Maternell immunisering är ett sjukdomstillstånd där moderns försvarsmekanism förstör fostrets röda blodkroppar och orsakar anemi hos fostret. Den primära behandlingsmetoden är intrauterina blodtransfusioner. Undersökning av foster under graviditeten utförs i stor utsträckning med hjälp av ultraljud. Ultraljudsundersökning begränsas av att fostret rör på sig och har en hög hjärtfrekvens. Målet med arbetet var att undersöka deformationen av myokardiet hos två grupper av foster. Den ena bestod av nio foster som genomgår intrauterina blodtransfusioner, den andra bestod av nio normala foster i motsvarande graviditetsvecka. Mätningar utfördes i programmet EchoPAC med 2D STE metoden, en tvådimensionell metod där speckle från myokardiet markeras och observeras över tid för att studera förändringen i hjärtats segment, hjärtdeformationen. Detta gjordes som en pilotundersökning primärt i syfte att bedöma genomförbarheten samt möjliga svårigheter med undersökningarna samt undersöka om metoden skulle kunna påvisa skillnader i deformationen mellan foster som behandlas med intrauterina blodtransfusioner och normala foster. Metoden visades vara genomförbar. Resultaten visar att deformationen i hjärtat hos foster som genomgår intrauterina blodtransfusioner är en aning högre än hos normala foster. Skillnaden i hjärtdeformationen mellan grupperna har visat sig vara signifikant. / Maternal immunization is a condition in which the mother's defense mechanism destroys the red blood cells in the fetus, which causes anemia. The primary treatment method is intrauterine blood transfusions. Ultrasound is one of the most common tools used to assess fetuses. Examination with ultrasound is limited by the fetal movements and a high fetal heart rate. The aim of this project was to pilot an investigation of myocardial strain within two groups of fetuses. One group consisted of nine fetuses undergoing intrauterine blood transfusions, the other consisted of nine normal fetuses in the corresponding week of pregnancy. Measurements were performed in the program EchoPAC with the 2D STE method, a two-dimensional method where speckles from the myocardium are marked and observed over time to study the change in the heart segment, the strain. This was done primarily to investigate if measurements were feasible and what problems could occur, and secondarily whether the method could show a difference in strain between fetuses treated with intrauterine blood transfusions and normal fetuses. The results show that the measurements were feasible. Results show that the strain of the heart in fetuses undergoing intrauterine blood transfusions is higher than in normal fetuses. The difference in the strain between the groups has shown to be significant

Vid positronemissionstomografi (PET) kräver vissa radiofarmaka lösningsmedlen N,N-dimetylformamid (DMF) och dimetylsulfoxid (DMSO) vid syntes. Rester av lösningsmedlen kan därför finnas kvar i produkten som ska injiceras i patienten och därför ska mängden lösningsmedelsrester kontrolleras enligt Europeiska läkemedelsmyndighetens riktlinjer (EMA). Gaskromatografi är standardmetod för att kvantifiera lösningsmedelsrester men är inte optimal för DMF och DMSO, som istället kan analyseras med UHPLC (ultra high performanc liquid chromatography) och UV-detektor. Syftet med projektet var att utföra metodoptimering och validering av en reverse phase UHPLC-UV metod för lösningsmedlen DMF och DMSO, på ett Agilent 1290 instrument. Sex aktuella radiofarmaka (spårmolekyler) användes vid utförandet. För metodoptimering studerades flera instrumentinställningar för analys av DMF och DMSO. Under optimeringen analyserades DMF och DMSO lösta i provmatriser och spårmolekyler med olika koncentration. DMF separerade från provmatriser och spårmolekyler. DMSO co-eluerade med de nämnda ovan och därför utfördes den efterföljande valideringen endast för DMF. Resultaten från valideringen erhöll godkända resultat för fem av sex radiofarmaka. Korrelationskoefficient var 0.9998, noggrannheten bestämdes till 96.8 – 101.5% och för precision som repeterbarhet och reproducerbarhet blev den relativa standardavvikelsen <5%. Detektionsgränsen bestämdes till 0.014 µg/mL och kvantifieringsgränsen till 0.047 µg/mL. Slutsatsen av projektet var att haltbestämning av lösningsmedlet DMF kan utföras. Därmed kan kraven från EMA säkerställas, men för en mer optimal metod kan ändring av pH på mobilfasen, flödeshastighet, kolonntyp och orsak till de breda topparna studeras närmare.

