Thesis (Ph. D. in Cancer Biology)--Vanderbilt University, May 2009. / Title from title screen. Includes bibliographical references.

Μελετήθηκε η επίδραση ουραιμικού ορού στο σύστημα των μεταλλοπρωτεϊνασών MMP-2 και MMP-9 και των αναστολέων τους TIMP-1 και TIMP-2 καθώς και σε βασικές βιολογικές δράσεις των ενδοθηλιακών κυττάρων σε καλλιέργειες HUVEC. Ο ορός συλλέχθηκε από ασθενείς που υποβάλλονταν σε συνεδρίες αιμοκάθαρσης (πριν και μετά τις συνεδρίες). Διαπιστώθηκε πως ο ουραιμικός ορός μειώνει την ικανότητα πολλαπλασιασμού, μετανάστευσης και επούλωσης τρύματος, ενώ επάγει την απόπτωση. Επιπλέον, ο ουραιμικός ορός επάγει τις μεταλλοπρωτεϊνάσες MMP-2 και MMP-9, καταστέλλει τους αναστολείς τους TIMP-1 και TIMP-2 και μειώνει την παραγωγή κολλαγόνου τύπου IV και ελαστίνης. / -

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-17Bitstream added on 2014-06-13T19:15:14Z : No. of bitstreams: 1 tiano_gc_me_araca.pdf: 753020 bytes, checksum: 112d8897b7c84b5e590dd8fe0fffdb91 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O declínio mundial da cárie dentária é atribuído ao uso abrangente do flúor. Embora esse elemento seja capaz de proteger os dentes, seu uso excessivo pode levar a uma ação citotóxica causando a inibição do crescimento celular, da síntese de proteínas e até mesmo a morte celular. O primeiro objetivo deste estudo foi investigar a concentração ideal do NaF (NaF) capaz de ativar os fibroblastos gengivais de camundongos sem induzir morte celular. Observou-se que, nesses fibroblastos, a concentração de 40 μg F/mL induziu morte celular de 62,6 %. Na concentração de 20 μg F/mL a morte celular foi de apenas 22,1%. Com base nesses resultados, optou-se por utilizar a concentração de 20 μg F/mL como dose máxima para investigar os mecanismos envolvidos na ativação dos fibroblastos gengivais. Dessa forma, avaliou-se a capacidade do NaF induzir a expressão de MMP-2 e MMP-9 pelos fibroblastos gengivais de camundongos na presença ou ausência de LPS, assim como a produção da quimiocina CCL-3/MIP-1α e óxido nítrico. Avaliou-se também a participação das vias de sinalização intracelular p44/42, p38, PI3K e NF-кB envolvidas durante essa ativação, por meio da utilização dos respectivos inibidores PD98059 (50 μM), SB202190 (10 μM), LY294002 (30 μM) e dexametasona (10 μM). Observou-se que o NaF foi capaz de estimular os fibroblastos gengivais a expressarem MMP-9, mas não MMP-2, na concentração de 20 μg F/mL com pico máximo 6 horas após, retornando aos níveis normais 24 horas após. A produção da quimiocina CCL3/MIP-1α pelos fibroblastos estimulados pelo NaF também foi observada com a concentração de 20 μg F/mL com pico máximo 6 horas após estímulo. Na presença de LPS, observou-se uma potenciação da expressão de MMP-9 e produção de CCL3/MIP-1α na concentração de 20 μg F/mL, 6 horas após. / The worldwide decline of the dental caries is attributed to the widespread use of fluoride. Although this element is capable of protecting the teeth, its excessive use, can lead to a cytotoxic action, causing an inhibition of the cell growth, of the protein synthesis and even the cellular death. Based on these results, we have chosen to use a concentration of 20 μ g F/mL as maximum concentration to investigate the mechanisms involved in the activation of the gingival fibroblasts. It was observed that, on those fibroblasts, the concentration of 40 μg F/mL has resulted in a death cellular index of 62.6%. In the concentration of 20 μg F/mL the cellular death was of 22.1% only. Based on these results, the concentration of 20 μg F/mL has been chosen as maximum concentration to investigate the mechanisms involved in the activation of the gingival fibroblasts. Later, the ability of NaF to induce the expression of MMP-2 and MMP-9 in gingival fibroblasts of mice in the presence or absence of LPS has been assessed, as well as the production of chemokine CCL-3/MIP-1a and nitric oxide. It also evaluated the participation of intracellular signaling pathways p44/42, p38, PI3K e NF-kB involved in this activation, through inhibitors PD98059 (50 μM), SB202190 (10 μM), LY294002 (30 μM) e dexamethasone (10 μM). It was observed that the NaF was capable to stimulate the gingival fibroblasts to express MMP-9, at the concentration of 20 μgF/mL with maximum peak 6 hours after, returning to normal levels 24 hours after. The expression of MMP-2 was not observed. The production of chemokine CCL3/MIP-1α was also observed with the concentration of 20 μgF/mL with maximum peak 6 hours after the stimulation. In the presence of LPS, it was observed an intensification in the expression of MMP-9 and also in the production of CCL3/MIP-1α at the concentration of 20 μgF/mL, 6 hours later.

