQG- 607 e o IQG-639 foram ativos quando testados em culturas de M. tuberculosis H37Rv e sobre dois isolados cl?nicos resistentes ? isoniazida in vitro. Neste trabalho, a atividade destes dois compostos foi avaliada in vivo, utilizando um modelo murino de infec??o por M. tuberculosis. Camundongos su??os foram infectados com a cepa de M. tuberculosis H37Rv e o IQG-607 ou o IQG-639 (250 mg/kg) foram administrados aos animais durante 28 ou 56 dias. Adicionalmente, um estudo de dose-resposta foi realizado com o composto IQG-607, empregando as doses de 5, 10, 25, 50, 100, 200 e 250 mg/kg. As atividades dos compostos-teste foram comparadas ? atividade da isoniazida (25 mg/kg), o controle positivo do tratamento. Ap?s 28 ou 56 dias de tratamento, tanto o IQG-607 quanto a isoniazida reduziram significativamente a esplenomegalia induzida pela infec??o e, tamb?m, diminu?ram as unidades formadoras de col?nia, tanto nos pulm?es quanto nos ba?os dos animais tratados. O IQG-607 e a isoniazida melhoraram o aspecto macrosc?pico dos pulm?es, reduzindo as les?es pulmonares de maneira semelhante. Por sua vez, o IQG-639 n?o foi capaz de modificar significativamente nenhum par?metro avaliado neste estudo. O IQG-607 n?o apresentou um perfil cl?ssico de dose depend?ncia, sendo observada atividade inibit?ria significativa similar, entre as doses de 10 mg/kg e 250 mg/kg. Al?m disto, um experimento utilizando um controle pr?-tratamento demonstrou que o IQG-607 possui atividade bactericida no nosso modelo. A atividade satisfat?ria do IQG-607 em camundongos infectados com M. tuberculosis sugere que este composto pode ser um candidato promissor no desenvolvimento cl?nico de um novo agente antimicobacteriano.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 446130.pdf: 1910036 bytes, checksum: 59d877dc63ef59118f780b6e08cf8f9f (MD5) Previous issue date: 2013-01-28 / Tuberculosis remains the most common cause of death due to an infectious agent. Among targets identified in Mycobaterium tuberculosis genome, enzymes of the shikimate pathway deserve special attention. Shikimate kinase is the fifth enzyme of the shikimate pathway, which has been identified in fungi, apicomplexans, plants and prokaryotes. This metabolic route is composed of seven steps, which converts erythrose-4-phosphate and phosphoenol pyruvate to chorismic acid and is responsible for the biosynthesis of aromatic amino acids. Shikimate kinase has been shown to be essential to the survival of Mycobacterium tuberculosis, and since it is absent in human, this enzyme is considered to be a target for chemotherapeutic for development of antitubercular drugs. The aim here is to identify possible inhibitors, focusing on simulations of molecular docking in the ATP-binding site of the enzyme. The program used in the simulations was the Molegro Virtual Docker and protein-ligand interactions were tested in 12 crystallographic structures and then, it was choosen a protocol which generated docking RMSD values below 2 ?. Application of this docking protocol to a decoy dataset generated a enrichment factor of 24.57, which is considered adequate for molecular docking simulations focused on kinases. The present docking protocol was then applied to a small-molecule database with over 80,000 entries. Analysis of the results identified 5 potencial shikimate kinase inhibitors. Examination of the intermolecular interaction between enzyme and the ligands identified the main structural features responsible for ligand-binding affinity. This is the first molecular docking study focused on the ATP-binding pocket of shikimate kinase. / A Tuberculose continua sendo a causa mais comum de morte em decorr?ncia de um agente infeccioso. Entre os alvos identificados no genoma do Mycobaterium tuberculosis, enzimas da via do chiquimato merecem aten??o especial. A chiquimato quinase ? a quinta enzima da via do chiquimato, e tem sido identificada em fungos, organismos do filo apicomplexa, plantas e procariontes. Esta via metab?lica ? composta por sete passos, que catalisam sequencialmente a convers?o de eritrose-4-fosfato e fosfoenolpiruvato em corismato; e ? respons?vel pela bioss?ntese de amino?cidos arom?ticos. Chiquimato quinase parece ser essencial para a sobreviv?ncia do Mycobacterium tuberculosis, uma vez que ? ausente no homem, esta enzima ? considerada como um alvo para o desenvolvimento de quimioter?picos e medicamentos contra a tuberculose. O objetivo ? identificar poss?veis inibidores, focando as simula??es de docking molecular no s?tio de liga??o do ATP da enzima. O programa usado nas simula??es foi o Molegro Virtual Docker e a intera??o prote?na-ligante foi testada em 12 estruturas cristalogr?ficas e logo ap?s, escolhido um protocolo de docking a partir de valores de RMSD abaixo de 2?. O m?todo foi validado usando o melhor protocolo de re-docking no Virtual Screening atrav?s do Fator de Enriquecimento que obteve resultado de 24,57%, que ? considerado adequado para as simula??es de docking molecular focados em quinases. O presente protocolo de docking foi aplicado em um banco de dados com mais de 80.000 mol?culas. A an?lise dos resultados identificaram 5 potenciais inibidores da chiquimato quinase. Na an?lise das intera??es intermoleculares entre a enzima e os ligantes foram identificadas caracter?sticas estruturais respons?veis pela afinidade da liga??o pelo ligante. Este ? o primeiro estudo de docking molecular focado no bols?o de liga??o do ATP da chiquimato quinase.