<p>S. 1-40: sammanfattning, s. 41-96: 5 uppsatser</p> / digitalisering@umu.se

4AbstractA pre-filled syringe consists of a number of different components and materials e.g. glass, polymer and silicone oil, which will, in various degrees, interact with the pharmaceutical protein and excipients contained within. In addition to soluble protein loss due to adsorption to silicone droplets, silicone oil (SO) have also been reported to form complexes with pharmaceutical proteins that potentially provoke early and late-stage immune responses. The objective of this project was to investigate the impact of 10 different syringe barrel and plunger combination on the quality on pharmaceutical X and the performance of the syringe (syringeability). This is an explorative study and the purpose of this study was to investigate what options there were rather than to make firm recommendations. pH measurements indicated all chosen combinations were within acceptance criteria. Similarly, subvisible particle with reference standards and USP &lt;788&gt; tests indicated that all chosen combinations were within acceptance criteria. Analysis of visible particles without reference standards indicated that all combinations except 1B and 1C were within acceptance criteria. In terms of syringeability, functional testing revealed that combination 8A was a very poor choice and combination 1B a very good choice. In all of the tests, the currently used combination 1A was within the acceptance criteria. With respect to both the pharmaceutical quality and syringeability, it was considered to be equally preferred as many other combinations. Therefore, there is no real urgency to exchange the currently used syringe. Further investigation of plunger B, and possible other plunger combinations is recommended as they might play a bigger role than the syringe barrel with regard to the syringeability. Additionally, placebo suspension can only be used as a representative alternative for testing pH. / En förfylld spruta består av många olika komponenter och material så som glas, polymer, silikon olja, vilka, till olika grad, kommer reagera med proteiner och hjälpämnen i läkemedlet. Utöver förlust av protein (som följd av adsorption till silikon droppar), har det även rapporterats att silikon olja (SO) bildar komplex med proteinerna i läkemedlet vilka kan framkalla en immunologisk reaktion. Syftet med detta projekt var att undersöka effekten av 10 olika kombinationer av sprut-höljen samt kolvar på kvalitén på läkemedel X samt sprutans prestationsförmåga. Detta är en explorativ studie och syftet var att undersöka vilka alternativ som finns samt få en indikation för hur de uppför sig snarare än att ge tydliga rekommendationer. pH mätningar indikerade att alla valda kombinationer var inom acceptanskriterier. Liknande, både mätning av synliga och mikroskopiska partiklar med hjälp av referenslösningar samt metod USP 788 indikerade att alla valda kombinationer var inom acceptanskriterier. Mätning av synliga och mikroskopiska partiklar utan referenslösningar indikerade att alla kombinationer utom 1B och 1C var inom acceptanskriterier. Gällande sprutkombinationernas funktionalitet (prestationsförmåga) visade det sig att kombination 8A var ett dåligt val och kombination 1B ett attraktivt val. I alla tester, den nuvarande använda kombinationen (1A) var inom acceptanskriterier. Med avseende på både läkemedlets kvalité samt funktionalitet visade sig 1A vara ett likvärdigt alternativ till de andra kombinationerna. Detta innebär att det i dagsläget inte finns ett akut behov av att byta ut det nuvarande sprutkombinationen. Fortsatt utredning av kolv B, samt andra kolvar, är att rekommendera då de kan ha större påverkan funktionaliteten än höljet. Vidare kan placebolösning enbart användas som ett representativt alternativ för att testa pH.