Objetivo: analisar a influÃncia do uso de inibidores de metaloproteinases da matriz [epigalocatequina-3-galato (EGCG) e digluconato de clorexidina (CHX)] utilizados como prÃ-tratamento dentinÃrio sobre a resistÃncia de uniÃo de um sistema adesivo autocondicionante em dentina hÃgida (H) e erosivamente desmineralizada (ED). Materiais e MÃtodos: terceiros molares humanos hÃgidos extraÃdos tiveram o terÃo oclusal seccionado, expondo a superfÃcie dentinÃria subjacente ao esmalte. A microdureza de superfÃcie (Knoop) da dentina exposta foi usada como parÃmetro para a seleÃÃo de 36 dentes, que foram aleatoriamente distribuÃdos em 6 grupos experimentais, de acordo com o tipo de dentina e com o prÃ-tratamento empregado (n=6): HAD (HÃgida + Ãgua destilada); HCHX (HÃgida + CHX a 2%); HEGCG (HÃgida + EGCG a 0,1%); EDAD (Erosivamente desmineralizada + Ãgua destilada); EDCHX (Erosivamente desmineralizada + CHX a 2%); EDEGCG (Erosivamente desmineralizada + EGCG a 0,1%). Todos os grupos foram submetidos à formaÃÃo de uma pelÃcula adquirida com saliva humana e, em seguida, os dentes dos grupos EDAD, EDCHX e EDEGCG foram submetidos a um ciclo erosivo (Ãcido cÃtrico 1%, pH 3,75; 3x/dia por 5 dias), enquanto que nos grupos HAD, HCHX e HEGCG, a soluÃÃo Ãcida foi substituÃda por Ãgua destilada. No perÃodo entre os ciclos, os espÃcimes foram armazenados em saliva artificial durante 2 h. ApÃs os ciclos, as superfÃcies dentinÃrias (hÃgidas e erosivamente desmineralizadas) foram prÃ-tratadas com 15 &#956;L da soluÃÃo, ativamente, por 60 s e, posteriormente, o sistema adesivo Clearfil SE Bond (CSEB) foi aplicado e um platà de 4 mm de resina composta Filtek Z250 foi construÃdo. ApÃs estocagem em Ãgua destilada a 37 ÂC por 24 h, os dentes foram cortados em forma de palitos, os quais foram submetidos a um ensaio mecÃnico de microtraÃÃo à velocidade de 0,5 mm/min. Resultados: os valores de resistÃncia de uniÃo (MPa) foram estatisticamente avaliados por ANOVA a dois critÃrios (condiÃÃo da dentina e prÃ-tratamento) e teste de Bonferroni (entre grupos), com nÃvel de significÃncia de 5%. Os grupos tratados com CHX apresentaram valores de resistÃncia de uniÃo estatisticamente inferiores (p<0,05) em relaÃÃo aos demais grupos, independentemente da condiÃÃo de dentina. Os grupos com prÃ-tratamento com Ãgua destilada e EGCG nÃo apresentaram diferenÃas significantes entre si (p>0,05). ConclusÃo: o uso de CHX influenciou negativamente, enquanto o uso de EGCG nÃo influenciou a resistÃncia de uniÃo do sistema adesivo CSEB à dentina hÃgida (H) e erosivamente desmineralizada (ED). / Objective: to analyze the influence of the use of two matrix metalloproteinases inhibitors [epigallocatechin-3-gallate (EGCG) and chlorhexidine digluconate (CHX)] as pretreatment solutions on dentin bond strength of a self-etch adhesive system on sound (H) and erosively demineralized dentin (ED). Materials and Methods: intact human third molars were sectioned on the occlusal third, exposing the underlying dentin surface. The surface hardness (Knoop) from exposed dentin was used as a parameter for the selection of 36 teeth that were randomly divided into 6 experimental groups according to the type and dentin pretreatment employed (n=6): HAD (sound + distilled water); HCHX (sound + 2% CHX); HEGCG (sound + 0,1% EGCG); EDAD (erosively demineralized + distilled water); EDCHX (erosively demineralized + 2% CHX); EDEGCG (erosively demineralized + 0,1% EGCG). All groups were subjected to an acquired pellicle formation with human saliva and then, teeth from EDDW, EDCHX and EDEGCG groups were subjected to an erosion cycle (1% citric acid, pH 3.75, 3 3x/day, during 5 days), whereas in the groups HAD, HCHX and HEGCG the acid solution was replaced by distilled water. Between the cycles, specimens were stored in artificial saliva for 2 h. After the cycles, dentin surfaces (sound and erosively demineralized) were pretreated with 15 &#956;L of the solution, actively, for 60 s and than Clearfil SE Bond (CSEB) was applied and a 4mm resin build up was made with composite resin Filtek Z250Â. After storage in distilled water at 37 ÂC for 24 h, specimens were sectioned in sticks, which were subjected to a which were subjected to a microtensile mechanical test with speed of 0.5 mm/min. Results: bond strength values (MPa) were statistically evaluated by two-way ANOVA (dentin condition and pretreatment) and Bonferroni test (between groups), with a significance level of 5%. The groups treated with CHX showed bond strength values statistically lower (p< 0.05) compared to the other groups, regardless of the condition of dentin. Groups with pretreatment with distilled water and EGCG showed no significant differences between them (p>0.05). Conclusion: the use of CHX influenced negatively, while the use of EGCG did not affect the bond strength of CSEB to sound and erosively demineralized dentin.