Orientador: Rosana Rossi Ferreira / Banca: Luis Antônio de Assis Taveira / Banca: Marjorie de Assis Golim / Resumo: A pele é uma estrutura complexa pois apresenta um conjunto de estruturas superficiais com características elásticas, áspera e sob condições normais tem capacidade de se autoregenerar. Um acidente causando uma lesão de pele de menor ou maior intensidade pode ocasionar um dano grave para o paciente como as queimaduras, as quais, na maioria das vezes, são ocasionadas por agentes térmicos, químicos, elétricos ou radioativos. O tratamento destas lesões visa a restauração dos tecidos lesados e uma das opções de tratamento é a utilização dos biocurativos, um produto biotecnológico desenvolvido pelo Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucaut/UNESP obtidos a partir da adição "in vitro" de trombina e gluconato de cálcio ao Concentrado de Plaquetas (CP), estimulando a degranulação destas para liberação de vários fatores de crescimento, como PDGF e TGF-ß, atuando no processo de cicatrização. Este estudo propõe avaliar a eficácia do Gel de Plaquetas home made em ratos Wistar com lesões de pele sofridas por queimaduras por escaldo e realizar farmacoeconomia, analisando uma comparação do tempo de tratamento, eficácia e custo do Gel de Plaquetas com o tratamento hospitalar usual em queimaduras à base de colagenase + cloranfenicol. Foram incluídos 25 ratos da raça Wistar, divididos em 3 grupos segundo o tipo de tratamento utilizado: Grupo A, Colagenase + Cloranfenicol (10 ratos); Grupo B, Gel de Plaquetas (10 ratos) e Grupo C, controle (5 ratos). Os produtos foram aplicados em dias alternados em todos animais por um período de 30 dias e as lesões analisadas clinicamente e histológicamente. No grupo A, observou-se eritema em todos os animais avaliados, onde a presença de crosta foi uma constante, com exceção de 1 animal. A presença de exsudato ocorreu em 2 animais deste grupo. No grupo B, observou-se a presença de eritema e crosta em todos os animais e não houve exsudato ... / Abstract: Skin is a complex structure because it shows a surface structure group with elastic features, rough and under normal conditions it is able to self regenerate. An accident causing a lower or higher intensity skin lesion may cause serious injury to the patient such as burns which usually are caused by thermal, chemical, electrical or radioactive agents. The treatment of such injury aims at the restoration of damaged tissues and one treatment option is the use of bio bandages, a biotech product developed by the Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu/UNESP (Cell Blood Center Engineering Laboratory from Botucatu / UNESP) obtained from "in vitro" thrombin and calcium gluconate addition to Platelet Concentrates (PC), stimulating the degranulation to releasing several growth factors such as PDGF and TGF-ß, working in the healing process. This study aims to assess the home made Platelet Gel effectiveness in Wistar rats with skin injuries suffered from scald burns and perform pharmacoeconomics, analyzing a treatment time comparison, the cost and effectiveness of Platelet Gel concerning the usual hospital treatment for collagenase + chloramphenicol based burns. We included 25 Wistar rats divided into 3 groups according to treatment type used: Group A, Collagenase + Chloramphenicol (10 rats), Group B, Platelet Gel (10 rats) and Group C, control (5 rats). Products were administered on alternate days in all animals for 30 days and lesions were clinically and histologically analyzed. In group A, erythema was observed in all evaluated animals, where the presence of crust was a steady, with one animal exception. The presence of exudate occurred in two animals in this group. In group B, erythema and crust were observed in all animals and there was no exudate in any animal this group. In group C, all animals showed erythema, but the presence of crust occurred in only 1 animal. There was no exudate in the animals. In statistical ... / Mestre