The childhood cancer neuroblastoma mostly affects children under the age of 2 and comprises 6% of all childhood cancers. Neuroblastoma has very diverse phenotypes caused by both inter- and intra-tumour heterogeneities. The phenotypes are classified as being either low- or high-risk. This project focuses on high-risk NB cell lines with various chemotherapy sensitivity. Titration studies with chemotherapy agents cisplatin or doxorubicin showed a proneness of p53 mutated cell lines to arrest in either the S- and/or the G2/M-phase, depending on the drug and the drug dosage, indicating on a dose-dependent cell cycle response. To potentially inhibit the cells from arresting a treatment assay with 3 cell cycle key-components, pATM, Chk1 and Wee1 inhibitors was done. An initial immunocytochemistry staining of the expression levels of pATM and Wee1 showed that pATM was upregulated for 5 out 7 tested cell lines, namely SK-N-SH, SK-N-FI, Kelly, SK-N-DZ and BE(2)-C, upon chemotherapy treatment with doxorubicin. Wee1 was however only upregulated for 3 out 7 cell lines; Kelly, SK-N-DZ and BE(2)-C. The upregulation of pATM and Wee1 showed a potential confirmation of their involvement in CT induced cell cycle arrest. Upon inhibition of pATM, Chk1 and Wee1 diverse effects were observed for each cell line (SK-N-SH, SK-N-AS, SK-N-FI, Kelly, SK-N-DZ and BE(2)-C). Wee1 showed the most promising results were the cell viability decreased for all 5 p53 mutated cell lines and the confluency over time decreased for 4 out 5 p53 mutated cell lines. The p53 wild type cell line SK-N-SH was less sensitive towards Chk1 and Wee1 inhibition indicating that cell lines with functional p53 might not be as dependent on the Chk1 and Wee1 pathways compared to cell lines with non-functional p53. Thus, targeting the cell cycle arrest might be a promising therapeutic target for high-risk neuroblastoma. / Barndomscancern neuroblastom utgör 6% av all barncancer. Majoriteten av de drabbade är under 2 år. Neuroblastom har en stor mångfald av fenotypiska utryck som orsakas av dess inter- och intra-tumör heterogenitet. Fenotyperna klassificeras antigen som låg- eller högrisk. Här har 7 högrisks-neutoblastom cellinjer med varierande grad av känslighet mot kemoterapi analyserats. Titreringsstudier med kemoterapierna cisplatin och doxorubicin påvisade en benägenhet för de p53 muterade cellinjerna att arrestera i S- och/eller i G2/M-fasen, beroende på behandlingen samt behandlingsdosen, vilket indikerar på en dos-beroende cellcykel respons. En behandlingsanalys med de 3 nyckelkomponenterna fosforylerat ATM, Chk1 samt Wee1 gjordes för att potentiellt inhibera cellerna från att arrestera. Efter en initial immunocytokemi infärgning av pATM samt Wee1 visade 5 av 7 cellinjer (SK-N-SH, SK-N-FI, Kelly, SK-N-DZ samt BE(2)-C) en uppreglering av pATM-uttryck till följd av doxorubicin behandling. Däremot var Wee1 endast uppreglerat för 3 av 7 cell linjer (Kelly, SK-N-DZ samt BE(2)-C). Uppregleringen av pATM och Wee1 påvisar ett potentiellt samband mellan kemoterapi-inducerad cellcykelarrest och ökat utryck av pATM och Wee1. Vid inhibering av pATM, Chk1 samt Wee1 gav Wee1 de mest lovande resultaten där cellviabiliteten minskade för samtliga 5 p53-muterade cellinjer och där konfluensen över tid minskade för 4 av 5 p53-muterade cellinjer. SK-N-SH med funktionerande p53 var mindre känslig gentemot Chk1 och Wee1 inhibering, vilket indikerar att cellinjer med funktionerande p53 inte är lika beroende av reaktionsvägarna för Chk1 och Wee1 jämfört med cellinjer som har icke-funktionerande p53. Därmed kan riktad behandling mot cellcykelarrest vara en lovande behandling för högrisks-neuroblastom.