O aumento do estresse oxidativo e da atividade das metaloproteinases contribui para as alterações vasculares estruturais e funcionais presentes na hipertensão renovascular. O objetivo desse trabalho foi verificar se o tratamento com espironolactona, hidroclorotiazida, ou ambas as drogas modificam as alterações presentes no modelo dois-rins, um-clipe de hipertensão renovascular na pressão arterial, incluindo-se remodelamento da aorta, alterações de reatividade vascular, estresse oxidativo e níveis e atividade da metaloproteinase-2 da matriz extracelular (MMP-2). Animais controles operados ou ratos submetidos à estenose da artéria renal foram tratados com o veículo, espironolactona (25 mg.kg-1dia-1), hidroclorotiazida (20 mg.kg-1dia-1), ou a combinação dos dois medicamentos para oito semanas. A pressão arterial sistólica foi monitorada semanalmente por pleitismografia de cauda. Anéis de aorta foram isolados para avaliar o relaxamento vascular dependente e independente do endotélio. A análise morfométrica da parede da aorta foi realizada em coloração de hematoxilina/eosina. Foram avaliados a produção do ânion superóxido na aorta pela -nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato oxidase vascular, a peroxidação lipídica plasmática, medida como substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, os níveis e atividade de MMP-2 determinados por zimografia em gel e fluorimetria em extrato de aorta, imuno-histoquímica e zimografia situ. O tratamento com espironolactona, hidroclorotiazida, ou a combinação das drogas atenuou a hipertensão arterial, reverteu a disfunção endotelial, atenuou o remodelamento vascular da aorta, assim como o aumento no estresse oxidativo, e reduziu os níveis e a atividade da MMP-2 induzidos pela hipertensão. Estes resultados sugerem que a espironolactona e hidroclorotiazida, isoladamente ou em combinação, produzem efeitos antioxidantes e diminuem o aumento da atividade da MMP-2, melhorando assim a disfunção vascular e remodelamento encontrados nesse modelo de hipertensão renovascular. / Increased oxidative stress and upregulation of matrix metalloproteinases may cause structural and functional vascular changes in renovascular hypertension. The aim of this work was to examine whether the treatment with spironolactone, hydrochlorothiazide, or both drugs modify two-kidney,one clip hypertensioninduced changes in arterial blood pressure, aortic remodeling, vascular reactivity, oxidative stress, and MMPs levels/activity. Sham operated or hypertensive rats were treated with vehicle, spironolactone (25 mg.kg-1day-1), hydrochlorothiazide (20 mg.kg-1day-1), or the combination of the two drugs for eight weeks. Systolic blood pressure was monitored weekly by tail-cuff plethysmography. Aortic rings were isolated to assess endothelium dependent and independent relaxations. Morphometry of the aortic wall was carried out in hematoxylin/eosin sections. Aortic nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase activity and superoxide production was evaluated. Formation of reactive oxygen species was measured in plasma as thiobarbituric acid reactive substances. Aortic metalloproteinase-2 levels and activity were determined by gelatin and in situ zymography, fluorimetry, and immunohistochemistry. Treatment with spironolactone, hydrochlorothiazide, or the combination attenuated two-kidney, one-clip induced hypertension and reversed the endothelial dysfunction, reversed the vascular aortic remodeling, attenuated hypertension-induced increases in oxidative stress, and reduced metalloproteinase-2 levels/activity induced by hypertension. These findings suggest that spironolactone or hydrochlorothiazide, alone or combined, produce antioxidant effects and decrease renovascular hypertension-induced MMP-2 upregulation, thus improving the vascular dysfunction and remodeling found in this model of hypertension.