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-08-03T18:19:52Z No. of bitstreams: 1 DIS_GUSTAVO_BELLANI_MIGOTT_COMPLETO.pdf: 6201853 bytes, checksum: 70237f84b98539735536877e1ffbc4e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-03T18:19:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_GUSTAVO_BELLANI_MIGOTT_COMPLETO.pdf: 6201853 bytes, checksum: 70237f84b98539735536877e1ffbc4e7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Tuberculosis is an infectious disease responsible for about 1.3 million deaths annually worldwide. Despite the appearance of multi-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis (Mtb), since the 80?s there is a gap in the development of new antimicrobials. With the advent of bioinformatics and computational molecular biophysics, became possible to test, from a established molecular target, numerous molecules, especially associated with the prediction of binding free energy. In the current dissertation, were selected 14 compounds with recognized activity against the enzyme 2-trans-enoil-ACP redutase (InhA, EC 1.3.1.9) of Mtb. These molecules were divided into three groups. Set 1: 5 compounds with distant values of binding free energy. Set 2: 9 compounds with close binding free energy values and similar molecular structures (derived from Genz 10850). Set 3: 14 ligands, corresponding to the sum of the set?s 1 and 2. Sampling obtained from molecular dynamics and 2 ns of simulations, in explicit solvent, allowed to estimate the free energy of bind associated with the methods MM/GBSA, MM/PBSA, (QM)MM/GBSA, LigScore, DrugScore, AutoDock and SQM. The ranking of the compounds were based in the correlation (R2) between the predicted and experimental values. Results showed similar values of R2 in all tested methods. More accurate methods, such as SQM and (QM)/MM/GBSA, not obtained better correlations in comparison with simplified methods, as LigScore and DrugScore. In general, Set 1 obtained a moderate correlation (R2 of 0.00-0.80). Set?s 2 and 3, showed weak correlation (R2 < 0.40). Despite the satisfactory results of Set 1, the tested methods presented limitations in the ranking of compounds with close values of experimental binding free energy and similar molecular structures, as Set 2. / A tuberculose ? uma doen?a infectocontagiosa respons?vel por cerca de 1,3 milh?o de mortes anualmente a n?vel mundial. Apesar do aparecimento de cepas multirresistentes de Mycobacterium tuberculosis (Mtb), desde a d?cada de 80 se observa uma lacuna no desenvolvimento de novos antimicrobianos. Com o advento da bioinform?tica e biof?sica molecular computacional, tornou-se poss?vel, a partir de um alvo molecular preestabelecido, testar in?meros candidatos a f?rmacos, com destaque para a predi??o da energia livre de liga??o. Nesta disserta??o, foram selecionados 14 compostos com conhecida atividade frente a enzima 2-trans-enoil-ACP redutase (InhA, EC 1.3.1.9) de Mtb. Estas mol?culas foram divididas em 3 grupos. Grupo 1: 5 compostos com valores esparsos de energia livre. Grupo 2: 9 compostos com valores similares de energia livre e derivadas do composto Genz-10850. Grupo 3: 14 compostos correspondendo ? uni?o dos Grupos 1 e 2. Amostragens por simula??es de din?mica molecular de 2 ns, em solvente expl?cito, permitiram estimar os valores da energia livre de liga??o destes compostos com os m?todos MM/GBSA, MM/PBSA, (QM)MM/GBSA, LigScore, DrugScore, AutoDock e SQM. O ranqueamento dos compostos foi baseado na correla??o (R2) entre valores experimentais e estimados de energia livre. Os resultados apontaram valores de R2 similares entre os m?todos testados. T?cnicas mais robustas, como SQM e (QM)MM/GBSA, n?o obtiveram resultados mais acurados em compara??o ?quelas mais simples, como LigScore e DrugScore. No geral, foram obtidos valores moderados de correla??o (R2 de 0,00-0,80) para o Grupo 1. Os Grupos 2 e 3 exibiram correla??es fracas (R2 <0,40). Apesar dos resultados satisfat?rios para o Grupo 1, os m?todos utilizados apresentaram limita??es e n?o foram capazes de predizer e ranquear corretamente compostos com valores pr?ximos de energia livre e estruturas moleculares similares, como os do Grupo 2.