Aggregation of microtubule-associated protein tau is involved in the pathology of several neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s disease. The affibody TP4 has been shown to inhibit this aggregation process, and its target-binding positions were previously grafted onto a dimeric affibody scaffold, creating the sequestrin seqTP4. This project constitutes a part of the affinity maturation process of seqTP4, using two different bacterial display methods. An error-prone PCR library was first expressed on Staphylococcus carnosus cells for selection of variants with improved tau-binding properties, resulting in a library of 1.4×107 transformants. Flow cytometric tests indicated difficulties in the setup due to nonspecific interactions, and whereas several different approaches to alleviate the problems were investigated, two cell sorting attempts were ultimately unsuccessful. Subcloning of seqTP4 and the library to an Escherichia coli surface display vector resulted in functional surface expression of seqTP4 on E. coli JK321 and BL21 cells, and a BL21 library size of 1.6×109 transformants. An initial flow cytometric test of this library indicates the presence of improved tau-binding variants, paving the way for future cell sorting. / Aggregering av mikrotubuli-associerat protein tau är involverad i patologin av flera neurodegenerativa sjukdomar, däribland Alzheimers sjukdom. Affibodymolekylen TP4 har visat sig inhibera denna aggregeringsprocess, och överföring av dess målbindande positioner till ett dimeriskt affibodyprotein har tidigare gett upphov till seqTP4, en så kallad sequestrin. Detta projekt utgör ett led i processen att affinitetsmaturera seqTP4, med hjälp av två olika metoder för presentation av proteiner på ytan av bakterieceller. Ett error-prone PCR-bibliotek uttrycktes först på ytan av Staphylococcus carnosus-celler för selektion av varianter med ökad affinitet för tau, vilket resulterade i ett bibliotek av 1.4×107 transformanter. Flödescytometriska tester tydde på svårigheter i detta upplägg på grund av ospecifika interaktioner, och emedan flera olika angreppssätt för att förmildra dessa problem undersöktes, misslyckades slutligen två cellsorteringsförsök. Omkloning av seqTP4 och biblioteket till en vektor för ytpresentation på Escherichia coli resulterade i funktionellt ytuttryck av seqTP4 på E. coli JK321- och BL21-celler, och ett BL21-bibliotek bestående av 1.6×109 transformanter. Ett första flödescytometriskt test av detta bibliotek tyder på närvaron av varianter med förbättrad förmåga att binda tau, och vägen ligger nu relativt öppen för cellsortering.

Hemicelluloses are synthesized by proteins encoded by genes from the cellulose synthasegene superfamily. One subgroup of this gene family is the cellulose synthase-like B, which islargely uncharacterized and unexplored. The common model organism Nicotianabenthamiana has one such gene in its genome, NbCslB, encoding a membrane protein. Theexpression of this gene has previously been studied in vivo, but in order to study the protein invitro a viable solubilization and purification protocol is required. This study evaluated the useof the detergent n-Dodecyl β-D-maltoside (DDM) for solubilization, followed by purificationusing immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC), and thereafter reconstitutionof the protein into proteoliposomes. SDS-PAGE as well as Western blot analyses showed thatthe purification was successful and provided a pure sample of protein. Throughout theanalyses performed, an anti-FLAG antibody was discovered to bind well to the protein, andthereby be especially useful for analysis. An activity assay was performed on the purifiedprotein, to characterize its function and evaluate whether the protein had maintained itsactivity and conformation after the steps of purification and reconstitution. No activity couldbe detected in the enzymatic assay, which indicated that the purification protocol may havebeen too rough on the protein, that the reconstitution was not successful, or that the assayconditions were not optimal. These results can be used as a base for future research, where theprotocols for solubilization, purification, and reconstitution should be further refined in orderto obtain an end result where the purified protein is active. When an active and pure proteinsample is achieved, it will be possible to perform further attempts at characterizing thefunction of the protein using enzymatic activity assays. Additionally, the results showed thatthe choice of antibody can be crucial for proper analysis of this protein. / Hemicellulosa syntetiseras av proteiner vars gener återfinns i genfamiljen cellulosasyntas. Enundergrupp till denna genfamilj