Orientador: Jose Mauro Granjeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T11:41:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Demarchi_AnaClaudiaCardosodeOliveira_D.pdf: 5748533 bytes, checksum: fc7f80117afc19afea7b65b54245cd3e (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: As fissuras orais exercem uma profunda influência sobre a vida de seus portadores. Esses indivíduos apresentam, desde o nascimento, dificuldades na alimentação, disturbios ósseos maxilar e mandibular, na arcada dentária, na fala e, em alguns casos, na audição. Além disto, fissurados e seus familiares enfrentam sérios problemas psicológicos decorrentes do comprometimento estético causado pela anomalia. Sem dúvida alguma, a morfogênese do palato secundário é um dos pontos mais críticos na formação da face e do palato. Depende de uma sequência complexa de eventos que possuem em comum o remodelamento de matriz extracelular (MEC), regulado, principalmente, pelas metaloproteinases de matriz (MMPs). Esta éa primeira vez que RECK, uma proteína indutora da reversão tumoral, rica em cisteína e com motivos kazal, é pesquisada neste processo. O primeiro objetivo deste estudo foi investigar se há expressão de RECK durante os eventos envolvidos na formação do palato secundário em camundongos. A partir dos resultados obtidos, indicando a presença de RECK nesses eventos, objetivou-se estabelecer um padrão temporal e espacial dessa expressão, assim como analisar o padrão de distribuição de MMP-2 e MMP-9, comparando os resultados obtidos entre si. Para tanto, cabeças inteiras e palatos dissecados de embriões de camundongos com 13; 14; 14,5 e 15 dias de desenvolvimento embrionário (DE) foram submetidos a reações de PCR em tempo real, hibridização in situ, imunoistoquímica e zimografia. As reações de PCR em tempo real indicaram a presença de mRNA de RECK (mRECK) em todos os períodos analisados, os níveis do transcrito aumentaram gradativamente e foram significativamente diferentes entre 13 e 15DE e entre 14 e lSDE. Os resultados de hibridização in situ e imunoistoquímica apontaram, consecutivamente, um padrão variável de distribuição de mRECK e da proteína RECK no mesênquima, epitélio e linha de junção (LI) formada entre as paredes palatais, no transcorrer dos períodos analisados. Com relação ao padrão de expressão das MMPs, a análise imunoistoquímica revelou a presença de MMP-2 no mesênquima, epitélio e LI em todos os períodos. A MMP-9 foi expressa no 14DE, 14,SDE e lSDE na LI e mesênquima palatal. A análise zimográfica confirmou a atividade de MMP-2 e MMP-9. Dessa forma, concluímos que RECK está presente nos principais eventos de formação do palato secundário, apresentando um padrão de expressão variável no tempo e espaço, que quando compar~o ao padrão de " expressão de MMP-2 e MMP-9 apresentam, na maioria das vezes, similaridades entre si. Esses , achados sugerem um provável envolvimento dessas moléculas na organogênese do palato secundário e uma possível interação/modulação entre elas / Abstract: The oral clefts show a great influence in the size of their hosts. They have, since birthy, difficulties in alimentation, problems in the maxilar bones, in dental arch, in speech, and in some cases, in hearing. In addition, the hosts and their families have serious psychological problems due to the esthetic lenght caused by anomalia. With no doubt, the formations of the secondary palate is one of the most critial phases during the formation of the surface and of the palate. Depending on a sequente of complex events that have in common the remodeling of the extracellular matrix (ECM), mainly regulated by matrix metalloproteinases (MMPs). This is first time that the presence of RECK, a reversion-inducing cystein-rich protein with kazal motifs, this is process is researched. The first objective of this study was to investigate the RECK expression during events involved in formation of the secondary palate in mice. Based on the results obtained, which indicated the presence of RECK in these events, the objective was to establish a temporal and spatial pattern of such expression, as well as to analyze the pattern of distribution of MMP-2 and MMP-9, comparing the results obtained to each other. For that purpose, whole heads and dissected palates of mice aged 13, 14, 14.5 and 15 days of embryonic development (ED) were submitted to real-time PCR, in situ hybridization, immunohistochemistry and zymography. The real-time PCR indicatedthe presence of mRNA of RECK (mRECK) in all periods analyzed; the transcript levels were gradually increased and were significant1y different between 13 and 15ED and between 14 and 15ED. The results of in situ hybridization and immunohismchemistry consecutively indicated a variable pattern of distribution of mRECK and RECK protein in the mesenchyme, epithelium and in midline edge seam (MES) formed between the palatal shelves during the study periods. With regard to the pattern of expression of MMPs, immunohistochemical analysis revealed the presence of MMP- 2 in the mesenchyme, epithelium and MES in all periods. The MMP-9 was expressed in the MES and palatal mesenchyme at 14ED, 14.5ED and 15ED. Zymographic analysis confirmed the activity of MMP- 2 and MMP-9. Therefore, it was concluded that RECK is present in the main