är cellulosasyntasliknande B, en grupp som till stor del ärokarakteriserad och outforskad. Den vanliga modellorganismen Nicotiana benthamiana haren sådan gen i sitt genom, NbCslB, som kodar för ett membranprotein. Hur denna genuttrycks har tidigare studerats in vivo, men for att kunna studera proteinet in vitro krävs etthållbart protokoll för solubilisering och rening. Denna studie utvärderade användningen avlösningsmedlet n-Dodecyl β-D-maltoside (DDM) för solubilisering, följt av rening medimmobiliserad metalljon-affinitetskromatografi (IMAC), och efter det rekonstitution avproteinet till proteoliposomer. SDS-PAGE och Western blot analyser visade att reningen varlyckad, och att ett rent proteinprov erhållits. När analyserna genomfördes upptäcktes att enanti-FLAG antikropp band särskilt väl till proteinet, och därmed var mycket användbar vidanalys. En aktivitetsanalys genomfördes med det renade proteinet för att karakterisera dessfunktion och utvärdera huruvida proteinet hade bevarat sin aktivitet och konformation efterrening och rekonstitution. Ingen aktivitet kunde detekteras i den enzymatiskaaktivitetsanalysen, vilket indikerade att reningen eventuellt var för hård mot proteinet,alternativt att rekonstitutionen inte var lyckad, eller att förhållandena för analysen inte varoptimala. Dessa resultat kan användas som en bas för framtida forskning om proteinet, därprotokollen för solubilisering, rening och rekonstitution bör vidareutvecklas för att uppnå ettslutresultat där det renade proteinet är aktivt. När ett aktivt och rent proteinprov uppnåtts ärdet möjligt att genomföra ytterligare försök att karakterisera proteinets funktion medenzymatiska aktivitetsanalyser. Resultaten visade också att valet av antikropp kan varaavgörande för att ordentligt kunna analysera detta protein.

Amine transaminases (ATA) catalyse the transfer of an amino group from one molecule and replaces a ketone or aldehyde with the amino group, the amino group on the amino-donor is replaced with a ketone or aldehyde. This enzyme, ATA from Chromobacterium violaceum, has previously been used to catalyse the reaction involving amphetamine, therefore, it might be possible to use this enzyme to convert amphetamine and the product absorbs in the UV spectrum and can therefore be measured spectrophotometrically. The aim of the project was to explore the possibility of using ATA in a portable biosensor for the detection of amphetamine. A literature study of commercially available portable biosensors was performed, activity of the free enzyme was tested against two substrates, methylbenzylamine (MBA) and amphetamine. Research on immobilization techniques, materials, and surface functionalization was done to chose suitable methods for immobilizing ATA. Two immobilization methods were suggested and one of the methods, ionic immobilization through His-tag towards Ni2+ on the surface, was tested for enzyme activity toward MBA. The enzyme activity of the free enzyme in solution towards MBA was comparable to previously reported enzyme activity, however, no enzyme activity towards amphetamine was observed. No activity was observed for the immobilized enzyme, but it might be due to the experimental design, more experiments need to be performed to draw conclusions. / Amintransaminaser (ATA) katalyserar överförandet av en amingrupp från en molekyl och ersätter en keton eller aldehyd med den amingruppen, amingruppen på amin-donatorn ersätts med en keton eller aldehyd. Det här enzymet, ATA från Chromobacterium violaceum (CvATA), har tidigare använts för att katalysera en reaktion som involverar amfetamin, därför skulle detta enzym kunna användas på amfetamin. Produkten av reaktionen absorberar i UV spektrumet och kan mätas med en spektrofotometer. Målet med projektet var att utforska möjligheten av att använda CvATA i en biosensor för att detektera amfetamin. En litteraturstudie på kommersiellt tillgängliga bärbara biosensorer genomfördes, aktiviteten av det fria enzymet testades mot två substrat, metylbenzylamin (MBA) och amfetamin. Information samlades om immobiliseringstekniker, material, och ytfunktionalisering gjordes för att välja ut lämpliga metoder för immobilisering av CvATA. Två immobiliseringsmetoder föreslogs och en av metoderna, immobilisering via enzymets His6-tagg och Ni2+ joner på ytan, testades för enzymaktivitet mot MBA. Enzymaktiviteten av det fria enzymet i lösning mot MBA var i samma storleksordning som tidigare rapporterad enzymaktivitet, men ingen enzymaktivitet mot amfetamin kunde observeras. Ingen aktivitet kunde observeras för det immobiliserade enzymet, men det kan vara på grund av designen på experimentet, fler experiment behöver göras för att kunna dra några fler slutsatser.

Huntington diseases(HD) is a fatal autosomal neurodegenerative genetic disorder, caused by a CAG trinucleotide repeat expansion in the huntingtin (HTT) gene, resulting in a toxic gain-of-function in the mutant huntingtin protein(mHTT). To date, there is no approved treatment to either cure or halt the course of HD. It has been established that wild-type(wt) HTT protein is essential for development and has a critical role for maintaining neuronal health, thus, a preferable approach for treatment is an mHTT specific lowering maintaining the wild type HTT expression. The achievement of an allele specific therapies depends on targetable allele variation, hence in this project, was the allele frequency in the Swedish population investigated and compared with both the total population and the European population selective. The data demonstrated that there is significant differences between populations. Additionally, the gene expression in five human fibroblast from HD patients with CAG repeats varying from 40 up to180, was analyzed as well as the gene variation across tissue , where the human HD brain and two animal brains; a nonhuman primate and a transgenic minipig, was compared. The result demonstrated that there is similarity in the gene expression between the two models and the human brain, where the highest expression was seen in the prefrontal cortex. The results from the gene expression analyze in the cell lines of fibroblast demonstrated that there is difference in expression between CAG repeats. Furthermore could it be seen that there were only two cell lines, HD180 and HD70, that was heterozygous for dACTT, rs362307, and for the SNP, rs7223906, in exon 67. There are various therapeutic approaches in the pipeline for HD as shown in this thesis, and hopefully a treatment for the disease in the not too distant future. / Huntingtons sjukdom är en dödlig autosomal neurodegenerativ genetisk avvikelse, orsakad av en specifik DNA-sekvens, CAG, upprepning i arvsanlaget som kodar för proteinet huntingtin (HTT). Det muterade HTT skadar nervcellerna i hjärnan och leder till att cellerna bryts ner. Idag finns ännu inga godkända terapier för att bota eller stoppa förloppet av Huntingtons sjukdom. Det har konstaterats att det friska HTT protein är betydelsefullt för utvecklingen och att den har en kritisk roll för att upprätthålla hjärnans nervceller. Därför skulle det vara fördelaktigt att som behandling sänka nivåerna av det muterade HTT och samtidigt behålla nivåerna av det friska HTT i en så kallad allel-specifik strategi. Utförandet av en allel-specifik behandling är beroende allel variationen mellan den friska genen och den muterade. Därför undersöktes allel-frekvensen i den svenska populationen och jämfördes mellan den europiska populationens frekvens. Resultatet från denna undersökning påvisade att det finns tydliga skillnader mellan förekomst av allel-variationer mellan olika populationer. Utöver detta undersöktes även genuttrycket i fem mänskliga friboblaster från patienter med Huntingtons med varierande CAG längd, från 40 repetitioner upp till 180 repetitioner, samt genvariationen mellan vävnader i hjärnan. För den sistnämnda användes data från en mänsklig hjärnan med Huntingtons sjukdom och två djurhjärnor; en ifrån en icke-mänsklig primat och ifrån en transgen minigris. Resultatet påvisade likheter mellan genuttrycket mellan den mänskliga hjärnan och djurhjärnorna, och det högsta uttrycket återfanns i prefrontala cortex. Resultat från fibroblastproverna visade att det finns skillnader i genuttryck mellan patienter som innehar olika längd på CAG-sekvensen. D, dessutom var det endast två cellinjerna, HD180 och HD70, som var heterozygoter för dACTT, rs 362307, var det enda somoch variationen i exon 67, rs7223906. Det finns varierande en multitud av tillvägagångssätt som anges i denna uppsats för att behandla utvecklandet av Huntingtons sjukdom i utveckling, , som anges i denna uppsats, och förhoppningsvis är finns ett botemedel inte i en inte alltför avlägsen framtid.