events of formation of the secundary pala te, presenting a variable pattern of expression along time and space, which often present similarities to each other compared to the pattern of expression of MMP-2 and MMP-9. These findings suggest probable .involvement of these molecules in the formation of the secondary palate and possible interaction/modulation among them / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Dagmar Ruth Stach-Machado, Hernandes Faustino de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T23:10:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lorencini_Marcio_M.pdf: 2260417 bytes, checksum: a023a6cebfd812d6f2ed9c440e34ac59 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A doença periodontal é a patologia crônica de maior incidência na dentição humana. A placa bacteriana é seu agente etiológico principal, embora uma resposta imune exacerbada seja apontada como fator preponderante para o agravamento das lesões. Já nos primeiros estágios da doença é possível notar uma grande degradação da matriz extracelular local, principalmente de fibras colágenas. Dessa forma, o envolvimento das metaloproteinases de matriz (MMPs), uma família de enzimas com atividade dependente de íons metálicos que degradam proteínas estruturais da matriz extracelular, tem sido amplamente estudado nesta patologia. Baseado nestas evidências, o objetivo deste projeto foi caracterizar as principais modificações teciduais associadas ao modelo de doença periodontal induzida em ratos com ligaduras durante três, cinco ou sete dias. Foi analisada a microbiota associada à progressão inicial da doença, a disposição de fibras colagênicas e reticulares no tecido gengival e o perfil de células inflamatórias migrantes. Também foi avaliada a expressão e atividade enzimática de MMP-2 e -9, além da expressão gênica de MMP-2, -7, -9 e -14, e do inibidor RECK. A indução da doença com ligaduras pennitiu a formação de placa bacteriana caracterizada pela substituição de microorganismos Oram-positivos por Oram-negativos. O tecido gengival apresentou uma diminuição na área ocupada por fibras colagênicas, com a deposição de fibras mais espessas, características de um processo inicial de fibrose, aos sete dias de indução da resposta inflamatória. Não foram observadas alterações na disposição de fibras reticulares próximas à membrana basal do epitélio. Aos três e cinco dias de inflamação, respectivamente, foram observados picos de migração de neutrófilos e macrófagos. A MMP-2 apresentou um aumento crescente na atividade enzimática e expressão gênica até os sete dias de inflamação induzida, com a marcação de células epiteliais e fibroblastos na imunohistoquímica. A MMP-9 apresentou um pico na atividade enzimática aos três dias e um pico na expressão gênica aos cinco dias de inflamação, com a marcação imunohistoquímica de células epiteliais, fibroblastos e células inflamatórias migrantes para o sítio gengiva!. As MMPs-7 e -14, assim como o inibidor RECK, não apresentaram mudanças significativas em suas expressões gênicas. Os amplificados derivados de RT-PCR para MMP-7 apresentaram um fragmento correspondente a um íntron, indicando um possível mecanismo de regulação relacionado ao processamento do RNA mensageiro. Podemos concluir que o modelo de doença periodontal induzida por ligadura em ratos apresentou uma dinâmica bastante similar aos resultados já descritos para a evolução da doença no homem. A degradação de matriz extracelular observada foi coerente com o aumento na expressão e atividade enzimática de MMP-2 e -9, sugerindo que estas enzimas estejam relacionadas a este processo. Os resultados obtidos para a MMP-2 sugerem uma produção vinculada predominantemente a células próprias do tecido afetado pelo processo inflamatório. A MMP-9, no entanto, parece ter um aumento diretamente relacionado com a chegada de células inflamatórias no sítio gengival. Nossos estudos foram realizados com o intuito de elucidar os mecanismos moleculares da doença periodontal, buscando encontrar caminhos para o desenvolvimento de aplicações de potencial utilização diagnóstica ou terapêutica / Abstract: Periodontal disease is the major chronic disease affecting the human dentition. Bacteri plaque is its main etiological factor, although an exacerbated immune response is point< preponderant factor to the aggravation of the lesions. In the early stages of disease there is a gre degradation of the local extracellular matrix, mainly of the collagen fibers. That way, ti involvement of matrix metalloproteinases (MMPs), a family of enzymes with activity dependir on metallic ions that can degrade structural proteins of the extracelular matrix, it has been studit thoroughly in this pathology. Based on these evidences, the aim of this project was characterize the main tissue modifications associated to the model of periodontal disease induc~ in rats with ligatures during three, five or seven days. It was analyzed the microbiota associat~ to the initial development of the disease, the arrangement of collagen and reticulin fibers in ti gingival tissue and the migration of inflammatory cells. It was also evaluated the expression ar enzymatic activity ofMMP-2 and -9, besides the gene expression ofMMP-2, -7, -9 and -14, ar of the RECK inhibitor. The induction of disease using ligatures allowed the formation I bacterial plaque, characterized by substitution of Gram-positive for Gram-negati1 microorganisms. The gingival tis sue presented a decrease in the area occupied by collagen fibel with the formation of thicker fibers at seven days on induction of inflammatory response, usual found in fibrosis processes. Alterations were not observed for the organization of reticulin fibe elose to the basement membrane of the epithelium. To the three and five days of inflammatio respectively, peaks of neutrophils and macrophages migration were observed. MMP-2 present~ an increase in the enzymatic activity and gene expression until the seven days of induc~ inflammation, with the demarcation of epithelial cells and fibroblasts by immunohistochemistr MMP-9 presented a peak of enzymatic activity at the third day of inflammation and a peak I gene expression at the fifth day, with the demarcation of epithelial cells, fibroblasts ar migrating inflammatory cells to the gingival area. MMP-7 and -14, as well as the inhibitl RECK, did not present significant changes in their gene expressions. The amplified from R.' PCR for MMP-7 presented a fragment corresponding to an intron, indicating a possib regulation mechanism related to an altemative splicing of mRNA. The degradation ( extracellular matrix was coherent with the increased gene expression and enzymatic activity I MMP-2 and -9, suggesting that these enzymes are related to this processo The results for MMI suggest that its production may be related to the resident cells grom gingival tissue. In the otl hand MMP-9 may be produced by migrating inflammatory cells. We conclude that t periodontal disease model showed similar dynamics to the human disease described I 1 literature, and it could be an important tool to understand the molecular events associated w the pathology and to support the development of diagnostic or therapeutic applications / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Edgard Graner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-27T09:39:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_HannahCarmemCarlosRibeiro_D.pdf: 2966581 bytes, checksum: 18a22acf8512cc1abc03572e8071674e (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A Ciclosporina A (CSA) é uma droga imunossupressora, que atua de forma específica e reversível, principalmente em linfócitos T CD4. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da CSA sobre a produção e atividade de metaloproteinases de matriz (MMPs) associadas ao processo de reparação alveolar de molares de ratos Wistar, através de análise zimográfica. Foram utilizados 30 ratos tratados diariamente com CSA na concentração de 10 mg/kg de peso corporal por via subcutânea, com o início do tratamento ocorrendo 7 dias antes das exodontias e permanecendo após as cirurgias por períodos de 1 a 10 dias, quando os grupos foram sacrificados. Como grupo controle foram utilizados 30 ratos aplicados com solução salina a 0,9%. Verificou-se a presença de enzimas gelatinolíticas com comportamento, frente a ação de inibidores específicos e massa molecular semelhantes às das enzimas pertencentes ao grupo das MMPs. A análise nos diversos períodos de reparação alveolar demonstrou que este processo é acompanhado por secreção e atividade gelatinolítica, principalmente de MMP-9 e MMP-2. A produção e atividade gelatinolítica total e das MMP-9 e MMP-2 dos meios de cultura condicionados com o tecido de granulação dos alvéolos dos ratos foi menor nos animais tratados com CSA do que no grupo controle. Estes resultados indicam que a CSA reduz a produção e atividade de enzimas pertencentes ao grupo das MMPs, que participam no processo de reparo alveolar / Abstract: Cyclosporin A (CSA) is a potent immunosuppressive agent which acts in a specific and reversible way, mainly in T CD4 Iymphocytes. The aim of this study was to investigate the production and activity of matrix metalloproteinases (MMPs) through zymography during alveolar wound healing of inferior molars of Wistar's rats treated with CSA. Thirty Wistar rats where daily injected subcutaneously with 10 mg/kg/body weight of CSA starting seven days before the extraction and continuing from 1 to 10 days after surgery. The same numbers of rats were injected with the same volume of saline solution as a control group. Specific inhibitors were used to identify MMPs enzymes group. The data obtained from different healing periods, showed secretion and gelatinolytic activity, mainly by MMP-9 and MMP-2. The total gelatinolytic activity of MMP-9 and MMP-2 of the cell culture medium incubated with granulation tissue from the healing area, were lower in the CSA group than in the control group. The results showed that CSA use reduced the MMPs enzyme activity, which may have an important role in the alveolar wound healing process / Doutorado / Doutor em Biologia e Patologia Buco-Dental