It has been illegal to deposit household waste in Swedish landfills since 2005. The large amount of waste deposited prior to this does however continue to pose an environmental concern, mainly in the form of leachate water. This study focused on enhancing the denitrification process in a leachate water treatment plant through bioaugmentation. The two strains Brachymonas denitrificans and Comamonas denitrificans as well a commercial seed mix from ClearBlu Environmental® (CBE-mix) containing amongst others, Pseudomonas putida AD 21 and Pseudomonas fluorescens, were investigated as candidates. Nitrite, nitrate, and ammonium concentrations were measured in laboratory-, and pilot-scale studies to follow the processes of nitrification and denitrification. The pilot study was conducted for 10 days in the middle of May 2020 with leachate from the treatment plant in an aerated and nonaerated setup in open field conditions. C. denitrificans and B. denitrificans were both shown to be able to adapt to growth in landfill leachate. The addition of these strains led to a higher rate of nitrate reduction compared to the control during the first days of the pilot experiment but showed no difference in the total amount of nitrate reduced. The combined nitrogen concentration of ammonium, nitrate, and nitrite was 6.7% lower than the control when using a culture augmented with the CBE-mix in the aerated setup. This could indicate aerated denitrification. The amount of nitrate reduced during the pilot experiment was increased with 32% when augmenting the community with the CBE-mix in a nonaerated setup. An explanation could be that certain strains in the mix were able to utilize hard to degrade organic carbon present in the leachate or that the mix had a higher ratio of reduced nitrate to consumed organic carbon than the indigenous community. / Det har varit olagligt att deponera hushållsavfall i Sverige sedan 2005, den stora mängd avfall som deponerats innan dess fortsätter dock att utgöra ett miljöproblem, främst genom genereringen av lakvatten. Den här studien fokuserade på möjligheten att förbättra denitrifikationen i ett reningsverk för lakvatten genom bioaugmentation. Två stammar tillhörande Brachymonas denitrificans, och Comamonas denitrificans, samt en kommersiell bakterieblandning från ClearBlu Environmental® innehållande bland andra Pseudomonas putida AD 21 och Psedomonas flourescens, undersöktes som möjliga kandidater. Ammonium-, nitrat- och nitritkoncentrationer mättes i odlingsstudier i labbskala och i en pilotstudie för att undersöka nitrifikation och denitrification. Pilotstudien utfördes i en luftad och en o luftad konfiguration utomhus i mitten av maj 2020, med lakvatten från reningsverket under en 10 dagars period. C. denitrificans och B. denitrificans klarade båda av att anpassa sig till tillväxt i lakvatten. Tillsats av dessa arter ledde till en ökning i nitratreduktionshastighet i början av pilotexperimentet men gav ingen total minskning av nitratmängden. Den sammanlagda slutkoncentrationen av ammonium-, nitrat- och nitritkväve var 6,7% lägre än i kontrollen när en kultur argumenterad med den kommersiella bakteriemixen användes i den luftade konfigurationen. Mängden reducerat nitrat ökade med 32% när en kultur augmenterad med den kommersiella mixen användes i den oluftade konfigurationen. En möjlig förklaring är att vissa stammar i mixen klarade av att tillgodogöra sig svårnedbrytbara kolföreningar i lakvattnet eller att ration mellan reducerat nitrat mot konsumerat organiskt kol var högre än i det ursprungliga microbsamhället.