Submitted by Lúcia Brandão (lucia.elaine@live.com) on 2015-12-09T18:22:03Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Fernanda Torlania Alves Gomes.pdf: 2631196 bytes, checksum: 54e703f505ae72013581a2180b57e832 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-19T19:42:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Fernanda Torlania Alves Gomes.pdf: 2631196 bytes, checksum: 54e703f505ae72013581a2180b57e832 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-01-19T19:43:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Fernanda Torlania Alves Gomes.pdf: 2631196 bytes, checksum: 54e703f505ae72013581a2180b57e832 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-19T19:43:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Fernanda Torlania Alves Gomes.pdf: 2631196 bytes, checksum: 54e703f505ae72013581a2180b57e832 (MD5) Previous issue date: 2014-04-14 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / There is a growing demand of using plants from the Amazon to the development of drugs and cosmetics. The Eperua genus belongs to the family Fabaceae and consists of 14 species distributed from Central Amazonia. The oil-resin extracted from the trunk of Eperua has been used in popular medicine similarly to the copaiba oil as healing, antibacterial and antifungal. Very few studies have been conducted in order to test the biological activities of the oil-resin of these species. This study aimed to investigate the effects of the acid fraction of E.oleifera oil-resin on cell proliferation, collagen production in human fibroblasts, inhibition of metalloproteinases and cytotoxicity against malignant cell lines. It was evaluated the effects of the oil-resin on the morphology, proliferation and collagen production in fibroblast cells MRC-5 and FPH. There was a reduction of cell proliferation of fibroblast cells treated with the oil-resin at a concentration of 5 µg/mL. The induction of collagen production in fibroblasts was significant in the treatments performed above 2.5 µg/mL relative to untreated cells. Additionally, the cytotoxicity of the oil was evaluated on three lines and six neoplastic and three non-neoplastic cell line. The results showed significant cytotoxicity against all lines, with IC50 values between (13 - 50 µg/mL). The evaluation of the hemolytic potential of the oil-resin showed high toxicity in erythrocytes of Swiss mice Mus musculus, with IC50 = 38.29 µg/mL. According to the comet assay, the acid fraction of E. oleifera oil-resin induced genotoxicity in MRC-5 cells with DNA damage index between (40 - 60 %) when compared to the negative controls (0-20%). Inhibitory action of the oil-resin was observed in the concentration-dependent manner on collagenase activity, with IC50 = 46.64 µg/mL. The zymography assay testing the activity of MMP - 2 and MMP – 9 from HaCaT cells, showed little significant enzymatic inhibition, because of its not viable treatment in high concentrations. Results showed that the acid fraction of E. oleifera oil-resin showed cytotoxic, genotoxic and hemolytic effects, and collagenase inhibition. Taken together, our data suggests that E. oleifera could be considered as a source of new therapeutic drug, by isolating the active compounds and possibly decreasing the undesirable toxic side effects. / É crescente a demanda do uso de plantas da Amazônia para o desenvolvimento de fármacos e cosméticos. O gênero Eperua, pertencente à família Fabaceae, é constituído por 14 espécies distribuídas pela Amazônia Central. O óleo-resina extraído do tronco das árvores deste gênero tem sido utilizado na medicina popular de modo similar ao da copaíba, como cicatrizante, antifúngico e bactericida. Pouquíssimos estudos foram realizados com o propósito de testar as atividades biológicas do óleo-resina destas espécies. O presente trabalho objetivou investigar os efeitos da fração ácida do óleo-resina de Eperua oleifera na proliferação celular e produção de colágeno em fibroblastos humanos, inibição de metaloproteinases e citotoxicidade contra linhagens celulares tumorais e não tumorais. Foram avaliados os efeitos do óleo na morfologia, proliferação e produção de colágeno em fibroblastos das linhagens FPH e MRC-5. Foi avaliada a citotoxicidade da fração ácida do óleo-resina sobre seis linhagens neoplásicas e três linhagens não neoplásicas. Houve significativa citotoxicidade do óleo contra todas as linhagens avaliadas, com valores de CI50 entre (13 - 50 µg/mL). A indução da produção de colágeno em fibroblastos foi significativa nos tratamentos realizados a partir de 2,5 µg/mL. Houve redução da proliferação celular nos tratamentos com o óleoresina na concentração de 5 µg/mL. A avaliação do potencial hemolítico do óleo indicou toxicidade em eritrócitos de camundongos suiços Mus musculus, com valor de CI50 = 38,29 µg/mL. O teste do cometa indicou que o óleo induziu genotoxicidade nas células MRC-5 com índice de dano no DNA entre (40 – 60%) nas concentrações de 7,5 - 30 µg/mL. Foi observada ação inibitória do óleo-resina na atividade de colagenases de forma concentraçãodependente, com CI50 = 46,64 µg/mL. Ensaios zimográficos da atividade de MMP-2 e MMP-9 de células HaCaT não indicaram importante inibição enzimática quando avaliadas em baixas concentrações do óleo-resina. Os resultados obtidos evidenciaram que a fração ácida do óleoresina de E. oleifera apresentou efeito citotóxico, genotóxico, hemolítico, e inibidor de colagenases. Face ao exposto, nossos dados sugerem que E. oleifera pode vir a ser considerada uma fonte de novos agentes quimioterapêuticos, por meio do isolamento dos compostos ativos e, possível diminuição dos efeitos tóxicos indesejáveis.

O processo de reparo do tecido ósseo tem sido alvo de estudos com o intuito de promover uma melhora na qualidade e tempo de reparo. Um elemento que tem sido estudado por alguns grupos é o fluoreto, pois tem sido proposto como terapêutico para osteoporose (Europa). Deste modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar comparativamente o efeito do fluoreto administrado na água de beber sobre o reparo ósseo alveolar de ratos. Neste estudo foram utilizados 4 grupos com ratos Wistar de 80 dias de vida (n=200), os quais receberam água de beber contendo 5, 15 e 50 ppm de fluoreto e água deionizada (controle) durante todo experimento. Esses animais tiveram o incisivo superior direito extraído. Os animais foram eutanasiados 0 hora, 7, 14, 21 e 30 e 60 dias após a extração. Amostras de plasma sanguíneo foram obtidas para análise de concentração de flúor, e a região do alvéolo dental foi coletada para as análises de microscopia (Hematoxilina Eosina e imunoistoquímica) e zimografia (metaloproteinases de matriz 2 e 9 MMP-2 e 9). A análise de concentração de flúor no plasma sangüíneo mostrou maior presença desse elemento no grupo tratado com 50 ppm de F nos períodos de 21 e 30 dias. Na análise histológica foi detectado osso neoformado em todos os animais até 60 dias, porém o grupo de 50 ppm de F apresentou menor formação óssea nos períodos de 14, 21 e 30dias. A análise morfométrica confirmou um aumento na densidade de volume de osso neoformado, entre 7 e 60 dias, nos grupos controle, 5 ppm, 15 ppm e 50 ppm de F, com concomitante diminuição na densidade de volume de coágulo sangüíneo. A expressão de RANK-L e OPG não foi alterada pela exposição crônica ao fluoreto na água de beber durante os períodos estudados (p<0,05). A atividade da MMP-2 foi mais acentuada no período inicial, enquanto a MMP-9 teve maior atividade no período final. Concluiu-se que o F, em altas concentrações pode alterar a dinâmica do reparo ósseo alveolar diminuindo a formação de novo tecido ósseo, associado a um atraso na remissão do coágulo sangüíneo. Proteínas como RANK-L, OPG, MMP-2 e MMP-9 também podem ter sua expressão alterada no tecido ósseo em reparo. / The repair of bone has been investigated with the aim of promoting an improvement in the quality and time of the repair process. One element that has been studied by some groups is fluoride, it has been proposed as a treatment for osteoporosis (Europe). Thus, the objective was to comparatively evaluate the effect of fluoride administered in drinking water on alveolar bone repair in rats. This study used 4 groups of rats of 80 days (n=200), which received drinking water containing 5, 15, and 50 ppm of fluoride, and deionized water (control) throughout the experiment. These animals had their upper right incisor extracted. The animals were euthanized 0 hours, 7, 14, 21 and 30 and 60 days after extraction. Samples of blood plasma were obtained for analysis of fluoride concentration, and the region of the alveolus was collected for microscopic analysis (Hematoxylin eosin and Immunohistochemistry) and zymography (metalloproteinases 2 and 9 MMP-2 and 9). Analysis of fluoride concentration in blood plasma showed a greater presence of this element in the group treated with 50 ppm of F in periods of 21 and 30 days. Histological analysis detected a new bone formed in all animals up to 60 days, but the group of 50 ppm F showed lower bone formation at 14, 21 and 30 days. Morphometric analysis confirmed an increase in the volume density of newly formed bone, between 7 and 60 days in control groups, 5 ppm, 15 ppm and 50 ppm F, with a concomitant decrease in the volume density of blood clot. The expression of RANK-L and OPG was not altered by chronic exposure to fluoride in drinking water during the study period (p<0.05). The activity of MMP-2 was more pronounced in the early period, while MMP-9 had higher activity in the final period. It was conclude that the F, in high concentrations change the dynamics of the alveolar bone repair by decreasing the formation of new bone, associated with a delay in treating the blood clot. Proteins as RNK-L, OPG, MMP-2 and MMP-9 may also have changed in their expression in bone tissue repair.